ÍÁÖÈÏËÇ AS-D ×ËÙÑÏÏÎÉÊÇ
ÅÓÔÅÑÁÓÇ ÊÁÉ
α-ÍÁÖÈÕË ÏÎÉÊÇ ÅÓÔÅÑÁÓÇ
(Áñ. ÄÈáäÈêáóßá 90)
_______________________________
ÐÑÏÏÑÉÆÏÌÅÍÇ ×ÑÇÓÇ
_______________________________
Ôá áíôÈäñáóôÞñÈá ôçò Sigma-Aldrich ðñïïñßæïíôáÈ
ãÈá êõôôáñïëïãÈêü åíôïðÈóìü ôçò íáöèüëçò AS-D
÷ëùñïïîÈêÞò åóôåñÜóçò êáÈ ôçò α-íáöèõë ïîÈêÞò
åóôåñÜóçò óôï áßìá, óå ëåðôÝò óôñþóåÈò ìõåëïý ôùí
ïóôþí Þ óå ðáñáóêåõÜóìáôá Èóôþí. Ôá áíôÈäñáóôÞñÈá
åóôåñÜóçò ðñïïñßæïíôáÈ ãÈá “In Vitro ÄÈáãíùóôÈêÞ
×ñÞóç”.
ÏÈ êõôôáñÈêÝò åóôåñÜóåò åßíáÈ åõñÝùò äÈáäåäïìÝíåò
êáÈ öáßíåôáÈ üôÈ áíôÈðñïóùðåýïõí ìÈá óåÈñÜ
äÈáöïñåôÈêþí åíæýìùí ðïõ äñïõí óå åðÈëåãìÝíá
õðïóôñþìáôá. Õðü ïñÈóìÝíåò óõíèÞêåò áíôßäñáóçò,
ßóùò åßíáÈ åöÈêôüò ï ðñïóäÈïñÈóìüò ôïõ ôýðïõ ôùí
áÈìïðïÈçôÈêþí êõôôÜñùí, ÷ñçóÈìïðïÈþíôáò åÈäÈêÜ
õðïóôñþìáôá åóôåñÜóçò. ÏÈ ìÝèïäïÈ ðïõ ðåñÈãñÜöïíôáÈ
ðáñÝ÷ïõí ôñüðïõò äÈÜêñÈóçò ôùí êïêêÈïêõôôÜñùí áðü
ôá ìïíïêýôôáñá.1-8
ÃÈá ôçí åêôÝëåóç áõôÞò ôçò åîÝôáóçò, áßìá, ëåðôÝò
óôñþóåÈò ìõåëïý ôùí ïóôþí Þ ðáñáóêåõÜóìáôá Èóôþí
åðùÜæïíôáÈ åßôå ìå ÷ëùñïïîÈêÞ íáöèüëç AS-D åßôå ìå
α-íáöèõë ïîÈêü ðáñïõóßá åíüò óôáèåñïý äÈáæùíÈáêïý
Üëáôïò. Ç åíæõìÈêÞ õäñüëõóç ôùí åóôåñÈêþí äåóìþí
áðåëåõèåñþíåÈ åëåýèåñåò åíþóåÈò íáöèüëçò. ÁõôÝò
åíþíïíôáÈ ìå ôï äÈáæùíÈáêü Üëáò, ó÷çìáôßæïíôáò
Ýíôïíá ÷ñùìáôÈóìÝíåò áðïèÝóåÈò óôÈò èÝóåÈò åíæõìÈêÞò
äñáóôÈêüôçôáò.
_______________________________
ÁÍÔÉÄÑÁÓÔÇÑÉÁ
_______________________________
ÄÉÌÅÈÕË ÖÏÑÌÁÌÉÄÉÏ, Áñ. Êáôáëüãïõ 9010-25 mL
ÌÏÍÏÌÅÈÕË ÁÉÈÅÑÁÓ ÔÇÓ ÁÉÈÕËÅÍÏÃËÕÊÏËÇÓ,
Áñ. Êáôáëüãïõ 9011-25 mL
×ËÙÑÏÏÎÉÊÇ ÍÁÖÈÏËÇ AS-D, Áñ. Êáôáëüãïõ 905-10 CAP
Ç êÜøïõëá ðåñÈÝ÷åÈ 20 mg.
α-ÍÁÖÈÕË ÏÎÉÊÏ, Áñ. Êáôáëüãïõ 906-10 CAP
Ç êÜøïõëá ðåñÈÝ÷åÈ 20 mg.
ÐÕÊÍÏ ÑÕÈÌÉÓÔÉÊÏ ÄÉÁËÕÌÁTRIZMALTM 6,3,
Áñ. Êáôáëüãïõ 903C-50 mL
TRIZMA® ìçëÈêïý 200 mmol/L. Ùò óõíôçñçôÈêü
ðñïóôßèåôáÈ ÷ëùñïöüñìÈï.
ÐÕÊÍÏ ÑÕÈÌÉÓÔÉÊÏ ÄÉÁËÕÌÁTRIZMALTM 7,6,
Áñ. Êáôáëüãïõ 902C-50 mL
TRIZMA® ìçëÈêïý 200 mmol/L. Ùò óõíôçñçôÈêü
ðñïóôßèåôáÈ ÷ëùñïöüñìÈï.
ÄÉÁËÕÌÁ ÁÉÌÁÔÏÎÕËÉÍÇÓ ÔÏÕ MAYER,
Áñ. Êáôáëüãïõ MHS1-100 ml
ÁÈìáôïîõëßíç ðÈóôïðïÈçìÝíç 0,1 % (w/v), êáÈ
óôáèåñïðïÈçôÝò.
ÄÉÁËÕÌÁ ÏÎÉÍÇÓ ÁÉÌÁÔÏÎÕËÉÍÇÓ,
Áñ. Êáôáëüãïõ 2852-100 ml
ÁÈìáôïîõëßíç ðÈóôïðïÈçìÝíç 1 g/L, êáÈ óôáèåñïðïÈçôÝò,
pH 3,3 óôïõò 25 °C.
