Run 96
Modules In This Issue
Immunocytochemistry
New Pilot Modules
Module
8
Gastric
HER2 IHC
Results - Summary Graphs - Pass Rates
Best Methods - Selected Images
Breast
HER2 ISH Technical
Assessment Dates: 5-20th January 2012
Immunocytochemistry Modules
Module
1
General Pathology:
SMA & CK
2
Breast pathology:
ER
3
Breast pathology:
HER2 IHC
4
Lymphoid pathology:
BCL2 & Cyclin D1
5
Neuropathology:
Ki67 & EMA
6
Cytology:
Melanoma & Calretinin
7A
Alimentary Tract:
GIST: CD117 & DOG1
In-situ Hybridisation Modules
Breast:
HER2 ISH Interpretive
Cover Photo:
Taken from Gastric IHC pre-pilot assessment showing gastric tumour from one of
the distributed samples. A) 3+ complete
membrane staining of high intensity and
B) Area of 2+ with lower staining intensity
** Reserve The Date **
The UK NEQAS ICC & ISH Conference for Tissue Diagnostics
Will Take Place on The
12-14th October 2012
Windsor
www.beaumonthousewindsor.co.uk
More information will follow soon
© UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent
General Information
Data shown in this article is collated from UK NEQAS ICC & ISH and is presented and described ‘as collected’, and does not
ether endorse nor denounce any particular product or method and is provided as a guide to highlight optimal and sub-optimal
staining methodologies.
For further information of the UK NEQAS
ICC & ISH scheme, general EQA
enquiries, slide returns please contact:
For enquiries concerning training issues,
meetings, or courses, please contact:
Dr Merdol Ibrahim, Scheme Manager
UK NEQAS ICC & ISH
Suite 3/02 Hamilton House
Mabledon Place
London WC1H 9BB, UK
Tel: (+44)207 554 8678
E-mail: [email protected]
Mr Keith Miller, Scheme Director
UK NEQAS ICC & ISH
UCL-AD, 21 University Street, University
College London
London WC1E 6JJ, UK
Tel: (+44)207 679 6048
E-mail: [email protected]
Director
Mr Keith Miller
([email protected])
Deputy Director
Mr Andrew Dodson
([email protected])
Assistant Manager
Ms Suzanne Parry
([email protected])
Manager
Dr Merdol Ibrahim
([email protected])
Office Manager
Mrs Ailin Rhodes
([email protected])
Quality Manager
Mr Neil Bilbe
([email protected])
Clerical Assistant
Mrs Clara Lynch
([email protected])
ASSESSORS
Mr C Abbott, Bristol, UK
DR M Arends, Cambridge, UK
Dr M Ashton-Key, Southampton, UK
Mr J Askaa, Copenhagen, Denmark
Dr E Baslev, Herlev, Denmark
Mrs J Bell, Nottingham, UK
Mr N Bilbe, London, UK
Mr D Blythe, Leeds, UK
Mr J Brown, London, UK
Dr J Cabecadas, Lisbon, Portugal
DR L Carson, Aberdeen, UK
Mrs A Clayton, Preston, UK
Mrs A Cramer, Manchester, UK
Mr A Dodson, Liverpool, UK
Mrs G Donald, Maidstone, UK
Dr D Faratian, Edinburgh, UK
Mr A Ferrero, Lisbon, Portugal
Mr R Fincham, Cambridge, UK
Mr D Fish, Reading, UK
DR M Flezar, Ljubljana, Slovenia
Mrs S Forrest, Liverpool, UK
Dr M Franco, Lisbon, Portugal
Dr I Frayling, Cardiff, Wales
Ms J Freeman, London, UK
Dr C Gillett, London, UK
Ms J Gorst, Bucks, UK
Mr J Gregory, Birmingham, UK
Prof A Hanby, Leeds, UK
Mr N Hand, Nottingham, UK
Ms L Happerfield, Cambridge, UK
Dr M Heragoda, London, UK
Dr R Hunt, Stockport, UK
Dr M Ibrahim, London, UK
Mr P Jackson, Leeds, UK
Prof B Jasani, Cardiff, UK
Mrs N Johnson, Cambridge, UK
Ms S Jordan, London, UK
Dr J Joseph, Preston, UK
Mrs M Judd, Southampton, UK
Prof E Kaye, Dublin, Ireland
Dr G King, Aberdeen, UK
Mrs I Kirbis, Ljubljana, Slovenia
Dr T Krenacs, Szeged, Hungary
Dr B Lloyd, Cambridge, UK
Mrs J MacMillan, Glasgow, UK
Mr C Marsh, Newcastle, UK
Dr P Maxwell, Belfast, UK
Mr K McAllister, Dublin, Ireland
Mrs H McBride, Belfast, UK
Mr J McGloin, London, UK
Dr S McQuaid, Belfast, UK
Mr K Miller, London, UK
Ms J Moorhead, London, UK
Ms P Munson, London, UK
Mrs L Necus, Kettering, UK
Mr S Nielsen, Aalborg, Denmark
Mr T O’Grady, Dublin, Ireland
Dr G Orchard, London, UK
Ms S Parry, London, UK
Dr V Phillips, Cambridge, UK
Dr S Pinder, Cambridge, UK
Dr E Provenzano, Cambridge, UK
Mrs F Rae, Edinburgh, UK
Dr B Rasmussen, Roskilde, Denmark
Dr A Riley, Stirling, UK
Mr G Rock, Birminghma, UK
Mr J Ronan, Nottingham, UK
Mr R Roque, Lisbon, UK
Dr F Schmitt, Porto, Portugal
Mrs J Starczynski, Birmingham, UK
Mrs C Thomas, Preston, UK
Mrs J Tunnicliffe, Vancouver, Canada
Mrs R VanWijk, Cape town, South Africa
Dr M Vyberg, Aalborg, Denmark
Mr A Watson, Newcastle, UK
Mrs H White, Maidstone, UK
Mrs J Williams, Portsmouth, UK
Ms S Wozniak, Cardiff, UK
Journal layout and design prepared by UK NEQAS ICC & ISH
© UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent
1
The HER2 IHC Gastric Module (Pre-pilot Results)
Run 96
Merdol Ibrahim, Suzanne Parry, Jane Starczynski, Newton Wong, Bharat Jasani and Iris Nagelmeier
Antigens Assessed:
HER2 IHC
Tissue Sections circulated:
Composite slide consisting of:
A. 3+ Intestinal Gastric carcinoma. Note: one block also had an area of 2+
membrane staining
B. 2+ Intestinal Gastric carcinoma
C. 1+ Intestinal Gastric carcinoma
D. Negative Intestinal Gastric carcinoma
Number of Participants Taking Part
89
Specific Guideline Used in The Assessment of Slides (Table 1):
The gastric immunohistochemical results were evaluated by UK NEQAS assessors using the gastric scoring guidelines
as devised by Hoffman et al., (2008) and Rüschoff et al., (2010)
Surgical / resections
(As used in this assessment)
Biopsies
No staining in < 10% of tumour cells
No staining in any of the tumour cells
1+
(negative)
Faint barely perceptible incomplete
membrane staining in >10% of cells
staining
Tumour cells with faint barely perceptible incomplete
membrane staining, irrespective of percentage of
tumour cells stained
2+
(equivocal*)
Weak to moderate complete, basolateral
or lateral
membrane reactivity in > 10% of tumour
cells
Tumour cells with weak to moderate complete,
basolateral or lateral membrane reactivity irrespective
of percentage of tumour cells stained
3+
(positive)
Strong complete, basolateral or lateral
membrane
reactivity in > 10% of tumour cells
Tumour cells with strong, basolateral or lateral
membrane reactivity irrespective of percentage of
tumour cells stained
Score
(negative)
* Equivocal cases should be refluxed to ISH testing. Note: in the UK, NICE guidelines
recommend that only 3+ cases are put forward for Trastuzumab treatment, see http://
guidance.nice.org.uk/TA208
Table 1
Validation of Distributed Samples
IHC Validation of Distributed Samples
The NEQAS tissue sections were quality controlled prior to sending out, using the Ventana pathway 4B5 as the ‘gold
standard’. However, sections were also stained using the Dako Herceptest and Leica Oracle system: Important: The
Leica Oracle HER2 IHC System is not currently supported for gastric HER2 IHC and any laboratory using the kit
for gastric purposes should be aware that they are doing so ’off label usage’ and would need to fully validate the
Leica Oracle system prior to diagnostic use.
ISH Validation of Distributed Samples
The tissue was also assessed for gene expression using both FISH (Abbott Vysis) and DDISH (Ventana), and the amplified
status of the tissue sections are shown below.
Section Label
From slide Label
End
Staining Pattern
with Ventana 4B5
HER2 status by ISH*
A
3+
Amplified (but see fig 1-4)
B
2+
Amplified (but see fig 9 & 10)
C
1+
Not amplified (see fig 11)
D
negative
Not amplified (see fig 13)
Table 2
© UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent
2
The HER2 IHC Gastric Module (Pre-pilot Results)
Run 96
UK NEQAS Specific Scoring Criteria
UK NEQAS ICC & ISH uses an EQA specific scoring criteria when scoring the tissue sections, so as to provide participants
additional technical feedback, which is illustrated in the table below.
Expected
Score
3
Acceptable Scores
Description of staining Pattern used by the assessors
3+ only (during this pre-pilot Only a strong complete, basolateral or lateral membrane reactivity in > 10% of
assessment scores of 3+/2+ or tumour cells is acceptable
2+/3+ were also accepted)
2+
2+ or 1+/2+ or 2+/1+
2+/3+ or 3+/2+
i) 1+/2+ or 2+/1+: Staining is slightly weaker than expected with membrane showing
more 1+ compared to 2+ (1+/2+) or 2+ membrane staining is present but also
showing 1+ staining (2+/1+).
ii) 2+/3+ or 3+/2+: Staining is slightly weaker than expected with membrane showing
more 2+ compared to 3+ (2+/3+) or 3+ membrane staining is present but also
showing 2+ staining (3+/2+). 1+
1+ or 0/1+ or 1+/0
i) 0/1+: Staining is more towards the weaker end of 1+ staining but still acceptable.
ii) 1+/0: Staining is more towards the weaker end of 1+ staining but still acceptable.
negative
0 or 0/1+ or 1+/0
0/1+ or 1+/0 = Cells are starting to show very weak membrane staining
‘U’/Uninterpretable Scores: Assessors may also give a score of 'U' which indicates that the cell lines / tissue sections were
'uninterpretable’ due to the reasons set out below. A score of U/x e.g. U/3+ or U/2+ or U/1+ or U/0 indicates a borderline
uninterpretable scores indicating that the staining is just about readable and further improvements are required.
Table 3
treatment for patients showing 3+ IHC and IHC2+/FISH+
expression. The initial development of the HER2 scoring criteria
was developed as a precursor to the ToGA trial (Hoffman et al.,
2008) with the study group modifying the breast HER2 IHC
scoring algorithm to compensate for the incomplete membrane
staining and greater tumour heterogeneity seen in gastric
cancers. A different scoring system was also established for resection and core biopsies as illustrated in table 1. A more recent
article by Rüschoff et al., (2010) has validated the scoring
procedure further with a detailed approach to ’stepwise’ HER2
IHC scoring in gastric cancers. The article also compared the
Ventana 4B5 assay with the Herceptest and indicated “a
tendency towards higher sensitivity for 4B5 detecting positive
HER2 amplification” but “There was no difference between both
test platforms with respect to the ISH-negative cases with the
one equivocal case testing negative at some sites and as
positive at others”. Rüschoff and colleagues also used both
After each slide has been individually scored and reported, an fluorescent (Dako pharmDX or PathVysion Vysis) and
overall pass mark is generated by adding together each of the 4 chromogen (Ventana BDISH) to confirm their IHC findings.
assessors marks giving a total potential score out of 12.
i. Acceptable = a score of between 11-12/12 (3 or more
Acceptable & Unacceptable Staining (Figs 1-13)
assessors have scored the slide as acceptable).
ii. Borderline = a score of between 6-10/12 (2 out of 4 The samples distributed consisted of a single slide of composite
gastric resection tissue samples denoted A-D and arranged as
assessors have scored the slide as acceptable).
iii. Unacceptable = a score of <5 (3 or more assessors have follows:
A. 3+ Intestinal Gastric carcinoma (Figs 1-6)
scored the slide as unacceptable).
Assessment Procedure
Assessment is carried out around a multi-header microscope
with each slide being assessed by 4 independent assessors
and a microscope lead. Each of the NEQAS sections (A,B,C,D)
(as well as in-house samples where submitted) are individually
assessed, with each assessor providing their own interpretation,
technical feedback for each of the tissue sections and an
individual score for the slide overall, such that:
i. Acceptable: Expected level of membrane staining and of
good technical staining. Equates to a score of 3/3
ii. Borderline: Tissue is interpretable but technical
improvements can be made. Equates to a score of 2/3
iii. Unacceptable: The Tissue/s are not staining as expected
indicating that technical improvements are required and /or the
staining is uninterpretable due to technical issues (see second
table above). Equates to a score of 1/3
B. 2+ Intestinal Gastric carcinoma (Figs 7-10)
C. 1+ Intestinal Gastric carcinoma (Figs 11-12) and
D. Negative Intestinal Gastric carcinoma (Fig 13).
General Introduction
Immunohistochemical testing of HER2 status is now routinely
used in breast cancer testing and is recognised as a prognostic
and predictive marker, generally used alongside breast
hormonal receptor markers ER/PR. Patients who are HER2
positive (IHC 3+ and IHC 2+/ISH+ ) have been shown to benefit
from Herceptin (Trastuzumab) therapy and increased overall
survival rate. More recently the Trastuzumab for Gastric Cancer
(ToGA) study, which investigated Trastuzumab in HER2 positive
advanced gastric cancer (Bang et al., 2010) showed overall
median survival of nearly 3 months. Similar to breast cancer, the
ToGA trial showed an increased benefit from Trastuzumab
Note; although section ‘A‘ was a heterogeneous tumour
showing 3+ and an area of 2+ membrane staining, the 2+ area
was not assessed and assessment focused on the 3+ area only.
Please refer to images and associated legends for further
information regarding the acceptable and unacceptable range of
staining patterns that were submitted for assessment.
© UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent
3
The HER2 IHC Gastric Module (Pre-pilot Results)
Additional Comments
a. The Ventana 4B5 did show epithelial staining (intestinal
metaplasia), especially on the distributed 3+ tumour section (not
illustrated) and participants were not scored down as the
assessment team were aware that this is one of the staining
characteristics of the Ventana 4B5 antibody and did not detract
from the actual staining of the gastric cancer
b. The Leica Oracle HER2 IHC System is not currently
supported for gastric HER2 IHC and any laboratory using the kit
for gastric purposes should be aware that they are doing so ’off
label usage’ and would need to fully validate the Leica Oracle
system prior to diagnostic use.
Pass Rates (see fig. 14)
Run 96
breast control tissue as their in-house controls.
Gastric controls would be the preferred tissue choice as in-house
controls for this module, but it is quite understandable that
laboratories may find it difficult to source good quality controls,
therefore laboratories were not penalised if they had submitted
breast carcinomas. Whether gastric or breast tissue is used,
laboratories should still submit in-house controls showing 3+, 2+
and 1+/0 levels of membrane expression.
It was also noted that several laboratories also submitted a
heterogeneous gastric tumour with areas of 3+ and areas of 2+
membrane expression as in-house controls, and the panel
agreed that this was also acceptable as long as the participant
indicated the areas of expected membrane staining.
References:
Of the 89 participants that took part in this assessment, results 1. Hofmann M, Stoss O, Shi D et al., Assessment of a HER2 scoring
from the NEQAS distributed samples showed an overall
system for gastric cancer: results from a validation study.
Histopathology. 2008 52(7):797-805.
acceptable pass rate of 54%, with 17% of participants scoring a
borderline pass and an unacceptable rate of 29%. The main 2. Rüschoff J, Dietel M, Baretton G etc al., HER2 diagnostics in gastric
cancer-guideline validation and development of standardized
reasons for unacceptable scores were mainly due to
immunohistochemical testing. Virchows Arch. 2010 457(3):299-307.
understaining of the 3+ or 2+ tumour sections, excessive
3. Bang YJ, Van Cutsem E, Feyereislova A, Chung HC, Shen L, Sawaki
cytoplasmic staining and excessive haematoxylin (see figs 1A, Lordick F, Ohtsu A, Omuro Y, Satoh T, Aprile G, Kulikov E, Hill J,
13) . Of the 89 participants submitting NEQAS distributed slides,
Lehle M, Rüschoff J, Kang YK; ToGA Trial Investigators. Trastuzumab
55 also submitted in-house control material, of which 29%, as
in combination with chemotherapy versus chemotherapy alone for
with the NEQAS sections, also received an unacceptable score.
treatment of HER2-positive advanced gastric or gastro-oesophageal
junction cancer (ToGA): a phase 3, open-label, randomised controlled
The main reasons for unacceptable scores for in-house material
trial. Lancet. 2010 376(9742):687-97
again were due to excessive cytoplasmic staining and excessive
haematoxylin, and in some cases the participants selfassessment was discordant with that of the NEQAS assessment
panel, for example participant interpretation indicating a 2+
membrane score on one of the in-house tumours, compared to a
1+ interpretation by the NEQAS assessors, indicating the
possibility of under staining and therefore possible
misinterpretation.
Methodologies (see fig. 15)
The main methodology employed was the Ventana 4B5 antibody
with 51% (n=45) of participants using this assay and which
showed an overall acceptable rate of 76%, borderline pass rate
of 11% and an unacceptable rate of 13% (6 participants). The
second most common methodology was a home-brew method
using the Dako polyclonal antibody (15% n=13) but which had a
69% (n=9) unacceptable rate. The Dako polyclonal was noted to
be used with a full range of retrieval methods, including water
bath, microwave oven and pressure cooker. However, there
were laboratories who did have an acceptable pass rate (5%,
n=2) who had optimised their protocols for gastric IHC testing.
The third most popular method was the Dako Herceptest, with
13% (n=12) of participants using this method and which showed
a good pass rate of 83% (n=10). Other methodologies employed
and their pass rate can be seen further in fig 15, but it should be
noted that with such small number of users of the differing
methodologies it is not possible to say whether such methods/
antibodies are suitable for gastric IHC in the context of the UK
NEQAS gastric assessment.
Control Tissue and Recommendations
In-house control slides were also requested for this module,
however, it was left open for laboratories to submit the control
material of their choice. For this run 54 laboratories out of 88
submitted an in-house control, of which 39/54 (72%) submitted
gastric cancer control tissue, with the majority of these being
composite control slides with 3+,2+ and 1+/0 membrane
staining. The remaining 15/54 (28%) of laboratories submitted
© UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent
4
The HER2 IHC Gastric Module (Pre-pilot Results)
Run 96
Selected Images Showing Optimal and Sub-optimal Immunostaining
Fig 1. Low magnification showing the expected level of staining for the high expressing UK NEQAS
distributed tumour section (section A on slide), which had an area of 3+ membrane staining (blue
oval) and an area of 2+ (red circle) membrane staining. Section stained using the Ventana 4B5
antibody.
Fig 2. High magnification of fig 1 (section A on slide). (A) 3+ complete membrane staining of high
intensity and B) Area of 2+ staining with lower staining intensity when compared to B. Section
stained using the Ventana 4B5 antibody.
Fig 3. Expected level of staining of the high expressing region (3+) of the NEQAS distributed tumour
section (section A on slide). A) stained with Dako Herceptest and B) stained with the CCBE356
antibody clone.
Fig 4. Acceptable 2+ membrane staining found in (section A on slide). A) stained with Dako
Herceptest and B) stained with the CCBE356 antibody clone.
Fig 5. Very weak, unacceptable staining of UK NEQAS distributed sections (section A on slide)
showing A) very weak A) 3+ and B) 2+ areas on the same slide sections. Section stained using the
Leica Oracle kit.
Fig 6. Unacceptable level of staining of UK NEQAS distributed 3+ expressing tumour A) section
stained with SP3 antibody clone using a home-brew method B) section stained using the Ventana 4B5
antibody showing poor localisation of antibody and excessive haematoxylin staining.
© UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent
5
The HER2 IHC Gastric Module (Pre-pilot Results)
Run 96
Selected Images Showing Optimal and Sub-optimal Immunostaining
Fig 7. Acceptable levels of staining of 2+ gastric tumour distributed by UK NEQAS (section B on
slide) A) stained using the Ventana 4B5 and B) stained using the Dako Herceptest. Both examples
show moderate complete and basolateral membrane staining in > 10% of tumour cells.
Fig 8. Unacceptable level of staining of 2+ gastric tumour distributed by UK NEQAS (section B on
slide) A) false negative staining of the 2+ tumour stained using the SP3 clone B) Excessive
cytoplasmic staining making any membrane staining uninterpretable. Section stained using a homebrew method using the Dako polyclonal antibody.
Fig 9. The distributed 2+ tumour section (section B on slide) showed heterogeneous staining
depending on the area visualised. A) circled area in red showed B) 2+ membrane staining, with
incomplete basolateral membrane staining using the Dako polyclonal antibody with a home-brew
method whilst C) stained with the Ventana 4B5 clone showed 1+ staining within the same area. This
difference in staining was only seen with the Dako polyclonal using the home-brew method.
Fig 10. In contrast to fig 9, the same 2+ tumour section (section B on slide) in a different area A)
circled in red showed B) 1+ membrane staining, with the Dako polyclonal antibody with a home-brew
method whilst C) stained with the Ventana 4B5 clone showed strong 2+ basolateral membrane
staining. This difference in staining was only seen with the Dako polyclonal using the home-brew
method.
Fig 11. Good demonstration of 1+ staining (section C on slide) from the UK NEQAS distributed
section, showing incomplete membrane staining in >10% of tumour cells. Section stained using the
Ventana 4B assay.
Fig 12. Unacceptable demonstration of 1+ staining (section C on slide) from the UK NEQAS
distributed section. There is no obvious membrane staining with excessive haematoxylin staining
possibly masking the membrane staining further. Section stained using the Dako polyclonal antibody
using a home-brew method.
© UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent
6
The HER2 IHC Gastric Module (Pre-pilot Results)
Run 96
Selected Images Showing Optimal and Sub-optimal Immunostaining
Fig 13. A) Expected staining of the negative gastric
tumour section distributed by UK NEQAS (section D
on slide). Section stained using Ventana 4B5 assay.
B) Unacceptable false positive membrane staining of
the NEQAS distributed negative gastric tumour.
There appears to be false 2+ membrane staining.
Section stained using the Dako polyclonal antibody
using a home-brew method.
Fig.14 Pass Rates on NEQAS Tissue, In-house tissue and Control Cell Line
Fig. 14 Graph displaying the overall assessors scores for the NEQAS distributed tissue, in-house submitted tissue and kit (control) cell lines.
Overall there were 89 participants who took part and submitted slides for assessments, of these 55 also submitted in-house tissue with 9
participants also submitting kit (control) cell lines.
© UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent
7
The HER2 IHC Gastric Module (Pre-pilot Results)
Run 96
Fig.15 Method Used and Associated Pass Rate on NEQAS Distributed Tissue Sections
Fig. 15 The graph shows that overall 64% of participants used a validated and recommended kit for testing of HER2 gastric cases. It should be noted that although
the Leica Oracle (15% of users) is also a kit it has yet to be recommended (formulated?) for the commercial use in gastric testing. The main ’home-brew’ method
of choice was the Dako polyclonal antibody using a variety of methods, however as the graphs show the acceptable rates were only 15%, with 69% of participants
achieving an unacceptable score. There were also other ‘home-brew’ methods used including, for example the CB11 clone, SP3, CBE356 which showed variable
pass rates.
© UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent
8
The HER2 ISH Module - Technical (pilot)
Run 25
Merdol Ibrahim, Suzanne Parry and 9 Reference Centres
Gene Assessed:
HER2 Chromogen ISH
Sections circulated:
Composite block containing cell line pellets (see below)
Number of Participants Taking Part
28
The Summary Box below gives details of the HER2 phenotype and genotype of the cell lines circulated for these assessments, which
comprised formalin fixed and paraffin processed sections from a composite block of four human breast carcinoma cell lines. The cell lines
are the same ones which are used in the HER2 IHC module (results of the HER2 IHC module can be found in this and previous issues of
Immunocytochemistry; and readers may wish to consult them for further details). The sections were positioned on the microscope slide as
indicated.
HER2 status by IHC1
HER2 status by FISH2
A. SK-BR-3
3+
Amplified
B. MDA-MB-453
2+
Borderline: Amplified to Non-Amplified
C. MDA-MB-175
1+
Not amplified
D. MDA-MB-231
negative
Not amplified
Cell line
1: Scored using Clinical Trials Assay system
2: FISH status as assessed by the UK NEQAS ICC & FISH reference laboratories (Bartlett et al., 2007)
Cell Line Positioning:
Cell lines are positioned on microscope slides, as illustrated below. Any variation in this pattern is
indicated on distribution of the slides
Slide
Label
Assessment Procedure Chromogen ISH:
Assessment is carried out around a multi-header microscope with each slide being assessed by 4 independent assessors and a
microscope lead.
Each of the NEQAS cell lines (A,B,C,D) (as well as in-house samples where submitted) are individually assessed, for the quality
of ISH staining for each NEQAS cell line (or control tissue if in-house samples were submitted) and scored according to the
criteria shown in the table below.
Assessors do not count the HER2/CEP17 signals. The accuracy of signal enumeration is assessed in the 'interpretive' section of
the HER2 ISH module.
After each cell line has been individually scored and reported, an overall pass mark is generated for the slide as a whole by
counting each of the assessors individual cell line scores, with the most frequently selected score (Acceptable or Borderline or
Unacceptable) used as the final overall score. If there is a near even (50%)split between ‘Acceptable’ and ‘Unacceptable’ then a
‘Borderline’ score is awarded.
Individual Assessor Scores (Also Refer to Assessment Procedure text)
Acceptable
The cell line/s and/or in-house tissue show a good/very good standard of staining and are suitable for
interpretive analyses.
Borderline
The cell line/s and/or in-house tissue is borderline interpretable with 2 out of the 4 assessors indicating
that improvements can be made with respect for example:
- Excessive / Weak Nuclear staining
- Level of probe hybridisation
- Excessive background staining
Unacceptable
The cell line/s and/or in-house tissue is unacceptable for interpretation with at least 3 out of the 4
assessors indicating that there are staining quality issues, which could be due to:
- Excessive / Weak Nuclear staining
- Poor probe hybridisation
- Missing Her2 copy no. / CEP 17
- Excessive background staining
© UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent
9
The HER2 ISH Module - Technical (pilot)
Important: If two separate slides are submitted with
separate CEP17 and HER 2 copy numbers (e.g. Ventana/
Roche SISH), then the assessors regard this as a single
result, and as such, combined comments are placed in a
single results column.
Run 25
assessable, with a pass rate of 32% (21/65) on the NEQAS
distributed slide and 42% (14/33) on in-house control
material. The overall unacceptable rate for the NEQAS cell
lines was 40% compared to 45% for the in-house tissue (see
Figure 3).
The main FISH methodologies used and respective pass
rates are illustrated in Figure 4 and showed that the Vysis kit
Assessment Procedure Fluorescent ISH:
was the main method of choice ( 68%, 44/65 participants).
This was the first assessment for those using a fluorescent As with the CISH slides it should be noted that some
based technique. Submitted slides were batched in a methods were used by only a small proportion of
randomly selected manner and sent to reference centres participants.
who had the appropriate fluorescent filter sets. Slides are
assessed by a single reference centre assessor.
Comparing CISH and FISH Methods
Each of the NEQAS cell lines (A,B,C,D) (as well as in-house
samples where submitted) are individually assessed for the
quality of ISH staining for each NEQAS cell line (or control
tissue if in-house samples were submitted), and scored
according to the criteria shown in the table below.
Assessors do not count the HER2/CEP17 signals. The
accuracy of signal enumeration is assessed in the
'interpretive' section of the HER2 ISH module.
After each cell line has been individually scored and
reported, an overall pass mark is generated for the slide as
a whole by counting each of the assessors individual scores
for that particular cell line or in-house control, with the most
frequently selected score (Acceptable or Borderline or
Unacceptable) used as the final overall score. If there is a
near even (50%) split between ‘Acceptable’ and
‘Unacceptable’ then a ‘Borderline’ score is awarded.
Although this pilot data appears to show higher pass rates
with CISH methods compared to FISH methods, it is
advisable not to over-interpret these results as we cannot be
confident that fluorescent samples sent in had not degraded
making some of the FISH slides uninterpretable. Please see
below for further guidance on returning FISH slides for
NEQAS assessments.
IMPORTANT
Recommendations for Returning FISH Slides
for NEQAS Assessments
a.
Results Summary
CISH Results (Second Pilot Run)
b.
Selected images showing the acceptable and unacceptable
levels of staining for the different methods are illustrated in
c.
figures 5-29 .
Participants using chromogen based methods, showed an d.
overall acceptable rate of 50% (16/32), on the NEQAS
distributed cell lines and 63% (12/19) on in-house control
material. The overall unacceptable rate for the NEQAS cell
lines was 28% compared to 16% for the in-house tissue.
Note that only 59% of those submitting NEQAS slides also
submitted an in-house control for assessment (See Fig 1).
Section should be mounted using a fluorescence
antifade mounting media, which prevents loss/quenching
of fluorescence e.g. Vectashield (Vector labs), Dako
Fluorescence Mounting Medium (Dako), Fluoromount
(SIGMA/Aldrich, VWR). Note: The Abbott Vysis kit
already contains DAPI in phenylenediamine
dihydrochloride, which is an anti fading reagent, but we
have found that some laboratories also used the above
mentioned mounting media.
Seal the coverslip edges onto the slide using clear
varnish or another sealing agent, which will stop the
slide from drying out.
Send back FISH slides as soon as you have finished
your own interpretation.
There is no need to send back slides packed in ice/dry
ice. Please return in the slide mailer that is provided.
The main methodologies used and respective pass rates are
illustrated Figure 2. Note that although percentage pass
rates are shown the number of participants using any one
method are overall quite low, and n=1 in some methods.
This pre-pilot does however show that improvement is also
required in the HER2 CISH staining protocols and
methodologies.
FISH Results (First Pre-Pilot Run)
Selected images showing the acceptable and unacceptable
levels of staining for the different methods are illustrated in
figures 30-41.
For this first assessment of the FISH sections 65 slides were
© UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent
10
The HER2 ISH Module - Technical (pilot)
Run 25
Fig. 1 Chromogen ISH Overall Pass Rates
Fig. 2 Chromogen ISH: Pass Rate related to Methods
32 Participants submitted slides for the CISH technical assessments of which 19 (61%)submitted an in-house control.
© UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent
11
The HER2 ISH Module - Technical (pilot)
Run 25
Fig. 3 Fluorescent ISH Overall Pass Rates
Fig. 4 Fluorescent ISH Pass Rate related to Methods
There were 68 submissions for NEQAS cell line FISH slides but only 65 slides were assessable, due to 3 broken slides.
O the 68 that submitted NEQAS HER2 FISH cell lines, 33 (51%) submitted an in-house control. Important: there
appeared to be a high fail rate on the Vysis kit but it was noted that this could have been due to loss of
fluorescence signal whilst transporting and storing slides. Please see section ‘Recommendations for Returning
FISH Slides for NEQAS Assessments’.
© UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent
12
The HER2 ISH Module - Technical (pilot)
Run 25
How to Use this Report to Compare NEQAS Cell Line ‘Technical’ & ‘Interpretive’ Results:
Once you have your results for both the ‘Interpretive’ and ‘Technical’ HER2 ISH modules, use both results to troubleshoot
whether there are interpretive and/or technical issues with your ISH methodology.
The table below shows a brief troubleshooting guide, which we hope will assistant you further.
UK NEQAS ICC & ISH recommends that laboratories should continually monitor their performance to make sure that both
technical and interpretive results are frequently audited.
Interpretive & Technical Troubleshooting Guide
Interpretive
Result
Appropriate or
Acceptable
Unacceptable
Technical
Result
(pre-pilot module)
Acceptable
Acceptable
Appropriate or
Acceptable
Borderline
Unacceptable
Borderline
Appropriate or
Acceptable
Unacceptable
Unacceptable
Unacceptable
The cell lines show a good standard of staining and have been interpreted
correctly
The cell lines show a good standard of staining BUT there appears to be
issues with interpretation i.e. HER2 copy number and/or CEP17
overestimated/underestimated.
Recommend that scoring/counting criteria is reviewed
The cell lines are of borderline acceptability for staining quality.
Recommend that technical method (kit/assay) is further optimised.
The technical staining can be improved as this may be effecting
interpretation.
Recommend that technical method (kit/assay) is optimised (or where
relevant a standardised kit is used as per instructions) as
interpretation, may be effected by the borderline quality of staining.
The cell lines are unacceptable for interpretation and caution should be
taken when interpreting from these slides.
Recommend that technical method (kit/assay) is optimised (or where
relevant a standardised kit is used as per instructions) as
interpretation, although appears correct, may lead to incorrect
interpretation of clinical cases
The cell lines are unacceptable for technical staining and interpretation.
Reporting from such cases is very likely to lead to incorrect
interpretation of clinical cases.
If there is persistent underperformance:
- seek assistance from kit/assay manufacturer
- seek assistance from UK NEQAS or colleagues
- re-validate protocol (retrospectively and prospectively)
- review scoring criteria
- Send clinical cases to a reference centre to confirm your results
© UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent
13
The HER2 ISH Module - Technical (pilot)
Run 25
Selected CHROMOGEN Based Images From Assessed slides Ventana Inform SISH
Ventana SISH
Fig 5. Acceptable Her2 copy no. in the
NEQAS amplified 3+ cell line. The
signals are strong and appear as large and
small clusters.
Fig 6. Acceptable CEP17 in the
NEQAS amplified 3+ cell line,
showing strong, distinct probe signals
in the nuclei.
Fig 7. Acceptable Her2 copy no. in
the NEQAS non-amplified 1+ cell line,
showing strong and discrete signals
at the expected level of copies per
cell.
Fig 8. Acceptable CEP17 in the
NEQAS non-amplified 1+ cell line.
The nuclei show strong and distinct
probe signals .
Fig 9. Acceptable Her2 copy no. in
the NEQAS equivocal 2+ cell line.
The signals are strong and discrete
with the expected level of copies per
nuclei.
Fig 10. Unacceptable Her2 copy no.
in the NEQAS equivocal 2+ cell line.
(Compare to Fig5). The slide is
uninterpretable due to the
inappropriate non-specific silver
Fig 11. Borderline pass CEP17 in the
NEQAS distributed equivocal 2+ cell
line. (Compare to Figs 6 & 8).
Although the Ch17 is present, the
signals are weak.
Fig 12. Acceptable example of an in
house amplified control section,
showing strong small and large
clusters of Her2 copy no. signals
© UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent
14
The HER2 ISH Module - Technical (pilot)
Run 25
Selected CHROMOGEN Based Images From Assessed slides Ventana Inform DDISH
Ventana DDISH
Fig 13. Acceptable pattern of staining
in the NEQAS amplified 3+ cell line.
The distinct Her2 SISH and Ch17 red
ISH signals are demonstrated clearly.
The Her2 copy no. signals appear as
large and small clusters.
Fig 14. Acceptable pattern of staining
in the NEQAS equivocal 2+ cell line,
showing strong, distinct Her2 and
Ch17 signals with the expected level
of copies per cell.
Fig 15. Acceptable pattern of staining
in the NEQAS non-amplified 1+ cell
line. The Her2 and Ch17 signals are
strong and clear. The expected level
of copies per nuclei are
demonstrated.
Fig 16. Acceptable pattern of staining
in the NEQAS distributed negative
cell line, showing strong distinct Her2
and Ch17 signals visible as 1-2
copies per cell.
