一般研究用試薬（For general laboratory use.） AptaTaq DNA Green Master with ROX インターカレータ蛍光色素を用いたリアルタイム PCR 用マスターミックス（2×濃度） Cat. No. 07466072001 5×1 ml Ver.1/2014.12 保存温度-15∼-25℃ 製品説明本製品は、インターカレータ（ResoLight）を用いたリアルタイム PCR 用マスターミックスです。ROX リファレンス色素による補正を必要とするあらゆるリアルタイム PCR 機器に対応しています。本製品には Roche Diagnostics GmbH が提供する AptaTaq DNA Polymerase を採用しております。マスターミックス内容本製品は、AptaTaq DNA Polymerase、dNTP、ROX リファレンス色素、専用バッファを含む 2×濃度のマスターミックスです。保存方法未開封のキットは、-15∼-25℃で保存してください。開封後は+2∼+8℃で 3 ヶ月間安定です。 PCR 反応液セットアップコンポーネント AptaTaq GM Master with ROX(2×) 容量最終濃度 10μl 1× Forward プライマー Reverse プライマー H2O 適宜適宜適宜 100-1000 nM 100-1000 nM テンプレート（DNA や cDNA）適宜 gDNA: ∼250 ng cDNA: ∼50 ng 合計 20μl * プライマーやテンプレートの希釈は、PCR グレードの H2O または Tris-HCl バッファ(5-10mM, pH 7.5-8.0)を使用してください（TE バッファを用いると溶液中の Mg2+濃度が変化してしまいますので避けてください）。 ** cDNA は反応液量の 10%を超えて持ち込むと、PCR 反応を阻害することがあります。まずは、10 倍、100 倍などの段階希釈したもので阻害がかからないか確認することをおすすめします（阻害がある場合は、増幅シグナルが等間隔で得られません）。 PCR 反応プロトコール現在ご利用のリアルタイム PCR の反応プロトコールでほとんどの場合は問題なくご利用いただけます。ご参考のため、典型的なリアルタイム PCR の反応プロトコールを一例として右に示します。ロシュ・ダイアグノスティックス株式会社〒105-0014 東京都港区 2 丁目 6 番 1 号 TEL.：03-5443-5287 FAX.：03-5443-6574http://www.roche-diagnostics.jp/ Step UNG* Cycles Temp. Time Acquisition 1 50 120 s none 1 95 30 s none 40 95 58-60* 1-3 s 20 s None Single 1 95 65 95 0s 15 s 0 s（0.1℃/s） None None Continuous 40 30 s Denature PCR Melting Curve Cooling 1 None * 使用するリアルタイム PCR 装置に依存します。 * UNG 添加によるキャリーオーバーコンタミネーション防止の場合のみ必要です（UNG ご利用の場合には別途 Roche Diagnostics 社の「 LightCycler® Uracil-DNA Glycosylase （03539806001）」をお求めください）。トラブルシューティングトラブル現象原因ゲノム DNA テンプレートを用いて、十分な増幅が得られない。増幅蛍光が検出できない、ゲル電気泳動でもバンドが検出できない対応方法変性条件が不十分 Activation 時の Hold 時間を 3 min まで延長する PCR プログラムが適切でない PCR プログラムを調整するピペッティングを失敗したピペッティングステップを再確認するプライマーを再デザインする再精製するアンプリコンが長すぎるテンプレートに PCR 阻害物質が含まれる