Risultati della Ricerca Protocollo di caratterizzazione

Risultati della Ricerca
Titolo
Protocollo di caratterizzazione fenotipica di ceppi di Lactobacillus helveticus
Descrizione estesa del risultato
Il protocollo è stato messo a punto presso il CRA-FLC di Lodi. Il protocollo ha previsto la
caratterizzazione fenotipica di ceppi di L. helveticus sulla base dello studio dell'attività proteolitica,
dell'attività peptidasica, dell'attività b-galattosidasica, dell'attività decarbossilasica e della capacità
autolitica dei ceppi. L’attività proteolitica è stata valutata in latte mediante test spettrofotometrico
OPA (orto-phtalaldeide) in grado di determinare gli α-amino-gruppi liberati dalla proteolisi delle
proteine del latte. I risultati sono stati espressi in riferimento ad una retta di taratura ottenuta
dosando con lo stesso metodo soluzioni a titolo noto di glicina. I ceppi sono stati inoculati (2%) in
latte in polvere ricostituito al 10% e incubati alla temperatura di 42°C per 48 ore. Una provetta non
inoculata è stata incubata alla stessa temperatura e utilizzata come controllo negativo. L’analisi è
stata eseguita in doppio per verificarne la ripetibilità. I risultati sono stati espressi come µg di
α-ammino-gruppi liberati su mL di campione. L’attività peptidasica è stata valutata su substrati
sintetici β-naftilati quali Arg-βNa, Leu-βNa, Glu-βNa per determinare la presenza di attività
aminopeptidasiche di tipo pepC e pepN (broad aminopeptidase) e Phe-pro-βNa per determinare
l’attività di tipo pepX (x-prolyl-dipeptydil aminopeptidase) o pepQ (prolidase). Il grado di attività
β-galattosidasica dei ceppi è stato valutato mediante test colorimetrico su una sospensione di cellule
raccolte in fase stazionaria di crescita utilizzando o-nitrophenyl-β-galactosidase (ONPG). Per ogni
ceppo sono stati raccolti valori di assorbanza a 420 e 560 nm. La capacità di produrre ammine
biogene per decarbossilazione specifica di amminoacidi è stata valutata in terreno agarizzato
addizionato di amminoacidi precursori. La positività al test viene evidenziata dal viraggio di colore
e dalla precipitazione dell’aminoacido attorno allo spot corrispondente. Il grado di autolisi dei ceppi
è stato valutato monitorando la diminuzione di assorbanza di una sospensione cellulare raccolta in
fase esponenziale di crescita dopo incubazione a 37°C per 24 ore in tampone fosfato.
Il protocollo può servire a laboratori di ricerca per la caratterizzazione di ceppi di batteri lattici da
utilizzare per lo sviluppo di fermenti selezionati o per la caratterizzazione di ceppi presenti nella
propria ceppoteca. Il risultato è prontamente trasferibile all'utilizzatore finale purchè abbia
conoscenze di microbiologia e abbia un laboratorio con le adeguate attrezzature scientifiche. Per
eventuali chiarimenti riguardanti il protocollo descritto contattare il referente della scheda Dr.
Carminati.
Responsabile del risultato
Domenico Carminati
Via Antonio Lombardo, 11, 26900 – LODI ()
Tel.: +39-0371-45011
E-mail: [email protected]
Anno
2014
Classificazione del risultato
Comparto produttivo: Alimenti/bevande dell’industria alimentare (gelati, biscotti, birra, ecc.)
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ALIMENTI/BEVANDE DELL'INDUSTRIA ALIMENTARE
Particolari categorie PRODOTTI TIPICI/TRADIZIONALI
di prodotti/comparti Prodotti tipici/tradizionali
produttivi:
Categorie di ambiti di TEMATICHE TECNICHE SU SPECIFICHE FASI DELLE FILIERE
ricerca:
PRODUTTIVE
Qualità dei prodotti
QUALITÀ DEI PRODOTTI IN GENERALE
Parole chiave
protocolli, biodiversità microbica
Trasferibilità del risultato
Si, trasferibilità immediata
Natura del risultato
di processo
Aree interessate
Aree a clima continentale
Aree a clima mediterraneo
Impatto dal punto di vista tecnico
ottimizzazione delle attività produttive
Impatto dal punto di vista socioeconomico
miglioramento qualitativo
valorizzazione prodotti tipici/tradizionali locali
Impatto dal punto di vista ambientale
tutela biodiversità
Presupposti di contesto
formazione imprenditori/lavoratori
impianti/attrezzatura/laboratori specifici
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Soggetti istituzionali da coinvolgere
Consorzi di tutela e valorizzazione
Consorzi di produttori
Enti di ricerca
Potenziali utilizzatori
Laboratori pubblici per la qualità alimentare
Industrie di settore
Consorzi di tutela e valorizzazione
Enti di ricerca
Università
Modalità di diffusione
Attraverso convenzioni operative per specifiche attività
Partenariati ricerca e competitività
Progetti comuni con i vari soggetti, istituzionali e non, interessati
Progetti comuni con consorzi di tutela
Pubblicazioni
Non sono presenti Pubblicazioni collegate al risultato
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Progetto / Ricerca di riferimento
Titolo del progetto
Caratterizzazione di batteri lattici termofili Sacco - SACCOLAB
Coordinatore del progetto
Domenico Carminati
Via Antonio Lombardo, 11, 26900 – LODI ()
Tel.: +39-0371-45011
E-mail: [email protected]
Ente finanziatore
SACCO S.r.l.
Breve descrizione del progetto e dei suoi obiettivi
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Lo studio è rivolto ad approfondire le conoscenze su proprietà metaboliche e caratteristiche
tecnologiche di ceppi di lattobacilli termofili della società SACCO srl da applicare nella
fabbricazione di formaggi e latti fermentati. I ceppi, appartenti alle specie Lb. helveticus e Lb.
delbrueckii subsp. lactis, saranno indagati per quanto riguarda la sensibilità fagica, la lisogenia,
l'attività proteolitica, la capacità di autolisi e l'attività decarbossilasica. Questi caratteri possono
variare anche considerevolmente all'interno della specie, e la loro conoscenza diventa importante
per selezionare i ceppi con le caratteristiche più idonee per formulare colture starter per
applicazioni lattiero-casearie diverse.
U.O. / Partner coinvolti nella realizzazione del risultato
Non sono presenti Unità operative collegate al risultato
Referenti istituzionali già coinvolti nella ricerca
Non sono presenti Referenti già coinvolti per il risultato
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