Run 98
Immunocytochemistry
IN THIS ISSUE
Short Report
UK NEQAS ICC & ISH
User Survey 2012
Page
4-9
Results - Summary Graphs - Pass Rates
Best Methods - Selected Images
Assessment Dates:
25th June - 20th July 2012
Immunocytochemistry Modules
General Pathology:
CD31/CD34 & TTF-1
Breast pathology:
PR
10-17
Molecular Pathology: Focussing on Patients
October 12th – 14th 2012
18-25
Breast pathology:
HER2 IHC
26-32
Gastric:
HER2 IHC
33-41
Lymphoid pathology:
CD30 & BCl-6
42-49
Neuropathology:
Synaptophysin & Tau
50-57
Cytology:
CD45 & Calretenin
58-65
Alimentary Tract:
GIST: CD117 & DOG-1
66-73
A joint meeting provided by
UK NEQAS for ICC & ISH and UK NEQAS for Molecular Genetics
at
The Beaumont Estate Hotel & Conference Centre
Old Windsor, UK
www.beaumonthousewindsor.co.uk
In-situ Hybridisation Modules
Breast:
HER2 ISH Interpretive
75-78
Breast
HER2 ISH Technical
79-86
Commercial sponsors in this Issue
See Pages 2-3 for Programme and Registration
Details
© UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent
General Information
Data shown in this article is collated from UK NEQAS ICC & ISH assessments and is presented and described ‘as collected’, and
does not ether endorse nor denounce any particular product or method and is provided as a guide to highlight optimal and suboptimal staining methodologies.
UK NEQAS ICC & ISH does not endorse any of the products featured by the commercial sponsors and are placed at the
discretion of UK NEQAS ICC & ISH. Furthermore, commercial companies featured do not have any input or influence
over the content, including results that are shown.
For further information of the UK NEQAS
ICC & ISH scheme, general EQA
enquiries, slide returns and advertising
opportunities please contact:
For enquiries concerning training issues,
meetings, or courses, please contact:
Dr Merdol Ibrahim, Scheme Manager
UK NEQAS ICC & ISH
Suite 3/02 Hamilton House
Mabledon Place
London WC1H 9BB, UK
Tel: (+44)207 554 8678
E-mail: [email protected]
Mr Keith Miller, Scheme Director
UK NEQAS ICC & ISH
UCL-AD, 21 University Street, University
College London
London WC1E 6JJ, UK
Tel: (+44)207 679 6048
E-mail: [email protected]
Director
Mr Keith Miller
([email protected])
Deputy Director
Mr Andrew Dodson
([email protected])
Assistant Manager
Ms Suzanne Parry
([email protected])
Manager
Dr Merdol Ibrahim
([email protected])
Office Manager
Mrs Ailin Rhodes
([email protected])
Quality Manager
Mr Neil Bilbe
([email protected])
Clerical Assistant
Mrs Clara Lynch
([email protected])
ASSESSORS
United Kingdom
Mr C Abbott, Bristol
Dr N Atkey, Southampton
Dr M Arends, Cambridge
Dr M Ashton-Key, Southampton
Mrs J Bell, Nottingham
Mr N Bilbe, London
Mr D Blythe, Leeds
Mr J Brown, London
Dr L Carson, Aberdeen
Ms E Clark, Surrey
Mrs A Clayton, Preston
Mrs A Cramer, Manchester
Dr S Di Palma, Surrey
Mr A Dodson, Liverpool
Mrs G Donald, Maidstone
Dr D Faratian, Edinburgh
Mr R Fincham, Cambridge
Mr D Fish, Reading
Mrs S Forrest, Liverpool
Dr I Frayling, Cardiff, Wales
Ms J Freeman, London
Dr C Gillett, London
Ms J Gorst, Bucks
Mr J Gregory, Birmingham
Prof A Hanby, Leeds
Mr N Hand, Nottingham
Ms L Happerfield, Cambridge
Dr R Hunt, Stockport
Dr M Ibrahim, London
Mr P Jackson, Leeds
Prof B Jasani, Cardiff
Mrs N Johnson, Cambridge
Ms S Jordan, London
Dr J Joseph, Preston
Mrs M Judd, Southampton
Mrs J MacMillan, Glasgow
Mr C Marsh, Newcastle
Dr P Maxwell, Belfast
Dr G King, Aberdeen
Mrs H McBride, Belfast
Mr J McGloin, London
Dr S McQuaid, Belfast
Mr K Miller, London
Ms J Moorhead, London
Dr M Morgan, Cardiff
Ms P Jones, London
Ms A Newman, London
Mrs L Necus, Kettering
Dr G Orchard, London
Ms S Parry, London
Dr S Pinder, London
Dr M Pitt, Preston
Mrs F Rae, Edinburgh
Dr A Riley, Stirling
Mr G Rock, Birmingham
Mr J Ronan, Nottingham
Dr J Starczynski, Birmingham
Mrs C Thomas, Preston
Mr P Thompson, Leeds
Mr A Watson, Newcastle
Mr P Wencyk, Nottingham
Mrs H White, Maidstone
Mrs J Williams, Portsmouth
Ms S Wozniak, Cardiff
Australia
Mrs J Brincat, Victoria
Canada
Mrs J Tunnicliffe, Vancouver,
Prof. J Bartlett, Toronto
Denmark
Mr J Askaa, Copenhagen
Dr E Baslev, Herlev
Dr B Rasmussen, Roskilde
Germany
Dr Iris Nagelmeier, Kassel
Slovenia
Dr M Flezar, Ljubljana
Mrs I Kirbis, Ljubljana
South Africa
Mrs R Van Wijk, Cape town
Sweden
Dr G Elmberger, Stockholm
Switzerland
Prof. Pierre-Andre Diener, St
Gallen
Hungary
Dr T Krenacs, Szeged
Ireland
Prof E Kaye, Dublin
Mr K McAllister, Dublin
Dr T O’Grady, Dublin
Ms Yvonne Connolly, Dublin
Dr Hilary Magee, Dublin
Portugal
Dr J Cabecadas, Lisbon
Dr M Franco, Lisbon
Dr F Schmitt, Porto
Mr A Ferrero, Lisbon
Mrs T Periera, Lisbon
Mr R Roque, Lisbon
Mr J Matos, Lisbon
Journal layout and design prepared by UK NEQAS ICC & ISH
© UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent
1
Meeting Announcement
Molecular Pathology: Focussing on Patients
October 12th – 14th 2012
A joint meeting provided by
UK NEQAS for ICC & ISH and UK NEQAS for Molecular Genetics
at
The Beaumont Estate Hotel & Conference Centre
Old Windsor, UK
www.beaumonthousewindsor.co.uk
Friday 12th October
12.00
Breast Cancer
Registration and buffet lunch
Lung Cancer: Pathology, Personalised Therapy &
Related Biomarkers
14.00
Introduction by chairman
Professor Adrienne Flanagan (UCL Cancer Institute)
14.45
Histopathology of lung cancer
Dr Mary Falzon (University College London
Hospitals)
15.30
Refreshments and trade
15.50
“Personalized Therapy for Advanced Non-small
Cell Lung Cancer
Professor Roy Hebst (Yale Comprehensive Cancer
Centre)
16.30
ALK Rearrangements in Non-Small Cell Lung
Cancer
Dr Jens Dhein (Abbott Molecular)
17.20
Summary and discussion
11.00
Usual and unusual molecular Her-2/neu signal
patterns in breast carcinoma
Dr Matteo Brunelli (Verona, Italy)
11.50
HER2 IQFISH pharmDx™. Get your In Situ
Hybridization Results in 3½ hours.
Performance Evaluation – Results from IntraLaboratory Comparison Study
Dr Iris Nagelmeier (Targos)
Clinical Perspectives – How will this new
Technology Change the Use of ISH in Cancer
Diagnostics and the value for Oncologist and
Patients
Dr Kenneth Bloom (GE Health Care- Clarient)
12.35
Lunch and trade
14.00
Introduction by chairman
Andrew Dodson (Liverpool Royal Infirmary)
14.05
The Roche oncology pipeline
Dr Julian Cole (Roche Products Ltd)
14.50
The Roche biomarking pipeline
Dr Eric Walk, (Ventana – Tucson)
15.35
Refreshments and trade
th
Saturday 13 October
Novel Slide Based Testing
9.00
Introduction by chairman
Professor Bharat Jasani (University of Wales College
of Medicine)
9.05
Modern slide based predictive testing
Dr Kenneth Bloom (GE Health Care- Clarient)
16.00
Pathology of the GI tract
Professor Marco Novelli ( UCLH)
9.50
Current status of IHC4 in breast cancer
Professor Mitch Dowsett (ICR Royal Marsden
Hospital)
16.45
The impact of cetuximab therapy on colorectal
cancer
TBC
10.35
Refreshments and trade
17.30
Summary and discussion
GI Tract: Pathology, Personalised Medicine &
Targeted Therapy
© UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent
2
Meeting Announcement
Sunday 14th October
Session 3
Selected Topics
9.00
Introduction by chairman
Dr Matteo Brunelli (Verona, Italy)
9.05
Aspects of Quality Assessment (Part I)
Dr Merdol Ibrahim (UK NEQAS –ICC & ISH, UCL)
9.40
UK NEQAS ICC & ISH scheme updates: Technical
modules for breast ISH and Gastric ICC HER2
Suzanne Parry (UK NEQAS –ICC & ISH, UCL)
10.15
Refreshments and trade
10.45
Oncotype DX
Dr Christer Svedman (Genomic Health)
11.30
The role of NICE in biomarker approval
Professor Ian Cree (Warwick University Hospital)
12.15:
Summary, discussion and presentation of poster
prizes.
12.30
Lunch and depart
Satellite Meetings
Saturday 13th October
Molecular Pathology
Meeting Leader – Dr Sandi Deans
16.00
Introduction by chairman
Dr Philippe Taniere (Birmingham)
16.05
Metastatic Melanoma – The disease and current
treatment
TBC
16.45
Metastatic Melanoma – The laboratory’s
perspective
Dr David Gonzalez de Castro (Royal Marsden
Hospital)
UK NEQAS Mock Assessments
10.00 - 6.00. UKNEQAS –ICC & ISH (Meeting Leader – Dr
Merdol Ibrahim, UKNEQAS –ICC & ISH)
ALK Workshop
12.30 -14.00. Workshop for ALK in Non-Small Cell Lung
Cancer (Workshop Leader - Michael Gandy, UCL-Advanced
Diagnostics)
Conference dinner and entertainment
from 19.00
Sunday 14th October
9.00 - 2.30. UK NEQAS - CPT (Meeting Leader –
Garry Thompson (UKNEQAS-CPT)
Session 1
9.25
Introduction by chairman
Dr Sandi Deans (UK NEQAS for Molecular Genetics)
9.30
Aspects of personalised medicine
Dr Hendrik-Tobias Arkenau (Sarah Cannon Research POSTERS
Abstracts are invited for posters – closing date 31st
UK) TBC
9.30 - 11.00. Workshop on Gastric HER-2 (Workshop
Leader - Dr Iris Nagelmeier, Targos)
August 2012
10.30: Refreshments and Trade
11.00
Crizotinib: a wonder drug?
Dr Sanjay Popatt (Royal Marsden Hospital)
11.50
Molecular diagnostics in lymphoma
Professor Ming Du (Addenbrooke’s Hospital)
12.30
Lunch and Trade
Session 2
14.00
Introduction by chairman
Dr Rachel Butler (Cardiff)
14.05
Molecular markers in ovarian cancer
Dr James Brenton (CR-UK) TBC
CRUK Stratified Medicine
Dr James Peach (CR-UK) TBC
14.50
15.35
Royal College and IBMS CPD points – to be
confirmed
For Further Details & Registration
Click HERE
Or Visit www.ukneqasicc.ucl.ac.uk/
meetings.shtml
Refreshments and Trade
© UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent
3
UK NEQAS ICC & ISH User Survey 2012: Participant Feedback
Neil Bilbe, Merdol Ibrahim and Keith Miller
Introduction
Survey questions and topics
As part of the annual requirements of an EQA scheme to
assess user satisfaction, a survey was sent to all participants
in May 2012.
Q1. Packaging of samples
Method
Q3. Time to stain/return samples
In May 2012, approximately 528 active participants were
registered with UK NEQAS ICC & ISH. An email, with a link to
the online survey, was sent to each of them, along with
instructions.
Participants were given 1 month to respond – the closing date
was June 8th 2012.
At the start of the survey, there were 5 mandatory fields to
complete:





Participant Number
Region (UK or non-UK)
Person completing survey
Yearly workloads
Modules participated in for year 2011/2012 (Runs: 94 – 97)
There were also a number of optional fields including ‘How
long have you been using our service’
Q2. Labelling of slides, module identification
Q4. Details in cover letter and online
Q5. Procedure for returning samples
Q6. Web based format of the results
Q7. Assessor comments and feedback
Q8. Technical help and advice
Q9. Communication with UK NEQAS ICC & ISH
Q10. Dealing with complaints
Q11. Ease of contacting UK NEQAS ICC & ISH
Q12. The UK NEQAS ICC & ISH E-Journal
Q13. UK NEQAS ICC & ISH meetings generally
Q14. Location of UK NEQAS ICC & ISH meetings
There were 26 main questions. For the first 16 questions
respondents were asked to give a rating of:

Very Satisfied

Satisfied

Neutral

Dissatisfied or

Very Dissatisfied
Question 17 asked how likely participants were to continue
using the service; questions 18, 19, 20, 21, 23 and 24 required
a Yes or No type response.
Questions 22 A, B, & C asked participants to rate the quality of
the EQA material.
The final two questions (Q. 25 & 26) asked for the overall
rating of our service; firstly by satisfaction level, and secondly,
with a score out of 10.
At the end of the main survey there were 4 additional
questions (optional) relating to the use of in-house controls.
Return Details
167 single replies were received, (any duplicate, incomplete or
multiple entries were deleted), approximately 32% of
participants.
Q15. Content or type of meetings
Q16. Number of meetings
Q17. How likely to continue using our service
Q18. Would you recommend service to others
Q19. Ever had cause to complain to UK NEQAS ICC &
ISH office
Q20. Do you treat UK NEQAS ICC & ISH samples
differently to your in-house controls/slides
Q21. Do you find the assessment of your in-house
controls useful
Q22. How do you rate the quality of:
EQA Tissue sections
EQA Cytospins
EQA Cell Lines
Q23. Do you use your EQA results to try and improve
the quality of your in-house staining
Q24. Have you ever requested a reassessment
Q25. Overall how satisfied with our service
Q26. Rating of UK NEQAS ICC & ISH out of 10
67 (40%) of replies were from UK participants 31% of all
registered UK participants
100 (60%) of replies were from overseas (OS) participants
32% of all registered non-UK participants.
© UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent
4
UK NEQAS ICC & ISH User Survey 2012: Participant Feedback
At the end of each section, or following some individual
questions, there were comments sections allowing participants
to express their views, or make any comments they felt would
be useful to UK NEQAS ICC & ISH management.
Overall analysis of satisfaction
Results from the response to Q. 25 & Q. 26 relating to overall
satisfaction levels.
User Survey 2012: Level of Satisfaction by Percentage
(S) Slides & module labelling/identification: 58%
(D) Web based format of results/Time to stain and return
slides (2 topics): 3.5%
Part 2: Participant feedback and
communication section (Q. 7 – 12)
(S) Ease of contacting UK NEQAS: 30.5%
(D) Assessor comments and feedback: 12.5%
80%
70%
Part 1: Sample and results section (Q. 1 – 6):
65.66%
60%
Part 3: UK NEQAS ICC & ISH meetings section
(Q. 13 – 16)
% of Labs
50%
40%
(S) UK NEQAS ICC & ISH meetings: 10.1%
(D) Location of meetings: 6.5%
30%
24.70%
20%
9.64%
10%
0.00%
0.00%
Dissatisfied
V. Dissatisfied
0%
V. Satisfied





Satisfied
Neutral

Very Satisfied (41)
Satisfied (109)
Neutral (17)
Very/Dissatisfied
Part 4: Specific questions about the service (Q.
17 – 21)
These required answers not related to satisfaction or
dissatisfaction.
24.7%
65.7%
9.6%
0%
17. How likely are you to continue to use our service?
Effectively, over 90% of users were either Very Satisfied or
Satisfied with the service, 9.6% responded to being Neutral.
There were no Dissatisfied responses this year (1 in 2011).
Response by region:
UK (67)
OS (100)
Very Satisfied
21 (31.3%)
20 (20%)
Satisfied
43 (64.1%)
66 (66%)
3 (4.4%)
14 (14%)
0 (0%)
0 (0%)
18. Would you recommend this service to others?
Neutral
Very/Dissatisfied
N.B. In general, more UK labs expressed higher percentages
of satisfaction than OS labs.
Replies to individual questions
The response to individual questions was not mandatory,
therefore the number of participants leaving feedback varied
from question to question, and topic to topic.
The highest levels of very satisfied (S) and highest level of
dissatisfaction (D) for each of the sections is summarised
below.
19. Have you ever had cause to complain to UK NEQAS
ICC & ISH in last year?
© UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent
5
UK NEQAS ICC & ISH User Survey 2012: Participant Feedback
20. Do you treat UK NEQAS ICC & ISH samples differently
to your in-house sections/samples?
21. Do you find the assessment of your in-house controls
useful?
Question 23 asked whether labs used their
EQA results to improve in-house staining
Question 24 asked whether labs had ever
requested a reassessment of their EQA result
Questions 22 A, B & C related to the quality of
the EQA material
Module Related Data
a. Tissue sections
The average number of modules that labs participate in is 3.5;
the combined number of modules for all labs responding was
583, the number of labs for each module was:
b. Cytology preparations
When this is compared to the actual number of labs registered
for each module:
c. Cell lines
On average 35.6% of labs registered for a particular module
responded to the survey, with a median of 33.6%. Lowest
response 29.4% (Her2 both ICC & ISH), highest 48.1%
(Cytology).
© UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent
6
UK NEQAS ICC & ISH User Survey 2012: Participant Feedback
Overall rating of UK NEQAS ICC & ISH out of 10
by module (Q. 26)
There is little difference in the two sets of figures, with over
90% of participants ‘satisfied’ in both surveys.
