ΟΛΙΚΕΣ ΠΡΩΤΕΙΝΕΣ BIURET ΑΡΧΗ ΜΕΘΟΔΟΥ ΜΕΘΟΔΟΣ (Ολοι οι όγκοι δηλώνουν ml) Σε αλκαλικό περιβάλλον οι πρωτεϊνες αντιδρούν με ιόντα Cu++ προς έγχρωμο προϊόν. Η αύξηση της απορρόφησης στα 540 nm είναι ανάλογη της συγκέντρωσης των πρωτεϊνών στο δείγμα. Μήκος κύματος : 540 nm (530 - 570 nm)ο Θερμοκρασία : Περιβάλλοντος (20 - 30 C) Κυψελίδα : 1 cm Σταθερότητα χρώματος : 2 ώρες όπου Τ : τυφλό, Δ : δείγμα, S : πρότυπο Διάλυμα ιόντων χαλκού Πρότυπο πρωτεϊνών Δείγμα Τ 1.0 - Δ 1.0 0.02 S 1.0 0.02 ο Παραμονή 30 min σε θερμοκρασία 15-30 C. Ανάδευση Φωτομέτρηση έναντι τυφλού, σε μήκος κύματος 540 nm. ΦΥΣΙΟΛΟΓΙΚΕΣ ΤΙΜΕΣ g/dl 1.Ενήλικες 2.Νεογνά (μέχρι 4 εβδομάδων) 3.Βρέφη (2 - 12 μηνών) 4.Παιδιά (πάνω από 12 μηνών) ΥΠΟΛΟΓΙΣΜΟΙ 6.6 - 8.7 4.6 - 6.8 4.8 - 7.6 6.0 - 8.0 Ολικές πρωτεϊνες (g/dl) = AΔ/AS x τιμή προτύπου(g/dl) Η τιμή του προτύπου αναγράφεται στο φιαλίδιο. ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΑ ΓΡΑΜΜΙΚΟΤΗΤΑ Μονού αντιδραστηρίου Μέχρι 12 g/dl ανάλογα με τον τύπο του αναλυτή R2.Διάλυμα ιόντων χαλκού R4.Πρότυπο διάλυμα Ολικών Πρωτεϊνών (όπου απαιτείται) (η τιμή αναγράφεται στο φιαλίδιο) CALIBRATOR/ ΟΡΟI ΕΛΕΓΧΟΥ (Δεν παρέχονται με το κιτ) Διπλού αντιδραστηρίου ΠΑΡΑΤΗΡΗΣΕΙΣ R1. Διάλυμα Τρυγικών R2. Διάλυμα ιόντων χαλκού 1. Εάν το φωτόμετρο απαιτεί μεγαλύτερο όγκο φωτομέτρησης, πολλαπλασιαστε τους χρησιμοποιούμενους όγκους x 2,5 2. Η χρήση του πρότυπου διαλύματος στη βαθμονόμηση του αναλυτή δεν συνιστάται λόγω διαφορετικής υφής του φέροντος μίγματος (matrix) ως προς τον ορό. Σε πολλές περιπτώσεις η επίδραση αυτή είναι αμελητέα σε άλλες όμως όχι. Γι’ αυτό το λόγο η χρήση του πρότυπου διαλύματος ως calibrator ή ορός ελέγχου δεν επιτρέπεται. Biomultical, Bionorm, Biopath ΠΑΡΑΣΚΕΥΗ ΔΙΑΛΥΜΑΤΟΣ ΕΡΓΑΣΙΑΣ Τα αντιδραστήρια χρησιμοποιούνται ως έχουν. ΤΕΛΙΚΕΣ ΣΥΓΚΕΝΤΡΩΣΕΙΣ Τρυγικό κάλιονάτριο 18 mM, ιόντα χαλκού 8 mM, ιωδιούχα 10 mM, καυστικό νάτριο 100 mM. ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΑ ΧΡΟΝΟΣ ΖΩΗΣ ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΩΝ 1.Weichselbaum T.E.Amer.J.Clin.Path.16 40 (1946) ο Αναγράφεται στο set, σε θερμοκρασία 2-10 C. Σταθερότητα επί του αναλυτή περίπου 1 μήνα. ΧΡΗΣΙΜΟΠΟΙΟΥΜΕΝΟ ΔΕΙΓΜΑ Ορός. Σταθερότητα πρωτεϊνών ο θερμοκρασία 2-10 C. στο δείγμα, 6 ημέρες σε ΒΙΟΤΕΧΝΟΛΟΓΙΚΕΣ ΕΦΑΡΜΟΓΕΣ ΕΠΕ Αιγίνης 16 17342 Αγιος Δημήτριος Αθήνα Τηλ: 00302109855811 Fax: 00302109855446 e mail: [email protected] www.biosis.com.gr ΤΕΧΝΙΚΑ ΧΑΡΑΚΤΗΡIΣΤΙΚΑ ΣΥΣΚΕΥΑΣΙΑ Γραμμικότητα (Linearity): Η Αντίδραση είναι γραμμική στην περιοχή συγκεντρώσεων από 0,09-12 g/dl Μονού αντιδραστηρίου Αναλυτική ευαισθησία - όριο ανίχνευσης (Sensitivity): Το όριο ευαισθησίας του προσδιορισμού υπολογίστηκε ότι αντιστοιχεί με 0,09g/dl Πιστότητα (Precision): Επαναληψιμότητα (Repeatability): A. Δεδομένα εντός του αυτού κύκλου ανάλυσης: Αριθμός Μέση SD CV δειγμάτων Τιμή mg/dl % 10 5,21 0,047 0,90 10 5,32 3,93 0,73 20 7,68 0,085 1,10 Αναπαραγωγιμότητα (Reproducibility): Β. Δεδομένα διαφόρων κύκλων και ημερών ανάλυσης: Αριθμός Μέση SD CV δειγμάτων Τιμή mg/dl % 14 5,19 0,20 3,85 13 5,42 0,25 4,62 13 6,60 0,14 2,16 4 x 50 ml 4 x 100 ml Διπλού αντιδραστηρίου R1 : 3 x 46 ml R2 : 1 x 50 ml Παρεμποδίσεις - αλληλεπιδράσεις (Interferance): Δεν παρουσιάζουν σημαντική αναστολή μέχρι τα αναφερόμενα όρια Παρεμποδιστής Έκφραση σε Όρια mg/dl Αιμόλυση Αιμοσφαιρίνη ~500 Θολερότητα Τριγλυκερίδια ~1000 Ίκτερος Χολερυθρίνη ~20 Ανάλυση παλινδρόμησης ( Regression Analysis): Μέθοδος: Γραμμική παλινδρόμηση (Linear Regression) Αριθμός Δειγμάτων : 39 Όρια συγκέντρωσης : 3,77-9,39 g/dl Σχέση : y = -0,13+1,03 x Όπου y η παρούσα μέθοδος και x παρεμφερής μέθοδος προσδιορισμoύ. Συντελεστής συσχέτισης r=0,991 ΒΙΟΤΕΧΝΟΛΟΓΙΚΕΣ ΕΦΑΡΜΟΓΕΣ ΕΠΕ Αιγίνης 16 17342 Αγιος Δημήτριος Αθήνα Τηλ: 00302109855811 Fax: 00302109855446 e mail: [email protected] www.biosis.com.gr ΒΙΟΤΕΧΝΟΛΟΓΙΚΕΣ ΕΦΑΡΜΟΓΕΣ ΕΠΕ Αιγίνης 16 17342 Αγιος Δημήτριος Αθήνα Τηλ: 00302109855811 Fax: 00302109855446 e mail: [email protected] www.biosis.com.gr