Fig 17. Unacceptable staining in the
NEQAS amplified 3+ cell line.
Although the nuclei appear to
demonstrate the expected level of
amplification, the Ch17 signals have
leached. The slide is therefore
unquantifiable.
Fig 18. Borderline pass staining in the
NEQAS 2+ cell line. Although the
Her2 and Ch17 signals are visible,
leaching of the Ch17 signal makes
the signal difficult to read.
Fig 19. Unacceptable staining in the
NEQAS non-amplified 1+ cell line.
The signals are unreadable and the
cells exhibit damaged morphology.
This is likely to be caused by
excessive pre-treatment.
Fig 20. Unacceptable staining in the
NEQAS amplified 3+ cell line. The
slide shows cellular morphology
damage and signals are barely
visible. This is most likely caused by
excessive pre-treatment..
Fig 21. Acceptable pattern of staining
demonstrated in an amplified inhouse control section. The Her2
SISH clusters are strong, and the 1-2
Ch17 Red signals are demonstrated.
Fig 22. Acceptable pattern of staining
demonstrated in normal internal
control cells seen within the submitted
in-house amplified slide shown in Fig
21.
Fig 23. Acceptable pattern of staining
demonstrated in an in-house control
section, showing strong Her2 SISH
clusters and clear Ch17 red signals
as 1-2 copies per cell.
© UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent
15
The HER2 ISH Module - Technical (pilot)
Run 25
Selected CHROMOGEN Based Images From Assessed slides
Invitrogen (Spot-Light)
Fig 24.Unacceptable staining in the
NEQAS amplified 3+ cell line. The
Her2 copy no. is unreadable due to
non-specific staining within the nuclei.
Fig 25.Unacceptable staining in the
NEQAS non-amplified 1+ cell line.
The nuclear signal appears to be nonspecific rather than hybridised HER2
copy no. making the cells unreadable.
Fig 26. Unacceptable staining in the
NEQAS negative cell line, showing an
unreadable Her2 copy no. and
nuclear morphology damage.
Fig 28. Unacceptable staining of the
participant’s in-house control section.
The slide is unreadable as it is very
difficult to discern whether the Her2
copy no. is real or actually nonspecific staining. The cells also show
morphology damage.
Fig 29. Unacceptable staining in a
participant’s in-house amplified
control section. Although the Cep17
signals are clear, the Her2 copy no. is
unreadable and the slide is therefore
unquantifiable.
Zytovision (ZytoDot 2C)
Fig 27. Unacceptable staining in the
NEQAS non-amplified 1+ cell line.
The Her2 copy no. is unreadable with
cellular morphology damage. The
counterstain is also extremely weak.
© UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent
16
The HER2 ISH Module - Technical (pilot)
Run 25
Selected Fluorescence Based Images From Assessed slides
Fig 30. Acceptable pattern of staining
in the NEQAS amplified 3+ cell line.
The Her2 (red) and Cep17 (green)
signals are bright and clearly
demonstrated. The Her2 signals are
of the expected level of copies per
cell.
Fig 31. Acceptable pattern of staining
in the NEQAS non-amplified 1+ cell
line, showing bright distinct Her2 and
Cep17 signals present at the
expected level.
Fig 32. Excellent example of an in
house control, submitted from the
same laboratory as the slide seen in
Fig 31. The optimal staining
correlates well with that seen in the
NEQAS cell line.
Fig 33. Borderline pass in the
NEQAS distributed 2+ cell line.
Although both the Her2 and Cep17
signals are present, they are very
weak. (Compare to the intensity of
signals seen in Figs 30-32).
Fig 34. NEQAS amplified 3+ cell line.
Both the Her2 and Cep17 signals are
demonstrated. However the CEP17
signal is large and fragmented with
some smaller cep17 signals.
Fig 35. Unacceptable staining in the
NEQAS non-amplified 1+ cell line.
The main problem appears to be
under-digestion of the slide.
Fig 36. Unacceptable staining in the
NEQAS amplified 3+ cell line.
Although the nuclei appear to
demonstrate the expected level of
amplification, there is no Cep17
signal . The slide is therefore
unquantifiable.
Fig 37. Excellent example of an in
house control. Both the Her2 (red)
and Cep17 (green) signals are bright
and clearly demonstrated.
Fig 38. Unacceptable staining in the
NEQAS 2+ cell line, showing
excessive background and nonspecific red and green fluorescence
outside of the nucleus.
Fig 39. Unacceptable staining
demonstrated in the in- house section
submitted from the same laboratory
shown in Fig 38. The background
and non-specific staining correlates
with that seen in the NEQAS cell line.
Fig. 40 Unacceptable staining in the
NEQAS 3+ amplified cell line. The
section is unreadable due to
excessive background staining and
nuclear morphology damage.
Fig 41. Unacceptable staining
demonstrated in the in- house section
submitted from the same laboratory
shown in Fig 40. The non-specific
staining and nuclear morphology
damage correlates with that seen in
the NEQAS cell line.
© UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent
17
The General Pathology Module
Run 96
Julie Williams and Perry Maxwell
Gold Standard
Second Antibody
Antigens Assessed:
SMA
CK
Tissue Sections circulated:
Appendix & Leiomyosarcoma
Stomach & Normal Tonsil
Number of Registered Participants:
365
Summary Graphs - Pass Rate Tables
Best Method - Selected Images
© UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent
18
ΓΕΝΕΡΑΛ ΠΑΤΗΟΛΟΓΨ Μοδυλε
ΡΥΝ 96
Σελεχτεδ Ιµαγεσ σηοωινγ Οπτιµαλ ανδ Συβ−οπτιµαλ Ιµµυνοσταινινγ
Φιγ 1.Οπτιµαλ δεµονστρατιον οφ ΣΜΑ ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ αππενδιξ σεχτιον, σηοωινγ στρονγ
σταινινγ οφ τηε σµοοτη µυσχλε λαψερσ ιν τηε µυσχυλαρισ προπρια ανδ µυσχυαλρισ µυχοσαε. Τηε
σεχτιον αλσο σηοωσ σταινινγ οφ τηε δελιχατε φιβρεσ ανδ α χλεαν βαχκγρουνδ. Σταινεδ ωιτη ∆ακο
1Α4 αντιβοδψ, 1:200, υσινγ τηε ∆ακο ΠΤ λινκ, αυτοσταινερ ανδ ΦΛΕΞ δετεχτιον κιτ.
Φιγ2.Ηιγη µαγνιφιχατιον ϖιεω οφ τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ αππενδιξ σεχτιον σηοων ιν Φιγ1. Τηε στρονγ
χψτοπλασµιχ σταινινγ ιν τηε µυσχυλαρισ προπρια οφ τηε σµοοτη µυσχλε λαψερ (Α) ανδ τηε σταινινγ
οφ τηε δελιχατε φιβρεσ (Β) αρε δεµονστρατεδ µορε χλεαρλψ.
Φιγ 3.Συβ−οπτιµαλ δεµονστρατιον οφ ΣΜΑ ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ αππενδιξ σεχτιον, σηοωινγ ωεακ
σταινινγ τηρουγηουτ τηε σεχτιον (χοµπαρε το Φιγ1). Σεχτιον σταινεδ ωιτη ∆ακο 1Α4 αντιβοδψ,
1:250, ον τηε ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ, ΧΧ1 µιλδ ανδ ιςιεω δετεχτιον κιτ
Φιγ4.Ποορ σταινινγ ωιτη ΣΜΑ ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ αππενδιξ σεχτιον, σηοωινγ νον−σπεχιφιχ σταινινγ
οφ λψµπηοχψτεσ ανδ επιτηελιαλ χελλσ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη ∆ακο 1Α4 αντιβοδψ, 1:200, ον τηε
ςεντανα ∆ισχοϖερψ ΞΤ, ΧΧ1 στανδαρδ ανδ ∆ισχοϖερψ δετεχτιον κιτ.
Φιγ5.Τωο εξαµπλεσ οφ ΣΜΑ σταινινγ ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ λειοµψοσαρχοµα τυµουρ. (Α)
δεµονστρατεσ οπτιµαλ ιντενσε ωελλ λοχαλισεδ χψτοπλασµιχ σταινινγ, ωηερεασ τηε σταινινγ ιν (Β) ισ
τοο ωεακ. Βοτη σεχτιονσ σταινεδ ωιτη ∆ακο 1Α4 αντιβοδψ, υσινγ τηε ∆ακο ΠΤ λινκ, αυτοσταινερ
ανδ ΦΛΕΞ κιτ. Ηοωεϖερ, Αβ διλυτιον φορ (Β) ωασ 1:500, ανδ1:200 φορ (Α)
Φιγ6.Γοοδ εξαµπλε οφ αν ‘ιν ηουσε’ αππενδιξ χοντρολ σεχτιον σταινεδ ωιτη ΣΜΑ, σηοωινγ στρονγ
σπεχιφιχ σταινινγ ωιτη α χλεαν βαχκγρουνδ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη ∆ακο 1Α4 αντιβοδψ, 1:250,
υσινγ τηε ΠΤ Λινκ, αυτοσταινερ ανδ ΦΛΕΞ δετεχτιον κιτ.
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 14:42 ον Τηυρσδαψ, 2 Φεβρυαρψ, 2012
19
ΓΕΝΕΡΑΛ ΠΑΤΗΟΛΟΓΨ Μοδυλε
ΡΥΝ 96
Σελεχτεδ Ιµαγεσ σηοωινγ Οπτιµαλ ανδ Συβ−οπτιµαλ Ιµµυνοσταινινγ
Φιγ7.Οπτιµαλ δεµονστρατιον οφ ΠΑΝ ΧΚ ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ διστριβυτεδ στοµαχη σεχτιον, σηοωινγ
στρονγ, διστινχτ χψτοπλασµιχ σταινινγ ιν τηε γλανδσ. Σηοων το α βεττερ αδϖανταγε ιν τηε
ηιγη−ποωερ ϖιεω (Β). Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε ∆ακο ΜΝΦ116 αντιβοδψ, 1:75, νο−πρετρεατµεντ ον
τηε ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ ανδ ιςιεω δετεχτιον κιτ.
Φιγ8.Ποορ δεµονστρατιον οφ ΠΑΝ ΧΚ ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ διστριβυτεδ στοµαχη σεχτιον. Τηε
σταινινγ ισ πατχηψ ανδ ωεακ ανδ δοεσ νοτ χοµπλετε τηε δεπτη οφ τηε επιτηελιαλ λαψερ (χοµπαρε το
Φιγ7). Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε ∆ακο ΜΝΦ116 αντιβοδψ, 1:100, υσινγ τηε ∆ακο ΠΤ λινκ,
αυτοσταινερ ανδ ΦΛΕΞ δετεχτιον κιτ.
Φιγ9.Εξχελλεντ δεµονστρατιον οφ ΠΑΝ ΧΚ ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ διστριβυτεδ τονσιλ σεχτιον, σηοωινγ
στρονγ διστινχτ χψτοπλασµιχ σταινινγ τηρουγηουτ τηε εντιρε σθυαµουσ επιτηελιαλ λαψερ. Σηοων το α
βεττερ αδϖανταγε ιν τηε ηιγη−ποωερ ϖιεω (Α’). Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε ∆ακο ΜΝΦ116 αντιβοδψ,
1:75, νο−πρετρεατµεντ ον τηε ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ ανδ ιςιεω δετεχτιον κιτ.
Φιγ10.Συβ−οπτιµαλ δεµονστρατιον οφ ΠΑΝ ΧΚ ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ διστριβυτεδ τονσιλ σεχτιον. Τηε
σταινινγ ισ ωεακ ανδ ινχοµπλετε τηρουγηουτ τηε επιτηελιαλ λαψερ (χοµπαρε το Φιγ9). Σεχτιον
σταινεδ ωιτη τηε ∆ακο ΜΝΦ116 αντιβοδψ, 1:100, υσινγ τηε ∆ακο ΠΤ λινκ, αυτοσταινερ ανδ ΦΛΕΞ
δετεχτιον κιτ.
Φιγ11.Ποορ δεµονστρατιον οφ ΠΑΝ ΧΚ ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ διστριβυτεδ τονσιλ σεχτιον. Τηε σταινινγ
ισ τοο στρονγ ανδ τηερε ισ α χονσιδεραβλε αµουντ οφ βαχκγρουνδ ανδ νον−σπεχιφιχ σταινινγ.Τηισ
ισ µοστ λικελψ χαυσεδ βψ εξχεσσιϖε αντιγεν ρετριεϖαλ. Σταινεδ ωιτη Λειχα ΑΕ1/ΑΕ3 αντιβοδψ,
1:200, πρε−τρεατεδ ον τηε Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ2 30 µινσ.
Φιγ12.Γοοδ εξαµπλε οφ αν ‘ιν ηουσε’ χοντρολ σταινεδ ωιτη ΠΑΝ ΧΚ, σηοωινγ στρονγ, διστινχτ
χψτοπλασµιχ σταινινγ ιν τηε βρεαστ χαρχινοµα (Α) ανδ τονσιλ (Β) σεχτιονσ συβµιττεδ ον τηε σαµε
σλιδε. Σεχτιονσ σταινεδ ωιτη Μεναρινι ΑΕ1/ΑΕ3 αντιβοδψ, 1:100, ον τηε ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ,
ΧΧ1 στανδαρδ ανδ ιςιεω δετεχτιον κιτ.
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 14:42 ον Τηυρσδαψ, 2 Φεβρυαρψ, 2012
20
ΓΕΝΕΡΑΛ ΠΑΤΗΟΛΟΓΨ Μοδυλε
Ρυν 96
ΡΥΝ 96Α Σµοοτη Μυσχλε Αχτιν (ΣΜΑ) ον ΝΕΘΑΣ Σεχτιονσ
120
ΡΥΝ 96Β Σµοοτη Μυσχλε Αχτιν (ΣΜΑ) ον ιν−ηουσε Σεχτιονσ
Ινδιϖιδυαλ
Σχορεσ
120
4 = 0 (0%)
4 = 0 (0%)
5 = 0 (0%)
5 = 0 (0%)
6 = 0 (0%)
100
6 = 0 (0%)
100
7 = 1 (0%)
7 = 1 (0%)
9 = 3 (1%)
10 = 10 (3%)
11 = 14 (4%)
60
12 = 38 (11%)
13 = 20 (6%)
40
8 = 2 (1%)
νο. οφ ρετυρνσ
νο. οφ ρετυρνσ
8 = 5 (1%)
80
80
9 = 3 (1%)
10 = 9 (3%)
11 = 5 (1%)
60
12 = 25 (7%)
13 = 25 (7%)
40
14 = 24 (7%)
14 = 38 (11%)
15 = 46 (13%)
15 = 40 (11%)
16 = 105 (29%)
20
16 = 116 (33%)
20
17 = 59 (16%)
17 = 53 (15%)
18 = 26 (7%)
0
4
5
6
7
8
9
10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
18 = 25 (7%)
0
19 = 4 (1%)
20 = 3 (1%)
4
5
6
7
8
9
Σχορεσ
10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
Συµµαρψ
16 − 20 = 197 (55%)
16 − 20 = 206 (58%)
13 − 15 = 90 (25%)
13 − 15 = 103 (29%)
10 − 12 = 62 (17%)
10 − 12 = 39 (11%)
0 − 9 = 9 (3%)
0 − 9 = 6 (2%)
Μεδιαν = 13.50
Μεδιαν = 13.50
100
160
5 = 0 (0%)
140
6 = 0 (0%)
7 = 0 (0%)
120
10 = 10 (3%)
11 = 17 (5%)
12 = 49 (14%)
13 = 41 (11%)
40
14 = 20 (6%)
15 = 37 (10%)
νο. οφ ρετυρνσ
8 = 11 (3%)
νο. οφ ρετυρνσ
6 = 0 (0%)
7 = 0 (0%)
9 = 11 (3%)
8 = 2 (1%)
9 = 4 (1%)
100
10 = 3 (1%)
11 = 14 (4%)
80
12 = 18 (5%)
13 = 27 (8%)
60
14 = 20 (6%)
15 = 44 (12%)
40
16 = 82 (23%)
20
17 = 37 (10%)
16 = 146 (41%)
17 = 52 (15%)
20
18 = 23 (6%)
0
19 = 12 (3%)
4
5
6
7
8
9
10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
Σχορεσ
20 = 9 (3%)
Ινδιϖιδυαλ
Σχορεσ
4 = 0 (0%)
5 = 0 (0%)
60
20 = 3 (1%)
ΡΥΝ 96∆ Παν ΧΚ (Βροαδ σπεχτρυµ ΧΚ) ον ιν−ηουσε Σεχτιονσ
Ινδιϖιδυαλ
Σχορεσ
4 = 0 (0%)
80
19 = 9 (3%)
Σχορεσ
Συµµαρψ
ΡΥΝ 96Χ Παν ΧΚ (Βροαδ σπεχτρυµ ΧΚ) ον ΝΕΘΑΣ Σεχτιονσ
Ινδιϖιδυαλ
Σχορεσ
18 = 17 (5%)
0
19 = 5 (1%)
4
5
6
7
8
9
10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
20 = 3 (1%)
Σχορεσ
Συµµαρψ
Συµµαρψ
16 − 20 = 163 (45%)
16 − 20 = 223 (63%)
13 − 15 = 98 (27%)
13 − 15 = 91 (26%)
10 − 12 = 76 (21%)
10 − 12 = 35 (10%)
0 − 9 = 22 (6%)
0 − 9 = 6 (2%)
Μεδιαν = 14.00
Μεδιαν = 14.00
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 15:33 ον Τηυρσδαψ, 2 Φεβρυαρψ, 2012
21
ΓΕΝΕΡΑΛ ΠΑΤΗΟΛΟΓΨ Μοδυλε
Ρυν 96
ΑΝΤΙΒΟ∆ΙΕΣ ΑΝ∆ ΟΤΗΕΡ ΤΕΧΗΝΙΧΑΛ ΠΑΡΑΜΕΤΕΡΣ ΕΜΠΛΟΨΕ∆ ΒΨ
ΠΑΡΤΙΧΙΠΑΝΤΣ ΙΝ ΤΗΕ ΓΕΝΕΡΑΛ ΠΑΤΗΟΛΟΓΨ ΜΟ∆ΥΛΕ
Τηε φολλοωινγ ταβλεσ ρεχορδ τηε νυµβερ οφ παρτιχιπαντσ (Ν) υσινγ εαχη πριµαρψ αντιβοδψ. Τηε περχενταγε (%) ρεφερσ
το τηε προπορτιον οφ τηεσε παρτιχιπαντσ αχηιεϖινγ αχχεπταβλε σταινινγ (α σχορε >12/20) ον ΥΚ ΝΕΘΑΣ σεχτιονσ.
Γενεραλ Πατηολογψ Ρυν: 96
Γενεραλ Πατηολογψ Ρυν: 96
Πριµαρψ Αντιβοδψ : Σµοοτη Μυσχλε Αχτιν (ΣΜΑ)
Πριµαρψ Αντιβοδψ : Παν ΧΚ (Βροαδ σπεχτρυµ ΧΚ)
Αντιβοδψ ∆εταιλσ
Ν
%
Αντιβοδψ ∆εταιλσ
Ν
%
100
Α. Μεναρινι ΜΠ−001Χ/Πξ (1Α4)
1
0
Α.Μεναρινι ΜΥ071 ΥΧ (ΑΕ1ΑΕ3)
2
Α. Μεναρινι ΜΥ 128 ΥΧ (ΙΑ4)
2
100
Βεχτον ∆ιχκινσον 349205 (ΧΑΜ5.2)
1
0
Βιογενεσισ 109Μ ΣΜΑ (1Α4)
1
100
ΒιοΓενεξ ΜΥ071−ΥΧ (ΑΕ1/ΑΕ3)
3
33
Χελλ Μαρθυε 201Μ (Χλονε ΗΗΦ35)
1
100
Χελλ Μαρθυε ΑΕ1/ΑΕ3 313Μ−
5
80
Χελλ Μαρθυε 202Μ (Χλονε 1Α4)
9
67
Χηεµιχον ΜΑΒ 3412 (ΑΕ1/ΑΕ3)
3
100
∆ακο Μ0635 ΣΜΑ (Χλονε ΗΗΦ35)
2
50
∆ Βιοσψστεµσ ΑΕ1/ΑΕ3 ΜΟΒ−190
2
100
235
79
∆ Βιοσψστεµσ ΜΝΦ116 ΜΟΒ−052
1
100
∆ακο ΡΤΥ (Χλονε 1Ρ611)
7
86
∆ακο ΦΛΕΞ ΡΤΥ ΑΕ1/ΑΕ3 ΙΡ053
6
100
Λειχα/Νοϖοχαστρα ΠΑ0943 (ασµ−1)
9
100
∆ακο Μ 3515 (ΑΕ1/ΑΕ3)
139
78
Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−ΣΜΑ (ασµ−1)
19
84
∆ακο Μ0821(ΜΝΦ116)
104
66
Νοϖοχαστρα ΡΤΥ−ΣΜΑ (ασµ−1)
6
83
∆ακο Ν1590 (ΑΕ1/ΑΕ3)
5
80
∆ακο Μ0851 ΣΜΑ (Χλονε 1Α4)
Σιγµα ΙΜΜΗ2−1ΚΤ (1Α4)
14
100
∆ακο Πολψχλοναλ Ζ0622
1
0
Τηερµο Σχιεντιφιχ/Νεοµαρκερσ ΜΣ 113−Π (1Α4)
3
100
Ινϖιτρογεν ΠΑΝ ΑΕ1/ΑΕ3 180132
2
50
Τηερµο Σχιεντιφιχ/Νεοµαρκερσ ΜΣ 742−Σ (ΗΗΦ35)
1
0
Λειχα Μυλτι Χλονε ΑΕ1/ΑΕ3 ΠΑ0909
6
33
ςεχτορ ςΠ Σ281 ΣΜΑ (ασµ−1)
2
100
Μενοπατη ΠΑΝ ΑΕ1/ΑΕ3 ΜΠ−011
1
100
ςεντανα (ΗΥΧ1−1) 760−2502
17
88
Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−ΑΕ1−ΑΕ3
ςεντανα 760 2833 (1Α4)
20
70
Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−ΠΑΝ ΧΚ
4
100
ςεντανα 760−2601 (ΗΗΦ35)
Νοϖοχαστρα ΡΤΥ−ΑΕ1−ΑΕ3
22
73
3
67
1
0
13
92
Σιγµα Χ2562 (Παν ΧΚ)
1
0
ςεχτορ Λαβσ Χλονεσ 5∆3+ΛΠ34 ςΠ−Χ421
1
0
ςεχτορ Λαβσ Μυλτι Χλονε Χ−11 ςΠ−Χ420
1
100
ςεντανα 760 2135 (ΑΕ1ΑΕ3)
5
60
ςεντανα 760 2595 (ΑΕ1ΑΕ3)
22
77
Ζψµεδ 18−0132 (ΑΕ1/ΑΕ3)
3
33
Ζψτοµεδ ΠΑΝ ΑΕ1/ΑΕ3 ΜΣΚ019
3
67
Οτηερ
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 15:33 ον Τηυρσδαψ, 2 Φεβρυαρψ, 2012
22
ΓΕΝΕΡΑΛ ΠΑΤΗΟΛΟΓΨ Μοδυλε
Ρυν 96
Γενεραλ Πατηολογψ Ρυν: 96
Ηεατ Μεδιατεδ Ρετριεϖαλ
Γενεραλ Πατηολογψ Ρυν: 96
Παν ΧΚ (Βροαδ
σπεχτρυµ ΧΚ)
Σµοοτη Μυσχλε
Αχτιν (ΣΜΑ)
Ν
%
Ν
%
4
75
4
100
∆ακο Πασχαλ
3
67
3
∆ακο ΠΤΛινκ
55
80
59
Λαβ ϖισιον ΠΤ Μοδυλε
8
75
7
Λειχα Βονδ ΙΙΙ ΕΡ1
7
100
Λειχα Βονδ ΙΙΙ ΕΡ2
12
Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ1
17
Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ2
Μιχροωαϖε Οϖεν
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
Βιοχαρε ∆εχλοακινγ Χηαµβερ
Οτηερ
Πρεσσυρε Χοοκερ
%
Ν
%
5
20
4
75
33
ΒιοΓενεξ Προτεασε
5
100
0
0
85
∆ακο Προτεασε (Σ2019)
1
0
0
0
100
∆ακο Προτεινασε Κ (κ1492)
1
100
0
0
5
100
∆ακο Προτεινασε Κ (Σ3020)
8
75
0
0
67
5
80
Μεναρινι προτεασε ΞΞλς (Π8038)
1
100
0
0
53
16
81
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
68
75
161
79
21
81
30
90
Οτηερ
13
69
3
67
14
50
15
80
Σιγµα χηψµοτρψπσιν (Χ4129)
3
0
1
100
60
67
93
81
ΣΙΓΜΑ Προτεινασε 24
3
67
0
0
6
100
6
83
ςΒΣ Βονδ Ενζψµε 1
48
60
3
67
ςΒΣ Βονδ Ενζψµε 2
73
8
50
2
100
0
0
Στεαµερ
3
100
2
100
ςεντανα Βενκ ΧΧ1 (Εξτενδεδ)
2
100
2
50
ςεντανα Βενκ ΧΧ1 (Μιλδ)
11
91
10
60
ςεντανα Βενκ ΧΧ1 (Στανδαρδ)
11
91
5
80
1
100
5
60
12
75
5
80
ςεντανα Βενκ ΥΛΤΡΑ ΧΧ1 (Σταν.)
5
100
4
75
ςεντανα Βενκ ΥΛΤΡΑ ΧΧ1# (8µινσ)
2
50
1
100
50
ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Εξτενδεδ)
1
100
2
15
80
20
65
ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Στανδαρδ)
9
78
11
64
ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1# (8µινσ)
1
100
13
85
Ωατερ βατη 68 ΟΧ
1
100
1
100
Ωατερ βατη 95−98 ΟΧ
3
100
2
50
ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Μιλδ)
Σµοοτη Μυσχλε
Αχτιν (ΣΜΑ)
Ν
11
ςεντανα Βενκ ΥΛΤΡΑ ΧΧ1 (Μιλδ)
Παν ΧΚ (Βροαδ
σπεχτρυµ ΧΚ)
ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ
Πρεσσυρε Χοοκερ ιν Μιχροωαϖε Οϖεν
ςεντανα Βενκ ΧΧ1# (8µινσ)
Ενζψµε Μεδιατεδ Ρετριεϖαλ
2
50
0
0
ςεντανα Προτεασε
15
80
1
100
ςεντανα Προτεασε 1 (760−2018)
54
70
2
0
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 15:33 ον Τηυρσδαψ, 2 Φεβρυαρψ, 2012
23
ΓΕΝΕΡΑΛ ΠΑΤΗΟΛΟΓΨ Μοδυλε
Ρυν 96
Γενεραλ Πατηολογψ Ρυν: 96
∆ετεχτιον
Γενεραλ Πατηολογψ Ρυν: 96
Παν ΧΚ (Βροαδ
σπεχτρυµ ΧΚ)
Σµοοτη Μυσχλε
Αχτιν (ΣΜΑ)
Ν
%
Ν
%
1
0
2
100
17
76
16
94
Βιοχαρε πολψµερ (Μ4Υ534)
1
100
1
100
ΒιοΓενεξ ΣΣ Πολψµερ (Θ∆ 420−ΨΙΚΕ)
1
100
1
0
6
67
6
50
∆ακο Ενςισιον ΦΛΕΞ ( Κ8000/10)
12
67
18
89
∆ακο Ενςισιον ΦΛΕΞ+ ( Κ8002/12)
37
81
36
81
16
75
14
93
2
50
3
67
1
100
1
100
4
50
4
0
1
0
0
0
2
100
2
100
3
67
2
100
Α Μενερινι Πολψµερ (ΜΠ−ΞΧΠ)
ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ
ΒιοΓενεξ ΣΣ Πολψµερ (Θ∆ 430−ΞΑΚΕ)
∆ακο Ενϖισιον ΗΡΠ/∆ΑΒ ( Κ5007)
∆ακο Ενϖισιον+ ΗΡΠ µουσε Κ4004/5/6/7
∆ακο ρβ−α−µο Ιγ (Ε0354)
∆ακο ΡΕΑΛ ΗΡΠ/∆ΑΒ (Κ5001 )
Ι∆ Λαβσ ΣΣ Σψστεµ ΗΡΠ (Ι∆ΣΤ1007)
Λαβςισιον Υλτραςισιον ΛΠ ΗΡΠ (ΤΛ 125 ΗΛϑ)
Λαβςισιον Υλτραςισιον ΛΠ ΗΡΠ (ΤΣ 125 Η∆)
Λαβςισιον Υλτραςισιον ΟΝΕ Πολψµερ ( ΤΛ−012/5−Η∆ϑ/Τ
2
50
3
100
Λειχα Βονδ Πολψµερ ∆εφινε (∆Σ9713)
1
100
1
0
89
64
93
90
8
63
7
57
Νονε
3
100
4
100
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
4
100
1
100
3
67
3
67
16
75
16
88
Λειχα Βονδ Πολψµερ Ρεφινε (∆Σ9800)
ΜεναΠατη Ξ−Χελλ Πλυσ (ΜΠ−ΞΧΠ)
Νοϖοχαστρα Νοϖολινκ Π∆Σ (ΡΕ7−140/150/280/290−Κ)
Οτηερ
Ποωερ ςισιον ∆ΠςΒ999 ΗΡΠ
0
0
1
100
ςεχτορ Ελιτε ΑΒΧ (ΠΚ−6102)
1
100
0
0
2
100
ςεχτορ Ελιτε ΑΒΧ Κιτ (ΠΚ−7200)
2
50
ςεχτορ Ελιτε Υνιϖερσαλ ΑΒΧ (ΠΚ−6200)
1
100
1
100
ςεχτορ ΙµµΠΡΕΣΣ Υνιϖερσαλ (ΜΠ−7500)
1
0
1
100
ςεντανα ιςιεω σψστεµ (760−091)
34
79
27
52
ςεντανα Υλτραςιεω Κιτ (760−500)
77
77
81
77
Χηροµογεν
Α. Μεναρινι Λιθυιδ Σταβλε ∆ΑΒ κιτ
ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ
Παν ΧΚ (Βροαδ
σπεχτρυµ ΧΚ)
Ν
1
Σµοοτη Μυσχλε
Αχτιν (ΣΜΑ)
100
Ν
1
%
30
77
29
83
ΒιοΓενεξ ∆ΑΒ (Θ∆430)
2
100
3
33
ΒιοΓενεξ Λιθυιδ ∆ΑΒ (ΗΚ153−5Κ)
2
100
2
0
ΒιοΓενεξ λιθυιδ ∆ΒΑ (ΗΚ−124−7Κ)
1
100
0
0
∆ακο ∆ΑΒ Κ3468
1
100
1
100
∆ακο ∆ΑΒ Λιθυιδ (Κ3465)
0
0
2
100
∆ΑΚΟ ∆ΑΒ+
1
0
1
100
∆ακο ∆ΑΒ+ Λιθυιδ (Κ3468)
9
67
8
88
∆ακο ∆ΑΒ+ ΡΕΑΛ ∆ετεχτιον (Κ5001)
3
33
3
67
∆ακο Ενςισιον Πλυσ κιτσ
4
50
5
80
∆ακο ΦΛΕΞ ∆ΑΒ
49
80
52
87
∆ακο ΡΕΑΛ Ενςισιον Κ5007 ∆ΑΒ
17
82
14
93
∆ακο ΡΕΑΛ Κ5001 ∆ΑΒ
5
80
3
0
Λαβςισιον (ΤΑ−125−Η∆)
1
0
1
100
Λαβςισιον ∆ΑΒ
1
100
1
100
µεναπατη ξχελλ κιτ ∆ΑΒ (ΜΠ−860)
8
50
8
63
11
45
14
86
2
50
3
100
Οτηερ
Σιγµα ∆ΑΒ (∆5637)
Σιγµα ∆ΑΒ (∆5905)
1
100
1
100
84
65
86
88
1
100
0
0
ςεντανα ∆ΑΒ
17
82
7
86
ςεντανα ιϖιεω
22
77
25
44
ςεντανα Υλτραϖιεω ∆ΑΒ
80
76
83
78
ςισιον ΒιοΣψστεµσ Βονδ Ξ ∆ΑΒ
2
100
3
100
Ζψµεδ ∆ΑΒ Πλυσ Κιτ
1
100
0
0
ςΒΣ Βονδ Πολψµερ Ρεφινε κιτ (∆Σ9800)
ςεχτορ ∆ΑΒ (ΣΚ−4100)
Γενεραλ Πατηολογψ Ρυν: 96
Αυτοµατιον
Παν ΧΚ (Βροαδ
σπεχτρυµ ΧΚ)
ΒιοΓενεξ ΓενοΜΞ 6000ι
ΒιοΓενεξ Οπτιµαξ
Σµοοτη Μυσχλε
Αχτιν (ΣΜΑ)
Ν
%
Ν
%
3
100
3
33
3
100
2
0
∆ακο Αυτοσταινερ
18
61
14
79
∆ακο Αυτοσταινερ Λινκ 48
36
75
43
81
∆ακο Αυτοσταινερ πλυσ
18
89
17
82
5
80
7
86
∆ακο Αυτοσταινερ Πλυσ Λινκ
∆ακο ΤεχηΜατε 500
2
100
1
100
Λαβςισιον Αυτοσταινερ
14
50
12
92
Λειχα Βονδ Μαξ
77
62
77
88
Λειχα Βονδ Ξ
1
100
1
100
Λειχα Βονδ−ΙΙΙ
24
75
27
96
8
50
8
75
12
83
13
85
6
83
6
67
100
Μεναρινι − Ιντελλιπατη ΦΛΞ
Νονε (Μανυαλ)
Οτηερ
Σηανδον Σεθυενζα
7
57
6
ςεντανα Βενχηµαρκ
12
83
11
64
ςεντανα Βενχηµαρκ ΥΛΤΡΑ
25
76
22
86
ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ
82
79
84
67
3
67
1
100
ςεντανα ΝεξΕΣ
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 15:33 ον Τηυρσδαψ, 2 Φεβρυαρψ, 2012
%
100
24
Ρυν 96
ΓΕΝΕΡΑΛ ΠΑΤΗΟΛΟΓΨ Μοδυλε
ΒΕΣΤ ΜΕΤΗΟ∆Σ
Σµοοτη Μυσχλε Αχτιν (ΣΜΑ) − Μετηοδ 1
Παρτιχιπαντ σχορεδ 19/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 16/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
∆ακο Μ0851 ΣΜΑ (Χλονε 1Α4) , 60 Μινσ, 37 ≡Χ
Αυτοµατιον:
ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ
Μετηοδ:
ςεντανα Υλτραςιεω ∆ΑΒ
Μαιν Βυφφερ:
ςεντανα ρεαχτιον βυφφερ (950−300)
ΗΜΑΡ:
ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Στανδαρδ)
∆ιλυτιον 1: 500
ΕΑΡ:
Χηροµογεν:
ςεντανα Υλτραϖιεω ∆ΑΒ
∆ετεχτιον:
ςεντανα Υλτραςιεω Κιτ (760−500)
Πρεδιλυτεδ
Σµοοτη Μυσχλε Αχτιν (ΣΜΑ) − Μετηοδ 2
Παρτιχιπαντ σχορεδ 20/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 17/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
∆ακο Μ0851 ΣΜΑ (Χλονε 1Α4) , 30 Μινσ, 20 ≡Χ
Αυτοµατιον:
∆ακο Αυτοσταινερ
∆ιλυτιον 1: 400
Μετηοδ:
∆ακο ΦΛΕΞ+ κιτ
Μαιν Βυφφερ:
∆ακο ΦΛΕΞ ωαση βυφφερ
ΗΜΑΡ:
∆ακο ΠΤΛινκ, Βυφφερ: ∆ΑΚΟ Ηιγη πΗ ΑΡ σολυτιον
ΕΑΡ:
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
Χηροµογεν:
∆ακο ΦΛΕΞ ∆ΑΒ, 20 ≡Χ., Τιµε 1: 5 Μινσ, Τιµε 2: 5 Μινσ
∆ετεχτιον:
Νονε
Σµοοτη Μυσχλε Αχτιν (ΣΜΑ) − Μετηοδ 3
Παρτιχιπαντ σχορεδ 20/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 20/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
∆ακο Μ0851 ΣΜΑ (Χλονε 1Α4) , 28 Μινσ, 25 ≡Χ
Αυτοµατιον:
ςεντανα Βενχηµαρκ ΥΛΤΡΑ
Μετηοδ:
ςεντανα Υλτραςιεω ∆ΑΒ
Μαιν Βυφφερ:
ςεντανα ρεαχτιον βυφφερ (950−300), ΠΗ: 7.6
ΗΜΑΡ:
ςεντανα Βενκ ΧΧ1 (Στανδαρδ), ΠΗ: 9
∆ιλυτιον 1: 100
ΕΑΡ:
Χηροµογεν:
ςεντανα Υλτραϖιεω ∆ΑΒ, 25 ≡Χ., Τιµε 1: 5 Μινσ, Τιµε 2: 5 Μινσ
∆ετεχτιον:
Σµοοτη Μυσχλε Αχτιν (ΣΜΑ) − Μετηοδ 4
Παρτιχιπαντ σχορεδ 20/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 18/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
Λειχα/Νοϖοχαστρα ΠΑ0943 (ασµ−1) , 20 Μινσ, 25 ≡Χ Πρεδιλυτεδ
Αυτοµατιον:
Λειχα Βονδ−ΙΙΙ
Μετηοδ:
ςΒΣ ΒονδΜΑξ Ρεφινε ΚΙΤ
Μαιν Βυφφερ:
Βονδ Ωαση Βυφφερ (ΑΡ9590)
ΗΜΑΡ:
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
ΕΑΡ:
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
Χηροµογεν:
ςΒΣ Βονδ Πολψµερ Ρεφινε κιτ (∆Σ9800), 25 ≡Χ., Τιµε 1: 10 Μινσ
∆ετεχτιον:
Λειχα Βονδ Πολψµερ Ρεφινε (∆Σ9800) , 8 Μινσ, 25 ≡Χ Πρεδιλυτεδ
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 15:33 ον Τηυρσδαψ, 2 Φεβρυαρψ, 2012
25
Ρυν 96
ΓΕΝΕΡΑΛ ΠΑΤΗΟΛΟΓΨ Μοδυλε
ΒΕΣΤ ΜΕΤΗΟ∆Σ
Παν ΧΚ (Βροαδ σπεχτρυµ ΧΚ) − Μετηοδ 1
Παρτιχιπαντ σχορεδ 20/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 16/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
∆ακο Μ 3515 (ΑΕ1/ΑΕ3) , 60 Μινσ, 37 ≡Χ
Αυτοµατιον:
ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ
Μετηοδ:
ςεντανα Υλτραςιεω ∆ΑΒ
Μαιν Βυφφερ:
ςεντανα ρεαχτιον βυφφερ (950−300)
ΗΜΑΡ:
ςεντανα Βενκ ΧΧ1 (Στανδαρδ)
∆ιλυτιον 1: 100
ΕΑΡ:
Χηροµογεν:
ςεντανα Υλτραϖιεω ∆ΑΒ
∆ετεχτιον:
ςεντανα Υλτραςιεω Κιτ (760−500)
Παν ΧΚ (Βροαδ σπεχτρυµ ΧΚ) − Μετηοδ 2
Παρτιχιπαντ σχορεδ 20/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 18/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
∆ακο Μ0821(ΜΝΦ116) , 32 Μινσ
Αυτοµατιον:
ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ
Μετηοδ:
ςεντανα ιςιεω Κιτ
Μαιν Βυφφερ:
ςεντανα ρεαχτιον βυφφερ (950−300)
∆ιλυτιον 1: 75
ΗΜΑΡ:
ΕΑΡ:
ςεντανα Προτεασε 1 (760−2018) ∆ιγεστιον Τιµε ΝΕΘΑΣ: 10 Μινσ. Ιν−Ηουσε: 10 Μινσ
Χηροµογεν:
ςεντανα ∆ΑΒ
∆ετεχτιον:
ςεντανα ιςιεω σψστεµ (760−091)
Πρεδιλυτεδ
Παν ΧΚ (Βροαδ σπεχτρυµ ΧΚ) − Μετηοδ 3
Παρτιχιπαντ σχορεδ 19/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 18/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
ςεντανα 760 2595 (ΑΕ1ΑΕ3) , 8 Μινσ
Αυτοµατιον:
ςεντανα Βενχηµαρκ ΥΛΤΡΑ
Μετηοδ:
ςεντανα Υλτραςιεω ∆ΑΒ
Μαιν Βυφφερ:
ςεντανα ρεαχτιον βυφφερ (950−300)
ΗΜΑΡ:
ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Μιλδ)
ΕΑΡ:
ςεντανα Προτεασε ∆ιγεστιον Τιµε ΝΕΘΑΣ: 8 Μινσ
Χηροµογεν:
ςεντανα Υλτραϖιεω ∆ΑΒ
∆ετεχτιον:
ςεντανα Υλτραςιεω Κιτ (760−500)
Παν ΧΚ (Βροαδ σπεχτρυµ ΧΚ) − Μετηοδ 4
Παρτιχιπαντ σχορεδ 20/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 20/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
ςεντανα 760 2135 (ΑΕ1ΑΕ3)
Αυτοµατιον:
ςεντανα Βενχηµαρκ
Μετηοδ:
ςεντανα Υλτραςιεω ∆ΑΒ
Μαιν Βυφφερ:
ςεντανα ρεαχτιον βυφφερ (950−300)
ΗΜΑΡ:
ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Μιλδ)
ΕΑΡ:
ςεντανα Προτεασε 1 (760−2018)
Χηροµογεν:
ςεντανα Υλτραϖιεω ∆ΑΒ
∆ετεχτιον:
ςεντανα Υλτραςιεω Κιτ (760−500)
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 15:33 ον Τηυρσδαψ, 2 Φεβρυαρψ, 2012
26
The Breast Hormonal Receptor Module
Run 96
Suzanne Parry and Merdol Ibrahim
Antigens Assessed:
Oestrogen Receptors (ER)
Tissue Sections circulated:
Sections from a composite block (see table below)
Number of Registered Participants:
332
Circulated Tissue
The table below left shows the staining characteristics of the tissue sections circulated during Run96, which composed
of three infiltrating ductal carcinomas (IDCs) with differing levels of receptor expression, along with three ER control cell
lines (see photograph below right). The staining of the tumours were characterised using the 6F11 antibody clone. Note:
Only the breast tissue cases were used to gauge the participants overall performance. Cell lines were used for
validation purposes only.