Using the same method employed for the 2010 and 2011
surveys, the percentage of non-satisfied responses derived
from totalling up all the relevant individual questions (Q. 115/16) is 3.1% (2010), 3.3% (2011) and 3.0% (2012) so again
static.
Levels of dissatisfaction 2011 v 2012
The lowest levels of satisfaction in 2011 are compared with
the results for 2012:
The average score was 7.8 (same as last year), with a low of
7.7 (cytology and neuropathology) and a high of 8 (HER2
ISH). The median was also 7.8.

Location of meetings (same level)

Assessor comments (improved)

Online report format/data input (improved)

Time given to stain samples (worse)

Handling of complaints (improved)

Receipt of samples (same)
Most of these changes are small +/- 1 - 2%
Overall satisfaction levels by module (Q. 25)
Topic
Using the combined Very Satisfied and Satisfied percentages
returned for each module the results are:
2011 %
(Dissatisfied)
2012 %
(Dissatisfied)
Location of meetings
7.1
7
Assessor comments
13.6
12.5
Online reports/data input
6.4
3.5
Handling of complaints
2.1
1.1
0
0
2.8
4
Receipt of samples
Time given to stain samples
Comments, suggestions, and feedback about
the service:
With a low of 84.2% (cytology) and a high of 96% (HER2 ISH)
this mirrors the scores out of 10 (see graph above).
Comparisons with data from 2011 Survey
The levels of satisfaction remain relatively unchanged, but
with a slight decrease in the number of Very Satisfied ( 6.8%)
responses and an increase in the Satisfied ( 7.1%)
responses
Comments were returned throughout the survey; these were
collated and categorized into 6 main areas:
 Sample and results section
 Participant feedback and communication section
 UK NEQAS ICC & ISH meetings section
 Quality of UK NEQAS ICC & ISH EQA material
 General comments and feedback about the service
 Comments relating to the in-house controls mini survey
Responses
2011 (%)
2012 (%)
Very Satisfied
31.5
24.7
Satisfied
58.6
65.7
All other responses
9.9
9.6
(this will form part of a separate article and therefore will not
be discussed here)
It is not possible to list all the comments, many were not
relevant to the section or questions they appeared in or
responded to, and several participants made the same or a
similar comment.
© UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent
7
UK NEQAS ICC & ISH User Survey 2012: Participant Feedback
Suggestions and Comments “with a response
from UK NEQAS ICC & ISH”
Cover letters and emails should mention both ICC and the
ISH run numbers and references
“The HER2 ISH run number, along with the ICC run numbers,
will appear on future participant communications (letter, email
etc)”
Late receipt of slides and hence return of samples
(Overseas labs)
“UK NEQAS ICC & ISH appreciates that slides sent to some
countries/regions takes longer than we would like, any labs
experiencing particular difficulties are advised to contact the
scheme. There is an option for slides to be sent by courier, but
the labs have to pay for this. Labs are not penalised for late
submissions, but we do audit the receipt times.”
Data entry still complicated and time consuming
“In order for us to give the level of feedback we desire (best
methods etc) input of data relating to methodologies is
extremely important. In order to ensure that labs re-enter
important data every time these fields are not saved for each
run and are mandatory”
More information on UK NEQAS ICC & ISH samples
(pathology, fixation and processing)
“The amount of information we are able to provide is
dependent on the details we receive from the EQA material
supplier, but we will endeavour to obtain as much as we can”
Variable and conflicting assessor comments particularly
for breast modules (ER/HER2)
“The breast modules are amongst the most difficult to assess,
and like any staining method are very subjective; the
comments are those of the individual assessors, UK NEQAS
ICC & ISH does not audit these prior to reports being
generated. Participants are welcome to contact the scheme
concerning any report related issues.”
Cell lines require different (pre) treatments to paraffin
sections making staining difficult or tricky
“This should only apply to certain modules or tissue types, but
UK NEQAS ICC & ISH is aware that the preparation (fixation
etc) of cell lines may differ from tissue sections”
Publication of the ISH reference centre methodologies
“Best methods are available as part of the standard feedback,
both online, and in the E-Journal. UK NEQAS ICC & ISH will
look at the feasibility of collating the reference centre
methods”
“The forthcoming meeting at Windsor will have ICC and ISH
workshops. UK NEQAS ICC & ISH is also planning to run
some local technical meetings for all modules, as well as
possibly introducing webcasts to its educational portfolio”
Cell blocks more common than cytospins now
“UK NEQAS ICC & ISH currently uses effusions to create a
mixed cellular population. Cytospins are an accepted
preparation method in most labs and are a cytological sample.
The use of cell blocks may be trialled in the future, but in view
of the range of techniques in cytology, cytospins are
considered the best compromise at present”
UK NEQAS ICC & ISH samples do not reflect laboratory
day-to-day specimens
“Samples used by UK NEQAS ICC & ISH are taken from
routine surgical cases and normally treated the same as for
the diagnostic samples on the same cases. Given the quantity
of material required for some of the modules may mean that
on occasion, we are unable to obtain sufficient amounts of
material resulting in samples being treated differently. The
tissue, fixation and section details are provided as part of the
online data”
More antigen specific staining criteria
“UK NEQAS ICC & ISH provides an overview of the staining
requirements and characteristics of the antigens it requests.
The tissue type and pathology (where appropriate) should
allow labs to glean the expected staining of our EQA samples”
Website often out-of-date and lacks information
“The UK NEQAS ICC & ISH website is currently listed as a
future scheme enhancement, but with the recent launch of
several new modules and other upgrades, is now temporarily
on hold. The new UK NEQAS ICC & ISH E-Journal contains
the most up-to-date technical feedback and news”
Variety of antibodies needs to be expanded (cytology)
“We carried out a user ‘antibody repertoire’ survey earlier this
year, we will be contacting our suppliers with the details of any
markers not currently being used by UK NEQAS ICC & ISH so
that they may be able to provide suitable material in order for
us to do so in the future”
Slides received broken more than previously
“The final handling and carrying of the packages sent out to
participants is not overseen by UK NEQAS ICC & ISH. This
will be discussed to see if arrangements can be made to
minimise this as much as possible”
More technically based meetings and workshops (ISH)
with some done online
© UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent
8
UK NEQAS ICC & ISH User Survey 2012: Participant Feedback
Data entry only remembers details for 1st stain not 2nd
“The online entry system should store both sets of data. It is
important to remember that until both sets of details have
been added, to use the Save button so that you can return at
a later date”
Control material (tumours etc) very precious so are
reluctant to use for EQA purposes
“It is understandable that labs are reluctant to use valuable
material for EQA purposes, but EQA samples should ideally
be treated/stained alongside routine material demonstrating
the same antigen. Admittedly, this creates a problem
concerning the use and availability of the control slide(s). If
this information is relayed to UK NEQAS ICC & ISH we will be
aware of the reason for the use of the particular control
material/slide submitted”
Summary
Levels of participant satisfaction remain high at c. 90%. The
actual level of Very Satisfied respondents showed a decrease
from 31.5% (2011) to 24.7% (2012). The reason for this
appears to be the reduction in Very Satisfied UK participants
(down 9.7%).
The main areas where there were any significant differences
in dissatisfaction between UK and OS labs are for ‘time taken
to return slides’ and the ‘procedure for returning samples’.
This possibly reflects the increase in OS participants and
decrease in UK labs, so is perhaps not unexpected.
The percentage of UK labs returning adverse comments
concerning: ‘Assessor comments and feedback’ and ‘The
number of UK NEQAS ICC & ISH meetings’ was higher than
for OS labs; all other areas were equal. The overall number of
dissatisfied response to all questions was exactly 50:50
between UK and OS labs (32/64 each).
The survey results will be reviewed and discussed further, at
UK NEQAS ICC & ISH Quality Management meetings, and
the Annual Management Review, October 2012.
UKNEQAS ICC & ISH staff and management would like to
thanks all the users and participants for their time and
comments whilst completing this survey. If you require any
further information, or wish to contact the office concerning
this article, please write, call, or email: [email protected]
When comparing the score out of 10 results from last year, the
overall response is the same at 7.8/10. Only three modules
showed any significant difference in scores:
1.
General Path (up) 7.6 to 7.9
2.
HNPCC (down)
8.4 to 7.9
3.
HER2 ISH (up)
7.7 to 8.0
The feedback received via the assessor comments, all
aspects of the online data input, and the results format, are
still the main cause of adverse comments and dissatisfaction,
although this is closely followed by the comments from nonUK labs concerning the time taken to receive/stain/return EQA
samples.
The levels of ‘very satisfied’ responses for specific questions
are relatively static, with two noticeable exceptions: Time to
stain samples ( 17%) and Assessor feedback and comments
( 3.5%)
The new E-Journal had 72% Very/Satisfied with the rest
Neutral.
Section/cytospin/cell line quality is acceptable, without being
spectacular, with between 6-10% returning an ‘excellent’
response; the majority (80-90%) responded either Very Good
or Good/Acceptable. 4-6% responded Poor and only the EQA
cell lines got a response of Very Poor 0.9% (1 lab). There
were no significant differences in the UK or OS lab responses.
© UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent
9
The General Pathology Module
Run 98
Perry Maxwell and Merdol Ibrahim
Gold Standard
Second Antibody
Antigens Assessed:
CD31/CD34
TTF-1
Tissue Sections circulated:
Normal Appendix & GIST
Normal Lung & Lung Tumour
Number of Registered Participants:
357
Introduction
Endothelial markers - Gold Antibody
CD31: also called Platelet Endothelial Cell Molecule-1 (PECAM1) is a transmembrane glycoprotein found at endothelial cell
junctions which is thought to play a role in angiogenesis, wound
healing and thrombosis. It is expressed on endothelial cells in a
wide range of tissues including sinusoidal cells of liver, lymph
nodes and spleen. It is also found on megakaryocytes, platelets
and other haematopoietic cells including B-lymphocytes
particularly in the follicular mantle zone. Its main diagnostic use
is in the identification of endothelial tumours as it is said to be a
more sensitive marker than either CD34 or Von Willebrand
Factor (DeYoung et al). It has been shown to be a good marker
of endothelial differentiation. Staining is predominately in the
cell membrane but some weaker staining of the cytoplasm can
be seen.
CD34: is a transmembrane glycoprotein which is expressed on
immature haematopoietic stem/progenitor cells, capillary
endothelial cells and embryonic fibroblasts. It can also be found
in splenic marginal zones, dendritic interstitial cells around
vessels, nerves, hair follicles, muscle cells and sweat glands in
various tissues. CD34 labels capillaries in most tissues but may
be absent in large veins and arteries and is negative in the
sinus endothelium of placenta and spleen. CD34 is an excellent
indicator of vascular differentiation, regardless of the tumour
grade, therefore it is a good marker for vascular tumours (Cerilli
et al, Leong). Due to the comparatively wide range of cell types
stained by CD34 it is recommended that this antibody is used
with a panel of endothelial makers including CD31 and Von
Willebrand Factor. There are a number of clones available for
CD34, of which, QBEnd/10 is the most popular. Staining with
CD34 is restricted to the cell membrane.
Features of optimal immunostaining
CD31
• Strong staining of the endothelial cells in the blood vessels and
lymphatic vessels throughout the appendix
• Strong staining of the T-cells in the base of the lamina propria and
weaker staining of the B-cells in the follicular mantle with HIER pretreatment.
• Minimal background staining.
CD34
• Strong staining of the endothelial cells in the blood vessels and
lymphatic vessels throughout the appendix
• Strong staining on the dendritic interstitial cells in the lamina propria
with HIER pre-treatment
• Minimal background staining.
Features of sub-optimal immunostaining
CD31 and CD34
• Weak or negative staining of the endothelial cells and other elements
in the appendix.
• Non-specific nuclear staining possibly caused by over-pretreatment.
• Inappropriate staining of, for example, epithelium and lymphocytes,
probably due to over-pretreatment
References
1. DeYoung BR, Wick MR, Fitzgibbon JF et al. CD31: an immunospecific marker for endothelial
differentiation in human neoplasms. Applied Immunohistochem. 1993; 1: 97-100
2. Cerilli LA and Wick MR. Immunohistology of soft tissue and osseous neoplasms. In:
Diagnostic Immunohistochemistry. Dabbs DJ. (Editor). Churchill Livingstone, Philadelphia
2002; 71
3. Leong AS-Y, Cooper K, Leong FJW-M. CD34. In: Manual of Diagnostic Antibodies for
Immunohistology (1st Ed.). Oxford University Press, Oxford 1999;
83-84
4. Leong AS-Y, Cooper K, Leong FJW-M. Factor VIII RA (Von Willebrand factor). In: Manual of
Diagnostic Antibodies for Immunohistology (1st Ed.).
Oxford University Press, Oxford 1999; 167.
Thyroid Transcription Factor (TTF1)- Secondary
Antibody
Thyroid transcription factor (TTF1) is part of the family of
homeodomain (protein structural domain that binds DNA or
RNA) transcription factors and is a gene regulatory factor
expressed in the follicular epithelial and parafollicular c-cells of
the thyroid, epithelial cells of the lung, brain and pituitary gland.
TTF1 is essential for the normal development of both the thyroid
and lung, and increased TTF1 immunohistochemical expression
if seen in both pulmonary adenocarcinomas and thyroid
neoplasms of follicular origin (follicular adenoma and follicular
and papillary carcinoma).
Not all pulmonary adenocarcinomas have been shown to be
positive for TTF1, with a positivity range of between 65-80%
(Comperat et al 2005), depending on the antibody clone used.
TTF1 in small lung carcinomas have been shown in about 96%
of cases (Ordonez et al., 2000) and in 75% of non-small cell
pulmonary carcinomas, but generally not thought to be
expressed in typical pulmonary carcinoids, although the
literature does have some contrasting views.
TTF1 can also be used to differentiate between tumours of
primary and metastatic origin e.g. primary lung adenocarcinoma
(T T F 1+/ c dx2- )
vs
m et as t ast at i c
gastroint est i nal
adenocarcinomas (TTF1+/cdx2-). Furthermore, TTF1 alongside
other antibodies such as CK 20 can help to further identify
tumour types including Merkel cell carcinoma (TTF1-/CK20+)
and metastatic small cell lung carcinoma ( TTF1+/CK20-).
Features of optimal immunostaining
Normal Lung
 Strong, nuclear staining of the basal epithelial cells lining the bronchial
ducts
 Weak to moderate nuclear staining of bronchial luminal epithelial cells
 Clean background
Lung adenocarcinoma
 Strong, nuclear staining virtually all neoplastic cells
 Strong, nuclear staining of the basal epithelial cells lining the bronchial
ducts
 Weak to moderate nuclear staining of bronchial luminal epithelial cells
Features of suboptimal immunostaining
 Weak staining of the basal epithelial cells lining the bronchial ducts
 Weak staining of neoplastic cells of the tumour
 Non-specific nuclear staining
 Excessive background staining
References
1. Comperat E, Zhang F, Perrotin C, Molina T, Magdeleinat P, Marmey B, Regnard JF, Audouin
J, Camilleri-Broet S. Variable sensitivity and specificity of TTF1 antibodies in lung metastatic
adenocarcinoma of colorectal origin. Mod Pathol. 2005 18(10):1371-6.
2. Ordonez NG. Value of thyroid transcription factor-1 immunostaining in distinguishing small
cell lung
© UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent
10
ΓΕΝΕΡΑΛ ΠΑΤΗΟΛΟΓΨ Μοδυλε
ΡΥΝ 98
Σελεχτεδ Ιµαγεσ σηοωινγ Οπτιµαλ ανδ Συβ−οπτιµαλ Ιµµυνοσταινινγ
Φιγ 1. Οπτιµαλ δεµονστρατιον οφ Χ∆34 ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ διστριβυτεδ αππενδιξ σεχτιον. Εϖεν ατ
λοω ποωερ τηε στρονγ διστινχτ σταινινγ οφ τηε ϖεσσελσ ανδ ενδοτηελιαλ χελλσ ισ χλεαρλψ ϖισιβλε.
Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε ∆ακο ΘΒΕνδ αντιβοδψ, 1:50, ∆ακο ΠΤ Λινκ, αυτοσταινερ ανδ ΦΛΕΞ κιτ.
Φιγ 2. Γοοδ δεµονστρατιον Χ∆34 ιν ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΓΙΣΤ σεχτιον, σηοωινγ ιντενσε ωελλ λοχαλισεδ
πρεδοµιναντλψ µεµβρανουσ ανδ χψτοπλασµιχ σταινινγ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε ∆ακο ΘΒΕνδ
αντιβοδψ, 1:50, υσινγ τηε ∆ακο ΠΤ Λινκ, αυτοσταινερ ανδ ΦΛΕΞ κιτ.
Φιγ 3. Συβ−οπτιµαλ δεµονστρατιον οφ Χ∆34 ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ αππενδιξ σεχτιον. Ονλψ α φεω
ενδοτηελιαλ χελλσ ανδ ϖεσσελσ αρε δεµονστρατεδ ανδ τηε σταινινγ ισ ϖερψ ωεακ (χοµπαρε το
Φιγ1). Σεχτιον σταινεδ ωιτη ∆ακο ΘΒΕνδ αντιβοδψ, 1:00, ον τηε Λειχα ΒονδΜαξ, ΕΡ1 ανδ
Ρεφινε δετεχτιον κιτ.
Φιγ 4. Συβ−οπτιµαλ δεµονστρατιον οφ Χ∆34 ιν ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΓΙΣΤ σεχτιον. Τηε σταινινγ ισ ϖερψ
ωεακ ανδ ιν σοµε αρεασ τηε αντιγεν ισ νοτ δεµονστρατεδ (χοµπαρε το Φιγ2). Σεχτιον σταινεδ
ωιτη ∆ακο ΘΒΕνδ αντιβοδψ, 1:00, ον τηε Λειχα ΒονδΜαξ, ΕΡ1 ανδ Ρεφινε δετεχτιον κιτ.