ÁËÁÓ ÁÍÈ. MÐËÅ RR, Áñ. Êáôáëüãïõ FBS25-10CAP
ÐñïæõãÈóìÝíåò êÜøïõëåò. Ôï ðñáãìáôÈêü âÜñïò áíÜ
êÜøïõëá ðïÈêßëåÈ áíÜëïãá ìå ôçí êáèáñüôçôá ôçò
ðáñôßäáò ôçò ÷ñùóôÈêÞò êáÈ Ý÷åÈ âåëôÈóôïðïÈçèåß ìå
äïêÈìáóßá.
ÁËÁÓ ÁÍÈ. CORINTH V, Áñ. Êáôáëüãïõ 9015-10CAP
ÐÕÊÍÏ ÊÉÔÑÉÊÏ, Áñ. Êáôáëüãïõ 3861-20 mL
ÑõèìÈóôÈêü äÈÜëõìá êÈôñÈêïý 0,383 mol/L, pH 5,4 üôáí
áñáÈþíåôáÈ óýìöùíá ìå ôçí äÈáäÈêáóßá.
ÁÐÏÈÇÊÅÕÓÇ ÊÁÉ ÓÔÁÈÅÑÏÔÇÔÁ:
Ôá äÈìåèõë öïñìáìßäÈï, ìïíïìåèõë áÈèÝñáò ôçò
áÈèõëåíïãëõêüëçò, ðõêíü ñõèìÈóôÈêü äÈÜëõìá TRIZMALTM
6,3, ðõêíü ñõèìÈóôÈêü äÈÜëõìá TRIZMALTM 7,6, äÈÜëõìá
áÈìáôïîõëßíçò ôïõ Mayer êáÈ ôï äÈÜëõìá ¼îÈíçò ÁÈìáôïîõëßíçò
öõëÜóóïíôáÈ óå èåñìïêñáóßá äùìáôßïõ (18–26 °C).
Ôá äÈáëýìáôá ÷ëùñïïîÈêÞò íáöèüëçò AS-D,
α-Íáöèõë ÏîÈêü êáÈ ¢ëáò áíè. ìðëå RR öõëÜóóïíôáÈ
êÜôù áðü ôïõò 0 °C.
Ôá äÈáëýìáôá ¢ëáò áíè. Corinth V êáÈ ðõêíü êÈôñÈêü
öõëÜóóïíôáÈ óôï øõãåßï (2–8 °C).
Ôá äÈáëýìáôá ÷ëùñïïîÈêÞò íáöèüëçò AS-D,
α-Íáöèõë ÏîÈêü, ¢ëáò áíè. ìðëå RR êáÈ ¢ëáò áíè.
Corinth V åßíáÈ óôáèåñÜ ìÝ÷ñÈ ôçí çìåñïìçíßá ëÞîçò ðïõ
åìöáíßæåôáÈ óôÈò åôÈêÝôåò.
Ôï áñáÈü äÈÜëõìá êÈôñÈêïý åßíáÈ óôáèåñü ãÈá 1
åâäïìÜäá áí öõëá÷ôåß ìå ôï ðþìá ôïõ óöÈ÷ôÜ êëåÈóìÝíï
óå èåñìïêñáóßá äùìáôßïõ (18–26 °C).
Ôá ðõêíü äÈÜëõìáTRIZMALTM 6,3, ðõêíü äÈÜëõìá
TRIZMALTM 7,6 êáÈ ðõêíü êÈôñÈêü åßíáÈ êáôÜëëçëá ãÈá
÷ñÞóç üôáí äåí õðÜñ÷åÈ ìÈêñïâÈáêÞ áíÜðôõîç.
ÖèïñÈïý÷ï íÜôñÈï, 2 g/dl. Áðïèçêåýóôå óå
èåñìïêñáóßá äùìáôßïõ (18–26 °C). ×ñçóÈìïðïÈåßôáÈ áí
åêôåëåßôáÈ ç “ÄÈáäÈêáóßá α-Íáöèõë ÏîÈêÞò ÅóôåñÜóçò ìå
áíáóôïëÞ öèïñßïõ”.
ÁÐÏÓÕÍÈÅÓÇ:
Áðïññßøôå ôï äÈìåèõë öïñìáìßäÈï êáÈ ôïí ìïíïìåèõë
áÈèÝñá ôçò áÈèõëåíïãëõêüëçò áí áðïêôÞóïõí ÷ñùìáôÈóìü
Þ èïëþóïõí.
Ôï áñáÈü ñõèìÈóôÈêü äÈÜëõìáTRIZMALTM 6,3 êáÈ ôï
áñáÈü ñõèìÈóôÈêü äÈÜëõìá TRIZMALTM 7,6 ðñÝðåÈ íá
÷ñçóÈìïðïÈïýíôáÈ ìßá öïñÜ êáÈ ìåôÜ íá áðïññßðôïíôáÈ.
Áðïññßøôå ôï ÄÈÜëõìá ÁÈìáôïîõëßíçò ôïõ Mayer êáÈ
ôï ÄÈÜëõìá ¼îÈíçò ÁÈìáôïîõëßíçò üôáí ï ÷ñüíïò ðïõ
áðáÈôåßôáÈ ãÈá êáôÜëëçëç ÷ñþóç õðåñâåß ôïí ÷ñüíï ðïõ
óõíÈóôÜôáÈ óôç äÈáäÈêáóßá êáôÜ ðåñÈóóüôåñï áðü 5
ëåðôÜ.
ÐÑÏÅÔÏÉÌÁÓÉÁ:
Ôï ÄÉÁËÕÌÁ ×ËÙÑÏÏÎÉÊÇÓ ÍÁÖÈÏËÇÓ AS-D
ðñïåôïÈìÜæåôáÈ äÈáëýïíôáò 1 êÜøïõëá ÷ëùñïïîÈêÞò
íáöèüëçò AS-D óå 2 mL äÈìåèõë öïñìáìÈäßï. ÁöáÈñÝóôå
1 êÜøïõëá áðü ôïí êáôáøýêôç üðùò áðáÈôåßôáÈ.
ÐáñáóêåõÜóôå ìüëÈò ðñÈí áðü ôç ÷ñÞóç.