Tissue Sections
% positivity
Staining Intensity
Allred / Quick
Score
A. IDC
85-95%
High
7-8
B. IDC
50-75%
Medium to high
4-6
C. IDC
0%
Negative*
0
A
>80%
High
7-8
B
30-35%
High
6
C
0%
Negative
0
Cell Lines
General Guideline Used in The Assessment of Slides
SCORE
0
STAINING PATTERN
Slide not returned by Participant.
1 or 2
Staining of considerably fewer nuclei than expected in one or more of the distributed tissue
sections, or inappropriate staining of nuclei in cells not expected to stain.
3
Staining of 10% or greater of tumour nuclei in each of the positive tumour sections, though
substantially less than expected to stain, or staining is weaker than expected.
4 or 5
Demonstration of the expected proportion of nuclei stained in the invasive tumours, with roughly
the expected staining intensity.
Marks are also deducted when correct clinical interpretation of staining may be hindered due to
factors such as:
- False positive / false negative / non-specific or inappropriate staining
- Excessive cytoplasmic or diffuse nuclear staining
- Excessively strong or weak haematoxylin counterstain.
- Excessive Antigen retrieval resulting in morphological damage
- Poor quality/inadequate choice of in-house control tissue ( poor/inadequate fixation, damaged cell
morphology, over retrieval etc)
In-house Tissue Recommendations & Assessment
Participants in-house control tissue MUST consist of composite breast tissue (cell line controls are an
acceptable alternative), placed onto a single slide as outlined below
i. >80% tumour positivity with high intensity (Allred/Quick score 7-8)
ii. 30-70% tumour positivity with low-moderate intensity (Allred/Quick score 4-6)
iii. Negative tumour, with normal positively stained glands (Allred/Quick score <1)
Participants are requested to stain their own In-house control and submit at least two unstained sections
from the same tissue block, thus allowing the organising laboratory to stain the same case. The
subsequent comparison of the staining achieved by the participant and organising laboratories on the Inhouse sections, allowed for a more accurate assessment of the staining quality present.
Participants NOT using a composite control and/or NOT sending in unstained sections are
assessed a maximum score of a 'borderline' pass (10-12/20).
© UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent
27
The Breast Hormonal Receptor Module
Introduction
Oestrogen receptor alpha (ER-) plays a vital role in both the
prognosis and predictive response of patient who may be
considered for hormone therapy3 Following the work of
Harvey and colleagues1, immunohistochemistry has now
become the recognised ‘gold standard’ for determining
patient ER status. It is therefore crucial that not only the
antibodies are correctly validated prior to patient-tissue use,
but also proper control tissues are used to gauge the
sensitivity of the test. Furthermore, in the UK, the NHS
B r e a s t
S c r e e n i n g
P r o g r a m m e
(www.cancerscreening.nhs.uk/breastscreen/index.html)
recommends the Quick score (Allred)1,2 to semi quantify the
proportion and intensity of nuclear staining, thus further
standardising the scoring criteria.
Run 96
participants are strongly encouraged to properly control the
staining of their clinical cases. These finding indicate the
necessity of good quality control tissue of known levels of
expression (high, medium and negative) so both the
sensitivity and specificity of the ER IHC staining can be
adequately monitored4,5.
A new antibody was also noted during this assessment,
namely the Dako EP1 clone, with 3 participants now
appearing to use it in their everyday repertoire. Two out of
the 3 participants showed the expected level of staining
using this antibody clone. The EP1 antibody is
recommended to be used with a high pH antigen retrieval.
It should also be noted that during this assessment
participants unstained in-house controls were also stained
using the Dako EP1 clone and showed a good level of
staining. But again further data has yet to be collected on
ER Cell Lines
this EP1 clone and participants are advised to carry out a
For this assessment ER expressing cell lines were also
proper validation prior to introducing it into their everyday
incorporated alongside the tissue sections. The cell lines
laboratory practice.
were however not used as part of the assessment procedure
but data was collected on their staining pattern in order to
validate their usability for possible future NEQAS ER/PR
assessments. The cell lines were kindly prepared and In-house Tissue Results
donated by Dako and consisted of; a) CAMA-1 (human Participants submitted in-house control material showed an
breast carcinoma) ER positive cell line, b) HT-29 (human overall pass rate of 58%, with a borderline pass rate of 37%.
colon cancer) ER negative cell lines, and c) a mixture of The main reasons behind the borderline scores were mainly
CAMA-1 and HT-29 to provide a pseudo-mid expressing cell due to participants not submitting the required high, mid and
negative ER expressing tumours. As discussed above, good
line
quality control material is paramount to gauging both the
For the UK NEQAS assessment the team of assessors sensitivity and specificity of ER staining and can be used to
gauge the sensitivity and specificity of the participants trouble shoot where in the staining methodology the problem
submitted stained slides and score them according to the may be.
expected level of staining that can be achieved using the
6F11 antibody clone on the same composite tissue sent out
References
to the participants.
Assessment Results
Features of optimal immunostaining (figs 1-4)
• Staining of the expected proportion of invasive tumour
nuclei with the anticipated staining intensity
• Intense nuclear staining of ht e appropriate distribution in
normal glands
• Cytoplasmic staining not excessive
• No background staining of connective tissues or
inappropriately localised staining
Features of sub-optimal immunostaining (figs 5-7)
• Relatively weak nuclear staining of the receptor positive
tumours
• Excessive cytoplasmic staining
• Excessive background staining of connective tissue
elements
• Inappropriate staining of some cells e.g. lymphocytes,
fibroblasts
NEQAS Slide Results
1. Jennet M. Harvey, Gary M. Clark, C. Kent Osborne, and D. Craig
Allred (1999) Estrogen Receptor Status by Immunohistochemistry Is
Superior to the Ligand-Binding Assay for Predicting Response to
Adjuvant Endocrine Therapy in Breast Cancer J Clin Oncol 17:14741481
2. Robin Leake, Diana Barnes, Sarah Pinder, Ian Ellis, Liz
Anderson, Tom Anderson, Ruth Adamson, Tony Rhodes, Keith
Miller and Rosemary Walker (2000) J. Clin. Pathol. 2000: 634-635
3. Fisher B, Costantino J, Redmond C, Poisson R, Bowman D,
Couture J, Dimitrov NV, Wolmark N, Wickerham DL, Fisher ER, et
al. (1989) A randomized clinical trial evaluating tamoxifen in the
treatment of patients with node-negative breast cancer who have
estrogenreceptor-positive tumors. N Engl J Med 1989: 479-484.
4. Ibrahim M, Dodson A, Barnett S, Fish D, Jasani B, Miller K. (2008)
Potential for false-positive staining with a rabbit monoclonal antibody
to progesterone receptor (SP2): findings of the UK National External
Quality Assessment Scheme for Immunocytochemistry and FISH
highlight the need for correct validation of antibodies on introduction
to the laboratory. Am J Clin Pathol. 129:398-409
5. Rhodes A, Jasani B, Balaton, et al. (2001) Study of interlaboratory reliability and reproducibility of estrogen and progesterone
receptor assays in Europe: documentation of poor reliability and
identification of insufficient microwave antigen retrieval time as a
major contributory element of unreliable assays. Am J Clin Pathol
2001: 44-58
The overall pass rate on NEQAS sections was 65% (scores
of 13-20/20) for participants as a whole, with a failure rate of
9% (28 participants). The main reason for failure during this
assessment was due to false positive staining of the
negative ER expressing tissue section (section C) (see fig.
5A). The false positive staining was also mirrored in the
negative cell line (Fig 5B), which further indicated the false
positive nature of the staining. Furthermore, the false
negative staining was quite evident in the 6F11 antibody
clone. It is however, difficult to say where the issue lay so
© UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent
28
ΡΥΝ 96
ΒΡΕΑΣΤ ΣΤΕΡΟΙ∆ ΗΟΡΜΟΝΕ ΡΕΧΕΠΤΟΡ Μοδυλε
Σελεχτεδ Ιµαγεσ σηοωινγ Οπτιµαλ ανδ Συβ−οπτιµαλ Ιµµυνοσταινινγ
Φιγ 1. Οϖερϖιεω οφ οπτιµαλλψ σταινεδ ΥΚ ΝΕΘΑΣ διστριβυτεδ σεχτιονσ, σηοωινγ Α) ηιγη
εξπρεσσινγ τυµουρ Β) µιδ−εξπρεσσινγ τυµουρ ανδ Χ) νεγατιϖε τυµουρ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη
Νοϖοχαστρα 6Φ11, 1:50 φορ 15 µινυτεσ, υσινγ βονδ ΜΑΞ ΕΡ2 ΙΙ αντιγεν ρετριεϖαλ (20 µινσ).
Φιγ 2. Γοοδ δεµονστρατιον οφ ΕΡ ιν τηε µιδ εξπρεσσινγ ΥΚ ΝΕΘΑΣ τυµουρ σεχτιον, σηοωινγ
ωελλ λοχαλισεδ ΕΡ εξπρεσσιον οφ ϖαρψινγ ιντενσιτψ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη ςεντανα ΣΠ1 πρε−διλυτεδ
αντιβοδψ, ον τηε ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ, υσινγ ΧΧ1 στανδαρδ ρετριεϖαλ.
Φιγ 3. ΥΚ ΝΕΘΑΣ διστριβυτεδ νεγατιϖε ΕΡ σεχτιον, σηοωινγ λαχκ οφ ΕΡ σταινινγ ωιτηιν τηε
τυµουρ χελλσ ανδ αν οϖεραλλ χλεανλψ λαβελλεδ τισσυε σεχτιον. Σεχτιον σταινεδ ωιτη ςεντανα ΣΠ1
πρε−διλυτεδ αντιβοδψ, ον τηε ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ, υσινγ ΧΧ1 στανδαρδ ρετριεϖαλ.
Φιγ 4. ΥΚ ΝΕΘΑΣ διστριβυτεδ χοντρολ χελλ λινεσ σηοωινγ τηε εξπεχτεδ λεϖελσ οφ σταινινγ. Α) ηιγη
εξπρεσσινγ χελλ λινε (Αλλρεδ 7−8) Β) Μιδ εξπρεσσινγ χελλ λινε σηοωινγ α µιξτυρε οφ ηιγη ανδ
νεγατιϖε χελλ λινεσ (1:2) (Αλλρεδ 5−6) ανδ Χ) Νεγατιϖε χελλ λινε (σεε ιντροδυχτιον φορ φυρτηερ
δεταιλσ). Σεχτιον σταινεδ ωιτη ςεντανα ΣΠ1 πρε−διλυτεδ αντιβοδψ, ον τηε ςεντανα Βενχηµαρκ
Φιγ 5. Υναχχεπταβλε λεϖελ οφ σταινινγ οφ ΥΚ ΝΕΘΑΣ διστριβυτεδ Α) νεγατιϖε τισσυε σεχτιον ανδ
Β) αδϕοινινγ νεγατιϖε χελλ λινε φροµ τηε σαµε σλιδε. Βοτη σεχτιονσ σηοω φαλσε ποσιτιϖε σταινινγ
ανδ α βαχκγρουνδ χψτοπλασµιχ βλυση. Σεχτιον σταινεδ ωιτη Νοϖοχαστρα 6Φ11 χλονε, διλυτεδ 1:50
φορ 30 µινσ., υσινγ Βονδ Μαξ ΕΡ2 ρετριεϖαλ φορ 30 µινσ.
Φιγ 6. Υναχχεπταβλε λεϖελ οφ σταινινγ οφ ΥΚ ΝΕΘΑΣ διστριβυτεδ Α) µιδ εξπρεσσινγ τυµουρ
σταινινγ µυχη λοωερ τηαν εξπεχτεδ αλονγ ωιτη αδϕαχεντ Β) ηιγη εξπρεσσινγ χελλ λινε, αλσο
σηοωινγ ωεακερ τηαν εξπεχτεδ λεϖελ οφ σταινινγ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη ∆ακο ΕΠ1 χλονεσ, διλυτεδ
1:100, ινχυβατιον 15 µινσ, υσινγ Λειχα Βονδ Μαξ ΕΡ1 ρετριεϖαλ φορ 20 µινυτεσ.
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 14:26 ον Τηυρσδαψ, 2 Φεβρυαρψ, 2012
29
ΡΥΝ 96
ΒΡΕΑΣΤ ΣΤΕΡΟΙ∆ ΗΟΡΜΟΝΕ ΡΕΧΕΠΤΟΡ Μοδυλε
Σελεχτεδ Ιµαγεσ σηοωινγ Οπτιµαλ ανδ Συβ−οπτιµαλ Ιµµυνοσταινινγ
Φιγ 7. Υναχχεπταβλε λεϖελ οφ σταινινγ οφ ΥΚ ΝΕΘΑΣ διστριβυτεδ Α) νεγατιϖε τισσυε σεχτιον ανδ
αδϕαχεντ Β) νεγατιϖε χελλ λινε φροµ τηε σαµε σλιδε. Α) Πατχηψ νυχλεαρ σταινινγ οφ τηε νεγατιϖε
τισσυε σεχτιον ανδ Β) µεµβρανε−λικε σταινινγ οφ τηε νεγατιϖε χελλ λινε, ωιτη νο αππαρεντ νυχλεαρ
λοχαλισατιον οφ τηε αντιβοδψ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη Αβχαµ 16660 (ΣΠ1 χλονε), διλυτεδ 1:50,
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 14:26 ον Τηυρσδαψ, 2 Φεβρυαρψ, 2012
30
ΒΡΕΑΣΤ ΣΤΕΡΟΙ∆ ΗΟΡΜΟΝΕ ΡΕΧΕΠΤΟΡ Μοδυλε
Ρυν 96
ΡΥΝ 96Ε Οεστρογεν ρεχεπτορσ ον ΝΕΘΑΣ Σεχτιονσ
ΑΛΛ ΠΑΡΤΙΧΙΠΑΝΤΣ
50
ΡΥΝ 96Ε Οεστρογεν ρεχεπτορσ ον ΝΕΘΑΣ Σεχτιονσ
ΥΚ ΠΑΡΤΙΧΙΠΑΝΤΣ
Ινδιϖιδυαλ
Σχορεσ
4 = 0 (0%)
4 = 0 (0%)
24
5 = 0 (0%)
5 = 0 (0%)
6 = 1 (0%)
40
6 = 0 (0%)
20
7 = 2 (1%)
7 = 1 (1%)
10 = 17 (5%)
30
11 = 14 (4%)
12 = 49 (15%)
13 = 28 (9%)
20
14 = 19 (6%)
8 = 5 (3%)
νο. οφ ρετυρνσ
νο. οφ ρετυρνσ
8 = 11 (3%)
9 = 14 (4%)
9 = 10 (6%)
16
10 = 8 (5%)
11 = 10 (6%)
12
12 = 23 (14%)
13 = 15 (9%)
14 = 8 (5%)
8
15 = 42 (13%)
15 = 23 (14%)
16 = 47 (15%)
10
16 = 14 (9%)
4
17 = 26 (8%)
17 = 13 (8%)
18 = 34 (10%)
0
18 = 21 (13%)
19 = 18 (6%)
4
5
6
7
8
9
10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
19 = 12 (7%)
0
20 = 2 (1%)
4
5
6
7
8
9
Σχορεσ
10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
Συµµαρψ
16 − 20 = 127 (39%)
16 − 20 = 61 (37%)
13 − 15 = 89 (27%)
13 − 15 = 46 (28%)
10 − 12 = 80 (25%)
10 − 12 = 41 (25%)
0 − 9 = 28 (9%)
0 − 9 = 16 (10%)
Μεδιαν = 13.00
Μεδιαν = 13.50
ΡΥΝ 96Φ Οεστρογεν ρεχεπτορσ ον ιν−ηουσε Σεχτιονσ
ΥΚ ΠΑΡΤΙΧΙΠΑΝΤΣ
Ινδιϖιδυαλ
Σχορεσ
40
4 = 0 (0%)
100
5 = 0 (0%)
35
6 = 0 (0%)
7 = 0 (0%)
30
10 = 11 (3%)
60
11 = 13 (4%)
12 = 96 (30%)
13 = 15 (5%)
40
14 = 20 (6%)
15 = 29 (9%)
νο. οφ ρετυρνσ
8 = 6 (2%)
νο. οφ ρετυρνσ
6 = 0 (0%)
7 = 0 (0%)
9 = 10 (3%)
8 = 2 (1%)
9 = 3 (2%)
25
10 = 6 (4%)
11 = 5 (3%)
20
12 = 37 (23%)
13 = 7 (4%)
15
14 = 11 (7%)
15 = 16 (10%)
10
16 = 39 (12%)
20
17 = 38 (12%)
16 = 21 (13%)
17 = 26 (16%)
5
18 = 26 (8%)
19 = 14 (4%)
0
4
5
6
7
8
9
10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
Σχορεσ
20 = 4 (1%)
Ινδιϖιδυαλ
Σχορεσ
4 = 0 (0%)
5 = 0 (0%)
80
20 = 1 (1%)
Σχορεσ
Συµµαρψ
ΡΥΝ 96Φ Οεστρογεν ρεχεπτορσ ον ιν−ηουσε Σεχτιονσ
ΑΛΛ ΠΑΡΤΙΧΙΠΑΝΤΣ
Ινδιϖιδυαλ
Σχορεσ
18 = 20 (12%)
0
19 = 8 (5%)
4
5
6
7
8
9
10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
20 = 2 (1%)
Σχορεσ
Συµµαρψ
Συµµαρψ
16 − 20 = 121 (38%)
16 − 20 = 77 (47%)
13 − 15 = 64 (20%)
13 − 15 = 34 (21%)
10 − 12 = 120 (37%)
10 − 12 = 48 (29%)
0 − 9 = 16 (5%)
0 − 9 = 5 (3%)
Μεδιαν = 14.00
Μεδιαν = 14.00
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 14:27 ον Τηυρσδαψ, 2 Φεβρυαρψ, 2012
31
Ρυν 96
ΒΡΕΑΣΤ ΣΤΕΡΟΙ∆ ΗΟΡΜΟΝΕ ΡΕΧΕΠΤΟΡ Μοδυλε
ΑΝΤΙΒΟ∆ΙΕΣ ΑΝ∆ ΟΤΗΕΡ ΤΕΧΗΝΙΧΑΛ ΠΑΡΑΜΕΤΕΡΣ ΕΜΠΛΟΨΕ∆ ΒΨ
ΠΑΡΤΙΧΙΠΑΝΤΣ ΙΝ ΤΗΕ ΒΡΕΑΣΤ ΣΤΕΡΟΙ∆ ΗΟΡΜΟΝΕ ΡΕΧΕΠΤΟΡ ΜΟ∆ΥΛΕ
Τηε φολλοωινγ ταβλεσ ρεχορδ τηε νυµβερ οφ παρτιχιπαντσ (Ν) υσινγ εαχη πριµαρψ αντιβοδψ. Τηε περχενταγε (%) ρεφερσ
το τηε προπορτιον οφ τηεσε παρτιχιπαντσ αχηιεϖινγ αχχεπταβλε σταινινγ (α σχορε >12/20) ον ΥΚ ΝΕΘΑΣ σεχτιονσ.
Βρεαστ Στεροιδ Ηορµονε Ρεχεπτορ Ρυν: 96
Βρεαστ Στεροιδ Ηορµονε Ρεχεπτορ Ρυν: 96
Αυτοµατιον
Πριµαρψ Αντιβοδψ : Οεστρογεν ρεχεπτορσ
Αντιβοδψ ∆εταιλσ
Ν
%
Α.Μεναρινι ΜΥ 272 (1∆5)
1
100
Αβχαµ αβ16660 (ΣΠ1)
1
0
∆ακο (ΕΠ1) ΙΡ084
1
100
∆ακο (ΕΠ1) Μ3643
2
50
∆ακο ΦΛΕΞ (1∆5) ΙΡ/ΙΣ657
2
0
∆ακο ΙΡ151 Αυτοσταινερ Λινκ (ΣΠ1)
4
100
∆ακο Μ3634 (ΣΠ1)
∆ακο Μ7047 ΕΡ (1∆5)
11
15
73
60
∆ακο Ν1575 (1∆5)
1
0
∆ακο Πηαρµ∆ξ (Αυτοσταινερ κιτ) Κ4071
1
0
∆ακο ΡΤΥ ΙΡ151 (ΣΠ1)
2
100
∆ακο ΣΚ310 πηαρµ∆Ξ κιτ (Λινκ) (1∆5 + ΕΡ−2−123)
1
100
13
Μεναπατη ΜΠ−093−ΧΜ1
Οεστρογεν
ρεχεπτορσ
Ν
%
ΒιοΓενεξ ΓενοΜΞ 6000ι
1
0
ΒιοΓενεξ Οπτιµαξ
2
50
∆ακο Αυτοσταινερ
10
80
∆ακο Αυτοσταινερ Λινκ 48
37
62
∆ακο Αυτοσταινερ πλυσ
12
25
6
83
Λαβςισιον Αυτοσταινερ
11
45
Λειχα Βονδ Μαξ
73
47
Λειχα Βονδ−ΙΙΙ
22
77
6
50
∆ακο Αυτοσταινερ Πλυσ Λινκ
Μεναρινι − Ιντελλιπατη ΦΛΞ
Νονε (Μανυαλ)
Οτηερ
Σηανδον Σεθυενζα
10
50
5
80
4
75
ςεντανα Βενχηµαρκ
11
73
46
ςεντανα Βενχηµαρκ ΥΛΤΡΑ
21
86
23
70
ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ
93
85
Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−ΕΡ−6Φ11 (6Φ11)
40
65
Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−ΕΡ−6Φ11/2
26
50
Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−Λ−ΕΡ− 6Φ11
61
57
Νοϖοχαστρα ΡΤΥ−ΕΡ−6Φ11
4
75
Τηερµο Φισηερ/ Νεοµαρκερσ ΡΜ 9101−Σ (ΣΠ1)
3
67
ςεχτορ ΧΒ11 ςΠ−Χ380
4
50
Λειχα Βονδ ΠΑ0151 (6Φ11)
ςεχτορ ςΠ−Ε613/4 (6Φ11)
ςεντανα 250− 2596 ΕΡ (6Φ11)
ςεντανα 760−2132 (6Φ11)
15
60
3
33
1
100
ςεντανα 790−4324 (ΣΠ1)
58
90
ςεντανα 790−4325 (ΣΠ1)
28
79
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 14:27 ον Τηυρσδαψ, 2 Φεβρυαρψ, 2012
32
Ρυν 96
Βρεαστ Στεροιδ Ηορµονε Ρεχεπτορ Ρυν: 96
Ηεατ Μεδιατεδ Ρετριεϖαλ
ΒΡΕΑΣΤ ΣΤΕΡΟΙ∆ ΗΟΡΜΟΝΕ ΡΕΧΕΠΤΟΡ Μοδυλε
Βρεαστ Στεροιδ Ηορµονε Ρεχεπτορ Ρυν: 96
Οεστρογεν
ρεχεπτορσ
Ενζψµε Μεδιατεδ Ρετριεϖαλ
Ν
%
7
86
ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ
∆ακο Πασχαλ
6
33
∆ακο Προτεασε (Σ2019)
∆ακο ΠΤΛινκ
50
62
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
Λαβ ϖισιον ΠΤ Μοδυλε
10
60
Λειχα Βονδ ΙΙΙ ΕΡ1
6
Λειχα Βονδ ΙΙΙ ΕΡ2
13
Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ1
24
42
Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ2
50
54
Μιχροωαϖε Οϖεν
10
60
1
100
8
63
13
46
Βιοχαρε ∆εχλοακινγ Χηαµβερ
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
Οτηερ
Πρεσσυρε Χοοκερ
Οεστρογεν
ρεχεπτορσ
Ν
%
5
100
1
100
145
67
Οτηερ
1
100
83
Τρψπσιν−∆ιφχο
1
100
62
ςΒΣ Βονδ Ενζψµε 1
1
0
Στεαµερ
1
0
ςεντανα Βενκ ΧΧ1 (Εξτενδεδ)
5
100
ςεντανα Βενκ ΧΧ1 (Μιλδ)
16
81
ςεντανα Βενκ ΧΧ1 (Στανδαρδ)
20
85
ςεντανα Βενκ ΧΧ1# (8µινσ)
3
67
ςεντανα Βενκ ΧΧ2 (µιλδ)
1
0
ςεντανα Βενκ ΥΛΤΡΑ ΧΧ1 (Μιλδ)
9
78
ςεντανα Βενκ ΥΛΤΡΑ ΧΧ1 (Σταν.)
9
78
ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Εξτενδεδ)
7
71
ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Μιλδ)
15
87
ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Στανδαρδ)
34
82
ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ2 (Σ)
1
100
Ωατερ βατη 95−98 ΟΧ
3
100
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 14:27 ον Τηυρσδαψ, 2 Φεβρυαρψ, 2012
33
Ρυν 96
Βρεαστ Στεροιδ Ηορµονε Ρεχεπτορ Ρυν: 96
∆ετεχτιον
Α Μενερινι Πολψµερ (ΜΠ−ΞΧΠ)
ΒΡΕΑΣΤ ΣΤΕΡΟΙ∆ ΗΟΡΜΟΝΕ ΡΕΧΕΠΤΟΡ Μοδυλε
Βρεαστ Στεροιδ Ηορµονε Ρεχεπτορ Ρυν: 96
Οεστρογεν
ρεχεπτορσ
Ν
%
1
100
Χηροµογεν
Α. Μεναρινι Λιθυιδ Σταβλε ∆ΑΒ κιτ
Οεστρογεν
ρεχεπτορσ
Ν
2
%
100
12
83
ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ
21
71
ΒιοΓενεξ ΣΣ Πολψµερ (Θ∆ 430−ΞΑΚΕ)
3
67
ΒιοΓενεξ ∆ΑΒ (Θ∆430)
2
100
∆ακο Α∆ςΑΝΧΕ ΗΡΠ (Κ4068/9)
1
0
ΒιοΓενεξ Λιθυιδ ∆ΑΒ (ΗΚ153−5Κ)
1
0
∆ακο Ενςισιον ΦΛΕΞ ( Κ8000/10)
8
63
∆ακο ∆ΑΒ Κ3468
4
50
∆ακο Ενςισιον ΦΛΕΞ+ ( Κ8002/12)
36
64
∆ΑΚΟ ∆ΑΒ+
3
33
∆ακο Ενϖισιον ΗΡΠ/∆ΑΒ ( Κ5007)
7
57
∆ακο ∆ΑΒ+ Λιθυιδ (Κ3468)
6
50
∆ακο Ενϖισιον+ ΗΡΠ µουσε Κ4004/5/6/7
3
33
∆ακο ∆ΑΒ+ ΡΕΑΛ ∆ετεχτιον (Κ5001)
1
0
∆ακο Ενςισιον Πλυσ κιτσ
5
60
ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ
∆ακο ρβ−α−µο Ιγ (Ε0354)
1
∆ακο ΡΕΑΛ ΗΡΠ/∆ΑΒ (Κ5001 )
4
25
Λαβςισιον Υλτραςισιον ΛΠ ΗΡΠ (ΤΣ 125 Η∆)
1
100
Λαβςισιον Υλτραςισιον ΟΝΕ Πολψµερ ( ΤΛ−012/5−Η∆ϑ/Τ
2
0
89
Λειχα Βονδ Πολψµερ Ρεφινε (∆Σ9800)
ΜεναΠατη Ξ−Χελλ Πλυσ (ΜΠ−ΞΧΠ)
6
100
∆ακο ΦΛΕΞ ∆ΑΒ
38
63
∆ακο ΡΕΑΛ Ενςισιον Κ5007 ∆ΑΒ
8
63
∆ακο ΡΕΑΛ Κ5001 ∆ΑΒ
3
33
53
µεναπατη ξχελλ κιτ ∆ΑΒ (ΜΠ−860)
7
57
50
Οτηερ
Νονε
3
67
Σιγµα ∆ΑΒ (∆5637)
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
2
100
Σιγµα ∆ΑΒ (∆5905)
Νοϖοχαστρα Νοϖολινκ Π∆Σ (ΡΕ7−140/150/280/290−Κ)
4
25
ςΒΣ Βονδ Πολψµερ Ρεφινε κιτ (∆Σ9800)
16
50
1
Οτηερ
ςεχτορ Ελιτε ΑΒΧ Κιτ (ΠΚ−7200)
ςεχτορ ΙµµΠΡΕΣΣ Υνιϖερσαλ (ΜΠ−7500)
12
33
1
100
1
100
81
52
ςεντανα ∆ΑΒ
7
100
100
ςεντανα ιϖιεω
20
90
ςεντανα Υλτραϖιεω ∆ΑΒ
98
82
3
33
1
100
ςεντανα ιςιεω σψστεµ (760−091)
25
92
ςεντανα Υλτραςιεω Κιτ (760−500)
95
81
ςισιον ΒιοΣψστεµσ Βονδ Ξ ∆ΑΒ
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 14:27 ον Τηυρσδαψ, 2 Φεβρυαρψ, 2012
34
Ρυν 96
ΒΡΕΑΣΤ ΣΤΕΡΟΙ∆ ΗΟΡΜΟΝΕ ΡΕΧΕΠΤΟΡ Μοδυλε
ΒΕΣΤ ΜΕΤΗΟ∆Σ
Οεστρογεν ρεχεπτορσ − Μετηοδ 1
Παρτιχιπαντ σχορεδ 18/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 18/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
ςεχτορ ςΠ−Ε613/4 (6Φ11) , 40 Μινσ, 37 ≡Χ
∆ιλυτιον 1: 50
Αυτοµατιον:
ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ
Μετηοδ:
ςεντανα Υλτραςιεω ∆ΑΒ
Μαιν Βυφφερ:
ςεντανα ρεαχτιον βυφφερ (950−300), ΠΗ: 7.4
ΗΜΑΡ:
ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Στανδαρδ)
ΕΑΡ:
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
Χηροµογεν:
ςεντανα Υλτραϖιεω ∆ΑΒ, 37 ≡Χ., Τιµε 1: 8 Μινσ
∆ετεχτιον:
ςεντανα Υλτραςιεω Κιτ (760−500) , 8 Μινσ, 37 ≡Χ Πρεδιλυτεδ
Οεστρογεν ρεχεπτορσ − Μετηοδ 2
Παρτιχιπαντ σχορεδ 18/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 20/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
∆ακο ΙΡ151 Αυτοσταινερ Λινκ (ΣΠ1) , 20 Μινσ, 21 ≡Χ Πρεδιλυτεδ
Αυτοµατιον:
∆ακο Αυτοσταινερ Λινκ 48
Μετηοδ:
∆ακο ΦΛΕΞ+ κιτ
Μαιν Βυφφερ:
∆ακο ΦΛΕΞ ωαση βυφφερ
ΗΜΑΡ:
∆ακο ΠΤΛινκ, Βυφφερ: ∆ΑΚΟ ΗΙΓΗ ΠΗ ΤΡΣ
ΕΑΡ:
Χηροµογεν:
∆ακο ΦΛΕΞ ∆ΑΒ, 21 ≡Χ., Τιµε 1: 5 Μινσ, Τιµε 2: 5 Μινσ
∆ετεχτιον:
∆ακο Ενςισιον ΦΛΕΞ+ ( Κ8002/12) , 20 Μινσ, 21 ≡Χ Πρεδιλυτεδ
Οεστρογεν ρεχεπτορσ − Μετηοδ 3
Παρτιχιπαντ σχορεδ 19/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 18/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−Λ−ΕΡ− 6Φ11 , 44 Μινσ, 37 ≡Χ
Αυτοµατιον:
ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ
Μετηοδ:
ςεντανα ιςιεω Κιτ
Μαιν Βυφφερ:
ςεντανα ρεαχτιον βυφφερ (950−300)
ΗΜΑΡ:
ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Στανδαρδ)
ΕΑΡ:
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
Χηροµογεν:
ςεντανα ιϖιεω, 37 ≡Χ., Τιµε 1: 8 Μινσ
∆ετεχτιον:
ςεντανα ιςιεω σψστεµ (760−091)
∆ιλυτιον 1: 30
Πρεδιλυτεδ
Οεστρογεν ρεχεπτορσ − Μετηοδ 4
Παρτιχιπαντ σχορεδ 19/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 19/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
ςεντανα 790−4325 (ΣΠ1) , 32 Μινσ, 37 ≡Χ Πρεδιλυτεδ
Αυτοµατιον:
ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ
Μετηοδ:
ςεντανα Υλτραςιεω ∆ΑΒ
Μαιν Βυφφερ:
ςεντανα ρεαχτιον βυφφερ (950−300)
ΗΜΑΡ:
ςεντανα Βενκ ΧΧ1 (Μιλδ)
ΕΑΡ:
Χηροµογεν:
ςεντανα Υλτραϖιεω ∆ΑΒ
∆ετεχτιον:
ςεντανα Υλτραςιεω Κιτ (760−500)
Πρεδιλυτεδ
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 14:27 ον Τηυρσδαψ, 2 Φεβρυαρψ, 2012
35
The Breast HER2 ICC Module
Run 96
Merdol Ibrahim, Suzanne Parry and Keith Miller
Antigens Assessed:
HER2
Tissue Sections circulated:
Composite cell lines (see table below)
Number of Registered Participants:
290
Specific Guideline Used in The Assessment of Slides:
The immunohistochemical results were evaluated by UK NEQAS assessors scoring independently using an adapted method initially devised
by the Clinical Trials Assay. Due to the nature of cell lines, overall percentage staining criteria can not be accurately applied to cell when
scoring cell lines. Communication with Leica Microsystems, with whom UK NEQAS ICC & ISH developed the cell lines, indicate that expected
level of membrane staining for a given cell line may range from 30-90% from the viable cell line population. For this reason when cutting
sections, every 50th section is stained as a reference point to gauge the expected level of staining throughout the cell block/s.
