Impossibile v isualizzare l'immagine. Seminario Aziendale " Gestione e trattamento precoce della sepsi grave “ Mantova, 4/12/2013 e 12/2/2014 EMOCULTURA CORRETTA ESECUZIONE IL LABORATORIO NELLA GESTIONE DELLE EMOCOLTURE ROSSELLA CERUTI S.C. LABORATORIO ANALISI - CIO Azienda Ospedaliera “C. Poma” MANTOVA EMOCOLTURA L’emocoltura è un esame microbiologico nel quale il sangue raccolto dal paziente viene inoculato in flaconi contenenti terreni di coltura liquidi specifici,per rilevare la presenza di batteri aerobi,anaerobi,miceti e fornire una guida nella valutazione della terapia più adatta (identificazione ed antibiogramma) CRITICITA’ • Timing prelievo • Accuratezza del prelievo • Numero prelievi • Volume sangue FLACONI • Flacone tappo verde per ricerca aerobi e miceti (5-10 ml) • Flacone tappo arancio per ricerca anaerobi (5-10 ml) • Flacone tappo giallo per ricerca aerobi e miceti (pediatrici 0.4-4 ml) • Flacone tappo nero per ricerca micobatteri (3-5 ml) • Emocoltura adulto :flacone aerobio+flacone anaerobio+adattatore blu • Emocoltura per Micobatteri:flacone dedicato+adattatore bianco COME RICHIEDERLA • GALILEO, ROUTINE, MICROBIOLOGIA • FLACONE (terreno,fondo,volume) • ETICHETTE • DATA PRELIEVO QUANDO INVIARLA • I flaconi devono essere consegnati in Laboratorio nel minor tempo possibile • In attesa della consegna i flaconi vanno conservati a temperatura ambiente e non refrigerati • Il Laboratorio accetta le emocolture 24 h su 24 h tutti i giorni compresi i festivi BACT ALERT INCUBATORE -AGITATORE Sistema di rilevazione microbica • Utilizzo di un sensore colorimetrico e di luce riflessa per monitorare la presenza di CO2 • I microrganismi metabolizzano i substrati presenti nel flacone con produzione di CO2 • La CO2 fa sì che il sensore verde azzurro gas permeabile presente sul fondo del flacone viri al giallo • La colorazione più chiara determina un aumento delle unità di riflettanza,monitorate e registrate dallo strumento ogni 10 minuti • Un algoritmo analizza il dato per determinare la positività • Il risultato è immediatamente notificato con allarmi sonori e visivi INCUBAZIONE • • • • Flaconi per aerobi e miceti Flacone per anaerobi Flaconi pediatrici Flaconi per Micobatteri 5 giorni 5 giorni 5 giorni 44 giorni • Incubazione protratta (21 giorni) per Brucella,endocardite,mielocoltura SEGNALARE IN NOTA REFERTAZIONE • Flacone negativo • Flacone positivo : - Esame microscopico (2 vetrini colorati con Gram e blu di metilene) - Semina su terreni di coltura solidi selettivi e non selettivi ESAME MICROSCOPICO • Batteri Gram negativi • Batteri Gram positivi • Cocchi Gram positivi (stafilococchi,streptococchi,pneumococchi • Cocchi Gram negativi • Miceti ESAME COLTURALE • Lettura piastre di coltura • COLTURA MONOMICROBICA : Identificazione/Antibiogramma • COLTURA POLIMICROBICA : Isolamento ,Incubazzione, Identificazione/Antibiogramma BATTERI GRAM NEGATIVI BATTERI GRAM POSITIVI BATTERI GRAM POSITIVI Corinebatteri COCCHI GRAM POSITIVI COCCHI GRAM POSITIVI COCCHI GRAM POSITIVI COCCHI GRAM NEGATIVI MICETI FLUSSO DI LAVORO • • • • • • • Paziente con batteriemia o sepsi Richiesta di emocoltura Prelievi e invio flaconi in Laboratorio Incubazione flaconi Positività flaconi Esame microscopico:avviso telefonico Esame colturale,incubazione terreni di coltura (18-24 h) • Identificazione ed antibiogramma • Referto definitivo (48-96 h) FALSI POSITIVI • Generalmente vengono considerati contaminanti gli Stafilococchi coagulasi negativi (CoNS),Corynebacterium spp,Bacillus spp,Streptococchi viridanti. • La probabilità di infezione “vera”,(in relazione a tipologia del paziente,condizioni predisponenti,presenza di dispositivi protesici)può essere del 10-15%per i CoNS,5%per Corynebacterium e Bacillus spp.,38% per Streptococchi viridanti • • Weinstein MP.J Clin Microbiol 2003;41:2275-8 Beekmann SE ,et al.Infect.Control Hosp Epidemiol 2005;26:559-66 EMOCOLTURE E CVC • Prelevare contemporaneamente un campione di sangue dal catetere e da vena periferica • Emocoltura da catetere positiva 2 ore prima rispetto a quella da vena periferica: infezione da catetere venoso centrale COME RIDURRE IL TAT - Esecuzione antibiogramma manuale direttamente da flacone positivo (previo esame microscopico) con referto preliminare - Semina su terreni cromogeni per evidenziare eventuali meccanismi di resistenza (ESBL,MRSA,) - Identificazione in pochi minuti da coltura e meccanismi di resistenza con spettrometria di massa (Maldi-Tof) - Metodiche molecolari CONCLUSIONI L’efficacia ed il significato clinico dell’emocoltura dipendono da molteplici aspetti organizzativi,metodologici ed interpretativi. Sono necessarie corrette procedure di prelievo,strumentazioni adeguate,un flusso di lavoro per fornire informazioni diagnostiche sempre più tempestive,un rigoroso protocollo di comunicazione
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