Ôï ÄÉÁËÕÌÁ α-ÍÁÖÈÕË ÏÎÉÊÏÕ ðñïåôïÈìÜæåôáÈ ìå
äÈÜëõóç ôïõ ðåñÈå÷ïìÝíïõ 1 êÜøïõëáò α-íáöèõëïîÈêïýë
ïîÈêïý óå 2 mL ìïíïìåèõëáÈèÝñá ôçò áÈèõëåíïãëõêüëçò.
ÁöáÈñÝóôå 1 êÜøïõëá áðü ôïí êáôáøýêôç üðùò
áðáÈôåßôáÈ. ÐáñáóêåõÜóôå ìüëÈò ðñÈí áðü ôç ÷ñÞóç.
To ÁÑÁÉÏ ÑÕÈÌÉÓÔÉÊÏ ÄÉÁËÕÌÁ TRIZMALTM 6,3
ðñïåôïÈìÜæåôáÈ ìå áñáßùóç 1 ìÝñïõò ðõêíïý ñõèìÈóôÈêïý
äÈáëýìáôïò TRIZMALTM 6,3 óå 9 ìÝñç áðÈïíÈóìÝíïõ
íåñïý. Ôï pH ðñÝðåÈ íá åßíáÈ 6,3 óôïõò 25 °C.
To ÁÑÁÉÏ ÑÕÈÌÉÓÔÉÊÏ ÄÉÁËÕÌÁ TRIZMALTM 7,6
ðñïåôïÈìÜæåôáÈ ìå áñáßùóç 1 ìÝñïõò Ðõêíïý ñõèìÈóôÈêïý
äÈáëýìáôïò TRIZMALTM 7,6 óå 9 ìÝñç áðÈïíÈóìÝíïõ
íåñïý. Ôï pH ðñÝðåÈ íá åßíáÈ 7,6 óôïõò 25 °C.
Ç ÁÈìáôïîõëßíç ôïõ Mayer êáÈ ôï ÄÈÜëõìá ¼îÈíçò
ÁÈìáôïîõëßíçò ðñÝðåÈ íá öÈëôñÜñïíôáÈ ðñÈí áðü ôç
÷ñÞóç.
Ôï ÁÑÁÉÏ ÄÉÁËÕÌÁ ÊÉÔÑÉÊÏÕ ðñïåôïÈìÜæåôáÈ ìå
áñáßùóç 1 ìÝñïõò Ðõêíïý ÊÈôñÈêïý ìå 9 ìÝñç áðÈïíÈóìÝíï
íåñü. Ôï pH ìåôÜ ôçí áñáßùóç åßíáÈ 5,4.
ÓÔÅÑÅÙÔÉÊÏ ÊÉÔÑÉÊÏÕ-ÁÊÅÔÏÍÇÓ-ÌÅÈÁÍÏËÇÓ:
Óå 18 mL ÁñáÈïý äÈáëýìáôïò êÈôñÈêïý, ðñïóèÝóôå 27 mL
áêåôüíçò âáèìïý ACS êáÈ 5 mL ìåèáíüëçò. ÖõëÜóóåôáÈ
êáëÜ êëåÈóìÝíï óå èåñìïêñáóßá äùìáôßïõ (18–26 °C).
Áðïññßøôå ìåôÜ áðü 8 þñåò.
ÐÑÏÖÕËÁÎÅÉÓ:
ÐñÝðåÈ íá áêïëïõèïýíôáÈ ïÈ óõíçèÈóìÝíåò
ðñïöõëÜîåÈò ðïõ åöáñìüæïíôáÈ êáôÜ ôï ÷åÈñÈóìü
áíôÈäñáóôçñßùí óôï åñãáóôÞñÈï. Áðïññßøôå ôá áðüâëçôá
ëáìâÜíïíôáò õðüøç üëïõò ôïõò ôïðÈêïýò, êñáôÈêïýò,
åðáñ÷Èáêïýò Þ åèíÈêïýò êáíïíÈóìïýò. ÁíáôñÝîôå óôï
Öýëëï ÄåäïìÝíùí Áóöáëåßáò ÕëÈêïý ãÈá ïðïÈåóäÞðïôå
åíçìåñùìÝíåò ðëçñïöïñßåò êÈíäýíïõ, áôõ÷Þìáôïò Þ
áóöÜëåÈáò.
_______________________________
ÄÉÁÄÉÊÁÓÉÁ
_______________________________
ÓÕËËÏÃÇ ÄÅÉÃÌÁÔÙÍ:
ÓõíÈóôÜôáÈ ç óõëëïãÞ äåÈãìÜôùí íá äÈåîÜãåôáÈ ìå
âÜóç ôï Ýããñáöï CLSI M29-A3. Êáìßá ãíùóôÞ ìÝèïäïò
åîÝôáóçò äåí ìðïñåß íá ðñïóöÝñåÈ áðüëõôç äÈáâåâáßùóç
üôÈ ôá äåßãìáôá áßìáôïò Þ Èóôïý äåí ìåôáäßäïõí ëïÈìþîåÈò.
ÅðïìÝíùò, üëá ôá ðáñÜãùãá áßìáôïò Þ äåßãìáôá Èóôþí
ðñÝðåÈ íá èåùñïýíôáÈ åíäå÷ïìÝíùò ëïÈìþäç.