Φιγ 5. Οπτιµαλ δεµονστρατιον οφ Χ∆31 ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ αππενδιξ σεχτιον. Χ∆31 νοτ ονλψ
σταινσ ενδοτηελιαλ χελλσ ανδ ϖεσσελσ, βυτ αλσο µαντλε ζονε Β χελλσ ανδ Τ χελλσ ασ σεεν ιν τηισ
ιµαγε. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε ∆ακο (ϑΧ/70Α) αντιβοδψ, 1:100, υσινγ τηε ∆ακο ΠΤ Λινκ,
αυτοσταινερ ανδ ΦΛΕΞ κιτ.
Φιγ 6. Οπτιµαλ δεµονστρατιον οφ Χ∆31 ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΓΙΣΤ σεχτιον. Τηε τυµουρ ισ νεγατιϖε
φορ Χ∆31 βυτ τηε ενδοτηελιαλ χελλσ αρε στρονγλψ σταινεδ ασ εξπεχτεδ ανδ τηε βαχκγρουνδ ισ
χλεαν. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε ∆ακο (ϑΧ/70Α) αντιβοδψ, 1:100, υσινγ τηε ∆ακο ΠΤ Λινκ,
αυτοσταινερ ανδ ΦΛΕΞ κιτ.
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 16:36 ον Τυεσδαψ, 31 ϑυλψ, 2012
11
ΓΕΝΕΡΑΛ ΠΑΤΗΟΛΟΓΨ Μοδυλε
ΡΥΝ 98
Σελεχτεδ Ιµαγεσ σηοωινγ Οπτιµαλ ανδ Συβ−οπτιµαλ Ιµµυνοσταινινγ
Φιγ 7. Οπτιµαλ δεµονστρατιον οφ ΤΤΦ−1 ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ νορµαλ λυνγ σεχτιον, σηοωινγ στρονγ
διστινχτ νυχλεαρ σταινινγ ιν τηε επιτηελιαλ χελλσ. Σηοων το βεττερ αδϖανταγε ιν τηε ηιγη ποωερ
ινσερτ ϖιεω. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε Νοϖοχαστρα ΣΠΤ24 αντιβοδψ, 1:150, ον τηε Λειχα
ΒονδΜαξ, ΕΡ2 ανδ Ρεφινε κιτ.
Φιγ 8. Οπτιµαλ δεµονστρατιον οφ ΤΤΦ−1 ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ λυνγ τυµουρ σεχτιον. ςιρτυαλλψ αλλ τηε
νεοπλαστιχ χελλσ σηοω στρονγ διστινχτ νυχλεαρ σταινινγ, ωιτη α χλεαν βαχκγρουνδ. Σεχτιον σταινεδ
ωιτη τηε Νοϖοχαστρα ΣΠΤ24 αντιβοδψ, 1:150, ον τηε Λειχα ΒονδΜαξ, ΕΡ2 ανδ Ρεφινε κιτ.
Φιγ 9. Γοοδ ΤΤΦ−1 σταινινγ οφ τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ λυνγ τυµουρ σεχτιον. Τηε νεοπλαστιχ χελλσ ανδ
βασαλ επιτηελιαλ χελλσ λινινγ τηε βρονχηιαλ δυχτ σηοω στρονγ, διστινχτ νυχλεαρ σταινινγ, ωηιλε τηε
λυµιναλ επιτηελιαλ χελλσ σηοω ωεακ νυχλεαρ σταινινγ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε ∆ακο 8Γ7Γ3/1
ανδτιβοδψ, 1:200, ον τηε ςεντανα Βενχηµαρκ, ΧΧ1 στανδαρδ.
Φιγ 10. Συβ−οπτιµαλ δεµονστρατιον οφ ΤΤΦ−1 ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ νορµαλ λυνγ σεχτιον. Αλτηουγη
τηε επιτηελιαλ χελλσ αρε σταινινγ ασ εξπεχτεδ, τηερε ισ αλσο ιναππροπριατε βαχκγρουνδ σταινινγ.
Σεχτιονσ σταινεδ ωιτη τηε ∆ακο 8Γ7Γ3/1 αντιβοδψ, ον τηε Λειχα ΒονδΜαξ, ΕΡ2 ανδ Ρεφινε κιτ.
Φιγ 11. Ποορ δεµονστρατιον οφ ΤΤΦ−1 ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ λυνγ τυµουρ σεχτιον. Τηε σταινινγ ισ
ϖερψ ωεακ ανδ διφφυσε (χοµπαρε ωιτη Φιγσ 8 & 9). Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε ςεχτορ ΣΠΤ24
αντιβοδψ, 1:400, πρε−τρεατεδ ιν τηε µιχροωαϖε ανδ σταινεδ ον τηε ΒιοΓενεξ ΓενοΜΞ
αυτοσταινερ ωιτη τηε ΒιοΓενεξ ΣΣ Πολψµερ κιτ.
Φιγ 12. Συβ−οπτιµαλ δεµονστρατιον οφ ΤΤΦ−1 ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ λυνγ τυµουρ σεχτιον, σηοωινγ
ιναππροπριατε νον−σπεχιφιχ χψτοπλασµιχ σταινινγ ανδ λιττλε σπεχιφιχ νυχλεαρ σταινινγ. Σεχτιονσ
σταινεδ ωιτη τηε ∆ακο 8Γ7Γ3/1 αντιβοδψ, 1:500, πρε−τρεατεδ ιν τηε ∆ακο Πασχαλ ανδ σταινεδ ον
τηε αυτοσταινερ ωιτη τηε ΡΕΑΛ κιτ.
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 16:36 ον Τυεσδαψ, 31 ϑυλψ, 2012
12
ΓΕΝΕΡΑΛ ΠΑΤΗΟΛΟΓΨ Μοδυλε
Ρυν 98
ΓΡΑΠΗΙΧΑΛ ΡΕΠΡΕΣΕΝΤΑΤΙΟΝ ΟΦ ΠΑΣΣ ΡΑΤΕΣ
ΡΥΝ 98Α Χ∆31 / Χ∆34 ον ΝΕΘΑΣ Σεχτιονσ
80
ΡΥΝ 98Β Χ∆31 / Χ∆34 ον ιν−ηουσε Σεχτιονσ
Ινδιϖιδυαλ
Σχορεσ
Ινδιϖιδυαλ
Σχορεσ
140
4 = 0 (0%)
4 = 0 (0%)
5 = 0 (0%)
70
5 = 0 (0%)
120
6 = 0 (0%)
7 = 0 (0%)
100
9 = 5 (1%)
50
10 = 7 (2%)
11 = 13 (4%)
40
12 = 22 (6%)
30
13 = 25 (7%)
νο. οφ ρετυρνσ
8 = 9 (3%)
νο. οφ ρετυρνσ
6 = 0 (0%)
7 = 0 (0%)
60
14 = 20 (6%)
20
8 = 0 (0%)
9 = 1 (0%)
80
10 = 0 (0%)
11 = 2 (1%)
12 = 15 (4%)
60
13 = 15 (4%)
14 = 10 (3%)
40
15 = 41 (12%)
15 = 22 (6%)
16 = 79 (23%)
10
16 = 129 (38%)
20
17 = 55 (16%)
17 = 53 (16%)
18 = 33 (10%)
0
4
5
6
7
8
9
10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
Σχορεσ
18 = 41 (12%)
0
19 = 23 (7%)
4
5
6
7
8
9
20 = 9 (3%)
10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
Σχορεσ
Συµµαρψ
Συµµαρψ
16 − 20 = 199 (58%)
16 − 20 = 274 (81%)
13 − 15 = 86 (25%)
13 − 15 = 47 (14%)
10 − 12 = 42 (12%)
10 − 12 = 17 (5%)
0 − 9 = 14 (4%)
0 − 9 = 1 (0%)
Μεδιαν = 14.00
Μεδιαν = 15.00
ΡΥΝ 98Χ Τηψροιδ Τρανσχριπτιον Φαχτορ 1 (ΤΤΦ1) ον ΝΕΘΑΣ Σεχτιονσ
60
19 = 28 (8%)
20 = 23 (7%)
ΡΥΝ 98∆ Τηψροιδ Τρανσχριπτιον Φαχτορ 1 (ΤΤΦ1) ον ιν−ηουσε Σεχτιονσ
Ινδιϖιδυαλ
Σχορεσ
Ινδιϖιδυαλ
Σχορεσ
140
4 = 0 (0%)
4 = 1 (0%)
5 = 0 (0%)
5 = 0 (0%)
50
6 = 0 (0%)
120
6 = 0 (0%)
7 = 0 (0%)
7 = 1 (0%)
40
9 = 4 (1%)
10 = 6 (2%)
11 = 11 (3%)
30
12 = 34 (10%)
13 = 15 (5%)
8 = 4 (1%)
100
νο. οφ ρετυρνσ
νο. οφ ρετυρνσ
8 = 7 (2%)
9 = 0 (0%)
10 = 3 (1%)
80
11 = 3 (1%)
12 = 19 (6%)
60
13 = 8 (2%)
14 = 14 (4%)
14 = 13 (4%)
20
15 = 36 (11%)
40
15 = 35 (11%)
16 = 137 (42%)
16 = 59 (18%)
10
17 = 52 (16%)
17 = 49 (15%)
20
18 = 32 (10%)
18 = 48 (15%)
0
19 = 26 (8%)
4
5
6
7
8
9
10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
Σχορεσ
20 = 13 (4%)
0
19 = 13 (4%)
4
5
6
7
8
9
10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
20 = 5 (2%)
Σχορεσ
Συµµαρψ
Συµµαρψ
16 − 20 = 198 (61%)
16 − 20 = 236 (73%)
13 − 15 = 64 (20%)
13 − 15 = 57 (18%)
10 − 12 = 51 (16%)
10 − 12 = 25 (8%)
0 − 9 = 12 (4%)
0 − 9 = 5 (2%)
Μεδιαν = 13.50
Μεδιαν = 14.00
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 13:09 ον Τηυρσδαψ, 23 Αυγυστ, 2012
13
ΓΕΝΕΡΑΛ ΠΑΤΗΟΛΟΓΨ Μοδυλε
Ρυν 98
ΑΝΤΙΒΟ∆ΙΕΣ ΑΝ∆ ΟΤΗΕΡ ΤΕΧΗΝΙΧΑΛ ΠΑΡΑΜΕΤΕΡΣ ΕΜΠΛΟΨΕ∆ ΒΨ ΠΑΡΤΙΧΙΠΑΝΤΣ ΙΝ ΤΗΕ
ΓΕΝΕΡΑΛ ΠΑΤΗΟΛΟΓΨ ΜΟ∆ΥΛΕ
Τηε φολλοωινγ ταβλεσ ρεχορδ τηε νυµβερ οφ παρτιχιπαντσ (Ν) υσινγ εαχη πριµαρψ αντιβοδψ ανδ τηε περχενταγε (%) οφ τηεσε
παρτιχιπαντσ αχηιεϖινγ αχχεπταβλε σταινινγ (α σχορε >12/20) ον ΥΚ ΝΕΘΑΣ σεχτιονσ.
Γενεραλ Πατηολογψ Ρυν: 98
Γενεραλ Πατηολογψ Ρυν: 98
Πριµαρψ Αντιβοδψ : Χ∆31 / Χ∆34
Πριµαρψ Αντιβοδψ : Τηψροιδ Τρανσχριπτιον Φαχτορ 1 (ΤΤΦ1)
Αντιβοδψ ∆εταιλσ
Αβχαµ Χ∆31 αβ9498 (ϑΧ/70Α)
Βεχκµαν Χουλτερ Χ∆34 ΙΜ0786 (ΘΒενδ10)
ΒιοΓενεξ ΑΜ236 5Μ (ΘΒενδ10) Χ∆34
Χελλ Μαρθυε Χ∆31 131Μ/760−4378 (ϑΧ70)
Χελλ Μαρθυε Χ∆34 134Μ/760−2620/ΧΜΧ33 (ΘΒενδ)
∆ακο Χ∆31 ΡΤΥ ΦΛΕΞ ΙΡ610 (ϑΧ70Α)
∆ακο Χ∆34 ΡΤΥ ΦΛΕΞ ΙΡ632 (ΘΒενδ10)
∆ακο Χ∆34 ΡΤΥ Ν1632 (ΘΒενδ10)
∆ακο Μ0823 (ϑΧ/70Α) Χ∆31
∆ακο Μ7165 (ΘΒενδ10) Χ∆34
Λαβςισιον Χ∆34 ΜΣ363Π (ΘΒενδ10)
Λεχια/Νοϖοχαστρα Χ∆31 ΝΧΛ−Χ∆−31−1Α10 (1Α10)
Λειχα/Νοϖοχαστρα Χ∆31 ΡΤΥ ΠΑ0250 (1Α10)
Λειχα/Νοϖοχαστρα Χ∆34 ΝΧΛ−ΕΝ∆ (ΘΒενδ)
Λειχα/Νοϖοχαστρα Χ∆34 ΡΤΥ ΠΑ0212 (ΘΒενδ)
Οτηερ
Σεροτεχ Χ∆34 ΜΧΑ 547 (ΘΒενδ10)
ΣΚΨΒΙΟ Χ∆34 (ΘΒενδ10)
Τηερµο Σχι Χ∆31 ΜΣ353 (ϑΧ/70Α)
ςεχτορ Χ∆34 ςΠ Χ345 (ΘΒενδ10)
ςεντανα Χ∆31 760−2619 (ϑΧ/70Α)
ςεντανα Χ∆31 760−4378 (ϑΧ70)
ςεντανα Χ∆34 790−2927 (ΘΒενδ10)
Γενεραλ Πατηολογψ Ρυν: 98
Ηεατ Μεδιατεδ Ρετριεϖαλ
Βιοχαρε ∆εχλοακινγ Χηαµβερ
∆ακο Πασχαλ
∆ακο ΠΤΛινκ
Λαβ ϖισιον ΠΤ Μοδυλε
Λειχα Βονδ ΙΙΙ ΕΡ1
Λειχα Βονδ ΙΙΙ ΕΡ2
Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ1
Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ2
Μιχροωαϖε Οϖεν
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
Οτηερ
Πρεσσυρε Χοοκερ
Στεαµερ
ςεντανα Βενκ ΧΧ1 (Εξτενδεδ)
ςεντανα Βενκ ΧΧ1 (Μιλδ)
ςεντανα Βενκ ΧΧ1 (Στανδαρδ)
ςεντανα Βενκ ΧΧ1# (8µινσ)
ςεντανα Βενκ ΥΛΤΡΑ ΧΧ1 (Εξτεν.)
ςεντανα Βενκ ΥΛΤΡΑ ΧΧ1 (Μιλδ)
ςεντανα Βενκ ΥΛΤΡΑ ΧΧ1 (Σταν.)