The table below demonstrates the staining patterns looked for in cell lines and in-house tissue sections during assessments.
Score
Assessment of Cell Line Staining Pattern
Assessment of In-house tissue sections
3+
Strong complete cell membrane staining
Strong complete cell membrane staining in >30% of tumour cells
2+
Weak to moderate complete cell membrane staining
Weak to moderate complete cell membrane staining in >10% of
tumour cells
1+
Faint barely perceptible incomplete membrane staining
Faint barely perceptible incomplete membrane in >10% of cells
staining
negative
No staining in the ‘0’ control cell line
No staining in the ‘0’ control cell line.
UK NEQAS Specific Scoring Algorithm:
UK NEQAS ICC & ISH devised an EQA specific algorithm for scoring both cell lines and tissue sections, so as to provide participants
additional technical feedback. As well as taking into account the expected range (30-90% see above) of cell line membrane staining, the
acceptable staining levels of each of the cell lines are as follows:
Table below illustrates the expected level of staining for each of the circulated breast carcinoma cell lines along with the UK NEQAS
scoring criteria used in assessments ONLY.
Cell line
Score
Acceptable level/s of
staining during
assessments
Description of staining Pattern used by the assessors
SK-BR-3
3+
3+ only
The 3+ cell line has a wide threshold of complete membrane staining showing strong
staining. Only this level of membrane staining is deemed acceptable for this cell line. .
MDA-MB-453
2+
MDA-MB-175
1+
1+ or 0/1+ or 1+/0
i) 0/1+: Staining is more towards the weaker end of 1+ staining but still acceptable.
ii) 1+/0: Staining is more towards the weaker end of 1+ staining but still acceptable.
MDA-MB-231
negative
0 or 0/1+ or 1+/0
0/1+ or 1+/0 = Cells are starting to show very weak membrane staining
2+ or 1+/2+ or 2+/3+ or i) 1+/2+ or 2+/1+: Staining is slightly weaker than expected with membrane showing
2+/1+ or 3+/2+
more 1+ compared to 2+ (1+/2+) or 2+ membrane staining is present but also
showing 1+ staining (2+/1+).
ii) 2+/3+ or 3+/2+: Staining is slightly weaker than expected with membrane
showing more 2+ compared to 3+ (2+/3+) or 3+ membrane staining is present but
also showing 2+ staining (3+/2+). ‘U’/Uninterpretable Scores
Assessors may also give a score of 'U' which indicates that the cell lines / tissue sections were 'uninterpretable’ due to the reasons set out
below. A score of U/x e.g. U/3+ or U/2+ or U/1+ or U/0 indicates a borderline uninterpretable scores indicating that the staining is just about
readable and further improvements are required.
Cell Line FISH Scores:
The NEQAS cell lines are also FISHed as part of the HER2 ISH module, and the table below shows the HER2
FISH ratio ranges provided by the UK NEQAS reference centres for Run 24 of the HER2 ISH assessments.
Cell line
Score
HER2 gene:Ch17 ratio HER2 status by FISH*
range
SK-BR-3
3+
3.26 - 4.40
Amplified
MDA-MB-453
2+
2.04 - 2.29
Borderline: Amplified to Amplified
MDA-MB-175
1+
1.08 - 1.29
Not amplified
MDA-MB-231
negative
0.97 - 1.16
Not amplified
© UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent
37
The Breast HER2 ICC Module
Run 96
Cell Line Positioning:
Cell lines are positioned on microscope slides, as illustrated below. Any variation in this pattern is
indicated on distribution of the slides
HER2
HER2 immunohistochemistry has been routinely used as a
predictive marker in breast cancer for more than 10 years.
Patients with HER2 positive tumours generally have a poor
overall prognosis. However, patients with metastatic disease
showed an improved rate of survival when the humanized
monoclonal antibody trastuzumab (Herceptin) was given alone
or added with chemotherapy treatment (Slamon et al., 1998).
Herceptin, in the metastatic setting was made available in the
UK in 2000 by the UK National Institute for Clinical Excellence
(NICE). In 2005, Herceptin in the adjuvant setting was also
shown to be effective in primary breast cancers by reducing
the risk of recurrence and mortality (see articles by Wolff et
al., (2006) and Walker et al., (2008) for further commentary
and citations), and in 2006 NICE approved primary breast
screening for HER2.
In the UK alone this has resulted in approximately 40,000
breast cancers per year being tested for HER2. With so many
more cases now being tested worldwide, it is imperative that
correct protocols and methodologies are followed and
adhered to. The UK NEQAS HER2 IHC module assesses the
technical quality of staining achieved by laboratories and
provides feedback to laboratories to help improve the
analytical phase of patient diagnosis.
appropriate invasive control material, to submit DCIS tissue
showing differing levels of membrane staining as an
acceptable alternative. Laboratories must indicate on their
datasheet which component of the tumour they have scored
otherwise the invasive component (if present) will be
assessed.
References
1. Slamon D, Leyland-Jones B, Shak S, et al. Addition of Herceptin
(humanised anti-HER2 antibody) to first line chemotherapy for
(HER2+/MBC) markedly increases anticancer activity: a
randomised, multinational controlled phase III trial. Proc ASCO
1998;17:98a.
2. Piccart-Gebhart MJ, Procter M, Leyland-Jones B, et al:
Trastuzumab after adjuvant chemotherapy in HER2-positive breast
cancer. N Engl J Med 353:1659-1672, 2005
3. Bartlett JM, Ibrahim M, Jasani B, et al. External quality assurance of
HER2 FISH testing: results of a UK NEQAS pilot scheme. J Clin
Pathol 2007 60(7):816-819.
4. Walker RA, Bartlett JM, Dowsett M, Ellis IO, Hanby AM, Jasani B,
Miller K, Pinder SE. HER2 testing in the UK: further update to
recommendations. J Clin Pathol. 2008 61(7):818-824.
5. Wolff AC, Hammond MEH, Schwartz JN, et al. American Society of
Clinical Oncology/College of American Pathologists guideline
recommendations for human epidermal growth factor receptor 2
testing in breast cancer. J Clin Oncol 2007;25:1–28.
Two recommended HER2 testing guidelines are: 1. The
ASCO/CAP guidelines by Wolff et al., (2006) and 2. UK
updated guidelines by Walker et al., (2008). Both provide
invaluable guidelines covering interpretation, tissue fixation
and antibody validation. The article by Walker et. al., also
provides guidelines on the minimum number of tests per year,
(250 for HER2 IHC and 100 HER2 ISH) that labs should be
testing in order to provide a robust HER2 IHC service.
Participants who continue to have difficulty in producing
acceptable staining results should be aware that the members
of staff at UK NEQAS are always willing to assist any
laboratory that is struggling to meet the required standard of
HER2 immunostaining, and would be happy to receive
request for assistance via e-mail in the first instance (see front
of journal for contact details).
In-house Control Tissue Recommendations
Correct choice of in-house control tissue and good
morphological preservation is paramount to gauge the
sensitivity of the HER2 test, which can have an impact on
clinical interpretation. UK NEQAS ICC & ISH therefore
recommends the following:
In-house control tissue (or cell lines) must include 3+,2+ and
1+/0 invasive breast cancer cases. However, it has become
quite apparent that as patient tumour size and respective
biopsies become smaller laboratories may be having difficulty
finding appropriate invasive control material. It is therefore
acceptable, if laboratories are having problems in finding
© UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent
38
ΒΡΕΑΣΤ ΗΕΡ2 ΙΧΧ Μοδυλε
ΡΥΝ 96
Σελεχτεδ Ιµαγεσ σηοωινγ Οπτιµαλ ανδ Συβ−οπτιµαλ Ιµµυνοσταινινγ
Φιγ1.Οπτιµαλ σταινινγ οφ τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ χελλ λινε ΣΚ−ΒΡ3 (3+), σηοωινγ στρονγ µεµβρανε
σταινινγ, ωηιχη ισ χοµπλετελψ χιρχυµφερεντιαλ, ωιτη µινιµαλ χψτοπλασµιχ σταινινγ. Σταινεδ ωιτη
ςεντανα 4Β5 πρεδιλυτεδ αντιβοδψ, ον τηε Βενχηµαρκ ΞΤ, ΧΧ1 µιλδ ανδ Υλτραϖιεω δετεχτιον κιτ.
Φιγ2.Οπτιµαλ σταινινγ οφ τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ χελλ λινε ΣΚ−ΒΡ3 (3+), σηοωινγ στρονγ χοµπλετε
µεµβρανε σταινινγ. Τηερε ισ α σµαλλ ποπυλατιον οφ δεαδ χελλσ ωηιχη αρε ιγνορεδ δυρινγ τηε
ασσεσσµεντσ. Σεχτιον σταινεδ υσινγ τηε ∆ακο Ηερχεπτ κιτ, πρε−τρεατµεντ χαρριεδ ιν τηε ωατερ
βατη (95−98°Χ) φορ 40 µινσ.
Φιγ3.Τωο εξαµπλεσ οφ ιναππροπριατε σταινινγ οφ τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ χελλ λινε ΣΚ−ΒΡ3 (3+). Βοτη
πανελσ σηοω εξχεσσιϖε νον−σπεχιφιχ χψτοπλασµιχ σταινινγ χαυσεδ βψ εξχεσσιϖε αντιγεν
ρετριεϖαλ. (Α) σταινεδ ωιτη ςεντανα 4Β5, ΧΧ1 στανδαρδ ανδ ιςιεω κιτ. (Β) σταινεδ ωιτη ∆ακο
ΧερΒ2 πολψ, 1:900, ον τηε ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ, ΧΧ1 µιλδ ανδ Υλτραϖιεω κιτ.
Φιγ4.Οπτιµαλ σταινινγ οφ τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ χελλ λινε Μ∆Α−ΜΒ−453 (2+), σηοωινγ χοµπλετε
µεµβρανε σταινινγ ιν τηε µαϕοριτψ οφ χελλσ, ωιτη λεσσ ιντενσιϖε σταινινγ τηαν τηατ σεεν ωιτη τηε
3+ χελλ λινε. Σεχτιον σταινεδ υσινγ τηε Λειχα Οραχλε ΧΒ11 ον τηε ΒονδΜαξ ωιτη ΕΡ1 ανδ Ρεφινε
κιτ.
Φιγ5.Οπτιµαλ σταινινγ οφ τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ χελλ λινε Μ∆Α−ΜΒ−453 (2+), σηοωινγ χοµπλετε
µεµβρανε σταινινγ ιν τηε µαϕοριτψ οφ χελλσ, ωιτη λεσσ ιντενσιϖε σταινινγ τηαν τηατ σεεν ωιτη τηε
3+ χελλ λινε. Σεχτιον σταινεδ ωιτη ςεντανα 4Β5 πρεδιλυτεδ αντιβοδψ, ον τηε Βενχηµαρκ ΞΤ, ΧΧ1
µιλδ ανδ Υλτραϖιεω δετεχτιον κιτ.
Φιγ6.Τωο εξαµπλεσ οφ ιναππροπριατε σταινινγ οφ τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ χελλ λινε Μ∆Α−ΜΒ−453 (2+). (Α)
σηοωσ στρονγ χοµπλετε µεµβρανε σταινινγ, ωηιχη ισ φαρ τοο ιντενσε φορ α 2+, σταινεδ υσινγ
Λειχα Οραχλε ΧΒ11 ωιτη ΕΡ1 25 µινσ. (Β) σηοωσ εξχεσσιϖε νον−σπεχιφιχ χψτοπλασµιχ σταινινγ
χαυσεδ βψ εξχεσσιϖε αντιγεν ρετριεϖαλ, σταινεδ ωιτη ∆ακο ΧερΒ2 πολψ, ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ.
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 13:37 ον Φριδαψ, 3 Φεβρυαρψ, 2012
39
ΒΡΕΑΣΤ ΗΕΡ2 ΙΧΧ Μοδυλε
ΡΥΝ 96
Σελεχτεδ Ιµαγεσ σηοωινγ Οπτιµαλ ανδ Συβ−οπτιµαλ Ιµµυνοσταινινγ
Φιγ7.Οπτιµαλ σταινινγ οφ τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ χελλ λινε Μ∆Α−ΜΒ−175 (1+), σηοωινγ αχιναρ χλυµπσ
ωιτη βοτη φινε µεµβρανε ανδ χοαρσε λυµιναλ σταινινγ. Ιτ ισ ονλψ τηε φινε µεµβρανε σταινινγ τηατ
ισ ασσεσσεδ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε ∆ακο Ηερχεπτ κιτ, πρε−τρεατµεντ χαρριεδ ουτ ιν τηε ωατερ
βατη (95−98°Χ) φορ 40 µινσ.
Φιγ8.Οπτιµαλ σταινινγ οφ τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ χελλ λινε Μ∆Α−ΜΒ−175 (1+). Παρτιαλ µεµβρανε ισ
οβσερϖεδ ωιτη λεσσ τηαν 10% οφ χελλσ σηοωινγ χοµπλετε µεµβρανε σταινινγ. Σεχτιον σταινεδ
υσινγ τηε Λειχα Οραχλε ΧΒ11 ον τηε ΒονδΜαξ ωιτη ΕΡ1 ανδ Ρεφινε κιτ.
Φιγ9.Ιναππροπριατε σταινινγ οφ αν ιν ηουσε 1+ σεχτιον, σηοωινγ τισσυε µορπηολογψ δαµαγε. Τηε
ΝΕΘΑΣ 1+ χελλ λινε (ινσερτ) συβµιττεδ φροµ τηισ Λαβ χορρελατεσ ωελλ. Τηισ ισ µοστ λικελψ χαυσεδ
βψ εξχεσσιϖε αντιγεν ρετριεϖαλ. Σεχτιονσ σταινεδ ωιτη Νοϖοχαστρα ΧΒ11 αντιβοδψ, 1:600,
πρε−τρεατεδ υσινγ α πρεσσυρε χοοκερ, δετεχτιον ωιτη τηε Νοϖολινκ πολψµερ κιτ.
Φιγ10.Ιναππροπριατε σταινινγ οφ τηε ‘ιν ηουσε’ 2+ σεχτιον (Α). (Σαµε λαβ ασ ιν Φιγ 9). Τηε
ΝΕΘΑΣ 2+ χελλ λινε (Β) συβµιττεδ φροµ τηισ Λαβ χορρελατεσ ωελλ, σηοωινγ µορπηολογψ δαµαγε
χαυσεδ βψ εξχεσσιϖε αντιγεν ρετριεϖαλ.
Φιγ11.Ιναππροπριατε σταινινγ σεεν ιν τηε συβµιττεδ ‘ιν ηουσε’ 3+ (Α) ανδ τηε ΝΕΘΑΣ 3+χελλ
λινεσ (Β) σηοω α στρονγ χορρελατιον. Βοτη δεµονστρατε εξχεσσιϖε νον−σπεχιφιχ χψτοπλασµιχ
σταινινγ χαυσεδ βψ οϖερ αντιγεν ρετριεϖαλ, ανδ αλσο εξχεσσιϖε χουντερσταιν. Σταινεδ ωιτη
ςεντανα 4Β5 Χονφιρµ, ον τηε Βενχηµαρκ ΞΤ, ΧΧ1 µιλδ ανδ Υλτραϖιεω δετεχτιον κιτ.
Φιγ12.Γοοδ εξαµπλε οφ αν ‘ιν ηουσε’ χοµποσιτε χοντρολ: (Α) 3+: ιντενσε, χρισπ µεµβρανε
σταινινγ (Β) 2+: ωεακ το µοδερατε µεµβρανε σταινινγ (Χ) 1+ : ωεακ ανδ παρτιαλ µεµβρανε
σταινινγ, ανδ (∆) νεγατιϖε τυµουρ ρεµαινσ υνσταινεδ. Σεχτιονσ σταινεδ ωιτη ςεντανα 4Β5
πατηωαψ, ον τηε ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ, ΧΧ1 µιλδ ανδ Υλτραϖιεω δετεχτιον κιτ.
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 13:37 ον Φριδαψ, 3 Φεβρυαρψ, 2012
40
ΒΡΕΑΣΤ ΗΕΡ2 ΙΧΧ Μοδυλε
Ρυν 96
Ρυν 96 ΗΕΡ2 ον ΝΕΘΑΣ Χελλ Λινεσ
ΑΛΛ ΠΑΡΤΙΧΙΠΑΝΤΣ
Ρυν 96 ΗΕΡ2 ον ΝΕΘΑΣ Χελλ Λινεσ
ΥΚ ΠΑΡΤΙΧΙΠΑΝΤΣ
160
60
140
50
120
Νο. οφ Ρετυρνσ
Νο. οφ Ρετυρνσ
40
100
80
60
30
20
40
10
20
0
Αχχεπταβλε
ΒορδερΛινε
0
Ιναππροπριατε
Αχχεπταβλε = 143 (61%) παρτιχιπαντσ
ΒορδερΛινε = 37 (16%) παρτιχιπαντσ
Ιναππροπριατε = 56 (24%) παρτιχιπαντσ
Αχχεπταβλε
ΒορδερΛινε
Ιναππροπριατε
Αχχεπταβλε = 59 (87%) παρτιχιπαντσ
ΒορδερΛινε = 6 (9%) παρτιχιπαντσ
Ιναππροπριατε = 3 (4%) παρτιχιπαντσ
Ρυν 96 ΗΕΡ2 ΙΗΧ ον ιν−ηουσε τισσυε σεχτιονσ
ΑΛΛ ΠΑΡΤΙΧΙΠΑΝΤΣ
Ρυν 96 ΗΕΡ2 ΙΗΧ ον ιν−ηουσε τισσυε σεχτιονσ
ΥΚ ΠΑΡΤΙΧΙΠΑΝΤΣ
40
100
35
80
Νο. οφ Ρετυρνσ
Νο. οφ Ρετυρνσ
30
60
40
25
20
15
10
20
5
0
Αχχεπταβλε
ΒορδερΛινε
Ιναππροπριατε
Αχχεπταβλε = 100 (43%) παρτιχιπαντσ
ΒορδερΛινε = 60 (26%) παρτιχιπαντσ
Ιναππροπριατε = 70 (30%) παρτιχιπαντσ
0
Αχχεπταβλε
ΒορδερΛινε
Ιναππροπριατε
Αχχεπταβλε = 38 (57%) παρτιχιπαντσ
ΒορδερΛινε = 17 (25%) παρτιχιπαντσ
Ιναππροπριατε = 12 (18%) παρτιχιπαντσ
Φορ Ινηουσε ασσεσσορ µακε α χοµβινεδ δεχισιον ασ το τηε αχχεπταβιλιτψ βασεδ υπον τηε φολλοωινγ:
α) Ιν−ηουσε χοντρολ τισσυε µυστ ινχλυδε 3+,2+ ανδ 1+/0 ινϖασιϖε βρεαστ χανχερ χασεσ (νοτ ∆ΧΙΣ).
β) Τισσυε φιξατιον, πρεσερϖατιον οφ µορπηολογψ, αντιγεν ρετριεϖαλ, χουντερσταιν ετχ ισ αλσο βε τακεν ιντο
χονσιδερατιον ωηεν σχορινγ.
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 10:22 ον Ωεδνεσδαψ, 8 Φεβρυαρψ, 2012
41
Ρυν 96
ΒΡΕΑΣΤ ΗΕΡ2 ΙΧΧ Μοδυλε
ΑΝΤΙΒΟ∆ΙΕΣ ΑΝ∆ ΟΤΗΕΡ ΤΕΧΗΝΙΧΑΛ ΠΑΡΑΜΕΤΕΡΣ ΕΜΠΛΟΨΕ∆ ΒΨ
ΠΑΡΤΙΧΙΠΑΝΤΣ ΙΝ ΤΗΕ ΒΡΕΑΣΤ ΗΕΡ2 ΙΧΧ ΜΟ∆ΥΛΕ
Τηε φολλοωινγ ταβλεσ ρεχορδ τηε νυµβερ οφ παρτιχιπαντσ (Ν) υσινγ εαχη πριµαρψ αντιβοδψ. Τηε περχενταγε (%)
ρεφερσ το τηε προπορτιον οφ τηεσε παρτιχιπαντσ αχηιεϖινγ αχχεπταβλε σταινινγ (α σχορε οφ Αχχεπταβλε ορ Βορδερλινε).
Βρεαστ ΗΕΡ2 ΙΧΧ Ρυν: 96
Βρεαστ ΗΕΡ2 ΙΧΧ Ρυν: 96
Πριµαρψ Αντιβοδψ : 96Ε1
Αυτοµατιον
96Ε1
Αντιβοδψ ∆εταιλσ
Ν
%
∆ακο Αυτοσταινερ
∆ακο Αυτοσταινερ Λινκ 48
Ν
%
3
67
1
0
28
71
∆ακο Α0485 Χ−ερΒ−2 (πολψ)
37
49
∆ακο Αυτοσταινερ πλυσ
8
88
∆ακο ΗερχεπΤεστ Κ5204 (πολψ)
10
90
∆ακο Αυτοσταινερ Πλυσ Λινκ
7
100
∆ακο ΗερχεπΤεστ Κ5207 (πολψ)
13
85
Λαβςισιον Αυτοσταινερ
2
0
∆ακο Λινκ ΗερχεπΤεστ ΣΚ001 (πολψ)
23
87
Λειχα Βονδ Μαξ
34
79
1
0
Λειχα Βονδ−ΙΙΙ
12
92
Νονε (Μανυαλ)
28
43
Οτηερ
5
60
Σηανδον Σεθυενζα
2
100
ςεντανα Βενχηµαρκ
5
60
86
Χελλ Μαρθυε ΧΜΑ 601 (ΧΒ11)
Ινϖιτρογεν 080107 (ΧΒ11)
Λαβϖισιον / Νεοµαρκερσ ΡΜ−9103 (ΣΠ3)
3
0
29
90
1
0
Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−Λ−ΧΒ11 (ΧΒ11)
7
43
ςεντανα Βενχηµαρκ ΥΛΤΡΑ
21
Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−Λ−ΧΒΕ356 (10Α7)
2
50
ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ
77
84
ςεχτορ ΧΒ11 ςΠ−Χ380
3
0
2
100
ςεντανα Χονφιρµ 790/800−2996 (4Β5)
29
83
ςεντανα Πατηωαψ 790−100 (4Β5)
16
88
ςεντανα Πατηωαψ 790−2991 (4Β5)
60
90
Λειχα Οραχλε ΗΕΡ2 Βονδ ΙΗΧ (ΧΒ11)
Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−ΧΒ11 (ΧΒ11)
Βρεαστ ΗΕΡ2 ΙΧΧ Ρυν: 96
ςεντανα ΝεξΕΣ
Βρεαστ ΗΕΡ2 ΙΧΧ Ρυν: 96
96Ε1
96Ε1
Ηεατ Μεδιατεδ Ρετριεϖαλ
Ενζψµε Μεδιατεδ Ρετριεϖαλ
Ν
%
34
74
ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ
Λαβ ϖισιον ΠΤ Μοδυλε
5
40
∆ακο Προτεασε (Σ2019)
Λειχα Βονδ ΙΙΙ ΕΡ1
9
89
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ1
32
78
Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ2
3
100
Μιχροωαϖε Οϖεν
5
20
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
3
67
Οτηερ
2
50
Πρεσσυρε Χοοκερ
4
75
Στεαµερ
2
50
ςεντανα Βενκ ΧΧ1 (Μιλδ)
26
85
ςεντανα Βενκ ΧΧ1 (Στανδαρδ)
10
70
4
50
∆ακο ΠΤΛινκ
ςεντανα Βενκ ΧΧ1# (8µινσ)
ςεντανα Βενκ ΥΛΤΡΑ ΧΧ1 (Μιλδ)
ςεντανα Βενκ ΥΛΤΡΑ ΧΧ1 (Σταν.)
ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Εξτενδεδ)
12
83
1
100
1
100
ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Μιλδ)
37
89
ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Στανδαρδ)
14
79
1
100
29
69
ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1# (8µινσ)
Ωατερ βατη 95−98 ΟΧ
Ν
%
11
64
1
100
101
71
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 10:22 ον Ωεδνεσδαψ, 8 Φεβρυαρψ, 2012
42
Ρυν 96
Βρεαστ ΗΕΡ2 ΙΧΧ Ρυν: 96
Βρεαστ ΗΕΡ2 ΙΧΧ Ρυν: 96
96Ε1
96Ε1
∆ετεχτιον
Χηροµογεν
Ν
%
ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ
31
84
Α. Μεναρινι Λιθυιδ Σταβλε ∆ΑΒ κιτ
∆ακο ΗερΧεπ Τεστ (Κ5204)
12
92
ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ
1
0
10
∆ακο Ενςισιον ΦΛΕΞ+ ( Κ8002/12)
∆ακο Ενϖισιον ΗΡΠ/∆ΑΒ ( Κ5007)
∆ακο ΛΣΑΒ Υνιϖερσαλ/ΗΡΠ ( Κ0673/4/5)
∆ακο Ενςισιον ΦΛΕΞ ( Κ8000/10)
∆ακο ΗερΧεπ Τεστ (Κ5205)
ΒΡΕΑΣΤ ΗΕΡ2 ΙΧΧ Μοδυλε
Ν
1
100
56
84
%
∆ακο ∆ΑΒ Κ3468
1
0
40
∆ΑΚΟ ∆ΑΒ+
7
86
2
50
∆ακο ∆ΑΒ+ Λιθυιδ (Κ3468)
3
33
3
0
∆ακο Ενςισιον Πλυσ κιτσ
2
50
20
60
0
∆ακο ΦΛΕΞ ∆ΑΒ
1
100
∆ακο ΗερΧεπ Τεστ Αυτο∋ρ (Κ5207)
10
90
∆ακο ΡΕΑΛ Ενςισιον Κ5007 ∆ΑΒ
3
∆ακο ΗερΧεπ Τεστ Αυτο∋ρ (ΣΚ001)
15
80
Λαβςισιον ∆ΑΒ
1
0
∆ακο ΛΣΑΒ+ σψστεµ −ΗΡΠ (Κ0679)
1
0
Οτηερ
15
67
∆ακο ρβ−α−µο Ιγ (Ε0354)
1
0
Σιγµα ∆ΑΒ (∆5637)
1
0
1
0
17
76
Λαβςισιον Υλτραςισιον ΛΠ ΗΡΠ (ΤΣ 125 Η∆)
1
0
Σιγµα ∆ΑΒ (∆5905)
Λαβςισιον Υλτραςισιον ΟΝΕ Πολψµερ ( ΤΛ−012/5−Η∆ϑ/Τ
1
0
ςΒΣ Βονδ Πολψµερ Ρεφινε κιτ (∆Σ9800)
17
71
ςεντανα ∆ΑΒ
6
67
Νονε
2
100
ςεντανα ιϖιεω
7
71
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
5
80
ςεντανα Υλτραϖιεω ∆ΑΒ
Λειχα Βονδ Πολψµερ Ρεφινε (∆Σ9800)
4
75
ςισιον ΒιοΣψστεµσ Βονδ Ξ ∆ΑΒ
Οτηερ
13
38
Ζψµεδ ∆ΑΒ
ςεντανα ιςιεω σψστεµ (760−091)
13
77
ςεντανα Υλτραςιεω Κιτ (760−500)
86
86
Νοϖοχαστρα Νοϖολινκ Π∆Σ (ΡΕ7−140/150/280/290−Κ)
91
86
2
100
1
0
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 10:22 ον Ωεδνεσδαψ, 8 Φεβρυαρψ, 2012
43
Ρυν 96
ΒΡΕΑΣΤ ΗΕΡ2 ΙΧΧ Μοδυλε
ΒΕΣΤ ΜΕΤΗΟ∆Σ
96 ΗΕΡ2 ΙΗΧ − Μετηοδ 1
Παρτιχιπαντ σχορεδ Αχχεπταβλε (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ Αχχεπταβλε (χοντρολ σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
ςεντανα Πατηωαψ 790−2991 (4Β5) , 14 Μινσ, 37 ≡Χ Πρεδιλυτεδ
Αυτοµατιον:
ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ
Μετηοδ:
ςεντανα Υλτραςιεω ∆ΑΒ
Μαιν Βυφφερ:
ςεντανα ρεαχτιον βυφφερ (950−300)
ΗΜΑΡ:
ςεντανα Βενκ ΧΧ1 (Μιλδ)
ΕΑΡ:
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
Χηροµογεν:
ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ
∆ετεχτιον:
ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ
96 ΗΕΡ2 ΙΗΧ − Μετηοδ 2
Παρτιχιπαντ σχορεδ Αχχεπταβλε (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ Αχχεπταβλε (χοντρολ σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
∆ακο Λινκ ΗερχεπΤεστ ΣΚ001 (πολψ) , 30 Μινσ, 22 ≡Χ Πρεδιλυτεδ
Αυτοµατιον:
∆ακο Αυτοσταινερ Λινκ 48
Μετηοδ:
ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ
Μαιν Βυφφερ:
∆ακο ΦΛΕΞ ωαση βυφφερ, ΠΗ: 7.6
ΗΜΑΡ:
∆ακο ΠΤΛινκ, Βυφφερ: ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ
ΕΑΡ:
Χηροµογεν:
ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ, 22 ≡Χ., Τιµε 1: 10 Μινσ
∆ετεχτιον:
∆ακο ΗερΧεπ Τεστ Αυτο∋ρ (ΣΚ001) , 30 Μινσ, 22 ≡Χ Πρεδιλυτεδ
96 ΗΕΡ2 ΙΗΧ − Μετηοδ 3
Παρτιχιπαντ σχορεδ Αχχεπταβλε (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ Αχχεπταβλε (χοντρολ σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
ςεντανα Πατηωαψ 790−2991 (4Β5) , 32 Μινσ, 37 ≡Χ Πρεδιλυτεδ
Αυτοµατιον:
ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ
Μετηοδ:
ςεντανα ιςιεω Κιτ
Μαιν Βυφφερ:
ςεντανα ρεαχτιον βυφφερ (950−300), ΠΗ: 7.6
ΗΜΑΡ:
ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Στανδαρδ)
ΕΑΡ:
Χηροµογεν:
ςεντανα ιϖιεω
∆ετεχτιον:
ςεντανα ιςιεω σψστεµ (760−091)
96 ΗΕΡ2 ΙΗΧ − Μετηοδ 4
Παρτιχιπαντ σχορεδ Αχχεπταβλε (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ Αχχεπταβλε (χοντρολ σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
Λειχα Οραχλε ΗΕΡ2 Βονδ ΙΗΧ (ΧΒ11) , 30 Μινσ, 21 ≡Χ Πρεδιλυτεδ
Αυτοµατιον:
Λειχα Βονδ Μαξ
Μετηοδ:
ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ
Μαιν Βυφφερ:
Βονδ Ωαση Βυφφερ (ΑΡ9590)
ΗΜΑΡ:
Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ1
ΕΑΡ:
Χηροµογεν:
ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ, 21 ≡Χ., Τιµε 1: 10 Μινσ
∆ετεχτιον:
ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 10:22 ον Ωεδνεσδαψ, 8 Φεβρυαρψ, 2012
44
The Lymphoma Module
Run 96
David Blythe Suzanne Parry and Merdol Ibrahim
Gold Standard
Second Antibody
Antigens Assessed:
BCL2
Cyclin D1
Tissue Sections circulated:
Tonsil & Follicular Lymphoma
Mantle Cell Lymphoma & Reactive
Tonsil
Number of Registered Participants:
240
Summary Graphs - Pass Rate Tables
Best Method - Selected Images
© UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent
45
ΛΨΜΠΗΟΜΑ Μοδυλε
ΡΥΝ 96
Σελεχτεδ Ιµαγεσ σηοωινγ Οπτιµαλ ανδ Συβ−οπτιµαλ Ιµµυνοσταινινγ
F e e e Φιγ2.Ποορ δεµονστρατιον οφ ΒΧλ2 ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ τονσιλ σεχτιον (Χοµπαρε το Φιγ 1). Τηε
µαϕοριτψ οφ χελλσ εξπεχτεδ το σταιν αρε νοτ δεµονστρατεδ. Τηε ηιγη−ποωερ ϖιεω (Β) σηοωσ τηατ
τηε χελλσ τηατ ηαϖε σταινεδ αρε ϖερψ ωεακ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη ∆ακο 124 αντιβοδψ, 1:100, ον
τηε Ve e , ΧΧ1 µιλδ ανδ ιVιεω δετεχτιον κιτ.