Áßìá, ëåðôÝò óôñþóåÈò ìõåëïý ôùí ïóôþí,
ðáñáóêåõÜóìáôá Èóôþí êáÈ ðáñáóêåõÜóìáôá êõôôáñïöõãïêÝíôñïõ ìðïñïýí íá ÷ñçóÈìïðïÈçèïýí ôüóï ìå
ôçí α-íáöèõë ïîÈêÞ åóôåñÜóç üóï êáÈ ìå ôçí åóôåñÜóç
ôçò ÷ëùñïïîÈêÞò íáöèüëçò AS-D. Ôï EDTA Þ ç
çðáñßíç ÷ñçóÈìïðïÈïýíôáÈ ùò áíôÈðçêôÈêÜ.9 Ìå ôçí
åóôåñÜóç ôçò ÷ëùñïïîÈêÞò íáöèüëçò AS-D ìðïñïýí
1-GR
íá ÷ñçóÈìïðïÈçèïýí êáôåøõãìÝíïÈ Þ åãêëåÈóìÝíïÈ óå
ðáñáößíç Èóôïß. Ç α-Íáöèõë ïîÈêÞ åóôåñÜóç ìðïñåß
íá ÷ñçóÈìïðïÈçèåß åðÈôõ÷þò óå êáôåøõãìÝíåò ôïìÝò
Èóôþí.10 Ôï áßìá Þ ïÈ ëåðôÝò óôñþóåÈò ìõåëïý ôùí ïóôþí
ìðïñïýí íá áðïèçêåõôïýí óôåñåùìÝíá óå èåñìïêñáóßá
äùìáôßïõ (18–26 °C) ãÈá áñêåôÝò åâäïìÜäåò Þ ìç
óôåñåùìÝíá ãÈá áñêåôÝò çìÝñåò ÷ùñßò ÈäÈáßôåñç ìåôáâïëÞ
ôçò äñáóôÈêüôçôáò.5,9 Ìçí ìåôáöÝñåôå óõíïëÈêü áßìá ãÈá
áíÜëõóç óå Üëëá åñãáóôÞñÈá. ÓôÝëíåôå óôåñåùìÝíåò Þ
ìç áíôÈêåÈìåíïöüñïõò. ÏÈ áíôÈêåÈìåíïöüñïÈ ðñÝðåÈ
íá ðáñáìÝíïõí óå ó÷åôÈêÜ ÷áìçëÞ èåñìïêñáóßá êáôÜ
ôçí ìåôáöïñÜ. ÁöÞóôå ôá óôñþìáôá íá óôåãíþóïõí åðß
ôïõëÜ÷Èóôïí 1 þñá ðñÈí áðü ôçí óôåñÝùóç.
ÅÉÄÉÊÁ ÕËÉÊÁ ÐÏÕ ÁÐÁÉÔÏÕÍÔÁÉ ÁËËÁ ÄÅÍ
ÐÁÑÅ×ÏÍÔÁÉ:
Ìåèáíüëç, Áðüëõôç
Áêåôüíç, ÁíôÈäñáóôÞñÈï ACS
ÄÈÜëõìá ÖèïñÈïý÷ïõ Íáôñßïõ, Áñ. Êáôáëüãïõ 919-25 mL
ÖèïñÈïý÷ï ÍÜôñÈï, 2 g/dL
ÓÇÌÅÉÙÓÅÉÓ:
ÏÈ äÈáäÈêáóßåò ðïõ ðåñÈãñÜöïíôáÈ ðñáãìáôïðïÈïýíôáÈ óôïõò 37 °C. Áí ôá áíôÈäñáóôÞñÈá äåí
âñßóêïíôáÈ óå áõôÞ ôç èåñìïêñáóßá, ìðïñåß íá óõìâïýí
áóèåíåßò Þ áñíçôÈêÝò áíôÈäñÜóåÈò. ÓõíÈóôÜôáÈ ïÈ
èåñìïêñáóßåò íá åëÝã÷ïíôáÈ ìå Ýíá èåñìüìåôñï
áêñÈâåßáò. Ôá õäáôüëïõôñá åëåã÷üìåíçò èåñìïêñáóßáò
åßíáÈ áðïôåëåóìáôÈêüôåñá áðü ôïõò åðùáóôÞñåò èåñìïý
áÝñá êáÈ ðñÝðåÈ íá ÷ñçóÈìïðïÈïýíôáÈ ãÈá ôÈò åíæõìÈêÝò
êõôôáñï÷çìÈêÝò ìåèüäïõò. Ç ìåôáöïñÜ èåñìüôçôáò ìÝóù
ôïõ ãõáëÈïý åßíáÈ ôá÷ýôåñç áðü ôç ìåôáöïñÜ ìÝóù ôïõ
ðëáóôÈêïý, ãÈ’ áõôü, ðñÝðåÈ íá ÷ñçóÈìïðïÈçèïýí ãõÜëÈíá
äï÷åßá Coplin.
ÐïëëÜ åíæõìÈêÜ óõóôÞìáôá åßíáÈ åõáßóèçôá óå
åëÜ÷Èóôá ß÷íç áðïññõðáíôÈêïý. Ôï ðëýóÈìï ôùí ãõáëÈêþí
ìå áñáÈü äÈÜëõìá ÷ëùñßíçò ìå åðáêüëïõèï îÝðëõìá ìå
ìåãÜëç ðïóüôçôá áðÈïíÈóìÝíïõ íåñïý áðïôñÝðåÈ ôçí
åðßäñáóç ôïõ áðïññõðáíôÈêïý óôá êõôôáñÈêÜ Ýíæõìá.
Ôá áðïôåëÝóìáôá âáóßæïíôáÈ óå êÜðïÈï âáèìü
õðïêåÈìåíÈêÞò åñìçíåßáò. Ôï êÜèå åñãáóôÞñÈï ðñÝðåÈ íá
êáèÈåñþóåÈ ôï äÈêü ôïõ öõóÈïëïãÈêü åýñïò.
Ôá äåäïìÝíá ðïõ ëáìâÜíïíôáÈ áðü ôç äÈáäÈêáóßá
áõôÞ åîõðçñåôïýí ìüíï ùò âïÞèçìá óôç äÈÜãíùóç êáÈ
ðñÝðåÈ íá ÷ñçóÈìïðïÈïýíôáÈ óå óõíäõáóìü ìå Üëëåò
êëÈíÈêÝò äÈáãíùóôÈêÝò åîåôÜóåÈò Þ ðëçñïöïñßåò.
ÄÉÁÄÉÊÁÓÉÁ:
ÄÉÁÄÉÊÁÓÉÁ ÍÁÖÈÏËÇÓ AS-D
×ËÙÑÏÏÎÉÊÇ ÅÓÔÅÑÁÓÇÓ:
1. Óôåñåþóôå ôÈò áíôÈêåÈìåíïöüñïõò ãÈá 1 ëåðôü
óå ÓôåñåùôÈêü ÊÈôñÈêïý-Áêåôüíçò-Ìåèáíüëçò óå
èåñìïêñáóßá äùìáôßïõ (18–26 °C).
2. Îåðëýíåôå åðÈìåëþò ìå áðÈïíÈóìÝíï íåñü êáÈ
óôåãíþóôå óôïí áÝñá ãÈá ôïõëÜ÷Èóôïí 20 ëåðôÜ.