ςεντανα Βενκ ΥΛΤΡΑ ΧΧ1# (8µινσ)
ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Εξτενδεδ)
ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Μιλδ)
ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Στανδαρδ)
ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ2 (Ε)
Ωατερ βατη 68 ΟΧ
Ωατερ βατη 95−98 ΟΧ
Ν
%
1
1
1
1
4
4
11
6
46
118
2
7
2
65
12
6
3
1
1
11
2
2
28
100
100
0
100
75
75
100
83
65
86
100
71
50
94
100
67
33
100
100
100
50
100
71
Χ∆31 / Χ∆34
Ν
7
6
59
7
13
12
38
37
13
8
7
8
3
0
14
17
3
0
12
11
1
2
16
26
0
1
1
%
100
83
92
86
85
92
84
95
85
50
86
63
100
0
71
76
33
0
67
82
0
100
69
88
0
100
100
Αντιβοδψ ∆εταιλσ
Βιογενεξ ΜΥ397−ΥΧ
Χελλ Μαρθυε 343Μ−95/96/97 (8Γ7Γ3/1)
Χελλ Πατη ΜΟΒ 285 (8Γ7Γ3/1)
∆ακο ΙΡ056 (8Γ7Γ3/1)
∆ακο ΙΣ056 (8Γ7Γ3/1)
∆ακο Μ3575 (8Γ7Γ3/1)
Ινϖιτρογεν 180221 (8Γ7Γ3/1)
Λειχα Βονδ ΤΤΦ1 ΣΠΤ24 (ΡΤΥ) ΠΑ0364
Λειχα ΝΧΛ−Λ−ΤΤΦ Λ136446
Μεναρινι ΤΤΦ1 ΜΠ−087−χµ05
Νεοµαρκερ ΤΤΦ−1 ΜΣ−699−ΠΟ
Νεοµαρκερσ ΜΣ−69−ΞΞ (8Γ7Γ3/1)
Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−Λ−ΤΤΦ−1 (ΣΠΤ24)
Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−ΤΤΦ−1 (ΣΠΤ24)
Νοϖοχαστρα ΠΑ0364 (ΣΠΤ24)
Οτηερ
ΤΗερµο−Σχιεντιφιχ ΜΣ/699Π1
ςεχτορ ςΠ−Τ483 (ΣΠΤ24)
ςεντανα 760−2829 (8Γ7Γ3/1)
ςεντανα ΤΤΦ−1 (8Γ7Γ311) 790−4398
Ζψµεδ 08−1221 (8Γ7Γ3/1)
Ζψµεδ 18−0221 (8Γ7Γ3/1)
6
4
58
6
5
13
36
53
13
2
5
11
2
4
7
25
0
2
7
12
0
4
9
37
1
1
2
Γενεραλ Πατηολογψ Ρυν: 98
Ενζψµε Μεδιατεδ Ρετριεϖαλ
%
100
75
81
83
100
92
97
85
62
50
80
64
0
100
57
88
0
50
43
67
0
100
67
73
100
0
100
ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ
∆ακο Προτεινασε Κ (Σ3020)
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
Οτηερ
ςΒΣ Βονδ Ενζψµε 1
ςΒΣ Βονδ Ενζψµε 2
ςεντανα Προτεασε
ςεντανα Προτεασε 1 (760−2018)
%
2
1
9
3
6
3
96
4
12
14
1
2
5
83
22
5
3
3
10
10
22
5
3
ΒΟΝ∆ ΡΤΥ ΤΤΦ−1 (ΣΠΤ24) ΠΑ0364
Τηψροιδ
Τρανσχριπτιον
Φαχτορ 1 (ΤΤΦ1)
Ν
Ν
50
100
56
100
100
67
68
50
100
93
100
50
80
98
100
100
67
67
90
70
68
20
33
Χ∆31 / Χ∆34
Τηψροιδ
Τρανσχριπτιον
Φαχτορ 1
Ν
%
Ν
%
6
1
96
1
6
1
1
3
100
100
79
100
100
100
100
33
7
0
109
0
0
0
0
0
100
0
77
0
0
0
0
0
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 13:09 ον Τηυρσδαψ, 23 Αυγυστ, 2012
14
ΓΕΝΕΡΑΛ ΠΑΤΗΟΛΟΓΨ Μοδυλε
Ρυν 98
Γενεραλ Πατηολογψ Ρυν: 98
Γενεραλ Πατηολογψ Ρυν: 98
Χ∆31 / Χ∆34
∆ετεχτιον
Ν
Α Μενερινι Πολψµερ (ΜΠ−ΞΧΠ)
ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ
Βιοχαρε πολψµερ (Μ4Υ534)
ΒιοΓενεξ ΣΣ Πολψµερ (Θ∆ 420−ΨΙΚΕ)
ΒιοΓενεξ ΣΣ Πολψµερ (Θ∆ 430−ΞΑΚΕ)
∆ακο Ενςισιον ΦΛΕΞ ( Κ8000/10)
∆ακο Ενςισιον ΦΛΕΞ+ ( Κ8002/12)
∆ακο Ενϖισιον ΗΡΠ/∆ΑΒ ( Κ5007)
∆ακο Ενϖισιον+ ΗΡΠ µουσε Κ4004/5/6/7
∆ακο ΗερΧεπ Τεστ Αυτο∋ρ (Κ5207)
∆ακο ρβ−α−µο Ιγ (Ε0354)
∆ακο ΡΕΑΛ ΗΡΠ/∆ΑΒ (Κ5001 )
Λαβςισιον Υλτραςισιον ΛΠ ΗΡΠ (ΤΛ 125 ΗΛϑ)
Λαβςισιον Υλτραςισιον ΛΠ ΗΡΠ (ΤΣ 125 Η∆)
Λαβςισιον Υλτραςισιον ΟΝΕ Πολψµερ ( ΤΛ−012/5−Η∆ϑ/Τ
Λειχα Βονδ Πολψµερ ∆εφινε (∆Σ9713)
Λειχα Βονδ Πολψµερ Ρεφινε (∆Σ9800)
ΜεναΠατη Ξ−Χελλ Πλυσ (ΜΠ−ΞΧΠ)
Νονε
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
Νοϖοχαστρα Νοϖολινκ Π∆Σ (ΡΕ7−140/150/280/290−Κ)
Οτηερ
Ποωερ ςισιον ∆ΠςΒ999 ΗΡΠ
ςεχτορ Ελιτε ΑΒΧ Κιτ (ΠΚ−7200)
ςεχτορ Ελιτε Υνιϖερσαλ ΑΒΧ (ΠΚ−6200)
ςεχτορ ΙµµΠΡΕΣΣ Υνιϖερσαλ (ΜΠ−7500)
ςεντανα ιςιεω σψστεµ (760−091)
ςεντανα Οπτιςιεω Κιτ (760−700)
ςεντανα Υλτραςιεω Κιτ (760−500)
2
28
1
1
4
10
37
8
2
1
1
3
1
2
1
1
89
6
1
1
2
10
1
2
1
1
20
8
72
Τηψροιδ
Τρανσχριπτιον
Φαχτορ 1
%
Ν
100
89
100
100
75
90
97
88
100
100
0
33
100
100
100
0
89
83
100
100
100
80
100
100
100
100
60
88
78
3
23
1
1
3
6
42
7
0
0
1
3
0
2
2
1
90
5
2
5
2
11
1
2
1
1
24
5
72
%
67
83
100
100
67
83
88
71
0
0
100
33
0
0
100
100
89
60
0
100
100
64
100
100
100
100
79
80
72
Χηροµογεν
Α. Μεναρινι Λιθυιδ Σταβλε ∆ΑΒ κιτ
ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ
ΒιοΓενεξ ΑΕΧ
ΒιοΓενεξ ∆ΑΒ (Θ∆430)
ΒιοΓενεξ Λιθυιδ ∆ΑΒ (ΗΚ153−5Κ)
ΒιοΓενεξ λιθυιδ ∆ΒΑ (ΗΚ−124−7Κ)
∆ακο ∆ΑΒ Λιθυιδ (Κ3465)
∆ακο ∆ΑΒ+ Λιθυιδ (Κ3468)
∆ακο ∆ΑΒ+ ΡΕΑΛ ∆ετεχτιον (Κ5001)
∆ακο Ενςισιον Πλυσ κιτσ
∆ακο ΦΛΕΞ ∆ΑΒ
∆ακο ΡΕΑΛ Ενςισιον Κ5007 ∆ΑΒ
∆ακο ΡΕΑΛ Κ5001 ∆ΑΒ
Λαβςισιον (ΤΑ−125−Η∆)
Λαβςισιον ∆ΑΒ
µεναπατη ξχελλ κιτ ∆ΑΒ (ΜΠ−860)
Οτηερ
Σιγµα ∆ΑΒ (∆56 5)
Σιγµα ∆ΑΒ (∆5637)
Σιγµα ∆ΑΒ (∆5905)
ςΒΣ Βονδ Πολψµερ Ρεφινε κιτ (∆Σ9800)
ςεντανα ∆ΑΒ
ςεντανα ιϖιεω
ςεντανα Υλτραϖιεω ∆ΑΒ
ςισιον ΒιοΣψστεµσ Βονδ Ξ ∆ΑΒ
Χ∆31 / Χ∆34
Τηψροιδ
Τρανσχριπτιον
Φαχτορ 1 (ΤΤΦ1)
Ν
%
Ν
%
1
52
1
1
1
1
1
9
2
1
50
6
2
1
1
8
9
1
1
1
79
9
13
80
3
100
94
0
100
100
100
0
89
50
100
92
100
0
100
100
88
100
100
100
0
86
67
54
75
67
2
42
0
1
1
2
0
8
4
3
47
6
1
1
1
7
7
0
2
1
85
5
19
79
1
50
81
0
100
100
50
0
63
75
67
85
67
0
100
100
71
100
0
0
100
92
80
79
71
0
Γενεραλ Πατηολογψ Ρυν: 98
Χ∆31 / Χ∆34
Αυτοµατιον
ΒιοΓενεξ ΓενοΜΞ 6000ι
ΒιοΓενεξ Οπτιµαξ
∆ακο Αυτοσταινερ
∆ακο Αυτοσταινερ Λινκ 48
∆ακο Αυτοσταινερ πλυσ
∆ακο Αυτοσταινερ Πλυσ Λινκ
∆ακο ΤεχηΜατε 500
Λαβςισιον Αυτοσταινερ
Λειχα Βονδ Μαξ
Λειχα Βονδ−ΙΙΙ
Μεναρινι − Ιντελλιπατη ΦΛΞ
Νονε (Μανυαλ)
Οτηερ
Σηανδον Σεθυενζα
ςεντανα Βενχηµαρκ
ςεντανα Βενχηµαρκ ΥΛΤΡΑ
ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ
Τηψροιδ
Τρανσχριπτιον
Φαχτορ 1 (ΤΤΦ1)
Ν
%
Ν
%
4
2
10
43
9
6
1
10
77
33
7
10
3
4
8
34
71
50
100
80
88
89
100
100
90
88
91
86
90
100
100
38
71
77
4
1
10
33
14
9
1
10
83
25
6
9
4
4
7
29
75
50
100
80
85
79
67
100
80
90
88
67
44
100
75
86
62
77
ΒΕΣΤ ΜΕΤΗΟ∆Σ − Γολδ Στανδαρδ Αντιβοδψ
Α σελεχτιον φροµ ϕυστ α φεω οφ τηε βεστ µετηοδσ εµπλοψεδ βψ παρτιχιπαντσ
Χ∆31 / Χ∆34 − Μετηοδ 1
Παρτιχιπαντ σχορεδ 20/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 19/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
∆ακο Μ7165 (ΘΒενδ10) Χ∆34 , 30 Μινσ, 21 ≡Χ
Αυτοµατιον:
∆ακο Αυτοσταινερ Λινκ 48
∆ιλυτιον 1: 50
Μετηοδ:
∆ακο ΦΛΕΞ κιτ
Μαιν Βυφφερ:
∆ακο ΦΛΕΞ ωαση βυφφερ
ΗΜΑΡ:
∆ακο ΠΤΛινκ, Βυφφερ: ∆ακο ηιγη πΗ ταργετ ρετριεϖαλ σολυτιον, ΠΗ: 9
ΕΑΡ:
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
Χηροµογεν:
∆ακο ΦΛΕΞ ∆ΑΒ, 21 ≡Χ., Τιµε 1: 10 Μινσ
∆ετεχτιον:
∆ακο Ενςισιον ΦΛΕΞ ( Κ8000/10) , 30 Μινσ, 21 ≡Χ Πρεδιλυτεδ
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 13:09 ον Τηυρσδαψ, 23 Αυγυστ, 2012
15
ΓΕΝΕΡΑΛ ΠΑΤΗΟΛΟΓΨ Μοδυλε
Ρυν 98
Χ∆31 / Χ∆34 − Μετηοδ 2
Παρτιχιπαντ σχορεδ 20/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 18/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
Λειχα/Νοϖοχαστρα Χ∆34 ΝΧΛ−ΕΝ∆ (ΘΒενδ) , 15 Μινσ
Αυτοµατιον:
Λειχα Βονδ−ΙΙΙ
Μετηοδ:
ςΒΣ ΒονδΜΑξ Ρεφινε ΚΙΤ
Μαιν Βυφφερ:
Βονδ Ωαση Βυφφερ (ΑΡ9590)
ΗΜΑΡ:
Λειχα Βονδ ΙΙΙ ΕΡ2
∆ιλυτιον 1: 25
ΕΑΡ:
Χηροµογεν:
ςΒΣ Βονδ Πολψµερ Ρεφινε κιτ (∆Σ9800)
∆ετεχτιον:
Λειχα Βονδ Πολψµερ Ρεφινε (∆Σ9800) , 10 Μινσ
Χ∆31 / Χ∆34 − Μετηοδ 3
Παρτιχιπαντ σχορεδ 19/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 20/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
Λειχα/Νοϖοχαστρα Χ∆34 ΝΧΛ−ΕΝ∆ (ΘΒενδ) , 60 Μινσ, 37 ≡Χ
Αυτοµατιον:
ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ
Μετηοδ:
ςεντανα Υλτραςιεω ∆ΑΒ
Μαιν Βυφφερ:
ςεντανα ρεαχτιον βυφφερ (950−300)
ΗΜΑΡ:
ςεντανα Βενκ ΥΛΤΡΑ ΧΧ1 (Σταν.)
ΕΑΡ:
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
Χηροµογεν:
ςεντανα Υλτραϖιεω ∆ΑΒ, 27 ≡Χ., Τιµε 1: 8 Μινσ
∆ετεχτιον:
ςεντανα Υλτραςιεω Κιτ (760−500) , 8 Μινσ, 37 ≡Χ Πρεδιλυτεδ
∆ιλυτιον 1: 40
Χ∆31 / Χ∆34 − Μετηοδ 4
Παρτιχιπαντ σχορεδ 18/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 19/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
∆ακο Μ7165 (ΘΒενδ10) Χ∆34 , 30 Μινσ, 20 ≡Χ
Αυτοµατιον:
ΒιοΓενεξ ΓενοΜΞ 6000ι
Μετηοδ:
∆ακο ΦΛΕΞ+ κιτ
Μαιν Βυφφερ:
∆ακο ΦΛΕΞ ωαση βυφφερ
ΗΜΑΡ:
∆ακο ΠΤΛινκ, Βυφφερ: Ασ Περ Κιτ, ΠΗ: 9
∆ιλυτιον 1: 100
ΕΑΡ:
Χηροµογεν:
∆ακο ΦΛΕΞ ∆ΑΒ, 20 ≡Χ., Τιµε 1: 10 Μινσ
∆ετεχτιον:
∆ακο Ενςισιον ΦΛΕΞ+ ( Κ8002/12) , 15 Μινσ, 20 ≡Χ Πρεδιλυτεδ
ΒΕΣΤ ΜΕΤΗΟ∆Σ − Σεχονδαρψ Αντιβοδψ
Α σελεχτιον φροµ ϕυστ α φεω οφ τηε βεστ µετηοδσ εµπλοψεδ βψ παρτιχιπαντσ
Τηψροιδ Τρανσχριπτιον Φαχτορ 1 (ΤΤΦ1) − Μετηοδ 1
Παρτιχιπαντ σχορεδ 20/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 18/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−Λ−ΤΤΦ−1 (ΣΠΤ24) , 30 Μινσ, 37 ≡Χ
Αυτοµατιον:
ςεντανα Βενχηµαρκ ΥΛΤΡΑ
Μετηοδ:
ςεντανα Υλτραςιεω ∆ΑΒ
Μαιν Βυφφερ:
ςεντανα ρεαχτιον βυφφερ (950−300)
ΗΜΑΡ:
Οτηερ
∆ιλυτιον 1: 50
ΕΑΡ:
Χηροµογεν:
ςεντανα Υλτραϖιεω ∆ΑΒ
∆ετεχτιον:
ςεντανα Υλτραςιεω Κιτ (760−500)
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 13:09 ον Τηυρσδαψ, 23 Αυγυστ, 2012
16
ΓΕΝΕΡΑΛ ΠΑΤΗΟΛΟΓΨ Μοδυλε
Ρυν 98
Τηψροιδ Τρανσχριπτιον Φαχτορ 1 (ΤΤΦ1) − Μετηοδ 2
Παρτιχιπαντ σχορεδ 20/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 18/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
Ινϖιτρογεν 180221 (8Γ7Γ3/1) , 30 Μινσ, 22 ≡Χ
Αυτοµατιον:
∆ακο Αυτοσταινερ Λινκ 48
Μετηοδ:
∆ακο ΦΛΕΞ+ κιτ
Μαιν Βυφφερ:
∆ακο ΦΛΕΞ ωαση βυφφερ, ΠΗ: 7.4
ΗΜΑΡ:
∆ακο ΠΤΛινκ, ΠΗ: 9
∆ιλυτιον 1: 200
ΕΑΡ:
Χηροµογεν:
∆ακο ΦΛΕΞ ∆ΑΒ, 22 ≡Χ., Τιµε 1: 7 Μινσ
∆ετεχτιον:
∆ακο Ενςισιον ΦΛΕΞ+ ( Κ8002/12) , 15 Μινσ, 22 ≡Χ Πρεδιλυτεδ
Τηψροιδ Τρανσχριπτιον Φαχτορ 1 (ΤΤΦ1) − Μετηοδ 3
Παρτιχιπαντ σχορεδ 20/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 16/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
ςεχτορ ςΠ−Τ483 (ΣΠΤ24) , 30 Μινσ, 20 ≡Χ
Αυτοµατιον:
Λαβςισιον Αυτοσταινερ
∆ιλυτιον 1: 200
Μετηοδ:
Στ ΑΒΧ
Μαιν Βυφφερ:
ΤΒΣ + Τωεεν
ΗΜΑΡ:
∆ακο ΠΤΛινκ, Βυφφερ: ∆ακο ηιγη πΗ
ΕΑΡ:
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
Χηροµογεν:
Λαβςισιον (ΤΑ−125−Η∆)
∆ετεχτιον:
ςεχτορ Ελιτε ΑΒΧ Κιτ (ΠΚ−7200) , 30 Μινσ, 20 ≡Χ Πρεδιλυτεδ
Τηψροιδ Τρανσχριπτιον Φαχτορ 1 (ΤΤΦ1) − Μετηοδ 4
Παρτιχιπαντ σχορεδ 20/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 16/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−Λ−ΤΤΦ−1 (ΣΠΤ24) , 30 Μινσ, 25 ≡Χ
Αυτοµατιον:
Μεναρινι − Ιντελλιπατη ΦΛΞ
Μετηοδ:
µεναπατη ξχελλ πλυσ
Μαιν Βυφφερ:
ΤΒΣ + Τωεεν
ΗΜΑΡ:
Βιοχαρε ∆εχλοακινγ Χηαµβερ, Βυφφερ: χιτρατε, ΠΗ: 6
∆ιλυτιον 1: 1/50
ΕΑΡ:
Χηροµογεν:
µεναπατη ξχελλ κιτ ∆ΑΒ (ΜΠ−860), 25 ≡Χ., Τιµε 1: 5 Μινσ
∆ετεχτιον:
ΜεναΠατη Ξ−Χελλ Πλυσ (ΜΠ−ΞΧΠ) , 10 Μινσ, 25 ≡Χ Πρεδιλυτεδ
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 13:09 ον Τηυρσδαψ, 23 Αυγυστ, 2012
17
The Breast Hormonal Receptor Module
Run 98
Suzanne Parry and Merdol Ibrahim
Antigens Assessed:
Progesterone Receptors (PR)
Tissue Sections circulated:
Sections from a composite block (see table below)
Number of Registered Participants:
325
Circulated Tissue
The table below left shows the staining characteristics of the tissue sections circulated during Run98, which
composed of three infiltrating ductal carcinomas (IDCs) with differing levels of receptor expression. The staining of
the tumours were characterised using the PGR 16 (A) antibody clone.
Tissue Sections
% positivity
Staining Intensity
Allred / Quick Score
A. IDC
85-95%
High
7-8
B. IDC
11-33%
Medium-High
4-6
C. IDC
0%
Negative*
0
General Guideline Used in The Assessment of Slides
SCORE
0
STAINING PATTERN
Slide not returned by Participant.
1 or 2
No staining or staining of considerably fewer nuclei than expected in one or more of the
distributed tissue sections, or inappropriate staining of nuclei in cells not expected to stain.
3
Staining of 10% or greater of tumour nuclei in each of the positive tumour sections, though
substantially less than expected to stain, or staining is weaker than expected.
4 or 5
Demonstration of the expected proportion of nuclei stained in the invasive tumours, with roughly
the expected staining intensity.