F! e e " # Φιγ4.Συβ−οπτιµαλ δεµονστρατιον οφ ΒΧλ2 ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ φολλιχυλαρ λψµπηοµα (χοµπαρε το Φιγ
1). Χελλσ εξπεχτεδ το σταιν αρε δεµονστρατεδ βυτ τηε σταινινγ ισ ωεακ. (Β) ηιγη−ποωερ ϖιεω.
Σεχτιον σταινεδ ωιτη ∆ακο 124 αντιβοδψ, 1:100, ον τηε Ve e , ΧΧ1 µιλδ ανδ
ιVιεω δετεχτιον κιτ.
χψτοπλασµιχ σταινινγ οφ τηε περιπηεραλ Β−χελλσ ανδ ανδ περι− ανδ ιντρα−φολλιχυλαρ Τ−χελλσ. (Α’)
ηιγη−ποωερ ϖιεω. Σεχτιον σταινεδ ωιτη ∆ακο 124 αντιβοδψ, 1:200, ον τηε Λειχα ΒονδΜαξ, ΕΡ2
ανδ Ρεφινε δετεχτιον κιτ.
χρισπ σταινινγ οφ τυµουρ χελλσ (Α). Τηε ηιγη−ποωερ ϖιεω (Β) δεµονστρατεσ τηε ωελλ λοχαλισεδ
χψτοπλασµιχ σταινινγ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη ∆ακο 124 αντιβοδψ, 1:100, υσινγ τηε ∆ακο ΠΤ Λινκ,
" e Fa ee Φιγ5.Συβ−οπτιµαλ σταινινγ οφ ΒΧλ2 ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ τονσιλ σεχτιον, σηοωινγ εξχεσσιϖε
βαχκγρουνδ ανδ ιναππροπριατε νον−σπεχιφιχ σταινινγ. Σεχτιον σταινεδ ∆ακο 124 αντιβοδψ, 1:50,
epee e e"e e " e $ e pe %#e ee Φιγ6.G e&e ' "e’ τονσιλ σεχτιον σταινεδ ωιτη ΒΧλ2. Ινσερτ (Β) σηοωσ τηε
στρονγ ωελλ−λοχαλισεδ σταινινγ οφ τηε περιπηεραλ Β− ανδ Τ−χελλσ το α βεττερ αδϖανταγε. Σεχτιον
σταινεδ ωιτη ∆ακο 124 αντιβοδψ, 1:200, ον τηε Λειχα ΒονδΜαξ, ΕΡ2 ανδ Ρεφινε δετεχτιον κιτ.
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 14:31 ον Τηυρσδαψ, 2 Φεβρυαρψ, 2012
46
ΛΨΜΠΗΟΜΑ Μοδυλε
ΡΥΝ 96
Σελεχτεδ Ιµαγεσ σηοωινγ Οπτιµαλ ανδ Συβ−οπτιµαλ Ιµµυνοσταινινγ
Φιγ7.Οπτιµαλ δεµονστρατιον οφ Χψχλιν ∆1 ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ ρεαχτιϖε τονσιλ. Βοτη τηε σθυαµουσ
επιτηελιαλ ανδ σχαττερεδ ενδοτηελιαλ χελλσ σηοω µοδερατε το στρονγ σταινινγ νυχλεαρ ανδ ωεακ
ιντρα−χψτοπλασµιχ σταινινγ. (Β) Ηιγη−ποωερ ϖιεω. Σεχτιον σταινεδ ωιτη Νεοµαρκερσ ΣΠ4
αντιβοδψ, 1:50, ον τηε ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ, ΧΧ1 στανδαρδ, ανδ Υλτραϖιεω κιτ.
Φιγ8. Οπτιµαλ δεµονστρατιον οφ Χψχλιν ∆1 ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ µαντλε χελλ λψµπηοµα (ΜΧΛ),
σηοωινγ µοδερατε το στρονγ σταινινγ οφ ϖιρτυαλλψ αλλ τηε τυµουρ χελλσ (Α). Τηε ηιγη−ποωερ ϖιεω
(Β) δεµονστρατεσ τηε διστινχτ νυχλεαρ σταινινγ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε ςεχτορ ΣΠ4 αντιβοδψ,
1:25, υσινγ τηε ∆ακο ΠΤ Λινκ, αυτοσταινερ ανδ ΦΛΕΞ δετεχτιον κιτ.
)*+,-./01234*567 8952:;4<64*2: 2= >?@7*: AB *: 4C9 DE HIJK. <96@4*L9 42:;*7 M@2536<9 42
)*+NO- PC9 56Q2<*4? 2= @977; 9R39@498 42 ;46*: 6<9 2:7? S96T7? 8952:;4<6498 2< :24 ;46*:98 64 677-
Φιγ10.Συβ−οπτιµαλ δεµονστρατιον οφ Χψχλιν ∆1 ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΜΧΛ (χοµπαρε το Φιγ8). Τηε
µαϕοριτψ οφ χελλσ εξπεχτεδ το σταιν αρε δεµονστρατεδ βυτ τηε σταινινγ ισ ωεακ. (Β) Ηιγη−ποωερ
ϖιεω. Σεχτιον σταινεδ ωιτη Νεοµαρκερσ ΣΠ4 αντιβοδψ, 1:30, πρε−τρεατεδ ιν τηε µιχροωαϖε ανδ
υσινγ τηε (εχτορ Ελιτε ΑΒΧ κιτ.
Σεχτιον σταινεδ ωιτη ∆ακο ∆ΧΣ−6 αντιβοδψ, 1:20, υσινγ τηε ∆ακο ΠΤ Λινκ, αυτοσταινερ ανδ
)UIW 8949@4*2: T*4-
Φιγ11.Ποορ δεµονστρατιον οφ Χψχλιν ∆1 ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ ρεαχτιϖε τονσιλ σεχτιον, σηοωινγ
ιναππροπριατε νον−σπεχιφιχ σταινινγ ιν τηε γερµιναλ χεντρε. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε (εντανα
ΣΠ4 πρε−διλυτεδ αντιβοδψ ον τηε (εντανα Βενχηµαρκ ΥΛΤΡΑ, ΧΧ1 στανδαρδ, ανδ Υλτραϖιεω κιτ.
Φιγ12.X228 9R65379 2= 6: Y*: C2/;9Z χοντρολ σταινεδ ωιτη Χψχλιν ∆1, σηοωινγ στρονγ διστινχτ
σταινινγ ιν τηε λψµπη νοδε (Α) ανδ ΜΧΛ (Β) σεχτιονσ συβµιττεδ ον τηε σαµε σλιδε. Σεχτιονσ
σταινεδ ωιτη Νεοµαρκερσ ΣΠ4 αντιβοδψ, 1:50, ον τηε (9:46:6 [9:@C56<T WP, ΧΧ1 µιλδ ανδ
ι(ιεω δετεχτιον κιτ.
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 14:31 ον Τηυρσδαψ, 2 Φεβρυαρψ, 2012
47
ΛΨΜΠΗΟΜΑ Μοδυλε
Ρυν 96
ΡΥΝ 96Λ ΒΧΛ2 ον ΝΕΘΑΣ Σεχτιονσ
45
ΡΥΝ 96Μ ΒΧΛ2 ον ιν−ηουσε Σεχτιονσ
Ινδιϖιδυαλ
Σχορεσ
80
4 = 1 (0%)
5 = 0 (0%)
40
35
4 = 0 (0%)
5 = 0 (0%)
70
6 = 0 (0%)
7 = 2 (1%)
6 = 0 (0%)
7 = 0 (0%)
60
9 = 2 (1%)
10 = 4 (2%)
25
11 = 9 (4%)
12 = 41 (18%)
20
13 = 14 (6%)
15
8 = 2 (1%)
νο. οφ ρετυρνσ
νο. οφ ρετυρνσ
8 = 9 (4%)
30
9 = 3 (1%)
50
10 = 3 (1%)
11 = 9 (4%)
40
12 = 21 (9%)
13 = 18 (8%)
30
14 = 18 (8%)
14 = 16 (7%)
15 = 24 (10%)
10
15 = 18 (8%)
20
16 = 37 (16%)
16 = 76 (33%)
17 = 39 (17%)
5
17 = 37 (16%)
10
18 = 21 (9%)
0
4
5
6
7
8
9
10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
18 = 16 (7%)
0
19 = 12 (5%)
20 = 1 (0%)
4
5
6
7
8
9
Σχορεσ
10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
Συµµαρψ
16 − 20 = 110 (47%)
16 − 20 = 143 (61%)
13 − 15 = 56 (24%)
13 − 15 = 52 (22%)
10 − 12 = 54 (23%)
10 − 12 = 33 (14%)
0 − 9 = 14 (6%)
0 − 9 = 5 (2%)
Μεδιαν = 13.00
Μεδιαν = 14.00
50
70
5 = 0 (0%)
6 = 0 (0%)
7 = 1 (0%)
8 = 11 (5%)
10 = 4 (2%)
11 = 2 (1%)
12 = 22 (10%)
13 = 6 (3%)
20
8 = 5 (2%)
50
νο. οφ ρετυρνσ
νο. οφ ρετυρνσ
6 = 0 (0%)
60
7 = 3 (1%)
9 = 7 (3%)
9 = 1 (0%)
10 = 3 (1%)
40
11 = 9 (4%)
12 = 25 (11%)
30
13 = 18 (8%)
14 = 19 (8%)
15 = 18 (8%)
14 = 19 (8%)
20
15 = 25 (11%)
16 = 48 (21%)
10
17 = 25 (11%)
16 = 61 (27%)
17 = 32 (14%)
10
18 = 16 (7%)
0
19 = 22 (10%)
4
5
6
7
8
9
10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
Σχορεσ
20 = 25 (11%)
Ινδιϖιδυαλ
Σχορεσ
4 = 2 (1%)
5 = 0 (0%)
30
20 = 5 (2%)
ΡΥΝ 96Π Χψχλιν ∆1 ον ιν−ηουσε Σεχτιονσ
Ινδιϖιδυαλ
Σχορεσ
4 = 0 (0%)
40
19 = 9 (4%)
Σχορεσ
Συµµαρψ
ΡΥΝ 96Ν Χψχλιν ∆1 ον ΝΕΘΑΣ Σεχτιονσ
Ινδιϖιδυαλ
Σχορεσ
18 = 10 (4%)
0
19 = 9 (4%)
4
5
6
7
8
9
10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
20 = 5 (2%)
Σχορεσ
Συµµαρψ
Συµµαρψ
16 − 20 = 136 (60%)
16 − 20 = 117 (52%)
13 − 15 = 43 (19%)
13 − 15 = 62 (28%)
10 − 12 = 28 (12%)
10 − 12 = 37 (16%)
0 − 9 = 21 (9%)
0 − 9 = 9 (4%)
Μεδιαν = 13.50
Μεδιαν = 13.00
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 15:41 ον Τηυρσδαψ, 2 Φεβρυαρψ, 2012
48
ΛΨΜΠΗΟΜΑ Μοδυλε
Ρυν 96
ΑΝΤΙΒΟ∆ΙΕΣ ΑΝ∆ ΟΤΗΕΡ ΤΕΧΗΝΙΧΑΛ ΠΑΡΑΜΕΤΕΡΣ ΕΜΠΛΟΨΕ∆ ΒΨ
ΠΑΡΤΙΧΙΠΑΝΤΣ ΙΝ ΤΗΕ ΛΨΜΠΗΟΜΑ ΜΟ∆ΥΛΕ
Τηε φολλοωινγ ταβλεσ ρεχορδ τηε νυµβερ οφ παρτιχιπαντσ (Ν) υσινγ εαχη πριµαρψ αντιβοδψ. Τηε περχενταγε (%) ρεφερσ
το τηε προπορτιον οφ τηεσε παρτιχιπαντσ αχηιεϖινγ αχχεπταβλε σταινινγ (α σχορε >12/20) ον ΥΚ ΝΕΘΑΣ σεχτιονσ.
Λψµπηοµα Ρυν: 96
Λψµπηοµα Ρυν: 96
Πριµαρψ Αντιβοδψ : ΒΧΛ2
Πριµαρψ Αντιβοδψ : Χψχλιν ∆1
Αντιβοδψ ∆εταιλσ
Ν
%
Αντιβοδψ ∆εταιλσ
Ν
%
Β∆ 550847 ΒΧΛ2 (124)
1
100
Βιοχαρε Μεδιχαλ Π236Β
1
100
Βιογενεξ ΜΥ 287−ΥΧ (100)
1
100
Χελλ Μαρθυε (ΡΒΤ14) ΧΡΧ011
2
50
Χελλ µαρθυε ΧΜΧ329 (124)
4
25
∆ακο (∆ΧΣ−6) Μ7155
9
56
13
62
∆ακο (ΕΠ12) Μ3642
1
100
∆ακο Μ0887 (124)
109
74
∆ακο (ΣΠ4) Μ3635
22
82
∆ακο Μ0887 (124)
31
77
∆ακο ΦΛΕΞ ΡΤΥ (ΣΠ4) ΙΡ152
5
100
∆ακο ΡΤΥ (ΕΠ12) ΙΡ083/ΙΣ083
2
100
∆ακοΧψτοµατιον Μ7155 (∆Χ5−6)
1
0
1
100
86
∆ακο ΦΛΕΞ ΙΡ614 (124)
Λαβϖισιον/Νεοµαρκερσ ΜΣ−123−Π (100/∆5)
3
33
Λειχα ΡΤΥ (ΒΧλ2/100/∆5) ΠΑ0117
10
100
Λειχα/Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−ΒΧλ−2 (ΒΧλ2/100/∆5)
13
69
Λαβ ςισιον/Τηερµο Σχι ΜΣ 210Π (∆ΧΣ−6)
Λαβςισιον/Τηερµο Σχι (ΣΠ4) ΡΜ−9104
58
Λειχα/Νοϖο (Π2∆11Φ11) ΝΧΛ−Χψχλιν ∆1−ΓΜ−ΧΕ
14
57
8
50
2
50
Λειχα/Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−ΒΧλ−2−486 (3.1)
9
89
Μεναπατη (100/∆5) ΜΠ−003
1
100
Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−Λ−βχλ−2 (βχλ2/100/∆5)
9
89
Λειχα/Νοϖο ΡΤΥ (Π2∆11Φ11) ΝΧΛ−ΡΤΥ−Χψχλιν∆1
Οτηερ
2
50
Μεναπατη (ΣΠ4) ΜΠ−307
Σχψτεκ (124) Α2004
1
0
ςεχτορ ςΠΒ201 (ΒΧλ2/100/∆5)
1
100
ςεντανα (124) 790−4464
9
44
ςεντανα (ΣΠ66) 790−4604
1
100
14
36
1
0
ςεντανα 760−4240 (124)
Ζψµεδ 18−0193 (100)
ΝεοΜαρκερσ/Τηερµο Σχι (ΕΠΡ2241ΙΗΧ) ΡΜ−2113
59
81
Οτηερ
3
67
ςεχτορ ρβµ ςΠ−ΡΜ03 (ΣΠ4)
4
100
ςεχτορ ςΠ−Χ394 (Π2∆11Φ11)
1
0
ςεντανα (ΣΠ4−Ρ) 790−4508
3
100
30
77
ςεντανα ρβµ 760−4282 (ΣΠ4)
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 15:41 ον Τηυρσδαψ, 2 Φεβρυαρψ, 2012
49
ΛΨΜΠΗΟΜΑ Μοδυλε
Ρυν 96
Λψµπηοµα Ρυν: 96
Λψµπηοµα Ρυν: 96
ΒΧΛ2
Χψχλιν ∆1
ΒΧΛ2
Ν
%
Ν
%
3
67
3
33
∆ακο Πασχαλ
3
67
3
100
∆ακο ΠΤΛινκ
37
86
33
79
Λαβ ϖισιον ΠΤ Μοδυλε
6
100
5
80
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
Λειχα Βονδ ΙΙΙ ΕΡ1
1
0
1
0
Λειχα Βονδ ΙΙΙ ΕΡ2
16
88
16
Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ1
11
91
2
Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ2
Βιοχαρε ∆εχλοακινγ Χηαµβερ
Ν
%
Ν
%
ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ
2
100
1
100
ΒιοΓενεξ Προτεασε
0
0
1
100
∆ακο Προτεασε (Σ2019)
0
0
1
100
102
70
60
78
Οτηερ
0
0
1
0
81
ςΒΣ Βονδ Ενζψµε 1
1
0
0
0
50
ςεντανα Προτεασε
1
100
1
100
59
95
63
81
Μιχροωαϖε Οϖεν
6
67
9
33
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
0
0
1
0
Οτηερ
8
88
6
100
Πρεσσυρε Χοοκερ
10
50
7
57
Πρεσσυρε Χοοκερ ιν Μιχροωαϖε Οϖεν
0
0
1
100
Στεαµερ
2
50
0
0
ςεντανα Βενκ ΧΧ1 (Εξτενδεδ)
4
75
2
100
ςεντανα Βενκ ΧΧ1 (Μιλδ)
2
0
8
63
ςεντανα Βενκ ΧΧ1 (Στανδαρδ)
9
56
17
100
ςεντανα Βενκ ΥΛΤΡΑ ΧΧ1 (Εξτεν.)
2
50
2
50
ςεντανα Βενκ ΥΛΤΡΑ ΧΧ1 (Μιλδ)
1
0
1
0
ςεντανα Βενκ ΥΛΤΡΑ ΧΧ1 (Σταν.)
8
13
10
90
ςεντανα Βενκ ΥΛΤΡΑ ΧΧ2 (Μιλδ)
0
0
1
0
ςεντανα Βενκ ΥΛΤΡΑ ΧΧ2# (8µινσ)
1
100
0
0
14
29
2
50
83
ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Εξτενδεδ)
ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Μιλδ)
3
33
6
24
42
21
95
ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1# (8µινσ)
0
0
1
100
Ωατερ βατη 95−98 ΟΧ
3
0
5
40
ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Στανδαρδ)
Χψχλιν ∆1
Ενζψµε Μεδιατεδ Ρετριεϖαλ
Ηεατ Μεδιατεδ Ρετριεϖαλ
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 15:41 ον Τηυρσδαψ, 2 Φεβρυαρψ, 2012
50
ΛΨΜΠΗΟΜΑ Μοδυλε
Ρυν 96
Λψµπηοµα Ρυν: 96
Λψµπηοµα Ρυν: 96
ΒΧΛ2
∆ετεχτιον
Χψχλιν ∆1
Ν
%
Ν
%
Α Μενερινι Πολψµερ (ΜΠ−ΞΧΠ)
1
100
0
0
ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ
9
100
10
90
ΒιοΧαρτα (ΒΧΑ ΗΠ 504 ΥΣ)
0
0
1
100
ΒιοΓενεξ ΣΣ Πολψµερ (Θ∆ 420−ΨΙΚΕ)
1
100
1
100
1
0
0
0
8
75
9
100
30
87
21
76
∆ακο Α∆ςΑΝΧΕ ΗΡΠ (Κ4068/9)
∆ακο Ενςισιον ΦΛΕΞ ( Κ8000/10)
∆ακο Ενςισιον ΦΛΕΞ+ ( Κ8002/12)
∆ακο Ενϖισιον ΗΡΠ/∆ΑΒ ( Κ5007)
3
67
4
75
∆ακο Ενϖισιον+ ΗΡΠ µουσε Κ4004/5/6/7
1
100
1
100
1
100
0
0
∆ακο ΡΕΑΛ ΗΡΠ/∆ΑΒ (Κ5001 )
4
50
4
25
Λαβςισιον Υλτραςισιον ΛΠ ΗΡΠ (ΤΛ 125 ΗΛϑ)
1
0
2
50
Λαβςισιον Υλτραςισιον ΛΠ ΗΡΠ (ΤΣ 125 Η∆)
1
100
1
0
Λαβςισιον Υλτραςισιον ΟΝΕ Πολψµερ ( ΤΛ−012/5−Η∆ϑ/Τ
1
100
1
0
1
100
1
0
74
92
66
80
4
25
3
33
1
100
1
100
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
2
100
2
0
Νοϖοχαστρα Νοϖολινκ Π∆Σ (ΡΕ7−140/150/280/290−Κ)
3
67
4
75
14
64
14
71
∆ακο ρβ−α−µο Ιγ (Ε0354)
Λειχα Βονδ Πολψµερ ∆εφινε (∆Σ9713)
Λειχα Βονδ Πολψµερ Ρεφινε (∆Σ9800)
ΜεναΠατη Ξ−Χελλ Πλυσ (ΜΠ−ΞΧΠ)
Νονε
Οτηερ
Ποωερ ςισιον ∆ΠςΒ999 ΗΡΠ
1
0
1
0
ςεχτορ Ελιτε ΑΒΧ Κιτ (ΠΚ−7200)
1
100
1
100
100
ςεχτορ ΙµµΠΡΕΣΣ Υνιϖερσαλ (ΜΠ−7500)
1
100
1
12
17
13
92
ςεντανα Οπτιςιεω Κιτ (760−700)
1
0
1
100
ςεντανα Υλτραςιεω Κιτ (760−500)
52
46
52
88
ςεντανα ιςιεω σψστεµ (760−091)
ΒΧΛ2
Χψχλιν ∆1
Χηροµογεν
Ν
18
94
Ν
21
ΒιοΓενεξ Λιθυιδ ∆ΑΒ (ΗΚ153−5Κ)
1
100
0
0
∆ακο ∆ΑΒ Κ3468
0
0
3
100
∆ακο ∆ΑΒ+ Λιθυιδ (Κ3468)
5
60
2
100
∆ακο ∆ΑΒ+ ΡΕΑΛ ∆ετεχτιον (Κ5001)
1
0
2
50
∆ακο Ενςισιον Πλυσ κιτσ
4
100
3
100
ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ
∆ακο ΦΛΕΞ ∆ΑΒ
%
32
84
24
83
∆ακο ΡΕΑΛ Ενςισιον Κ5007 ∆ΑΒ
4
75
5
100
∆ακο ΡΕΑΛ Κ5001 ∆ΑΒ
4
50
4
50
Λαβςισιον ∆ΑΒ
1
100
3
33
µεναπατη ξχελλ κιτ ∆ΑΒ (ΜΠ−860)
5
40
3
33
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
Οτηερ
0
0
1
0
11
64
9
67
0
Σιγµα ∆ΑΒ (∆5637)
2
50
2
Σιγµα ∆ΑΒ (∆5905)
1
100
1
0
73
90
68
79
100
ςΒΣ Βονδ Πολψµερ Ρεφινε κιτ (∆Σ9800)
ςεχτορ ∆ΑΒ (ΣΚ−4100)
0
0
1
ςεντανα ∆ΑΒ
6
50
11
91
ςεντανα ιϖιεω
7
0
6
100
56
45
55
84
2
100
2
0
ςεντανα Υλτραϖιεω ∆ΑΒ
ςισιον ΒιοΣψστεµσ Βονδ Ξ ∆ΑΒ
Λψµπηοµα Ρυν: 96
ΒΧΛ2
Χψχλιν ∆1
Αυτοµατιον
Ν
%
Ν
%
ΒιοΓενεξ ΓενοΜΞ 6000ι
1
100
1
100
ΒιοΓενεξ Οπτιµαξ
0
0
1
0
∆ακο Αυτοσταινερ
7
57
9
44
∆ακο Αυτοσταινερ Λινκ 48
32
81
21
86
∆ακο Αυτοσταινερ πλυσ
7
71
7
43
∆ακο Αυτοσταινερ Πλυσ Λινκ
5
100
5
100
∆ακο ΤεχηΜατε 500
0
0
1
100
67
Λαβςισιον Αυτοσταινερ
7
100
9
61
95
60
80
Λειχα Βονδ Ξ
1
100
1
100
Λειχα Βονδ−ΙΙΙ
77
Λειχα Βονδ Μαξ
25
84
22
Μεναρινι − Ιντελλιπατη ΦΛΞ
3
33
1
0
Νονε (Μανυαλ)
3
67
3
33
Οτηερ
8
38
5
80
Σηανδον Σεθυενζα
2
50
2
0
ςεντανα Βενχηµαρκ
3
33
8
100
ςεντανα Βενχηµαρκ ΥΛΤΡΑ
16
38
15
67
ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ
52
44
53
91
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 15:41 ον Τηυρσδαψ, 2 Φεβρυαρψ, 2012
%
76
51
Ρυν 96
ΛΨΜΠΗΟΜΑ Μοδυλε
ΒΕΣΤ ΜΕΤΗΟ∆Σ
ΒΧΛ2 − Μετηοδ 1
Παρτιχιπαντ σχορεδ 19/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 18/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
∆ακο Μ0887 (124) , 30 Μινσ, ΡΟΟΜ ≡Χ
∆ιλυτιον 1: 1/50
Αυτοµατιον:
∆ακο Αυτοσταινερ Λινκ 48
Μετηοδ:
∆ακο ΦΛΕΞ+ κιτ
Μαιν Βυφφερ:
∆ακο ΦΛΕΞ ωαση βυφφερ, ΠΗ: 7.6
ΗΜΑΡ:
∆ακο ΠΤΛινκ, Βυφφερ: ΦΛΕΞ ΤΡΣ ΗΙΓΗ, ΠΗ: 9
ΕΑΡ:
Χηροµογεν:
∆ακο Ενςισιον Πλυσ κιτσ, ΡΟΟΜ ≡Χ., Τιµε 1: 5 Μινσ, Τιµε 2: 5 Μινσ
∆ετεχτιον:
∆ακο Ενςισιον ΦΛΕΞ+ ( Κ8002/12) , 15 Μινσ, ΡΟΟΜ ≡Χ Πρεδιλυτεδ
ΒΧΛ2 − Μετηοδ 2
Παρτιχιπαντ σχορεδ 20/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 19/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
∆ακο ΦΛΕΞ ΙΡ614 (124) , 15 Μινσ Πρεδιλυτεδ
Αυτοµατιον:
∆ακο Αυτοσταινερ Λινκ 48
Μετηοδ:
∆ακο ΦΛΕΞ+ κιτ
Μαιν Βυφφερ:
∆ακο ΦΛΕΞ ωαση βυφφερ
ΗΜΑΡ:
∆ακο ΠΤΛινκ
ΕΑΡ:
Χηροµογεν:
∆ακο ΦΛΕΞ ∆ΑΒ
∆ετεχτιον:
∆ακο Ενςισιον ΦΛΕΞ+ ( Κ8002/12)
ΒΧΛ2 − Μετηοδ 3
Παρτιχιπαντ σχορεδ 19/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 17/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
∆ακο Μ0887 (124) , 30 Μινσ, 22 ≡Χ
Αυτοµατιον:
Λειχα Βονδ Μαξ
Μετηοδ:
ςΒΣ ΒονδΜΑξ Ρεφινε ΚΙΤ
Μαιν Βυφφερ:
Βονδ Ωαση Βυφφερ (ΑΡ9590)
ΗΜΑΡ:
Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ2
∆ιλυτιον 1: 150
ΕΑΡ:
Χηροµογεν:
ςΒΣ Βονδ Πολψµερ Ρεφινε κιτ (∆Σ9800), 22 ≡Χ., Τιµε 2: 10 Μινσ
∆ετεχτιον:
Λειχα Βονδ Πολψµερ Ρεφινε (∆Σ9800) , 15 Μινσ, 22 ≡Χ Πρεδιλυτεδ
ΒΧΛ2 − Μετηοδ 4
Παρτιχιπαντ σχορεδ 19/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 17/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
Λειχα/Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−ΒΧλ−2−486 (3.1) , 32 Μινσ, 37 ≡Χ
Αυτοµατιον:
ςεντανα Βενχηµαρκ
∆ιλυτιον 1: 15
Μετηοδ:
ςεντανα Υλτραςιεω ∆ΑΒ
Μαιν Βυφφερ:
ςεντανα ρεαχτιον βυφφερ (950−300)
ΗΜΑΡ:
ςεντανα Βενκ ΧΧ1 (Εξτενδεδ)
ΕΑΡ:
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
Χηροµογεν:
ςεντανα Υλτραϖιεω ∆ΑΒ
∆ετεχτιον:
ςεντανα Υλτραςιεω Κιτ (760−500) , 12 Μινσ, 37 ≡Χ Πρεδιλυτεδ
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 15:41 ον Τηυρσδαψ, 2 Φεβρυαρψ, 2012
52
ΛΨΜΠΗΟΜΑ Μοδυλε
Ρυν 96
ΒΕΣΤ ΜΕΤΗΟ∆Σ
Χψχλιν ∆1 − Μετηοδ 1
Παρτιχιπαντ σχορεδ 20/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 19/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
∆ακο (ΣΠ4) Μ3635 , 25 Μινσ, 22 ≡Χ
Αυτοµατιον:
Λειχα Βονδ Μαξ
Μετηοδ:
ςΒΣ ΒονδΜΑξ Ρεφινε ΚΙΤ
Μαιν Βυφφερ:
Βονδ Ωαση Βυφφερ (ΑΡ9590)
ΗΜΑΡ:
Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ2
∆ιλυτιον 1: 25
ΕΑΡ:
Χηροµογεν:
ςεχτορ ∆ΑΒ (ΣΚ−4100), 22 ≡Χ., Τιµε 2: 10 Μινσ
∆ετεχτιον:
Λειχα Βονδ Πολψµερ Ρεφινε (∆Σ9800) , 15 Μινσ, 22 ≡Χ Πρεδιλυτεδ
Χψχλιν ∆1 − Μετηοδ 2
Παρτιχιπαντ σχορεδ 20/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 20/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
ΝεοΜαρκερσ/Τηερµο Σχι (ΕΠΡ2241ΙΗΧ) ΡΜ−2113 , 32 Μινσ, 37 ≡Χ
Αυτοµατιον:
ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ
Μετηοδ:
ςεντανα Υλτραςιεω ∆ΑΒ
Μαιν Βυφφερ:
ςεντανα ρεαχτιον βυφφερ (950−300)
ΗΜΑΡ:
ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Στανδαρδ)
ΕΑΡ:
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
Χηροµογεν:
ςεντανα Υλτραϖιεω ∆ΑΒ, 37 ≡Χ., Τιµε 1: 12 Μινσ, Τιµε 2: 12 Μινσ
∆ετεχτιον:
ςεντανα Υλτραςιεω Κιτ (760−500) , 8 Μινσ, 37 ≡Χ Πρεδιλυτεδ
∆ιλυτιον 1: 50
Χψχλιν ∆1 − Μετηοδ 3
Παρτιχιπαντ σχορεδ 20/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 19/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
ΝεοΜαρκερσ/Τηερµο Σχι (ΕΠΡ2241ΙΗΧ) ΡΜ−2113 , 30 Μινσ, 20 ≡Χ
Αυτοµατιον:
∆ακο Αυτοσταινερ Λινκ 48
Μετηοδ:
∆ακο ΦΛΕΞ+ κιτ
Μαιν Βυφφερ:
Τρισ Βυφφερεδ Σαλινε (ΤΒΣ), ΠΗ: 7.6
ΗΜΑΡ:
∆ακο ΠΤΛινκ, Βυφφερ: ∆ακο Ηιγη πΗ
ΕΑΡ:
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
Χηροµογεν:
∆ακο ΦΛΕΞ ∆ΑΒ, 20 ≡Χ., Τιµε 1: 5 Μινσ, Τιµε 2: 5 Μινσ
∆ετεχτιον:
∆ακο Ενςισιον ΦΛΕΞ+ ( Κ8002/12) , 15 Μινσ, 20 ≡Χ
∆ιλυτιον 1: 1/50
Χψχλιν ∆1 − Μετηοδ 4
Παρτιχιπαντ σχορεδ 20/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 20/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
∆ακο (∆ΧΣ−6) Μ7155 , 60 Μινσ, ΡΤ ≡Χ
Αυτοµατιον:
Λειχα Βονδ−ΙΙΙ
Μετηοδ:
ςΒΣ ΒονδΜΑξ Ρεφινε ΚΙΤ
Μαιν Βυφφερ:
Βονδ Ωαση Βυφφερ (ΑΡ9590)
ΗΜΑΡ:
Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ2
∆ιλυτιον 1: 25
ΕΑΡ:
Χηροµογεν:
ςΒΣ Βονδ Πολψµερ Ρεφινε κιτ (∆Σ9800), ΡΤ ≡Χ., Τιµε 1: 10 Μινσ
∆ετεχτιον:
Λειχα Βονδ Πολψµερ Ρεφινε (∆Σ9800) , 10 Μινσ, ΡΤ ≡Χ Πρεδιλυτεδ
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 15:41 ον Τηυρσδαψ, 2 Φεβρυαρψ, 2012
53
The Neuropathology Module
Run 96
Neil Bilbe, Robert Fincham and Stephen McQuaid
Gold Standard
Second Antibody
Antigens Assessed:
Ki-67/MIB-1
EMA
Tissue Sections circulated:
Glioblastoma & Meningioma
Meningioma
Number of Registered Participants:
64
Summary Graphs - Pass Rate Tables
Best Method - Selected Images
© UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent
54
ΝΕΥΡΟΠΑΤΗΟΛΟΓΨ Μοδυλε
ΡΥΝ 96
Σελεχτεδ Ιµαγεσ σηοωινγ Οπτιµαλ ανδ Συβ−οπτιµαλ Ιµµυνοσταινινγ
Φιγ 1.Οπτιµαλ δεµονστρατιον οφ Κι−67 ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ διστριβυτεδ γλιοβλαστοµα σεχτιον (Α,Β),
σηοωινγ στρονγ ωελλ−λοχαλισεδ, νυχλεαρ σταινινγ ωιτη α χλεαν βαχκγρουνδ. Σεχτιον σταινεδ υσινγ
τηε Λειχα ΜΜ1 αντιβοδψ, ωιτη νο πρε−τρεατµεντ ον τηε Λειχα ΒονδΜαξ, ΕΡ2 ανδ Ρεφινε
δετεχτιον κιτ.
Φιγ2.Οπτιµαλ δεµονστρατιον οφ Κι−67 ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ σεχτιονσ οφ µενινγιοµα (Α) ανδ
γλιοβλαστοµα (Β). Τηε νυχλεαρ σταινινγ ισ ιντενσε ανδ ωελλ−λοχαλισεδ, ωιτη τηε εξπεχτεδ νυµβερσ
οφ χελλσ σταινινγ ιν εαχη τισσυε. Σεχτιον σταινεδ ωιτη Βιοχαρε πολψχλοναλ αντιβοδψ, 1:30, ωιτη νο
πρε−τρεατµεντ ον τηε ςεντανα ΥΛΤΡΑ, ΧΧ1 στανδαρδ ανδ Υλτραϖιεω δετεχτιον κιτ.