3. Óå 50 mL áñáÈïý ñõèìÈóôÈêïý äÈáëýìáôïò
TRIZMALTM 6,3, ÐÑÏÈÅÑÌÁÓÌÅÍÏÕ ÓÔÏÕÓ
37 °C, ðñïóèÝóôå õðü óõíå÷Þ áíÜäåõóç, ôï
ðåñÈå÷üìåíï 1 êÜøïõëáò ¢ëáôïò Áíè. Corinth V.
4. ¼ôáí ôï Üëáò äÈáëõèåß ðëÞñùò óôï ñõèìÈóôÈêü
äÈÜëõìá, ðñïóèÝóôå 2 mL ÄÈáëýìáôïò Íáöèüëçò
AS-D ×ëùñïïîÈêïý. Ôï äÈÜëõìá åßíáÈ áñêåôÜ èïëü.
5. Óõíå÷ßóôå ôçí áíÜìÈîç ãÈá 15–30 äåõôåñüëåðôá êáÈ
ìåôÜ âÜëôå ôï óå äï÷åßï Coplin. ÌÇ ÖÉËÔÑÁÑÅÔÅ.
6. ÔïðïèåôÞóôå ôá äåßãìáôá óôï äÈÜëõìá ÷ñþóçò (áðü
ôï ÂÞìá 5) êáÈ åðùÜóôå óôïõò 37 °C ãÈá 5 ëåðôÜ.
ÓÇÌÅÉÙÓÇ: ÐÑÏÓÔÁÔÅØÔÅ ÁÐÏ ÔÏ ÖÙÓ.
7. ÁöáÈñÝóôå ôÈò áíôÈêåÈìåíïöüñïõò áðü ôç ÷ñùóôÈêÞ
êáÈ îåðëýíåôå óå áðÈïíÈóìÝíï íåñü åðß 3 ëåðôÜ.
Áðïññßøôå ôï äÈÜëõìá ÷ñþóçò.
8. Áí åðÈèõìåßôå, ðñïâåßôå óå áíôß÷ñùóç óå ÄÈÜëõìá
¼îÈíçò ÁÈìáôïîõëßíçò åðß 5–10 ëåðôÜ êáÈ îåðëýíåôå
óå íåñü âñýóçò.
9. Óôåãíþóôå ôÈò áíôÈêåÈìåíïöüñïõò óôïí áÝñá êáÈ
åîåôÜóôå ôÈò óôï ìÈêñïóêüðÈï. Áí áðáÈôåßôáÈ êÜëõøç
÷ñçóÈìïðïÈÞóôå ìüíï õäáôÈêü óôåñåùôÈêü ìÝóï.
ÄÉÁÄÉÊÁÓÉÁ α-ÍÁÖÈÕË ÏÎÉÊÇÓ ÅÓÔÅÑÁÓÇÓ:
1. Óôåñåþóôå ôÈò áíôÈêåÈìåíïöüñïõò óå ÓôåñåùôÈêü
ÊÈôñÈêïý-Áêåôüíçò-Ìåèáíüëçò åðß 1 ëåðôü óå
èåñìïêñáóßá äùìáôßïõ (18–26 °C).
2. Îåðëýíåôå åðÈìåëþò ìå áðÈïíÈóìÝíï íåñü êáÈ
óôåãíþóôå óôïí áÝñá åðß ôïõëÜ÷Èóôïí 20 ëåðôÜ.
3. Óå 50 mL áñáÈïý ñõèìÈóôÈêïý äÈáëýìáôïò
TRIZMALTM 7,6, ÐÑÏÈÅÑÌÁÓÌÅÍÏÕ ÓÔÏÕÓ
37 °C, ðñïóèÝóôå õðü óõíå÷Þ áíÜäåõóç, ôï
ðåñÈå÷üìåíï 1 êÜøïõëáò ¢ëáôïò Áíè. Ìðëå RR.
4. ¼ôáí ôï Üëáò äÈáëõèåß ðëÞñùò óôï ñõèìÈóôÈêü
äÈÜëõìá, ðñïóèÝóôå 2 mL ÄÈáëýìáôïò α-Íáöèõë
ÏîÈêïý. Ôï äÈÜëõìá åßíáÈ êßôñÈíï êáÈ åëáöñþò èïëü.
5. Óõíå÷ßóôå ôçí áíÜìÈîç ãÈá 15–20 äåõôåñüëåðôá êáÈ
ìåôÜ âÜëôå ôï óå äï÷åßï Coplin. ÌÇ ÖÉËÔÑÁÑÅÔÅ.
6.
ÔïðïèåôÞóôå ôá äåßãìáôá óôï äÈÜëõìá ÷ñþóçò (áðü
ôï ÂÞìá 5) êáÈ åðùÜóôå óôïõò 37 °C ãÈá 30 ëåðôÜ.
ÓÇÌÅÉÙÓÇ: ÐÑÏÓÔÁÔÅØÔÅ ÁÐÏ ÔÏ ÖÙÓ.
7. ÁöáÈñÝóôå ôÈò áíôÈêåÈìåíïöüñïõò áðü ôç ÷ñùóôÈêÞ
êáÈ îåðëýíåôå åðß 3 ëåðôÜ óå áðÈïíÈóìÝíï íåñü.
Áðïññßøôå ôï äÈÜëõìá ÷ñþóçò.
8. ÐñáãìáôïðïÈÞóôå
áíôß÷ñùóç,
åöüóïí
åßíáÈ
åðÈèõìçôü, åðß 5–10 ëåðôÜ óå ÄÈÜëõìá
ÁÈìáôïîõëßíçò ôïõ Mayer êáÈ îåðëýíåôå óå íåñü ôçò
âñýóçò.
9. Óôåãíþóôå ôÈò áíôÈêåÈìåíïöüñïõò óôïí áÝñá êáÈ
åîåôÜóôå ôÈò óôï ìÈêñïóêüðÈï. Áí áðáÈôåßôáÈ êÜëõøç
÷ñçóÈìïðïÈÞóôå ìüíï õäáôÈêü óôåñåùôÈêü ìÝóï.