Marks are also deducted when correct clinical interpretation of staining may be hindered due to
factors such as:
- False positive / false negative / non-specific or inappropriate staining
- Excessive cytoplasmic or diffuse nuclear staining
- Excessively strong or weak haematoxylin counterstain
- Excessive Antigen retrieval resulting in morphological damage
- Poor quality/inadequate choice of in-house control tissue ( poor/inadequate fixation, damaged cell
morphology, over retrieval etc.)
In-House Tissue Recommendations & Assessment
Participants in-house control tissue MUST consist of composite breast tissue (cell line controls are an
acceptable alternative), placed onto a single slide as outlined below:
i. >80% tumour positivity with high intensity (Allred/Quick score 7-8)
ii. 30-70% tumour positivity with low-moderate intensity (Allred/Quick score 4-6)
iii. Negative tumour, with normal positively stained glands (Allred/Quick score <1)
Participants NOT using a composite control are assessed a maximum score of a 'borderline' pass
(10-12/20).
© UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent
18
The Breast Hormonal Receptor Module
Introduction
Expression of the steroid hormone receptors, oestrogen
receptor-alpha (ER- ) and progesterone receptor (PR, types
A and B) in breast epithelial cells is important in the
development and function of the normal breast (Anderson).
They also play a key-role in proliferative and neoplastic
diseases of the breast (Cui et al.).
When examined by immunocytochemical staining,
approximately 75% of primary breast cancers express ER- ,
and of those approximately 50% co-express PR. Hormone
receptor status is a good predictor of response to antioestrogen based treatments such as tamoxifen and
aromatase-inhibitors (Fisher et al). PR expression is under
the control of ER- , and because of this it has been
proposed that PR expression in a tumour indicates the
presence of functional ER- (Cui et al); moreover, it
potentially defines a subpopulation of patients with superior
response to tamoxifen (Osborne et al); conversely, there is
evidence that ER- positive tumours that are PR negative
are best treated with aromatase-inhibitors in preference to
the ER-antagonists (Cui et al.). Finally, patients whose
breast tumours are ER- negative but PR positive respond
equally well to anti-oestrogen based treatments as do those
whose tumours are ER- positive (Ciocca and Elledge). All
these factors lead to the conclusion that correct PR status
determination is of great importance.
Assessment Results
Features of optimal immunostaining (figs 1- 4)
• Staining of the expected proportion of invasive tumour
nuclei with the anticipated staining intensity
• Intense nuclear staining of the appropriate distribution in
normal glands
• Cytoplasmic staining not excessive
• No background staining of connective tissues or
inappropriately localised staining
Features of sub-optimal immunostaining (figs 5-8)
• Relatively weak nuclear staining of the receptor positive
tumours and/or lower than the expected proportion of nuclei
staining positive
• Excessive cytoplasmic staining
• Excessive background staining of connective tissue
elements
• Inappropriate staining of some cells e.g. lymphocytes,
fibroblasts
NEQAS Slide Results
The overall pass rate for participants as a whole on the
NEQAS distributed sections was 65% (scores of 13-20/20).
23% (10-12/20) of participants received a borderline score,
and the failure rate was 12% (scores under 10/20).
The main reason for failure during this assessment was due
to false negative or lower than expected staining, in the midexpressing tumour (see figs 5&7). Another main contributor
to failure in this assessment was over-excessive antigen
retrieval, which caused inappropriate and non-specific
staining and background (see figs 6&8).
Once again all participants are encouraged to properly
validate their methodologies and use appropriate composite
control material, showing high, medium and negative PR
expression, so both the sensitivity and specificity of the PR
IHC staining can be adequately monitored.
Run 98
Previous assessment runs for PR have highlighted the
potential for false positive staining when using the rabbit
monoclonal anti-PR antibodies. (Dodson and Ibrahim;
Ibrahim et al.). However, we have since noticed a decline in
usage of the SP2 clone, and for this assessment run 98 only
1 laboratory submitted slides stained using this antibody (see
table below):
RUN
Use of SP2 Clone
75 (2006)
30 (6 UK labs)
79 (2007)
15 (0 UK labs)
93 (2011)
3 (0 UK labs)
98 (2012)
1 (0 UK labs)
In-house Tissue Results
As of the previous Run 97 it was decided that unstained inhouse slides will no longer be requested. Therefore,
assessors scored in-house slides based on the quality/
readability of the samples and the correct choice of tissue
and good morphological preservation, Participants were
given a
maximum score of 12/20 if the in-house control
samples did not comprise of a composite breast tissue with
the following levels of PR expression: i) a high expressing
tumour (Allred=7-8) ii) a mid expressing tumour (Allred=4-6)
and iii) a negative tumour (Allred=0). The presence of normal
staining glands is also encouraged.
Participants submitted in-house control material showed an
overall pass rate of 62%, comparable to that of the NEQAS
material, and the failure rate was very encouraging at only
3%. The main reasons behind the borderline scores were
mainly due to participants not submitting control slides with
composite controls i.e. a mid-expressing or negative tumour,
which accounted for 35% of the assessor comments during
the assessment.
References
1. Jennet M. Harvey, Gary M. Clark, C. Kent Osborne, and D. Craig Allred
(1999) Estrogen Receptor Status by Immunohistochemistry Is Superior to the
Ligand-Binding Assay for Predicting Response to Adjuvant Endocrine Therapy
in Breast Cancer J Clin Oncol 17:1474-1481
2. Robin Leake, Diana Barnes, Sarah Pinder, Ian Ellis, Liz Anderson, Tom
Anderson, Ruth Adamson, Tony Rhodes, Keith Miller and Rosemary Walker
(2000) J. Clin. Pathol. 2000: 634-635
3. Anderson E. The role of oestrogen and progesterone receptors in human
mammary development and tumorigenesis. Breast Cancer Res. 2002; 4:197201.
4.Fisher B, Costantino J, Redmond C, Poisson R, Bowman D, Couture J,
Dimitrov NV, Wolmark N, Wickerham DL, Fisher ER, et al. (1989) A
randomized clinical trial evaluating tamoxifen in the treatment of patients with
node-negative breast cancer who have estrogenreceptor-positive tumors. N
Engl J Med 1989: 479-484.
5. Osborne CK, Schiff R, Arpino G, et al. Endocrine responsiveness:
understanding how progesterone receptor can be used to select endocrine
therapy. Breasst 2005; 14:485-465.
6. Ciocca DR and Elledge R. Molecular markers for predicting response to
tamoxifen in breast cancer patients. Endocrine. 2000;13: 1-10.
5. Dodson A and Ibrahim M. The breast hormonal receptor module.
Immunocytochmistry 2008; 6: 74-78.
6. Ibrahim M, Dodson A, Barnett S, Fish D, Jasani B, Miller K. (2008) Potential
for false-positive staining with a rabbit monoclonal antibody to progesterone
receptor (SP2): findings of the UK National External Quality Assessment
Scheme for Immunocytochemistry and FISH highlight the need for correct
validation of antibodies on introduction to the laboratory. Am J Clin Pathol.
129:398-409
© UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent
19
ΡΥΝ 98
ΒΡΕΑΣΤ ΣΤΕΡΟΙ∆ ΗΟΡΜΟΝΕ ΡΕΧΕΠΤΟΡ Μοδυλε
Σελεχτεδ Ιµαγεσ σηοωινγ Οπτιµαλ ανδ Συβ−οπτιµαλ Ιµµυνοσταινινγ
Φιγ 1. Οπτιµαλλψ σταινεδ ΠΡ ιν τηε ηιγη εξπρεσσινγ τυµουρ φροµ τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ χοµποσιτε
βλοχκ. ςιρτυαλλψ αλλ τηε τυµουρ χελλ νυχλει αρε στρονγλψ δεµονστρατεδ ωιτη χλεαν στροµαλ σταινινγ.
Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε ∆ακο 636 (Α+Β) αντιβοδψ, 1:50, υσινγ τηε ∆ακο ΠΤ λινκ, αυτοσταινερ
ανδ Φλεξ δετεχτιον κιτ.
Φιγ 2. Γοοδ δεµονστρατιον οφ ΠΡ ιν τηε µιδ εξπρεσσινγ ΥΚ ΝΕΘΑΣ τυµουρ σεχτιον (Αλλρεδ
σχορε=4−6). Τηε τυµουρ νυχλει αρε φορ τηε µοστ παρτ, µοδερατελψ σταινεδ ανδ ηετερογενουσ.
Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε ∆ακο 636 (Α+Β) αντιβοδψ, 1:50, υσινγ τηε ∆ακο ΠΤ λινκ, αυτοσταινερ
ανδ Φλεξ δετεχτιον κιτ.
Φιγ 3. Οπτιµαλ δεµονστρατιον οφ ΠΡ ιν τηε ηιγη εξπρεσσορ σεχτιον φροµ τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ
χοµποσιτε βλοχκ. Μαιν φιελδ σηοωσ εϖεν, ωελλ λοχαλισεδ σταινινγ οφ τηε τυµουρ νυχλει.
Ηιγη−ποωερ (ινσετ) σηοωσ ϖιρτυαλλψ αλλ τηε νυχλει αρε στρονγλψ ποσιτιϖε. Σεχτιον σταινεδ ωιτη
Νοϖοχαστρα (16+ΣΑΝ27) αντιβοδψ, 1:200, υσινγ τηε Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ1 ανδ Ρεφινε κιτ.
Φιγ 4. Γοοδ δεµονστρατιον οφ ΠΡ ιν τηε µιδ εξπρεσσινγ ΥΚ ΝΕΘΑΣ τυµουρ σεχτιον, σηοωινγ
ωελλ λοχαλισεδ ΠΡ εξπρεσσιον ιν τηε εξπεχτεδ περχενταγε οφ τυµουρ νυχλει (Αλλρεδ=4−6). Σεχτιον
σταινεδ ωιτη Νοϖοχαστρα (16+ΣΑΝ27) αντιβοδψ, 1:200, υσινγ τηε Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ1 ανδ
Ρεφινε κιτ.
Φιγ 5. Συβ−οπτιµαλλψ σταινεδ ΠΡ ιν τηε µιδ εξπρεσσορ σεχτιον φροµ τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ χοµποσιτε
βλοχκ. Αλτηουγη α φεω νυχλει αρε σταινινγ, τηε σενσιτιϖιτψ οφ τηε ασσαψ ισ τοο ωεακ ωιτη λεσσ
τυµουρ νυχλει σταινινγ τηαν τηε εξπεχτεδ λεϖελ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη Νοϖοχαστρα (16Α) αντιβοδψ,
1:300, υσινγ τηε ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ ΧΧ1 στανδαρδ ανδ Υλτραϖιεω κιτ.
Φιγ 6. Ποορ δεµονστρατιον οφ ΠΡ ιν τηε µιδ εξπρεσσινγ ΥΚ ΝΕΘΑΣ τυµουρ, σηοωινγ εξχεσσιϖε
χψτοπλασµιχ ιναππροπριατε σταινινγ. Τηισ ισ µοστ λικελψ χαυσεδ βψ εξχεσσιϖε αντιγεν ρετριεϖαλ.
Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε ∆ακο 636 (Α+Β) αντιβοδψ, 1:50, πρε−τρεατεδ ιν τηε ∆ακο Παχαλ, ανδ
υσινγ τηε ∆ακο αυτοσταινερ ανδ ΡΕΑΛ δετεχτιον κιτ.
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 16:43 ον Τυεσδαψ, 31 ϑυλψ, 2012
20
ΡΥΝ 98
ΒΡΕΑΣΤ ΣΤΕΡΟΙ∆ ΗΟΡΜΟΝΕ ΡΕΧΕΠΤΟΡ Μοδυλε
Σελεχτεδ Ιµαγεσ σηοωινγ Οπτιµαλ ανδ Συβ−οπτιµαλ Ιµµυνοσταινινγ
Φιγ7. Ποορ σταινινγ ωιτη ΠΡ ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ µιδ εξπρεσσινγ σεχτιον. Τηε ασσαψ ισ τοο λοω,
ωιτη λεσσ τηαν τηε εξπεχτεδ περχενταγε οφ τυµουρ νυχλει σταινινγ ποσιτιϖε. Τηε χουντερσταιν ισ
αλσο τοο εξχεσσιϖε, µακινγ ιτ διφφιχυλτ το ιντερπρετ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη Νοϖοχαστρα (16Α)
αντιβοδψ, 1:100, ΧΧ1 στανδαρδ Υλτραϖιεω κιτ ον τηε ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ.
Φιγ 8. Υναχχεπταβλε λεϖελ οφ σταινινγ ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ νεγατιϖε σεχτιον, σηοωινγ εξχεσσιϖε
ιναππροπριατε νον−σπεχιφιχ βαχκγρουνδ σταινινγ. Τηισ ισ µοστ λικελψ χαυσεδ βψ εξχεσσιϖε
αντιγεν ρετριεϖαλ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε ∆ακο 636 (Α+Β) αντιβοδψ, πρε−τρεατεδ ον τηε Λειχα
Βονδ ΙΙΙ ΕΡ2 φορ 25 µινσ.
Φιγ 9. Γοοδ εξαµπλε οφ αν ιν−ηουσε χοµποσιτε βλοχκ (σεε φιγσ 10 & 11 φορ φυρτηερ ιµαγεσ φροµ
τηε σαµε σλιδε) χονσιστινγ οφ α ηιγη εξπρεσσινγ ΠΡ ποσιτιϖε τυµουρ. Σεχτιονσ σταινεδ ωιτη
Νοϖοχαστρα 16Α αντιβοδψ, διλυτεδ 1:350, υσινγ τηε ∆ακο ΠΤ λινκ, αυτοσταινερ ανδ Φλεξ δετεχτιον
κιτ.
Φιγ 10. Γοοδ εξαµπλε οφ αν ιν−ηουσε χοµποσιτε βλοχκ (σεε φιγσ 9 & 11 φορ φυρτηερ ιµαγεσ φροµ
τηε σαµε σλιδε) χονσιστινγ οφ α µιδ−εξπρεσσινγ ΠΡ ποσιτιϖε τυµουρ. Σεχτιονσ σταινεδ ωιτη
Νοϖοχαστρα 16Α αντιβοδψ, διλυτεδ 1:350, υσινγ τηε ∆ακο ΠΤ λινκ, αυτοσταινερ ανδ Φλεξ δετεχτιον
κιτ.
Φιγ 11. Γοοδ εξαµπλε οφ αν ιν−ηουσε χοµποσιτε βλοχκ (σεε φιγσ 9 & 10 φορ φυρτηερ ιµαγεσ φροµ
τηε σαµε σλιδε) χονσιστινγ οφ α ΠΡ νεγατιϖε τυµουρ. Σεχτιονσ σταινεδ ωιτη Νοϖοχαστρα 16Α
αντιβοδψ, διλυτεδ 1:350, υσινγ τηε ∆ακο ΠΤ λινκ, αυτοσταινερ ανδ Φλεξ δετεχτιον κιτ.
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 16:43 ον Τυεσδαψ, 31 ϑυλψ, 2012
21
Ρυν 98
ΒΡΕΑΣΤ ΣΤΕΡΟΙ∆ ΗΟΡΜΟΝΕ ΡΕΧΕΠΤΟΡ Μοδυλε
ΓΡΑΠΗΙΧΑΛ ΡΕΠΡΕΣΕΝΤΑΤΙΟΝ ΟΦ ΠΑΣΣ ΡΑΤΕΣ
ΡΥΝ 98Ε Προγεστερονε ον ΝΕΘΑΣ Σεχτιονσ
ΑΛΛ ΠΑΡΤΙΧΙΠΑΝΤΣ
80
ΡΥΝ 98Ε Προγεστερονε ον ΝΕΘΑΣ Σεχτιονσ
ΥΚ ΠΑΡΤΙΧΙΠΑΝΤΣ
Ινδιϖιδυαλ
Σχορεσ
4 = 0 (0%)
4 = 0 (0%)
35
5 = 0 (0%)
70
5 = 0 (0%)
6 = 1 (0%)
6 = 0 (0%)
30
7 = 1 (0%)
7 = 0 (0%)
8 = 28 (9%)
9 = 5 (2%)
50
10 = 10 (3%)
11 = 11 (4%)
40
12 = 49 (16%)
13 = 28 (9%)
30
14 = 31 (10%)
8 = 16 (11%)
25
νο. οφ ρετυρνσ
νο. οφ ρετυρνσ
60
15 = 33 (11%)
20
9 = 3 (2%)
10 = 4 (3%)
20
11 = 6 (4%)
12 = 32 (21%)
15
13 = 15 (10%)
14 = 18 (12%)
15 = 13 (9%)
10
16 = 73 (24%)
16 = 31 (20%)
17 = 19 (6%)
10
17 = 8 (5%)
5
18 = 7 (2%)
18 = 4 (3%)
19 = 3 (1%)
0
4
5
6
7
8
9
10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
19 = 2 (1%)
0
20 = 0 (0%)
4
5
6
7
8
9
Σχορεσ
10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
Συµµαρψ
16 − 20 = 102 (34%)
16 − 20 = 45 (30%)
13 − 15 = 92 (31%)
13 − 15 = 46 (30%)
10 − 12 = 70 (23%)
10 − 12 = 42 (28%)
0 − 9 = 35 (12%)
0 − 9 = 19 (13%)
Μεδιαν = 12.50
Μεδιαν = 13.50
ΡΥΝ 98Φ Προγεστερονε ον ιν−ηουσε Σεχτιονσ
ΥΚ ΠΑΡΤΙΧΙΠΑΝΤΣ
Ινδιϖιδυαλ
Σχορεσ
45
4 = 0 (0%)
80
5 = 0 (0%)
40
6 = 0 (0%)
7 = 1 (0%)
7 = 0 (0%)
10 = 8 (3%)
50
11 = 20 (7%)
40
12 = 77 (26%)
13 = 32 (11%)
30
14 = 17 (6%)
8 = 0 (0%)
νο. οφ ρετυρνσ
9 = 5 (2%)
νο. οφ ρετυρνσ
6 = 0 (0%)
35
8 = 3 (1%)
60
9 = 2 (1%)
30
10 = 3 (2%)
25
11 = 7 (5%)
12 = 44 (29%)
20
13 = 23 (15%)
14 = 9 (6%)
15
15 = 36 (12%)
20
16 = 66 (22%)
15 = 15 (10%)
10
16 = 40 (26%)
17 = 20 (7%)
10
18 = 7 (2%)
19 = 2 (1%)
0
4
5
6
7
8
9
10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
Σχορεσ
20 = 2 (1%)
Ινδιϖιδυαλ
Σχορεσ
4 = 0 (0%)
5 = 0 (0%)
70
20 = 0 (0%)
Σχορεσ
Συµµαρψ
ΡΥΝ 98Φ Προγεστερονε ον ιν−ηουσε Σεχτιονσ
ΑΛΛ ΠΑΡΤΙΧΙΠΑΝΤΣ
Ινδιϖιδυαλ
Σχορεσ
17 = 5 (3%)
5
0
18 = 3 (2%)
19 = 1 (1%)
4
5
6
7
8
9
10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
20 = 0 (0%)
Σχορεσ
Συµµαρψ
Συµµαρψ
16 − 20 = 97 (33%)
16 − 20 = 49 (32%)
13 − 15 = 85 (29%)
13 − 15 = 47 (31%)
10 − 12 = 105 (35%)
10 − 12 = 54 (36%)
0 − 9 = 9 (3%)
0 − 9 = 2 (1%)
Μεδιαν = 13.50
Μεδιαν = 14.00
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 13:08 ον Τηυρσδαψ, 23 Αυγυστ, 2012
22
Ρυν 98
ΒΡΕΑΣΤ ΣΤΕΡΟΙ∆ ΗΟΡΜΟΝΕ ΡΕΧΕΠΤΟΡ Μοδυλε
ΑΝΤΙΒΟ∆ΙΕΣ ΑΝ∆ ΟΤΗΕΡ ΤΕΧΗΝΙΧΑΛ ΠΑΡΑΜΕΤΕΡΣ ΕΜΠΛΟΨΕ∆ ΒΨ ΠΑΡΤΙΧΙΠΑΝΤΣ ΙΝ ΤΗΕ
ΒΡΕΑΣΤ ΣΤΕΡΟΙ∆ ΗΟΡΜΟΝΕ ΡΕΧΕΠΤΟΡ ΜΟ∆ΥΛΕ
Τηε φολλοωινγ ταβλεσ ρεχορδ τηε νυµβερ οφ παρτιχιπαντσ (Ν) υσινγ εαχη πριµαρψ αντιβοδψ ανδ τηε περχενταγε (%) οφ τηεσε
παρτιχιπαντσ αχηιεϖινγ αχχεπταβλε σταινινγ (α σχορε >12/20) ον ΥΚ ΝΕΘΑΣ σεχτιονσ.
