8 タンパク質／酵素 NEW 2012 年 2 月 15 日号 NEW NEW タンパク質／酵素 試料調製 タンパク質／酵素 プロテオミクス 血液保存用カードより抽出したタンパク質からヘモグロビンを除去するキット HemoVoid Blood Card Kit Whatman 903 Protein Saver Card（GE Healthcare 社）などの血液保存用カードにスポットし，乾燥させた血液試 料から，タンパク質を溶出させ，更にヘモグロビンを除去する キ ッ ト で す。 ヘ モ グ ロ ビ ン の 除 去 に は， シ リ カ ベ ー ス の HemoVoid を使用します。 特 長 磁性粒子 精製 His タグ／ GST タグ 融合タンパク質精製用磁気ビーズ His タグおよび GST タグ融合組換え体タンパク質を迅速・ 簡便に高純度で精製することができるシリカベースの磁気ビー ズです。Ni2 ＋または Co2 ＋（His タグ用）や，グルタチオン（GST タグ用）を表面に結合させたビーズがあり，それぞれについて ビ ー ズ の 粒 径 が 異 な る 2 種 類 の 製 品（EcoMag Magnetic Particle / BcMag Magnetic Beads） が あ り ま す。 ま た， 必要なバッファーなどをセットにしたキット製品もあります。 ◆ 98％以上のヘモグロビンを除去できます。 特 長 ◆ 操作にかかる時間は 30 分以内です。 ◆ ヒト，ヒツジ，ウシ，ヤギ，ウサギなど多くの動物種に適用できます。 ◆ 得られた試料は，ELISA，SDS-PAGE，二次元電気泳動，DIGE（二次 元ディファレンスゲル電気泳動解析） ，iTRAQ（タンパク質発現・相対 定量解析） ， MALDI-TOF-MS および LC-MS などの解析に使用できます。 ◆ バイオマーカー候補となりうる血中の微量タンパク質や酵素のプロ ◆ 高密度の Ni2 ＋，Co2 ＋ またはグルタチオンを表面に結合させたシリ カベースの超常磁性磁気ビーズです。 ◆ ワンステップの簡便で効率的な方法のため，カラム，フィルター， 遠心操作などの面倒な操作は不要です。 ◆ His タグおよび GST タグ融合タンパク質に対する結合能が高く，非 特異的結合は低く抑えられており，高純度なタンパク質の精製が可 テオミクス研究に有用です。 能です。 HemoVoid 処理後 HemoVoid 処理前 ◆ 試料のスケールアップ・ダウンや自動化が容易です。 -R-NH − 2＋ CH2COO Co 本紙に掲載されている 製品はすべて研究用です グルタチオン 磁気ビーズの構造 R 操作方法概略 HS O 1. 血液保存用カードをパンチで切り抜き，Protein extraction buffer HOOC N H PEB を加え，室温で 30 分間インキュベート後，5,000 rpm で 4 分間遠心分離を行う。 NH2 1 2 3 4 お問い合わせ先 2. SpinX centrifuge tube filter に HemoVoid と Binding buffer HVBB，1. で得られたライセートを加え，10 分間ボルテックス後， 5 − 2＋ CH2COO Ni CH2COO−Ni2＋ His-Ni2 ＋磁気ビーズの構造 His-Co2 ＋磁気ビーズの構造 血液保存用カードにスポットし，乾燥させた血液試料を溶出したもの（左）および，溶出 後に HemoVoid で精製したもの（右）について，410 nm の吸光度を測定してヘモグ ロビンの有無を確認した。 -R-NH CH2COO−Co2＋ H N COOH O 本製品で精製した His タグ融合 GFP 発現細 胞ライセートの電気泳動像 Lane 1：分子量マーカー Lane 2：未精製ライセート Lane 3, 4：EcoMag His-Ni Magnetic Particle で 精製 Lane 5：EcoMag His-Co Magnetic Particle で精製 5,000 rpm で 2 分間遠心分離を行う。 3. 2. のペレットに Wash buffer HVWB を加え， 5 分間ボルテックス後， 5,000 rpm で 2 分間遠心分離を行う（2 回繰り返す）。 試薬 4. 3. のペレットに Elution buffer HVEB を加え，10 分間ボルテック 仕 様 ス後，5,000 rpm で 2 分間遠心分離を行う。 ＦＡＸ ０３ ５ - ６８４ １ - ７７５ ＴＥＬ ０３ ５ - ６８４ １ - ６２０ 5. 得られた溶出液を各種解析に用いる。 His-Co 磁気ビーズ キット内容 ● HemoVoid ● Wash buffer HVWB ● Protein extraction buffer PEB ● Elution buffer HVEB ● Binding buffer HVBB ● SpinX centrifuge tube filter 品 名 メーカー 商品コード HemoVoid Blood Card Kit BTS HVBC-10 BTS HVBC-50 120215s_p08-09_k_n_i.indd 8 包装 / 価格（￥） 10 preps 50 preps 1 kit / 69,000 1 kit / 285,000 品 名 EcoMag His-Co Magnetic Particle BcMag His-Co Magnetic Beads 粒径（直径） 1 ∼ 10 μm 1 μm 粒子数 ∼ 1.7 × 107 個／ mg 表面積 ∼ 100 m2/g 磁化率（磁力） ∼ 40 EMU/g 磁性体の種類 超常磁性 実効密度 2.5 g/ml 濃 度 His 融合タンパ ク質の結合量 適 用 50 mg/ml 30 mg/ml （1％ CoCl, 20％エタノール）（1％ CoCl, 20％エタノール） ＞ 5 mg His-tagged GFP /ml of beads ＞ 1 mg His-tagged GFP /ml of beads タンパク質精製 免疫沈降・低発現量のタンパク質精製 2012/02/01 14:23:52
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