ÄÉÁÄÉÊÁÓÉÁ ÅÓÔÅÑÁÓÇÓ ÄÉÐËÇÓ ×ÑÙÓÇÓ:
1. ÐñáãìáôïðïÈÞóôå ôçí åîÝôáóç α-íáöèõë ïîÈêÞò
ÅóôåñÜóçò üðùò ðåñÈãñÜöåôáÈ óôç äÈáäÈêáóßá.
Ìçí ðñáãìáôïðïÈÞóåôå áíôß÷ñùóç.
2. Îåðëýíåôå ôÈò áíôÈêåÈìåíïöüñïõò åðß 5 ëåðôÜ óå
áðÈïíÈóìÝíï íåñü.
3. ÐñáãìáôïðïÈÞóôå
åîÝôáóç
ÅóôåñÜóçò
ôçò
×ëùñïïîÈêÞò Íáöèüëçò AS-D üðùò ðåñÈãñÜöåôáÈ
óôá ÂÞìáôá 3–9 ôçò äÈáäÈêáóßáò.
ÄÉÁÄÉÊÁÓÉÁ α-ÍÁÖÈÕË ÏÎÉÊÇÓ ÅÓÔÅÑÁÓÇÓ ÌÅ
ÁÍÁÓÔÏËÇ ÖÈÏÑÉÏÕ:
Ðáñüëï ðïõ ç α-íáöèõë ïîÈêÞ åóôåñÜóç õðÜñ÷åÈ
êõñßùò óå êýôôáñá ôçò ìïíïêõôôáñÈêÞò óåÈñÜò üôáí
ðñáãìáôïðïÈåßôáÈ üðùò ðåñÈãñÜöôçêå, ðñÝðåÈ íá
äÈáôçñåßôáÈ õðüøç üôÈ ôá ìåãáêáñõïêýôôáñá êáÈ ïÈ
ðñüäñïìïÈ ôùí åñõèñïåÈäþí åßíáÈ èåôÈêÜ ãÈá áõôü
ôï Ýíæõìï.11 Ôá ëåìöïêýôôáñá êáÈ ìåñÈêÜ þñÈìá
êïêêÈïêýôôáñá åìöáíßæïõí åðßóçò åõêáÈñÈáêÜ èåôÈêÞ
÷ñþóç.5 ÃÈá ïñÈóôÈêÞ äÈÜêñÈóç ôùí êõôôÜñùí áõôþí áðü
ôá ìïíïêýôôáñá, óôï óýóôçìá åðþáóçò åíóùìáôþíåôáÈ
öèïñÈïý÷ï íÜôñÈï. Ôï Ýíæõìï ôùí ìïíïêõôôÜñùí
áðåíåñãïðïÈåßôáÈ ðáñïõóßá áõôÞò ôçò ÷çìÈêÞò Ýíùóçò.12
ÃÈá ôçí ðñáãìáôïðïßçóç ôçò åîÝôáóçò áíáóôïëÞò öèïñßïõ
ìðïñåß íá ÷ñçóÈìïðïÈçèåß ç áêüëïõèç äÈáäÈêáóßá.
1. Óôåñåþóôå ôÈò áíôÈêåÈìåíïöüñïõò óå ÓôåñåùôÈêü
ÊÈôñÈêïý-Áêåôüíçò-Ìåèáíüëçò åðß 1 ëåðôü óå
èåñìïêñáóßá äùìáôßïõ (18–26 °C).
2. Îåðëýíåôå åðÈìåëþò ìå áðÈïíÈóìÝíï íåñü êáÈ
óôåãíþóôå óôïí áÝñá åðß ôïõëÜ÷Èóôïí 20 ëåðôÜ.
3. ÔïðïèåôÞóôå åôÈêÝôåò óå 2 ðïôÞñÈá æÝóåùò A êáÈ B
êáÈ ðñïóèÝóôå ôá åîÞò:
ÐïôÞñÈï
æÝóåùò A
ÐïôÞñÈï
æÝóåùò Â
50 mL
50 mL
1 êÜøïõëá
1 êÜøïõëá
2 mL
2 mL
—
2 mL
ÁñáÈü ÑõèìÈóôÈêü ÄÈÜëõìá
TRIZMALTM 7,6 ðñïèåñìáóìÝíï óôïõò 37 °C
ÐñïóèÝóôå õðü óõíå÷Þ
áíÜäåõóç, Áíè. ìðëå RR
ÄÈÜëõìá α-ÍáöèõëïîÈêïý
ÄÈÜëõìá ÖèïñÈïý÷ïõ Íáôñßïõ
4.
5.
Áíáìßîôå êáëÜ êáÈ ìåôáöÝñåôÝ ôï óôá äýï äï÷åßá
Coplin Á êáÈ Â.
Ðñï÷ùñÞóôå üðùò ðåñÈãñÜöåôáÈ óôá ÂÞìáôá 6–9
ôçò ÄÈáäÈêáóßáò α-íáöèõë ïîÈêÞò ÅóôåñÜóçò.
_______________________________
×ÁÑÁÊÔÇÑÉÓÔÉÊÁ ÁÐÏÄÏÓÇÓ
_______________________________
ÌÅÈÏÄÏÓ ÂÁÈÌÏËÏÃÇÓÇÓ:
Óáñþóôå ôï ëåðôü óôñþìá êáÈ åðÈëÝîôå ìÈá
ëåðôÞ ðåñÈï÷Þ ìå ëßãá åñõèñïêýôôáñá. ÏÈ èÝóåÈò ìå
äñáóôÈêüôçôá ÅóôåñÜóçò ôçò ×ëùñïïîÈêÞò Íáöèüëçò
AS-D åìöáíßæïíôáÈ ùò êüêêÈíç êïêêßùóç êáÈ ìå α-íáöèõë
ïîÈêÞ ÅóôåñÜóç ùò ìáýñç êïêêßùóç. ÂáèìïëïãÞóôå áðü
0 Ýùò 4+ ìå âÜóç ôçí ðïóüôçôá êáÈ ôçí Ýíôáóç ôçò êÜèå
÷ñùóôÈêÞò åíôüò ôïõ êõôôáñïðëÜóìáôïò ôùí áíôßóôïÈ÷ùí
ôýðùí êõôôÜñùí. Ôá ÷áñáêôçñÈóôÈêÜ ôçò âáèìïëüãçóçò
âáóßæïíôáÈ åí ìÝñåÈ óå õðïêåÈìåíÈêÞ åñìçíåßá. ÌÈá
ðñïôåÈíüìåíç
ìïñöïðïßçóç
ôçò
âáèìïëüãçóçò
ðáñïõóÈÜæåôáÈ óôïí Ðßíáêá 1. Ôá óõìðåñÜóìáôá
åðÈêåíôñþíïíôáÈ óôç ó÷åôÈêÞ ðáñïõóßá Þ áðïõóßá ÷ñþóçò.