Βρεαστ Στεροιδ Ηορµονε Ρεχεπτορ Ρυν: 98
Βρεαστ Στεροιδ Ηορµονε Ρεχεπτορ Ρυν: 98
Πριµαρψ Αντιβοδψ : Προγεστερονε
Αυτοµατιον
Αντιβοδψ ∆εταιλσ
Βιογενεξ ΑΜ172 (1Α6)
Χελλ Μαρθυε 323Ρ−16 (Α)
∆ακο ΙΡ068 (ΠγΡ 636) (Α&Β)
∆ακο ΙΣ068 (ΠγΡ 636) (Α&Β)
∆ακο Κ1904 (ΠγΡ 1294 (β))
∆ακο Μ3569 (ΠγΡ 636) (Α&Β)
∆ακο Ν1630 ΡΤΥ (ΠγΡ 636) (Α&Β)
ΝεοΜαρκερσ ΡΜ−9102−Σ (ΣΠ2) (Α&Β)
Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−Λ−ΠΓΡ−312 (16) (Α)
Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−Λ−ΠΓΡ−ΑΒ (16+ΣΑΝ27) (Α&Β)
Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−Λ−ΠΓΡ/2 (1Α6) (Α&Β)
Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−ΠΓΡ (1Α6) (Α&Β)
Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−ΠΓΡ−312 (16) (Α)
Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−ΠΓΡ−ΑΒ (16+ΣΑΝ27)
Νοϖοχαστρα ΠΑ0312 (16) (Α)
Νοϖοχαστρα ΡΤΥ−ΠΓΡ (1Α6) (Α&Β)
Νοϖοχαστρα ΡΤΥ−ΠΓΡ−312 (16) (Α)
Νοϖοχαστρα ΡΤΥ−ΠΓΡ−ΑΒ (16+ΣΑΝ27) (Α&Β)
Οτηερ
Σεροτεχ ΜΧΑ 1800 (1Α6) (Α&Β)
ςεχτορ Λαβσ ςΠ−Π975 (1Α6) (Α&Β)
ςεχτορ Λαβσ ςΠ−Π976 (16) (Α)
ςεχτορ Λαβσ ςΠ−Π977 (16+ΣΑΝ27) (Α&Β)
ςεντανα 790−2223 (1Ε2) (Α&Β)
ςεντανα 790−4296 (1Ε2) (Α&Β)
Ζψτοµεδ Σψτεµσ ΣΑ−ΡΒΚ−02 (ΣΠ42) (Α&Β)
Προγεστερονε
Ν
1
1
7
3
3
67
3
1
40
10
1
4
27
7
11
1
5
1
1
1
5
1
1
58
31
1
%
0
0
86
67
67
63
33
100
60
80
100
0
74
43
82
100
60
0
100
0
20
100
100
69
68
0
Βρεαστ Στεροιδ Ηορµονε Ρεχεπτορ Ρυν: 98
ΒιοΓενεξ ΓενοΜΞ 6000ι
ΒιοΓενεξ Οπτιµαξ
∆ακο Αυτοσταινερ
∆ακο Αυτοσταινερ Λινκ 48
∆ακο Αυτοσταινερ πλυσ
∆ακο Αυτοσταινερ Πλυσ Λινκ
Λαβςισιον Αυτοσταινερ
Λειχα Βονδ Μαξ
Λειχα Βονδ−ΙΙΙ
Μεναρινι − Ιντελλιπατη ΦΛΞ
Νονε (Μανυαλ)
Σηανδον Σεθυενζα
ςεντανα Βενχηµαρκ
ςεντανα Βενχηµαρκ ΥΛΤΡΑ
ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ
%
2
1
5
37
10
6
7
71
26
4
7
4
5
34
79
50
100
80
70
50
67
57
76
58
25
57
75
80
79
52
Βρεαστ Στεροιδ Ηορµονε Ρεχεπτορ Ρυν: 98
Προγεστερονε
Ηεατ Μεδιατεδ Ρετριεϖαλ
Βιοχαρε ∆εχλοακινγ Χηαµβερ
∆ακο Πασχαλ
∆ακο ΠΤΛινκ
Λαβ ϖισιον ΠΤ Μοδυλε
Λειχα Βονδ ΙΙΙ ΕΡ1
Λειχα Βονδ ΙΙΙ ΕΡ2
Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ1
Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ2
Μιχροωαϖε Οϖεν
Οτηερ
Πρεσσυρε Χοοκερ
Πρεσσυρε Χοοκερ ιν Μιχροωαϖε Οϖεν
ςεντανα Βενχηµαρκ
ςεντανα Βενκ ΧΧ1 (Εξτενδεδ)
ςεντανα Βενκ ΧΧ1 (Μιλδ)
ςεντανα Βενκ ΧΧ1 (Στανδαρδ)
ςεντανα Βενκ ΧΧ1# (8µινσ)
ςεντανα Βενκ ΥΛΤΡΑ ΧΧ1 (Μιλδ)
ςεντανα Βενκ ΥΛΤΡΑ ΧΧ1 (Σταν.)
ςεντανα Βενκ ΥΛΤΡΑ ΧΧ1# (8µινσ)
ςεντανα Βενκ ΥΛΤΡΑ ΧΧ2 (Μιλδ)
ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Εξτενδεδ)
ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Μιλδ)
ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Στανδαρδ)
Ωατερ βατη 95−98 ΟΧ
Ν
Προγεστερονε
Ενζψµε Μεδιατεδ Ρετριεϖαλ
Ν
%
5
4
48
6
9
17
24
47
10
3
7
1
1
2
17
16
1
10
17
1
1
1
16
31
3
40
50
71
67
67
65
71
74
50
100
71
100
0
50
59
63
0
80
88
100
0
0
38
55
33
ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
ςΒΣ Βονδ Ενζψµε 1
Ν
%
4
126
1
50
62
0
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 13:08 ον Τηυρσδαψ, 23 Αυγυστ, 2012
23
Ρυν 98
Βρεαστ Στεροιδ Ηορµονε Ρεχεπτορ Ρυν: 98
ΒΡΕΑΣΤ ΣΤΕΡΟΙ∆ ΗΟΡΜΟΝΕ ΡΕΧΕΠΤΟΡ Μοδυλε
Βρεαστ Στεροιδ Ηορµονε Ρεχεπτορ Ρυν: 98
Προγεστερονε
Προγεστερονε
∆ετεχτιον
Χηροµογεν
Α Μενερινι Πολψµερ (ΜΠ−ΞΧΠ)
ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ
ΒιοΓενεξ ΣΣ Πολψµερ (Θ∆ 430−ΞΑΚΕ)
∆ακο Ενςισιον ΦΛΕΞ ( Κ8000/10)
∆ακο Ενςισιον ΦΛΕΞ+ ( Κ8002/12)
∆ακο Ενϖισιον ΗΡΠ/∆ΑΒ ( Κ5007)
∆ακο Ενϖισιον+ ΗΡΠ µουσε Κ4004/5/6/7
∆ακο ρβ−α−µο Ιγ (Ε0354)
∆ακο ΡΕΑΛ ΗΡΠ/∆ΑΒ (Κ5001 )
Λαβςισιον Υλτραςισιον ΛΠ ΗΡΠ (ΤΛ 125 ΗΛϑ)
Λαβςισιον Υλτραςισιον ΛΠ ΗΡΠ (ΤΣ 125 Η∆)
Λαβςισιον Υλτραςισιον ΟΝΕ Πολψµερ ( ΤΛ−012/5−Η∆ϑ/Τ
Λειχα Βονδ Πολψµερ ΑΠ Ρεδ ∆ετεχτιον (∆Σ9305)
Λειχα Βονδ Πολψµερ Ρεφινε (∆Σ9800)
ΜεναΠατη Ξ−Χελλ Πλυσ (ΜΠ−ΞΧΠ)
Νονε
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
Νοϖοχαστρα Νοϖολινκ Π∆Σ (ΡΕ7−140/150/280/290−Κ)
Οτηερ
Ποωερ ςισιον ∆ΠςΒ999 ΗΡΠ
ςεχτορ Ελιτε ΑΒΧ Κιτ (ΠΚ−7200)
ςεχτορ ΙµµΠΡΕΣΣ Υνιϖερσαλ (ΜΠ−7500)
ςεντανα ιςιεω σψστεµ (760−091)
ςεντανα Οπτιςιεω Κιτ (760−700)
ςεντανα Υλτραςιεω Κιτ (760−500)
Ν
%
1
7
2
6
34
7
1
1
3
1
1
1
1
89
5
2
1
3
11
1
2
1
17
4
92
100
86
100
67
71
43
100
0
67
100
0
0
0
70
40
0
100
67
73
0
100
100
53
100
60
Α. Μεναρινι Λιθυιδ Σταβλε ∆ΑΒ κιτ
ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ
ΒιοΓενεξ ΑΕΧ
ΒιοΓενεξ ∆ΑΒ (Θ∆430)
∆ακο ∆ΑΒ Κ3468
∆ακο ∆ΑΒ Λιθυιδ (Κ3466)
∆ΑΚΟ ∆ΑΒ+
∆ακο ∆ΑΒ+ Λιθυιδ (Κ3468)
∆ακο ∆ΑΒ+ ΡΕΑΛ ∆ετεχτιον (Κ5001)
∆ακο Ενςισιον Πλυσ κιτσ
∆ακο ΦΛΕΞ ∆ΑΒ
∆ακο ΡΕΑΛ Ενςισιον Κ5007 ∆ΑΒ
∆ακο ΡΕΑΛ Κ5001 ∆ΑΒ
µεναπατη ξχελλ κιτ ∆ΑΒ (ΜΠ−860)
Οτηερ
Σιγµα ∆ΑΒ (∆5637)
Σιγµα ∆ΑΒ (∆5905)
ςΒΣ Βονδ Πολψµερ Ρεφινε κιτ (∆Σ9800)
ςεντανα ∆ΑΒ
ςεντανα ιϖιεω
ςεντανα Υλτραϖιεω ∆ΑΒ
ςισιον ΒιοΣψστεµσ Βονδ Ξ ∆ΑΒ
Ν
%
2
20
1
1
2
1
2
4
1
3
39
6
2
6
9
2
1
81
5
13
94
3
100
85
0
100
50
100
50
100
100
33
69
33
50
50
67
0
0
69
40
62
61
100
ΒΕΣΤ ΜΕΤΗΟ∆Σ
Α σελεχτιον φροµ ϕυστ α φεω οφ τηε βεστ µετηοδσ εµπλοψεδ βψ παρτιχιπαντσ
Προγεστερονε − Μετηοδ 1
Παρτιχιπαντ σχορεδ 19/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 15/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
∆ακο Μ3569 (ΠγΡ 636) (Α&Β) , 30 Μινσ, 25 ≡Χ
Αυτοµατιον:
∆ακο Αυτοσταινερ Πλυσ Λινκ
∆ιλυτιον 1: 600
Μετηοδ:
∆ακο ΦΛΕΞ+ κιτ
Μαιν Βυφφερ:
∆ακο ΦΛΕΞ ωαση βυφφερ
ΗΜΑΡ:
∆ακο ΠΤΛινκ, Βυφφερ: ΗΙΓΗ ΠΗ, ΠΗ: 9
ΕΑΡ:
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
Χηροµογεν:
∆ακο ΦΛΕΞ ∆ΑΒ, 25 ≡Χ., Τιµε 1: 10 Μινσ
∆ετεχτιον:
∆ακο Ενϖισιον+ ΗΡΠ µουσε Κ4004/5/6/7 , 15 Μινσ, 25 ≡Χ Πρεδιλυτεδ
Προγεστερονε − Μετηοδ 2
Παρτιχιπαντ σχορεδ 17/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 19/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
ςεντανα 790−2223 (1Ε2) (Α&Β) , 16 Μινσ, 37 ≡Χ Πρεδιλυτεδ
Αυτοµατιον:
ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ
Μετηοδ:
ςεντανα Υλτραςιεω ∆ΑΒ
Μαιν Βυφφερ:
ςεντανα ρεαχτιον βυφφερ (950−300)
ΗΜΑΡ:
ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Στανδαρδ)
ΕΑΡ:
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
Χηροµογεν:
ςεντανα Υλτραϖιεω ∆ΑΒ
∆ετεχτιον:
ςεντανα Υλτραςιεω Κιτ (760−500)
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 13:08 ον Τηυρσδαψ, 23 Αυγυστ, 2012
24
Ρυν 98
ΒΡΕΑΣΤ ΣΤΕΡΟΙ∆ ΗΟΡΜΟΝΕ ΡΕΧΕΠΤΟΡ Μοδυλε
Προγεστερονε − Μετηοδ 3
Παρτιχιπαντ σχορεδ 18/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 17/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
∆ακο Κ1904 (ΠγΡ 1294 (β)) , 32 Μινσ, 37 ≡Χ
Αυτοµατιον:
ςεντανα Βενχηµαρκ ΥΛΤΡΑ
∆ιλυτιον 1: 1:50
Μετηοδ:
ςεντανα Υλτραςιεω ∆ΑΒ
Μαιν Βυφφερ:
ςεντανα ρεαχτιον βυφφερ (950−300), ΠΗ: 7.6
ΗΜΑΡ:
ςεντανα Βενκ ΥΛΤΡΑ ΧΧ1 (Σταν.)
ΕΑΡ:
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
Χηροµογεν:
ςεντανα Υλτραϖιεω ∆ΑΒ
∆ετεχτιον:
ςεντανα Υλτραςιεω Κιτ (760−500) , 8 Μινσ, 37 ≡Χ Πρεδιλυτεδ
Προγεστερονε − Μετηοδ 4
Παρτιχιπαντ σχορεδ 17/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 17/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−Λ−ΠΓΡ−312 (16) (Α) , 15 Μινσ, ΡΤ ≡Χ
Αυτοµατιον:
Λειχα Βονδ Μαξ
Μετηοδ:
ςΒΣ ΒονδΜΑξ Ρεφινε ΚΙΤ
Μαιν Βυφφερ:
Βονδ Ωαση Βυφφερ (ΑΡ9590)
ΗΜΑΡ:
Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ1, ΠΗ: 6
∆ιλυτιον 1: 200
ΕΑΡ:
Χηροµογεν:
ςΒΣ Βονδ Πολψµερ Ρεφινε κιτ (∆Σ9800)
∆ετεχτιον:
Λειχα Βονδ Πολψµερ Ρεφινε (∆Σ9800) , 8 Μινσ, ΡΤ ≡Χ
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 13:08 ον Τηυρσδαψ, 23 Αυγυστ, 2012
25
The Breast HER2 ICC Module
Run 98
Merdol Ibrahim and Suzanne Parry
Antigens Assessed:
HER2
Tissue Sections circulated:
Composite cell lines (see table below)
Number of Registered Participants:
326
Specific Guideline Used in The Assessment of Slides:
The immunohistochemical results were evaluated by UK NEQAS assessors scoring independently using an adapted method initially devised
by the Clinical Trials Assay. Due to the nature of cell lines, overall percentage staining criteria can not be accurately applied when scoring cell
lines. Communication with Leica Microsystems, with whom UK NEQAS ICC & ISH developed the cell lines, indicate that the expected level of
membrane staining for a given cell line may range from 30-90% from the viable cell line population. For this reason when cutting sections,
every 50th section is stained as a reference point to gauge the expected level of staining throughout the cell block/s.
The table below demonstrates the staining patterns looked for in cell lines and in-house tissue sections during assessments.
