LEUKEMIA INHIBITOR FACTOR (LIF)’in SIĞIR EMBRĐYO GELĐŞĐMĐ ÜZERĐNE ETKĐSĐ Özlem Celasin 1, Arzu Çaputçu Taş1, Sezen Arat1, 1.TÜBĐTAK, MAM-Gen Mühendisliği ve Biyoteknoloji Enstitüsü, Gebze, Kocaeli, Leukemia inhibitor faktör (LIF) bir sitokindir ve blastosistin implantasyonu ve gebeliğin devamı için gerekli olduğu düşünülmektedir. In vitro elde edilen sığır blastosistlerinden LIFr ve gp130 transkipsiyon faktörü implantasyon öncesi dönemde salgılanırken in vivo embriyolar da moruladan hatch blastosist safhasına kadarki zaman süresince salgılanır. LIF aynı zamanda kök hücrelerin farklılaşmamasını da sağlar. Çalışmamızda; fare recombinant LIF kullanılmış ve sığır blastosist gelişimi üzerine etkisi incelenmiştir. Çalışmada kullanılacak olgunlaşmamış sığır yumurtaları mezbaha materyalinden aspire edilmiş ve 10%FCS, sodyum piruvat, EG, bLH, bFSH, IGF-1 ve penisilin/streptomisin içeren TCM199 medyumunda 38,5◦C %5CO2’li inkübatörde 18 saat tutularak olgunlaştırılmıştır. Olgunlaşan yumurtalara 133V/500µm 30µs 1 atış yapılarak füzyon uygulanmış ve sonrasında CaI ile 5 dk (5µM), CD(2.5 µg/ml)+cycloheximide(CHX,10µg/ml) kombinasyonu ile 1 saat ve CHX ile 4 saat muamele edilerek aktive edilmişlerdir. Aktivasyondan sonra füzyon çiftleri 8mg/ml BSA’lı Sage cleavage® medyumunda 72 saat kültüre edildikten sonra iki gruba (1-Sage+4mg/ml BSA+%5FCS, 2Sage+4mg/ml BSA+%5FCS+1000U LIF) ayrılarak Sage blastocyst® medyumunda 4 gün daha kültüre edilmişlerdir. Sonuçlar incelendiğinde; ikinci grubun blastosist gelişiminin (%21,74) diğer gruba (1; %8,52) göre anlamlı derecede yüksek olduğu görülmüştür. Sonuç olarak; serumlu medyum ortamına ilave edilen 1000U LIF’in blastosist gelişimi üzerine olumlu etkisi olduğu görülmüştür. Bu çalışma ile denemeler devam etmektedir. Bu çalışma TÜBĐTAK-KAMAG 106G005 projesi ile desteklenmiştir. Elektronik Đletişim Adresi: [email protected] THE EFFECT OF LEUKEMIA INHIBITOR FACTOR (LIF) ON THE DEVELOPMENT OF BOVINE EMBRYOS Özlem Celasin 1, Arzu Çaputçu Taş1, Sezen Arat1, 1.TUBITAK, MRC- Genetic Engineering and Biotechnology Institute Gebze, Kocaeli, Leukemia inhibitory factor (LIF) is a cytokine that is considered essential for blastocyst implantation and pregnancy maintenance. In vitro produced bovine embryos express LIFr and gp 130 transcripts in all stages of preimplantasyon development but in vivo embryos express gp130 from to morula to the hatched blastocysts stage. Also, LIF is used for embryonic stem cells pluripotencies. The objective of this study was to investigate the effect of mouse recombinat LIF on blastocysts development rates on partenogenetic studies. Immature bovine oocytes were aspirated from slaughterhouse ovaries and in vitro matured in tissue culture medium-199 (TCM-199) supplemented with 10% FCS, sodium pyruvate, EGF, bLH, bFSH, IGF-1 and penicillin/streptomycin for 18 hour at 38,5°C and 5% CO2 in humidified air. The mature oocytes were fused by one 30 µs pulse of 133V/500 µm. After fusion, oocytes were activated by exposing to calcium ionophore (5 µM for 5 min), cytochalasin D (2.5 µg/ml) + cycloheximide (CHX, 10 µg/ml) combination and CHX for 5 min, 1 h and 4 h, respectively. After activation, fusion units were cultured in Sage cleavage® medium supplemented with 8 mg/ml BSA for 72 h and then developing embryos were divided into two groups. Embryos in the first group and second group were respectively cultured in Sage blastocyst® media supplemented with 4 mg/ml BSA + 5% FCS and 4 mg/ml BSA + 5% FCS+1000U LIF for additional 4 days. In the second group, development rate to blastocyst (21,74 %) was significantly higher than the other group (8,52% the first group). The results indicate that 1000U LIF have a beneficial effect on blastocyst development if they are added in culture medium with serum. This study is still going on. This study was supported by grants from TUBITAK, Turkey (KAMAG-106G005). Contact E-mail: [email protected]
© Copyright 2024 Paperzz