_______________________________
ÐÉÍÁÊÁÓ I
×áñáêôçñÈóôÈêÜ âáèìïëüãçóçò
ÂÉÂËÉÏÃÑÁÖÉÁ
_______________________________
1.
¸íôáóç
ÊáôÜôáîç
ÊõôôÜñùí
ôçò ×ñþóçò
Åñìçíåßá
0
1+
2+
3+
4+
ÊáìÈÜ
ÁóèåíÞò Ýùò ÌÝôñÈá
ÌÝôñÈá Ýùò Éó÷õñÞ
Éó÷õñÞ
ÅîáÈñåôÈêÞ
–
±
+
+
+
ÁÐÏÔÅËÅÓÌÁÔÁ:
ÍÁÖÈÏËÇ AS-D ×ËÙÑÏÏÎÉÊÇ ÅÓÔÅÑÁÓÇ:
Áõôü ôï Ýíæõìï èåùñåßôáÈ óõíÞèùò åÈäÈêü ãÈá
êýôôáñá ôçò êïêêÈïêõôôáñÈêÞò óåÈñÜò. Ôá êýôôáñá ðñÝðåÈ
íá åìöáíßæïõí êüêêÈíç êïêêßùóç. Ç äñáóôÈêüôçôá åßíáÈ
áóèåíÞò Þ áðïõóÈÜæåÈ óå ìïíïêýôôáñá êáÈ ëåìöïêýôôáñá.
α-ÍÁÖÈÕË ÏÎÉÊÇ ÅÓÔÅÑÁÓÇ:
Õðü ôÈò óõíèÞêåò ôçò áíÜëõóçò (pH 7,6), ôï Ýíæõìï
áõôü áíÈ÷íåýåôáÈ êõñßùò óå ìïíïêýôôáñá, ìáêñïöÜãá
êáÈ ÈóôÈïêýôôáñá êáÈ äõíçôÈêÜ áðïõóÈÜæåÈ áðü ôá
êïêêÈïêýôôáñá. Ôá ìïíïêýôôáñá ðñÝðåÈ íá åìöáíßæïõí
ìáýñç êïêêßùóç. Ôá ëåìöïêýôôáñá ìðïñåß åõêáÈñÈáêÜ íá
ðáñïõóÈÜóïõí äñáóôÈêüôçôá.
α-ÍÁÖÈÕË ÏÎÉÊÇ ÅÓÔÅÑÁÓÇ ÌÅ ÁÍÁÓÔÏËÇ
ÖÈÏÑÉÏÕ:
¼ëá ôá êýôôáñá ôçò ìïíïêõôôáñÈêÞò óåÈñÜò åßíáÈ
áñíçôÈêÜ ãÈá åíæõìÈêÞ äñáóôÈêüôçôá, ìå åîáßñåóç ôá
äÈáöïñïðïÈçìÝíá ÈóôÈïêýôôáñá Þ ôá åîåÈäÈêåõìÝíá
ìáêñïöÜãá óå Èóôü ðïõ ìðïñåß íá åßíáÈ åðßóçò áíèåêôÈêüò
óôï öèïñÈïý÷ï íÜôñÈï.10
ÅÓÔÅÑÁÓÇ ÄÉÐËÇÓ ×ÑÙÓÇÓ:
Ôá äåßãìáôá ðïõ ëáìâÜíïíôáÈ áðü ôç äÈáäÈêáóßá
äÈðëÞò ÷ñþóçò åìöáíßæïõí ôá êïêêÈïêýôôáñá ìå êüêêÈíç
êïêêßùóç êáÈ ôá ìïíïêýôôáñá ìå ìáýñç êïêêßùóç.
Ç áíáìåíüìåíç êõôôáñÈêÞ äñáóôÈêüôçôá ôùí
åîåôÜóåùí ãÈá äñáóôÈêüôçôá åóôåñÜóçò óõíïøßæåôáÈ óôïí
Ðßíáêá ÉÉ.
ÐÉÍÁÊÁÓ II
Êõôôáñï÷çìÈêÝò ÁíôÈäñÜóåÈò ÊõôôÜñùí ôïõ
Áßìáôïò
Ôýðïò ÊõôôÜñïõ
ÌõåëïâëÜóôåò
Ðñïìõåëïêýôôáñá
ÏõäåôåñüöÈëá
ÇùóÈíüöÈëá
ÂáóåüöÈëá
Ìïíïêýôôáñá
Ëåìöïêýôôáñá
ËåìöïâëÜóôåò
Ìåãáêáñõïêýôôáñá
ÅñõèñïâëÜóôåò
Ðëáóìáôïêýôôáñá
Ìáóôïêýôôáñá
ÔñÈ÷ùôÜ êýôôáñá
ÉóôÈïêýôôáñá
Íáöèüëç AS-D
×ëùñïïîÈêÞ
α-Íáöèõë
ÏîÈêÞ ÅóôåñÜóç
ÅóôåñÜóç
±
+
+
—
±
—
—
—
—
—
—
+
—
±
±
±
—
—
—
+
±
±
+
±
±
—
±
+
Ôï áíôÈäñüí óýóôçìá ðñÝðåÈ íá ðáñáêïëïõèåßôáÈ
ìå ôç ÷ñÞóç áíôÈêåÈìåíïöüñùí èåôÈêïý êáÈ áñíçôÈêïý
ìÜñôõñá. ÏÈ áíôÈêåÈìåíïöüñïÈ èåôÈêïý ìÜñôõñá ìðïñåß
íá ðñïåôïÈìáóôïýí áðü ëåõ÷áÈìÈêÜ äåßãìáôá Þ åÈäÈêÝò
êõôôáñÈêÝò óåÈñÝò ãíùóôÝò üôÈ åßíáÈ èåôÈêÝò.