Score
Assessment of Cell Line Staining Pattern
Assessment of In-house tissue sections
3+
Strong complete cell membrane staining
Strong complete cell membrane staining in >30% of tumour cells
2+
Weak to moderate complete cell membrane staining
Weak to moderate complete cell membrane staining in >10% of
tumour cells
1+
Faint barely perceptible incomplete membrane staining
Faint barely perceptible incomplete membrane in >10% of cells
staining
negative
No staining in the ‘0’ control cell line
No staining in the ‘0’ control cell line.
UK NEQAS Specific Scoring Algorithm:
UK NEQAS ICC & ISH devised an EQA specific algorithm for scoring both cell lines and tissue sections, so as to provide participants
additional technical feedback. As well as taking into account the expected range (30-90% see above) of cell line membrane staining, the
acceptable staining levels of each of the cell lines are as follows:
Table below illustrates the expected level of staining for each of the circulated breast carcinoma cell lines along with the UK NEQAS
scoring criteria used in assessments ONLY.
Cell line
Score
Acceptable level/s of
staining during
assessments
Description of staining Pattern used by the assessors
SK-BR-3
3+
3+ only
The 3+ cell line has a wide threshold of complete membrane staining showing strong
staining. Only this level of membrane staining is deemed acceptable for this cell line. .
MDA-MB-453
2+
MDA-MB-175
1+
1+ or 0/1+ or 1+/0
i) 0/1+: Staining is more towards the weaker end of 1+ staining but still acceptable.
ii) 1+/0: Staining is more towards the weaker end of 1+ staining but still acceptable.
MDA-MB-231
negative
0 or 0/1+ or 1+/0
0/1+ or 1+/0 = Cells are starting to show very weak membrane staining
2+ or 1+/2+ or 2+/3+ or i) 1+/2+ or 2+/1+: Staining is slightly weaker than expected with membrane showing
2+/1+ or 3+/2+
more 1+ compared to 2+ (1+/2+) or 2+ membrane staining is present but also
showing 1+ staining (2+/1+).
ii) 2+/3+ or 3+/2+: Staining is slightly weaker than expected with membrane
showing more 2+ compared to 3+ (2+/3+) or 3+ membrane staining is present but
also showing 2+ staining (3+/2+).
‘U’/Uninterpretable Scores
Assessors may also give a score of 'U' which indicates that the cell lines / tissue sections were 'uninterpretable’ due to the reasons set out
below. A score of U/x e.g. U/3+ or U/2+ or U/1+ or U/0 indicates a borderline uninterpretable scores indicating that the staining is just about
readable and further improvements are required.
Cell Line FISH Scores:
The NEQAS cell lines are also FISHed as part of the HER2 ISH module, and the table below shows the HER2
FISH ratio ranges provided by the UK NEQAS reference centres for Run 24 of the HER2 ISH assessments.
HER2 gene:Ch17 ratio HER2 status by FISH*
range
Cell line
Score
SK-BR-3
3+
3.26 - 4.40
Amplified
MDA-MB-453
2+
2.04 - 2.29
Borderline: Amplified to Amplified
MDA-MB-175
1+
1.08 - 1.29
Not amplified
MDA-MB-231
negative
0.97 - 1.16
Not amplified
© UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent
26
The Breast HER2 ICC Module
Run 98
Cell Line Positioning:
Cell lines are positioned on microscope slides, as illustrated below. Any variation in this pattern is
indicated on distribution of the slides
HER2
HER2 immunohistochemistry has been routinely used as a
predictive marker in breast cancer for more than 10 years.
Patients with HER2 positive tumours generally have a poor
overall prognosis. However, patients with metastatic disease
showed an improved rate of survival when the humanized
monoclonal antibody Trastuzumab (Herceptin) was given alone
or added with chemotherapy treatment (Slamon et al., 1998).
Herceptin, in the metastatic setting was made available in the
UK in 2000 by the UK National Institute for Clinical Excellence
(NICE). In 2005, Herceptin in the adjuvant setting was also
shown to be effective in primary breast cancers by reducing the
risk of recurrence and mortality (see articles by Wolff et al.,
(2006) and Walker et al., (2008) for further commentary and
citations), and in 2006 NICE approved primary breast
screening for HER2.
In the UK alone this has resulted in approximately 40,000
breast cancers per year being tested for HER2. With so many
more cases now being tested worldwide, it is imperative that
correct protocols and methodologies are followed and adhered
to. The UK NEQAS HER2 IHC module assesses the technical
quality of staining achieved by laboratories and provides
feedback to laboratories to help improve the analytical phase of
patient diagnosis.
appropriate invasive control material, to submit DCIS tissue
showing differing levels of membrane staining as an acceptable
alternative. Laboratories must indicate on their datasheet which
component of the tumour they have scored otherwise the
invasive component (if present) will be assessed.
References
1. Slamon D, Leyland-Jones B, Shak S, et al. Addition of Herceptin
(humanised anti-HER2 antibody) to first line chemotherapy for
(HER2+/MBC) markedly increases anticancer activity: a randomised,
multinational controlled phase III trial. Proc ASCO 1998;17:98a.
2. Piccart-Gebhart MJ, Procter M, Leyland-Jones B, et al: Trastuzumab
after adjuvant chemotherapy in HER2-positive breast cancer. N Engl
J Med 353:1659-1672, 2005
3. Bartlett JM, Ibrahim M, Jasani B, et al. External quality assurance of
HER2 FISH testing: results of a UK NEQAS pilot scheme. J Clin
Pathol 2007 60(7):816-819.
4. Walker RA, Bartlett JM, Dowsett M, Ellis IO, Hanby AM, Jasani B,
Miller K, Pinder SE. HER2 testing in the UK: further update to
recommendations. J Clin Pathol. 2008 61(7):818-824.
5. Wolff AC, Hammond MEH, Schwartz JN, et al. American Society of
Clinical Oncology/College of American Pathologists guideline
recommendations for human epidermal growth factor receptor 2
testing in breast cancer. J Clin Oncol 2007;25:1–28.
Two recommended HER2 testing guidelines are: 1. The ASCO/
CAP guidelines by Wolff et al., (2006) and 2. UK updated
guidelines by Walker et al., (2008). Both provide invaluable
guidelines covering interpretation, tissue fixation and antibody
validation. The article by Walker et. al., also provides guidelines
on the minimum number of tests per year, (250 for HER2 IHC
and 100 HER2 ISH) that labs should be testing in order to
provide a robust HER2 IHC service.
Participants who continue to have difficulty in producing
acceptable staining results should be aware that the members
of staff at UK NEQAS are always willing to assist any
laboratory that is struggling to meet the required standard of
HER2 immunostaining, and would be happy to receive request
for assistance via e-mail in the first instance (see front of
journal for contact details).
In-house Control Tissue Recommendations
Correct choice of in-house control tissue and good
morphological preservation is paramount to gauge the
sensitivity of the HER2 test, which can have an impact on
clinical interpretation. UK NEQAS ICC & ISH therefore
recommends the following:
In-house control tissue (or cell lines) must include 3+,2+ and
1+/0 invasive breast cancer cases. However, it has become
quite apparent that as patient tumour size and respective
biopsies become smaller laboratories may be having difficulty
finding appropriate invasive control material. It is therefore
acceptable, if laboratories are having problems in finding
© UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent
27
ΒΡΕΑΣΤ ΗΕΡ2 ΙΧΧ Μοδυλε
ΡΥΝ 98
Σελεχτεδ Ιµαγεσ σηοωινγ Οπτιµαλ ανδ Συβ−οπτιµαλ Ιµµυνοσταινινγ
Φιγ 1.Γολδ στανδαρδ σταινινγ οφ τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ χελλ λινε ΣΚ−ΒΡ3 (3+), σηοωινγ στρονγ
µεµβρανε σταινινγ, ωηιχη ισ χοµπλετελψ χιρχυµφερεντιαλ ανδ µινιµαλ χψτοπλασµιχ σταινινγ. (Α)
σταινεδ ωιτη ςεντανα 4Β5 ανδ (Β) ωιτη τηε Λειχα Οραχλε κιτ.
Φιγ 2. Υναχχεπταβλε λεϖελ οφ σταινινγ οφ τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ χελλ λινε ΣΚ−ΒΡ3 (3+). Βοτη σεχτιονσ
σηοω χελλ µεµβρανε µορπηολογψ δαµαγε δυε το εξχεσσιϖε αντιγεν ρετριεϖαλ. (Α) σταινεδ ωιτη
τηε Λειχα Οραχλε κιτ, ανδ (Β) υσινγ α ηοµε−βρεω µετηοδ ωιτη τηε ∆ακο πολψχλοναλ αντιβοδψ ον
τηε ΒονδΜαξ ΕΡ2.
Φιγ 3. Γολδ στανδαρδ σταινινγ οφ τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ χελλ λινε Μ∆Α−ΜΒ−453 (2+), σηοωινγ χοµπλετε
µεµβρανε σταινινγ ιν τηε µαϕοριτψ οφ χελλσ, ωιτη λεσσ ιντενσιϖε σταινινγ τηαν τηατ σεεν ωιτη τηε
3+ χελλ λινε. (Α) σταινεδ ωιτη τηε ςεντανα 4Β5 ανδ (Β) ωιτη τηε Λειχα Οραχλε κιτ.
Φιγ 4. Γολδ στανδαρδ σταινινγ οφ τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ χελλ λινε Μ∆Α−ΜΒ−453 (2+) σταινεδ υσινγ τηε
Ηερχεπτ κιτ. Τηε σταινινγ ισ χοµπλετε ανδ µεµβρανουσ ιν τηε µαϕοριτψ οφ χελλσ ωιτη λοωερ
ιντενσιτψ ωηεν χοµπαρεδ το τηε 3+ χελλ λινε (σηοων ιν Φιγ1).
Φιγ 5. Υναχχεπταβλε λεϖελ οφ σταινινγ οφ τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ χελλ λινε Μ∆Α−ΜΒ−453 (2+). Σεχτιον (Α)
σταινεδ ωιτη τηε ςεντανα 4Β5 σηοωσ χελλ µορπηολογψ δαµαγε µοστ λικελψ χαυσεδ βψ εξχεσσιϖε
αντιγεν ρετριεϖαλ. Σταινινγ ιν (Β) ισ τοο στρονγ ανδ µορε ρεπρεσεντατιϖε οφ α 3+. Σταινεδ υσινγ
τηε Λειχα Οραχλε, ΕΡ1 25 µινσ.
Φιγ 6. Γολδ στανδαρδ σταινινγ οφ τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ χελλ λινε Μ∆Α−ΜΒ−175 (1+), σηοωινγ αχιναρ
χλυµπσ ωιτη παρτιαλ µεµβρανε σταινινγ, ωηιχη ισ δισχερνιβλε φροµ τηε ‘φυζζψ’ βρυση βορδερ
σταινινγ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε Ηερχεπτεστ κιτ.
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 16:59 ον Τυεσδαψ, 31 ϑυλψ, 2012
28
ΒΡΕΑΣΤ ΗΕΡ2 ΙΧΧ Μοδυλε
ΡΥΝ 98
Σελεχτεδ Ιµαγεσ σηοωινγ Οπτιµαλ ανδ Συβ−οπτιµαλ Ιµµυνοσταινινγ
Φιγ 7. Γολδ στανδαρδ σταινινγ οφ τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ χελλ λινε Μ∆Α−ΜΒ−175 (1+) σταινεδ ωιτη τηε
ςεντανα 4Β5 (Α) ανδ τηε Λειχα Οραχλε κιτσ (Β). Τηε αχιναρ χλυµπσ σηοω βοτη φινε ινχοµπλετε
µεµβρανε ανδ χοαρσε λυµιναλ σταινινγ. Ιτ ισ ονλψ τηε φινε µεµβρανε σταινινγ τηατ ισ ασσεσσεδ.
Φιγ 8. Υναχχεπταβλε λεϖελ οφ σταινινγ οφ τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ χελλ λινε Μ∆Α−ΜΒ−175 (1+). Σεχτιον (Α)
σταινεδ ωιτη τηε Λειχα Οραχλε κιτ σηοωσ τοο µανψ χοµπλετε µεµβρανεσ ανδ ισ µορε
ρεπρεσεντατιϖε οφ 2+ σταινινγ (χοµπαρε το Φιγ7). (Β) σταινεδ υσινγ τηε ςεντανα 4Β5, σηοωσ χελλ
µορπηολογψ δαµαγε µοστ λικελψ χαυσεδ βψ εξχεσσιϖε αντιγεν ρετριεϖαλ.
Φιγ 9. Σταινινγ οφ τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ νεγατιϖε ΜΒΑ−ΜΒ−231 (0) χελλ λινε. Σεχτιον (Α) σηοωσ τηε
Λειχα Οραχλε σταινεδ γολδ στανδαρδ ωιτη νο µεµβρανε σταινινγ. Σεχτιον (Β) ηασ υναχχεπταβλε
σταινινγ οφ τηε µεµβρανεσ ανδ χψτοπλασµ, αλσο σταινεδ υσινγ τηε Λειχα Οραχλε, ον τηε Βονδ ΙΙΙ
ΕΡ1, 25 µινσ.
Φιγ 11. Γοοδ εξαµπλε οφ αν ‘ιν ηουσε’ 1+ χοντρολ σταινεδ ωιτη τηε Ηερχεπτεστ κιτ. Τηε σταινινγ ισ
ωεακ ανδ παρτιαλλψ µεµβρανουσ.
Φιγ 11. Γοοδ εξαµπλε οφ αν ‘ιν ηουσε’ 2+ χοντρολ σταινεδ ωιτη τηε Ηερχεπτεστ κιτ, σηοωινγ ωεακ
το µοδερατε µεµβρανε σταινινγ.
Φιγ 12. Γοοδ εξαµπλε οφ αν ‘ιν ηουσε’ 3+ χοντρολ σταινεδ ωιτη τηε ςεντανα 4Β5, σηοωινγ
ιντενσε, χρισπ µεµβρανε σταινινγ.
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 16:59 ον Τυεσδαψ, 31 ϑυλψ, 2012
29
Ρυν 98
ΒΡΕΑΣΤ ΗΕΡ2 ΙΧΧ Μοδυλε
ΓΡΑΠΗΙΧΑΛ ΡΕΠΡΕΣΕΝΤΑΤΙΟΝ ΟΦ ΠΑΣΣ ΡΑΤΕΣ
Ρυν 98 ΗΕΡ2 ον ΝΕΘΑΣ Χελλ Λινεσ
ΑΛΛ ΠΑΡΤΙΧΙΠΑΝΤΣ
Ρυν 98 ΗΕΡ2 ον ΝΕΘΑΣ Χελλ Λινεσ
ΥΚ ΠΑΡΤΙΧΙΠΑΝΤΣ
60
140
120
50
100
Νο. οφ Ρετυρνσ
Νο. οφ Ρετυρνσ
40
80
60
30
20
40
10
20
0
Αχχεπταβλε
ΒορδερΛινε
0
Ιναππροπριατε
Αχχεπταβλε = 138 (55%) παρτιχιπαντσ
ΒορδερΛινε = 38 (15%) παρτιχιπαντσ
Ιναππροπριατε = 75 (30%) παρτιχιπαντσ
Αχχεπταβλε
ΒορδερΛινε
Ιναππροπριατε
Αχχεπταβλε = 56 (78%) παρτιχιπαντσ
ΒορδερΛινε = 11 (15%) παρτιχιπαντσ
Ιναππροπριατε = 5 (7%) παρτιχιπαντσ
Ρυν 98 ΗΕΡ2 ΙΗΧ ον ιν−ηουσε τισσυε σεχτιονσ
ΑΛΛ ΠΑΡΤΙΧΙΠΑΝΤΣ
Ρυν 98 ΗΕΡ2 ΙΗΧ ον ιν−ηουσε τισσυε σεχτιονσ
ΥΚ ΠΑΡΤΙΧΙΠΑΝΤΣ
120
45
40
100
35
30
Νο. οφ Ρετυρνσ
Νο. οφ Ρετυρνσ
80
60
40
25
20
15
10
20
5
0
Αχχεπταβλε
ΒορδερΛινε
Ιναππροπριατε
Αχχεπταβλε = 107 (44%) παρτιχιπαντσ
ΒορδερΛινε = 49 (20%) παρτιχιπαντσ
Ιναππροπριατε = 85 (35%) παρτιχιπαντσ
0
Αχχεπταβλε
ΒορδερΛινε
Ιναππροπριατε
Αχχεπταβλε = 42 (59%) παρτιχιπαντσ
ΒορδερΛινε = 17 (24%) παρτιχιπαντσ
Ιναππροπριατε = 12 (17%) παρτιχιπαντσ
Φορ Ινηουσε ασσεσσορ µακε α χοµβινεδ δεχισιον ασ το τηε αχχεπταβιλιτψ βασεδ υπον τηε φολλοωινγ:
α) Ιν−ηουσε χοντρολ τισσυε µυστ ινχλυδε 3+,2+ ανδ 1+/0 ινϖασιϖε βρεαστ χανχερ χασεσ (νοτ ∆ΧΙΣ).
β) Τισσυε φιξατιον, πρεσερϖατιον οφ µορπηολογψ, αντιγεν ρετριεϖαλ, χουντερσταιν ετχ ισ αλσο βε τακεν ιντο
χονσιδερατιον ωηεν σχορινγ.
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 13:07 ον Τηυρσδαψ, 23 Αυγυστ, 2012
30
Ρυν 98
ΒΡΕΑΣΤ ΗΕΡ2 ΙΧΧ Μοδυλε
ΑΝΤΙΒΟ∆ΙΕΣ ΑΝ∆ ΟΤΗΕΡ ΤΕΧΗΝΙΧΑΛ ΠΑΡΑΜΕΤΕΡΣ ΕΜΠΛΟΨΕ∆ ΒΨ ΠΑΡΤΙΧΙΠΑΝΤΣ ΙΝ ΤΗΕ
ΒΡΕΑΣΤ ΗΕΡ2 ΙΧΧ ΜΟ∆ΥΛΕ
Τηε φολλοωινγ ταβλεσ ρεχορδ τηε νυµβερ οφ παρτιχιπαντσ (Ν) υσινγ εαχη πριµαρψ αντιβοδψ. Τηε περχενταγε (%) ρεφερσ το τηε
προπορτιον οφ τηεσε παρτιχιπαντσ αχηιεϖινγ ∋Αχχεπταβλε∋ ορ ∋Βορδερλινε∋ σχορεσ.