Φιγ3.Συβ−οπτιµαλ δεµονστρατιον οφ Κι−67 ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ µενινγιοµα (Α) ανδ γλιοβλαστοµα
(Β) σεχτιονσ (χοµπαρε το Φιγ2). Σεχτιονσ σηοω ωεακ σταινινγ ιν λεσσ τηαν τηε εξπεχτεδ
περχενταγε οφ χελλσ. Βοτη σεχτιονσ σταινεδ ωιτη τηε ∆ακο ΜΙΒ−1 αντιβοδψ, υσινγ τηε ΠΤ Λινκ,
αυτοσταινερ ανδ ΦΛΕΞ κιτ. (Α) ωιτη α πρε−διλυτεδ αντιβοδψ ανδ (Β) υσινγ α διλυτιον οφ 1:100.
Φιγ4.Συβ−οπτιµαλ δεµονστρατιον οφ Κι−67 ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ σεχτιονσ οφ µενινγιοµα (Α) ανδ
γλιοβλαστοµα (Β), σηοωινγ ιναππροπριατε νον−σπεχιφιχ βαχκγρουνδ σταινινγ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη
∆ακο ΜΙΒ−1 αντιβοδψ, 1:100, ωιτη νο πρε−τρεατµεντ ον τηε Λειχα ΒονδΜαξ, ΕΡ2 ανδ Ρεφινε
δετεχτιον κιτ.
Φιγ5.Τωο εξαµπλεσ οφ ποορλψ χουντερσταινεδ ΥΚ ΝΕΘΑΣ γλιοβλαστοµα σεχτιονσ. Αλτηουγη τηε
Κι−67 σταινινγ ισ αχχεπταβλε, (Α) σηοωσ εξχεσσιϖε χουντερσταιν, ωηιλε (Β) ηασ ϖερψ λιττλε/νο
χουντερσταιν ατ αλλ.
Φιγ6. Γοοδ εξαµπλε οφ αν ‘ιν ηουσε’ χοντρολ σεχτιον σταινεδ ωιτη Κι−67, σηοωινγ ιντενσε
ωελλ−λοχαλισεδ, νυχλεαρ σταινινγ ανδ α χλεαν βαχκγρουνδ. Σηοων το βεττερ αδϖανταγε ιν τηε ηιγη
ποωερ ινσετ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη ∆ακο ΜΙΒ−1 αντιβοδψ, 1:25, ον τηε ςεντανα Βενχηµαρκ Υλτρα,
ΧΧ1 στανδαρδ ανδ Υλτραϖιεω δετεχτιον κιτ.
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 14:34 ον Τηυρσδαψ, 2 Φεβρυαρψ, 2012
55
ΝΕΥΡΟΠΑΤΗΟΛΟΓΨ Μοδυλε
ΡΥΝ 96
Σελεχτεδ Ιµαγεσ σηοωινγ Οπτιµαλ ανδ Συβ−οπτιµαλ Ιµµυνοσταινινγ
Φιγ 7.Οπτιµαλ δεµονστρατιον οφ ΕΜΑ ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ διστριβυτεδ µενινγιοµα, σηοωινγ στρονγ
ωελλ−λοχαλισεδ, χψτοπλασµιχ σταινινγ τηρουγηουτ τηε σεχτιον ωιτη α χλεαν βαχκγρουνδ. Σεχτιον
σταινεδ ωιτη τηε ∆ακο Ε29 αντιβοδψ, 1:300, ον τηε Λειχα Βονδ ΙΙΙ, ΕΡ1 ανδ Ρεφινε δετεχτιον κιτ.
Φιγ 8.Οπτιµαλ δεµονστρατιον οφ ΕΜΑ ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ διστριβυτεδ µενινγιοµα. Αλµοστ αλλ οφ
τηε χελλσ σηοω στρονγ χψτοπλασµιχ σταινινγ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη ∆ακο Ε29 πρεδιλυτεδ αντιβοδψ,
υσινγ τηε ΠΤ Λινκ, αυτοσταινερ ανδ ΦΛΕΞ δετεχτιον κιτ.
Φιγ9.Συβ−οπτιµαλ δεµονστρατιον οφ ΕΜΑ ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ µενινγιοµα, σηοωινγ ϖερψ ωεακ,
ϖιρτυαλλψ νεγατιϖε σταινινγ (χοµπαρε το Φιγσ 7&8). Σεχτιον σταινεδ ωιτη ∆ακο Ε29, 1:1000, ον
τηε ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ, ΧΧ1 στανδαρδ ανδ Υλτραϖιεω δετεχτιον κιτ.
Φιγ10. Συβ−οπτιµαλ δεµονστρατιον οφ ΕΜΑ ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ µενινγιοµα. Τηε σταινινγ ισ
πατχηψ ανδ ϖερψ ωεακ ιν αρεασ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη ∆ακο Ε29, 1:1000, ον τηε ςεντανα
Βενχηµαρκ ΞΤ, ΧΧ1 στανδαρδ ανδ Υλτραϖιεω δετεχτιον κιτ.
Φιγ11.|bbo f}]h~kf bc ]_ ^_ dbgsf€ µενινγιοµα χοντρολ σεχτιον, σηοωινγ στρονγ χψτοπλασµιχ,
πρεδοµιναντλψ µεµβρανουσ σταινινγ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη ∆ακο 4Χ4 αντιβοδψ, υσινγ τηε ΠΤ
s\]^_^_` bc \df \ghbgi jfkks l^\d ] jkf]_ m]jn`ibg_oq rfj\^b_ s\]^_fo l^\d t]nb uvwx yzv{{x
^_nx ]g\bs\]^_fi ]_o ‚uƒ of\fj\^b_ n^\q
Φιγ12.Γοοδ εξαµπλε οφ αν ‘ιν ηουσε’ µεταστατιχ βραιν τυµουρ, σηοωινγ σπεχιφιχ χψτοπλασµιχ
νο−πρετρεατµεντ, ανδ υσινγ τηε ∆ακο Ενϖισιον δετεχτιον κιτ.
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 14:34 ον Τηυρσδαψ, 2 Φεβρυαρψ, 2012
56
ΝΕΥΡΟΠΑΤΗΟΛΟΓΨ Μοδυλε
Ρυν 96
ΡΥΝ 96Γ Κι−67 / ΜΙΒ1 ον ΝΕΘΑΣ Σεχτιονσ
20
ΡΥΝ 96Η Κι−67 / ΜΙΒ1 ον ιν−ηουσε Σεχτιονσ
Ινδιϖιδυαλ
Σχορεσ
20
4 = 0 (0%)
4 = 0 (0%)
5 = 0 (0%)
5 = 0 (0%)
6 = 0 (0%)
16
6 = 0 (0%)
16
7 = 1 (2%)
7 = 0 (0%)
12
10 = 0 (0%)
11 = 0 (0%)
12 = 4 (6%)
8
13 = 2 (3%)
8 = 0 (0%)
νο. οφ ρετυρνσ
νο. οφ ρετυρνσ
8 = 0 (0%)
9 = 0 (0%)
9 = 0 (0%)
12
10 = 0 (0%)
11 = 0 (0%)
12 = 0 (0%)
8
13 = 1 (2%)
14 = 3 (5%)
14 = 3 (5%)
15 = 9 (14%)
4
15 = 7 (11%)
4
16 = 18 (29%)
16 = 13 (21%)
17 = 10 (16%)
17 = 19 (31%)
18 = 11 (17%)
0
4
5
6
7
8
9
10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
18 = 13 (21%)
0
19 = 3 (5%)
20 = 2 (3%)
4
5
6
7
8
9
Σχορεσ
10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
Συµµαρψ
16 − 20 = 44 (70%)
16 − 20 = 51 (82%)
13 − 15 = 14 (22%)
13 − 15 = 11 (18%)
10 − 12 = 4 (6%)
10 − 12 = 0 (0%)
0 − 9 = 1 (2%)
0 − 9 = 0 (0%)
Μεδιαν = 15.50
Μεδιαν = 16.00
12
20
5 = 0 (0%)
6 = 0 (0%)
6 = 0 (0%)
16
7 = 1 (2%)
7 = 0 (0%)
10 = 0 (0%)
11 = 1 (2%)
6
12 = 5 (8%)
13 = 7 (11%)
8 = 0 (0%)
νο. οφ ρετυρνσ
νο. οφ ρετυρνσ
8 = 1 (2%)
9 = 2 (3%)
9 = 0 (0%)
10 = 0 (0%)
12
11 = 0 (0%)
12 = 1 (2%)
13 = 1 (2%)
8
14 = 5 (8%)
4
14 = 1 (2%)
15 = 8 (13%)
16 = 11 (17%)
2
15 = 7 (11%)
16 = 18 (29%)
4
17 = 4 (6%)
17 = 19 (31%)
18 = 6 (10%)
0
19 = 6 (10%)
4
5
6
7
8
9
10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
Σχορεσ
20 = 6 (10%)
Ινδιϖιδυαλ
Σχορεσ
4 = 0 (0%)
5 = 0 (0%)
8
20 = 0 (0%)
ΡΥΝ 96Κ Επιτηελιαλ Μεµβρανε Αντιγεν (ΕΜΑ) ον ιν−ηουσε Σεχτιονσ
Ινδιϖιδυαλ
Σχορεσ
4 = 0 (0%)
10
19 = 6 (10%)
Σχορεσ
Συµµαρψ
ΡΥΝ 96ϑ Επιτηελιαλ Μεµβρανε Αντιγεν (ΕΜΑ) ον ΝΕΘΑΣ Σεχτιονσ
Ινδιϖιδυαλ
Σχορεσ
18 = 9 (15%)
0
19 = 6 (10%)
4
5
6
7
8
9
10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
20 = 0 (0%)
Σχορεσ
Συµµαρψ
Συµµαρψ
16 − 20 = 33 (52%)
16 − 20 = 52 (84%)
13 − 15 = 20 (32%)
13 − 15 = 9 (15%)
10 − 12 = 6 (10%)
10 − 12 = 1 (2%)
0 − 9 = 4 (6%)
0 − 9 = 0 (0%)
Μεδιαν = 14.00
Μεδιαν = 15.50
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 15:47 ον Τηυρσδαψ, 2 Φεβρυαρψ, 2012
57
ΝΕΥΡΟΠΑΤΗΟΛΟΓΨ Μοδυλε
Ρυν 96
ΑΝΤΙΒΟ∆ΙΕΣ ΑΝ∆ ΟΤΗΕΡ ΤΕΧΗΝΙΧΑΛ ΠΑΡΑΜΕΤΕΡΣ ΕΜΠΛΟΨΕ∆ ΒΨ
ΠΑΡΤΙΧΙΠΑΝΤΣ ΙΝ ΤΗΕ ΝΕΥΡΟΠΑΤΗΟΛΟΓΨ ΜΟ∆ΥΛΕ
Τηε φολλοωινγ ταβλεσ ρεχορδ τηε νυµβερ οφ παρτιχιπαντσ (Ν) υσινγ εαχη πριµαρψ αντιβοδψ. Τηε περχενταγε (%) ρεφερσ
το τηε προπορτιον οφ τηεσε παρτιχιπαντσ αχηιεϖινγ αχχεπταβλε σταινινγ (α σχορε >12/20) ον ΥΚ ΝΕΘΑΣ σεχτιονσ.
Νευροπατηολογψ Ρυν: 96
Νευροπατηολογψ Ρυν: 96
Πριµαρψ Αντιβοδψ : Κι−67 / ΜΙΒ1
Πριµαρψ Αντιβοδψ : Επιτηελιαλ Μεµβρανε Αντιγεν (ΕΜΑ)
Αντιβοδψ ∆εταιλσ
∆ακο ΦΛΕΞ ΡΤΥ (ΜΙΒ1) ΙΡ626
Ν
%
Αντιβοδψ ∆εταιλσ
Ν
%
100
3
67
Βιοχαρε (ΜΧ−5) ΧΜ−143 (ΜΧ−5)
1
43
98
∆ακο (4Χ4) Μ4507
2
50
Λειχα/Νοϖοχαστρα (ΜΜ1) ΝΧΛ−Κι67−ΧΕ
6
83
∆ακο (Ε29) Ν1504
1
100
Λειχα/Νοϖοχαστρα ΡΤΥ (Κ2) ΠΑ0230
1
100
∆ακο (Ε29) Μ0613
44
84
Λειχα/Νοϖοχαστρα ΡΤΥ (ΜΜ1) ΠΑ0118
1
100
∆ακο ΦΛΕΞ ΡΤΥ (Ε29) ΙΡ629
3
100
ΝεοΜαρκερσ/Τηερµο Σχι (ΣΠ6) ΡΜ 9106
1
100
Λειχα/Νοϖοχαστρα (ΓΠ1.4) ΝΧΛ−ΕΜΑ
4
100
Οτηερ
1
100
Λειχα/Νοϖοχαστρα ΡΤΥ (ΓΠ1.4) ΠΑ0035
1
100
Σιγµα (ΠΠ−67) Π6834
1
0
Νεοµαρκερ/Τηερµο Σχι (ΓΠ1.4) Αβ−2 ΜΣ−348
1
100
ςεντανα (Κ2) 760−2910
1
100
ςεντανα (Ε29) 760−4259
6
67
ςεντανα ΡΤΥ (30−9) 790−4286
5
80
∆ακο Μ7240 (ΜΙΒ1)
Νευροπατηολογψ Ρυν: 96
Ηεατ Μεδιατεδ Ρετριεϖαλ
Βιοχαρε ∆εχλοακινγ Χηαµβερ
∆ακο ΠΤΛινκ
Νευροπατηολογψ Ρυν: 96
Επιτηελιαλ
Μεµβρανε
Κι−67 / ΜΙΒ1
Ενζψµε Μεδιατεδ Ρετριεϖαλ
Ν
%
Ν
%
1
100
1
100
11
82
9
78
Λαβ ϖισιον ΠΤ Μοδυλε
0
0
1
100
Λειχα Βονδ ΙΙΙ ΕΡ1
3
100
0
0
Λειχα Βονδ ΙΙΙ ΕΡ2
2
100
5
100
Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ1
6
100
1
100
Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ2
8
100
16
100
Μιχροωαϖε Οϖεν
1
100
1
0
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
5
20
0
0
Οτηερ
1
100
3
67
Πρεσσυρε Χοοκερ
1
100
1
100
ςεντανα Βενκ ΧΧ1 (Εξτενδεδ)
0
0
1
100
ςεντανα Βενκ ΧΧ1 (Μιλδ)
3
100
6
100
ςεντανα Βενκ ΧΧ1 (Στανδαρδ)
5
60
3
100
ςεντανα Βενκ ΧΧ2 (Εξτενδεδ)
0
0
1
100
ςεντανα Βενκ ΧΧ2 (Στανδαρδ)
0
0
1
100
ςεντανα Βενκ ΥΛΤΡΑ ΧΧ1 (Εξτεν.)
1
100
0
0
ςεντανα Βενκ ΥΛΤΡΑ ΧΧ1 (Μιλδ)
2
100
4
100
ςεντανα Βενκ ΥΛΤΡΑ ΧΧ1 (Σταν.)
4
100
2
100
ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Μιλδ)
4
100
3
67
ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Στανδαρδ)
2
0
4
100
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
ςΒΣ Βονδ Ενζψµε 1
Επιτηελιαλ
Μεµβρανε
Κι−67 / ΜΙΒ1
Ν
%
Ν
%
24
75
27
93
2
100
0
0
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 15:47 ον Τηυρσδαψ, 2 Φεβρυαρψ, 2012
58
ΝΕΥΡΟΠΑΤΗΟΛΟΓΨ Μοδυλε
Ρυν 96
Νευροπατηολογψ Ρυν: 96
∆ετεχτιον
Νευροπατηολογψ Ρυν: 96
Επιτηελιαλ
Μεµβρανε
Κι−67 / ΜΙΒ1
Ν
%
Ν
%
ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ
5
80
5
100
ΒιοΓενεξ ΣΣ Πολψµερ (Θ∆ 420−ΨΙΚΕ)
1
100
0
0
ΒιοΓενεξ ΣΣ Πολψµερ (Θ∆ 430−ΞΑΚΕ)
0
0
1
100
∆ακο Ενςισιον ΦΛΕΞ ( Κ8000/10)
2
100
2
100
∆ακο Ενςισιον ΦΛΕΞ+ ( Κ8002/12)
6
67
7
71
∆ακο Ενϖισιον ΗΡΠ/∆ΑΒ ( Κ5007)
2
100
1
100
1
100
0
0
22
91
19
100
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
1
100
1
100
Οτηερ
4
75
3
67
ςεχτορ Ελιτε Υνιϖερσαλ ΑΒΧ (ΠΚ−6200)
1
100
1
0
ςεντανα ιςιεω σψστεµ (760−091)
3
67
5
100
ςεντανα Υλτραςιεω Κιτ (760−500)
14
79
16
94
∆ακο ΡΕΑΛ ΗΡΠ/∆ΑΒ (Κ5001 )
Λειχα Βονδ Πολψµερ Ρεφινε (∆Σ9800)
Επιτηελιαλ
Μεµβρανε
Κι−67 / ΜΙΒ1
ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ
Ν
9
89
Ν
9
ΒιοΓενεξ Λιθυιδ ∆ΑΒ (ΗΚ153−5Κ)
1
100
0
0
ΒιοΓενεξ λιθυιδ ∆ΒΑ (ΗΚ−124−7Κ)
0
0
1
100
∆ακο ∆ΑΒ+ ΡΕΑΛ ∆ετεχτιον (Κ5001)
1
100
1
100
∆ακο Ενςισιον Πλυσ κιτσ
2
50
1
100
∆ακο ΦΛΕΞ ∆ΑΒ
8
88
6
83
Οτηερ
4
75
3
67
Σιγµα ∆ΑΒ (∆5637)
1
100
1
0
18
89
18
100
Χηροµογεν
ςΒΣ Βονδ Πολψµερ Ρεφινε κιτ (∆Σ9800)
%
ςεντανα ∆ΑΒ
0
0
1
100
ςεντανα ιϖιεω
3
67
5
100
16
81
17
94
ςεντανα Υλτραϖιεω ∆ΑΒ
Νευροπατηολογψ Ρυν: 96
Αυτοµατιον
Επιτηελιαλ
Μεµβρανε
Κι−67 / ΜΙΒ1
Ν
%
Ν
%
ΒιοΓενεξ ΓενοΜΞ 6000ι
1
100
1
100
∆ακο Αυτοσταινερ Λινκ 48
8
88
6
83
∆ακο Αυτοσταινερ πλυσ
0
0
1
0
∆ακο Αυτοσταινερ Πλυσ Λινκ
3
67
3
100
100
Λειχα Βονδ Μαξ
16
94
14
Λειχα Βονδ Ξ
1
100
1
100
Λειχα Βονδ−ΙΙΙ
7
86
7
100
Μεναρινι − Ιντελλιπατη ΦΛΞ
1
100
1
100
Νονε (Μανυαλ)
2
100
2
50
Οτηερ
3
67
3
100
ςεντανα Βενχηµαρκ
3
67
3
100
ςεντανα Βενχηµαρκ ΥΛΤΡΑ
6
100
6
100
12
67
15
87
ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 15:47 ον Τηυρσδαψ, 2 Φεβρυαρψ, 2012
%
89
59
Ρυν 96
ΝΕΥΡΟΠΑΤΗΟΛΟΓΨ Μοδυλε
ΒΕΣΤ ΜΕΤΗΟ∆Σ
Κι−67 / ΜΙΒ1 − Μετηοδ 1
Παρτιχιπαντ σχορεδ 19/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 17/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
∆ακο Μ7240 (ΜΙΒ1) , 15 Μινσ, ΡΤ ≡Χ
Αυτοµατιον:
Λειχα Βονδ−ΙΙΙ
Μετηοδ:
ςΒΣ ΒονδΜΑξ Ρεφινε ΚΙΤ
Μαιν Βυφφερ:
Βονδ Ωαση Βυφφερ (ΑΡ9590)
ΗΜΑΡ:
Λειχα Βονδ ΙΙΙ ΕΡ2, ΠΗ: 9
∆ιλυτιον 1: 200
ΕΑΡ:
Χηροµογεν:
ςΒΣ Βονδ Πολψµερ Ρεφινε κιτ (∆Σ9800), ΡΤ ≡Χ., Τιµε 1: 10 Μινσ
∆ετεχτιον:
Λειχα Βονδ Πολψµερ Ρεφινε (∆Σ9800) , 8 Μινσ, ΡΤ ≡Χ Πρεδιλυτεδ
Κι−67 / ΜΙΒ1 − Μετηοδ 2
Παρτιχιπαντ σχορεδ 20/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 17/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
Λειχα/Νοϖοχαστρα (ΜΜ1) ΝΧΛ−Κι67−ΧΕ , 15 Μινσ, 25 ≡Χ
Αυτοµατιον:
Λειχα Βονδ−ΙΙΙ
Μετηοδ:
ςΒΣ ΒονδΜΑξ Ρεφινε ΚΙΤ
Μαιν Βυφφερ:
Βονδ Ωαση Βυφφερ (ΑΡ9590)
ΗΜΑΡ:
Λειχα Βονδ ΙΙΙ ΕΡ2
∆ιλυτιον 1: 100
ΕΑΡ:
Χηροµογεν:
ςΒΣ Βονδ Πολψµερ Ρεφινε κιτ (∆Σ9800)
∆ετεχτιον:
Λειχα Βονδ Πολψµερ Ρεφινε (∆Σ9800) , 8 Μινσ, 25 ≡Χ
Κι−67 / ΜΙΒ1 − Μετηοδ 3
Παρτιχιπαντ σχορεδ 18/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 19/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
∆ακο Μ7240 (ΜΙΒ1) , 30 Μινσ, ΡΟΟΜ ≡Χ
Αυτοµατιον:
∆ακο Αυτοσταινερ Λινκ 48
∆ιλυτιον 1: 1/50
Μετηοδ:
∆ακο ΦΛΕΞ+ κιτ
Μαιν Βυφφερ:
∆ακο ΦΛΕΞ ωαση βυφφερ, ΠΗ: 7.6
ΗΜΑΡ:
∆ακο ΠΤΛινκ, Βυφφερ: ΦΛΕΞ ΤΡΣ ΗΙΓΗ, ΠΗ: 9
ΕΑΡ:
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
Χηροµογεν:
∆ακο Ενςισιον Πλυσ κιτσ, ΡΟΟΜ ≡Χ., Τιµε 1: 5 Μινσ, Τιµε 2: 5 Μινσ
∆ετεχτιον:
∆ακο Ενςισιον ΦΛΕΞ+ ( Κ8002/12) , 30 Μινσ, ΡΟΟΜ ≡Χ Πρεδιλυτεδ
Κι−67 / ΜΙΒ1 − Μετηοδ 4
Παρτιχιπαντ σχορεδ 19/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 17/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
ςεντανα ΡΤΥ (30−9) 790−4286 , 16 Μινσ, 36 ≡Χ Πρεδιλυτεδ
Αυτοµατιον:
ςεντανα Βενχηµαρκ ΥΛΤΡΑ
Μετηοδ:
ςεντανα Υλτραςιεω ∆ΑΒ
Μαιν Βυφφερ:
ςεντανα ρεαχτιον βυφφερ (950−300), ΠΗ: 7.4
ΗΜΑΡ:
ςεντανα Βενκ ΥΛΤΡΑ ΧΧ1 (Μιλδ), Βυφφερ: Υλτρα ΧΧ1 (Χατ:950−224), ΠΗ: 8
ΕΑΡ:
Χηροµογεν:
ςεντανα Υλτραϖιεω ∆ΑΒ, ΠΗ: 7, 37 ≡Χ., Τιµε 1: 8 Μινσ
∆ετεχτιον:
ςεντανα Υλτραςιεω Κιτ (760−500) , 16 Μινσ, 37 ≡Χ Πρεδιλυτεδ
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 15:47 ον Τηυρσδαψ, 2 Φεβρυαρψ, 2012
60
Ρυν 96
ΝΕΥΡΟΠΑΤΗΟΛΟΓΨ Μοδυλε
ΒΕΣΤ ΜΕΤΗΟ∆Σ
Επιτηελιαλ Μεµβρανε Αντιγεν (ΕΜΑ) − Μετηοδ 1
Παρτιχιπαντ σχορεδ 20/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 17/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
∆ακο (Ε29) Μ0613 , 15 Μινσ, 25 ≡Χ
Αυτοµατιον:
Λειχα Βονδ−ΙΙΙ
Μετηοδ:
ςΒΣ ΒονδΜΑξ Ρεφινε ΚΙΤ
Μαιν Βυφφερ:
Βονδ Ωαση Βυφφερ (ΑΡ9590)
ΗΜΑΡ:
Λειχα Βονδ ΙΙΙ ΕΡ2
∆ιλυτιον 1: 200
ΕΑΡ:
Χηροµογεν:
ςΒΣ Βονδ Πολψµερ Ρεφινε κιτ (∆Σ9800)
∆ετεχτιον:
Λειχα Βονδ Πολψµερ Ρεφινε (∆Σ9800) , 8 Μινσ
Επιτηελιαλ Μεµβρανε Αντιγεν (ΕΜΑ) − Μετηοδ 2
Παρτιχιπαντ σχορεδ 19/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 17/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
Λειχα/Νοϖοχαστρα ΡΤΥ (ΓΠ1.4) ΠΑ0035 , 15 Μινσ Πρεδιλυτεδ
Αυτοµατιον:
Λειχα Βονδ Μαξ
Μετηοδ:
ςΒΣ ΒονδΜΑξ Ρεφινε ΚΙΤ
Μαιν Βυφφερ:
Βονδ Ωαση Βυφφερ (ΑΡ9590)
ΗΜΑΡ:
Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ1
ΕΑΡ:
Χηροµογεν:
ςΒΣ Βονδ Πολψµερ Ρεφινε κιτ (∆Σ9800)
∆ετεχτιον:
Λειχα Βονδ Πολψµερ Ρεφινε (∆Σ9800)
Πρεδιλυτεδ
Επιτηελιαλ Μεµβρανε Αντιγεν (ΕΜΑ) − Μετηοδ 3
Παρτιχιπαντ σχορεδ 20/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 19/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
∆ακο (Ε29) Μ0613 , 15 Μινσ
Αυτοµατιον:
Λειχα Βονδ−ΙΙΙ
Μετηοδ:
ςΒΣ ΒονδΜΑξ Ρεφινε ΚΙΤ
Μαιν Βυφφερ:
Βονδ Ωαση Βυφφερ (ΑΡ9590)
ΗΜΑΡ:
Λειχα Βονδ ΙΙΙ ΕΡ1
∆ιλυτιον 1: 100
ΕΑΡ:
Χηροµογεν:
ςΒΣ Βονδ Πολψµερ Ρεφινε κιτ (∆Σ9800), Τιµε 1: 10 Μινσ
∆ετεχτιον:
Λειχα Βονδ Πολψµερ Ρεφινε (∆Σ9800)
Επιτηελιαλ Μεµβρανε Αντιγεν (ΕΜΑ) − Μετηοδ 4
Παρτιχιπαντ σχορεδ 18/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 17/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
Λειχα/Νοϖοχαστρα (ΓΠ1.4) ΝΧΛ−ΕΜΑ , 32 Μινσ, 36 ≡Χ
Αυτοµατιον:
ςεντανα Βενχηµαρκ ΥΛΤΡΑ
Μετηοδ:
ςεντανα Υλτραςιεω ∆ΑΒ
Μαιν Βυφφερ:
ςεντανα ρεαχτιον βυφφερ (950−300)
ΗΜΑΡ:
ςεντανα Βενκ ΥΛΤΡΑ ΧΧ1 (Σταν.), Βυφφερ: ΧΧ1
ΕΑΡ:
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
Χηροµογεν:
ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ
∆ετεχτιον:
ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ
∆ιλυτιον 1: 1:100
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 15:47 ον Τηυρσδαψ, 2 Φεβρυαρψ, 2012
61
The Cytology Module
Run 96
Anthony Watson and Irena Kirbis
Gold Standard
Second Antibody
Antigens Assessed:
Melanoma
Calretinin
Tissue Sections circulated:
Human melanoma cell line (SKEffusion containing mesothelial,
MEL28) & human breast carcinoma lymphocytes and histocytes
cell line (MCF-7)
Number of Registered Participants:
77
Summary Graphs - Pass Rate Tables
Best Method - Selected Images
© UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent
62
„…Τ†‡†ˆ…
ΡΥΝ 96
Μοδυλε
Σελεχτεδ Ιµαγεσ σηοωινγ Οπτιµαλ ανδ Συβ−οπτιµαλ Ιµµυνοσταινινγ
Φιγ1.¦‹“‘Ž ¡š‘Œ”‹Ÿ‹“Œ” Œ™ §šŽ” Α ον τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ χψτοσπιν. (Α,Β) σηοω στρονγ
Φιγ2.Οπτιµαλ δεµονστρατιον οφ ΗΜΒ45 ον τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ χψτοσπιν. (Α,Β) σηοω στρονγ
‰Š‹ŒŽ‘“‰ ‹“”“”• “” Œ¢šŸ ¨—˜ Œ™ ‘šŽ”Œ‘ ‰šŽŽ ›“‹œ  ‰Žš” ‰ž•ŸŒ ”¡ ”¡ •ŒŒ¡ Žš¢šŽ Œ™
‰Š‹ŒŽ‘“‰ ‹“”“”• “” –—˜ Œ™ ‘šŽ”Œ‘ ‰šŽŽ ›“‹œ  ‰Žš” ‰ž•ŸŒ ”¡ ”¡ •ŒŒ¡ Žš¢šŽ Œ™
νυχλεαρ χουντερ−σταιν. Σταινεδ ωιτη ∆ακο Α103 αντιβοδψ, 1:50, υσινγ τηε ∆ακο ΠΤ Λινκ,
νυχλεαρ χουντερ−σταιν. Σεχτιον σταινεδ ωιτη ∆ακο ΗΜΒ45 αντιβοδψ, 1:500, νο πρε−τρεατµεντ ον
τηε £š”‹” ¤š”‰œ‘Ÿž ¥Τ ωιτη τηε ι£ιεω δετεχτιον κιτ.
 ‹Œ‹“”šŸ ”¡ ©ª«¥ ž“‹¬
Φιγ3.Συβ−οπτιµαλ δεµονστρατιον οφ Μελαν Α ον τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ χψτοσπιν. (Χοµπαρε το Φιγ 1)
(Α,Β) Αλλ χελλσ εξπεχτεδ το σταιν αρε δεµονστρατεδ βυτ τηε σταινινγ ισ ωεακ. Τηε χουντερσταιν ισ
ŽŒ š­‰š“¢š¬ ®š‰‹“Œ” ‹“”š¡ “”• ‹œš ‘š ”‹“Œ¡Š ”¡ ‹š‰œ”“¯ š  ‹œš ª œŒ›” “”
Φιγ4.Συβ−οπτιµαλ δεµονστρατιον οφ Σ−100 ον τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ χψτοσπιν. Τηε εξαµπλε σηοωσ
νον−σπεχιφιχ εξχεσσιϖε βαχκγρουνδ σταινινγ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη ∆ακο πολψχλοναλ αντιβοδψ,
1:400, νο πρε−τρεατµεντ ον τηε £š”‹” ¤š”‰œ‘Ÿž ¥Τ ωιτη τηε ι£ιεω δετεχτιον κιτ.
Φιγ1, ηοωεϖερ, τηε διλυτιον υσεδ ωασ τοο ηιγη ατ 1:100.
Φιγ5.°ŒŒ¡ š­‘Žš Œ™ ” ±“” œŒ š² χοντρολ φορ ΗΜΒ45 (µαλιγναντ µελανοµα σµεαρ), σηοωινγ
στρονγ χψτοπλασµιχ σταινινγ οφ τηε τυµουρ χελλσ ωιτη α χλεαν βαχκγρουνδ ανδ γοοδ λεϖελ οφ
” ‰ŽšŸ ‰Œ ”‹šŸ³‹“”¬ ®š‰‹“Œ” ‹“”š¡ ›“‹œ ´šŽŽ§Ÿ¯ š µ§¤¶·¸ ¹º·—¸ ”Œ Ÿš³‹Ÿš‹‘š”‹¸
ϖισυαλισεδ υσινγ τηε ∆ακο Ενϖισιον δετεχτιον κιτ.
©“•»¬¦‹“‘Ž ¡š‘Œ”‹Ÿ‹“Œ” Œ™ ´ŽŸš‹š”“” Œ” ‹œš ¼½ ¾«¿À® ‰Š‹Œ“”¬ Áœš š­‘Žš œŒ›
στρονγ χψτοπλασµιχ σταινινγ ιν τηε τυµουρ χελλσ ωιτη α χλεαν βαχκγρουνδ ανδ γοοδ λεϖελ οφ
νυχλεαρ χουντερσταιν. Σεχτιον σταινεδ ωιτη ∆ακο ∆ΑΚ−Χαλρετ 1 αντιβοδψ, 1:50, νο πρε−τρεατµεντ
υσινγ τηε £š”‹” ¤š”‰œ‘Ÿž ¥Τ ανδ Υλτραϖιεω δετεχτιον κιτ.
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
ÂÃÄÅÆÇÈ ÉÆ ÊËÌÍÎ ον Τηυρσδαψ, 2 Φεβρυαρψ, 2012
63
ÏÐΤÑÒÑÓÐ
ΡΥΝ 96
Μοδυλε
Σελεχτεδ Ιµαγεσ σηοωινγ Οπτιµαλ ανδ Συβ−οπτιµαλ Ιµµυνοσταινινγ
Φιγ7.Οπτιµαλ δεµονστρατιον οφ Χαλρετενιν ον τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ χψτοσπιν, σηοωινγ στρονγ
χψτοπλασµιχ σταινινγ ιν τηε τυµουρ χελλσ ανδ ρεαχτιϖε µεσοτηελιαλ χελλσ ωιτη α χλεαν βαχκγρουνδ
ανδ γοοδ λεϖελ οφ νυχλεαρ χουντερσταιν. Σεχτιον σταινεδ ωιτη ∆ακο ∆ΑΚ−Χαλρετ 1 αντιβοδψ, 1:50,
νο πρε−τρεατµεντ υσινγ τηε ∆ακο αυτοσταινερ ανδ ΦΛΕΞ κιτ.
î×ÙïãðááÚ ÝñÖéòÜÝ áó ÖØ ô×Ø æáâÔÝõ χοντρολ φορ Χαλρετενιν. Τηε πλευραλ εφφυσιον σηοωσ σπεχιφιχ
χψτοπλασµιχ σταινινγ, α γοοδ λεϖελ οφ νυχλεαρ χουντερσταιν ανδ α χλεαν βαχκγρουνδ. Σεχτιον
σταινεδ ωιτη τηε Νοϖοχαστρα 5Α5 αντιβοδψ, νο πρε−τρεατµεντ ανδ υσινγ τηε öεχτορ Ελιτε ΑΒΧ
δετεχτιον κιτ.
Φιγ8.Συβ−οπτιµαλ δεµονστρατιον οφ Χαλρετενιν ον τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ χψτοσπιν. Τηε εξαµπλε σηοωσ
ωεακ ανδ διφφυσε σταινινγ οφ τηε τυµουρ χελλσ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε Χελλ Μαρθυε πολψ
αντιβοδψ, ον τηε ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ ΧΧ1 8 µινσ ανδ Υλτραϖιεω δετεχτιον κιτ.
Φιγ10.Γοοδ εξαµπλε οφ αν ‘ιν ηουσε’ χοντρολ φορ Χαλρετενιν (Α,Β), σηοωινγ στρονγ χψτοπλασµιχ
ÔÕÖ×Ø×ØÙ ÖØÚ Ö ÛÜÝÖØ ÞÖÛßÙàáâØÚã äÝÛÕ×áØ ÔÕÖ×ØÝÚ å×Õæ ÕæÝ çèéÝÚ ÖØÕ×ÞáÚèê ëìëííê Øá
πρε−τρεατµεντ ανδ υσινγ τηε Λειχα ΒονδΜαξ ανδ Ρεφινε δετεχτιον κιτ.