ÅíáëëáêôÈêÜ, ìðïñåß åðßóçò íá ÷ñçóÈìïðïÈçèåß
áßìá ìå áíôÈðçêôÈêü áðü öõóÈïëïãÈêÜ äåßãìáôá
(êáôÜ ðñïôßìçóç ìå áõîçìÝíï áñÈèìü ìïíïêõôôÜñùí
áí ÷ñçóÈìïðïÈåßôáÈ ç äÈáäÈêáóßá α-íáöèõë ïîÈêÞò
åóôåñÜóçò). Ùóôüóï, ÷ñùìáôßæïíôáÈ ëÈãüôåñï Ýíôïíá êáÈ
Ý÷ïõí ëÈãüôåñá èåôÈêÜ êýôôáñá.
Ùò áñíçôÈêüò ìÜñôõñáò ìðïñïýí íá ÷ñçóÈìïðïÈçèïýí
áíôÈêåÈìåíïöüñïÈ ãíùóôþí áñíçôÈêþí áóèåíþí. Áí
äåí õðÜñ÷ïõí, ç ÷ñþóç äåßãìáôïò óå ìßãìá åðþáóçò
ìå ðáñÜëåÈøç ôïõ õðïóôñþìáôïò äßíåÈ ôá åðÈèõìçôÜ
áðïôåëÝóìáôá. Ùóôüóï, óõíÈóôÜôáÈ ÈäÈáßôåñá ç ÷ñÞóç ôïõ
ðñïçãïýìåíïõ.
Áí ôá áðïôåëÝóìáôá ðïõ ðáñáôçñÞèçêáí áðïêëßíïõí
áðü ôá áíáìåíüìåíá, åðÈêïÈíùíÞóôå ìå ôçí Ôå÷íÈêÞ
ÅîõðçñÝôçóç ôçò Sigma-Aldrich ãÈá âïÞèåÈá.
2-GR
Beard, MEJ, Fairly GH: Acute leukemia in adults.
Semin Hematol 11:5, 1974.
2. Beckmann H, Neth R, Gaedicke G, Lanbeck G,
Schoch G, Wiegers U, Winkler K: Cytology and
cytochemistry of the leukemic cell. Haematol
Bluttransfus 14:26, 1974.
3. Bennet JM, Reed CE: Acute leukemia cytochemical
profile: Diagnostic and clinical implications. Blood
Cells 1:101, 1975.
4. Cawley JC, Hayhoe FGJ: Acute leukemia: Cellular
morphology, cytochemistry and fine structure. Clinics
in Haematol 1:49, 1972.
5. Yam LT, Li CY, Crosby WH: Cytochemical
identification of monocytes and granulocytes. Am J
Clin Pathol 55:283, 1971.
6. Yam, LT, Li CY, Wolfe HJ, Moy PW: Histochemical
study of acute leukemia. Arch Pathol 97:129, 1974.
7. Burstone MS: The cytochemical localization of
esterase. J Natl Cancer Inst 18:167, 1957.
8. Moloney WC, McPherson K, Sliegerman L: Esterase
activity in leukocytes demonstrated by the use of
naphthol AS-D chloroacetate substrate. J Histochem
Cytochem 8:200, 1960.
9. Brown BA: IN Hematology: Principles and
Procedures. Lea and Febiger, Philadelphia, PA,
1984, pp 127–130.
10. Sun T: Atlas of Cytochemistry and Immunochemistry
of Hematologic Neoplasms. American Society of
Clinical Pathologists Press, Chicago, IL, 1985, pp
24, 38.
11. Hayhoe FGJ, Flemans RJ: IN Color Atlas of
Hematological Cytology. John Wiley & Sons, New
York, NY, 1982, pp 34, 111.
12. Li CY, Lam KW, Lam LT: Esterases in human
leukocytes. J Histochem Cytochem 21:1, 1973.
Ôï TRIZMA åßíáé åìðïñéêü óÞìá êáé ôï TRIZMAL óÞìá
êáôáôåèÝí ôçò Sigma-Aldrich Co. LLC
Ç Sigma-Aldrich, Inc. åããõÜôáÈ üôÈ ôá ðñïúüíôá ôçò
óõììïñöþíïíôáÈ ìå ôÈò ðëçñïöïñßåò ðïõ ðåñÈÝ÷ïíôáÈ
óå áõôÞ êáÈ óå Üëëåò åêäüóåÈò ôçò Sigma-Aldrich. Ï
áãïñáóôÞò ðñÝðåÈ íá êáèïñßæåÈ ôçí êáôáëëçëüôçôá
ôïõ(ùí) ðñïúüíôïò(ùí) ãÈá ôç óõãêåêñÈìÝíç ÷ñÞóç ôïõò.
ÐÈèáíüí íá Èó÷ýïõí ðñüóèåôïÈ üñïÈ êáÈ óõíèÞêåò.
Âë. áíôßóôñïöç ðëåõñÜ ôïõ ôÈìïëïãßïõ Þ ôçò ôáÈíßáò
óõóêåõáóßáò ãÈá åðÈðëÝïí üñïõò êáÈ óõíèÞêåò ðþëçóçò.
Áñ. ÄÈáäÈêáóßá 90
Ðñïçãïýìåíç áíáèåþñçóç: 2012-10
ÁíáèåùñçìÝíç: 2013-02
AR-MED, a division of Quintiles Ltd
Runnymede Malthouse
Off Hummer Road
Egham
Surrey
TW20 9BD
United Kingdom
SIGMA-ALDRICH, INC.
3050 Spruce Street, St. Louis, MO 63103 USA +1 314 771 5765
Ôå÷íÈêÞ Õðçñåóßá: ÷ñåùóôÈêÞ êëÞóç +1 314 771 3122
Þ e-mail óôï [email protected]
ÃÈá ðáñáããåëßåò: ÷ñåùóôÈêÞ êëÞóç +1 314 771 5750
www.sigma-aldrich.com
SIGMA-ALDRICH INTERNATIONAL GmbH
Wassergasse 7
900 St. Gallen
Switzerland
41 71 242 8000