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
÷øùúûüý þû ÿP
ον Τηυρσδαψ, 2 Φεβρυαρψ, 2012
64
ΧΨΤΟΛΟΓΨ Μοδυλε
Ρυν 96
ΡΥΝ 96Ρ Σ100/ ΗΜΒ45 / Μελαν−Α ον ΝΕΘΑΣ Σεχτιονσ
16
ΡΥΝ 96Σ Σ100/ ΗΜΒ45 / Μελαν−Α ον ιν−ηουσε Σεχτιονσ
Ινδιϖιδυαλ
Σχορεσ
32
4 = 0 (0%)
5 = 0 (0%)
14
7 = 1 (1%)
12
4 = 0 (0%)
5 = 0 (0%)
28
6 = 0 (0%)
6 = 0 (0%)
7 = 0 (0%)
24
9 = 4 (5%)
10 = 2 (3%)
11 = 3 (4%)
8
12 = 8 (11%)
13 = 3 (4%)
6
8 = 1 (1%)
νο. οφ ρετυρνσ
νο. οφ ρετυρνσ
8 = 0 (0%)
10
9 = 0 (0%)
20
10 = 0 (0%)
11 = 0 (0%)
16
12 = 0 (0%)
13 = 5 (7%)
12
14 = 3 (4%)
14 = 6 (8%)
15 = 4 (5%)
4
15 = 9 (12%)
8
16 = 13 (17%)
16 = 29 (40%)
17 = 15 (20%)
2
17 = 14 (19%)
4
18 = 7 (9%)
0
4
5
6
7
8
9
10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
18 = 4 (5%)
0
19 = 8 (11%)
20 = 5 (7%)
4
5
6
7
8
9
Σχορεσ
10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
Συµµαρψ
16 − 20 = 48 (63%)
16 − 20 = 52 (71%)
13 − 15 = 10 (13%)
13 − 15 = 20 (27%)
10 − 12 = 13 (17%)
10 − 12 = 0 (0%)
0 − 9 = 5 (7%)
0 − 9 = 1 (1%)
Μεδιαν = 14.00
Μεδιαν = 15.50
20
24
5 = 0 (0%)
6 = 0 (0%)
6 = 1 (1%)
20
7 = 0 (0%)
7 = 0 (0%)
10 = 1 (1%)
11 = 0 (0%)
12 = 3 (4%)
13 = 5 (7%)
8
14 = 2 (3%)
8 = 3 (4%)
νο. οφ ρετυρνσ
νο. οφ ρετυρνσ
8 = 0 (0%)
9 = 0 (0%)
9 = 2 (3%)
16
10 = 1 (1%)
11 = 2 (3%)
12
12 = 1 (1%)
13 = 1 (1%)
14 = 4 (5%)
8
15 = 9 (12%)
15 = 8 (11%)
16 = 13 (17%)
4
17 = 12 (16%)
16 = 23 (31%)
4
17 = 18 (24%)
18 = 18 (24%)
0
19 = 8 (11%)
4
5
6
7
8
9
10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
Σχορεσ
20 = 3 (4%)
Ινδιϖιδυαλ
Σχορεσ
4 = 0 (0%)
5 = 0 (0%)
12
20 = 0 (0%)
ΡΥΝ 96Υ Χαλρετινιν ον ιν−ηουσε Σεχτιονσ
Ινδιϖιδυαλ
Σχορεσ
4 = 1 (1%)
16
19 = 5 (7%)
Σχορεσ
Συµµαρψ
ΡΥΝ 96Τ Χαλρετινιν ον ΝΕΘΑΣ Σεχτιονσ
Ινδιϖιδυαλ
Σχορεσ
18 = 5 (7%)
0
19 = 3 (4%)
4
5
6
7
8
9
10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
20 = 2 (3%)
Σχορεσ
Συµµαρψ
Συµµαρψ
16 − 20 = 54 (72%)
16 − 20 = 51 (69%)
13 − 15 = 16 (21%)
13 − 15 = 13 (18%)
10 − 12 = 4 (5%)
10 − 12 = 4 (5%)
0 − 9 = 1 (1%)
0 − 9 = 6 (8%)
Μεδιαν = 15.00
Μεδιαν = 13.50
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 14:30 ον Τηυρσδαψ, 2 Φεβρυαρψ, 2012
65
Ρυν 96
ΧΨΤΟΛΟΓΨ Μοδυλε
ΑΝΤΙΒΟ∆ΙΕΣ ΑΝ∆ ΟΤΗΕΡ ΤΕΧΗΝΙΧΑΛ ΠΑΡΑΜΕΤΕΡΣ ΕΜΠΛΟΨΕ∆ ΒΨ
ΠΑΡΤΙΧΙΠΑΝΤΣ ΙΝ ΤΗΕ ΧΨΤΟΛΟΓΨ ΜΟ∆ΥΛΕ
Τηε φολλοωινγ ταβλεσ ρεχορδ τηε νυµβερ οφ παρτιχιπαντσ (Ν) υσινγ εαχη πριµαρψ αντιβοδψ. Τηε περχενταγε (%) ρεφερσ
το τηε προπορτιον οφ τηεσε παρτιχιπαντσ αχηιεϖινγ αχχεπταβλε σταινινγ (α σχορε >12/20) ον ΥΚ ΝΕΘΑΣ σεχτιονσ.
Χψτολογψ Ρυν: 96
Χψτολογψ Ρυν: 96
Πριµαρψ Αντιβοδψ : Σ100/ ΗΜΒ45 / Μελαν−Α
Πριµαρψ Αντιβοδψ : Χαλρετινιν
Αντιβοδψ ∆εταιλσ
Ν
Βιογενεξ Μελαν Α (ΜΑΡΤ−1) (Α103) ΑΜ361/ΜΥ361
1
Χελλ Μαρθυε ΧΜΑ710 (ΗΜΒ45)
1
∆ακο ΦΛΕΞ ΡΤΥ Μελαν Α (Α103) ΙΡ633
%
Αντιβοδψ ∆εταιλσ
Ν
%
100
Χελλ Μαρθυε − ΧΜΧ759 χαλρετινιν
1
0
100
Χελλ Μαρθυε 232Α−78
2
100
4
50
∆ακο ΙΡ627
∆ακο Μ0634 (ΗΜΒ45)
18
83
∆ακο Μ7245 Χαλρετινιν
∆ακο Μ7196 (Α103 Μελαν Α)
2
100
17
100
21
86
Ινϖιτρογεν 18−0211
1
100
∆ακο Ζ0311 (Σ100)
9
56
Λαβϖισιον − ΡΜ−9113 χαλρετινιν
1
100
Νοϖοχαστρα/Λειχα ΝΧΛ−ΗΜΒ45 (ΗΜΒ45)
2
100
Νοϖοχαστρα/Λειχα ΝΧΛ−ΜΕΛΑΝ Α (Μελαν Α)
9
78
Νοϖοχαστρα/Λειχα ΝΧΛ−ΡΤΥ−ΜελανΑ(Α103) ΠΑ0233
2
100
Νοϖοχαστρα/Λειχα ΝΧΛ−Σ100π (Σ100)
2
50
Οτηερ
2
100
ςεντανα ΗΜΒ45 790−2523
2
50
ςεντανα Μελαν Α (ΜΑΡΤ−1) 790−2990
2
0
ςεντανα Σ100 (4Χ4.9) 790−2914
1
100
Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−ΧΑΛΡΕΤ (5Α5)
15
93
Νοϖοχαστρα/Λειχα ΝΧΛ−Λ−ΧΑΛΡΕΤ−566
1
100
Νοϖοχαστρα/Λειχα ΡΤΥ−Χαλρετινιν (5Α5)
4
75
Οτηερ
1
100
ςεχτορ ςΠ−Χ306 χαλρετινιν
4
100
ςεντανα 250 2700 Χαλρετινιν
4
75
ςεντανα 790−4467
6
100
16
94
Ζψµεδ 18 0211 Χαλρετινιν
Χψτολογψ Ρυν: 96
Χψτολογψ Ρυν: 96
Πριµαρψ Αντιβοδψ : Σ100/ ΗΜΒ45 / Μελαν−Α
Πριµαρψ Αντιβοδψ : Χαλρετινιν
Αντιγεν Ρετριεϖαλ
Ν
%
Αντιγεν Ρετριεϖαλ
Ν
%
ΨΕΣ
12
16
ΨΕΣ
15
20
ΝΟ
64
84
ΝΟ
61
80
Βρεακδοων οφ παρτιχιπαντσ ρεπορτινγ ΨΕΣ
Ν
Βρεακδοων οφ παρτιχιπαντσ ρεπορτινγ ΨΕΣ
Ν
Ηεατ Μεδιατεδ
0
Ηεατ Μεδιατεδ
0
Ενζψµε
0
Ενζψµε
12
Βοτη
Νοτ Σπεχιφιεδ
0
Βοτη
Νοτ Σπεχιφιεδ
Χψτολογψ Ρυν: 96
Χψτολογψ Ρυν: 96
Ηεατ Μεδιατεδ Ρετριεϖαλ
Ηεατ Μεδιατεδ Ρετριεϖαλ
Χψτολογψ Ρυν: 96
Χψτολογψ Ρυν: 96
Ενζψµε Μεδιατεδ Ρετριεϖαλ
Ενζψµε Μεδιατεδ Ρετριεϖαλ
0
15
0
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 14:30 ον Τηυρσδαψ, 2 Φεβρυαρψ, 2012
66
Ρυν 96
Χψτολογψ Ρυν: 96
Χψτολογψ Ρυν: 96
Χαλρετινιν
∆ετεχτιον
Σ100/ ΗΜΒ45 /
Μελαν−Α
Ν
%
ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ
3
100
2
50
ΒιοΓενεξ ΗΡΠ (ΗΚ 519−06Κ)
0
0
1
100
ΒιοΓενεξ ΣΣ Πολψµερ (Θ∆ 430−ΞΑΚΕ)
2
100
1
100
∆ακο Ενςισιον ΦΛΕΞ ( Κ8000/10)
3
100
3
100
10
100
8
75
∆ακο Ενςισιον ΦΛΕΞ+ ( Κ8002/12)
Ν
%
∆ακο Ενϖισιον ΗΡΠ/∆ΑΒ ( Κ5007)
3
67
2
50
∆ακο Ενϖισιον+ ΗΡΠ µουσε Κ4004/5/6/7
2
100
3
67
∆ακο ΡΕΑΛ ( Κ5005)
0
0
1
100
Λαβςισιον Υλτραςισιον ΛΠ ΗΡΠ (ΤΣ 125 Η∆)
1
0
1
0
20
95
21
95
0
0
1
100
4
100
3
33
Ποωερ ςισιον ∆ΠςΒ999 ΗΡΠ
1
100
1
100
ςεχτορ Ελιτε ΑΒΧ (ΠΚ−6102)
1
100
1
100
1
100
1
100
8
100
9
56
14
86
15
67
Λειχα Βονδ Πολψµερ Ρεφινε (∆Σ9800)
Νονε
Οτηερ
ςεχτορ Ελιτε Υνιϖερσαλ ΑΒΧ (ΠΚ−6200)
ςεντανα ιςιεω σψστεµ (760−091)
ςεντανα Υλτραςιεω Κιτ (760−500)
ΧΨΤΟΛΟΓΨ Μοδυλε
Χαλρετινιν
Χηροµογεν
Σ100/ ΗΜΒ45 /
Μελαν−Α
Ν
0
%
Α. Μεναρινι Λιθυιδ Σταβλε ∆ΑΒ κιτ
0
Ν
1
ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ
6
100
8
88
ΒιοΓενεξ ∆ΑΒ (Θ∆430)
1
100
1
100
ΒιοΓενεξ Λιθυιδ ∆ΑΒ (ΗΚ153−5Κ)
1
100
0
0
∆ακο ∆ΑΒ Λιθυιδ (Κ3465)
1
100
0
0
∆ακο ∆ΑΒ+ Λιθυιδ (Κ3468)
1
100
2
50
∆ακο ∆ΑΒ+ ΡΕΑΛ ∆ετεχτιον (Κ5001)
1
100
1
0
∆ακο Ενςισιον Πλυσ κιτσ
1
100
1
100
∆ακο ΦΛΕΞ ∆ΑΒ
11
100
10
80
∆ακο ΡΕΑΛ Ενςισιον Κ5007 ∆ΑΒ
1
100
1
100
∆ακο ΡΕΑΛ Κ5005 Αλκαλινε πηοσπηατασε 1
1
0
1
100
Οτηερ
4
100
3
33
Σιγµα ∆ΑΒ (∆4168)
1
100
1
100
Σιγµα ∆ΑΒ (∆4293)
1
100
1
100
Σιγµα ∆ΑΒ (∆5637)
2
50
2
50
20
95
19
95
ςεντανα ∆ΑΒ
3
100
2
0
ςεντανα Ενηανχεδ Αλκ. Πηοσ. Ρεδ ∆ετεχτιον Κιτ
1
100
1
100
5
100
7
71
14
79
14
64
ςΒΣ Βονδ Πολψµερ Ρεφινε κιτ (∆Σ9800)
ςεντανα ιϖιεω
ςεντανα Υλτραϖιεω ∆ΑΒ
Χψτολογψ Ρυν: 96
Χαλρετινιν
Αυτοµατιον
Σ100/ ΗΜΒ45 /
Μελαν−Α
Ν
%
Ν
%
ΒιοΓενεξ ΓενοΜΞ 6000ι
1
100
1
100
ΒιοΓενεξ Οπτιµαξ
1
100
1
100
∆ακο Αυτοσταινερ
2
50
1
100
∆ακο Αυτοσταινερ Λινκ 48
8
100
9
78
∆ακο Αυτοσταινερ πλυσ
4
100
4
50
∆ακο Αυτοσταινερ Πλυσ Λινκ
2
100
2
100
Λαβςισιον Αυτοσταινερ
Λειχα Βονδ Μαξ
1
0
1
0
16
100
18
94
Λειχα Βονδ−ΙΙΙ
8
88
7
86
Νονε (Μανυαλ)
6
100
6
83
ςεντανα Βενχηµαρκ
5
100
5
80
ςεντανα Βενχηµαρκ ΥΛΤΡΑ
4
100
3
33
17
82
17
65
1
100
1
0
ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ
ςεντανα ΝεξΕΣ
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 14:30 ον Τηυρσδαψ, 2 Φεβρυαρψ, 2012
%
100
67
Ρυν 96
ΧΨΤΟΛΟΓΨ Μοδυλε
ΒΕΣΤ ΜΕΤΗΟ∆Σ
Σ100/ ΗΜΒ45 / Μελαν−Α − Μετηοδ 1
Παρτιχιπαντ σχορεδ 20/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 17/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
∆ακο Μ7196 (Α103 Μελαν Α) , 40 Μινσ
Αυτοµατιον:
∆ακο Αυτοσταινερ Λινκ 48
Μετηοδ:
∆ακο ΦΛΕΞ+ κιτ
Μαιν Βυφφερ:
∆ακο ΦΛΕΞ ωαση βυφφερ
ΗΜΑΡ:
∆ακο ΠΤΛινκ, ΠΗ: 9
∆ιλυτιον 1: 1:50
ΕΑΡ:
Χηροµογεν:
∆ακο ΦΛΕΞ ∆ΑΒ, 21 ≡Χ., Τιµε 1: 5 Μινσ, Τιµε 2: 5 Μινσ
∆ετεχτιον:
∆ακο Ενϖισιον+ ΗΡΠ µουσε Κ4004/5/6/7 , 20 Μινσ, 21 ≡Χ Πρεδιλυτεδ
Σ100/ ΗΜΒ45 / Μελαν−Α − Μετηοδ 1
Παρτιχιπαντ σχορεδ 20/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 16/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
∆ακο Μ7196 (Α103 Μελαν Α) , 30 Μινσ, 23 ≡Χ
Αυτοµατιον:
Νονε (Μανυαλ)
∆ιλυτιον 1: 1:100
Μετηοδ:
∆ακο ΦΛΕΞ+ κιτ
Μαιν Βυφφερ:
ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ
ΗΜΑΡ:
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
ΕΑΡ:
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
Χηροµογεν:
ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ, 23 ≡Χ., Τιµε 1: 10 Μινσ, Τιµε 2: 10 Μινσ
∆ετεχτιον:
∆ακο Ενςισιον ΦΛΕΞ+ ( Κ8002/12) , 30 Μινσ, 23 ≡Χ Πρεδιλυτεδ
Σ100/ ΗΜΒ45 / Μελαν−Α − Μετηοδ 1
Παρτιχιπαντ σχορεδ 19/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 19/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
∆ακο Μ0634 (ΗΜΒ45) , Ρτ. ≡Χ
Αυτοµατιον:
Λειχα Βονδ−ΙΙΙ
Μετηοδ:
ςΒΣ ΒονδΜΑξ Ρεφινε ΚΙΤ
Μαιν Βυφφερ:
Βονδ Ωαση Βυφφερ (ΑΡ9590)
ΗΜΑΡ:
Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ1
∆ιλυτιον 1: 100
ΕΑΡ:
Χηροµογεν:
ςΒΣ Βονδ Πολψµερ Ρεφινε κιτ (∆Σ9800)
∆ετεχτιον:
Σ100/ ΗΜΒ45 / Μελαν−Α − Μετηοδ 1
Παρτιχιπαντ σχορεδ 20/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 18/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
∆ακο Μ0634 (ΗΜΒ45) , 32 Μινσ, 37 ≡Χ Πρεδιλυτεδ ∆ιλυτιον 1: 500
Αυτοµατιον:
ςεντανα Βενχηµαρκ
Μετηοδ:
ςεντανα ιςιεω Κιτ
Μαιν Βυφφερ:
ςεντανα ρεαχτιον βυφφερ (950−300)
ΗΜΑΡ:
ΕΑΡ:
Χηροµογεν:
ςεντανα ιϖιεω
∆ετεχτιον:
ςεντανα ιςιεω σψστεµ (760−091)
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 14:30 ον Τηυρσδαψ, 2 Φεβρυαρψ, 2012
68
Ρυν 96
ΧΨΤΟΛΟΓΨ Μοδυλε
ΒΕΣΤ ΜΕΤΗΟ∆Σ
Χαλρετινιν − Μετηοδ 1
Παρτιχιπαντ σχορεδ 20/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 17/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
∆ακο Μ7245 Χαλρετινιν , 32 Μινσ, 37 ≡Χ
Αυτοµατιον:
ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ
Μετηοδ:
ςεντανα Υλτραςιεω ∆ΑΒ
Μαιν Βυφφερ:
ςεντανα ρεαχτιον βυφφερ (950−300)
ΗΜΑΡ:
ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Μιλδ)
ΕΑΡ:
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
Χηροµογεν:
ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ
∆ετεχτιον:
ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ
∆ιλυτιον 1: 50
Χαλρετινιν − Μετηοδ 1
Παρτιχιπαντ σχορεδ 19/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 17/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−ΧΑΛΡΕΤ (5Α5) , 15 Μινσ, 25 ≡Χ
Αυτοµατιον:
Λειχα Βονδ−ΙΙΙ
Μετηοδ:
ςΒΣ ΒονδΜΑξ Ρεφινε ΚΙΤ
Μαιν Βυφφερ:
Βονδ Ωαση Βυφφερ (ΑΡ9590)
ΗΜΑΡ:
Λειχα Βονδ ΙΙΙ ΕΡ1
∆ιλυτιον 1: 25
ΕΑΡ:
Χηροµογεν:
ςΒΣ Βονδ Πολψµερ Ρεφινε κιτ (∆Σ9800)
∆ετεχτιον:
Λειχα Βονδ Πολψµερ Ρεφινε (∆Σ9800) , 8 Μινσ, 25 ≡Χ
Χαλρετινιν − Μετηοδ 1
Παρτιχιπαντ σχορεδ 19/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 20/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
ςεντανα 250 2700 Χαλρετινιν , 20 Μινσ, 37 ≡Χ Πρεδιλυτεδ
Αυτοµατιον:
ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ
Μετηοδ:
ςεντανα ιςιεω Κιτ
Μαιν Βυφφερ:
ςεντανα ρεαχτιον βυφφερ (950−300)
ΗΜΑΡ:
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
ΕΑΡ:
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
Χηροµογεν:
ςεντανα ∆ΑΒ
∆ετεχτιον:
ςεντανα ιςιεω σψστεµ (760−091)
Χαλρετινιν − Μετηοδ 1
Παρτιχιπαντ σχορεδ 20/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 16/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
∆ακο Μ7245 Χαλρετινιν , 30 Μινσ, 23 ≡Χ
Αυτοµατιον:
Νονε (Μανυαλ)
∆ιλυτιον 1: 1:400
Μετηοδ:
∆ακο ΦΛΕΞ+ κιτ
Μαιν Βυφφερ:
ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ
ΗΜΑΡ:
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
ΕΑΡ:
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
Χηροµογεν:
∆ακο Ενςισιον Πλυσ κιτσ, 23 ≡Χ., Τιµε 1: 10 Μινσ, Τιµε 2: 10 Μινσ
∆ετεχτιον:
∆ακο Ενςισιον ΦΛΕΞ+ ( Κ8002/12) , 30 Μινσ, 23 ≡Χ Πρεδιλυτεδ
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 14:30 ον Τηυρσδαψ, 2 Φεβρυαρψ, 2012
69
The Alimentary Tract Module: CD117 & DOG1
Run 96
Merdol Ibrahim and Suzanne Parry
Gold Standard
Second Antibody
(optional)
Antigens Assessed:
CD117
DOG1
Tissue Sections circulated:
GIST + Tonsil + Desmoid
GIST + Tonsil + Desmoid
Number of Registered Participants:
222
Gold Standard - CD117
CD117 (c-kit) is a transmembrane tyrosine kinase growth
factor receptor involved in cell differentiation and is expressed
by melanocytes, mast cells and interstitial cells of cajal. CD117
is also expressed in gastrointestinal stromal tumors (GIST).
Until recently, patients with GIST faced a limited choice of
treatment regimes, which included radiotherapy and surgery,
with limited success. However, Glivec (imatinib), which was
originally developed for chronic myeloid leukaemia (CML), has
proved effective in the targeted treatment of GISTs, by directly
inhibiting the action of CD117.
Tissue Distribution
Circulated tissue comprised of GIST, appendix and a desmoid
tumour, which participants requested to stain the samples
using their normal protocol, whether with or without heat
mediated antigen retrieval.
Features of optimal immunostaining (see Fig2 1, 3-6)
 Good localisation of CD117 to cells of the GIST
 Good localisation of CD117 to mast cells
 Good localisation of CD117 to interstitial cells of Cajal
 No staining of desmoid tumour
Features of sub-optimal immunostaining (see Figs 2A & B)
 Weak and Patchy Staining of the tumour cells of the GIST
Little or no staining of the Mast Cells
 Excessive background / non specific staining
Second Antibody - DOG1
Features of sub-optimal immunostaining (see Figs 8B & 11)
 Weak and Patchy Staining of the tumour cells of the GIST
Note: Mast cells are not stained with DOG-1
References
1. Cordless et al., Biology of Gastrointestinal Stromal Tumours. J Clin
Oncol 2004, 22(18): 3813-3825.
2. Blay et al., Consensus meeting for the management of
gastrointestinal stromal tumors. Report of the GIST Consensus
Conference of 20-21 March 2004, under the auspices of ESMO.
Ann Oncol 2005 6: 566-578.
3. Parfitt JR, Rodriguez-Justo M, Feakins R, Novelli MR (2008)
Gastrointestinal Kaposi's sarcoma: CD117 expression and the
potential for misdiagnosis as gastrointestinal stromal tumour.
Histopathology 2008, 52: 816-23.
4. West RB, Corless CL, Chen X et al. The novel marker, DOG1, is
expressed ubiquitously in gastrointestinal stromal tumors
irrespective of KIT or PDGFRA mutation status. Am. J. Pathol.
2004; 65; 107–113.
5. Espinosa I, Lee CH, Kim MK et al. A novel monoclonal antibody
against DOG1 is a sensitive and specific marker for gastrointestinal
stromal tumors. Am. J. Surg. Pathol. 2008; 32; 210– 218.
6. Novelli M, Rossi S, Rodriguez-Justo M, Taniere P, Seddon B,
Toffolatti L, Sartor C, Hogendoorn PC, Sciot R, Van Glabbeke M,
Verweij J, Blay JY, Hohenberger P, Flanagan A, Dei Tos AP. DOG1
and CD117 are the antibodies of choice in the diagnosis of
gastrointestinal stromal tumours. Histopathology 2010, 57(2):259270.
7. Parfitt JR, Rodriguez-Justo M, Feakins R, Novelli MR.
Gastrointestinal Kaposi’s sarcoma: CD117 expression and the
potential for misdiagnosis as gastrointestinal stromal tumour.
Histopathology 2008; 52; 816–823.
“Discovered on GIST 1” (DOG1) antibody was initially
described in 20044 and has now started to be recognized as a
more specific marker of GISTs than CD117 4,5,6 . A recent study
has shown DOG1 sensitivity of 99% and found to be strong
and easier to interpret than CD1176 . The groups also showed
that seven CD117 negative GIST cases were found to be
DOG1 positive, and six of the tumours had PDGFRA
mutations. Furthermore, DOG1 is not expressed in Kaposi
sarcomas of the GI tract which have been shown to stain for
CD1177.
In more cases, combined CD117 and DOG1
immunohistochemistry has been suggested as a sufficient
panel to confirm diagnosis, with CD117 and DOG1 negative
cases tested further with a panel of antibodies including SMA,
desmin, S100 and molecular analysis, should be considered6 .
Tissue Distribution
Circulated tissue were from sequential sections used for the
CD117 distribution as show above and comprised of GIST,
appendix and a desmoid tumour.
Features of optimal immunostaining (see Figs 7,8A,9,10 & 12)
 Good localisation of DOG1 to cells of the GIST
 Good localisation of DOG1 to interstitial cells of Cajal
 No staining of desmoid tumour
© UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent
70
ΡΥΝ 96
ΑΛΙΜΕΝΤΑΡΨ ΤΡΑΧΤ ΠΑTY Μοδυλε
Σελεχτεδ Ιµαγεσ σηοωινγ Οπτιµαλ ανδ Συβ−οπτιµαλ Ιµµυνοσταινινγ
Φιγ1.Οπτιµαλ δεµονστρατιον οφ Χ∆117 ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ διστριβυτεδ ΓΙΣΤ σεχτιον, σηοωινγ
ιντενσε ωελλ λοχαλισεδ πρεδοµιναντλψ µεµβρανουσ ανδ χψτοπλασµιχ σταινινγ. Σταινεδ ωιτη ∆ακο
Α4502 πολψ αντιβοδψ, 1:120, πρε−τρεατεδ ιν τηε πρεσσυρε χοοκερ ανδ ϖισυαλισεδ υσινγ τηε
Ενϖισιον δετεχτιον κιτ.
Φιγ2.Τωο εξαµπλεσ οφ ποορλψ δεµονστρατεδ Χ∆117 ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΓΙΣΤ σεχτιον (Χοµπαρε
το Φιγ1). (Α) σηοωσ ϖερψ ωεακ σταινινγ, ανδ (Β) σηοωσ ωεακ, διφφυσε σταινινγ . (Α) σταινεδ ωιτη
∆ακο Α4502 πολψ αντιβοδψ, 1:120, υσινγ τηε Λαβϖισιον ΠΤ µοδυλε ανδ ∆ακο ΦΛΕΞ κιτ. (Β)
σταινεδ ωιτη Νοϖοχαστρα Τ595 αντιβοδψ, 1:10, ον τηε Λειχα Βονδ ΙΙΙ, ΕΡ1 ανδ Ρεφινε κιτ.
Φιγ3.Γοοδ δεµονστρατιον οφ µαστ χελλσ ωιτη Χ∆117 ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ διστριβυτεδ αππενδιξ
σεχτιον αφτερ ηεατ ρετριεϖαλ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη ∆ακο Α4502 πολψ αντιβοδψ, 1:400, υσινγ τηε
∆ακο ΠΤ Λινκ ανδ ΦΛΕΞ κιτ.
F
!"# $
Φιγ5.Εξπεχτεδ δεµονστρατιον οφ Χ∆11% ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ διστριβυτεδ δεσµοιδ σεχτιον. Τηε
µαστ χελλσ σηοω στρονγ µεµβρανουσ σταινινγ, ωηιλε τηε δεσµοιδ τυµουρ ισ νεγατιϖε. Σεχτιον
σταινεδ ωιτη ∆ακο Α4502 πολψ αντιβοδψ, 1:400, ον τηε Λειχα Βονδ Μαξ, ΕΡ2 ανδ Ρεφινε κιτ.
Φιγ6. E E & ’ χοντρολ σεχτιον, σηοωινγ γοοδ δεµονστρατιον οφ
Χ∆11%+ $#Τ αλονγ ωιτη µαστ χελλσ ιν αδϕαχεντ νορµαλ τισσυε. Σταινεδ ωιτη ∆ακο Α4502 πολψ
αντιβοδψ, 1:400, υσινγ τηε V e' (), ΧΧ1 µιλδ ανδ Υλτραϖιεω δετεχτιον κιτ.
αππενδιξ σεχτιον σταινεδ ωιτη Χ∆11%. Τηε Χαϕαλ χελλσ σηοω στρονγ διστινχτ σταινινγ ανδ τηε
σµοοτη µυσχλε ρεµαινσ υνσταινεδ ανδ χλεαν. Σεχτιον σταινεδ ωιτη ∆ακο Α4502 πολψ αντιβοδψ,
1:500, ον τηε Λειχα Βονδ ΙΙΙ, ΕΡ1 ανδ Ρεφινε κιτ.
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 14:40 ον Τηυρσδαψ, 2 Φεβρυαρψ, 2012
71
ΡΥΝ 96
ΑΛΙΜΕΝΤΑΡΨ ΤΡΑΧΤ ΠΑ*,-.-/0 Μοδυλε
Σελεχτεδ Ιµαγεσ σηοωινγ Οπτιµαλ ανδ Συβ−οπτιµαλ Ιµµυνοσταινινγ
Φιγ7.Οπτιµαλ δεµονστρατιον οφ ∆ΟΓ−1 ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ διστριβυτεδ ΓΙΣΤ σεχτιον, σηοωινγ
ιντενσε ωελλ λοχαλισεδ χψτοπλασµιχ ανδ µεµβρανουσ σταινινγ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε Λειχα Κ9
αντιβοδψ, 1:25, ον τηε Λειχα Βονδ ΙΙΙ, ΕΡ2 ανδ Ρεφινε κιτ.
Φιγ8.∆εµονστρατιον οφ ∆ΟΓ−1 ν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ διστριβυτεδ ΓΙΣΤ σεχτιον. (Α) σηοωσ γοοδ
στρονγ σταινινγ, χοµπαρεδ το τηε συβ−οπτιµαλ ωεακ σταινινγ σηοων ιν (Β). (Α & Β) βοτη σταινεδ
ωιτη τηε Λειχα Κ9 αντιβοδψ, 1:100. (Α) υσινγ τηε πρεσσυρε χοοκερ ανδ ΒιοΓενεξ πολψµερ κιτ,
ανδ (Β) υσινγ τηε ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ, ΧΧ1 µιλδ ανδ Υλτραϖιεω κιτ.
23456 7889 9:;8<=>?@>38< 8A >B: C:DD= 8A G@H@D 3< >B: ;I=CID@?3= J?8J?3@ 8A >B: KL MNOQR SGG
Φιγ10.Εξπεχτεδ ∆ΟΓ−1 εξπρεσσιον ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ διστριβυτεδ δεσµοιδ σεχτιον. Βοτη
τηε µαστ χελλσ ανδ δεσµοιδ τυµουρ αρε νεγατιϖε. Τηε σεχτιον ισ χλεαν ωιτη µινιµαλ νον−σπεχιφιχ
βαχκγρουνδ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη Λειχα Κ9 αντιβοδψ, 1:200, ον τηε Λειχα ΒονδΜαξ, ΕΡ1 ανδ
Ρεφινε κιτ.
@JJ:<93a =:C>38< =>@3<:9 U3>B WX7Z[6 \B: G@H@D C:DD= =B8U =>?8<4 93=>3<C> =>@3<3<4 @<9 >B:
=;88>B ;I=CD: ?:;@3<= I<=>@3<:9 @<9 CD:@<6 R:C>38< =>@3<:9 U3>B >B: s:3C@ L5 @<>3]89^_ [`bc_
ον τηε Λειχα Βονδ ΙΙΙ, ΕΡ2 ανδ Ρεφινε κιτ.
Φιγ116RI]Z8J>3;@D 9:;8<=>?@>38< 8A WX7Z[ 3< >B: KL MNOQR SGG 93=>?3]I>:9 9:=;839 =:C>38<
(Χοµπαρε το Φιγ10). Αλτηουγη τηε τυµουρ ανδ αλλ οτηερ χελλσ αρε νεγατιϖε ασ εξπεχτεδ, τηε
σεχτιον σηοωσ σοµε νον−σπεχιφιχ ιναππροπριατε βαχκγρουνδ σταινινγ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη
∆ιαγνοµιχσ πολψ αντιβοδψ, 1:100, υσινγ τηε ∆ακο ΠΤ s3<i @<9 2sNj i3>.
Φιγ12.7889 =>@3<3<4 9:;8<=>?@>:9 3< @< d3< B8I=:f 7SRΤ χοντρολ σεχτιον, σηοωινγ ιντενσε ωελλ
D8C@D3=:9 C^>8JD@=;3C @<9 ;:;]?@<8I= =>@3<3<46 R:C>38< =>@3<:9 U3>B s:3C@ L5 @<>3]89^_ [`[ll_
υσινγ τηε g:<>@<@ h:<CB;@?i j\, ΧΧ1 µιλδ ανδ Υλτραϖιεω κιτ.
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 14:40 ον Τηυρσδαψ, 2 Φεβρυαρψ, 2012
72
ΑΛΙΜΕΝΤΑΡΨ ΤΡΑΧΤ ΠΑΤΗΟΛΟΓΨ Μοδυλε
Ρυν 96
ΡΥΝ 96ς Χ∆117 ον ΝΕΘΑΣ Σεχτιονσ
28
ΡΥΝ 96Ω Χ∆117 ον ιν−ηουσε Σεχτιονσ
Ινδιϖιδυαλ
Σχορεσ
28
4 = 0 (0%)
4 = 0 (0%)
5 = 0 (0%)
24
5 = 0 (0%)
24
6 = 0 (0%)
6 = 0 (0%)
7 = 1 (1%)
7 = 0 (0%)
20
8 = 6 (6%)
9 = 0 (0%)
10 = 3 (3%)
16
11 = 2 (2%)
12 = 11 (11%)
12
13 = 6 (6%)
νο. οφ ρετυρνσ
νο. οφ ρετυρνσ
20
8 = 0 (0%)
9 = 0 (0%)
10 = 0 (0%)
16
11 = 0 (0%)
12 = 6 (6%)
12
13 = 2 (2%)
14 = 7 (7%)
8
14 = 4 (4%)
8
15 = 21 (21%)
15 = 9 (9%)
16 = 26 (25%)
4
16 = 27 (26%)
4
17 = 12 (12%)
17 = 25 (24%)
18 = 5 (5%)
0
4
5
6
7
8
9
10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
18 = 20 (19%)
0
19 = 2 (2%)
20 = 0 (0%)
4
5
6
7
8
9
Σχορεσ
10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
Συµµαρψ
16 − 20 = 45 (44%)
16 − 20 = 82 (80%)
13 − 15 = 34 (33%)
13 − 15 = 15 (15%)
10 − 12 = 16 (16%)
10 − 12 = 6 (6%)
0 − 9 = 7 (7%)
0 − 9 = 0 (0%)
Μεδιαν = 13.50
Μεδιαν = 16.00
24
35
5 = 1 (1%)
6 = 0 (0%)
7 = 0 (0%)
8 = 0 (0%)
10 = 1 (2%)
11 = 0 (0%)
12
12 = 2 (3%)
13 = 5 (8%)
8 = 0 (0%)
25
νο. οφ ρετυρνσ
νο. οφ ρετυρνσ
6 = 0 (0%)
30
7 = 0 (0%)
9 = 1 (2%)
9 = 0 (0%)
10 = 0 (0%)
20
11 = 1 (1%)
12 = 2 (3%)
15
13 = 3 (4%)
14 = 2 (3%)
8
15 = 6 (9%)
14 = 2 (3%)
10
15 = 7 (10%)
16 = 23 (35%)
4
17 = 13 (20%)
16 = 31 (46%)
17 = 7 (10%)
5
18 = 4 (6%)
0
19 = 8 (12%)
4
5
6
7
8
9
10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
Σχορεσ
20 = 1 (2%)
Ινδιϖιδυαλ
Σχορεσ
4 = 0 (0%)
5 = 0 (0%)
16
20 = 3 (3%)
ΡΥΝ 96Ωβ ∆ΟΓ1 ον ιν−ηουσε Σεχτιονσ
Ινδιϖιδυαλ
Σχορεσ
4 = 0 (0%)
20
19 = 7 (7%)
Σχορεσ
Συµµαρψ
ΡΥΝ 96ςβ ∆ΟΓ1 ον ΝΕΘΑΣ Σεχτιονσ
Ινδιϖιδυαλ
Σχορεσ
18 = 8 (12%)
0
19 = 5 (7%)
4
5
6
7
8
9
10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
20 = 0 (0%)
Σχορεσ
Συµµαρψ
Συµµαρψ
16 − 20 = 49 (74%)
16 − 20 = 51 (76%)
13 − 15 = 13 (20%)
13 − 15 = 12 (18%)
10 − 12 = 3 (5%)
10 − 12 = 3 (4%)
0 − 9 = 1 (2%)
0 − 9 = 1 (1%)
Μεδιαν = 15.00
Μεδιαν = 14.50
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 15:22 ον Τηυρσδαψ, 2 Φεβρυαρψ, 2012
73
ΑΛΙΜΕΝΤΑΡΨ ΤΡΑΧΤ ΠΑΤΗΟΛΟΓΨ Μοδυλε
Ρυν 96
ΑΝΤΙΒΟ∆ΙΕΣ ΑΝ∆ ΟΤΗΕΡ ΤΕΧΗΝΙΧΑΛ ΠΑΡΑΜΕΤΕΡΣ ΕΜΠΛΟΨΕ∆ ΒΨ
ΠΑΡΤΙΧΙΠΑΝΤΣ ΙΝ ΤΗΕ ΑΛΙΜΕΝΤΑΡΨ ΤΡΑΧΤ ΠΑΤΗΟΛΟΓΨ ΜΟ∆ΥΛΕ
Τηε φολλοωινγ ταβλεσ ρεχορδ τηε νυµβερ οφ παρτιχιπαντσ (Ν) υσινγ εαχη πριµαρψ αντιβοδψ. Τηε περχενταγε (%) ρεφερσ
το τηε προπορτιον οφ τηεσε παρτιχιπαντσ αχηιεϖινγ αχχεπταβλε σταινινγ (α σχορε >12/20) ον ΥΚ ΝΕΘΑΣ σεχτιονσ.
Αλιµενταρψ Τραχτ Πατηολογψ Ρυν: 96
Αλιµενταρψ Τραχτ Πατηολογψ Ρυν: 96
Πριµαρψ Αντιβοδψ : Χ∆117
Πριµαρψ Αντιβοδψ : ∆ΟΓ1
Αντιβοδψ ∆εταιλσ
Χελλ Μαρθυε 117Ρ/Σ−ξξ (ΨΡ145)
Ν
%
Αντιβοδψ ∆εταιλσ
Ν
%
Αβχαµ ΤΜΕΜ16Α (αβ53212)
1
100
Χελλ Μαρθυε 244Ρ−17/18 (ΣΠ31)
5
100
∆ιαγνοστιχ Βιοσψστεµσ ΡΜΑΒ031
1
0
∆ιαγοµιχσ 516−16714 (ρβ πολψ)
1
0
48
96
2
100
89
81
∆ιαγνοστιχ Βιοσψστεµσ (ΡΠ63)
1
0
Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−Χ∆117 (Τ595)
2
50
Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−χΚΙΤ (Τ595)
1
100
Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−Λ−Χ∆117 (Τ595)
1
0
Λειχα ΠΑ0219 (Κ9)
6
100
Νοϖοχαστρα ΡΤΥ−Χ∆117 (Τ595)
1
0
Σπρινγ Βιοσχιενχεσ Μ3310 (ρβ πολψ)
1
100
ςεντανα 790−2939 (ρβ πολψ)
1
100
Σπρινγ Βιοσχιενχεσ Μ3311 (ΣΠ31)
1
100
ςεντανα 790−2951 (9.7)
3
67
ςεντανα (ΣΠ31) 760−4590
1
100
∆ακο Α4502 (ρβ πολψ)
Λειχα ΝΧΛ−Λ−∆ΟΓ−1 (Κ9)
Αλιµενταρψ Τραχτ Πατηολογψ Ρυν: 96
Αλιµενταρψ Τραχτ Πατηολογψ Ρυν: 96
Χ∆117
∆ΟΓ1
Ηεατ Μεδιατεδ Ρετριεϖαλ
Βιοχαρε ∆εχλοακινγ Χηαµβερ
∆ακο ΠΤΛινκ
Χ∆117
∆ΟΓ1
Ενζψµε Μεδιατεδ Ρετριεϖαλ
Ν
%
Ν
%
0
0
1
100
78
16
81
9
Λαβ ϖισιον ΠΤ Μοδυλε
3
67
0
0
Λειχα Βονδ ΙΙΙ ΕΡ1
5
60
1
100
Λειχα Βονδ ΙΙΙ ΕΡ2
7
100
7
100
Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ1
8
88
6
100
Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ2
15
87
15
100
Μιχροωαϖε Οϖεν
2
50
0
0
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
6
33
0
0
Οτηερ
1
100
1
100
Πρεσσυρε Χοοκερ
1
100
3
100
ςεντανα Βενκ ΧΧ1 (Εξτενδεδ)
0
0
1
100
ςεντανα Βενκ ΧΧ1 (Μιλδ)
9
67
2
100
ςεντανα Βενκ ΧΧ1 (Στανδαρδ)
3
100
4
75
ςεντανα Βενκ ΧΧ2 (µιλδ)
0
0
2
100
ςεντανα Βενκ ΧΧ2 (Στανδαρδ)
0
0
1
0
ςεντανα Βενκ ΥΛΤΡΑ ΧΧ1 (Μιλδ)
4
75
0
0
ςεντανα Βενκ ΥΛΤΡΑ ΧΧ1 (Σταν.)
3
100
3
100
ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Εξτενδεδ)
1
0
1
100
ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Μιλδ)
8
100
3
67
ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Στανδαρδ)
5
80
5
100
ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1# (8µινσ)
1
100
0
0
Ωατερ βατη 95−98 ΟΧ
0
0
1
100
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
Ν
%
Ν
%
38
79
22
95
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 15:22 ον Τηυρσδαψ, 2 Φεβρυαρψ, 2012
74
ΑΛΙΜΕΝΤΑΡΨ ΤΡΑΧΤ ΠΑΤΗΟΛΟΓΨ Μοδυλε
Ρυν 96
Αλιµενταρψ Τραχτ Πατηολογψ Ρυν: 96
Αλιµενταρψ Τραχτ Πατηολογψ Ρυν: 96
Χ∆117
∆ετεχτιον
∆ΟΓ1
Ν
%
Ν
%
ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ
4
75
6
100
ΒιοΓενεξ ΣΣ Πολψµερ (Θ∆ 420−ΨΙΚΕ)
0
0
1
100
ΒιοΓενεξ ΣΣ Πολψµερ (Θ∆ 430−ΞΑΚΕ)
1
100
0
0
∆ακο Ενςισιον ΦΛΕΞ ( Κ8000/10)
1
100
1
0
∆ακο Ενςισιον ΦΛΕΞ+ ( Κ8002/12)
10
80
6
83
∆ακο Ενϖισιον ΗΡΠ/∆ΑΒ ( Κ5007)
3
67
1
100
Λαβςισιον Υλτραςισιον ΟΝΕ Πολψµερ ( ΤΛ−012/5−Η∆ϑ/Τ
1
0
0
0
33
85
25
100
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
1
100
0
0
Νοϖοχαστρα Νοϖολινκ Π∆Σ (ΡΕ7−140/150/280/290−Κ)
1
0
1
100
Οτηερ
3
100
3
100
Ποωερ ςισιον ∆ΠςΒ999 ΗΡΠ
1
0
1
100
1
100
0
0
ςεντανα ιςιεω σψστεµ (760−091)
4
75
3
100
ςεντανα Υλτραςιεω Κιτ (760−500)
30
73
18
83
Λειχα Βονδ Πολψµερ Ρεφινε (∆Σ9800)
ςεχτορ Ελιτε ΑΒΧ Κιτ (ΠΚ−7200)
Χ∆117
∆ΟΓ1
Χηροµογεν
Ν
12
83
Ν
8
ΒιοΓενεξ Λιθυιδ ∆ΑΒ (ΗΚ153−5Κ)
1
100
0
0
ΒιοΓενεξ λιθυιδ ∆ΒΑ (ΗΚ−124−7Κ)
0
0
1
100
∆ακο ∆ΑΒ+ Λιθυιδ (Κ3468)
1
100
0
0
∆ακο Ενςισιον Πλυσ κιτσ
2
50
1
100
ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ
∆ακο ΦΛΕΞ ∆ΑΒ
%
11
91
8
75
∆ακο ΡΕΑΛ Ενςισιον Κ5007 ∆ΑΒ
3
67
1
100
Λαβςισιον ∆ΑΒ
1
0
0
0
Οτηερ
2
50
2
100
Σιγµα ∆ΑΒ (∆5637)
ςΒΣ Βονδ Πολψµερ Ρεφινε κιτ (∆Σ9800)
ςεντανα ιϖιεω
ςεντανα Υλτραϖιεω ∆ΑΒ
1
0
1
100
29
86
23
100
4
75
3
100
34
74
18
83
Αλιµενταρψ Τραχτ Πατηολογψ Ρυν: 96
Χ∆117
∆ΟΓ1
Αυτοµατιον
ΒιοΓενεξ ΓενοΜΞ 6000ι
∆ακο Αυτοσταινερ
Ν
%
Ν
%
1
100
1
100
2
50
1
0
13
85
7
86
∆ακο Αυτοσταινερ πλυσ
3
67
3
100
∆ακο Αυτοσταινερ Πλυσ Λινκ
2
50
1
100
Λαβςισιον Αυτοσταινερ
3
67
0
0
Λειχα Βονδ Μαξ
25
88
20
100
Λειχα Βονδ−ΙΙΙ
100
∆ακο Αυτοσταινερ Λινκ 48
11
82
9
Νονε (Μανυαλ)
1
0
1
100
ςεντανα Βενχηµαρκ
2
50
1
100
8
63
3
67
30
80
19
89
ςεντανα Βενχηµαρκ ΥΛΤΡΑ
ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 15:22 ον Τηυρσδαψ, 2 Φεβρυαρψ, 2012
%
100
75
Ρυν 96
ΑΛΙΜΕΝΤΑΡΨ ΤΡΑΧΤ ΠΑΤΗΟΛΟΓΨ Μοδυλε
ΒΕΣΤ ΜΕΤΗΟ∆Σ
Χ∆117 − Μετηοδ 1
Παρτιχιπαντ σχορεδ 19/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 20/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
∆ακο Α4502 (ρβ πολψ)
∆ιλυτιον 1: 500
Αυτοµατιον:
Λειχα Βονδ−ΙΙΙ
Μετηοδ:
ςΒΣ ΒονδΜΑξ Ρεφινε ΚΙΤ
Μαιν Βυφφερ:
Βονδ Ωαση Βυφφερ (ΑΡ9590)
ΗΜΑΡ:
Λειχα Βονδ ΙΙΙ ΕΡ1
ΕΑΡ:
Χηροµογεν:
ςΒΣ Βονδ Πολψµερ Ρεφινε κιτ (∆Σ9800)
∆ετεχτιον:
Λειχα Βονδ Πολψµερ Ρεφινε (∆Σ9800)
Πρεδιλυτεδ
Χ∆117 − Μετηοδ 2
Παρτιχιπαντ σχορεδ 18/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 19/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
∆ακο Α4502 (ρβ πολψ) , 30 Μινσ, ρτ ≡Χ
Αυτοµατιον:
∆ακο Αυτοσταινερ Λινκ 48
Μετηοδ:
∆ακο ΦΛΕΞ+ κιτ
Μαιν Βυφφερ:
∆ακο ΦΛΕΞ ωαση βυφφερ
ΗΜΑΡ:
∆ακο ΠΤΛινκ, ΠΗ: 9
∆ιλυτιον 1: 1000
ΕΑΡ:
Χηροµογεν:
∆ακο ΦΛΕΞ ∆ΑΒ
∆ετεχτιον:
∆ακο Ενςισιον ΦΛΕΞ+ ( Κ8002/12) , 30 Μινσ, ρτψ ≡Χ
Χ∆117 − Μετηοδ 3
Παρτιχιπαντ σχορεδ 18/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 19/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
∆ακο Α4502 (ρβ πολψ) , 15 Μινσ, 37 ≡Χ
Αυτοµατιον:
Λειχα Βονδ−ΙΙΙ
Μετηοδ:
ςΒΣ ΒονδΜΑξ Ρεφινε ΚΙΤ
Μαιν Βυφφερ:
Βονδ Ωαση Βυφφερ (ΑΡ9590)
ΗΜΑΡ:
Λειχα Βονδ ΙΙΙ ΕΡ2
∆ιλυτιον 1: 200
ΕΑΡ:
Χηροµογεν:
ςΒΣ Βονδ Πολψµερ Ρεφινε κιτ (∆Σ9800), ΡΤ ≡Χ., Τιµε 1: 10 Μινσ
∆ετεχτιον:
Λειχα Βονδ Πολψµερ Ρεφινε (∆Σ9800) , 8 Μινσ, ΡΤ ≡Χ Πρεδιλυτεδ
Χ∆117 − Μετηοδ 4
Παρτιχιπαντ σχορεδ 18/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 17/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
∆ακο Α4502 (ρβ πολψ)
Αυτοµατιον:
ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ
∆ιλυτιον 1: 40
Μετηοδ:
ςεντανα ιςιεω Κιτ
Μαιν Βυφφερ:
ςεντανα ρεαχτιον βυφφερ (950−300)
ΗΜΑΡ:
ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Στανδαρδ)
ΕΑΡ:
Χηροµογεν:
ςεντανα ιϖιεω
∆ετεχτιον:
ςεντανα ιςιεω σψστεµ (760−091)
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 15:22 ον Τηυρσδαψ, 2 Φεβρυαρψ, 2012
76
Ρυν 96
ΑΛΙΜΕΝΤΑΡΨ ΤΡΑΧΤ ΠΑΤΗΟΛΟΓΨ Μοδυλε
ΒΕΣΤ ΜΕΤΗΟ∆Σ
∆ΟΓ1 − Μετηοδ 1
Παρτιχιπαντ σχορεδ 18/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 19/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
Λειχα ΝΧΛ−Λ−∆ΟΓ−1 (Κ9)
Αυτοµατιον:
Λειχα Βονδ−ΙΙΙ
Μετηοδ:
ςΒΣ ΒονδΜΑξ Ρεφινε ΚΙΤ
Μαιν Βυφφερ:
Βονδ Ωαση Βυφφερ (ΑΡ9590)
ΗΜΑΡ:
Λειχα Βονδ ΙΙΙ ΕΡ2
∆ιλυτιον 1: 200
ΕΑΡ:
Χηροµογεν:
ςΒΣ Βονδ Πολψµερ Ρεφινε κιτ (∆Σ9800)
∆ετεχτιον:
Λειχα Βονδ Πολψµερ Ρεφινε (∆Σ9800)
Πρεδιλυτεδ
∆ΟΓ1 − Μετηοδ 2
Παρτιχιπαντ σχορεδ 18/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 17/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
Λειχα ΝΧΛ−Λ−∆ΟΓ−1 (Κ9) , 30 Μινσ, ρτ ≡Χ
Αυτοµατιον:
∆ακο Αυτοσταινερ Λινκ 48
Μετηοδ:
∆ακο ΦΛΕΞ+ κιτ
Μαιν Βυφφερ:
∆ακο ΦΛΕΞ ωαση βυφφερ
ΗΜΑΡ:
∆ακο ΠΤΛινκ, Βυφφερ: ηιγη, ΠΗ: 9
∆ιλυτιον 1: 100
ΕΑΡ:
Χηροµογεν:
∆ακο ΦΛΕΞ ∆ΑΒ
∆ετεχτιον:
∆ακο Ενςισιον ΦΛΕΞ+ ( Κ8002/12) , 30 Μινσ, ρτ ≡Χ
∆ΟΓ1 − Μετηοδ 3
Παρτιχιπαντ σχορεδ 20/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 18/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
Λειχα ΝΧΛ−Λ−∆ΟΓ−1 (Κ9) , 15 Μινσ, 22 ≡Χ
Αυτοµατιον:
Λειχα Βονδ−ΙΙΙ
∆ιλυτιον 1: 50
Μετηοδ:
ςΒΣ ΒονδΜΑξ Ρεφινε ΚΙΤ
Μαιν Βυφφερ:
Βονδ Ωαση Βυφφερ (ΑΡ9590), ΠΗ: 7.5
ΗΜΑΡ:
Λειχα Βονδ ΙΙΙ ΕΡ2, Βυφφερ: Βονδ Επιτοπε Ρετριεϖαλ Βυφφερ 2, ΠΗ: 8.8
ΕΑΡ:
Χηροµογεν:
ςΒΣ Βονδ Πολψµερ Ρεφινε κιτ (∆Σ9800), 22 ≡Χ., Τιµε 1: 10 Μινσ, Τιµε 2: 10 Μινσ
∆ετεχτιον:
Λειχα Βονδ Πολψµερ Ρεφινε (∆Σ9800) , 8 Μινσ, 22 ≡Χ Πρεδιλυτεδ
∆ΟΓ1 − Μετηοδ 4
Παρτιχιπαντ σχορεδ 18/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 19/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
Σπρινγ Βιοσχιενχεσ Μ3310 (ρβ πολψ) , 32 Μινσ, ΡΤ ≡Χ
Αυτοµατιον:
ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ
Μετηοδ:
ςεντανα Υλτραςιεω ∆ΑΒ
Μαιν Βυφφερ:
ςεντανα ρεαχτιον βυφφερ (950−300), ΠΗ: 7.4
ΗΜΑΡ:
ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Στανδαρδ)
∆ιλυτιον 1: 1:50
ΕΑΡ:
Χηροµογεν:
ςεντανα Υλτραϖιεω ∆ΑΒ, ΡΤ ≡Χ., Τιµε 1: 8 Μινσ, Τιµε 2: 4 Μινσ
∆ετεχτιον:
ςεντανα Υλτραςιεω Κιτ (760−500) , 16 Μινσ, 37 ≡Χ Πρεδιλυτεδ
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 15:22 ον Τηυρσδαψ, 2 Φεβρυαρψ, 2012
77
The HER2 ISH Module - Interpretive
Run 25
Merdol Ibrahim, Suzanne Parry and 9 Reference Centres
Gene Assessed:
HER2
Sections circulated:
Composite block containing cell line pellets (see below)
Number of Registered Participants:
152
The Summary Box below gives details of the HER2 phenotype and genotype of the cell lines circulated for these
assessments, which comprised of formalin fixed and paraffin processed sections from a composite block of four human breast
carcinoma cell lines. The cell lines are the same ones which are used in the HER2 IHC module (results of the HER2 IHC
module can be found in this and previous issues of Immunocytochemistry; and readers may wish to consult them for further
details). The sections were positioned on the microscope slide as indicated.
Cell line
HER2 status by IHC1
HER2 status by FISH2
SK-BR-3
3+
Amplified
MDA-MB-453
2+
Borderline: Amplified to Amplified
MDA-MB-175
1+
Not amplified
MDA-MB-231
negative
Not amplified
1: Scored using Clinical Trials Assay system
2: FISH status as assessed by the UK NEQAS ICC & FISH reference laboratories (Bartlett et al., 2007)
AN IMPORTANT NOTE ABOUT THE TYPES OF PREPARATIONS WHICH ARE ASSESSED IN THIS MODULE
Although this module has been up until this time entitled HER2 FISH, the organizers would like to make it clear that the
submission of results from slides stained using chromogenic in-situ hybridisation (CISH) and silver in-situhybridisation (SISH) are equally acceptable, and are welcomed. Copy number data produced from slides stained using
this approach will be assessed in a similar way to that produced by single colour FISH users i.e. against the copy number
data produced by the reference centres.
Cell Line Positioning:
Cell lines are positioned on microscope slides, as illustrated below. Any variation in this pattern is
indicated on distribution of the slides
Slide
Label
Introduction
After successful conclusion of the pilot phase we are pleased to
announce that this is now a full UK NEQAS module. The results
of the first pilot and a three year follow-up have now been
published[1,2]. Furthermore, the scheme has allowed multiple
‘ring studies’ to be undertaken and have allowed new
methodologies, for example the Ventana silver ISH (SISH)[3],
Kreatech FISH probes[4] and the Ventana Dual ISH (BDISH)[5] to
be analysed. With the growing importance of colourimetric
assays, both chromogenic and silver based in situ detection
systems, the scheme has changed from a FISH to an ISH
based scheme, where all molecular in situ assays for HER2
gene copy/amplification determination are included. This move
reflects an ongoing development in chromogenic assay systems
which it is envisaged will lead to a wider uptake of these assays
within the diagnostic community. For UK laboratories carrying
out diagnostic HER2 ISH testing participation is therefore
mandatory under Clinical Pathology Accreditation (UK), and
National Quality Assurance Advisory Panel (NQAAP)
regulations. It should also be emphasised that the scheme
remains very-much open to non-UK laboratories as an aid to
monitoring and improving performance.
Recommendations
Diagnostic testing recommendations for HER2 ISH was
originally published by Walker et at [6] but a more recent
publication covering recommendations for both breast and
gastric in-situ hybridisation methods is now available[7].
Assessment of Slides (rationale behind the
adopted scoring system)
Cell lines were selected to cover the critical diagnostic interval
for the HER2 FISH test, where gene amplification is recognised
if the ratio of HER2 signals to Chromosome 17 signals exceeds
2.0. Previous evidence suggests that inter-observer error in
scoring FISH signals can be controlled within 10% for both
HER2 and other solid tissue analyses (Bartlett et al., 2001,
Bartlett, 2005 for review). This results in a small population of
cases (<2.0% of cases, unpublished observations; FISH used
as frontline test) where the result reported lies within a 10%
range of the diagnostic interval, i.e. between 1.80 and 2.20.
Whilst this compares favourably with the approximately 15% of
cases reported as borderline by immunohistochemistry it
© UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent
78
The HER2 ISH Module - Interpretive
Run 25
How the scoring system works
Schematic representation of the scoring system; the example illustrated uses the Reference Centre set of HER2/Ch17 ratios obtained
for the SK-BR3 cell line at run 4. In this case the lowest ratio obtained by a Reference Centre was 3.19, and the highest 4.10;
participants submitting ratios within this range were judged to have achieved an appropriate result (score = 3). The lower cut-off for
acceptable ratios (score = 2) was calculated as 3.19 minus 10% of 3.19, that is 2.87; and the upper cut-off was calculated as 4.10 plus
10% of 4.10, that is 4.51. Participants who submitted ratios out-with these 10% cut-offs were judged to have achieved an
inappropriate and received a score of 1. Except in the case of the MDA-MB-453 cell line, misdiagnosis (amplified reported as nonamplified, and visa versa) resulted in a score of 0. Superscript notation and abbreviation used in figure: * = does not apply to results
obtained for MDA-MB-453 cell line; RC = Reference Centre.
highlights the need to rigorously control scoring approaches. misdiagnoses for the purpose of this scheme.
Data suggest that allowing variation to increase by 5% (to 15%)
would double the number of equivocal cases (to 4%) and References
Bartlett JMS, Ibrahim M, Jasani B, et al. (2007) External quality assurance of
allowing an increase to 20% variation at the diagnostic interval 1. HER2
FISH testing: Results of a UK NEQAS pilot scheme. J Clin Pathol; 60:816
would lead to a four-fold increase in equivocal cases (Bartlett
-819
unpublished observations). These observations underpin the 2. Bartlett JM, Ibrahim M, Jasani B, Morgan JM, Ellis I, Kay E, Connolly Y,
Campbell F, O'Grady A, Barnett S, Miller K. (2009) External quality assurance
approach taken in assessing participants results.
of HER2 FISH and ISH testing: three years of the UK national external quality
For each cell line, participants scored 3 points if the result
assurance scheme. Am J Clin Pathol; 131:106-11.
reported fell within the range observed by the reference 3. Bartlett JM, Campbell FM, Ibrahim M, Wencyk P, Ellis I, Kay E, Connolly Y,
O'Grady A, Di Palma S, Starczynski J, Morgan JM, Jasani B, Miller K. (2009)
laboratories. These reference laboratory results already reflect
Chromogenic in situ hybridization: a multicenter study comparing silver in situ
the acceptable observer variation of 10% for inter-observer
hybridization with FISH. Am J Clin Pathol; 132: 514-520.
variation in scoring discussed above since they are collated 4. Bartlett JM, Campbell FM, Ibrahim M, Thomas J, Wencyk P, Ellis I, Kay E,
Connolly Y, O'Grady A, Barnett S, Starczynski J, Cunningham P, Miller K.
from seven different laboratories, each of which presents two
(2010) A UK NEQAS ICC and ISH multicentre study using the Kreatech
scores (up to 14 observations per cell line per assessment).
Poseidon HER2 FISH probe: intersite variation can be rigorously controlled
Thus results must fall within this range to be regarded as
using FISH. Histopathology; 56:297-304.
appropriate.
5. Bartlett JM, Campbell FM, Ibrahim M, O'Grady A, Kay E, Faulkes C, Collins N,
Starczynski J, Morgan JM, Jasani B, Miller K. (2011) A UK NEQAS ISH
For each cell line participants scored 2 points if results lay within
multicenter ring study using the Ventana HER2 dual-color ISH assay. Am J Clin
a further 10% of the range of results observed by the reference
Pathol; 135:157-162.
centres. These results reflect a band approximating to the 20% 6. Walker RA, Bartlett JM, Dowsett M, Ellis IO, Hanby AM, Jasani B, M i l l e r K ,
Pinder SE. (2008) HER2 testing in the UK: further update to recommendations.
variation described above. Such results reflect acceptable
J Clin Pathol;61818-824.
performance with the potential for improvement.
7. Bartlett JM, Starczynski J, Atkey N, Kay E, O'Grady A, Gandy M, Ibrahim M,
For results, which lay out with this second band of variation one
Jasani B, Ellis IO, Pinder SE, Walker RA. (2011) HER2 testing in the UK: r
point was given, representing inappropriate performance. For
recommendations for breast and gastric in-situ hybridisation methods. J Clin
Pathol; 64: 649-653.
such specimens it is important to note that despite the correct
diagnosis being given in many cases, a degree of variation
>20% from the accepted result is indicative of a high degree of
potential for error in diagnosis. In cases where results were not
only deviating to this degree from the accepted result but were
also misdiagnosed (e.g. where a non-amplified case is reported
as amplified) a score of 0 was recorded in recognition of the
negative impact this has on the laboratories likely performance
on diagnostic samples. Please note the following important
rider: for the MDA-MB-453 cell line, where “borderline” results
are often obtained and lie within the 20% margin-for-error
described above, such results are NOT regarded as
© UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent
79
Ρυν 25
ΡΥΝ 25 ΗΕΡ−2 ΙΣΗ − Αλλ Παρτιχιπαντσ
ΡΥΝ 25 ΗΕΡ−2 ΙΣΗ − ΥΚ λαβσ ονλψ
Ινδιϖιδυαλ
Σχορεσ
50
ΙΣΗ Μοδυλε
Ινδιϖιδυαλ
Σχορεσ
24
4 = 3 (2%)
4 = 0 (0%)
5 = 0 (0%)
5 = 0 (0%)
6 = 4 (3%)
40
6 = 0 (0%)
20
7 = 4 (3%)
7 = 0 (0%)
8 = 3 (7%)
νο. οφ ρετυρνσ
νο. οφ ρετυρνσ
8 = 5 (4%)
9 = 12 (10%)
30
10 = 15 (12%)
11 = 33 (26%)
12 = 49 (39%)
20
16
9 = 1 (2%)
10 = 5 (12%)
11 = 10 (24%)
12
12 = 22 (54%)
8
Συµµαρψ
Συµµαρψ
12 − 12 = 49 (39%)
10
12 − 12 = 22 (54%)
9 − 11 = 60 (48%)
9 − 11 = 16 (39%)
4
4 − 8 = 16 (13%)
4 − 8 = 3 (7%)
Μεδιαν = 11.00
0
4
5
6
7
8
9
10
11
Μεδιαν = 12.00
0
12
4
5
6
7
8
Σχορεσ
9
10
11
12
Σχορεσ
ΡΥΝ 25 Μετηοδ Εµπλοψεδ − Αλλ Παρτιχιπαντσ βψ Περχενταγε οφ Παρτιχιπαντσ
100
100
100
100
90
83
90
86
83
80
75
67
67
70
% οφ Παρτιχιπαντσ
100
70
63
57
60
60
51
50
50
80
50
40
40
30
30
20
20
10
0
% Πασσ Ρατε
100
100
1
0
1
1
Χοπψ Νο.:
Ιν ηουσε
ΧΙΣΗ
Χοπψ Νο.:
Οτηερ
2
Χοπψ Νο.: Χοπψ Νο.:
Ζψµεδ /
ςεντανα
Ινϖιτρογεν:
Ινφορµ
σποτ−λιγητ
6
1
0
2
5
1
10
6
5
6
3
1
10
0
Ρατιο:
∆ακο
∆υοΧΙΣΗ
Ρατιο:
∆ακο
Πηαρµ ∆ξ
Ρατιο: Ιν
ηουσε
ΦΙΣΗ
Ρατιο:
Λειχα
ΗΕΡ2
ΦΙΣΗ
ΤΑ9217
Ρατιο:
Κρεατεχη
Προβεσ
Ρατιο:
Οτηερ
Ρατιο:
Πατηϖψσιον
ςψσισ Κιτ
Ρατιο:
ςεντανα
∆υαλ ΙΣΗ
(Β∆ΙΣΗ)
Ρατιο:
ςεντανα
Ινφορµ
∆υαλ ΙΣΗ
780−4422
(∆∆ΙΣΗ)
Ρατιο:
ςεντανα
Ινφορµ
ΣΙΣΗ
Ρατιο:
Ζψτοϖισιον
Ζψτο∆οτ
2Χ
Ρατιο:
Ζψτοϖισιον
ΖψτοΛιγητ
ΡΥΝ 25 Μετηοδ Εµπλοψεδ − ΥΚ Λαβσ ονλψ βψ Περχενταγε οφ Παρτιχιπαντσ
100
100
100
100
100
100
90
90
100
90
80
% οφ Παρτιχιπαντσ
100
80
75
70
70
60
60
49
50
50
40
40
30
30
20
20
12
10
0
2
0
2
Χοπψ Νο.: Ιν
ηουσε ΧΙΣΗ
Χοπψ Νο.:
Ζψµεδ /
Ινϖιτρογεν:
σποτ−λιγητ
5
10
2
2
Ρατιο: Λειχα
ΗΕΡ2 ΦΙΣΗ
ΤΑ9217
Ρατιο: Οτηερ
5
7
10
2
0
Ρατιο: ∆ακο
Πηαρµ ∆ξ
Ρατιο: Κρεατεχη
Προβεσ
Ρατιο:
Πατηϖψσιον
ςψσισ Κιτ
Ρατιο: ςεντανα
∆υαλ ΙΣΗ
(Β∆ΙΣΗ)
Ρατιο: ςεντανα
Ινφορµ ∆υαλ ΙΣΗ
780−4422
(∆∆ΙΣΗ)
Ρατιο: ςεντανα
Ινφορµ ΣΙΣΗ
Ρατιο:
Ζψτοϖισιον
ΖψτοΛιγητ
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 13:38 ον Φριδαψ, 3 Φεβρυαρψ, 2012
81
% Πασσ Ρατε
100
100
Ρυν 25
ΙΣΗ Μοδυλε
ΡΥΝ 25 Μετηοδ Εµπλοψεδ − Αλλ Παρτιχιπαντσ βψ Νυµβερ οφ Παρτιχιπαντσ
100
100
100
90
100
83
100
90
86
83
Νυµβερ οφ Παρτιχιπαντσ
80
80
75
67
70
67
64
70
63
57
60
60
50
50
50
40
40
30
30
20
20
10
0
% Πασσ Ρατε
100
100
1
0
1
1
Χοπψ Νο.:
Ιν ηουσε
ΧΙΣΗ
Χοπψ Νο.:
Οτηερ
Χοπψ Νο.:
ςεντανα
Ινφορµ
3
Χοπψ Νο.:
Ζψµεδ /
Ινϖιτρογεν:
σποτ−λιγητ
7
6
6
2
1
0
12
8
7
1
10
4
1
0
Ρατιο:
∆ακο
∆υοΧΙΣΗ
Ρατιο:
∆ακο
Πηαρµ ∆ξ
Ρατιο: Ιν
ηουσε
ΦΙΣΗ
Ρατιο:
Κρεατεχη
Προβεσ
Ρατιο:
Λειχα
ΗΕΡ2
ΦΙΣΗ
ΤΑ9217
Ρατιο:
Οτηερ
Ρατιο:
Πατηϖψσιον
ςψσισ Κιτ
Ρατιο:
ςεντανα
∆υαλ ΙΣΗ
(Β∆ΙΣΗ)
Ρατιο:
ςεντανα
Ινφορµ
∆υαλ ΙΣΗ
780−4422
(∆∆ΙΣΗ)
Ρατιο:
Ζψτοϖισιον
Ζψτο∆οτ
2Χ
Ρατιο:
ςεντανα
Ινφορµ
ΣΙΣΗ
Ρατιο:
Ζψτοϖισιον
ΖψτοΛιγητ
ΡΥΝ 25 Μετηοδ Εµπλοψεδ − ΥΚ Λαβσ ονλψ βψ Νυµβερ οφ Παρτιχιπαντσ
100
100
100
100
100
100
100
90
90
90
80
Νυµβερ οφ Παρτιχιπαντσ
100
80
75
70
70
60
60
50
50
40
40
30
30
20
20
10
0
1
0
1
2
Χοπψ Νο.: Ιν
ηουσε ΧΙΣΗ
Χοπψ Νο.:
Ζψµεδ /
Ινϖιτρογεν:
σποτ−λιγητ
Ρατιο: ∆ακο
Πηαρµ ∆ξ
5
1
1
Ρατιο: Λειχα
ΗΕΡ2 ΦΙΣΗ
ΤΑ9217
Ρατιο: Οτηερ
20
2
10
4
3
Ρατιο: ςεντανα
Ινφορµ ∆υαλ ΙΣΗ
780−4422
(∆∆ΙΣΗ)
Ρατιο: ςεντανα
Ινφορµ ΣΙΣΗ
1
0
Ρατιο: Κρεατεχη
Προβεσ
Ρατιο:
Πατηϖψσιον
ςψσισ Κιτ
Ρατιο: ςεντανα
∆υαλ ΙΣΗ
(Β∆ΙΣΗ)
Ρατιο: Ζψτοϖισιον
ΖψτοΛιγητ
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 13:38 ον Φριδαψ, 3 Φεβρυαρψ, 2012
82
% Πασσ Ρατε
100
100
END
© UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent

Run 27 - UKNEQAS - Immunocytochemistry

εδώ