Βρεαστ ΗΕΡ2 ΙΧΧ Ρυν: 98
Αντιβοδψ ∆εταιλσ
Βιοχαρε ΧΜΕ 342 Α,Β (ΕΠ1045Ψ)
Χελλ Μαρθυε ΧΜΑ 601 (ΧΒ11)
∆ακο Α0485 Χ−ερΒ−2 (πολψ)
∆ακο ΗερχεπΤεστ Κ5204 (πολψ)
∆ακο ΗερχεπΤεστ Κ5207 (πολψ)
∆ακο Λινκ ΗερχεπΤεστ ΣΚ001 (πολψ)
Λαβϖισιον / Νεοµαρκερσ ΡΜ−9103 (ΣΠ3)
Λειχα Οραχλε ΗΕΡ2 Βονδ ΙΗΧ (ΧΒ11)
Νεοµαρκερσ ΜΣ−730−Π
Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−Λ−ΧΒ11 (ΧΒ11)
Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−Λ−ΧΒΕ356 (10Α7)
Οτηερ
ςεχτορ ΧΒ11 ςΠ−Χ380
ςεντανα Χονφιρµ 790/800−2996 (4Β5)
ςεντανα πατηωαψ 760−2694 (ΧΒ11)
ςεντανα Πατηωαψ 790−100 (4Β5)
ςεντανα Πατηωαψ 790−2991 (4Β5)
Βρεαστ ΗΕΡ2 ΙΧΧ Ρυν: 98
Ν
1
1
37
13
8
19
6
28
1
11
2
4
2
25
1
13
68
%
0
100
35
69
100
84
17
82
100
27
100
50
50
80
100
92
87
Βρεαστ ΗΕΡ2 ΙΧΧ Ρυν: 98
Ηεατ Μεδιατεδ Ρετριεϖαλ
∆ακο ΠΤΛινκ
Λαβ ϖισιον ΠΤ Μοδυλε
Λειχα Βονδ ΙΙΙ ΕΡ1
Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ1
Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ2
Μιχροωαϖε Οϖεν
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
Οτηερ
Πρεσσυρε Χοοκερ
Στεαµερ
ςεντανα Βενχηµαρκ
ςεντανα Βενκ ΧΧ1 (Εξτενδεδ)
ςεντανα Βενκ ΧΧ1 (Μιλδ)
ςεντανα Βενκ ΧΧ1 (Στανδαρδ)
ςεντανα Βενκ ΧΧ1# (8µινσ)
ςεντανα Βενκ ΥΛΤΡΑ ΧΧ1 (Μιλδ)
ςεντανα Βενκ ΥΛΤΡΑ ΧΧ1 (Σταν.)
ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Εξτενδεδ)
ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Μιλδ)
ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Στανδαρδ)
ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1# (8µινσ)
Ωατερ βατη 68 ΟΧ
Ωατερ βατη 95−98 ΟΧ
ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ
∆ακο ΗερΧεπ Τεστ (Κ5204)
∆ακο Ενςισιον ΦΛΕΞ ( Κ8000/10)
∆ακο Ενςισιον ΦΛΕΞ+ ( Κ8002/12)
∆ακο Ενϖισιον ΗΡΠ/∆ΑΒ ( Κ5007)
∆ακο Ενϖισιον+ ΗΡΠ ραββιτ Κ4008/9/10/11
∆ακο ΗερΧεπ Τεστ Αυτο∋ρ (Κ5207)
∆ακο ΗερΧεπ Τεστ Αυτο∋ρ (ΣΚ001)
∆ακο ρβ−α−µο Ιγ (Ε0354)
Λαβςισιον Υλτραςισιον ΛΠ ΗΡΠ (ΤΛ 125 ΗΛϑ)
Λαβςισιον Υλτραςισιον ΛΠ ΗΡΠ (ΤΣ 125 Η∆)
Λαβςισιον Υλτραςισιον ΟΝΕ Πολψµερ ( ΤΛ−012/5−Η∆ϑ/Τ
Λειχα Βονδ Πολψµερ ∆εφινε (∆Σ9713)
Λειχα Βονδ Πολψµερ Ρεφινε (∆Σ9800)
Νονε
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
Νοϖοχαστρα Νοϖολινκ Π∆Σ (ΡΕ7−140/150/280/290−Κ)
Οτηερ
ςεντανα ιςιεω σψστεµ (760−091)
ςεντανα Οπτιςιεω Κιτ (760−700)
ςεντανα Υλτραςιεω Κιτ (760−500)
ΒιοΓενεξ ΓενοΜΞ 6000ι
∆ακο Αυτοσταινερ
∆ακο Αυτοσταινερ Λινκ 48
∆ακο Αυτοσταινερ πλυσ
∆ακο Αυτοσταινερ Πλυσ Λινκ
Λαβςισιον Αυτοσταινερ
Λειχα Βονδ Μαξ
Λειχα Βονδ−ΙΙΙ
Νονε (Μανυαλ)
Οτηερ
Σηανδον Σεθυενζα
ςεντανα Βενχηµαρκ
ςεντανα Βενχηµαρκ ΥΛΤΡΑ
ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ
ςεντανα ΝεξΕΣ
Ν
%
1
4
22
6
6
2
34
12
36
2
1
2
37
72
2
0
75
73
50
100
50
71
83
33
50
0
50
84
86
100
Βρεαστ ΗΕΡ2 ΙΧΧ Ρυν: 98
Ν
%
26
4
8
32
4
8
3
4
2
3
1
1
22
9
2
16
6
2
35
14
1
1
36
69
75
75
78
25
13
67
100
0
0
100
100
95
78
0
75
67
100
91
79
100
0
56
Βρεαστ ΗΕΡ2 ΙΧΧ Ρυν: 98
∆ετεχτιον
Αυτοµατιον
Ενζψµε Μεδιατεδ Ρετριεϖαλ
ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
ςΒΣ Βονδ Ενζψµε 1
Ν
%
11
82
100
67
1
0
Ν
%
1
59
1
2
1
7
2
5
20
2
1
1
15
1
1
19
1
9
88
2
1
0
78
0
0
0
71
50
40
50
50
0
0
53
100
0
63
100
89
85
100
0
Βρεαστ ΗΕΡ2 ΙΧΧ Ρυν: 98
Ν
%
36
11
9
3
5
3
7
12
1
1
1
2
1
21
1
6
3
9
9
4
88
75
82
22
33
20
33
100
83
0
0
100
0
100
62
0
67
0
33
89
75
86
Χηροµογεν
Α. Μεναρινι Λιθυιδ Σταβλε ∆ΑΒ κιτ
ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ
ΒιοΓενεξ ΑΕΧ
∆ακο ∆ΑΒ Κ3468
∆ακο ∆ΑΒ Λιθυιδ (Κ3466)
∆ΑΚΟ ∆ΑΒ+
∆ακο ∆ΑΒ+ Λιθυιδ (Κ3468)
∆ακο Ενςισιον Πλυσ κιτσ
∆ακο ΦΛΕΞ ∆ΑΒ
∆ακο ΡΕΑΛ Ενςισιον Κ5007 ∆ΑΒ
Λαβςισιον (ΤΑ−125−Η∆)
Λαβςισιον ∆ΑΒ
Οτηερ
Σιγµα ∆ΑΒ (∆5637)
Σιγµα ∆ΑΒ (∆5905)
ςΒΣ Βονδ Πολψµερ Ρεφινε κιτ (∆Σ9800)
ςεντανα ∆ΑΒ
ςεντανα ιϖιεω
ςεντανα Υλτραϖιεω ∆ΑΒ
ςισιον ΒιοΣψστεµσ Βονδ Ξ ∆ΑΒ
Ζψµεδ ∆ΑΒ
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 13:07 ον Τηυρσδαψ, 23 Αυγυστ, 2012
31
Ρυν 98
ΒΡΕΑΣΤ ΗΕΡ2 ΙΧΧ Μοδυλε
ΒΕΣΤ ΜΕΤΗΟ∆Σ
Α σελεχτιον φροµ ϕυστ α φεω οφ τηε βεστ µετηοδσ εµπλοψεδ βψ παρτιχιπαντσ
98 ΗΕΡ2 ΙΗΧ − Μετηοδ 1
Παρτιχιπαντ σχορεδ Αχχεπταβλε (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ Ιναππροπριατε (χοντρολ σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
∆ακο Λινκ ΗερχεπΤεστ ΣΚ001 (πολψ) , 30 Μινσ, 25 ≡Χ Πρεδιλυτεδ
Αυτοµατιον:
∆ακο Αυτοσταινερ Πλυσ Λινκ
Μετηοδ:
∆ακο ΦΛΕΞ κιτ
Μαιν Βυφφερ:
∆ακο ΦΛΕΞ ωαση βυφφερ
ΗΜΑΡ:
∆ακο ΠΤΛινκ, Βυφφερ: Ασ περ κιτ
ΕΑΡ:
Χηροµογεν:
∆ακο ΦΛΕΞ ∆ΑΒ, Τιµε 1: 10 Μινσ, Τιµε 2: 10 Μινσ
∆ετεχτιον:
∆ακο ΗερΧεπ Τεστ Αυτο∋ρ (ΣΚ001) , 30 Μινσ, 25 ≡Χ Πρεδιλυτεδ
98 ΗΕΡ2 ΙΗΧ − Μετηοδ 2
Παρτιχιπαντ σχορεδ Αχχεπταβλε (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ Νοτ Αππλιχαβλε (χοντρολ σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
ςεντανα Πατηωαψ 790−2991 (4Β5) , 16 Μινσ, Αµβ ≡Χ Πρεδιλυτεδ
Αυτοµατιον:
ςεντανα Βενχηµαρκ ΥΛΤΡΑ
Μετηοδ:
ςεντανα Υλτραςιεω ∆ΑΒ
Μαιν Βυφφερ:
ςεντανα ρεαχτιον βυφφερ (950−300)
ΗΜΑΡ:
ςεντανα Βενκ ΥΛΤΡΑ ΧΧ1 (Μιλδ)
ΕΑΡ:
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
Χηροµογεν:
ςεντανα Υλτραϖιεω ∆ΑΒ, Αµβ ≡Χ.
∆ετεχτιον:
ςεντανα Υλτραςιεω Κιτ (760−500) , 8 Μινσ, Αµβ ≡Χ Πρεδιλυτεδ
98 ΗΕΡ2 ΙΗΧ − Μετηοδ 3
Παρτιχιπαντ σχορεδ Αχχεπταβλε (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ Νοτ Αππλιχαβλε (χοντρολ σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
Λειχα Οραχλε ΗΕΡ2 Βονδ ΙΗΧ (ΧΒ11) , 30 Μινσ, 22 ≡Χ Πρεδιλυτεδ
Αυτοµατιον:
Λειχα Βονδ Μαξ
Μετηοδ:
ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ
Μαιν Βυφφερ:
Βονδ Ωαση Βυφφερ (ΑΡ9590)
ΗΜΑΡ:
Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ1
ΕΑΡ:
Χηροµογεν:
ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ, Τιµε 2: 10 Μινσ
∆ετεχτιον:
ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ , 10 Μινσ, 22 ≡Χ Πρεδιλυτεδ
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 13:07 ον Τηυρσδαψ, 23 Αυγυστ, 2012
32
The HER2 IHC Gastric Pilot Module
Run 98
Merdol Ibrahim, Suzanne Parry, Jane Starczynski, Jane Moorhead, Phillipe Taniere and Iris Nagelmeier
Antigens Assessed:
HER2 IHC
Tissue Sections circulated:
Composite slide consisting of:
A. 2+ Intestinal Gastric carcinoma. Note: one block also had an area of 2+
membrane staining
B. 3+ Intestinal Gastric carcinoma
C. Negative Intestinal Gastric carcinoma
D. 2+ Intestinal Gastric carcinoma
Number of Participants Taking Part
128
Table: 1 Gastric HER2 ICC Membrane Scoring Guidlines
by Hoffman et al., (2008) and Rüschoff et al., (2010)
Surgical / resections
(As used in this assessment)
Biopsies
0
(negative)
No staining in < 10% of tumour cells
No staining in any of the tumour cells
1+
(negative)
Faint barely perceptible incomplete membrane
staining in >10% of cells staining
Tumour cells with faint barely perceptible incomplete membrane
staining, irrespective of percentage of tumour cells stained
2+
(equivocal*)
Weak/ moderate complete, basolateral or lateral
membrane reactivity in > 10% of tumour cells
Tumour cells with weak/ moderate complete, basolateral or lateral
membrane reactivity irrespective of % tumour cells stained
3+
(positive)
Strong complete, basolateral or lateral membrane
reactivity in > 10% of tumour cells
Tumour cells with strong, basolateral or lateral membrane
reactivity irrespective of percentage of tumour cells stained
Score
* Equivocal cases should be refluxed to ISH testing. Note: in the UK, NICE guidelines recommend that only 3+ cases are put
forward for Trastuzumab treatment, see http://guidance.nice.org.uk/TA208
Validation of Distributed Samples
IHC Validation of Distributed Samples
The NEQAS tissue sections were quality controlled prior to sending out, using the Ventana pathway 4B5 as the ‘gold
standard’. However, sections were also stained using the Dako Herceptest and Leica Oracle system:
Important: The Leica Oracle HER2 IHC System is not currently supported for gastric HER2 IHC and any laboratory using the
kit for gastric purposes should be aware that they are doing so ’off label usage’ and would need to fully validate the Leica
Oracle system prior to diagnostic use.
ISH Validation of Distributed Samples
The tissue was also assessed for gene expression using both FISH (Abbott Vysis) and DDISH (Ventana), and the amplified
Table 2:
Section Label From
slide Label End
Staining Pattern
with Ventana 4B5
HER2 status by ISH*
A
2+
Non-Amplified (but see fig 1-4)
B
3+
Amplified (but see fig 9 & 10)
C
0/1+*
Non-Amplified (see fig 11)
D
2+/3+**
Amplified (see fig 13)
*Block-b showed incomplete membrane staining in some cases
*Block-b showed 3+ membrane staining in some cases
© UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent
33
The HER2 IHC Gastric Pilot Module
Run 98
Assessment Procedure
Assessment is carried out around a multi-header microscope with each slide being assessed by 4 independent assessors and a
microscope lead. Each of the NEQAS samples (A,B,C,D) (as well as in-house samples where submitted) are individually
assessed, with each assessor providing membrane interpretation (see table 3), and an individual score out of 5 (see table 4)
based interpretability of membrane staining and technical feedback. The four assessors scores are then combined to give an
overall score out of 20 and it’s interpretation (see table 4).
Table 3: UK NEQAS Specific Membrane Scoring Criteria
UK NEQAS ICC & ISH uses an EQA specific scoring criteria when scoring the tissue sections, so as to provide participants
additional technical feedback, which is illustrated below.
Expected
membrane staining
Scoring criteria used by UK NEQAS ICC & ISH
3+
i) 3+: as expected
Ii) 2+/3+ or 3+/2+: Staining is slightly weaker than expected with membrane showing more 2+ compared to 3+
(2+/3+) or 3+ membrane staining is present but also showing 2+ staining (3+/2+).
2+
i) 1+/2+ or 2+/1+: Staining is slightly weaker than expected with membrane showing more 1+ compared to 2+
(1+/2+) or 2+ membrane staining is present but also showing 1+ staining (2+/1+).
ii) 2+/3+ or 3+/2+: Staining is slightly weaker than expected with membrane showing more 2+ compared to 3+
(2+/3+) or 3+ membrane staining is present but also showing 2+ staining (3+/2+).
1+
i) 0/1+: Staining is more towards the weaker end of 1+ staining but still acceptable.
ii) 1+/0: Staining is more towards the weaker end of 1+ staining but still acceptable.
Neg.
0/1+ or 1+/0 = Staining starting to show very weak membrane staining
‘U’ = Uninterpretable: Assessors may also give a score of 'U' which indicates that the cell lines / tissue sections were 'uninterpretable’ due
to the reasons set out below.
U/x = Borderline interpretable. A score of U/x e.g. U/3+ or U/2+ or U/1+ or U/0 indicates that the staining is just about readable and
further improvements are required.
Any other membrane score other that assigned for each of the expected scores are deemed as unacceptable
Table 4: Numeric Scoring Criteria used to Calculate the Overall Pass Mark
Individual
Assessor Score
Combined
Assessor Scores
0
0
1&2
4-9 = Unacceptable
3
10-12 = Borderline
4&5
13-15 = Acceptable
16-20 = Acceptable/
Excellent Standard
Overall Score Interpretation
Slide not submitted for assessment
Overall the samples are of unacceptable quality for clinical interpretation and technical
improvements need to be made. Marks may have been deducted due to:
 False positive / negative membrane staining
 Excessive cytoplasmic staining
 Excessive morphological damage
 Excessive staining of normal glands
Overall the samples are borderline interpretable indicating that technical improvements
need to be made. Marks may have been deducted due to:
 Weaker / stronger than expected membrane staining
 Some cytoplasmic staining
 Morphological damage
Overall the samples show acceptable membrane staining and are suitable for interpretation.
Further comments are also provided on individual participant reports. Other factors which may lead to a low score include: excessive /
insufficient haematoxylin staining ; Poor quality of in-house control tissue ; poor/inadequate choice of control tissue ; poor/inadequate
fixation ; Excessive antigen retrieval etc.
Introduction
Immunohistochemical testing of HER2 status is now routinely
used in breast cancer testing and is recognised as a
prognostic and predictive marker, generally used alongside
breast hormonal receptor markers ER/PR. Patients who are
HER2 positive (IHC 3+ and IHC 2+/ISH+ ) have been shown
to benefit from Herceptin (Trastuzumab) therapy and
increased overall survival rate. More recently the Trastuzumab
for Gastric Cancer (ToGA) study, which investigated
Trastuzumab in HER2 positive advanced gastric cancer (Bang
et al., 2010) showed overall median survival of nearly 3
months. Similar to breast cancer, the ToGA trial showed an
increased benefit from Trastuzumab treatment for patients
showing 3+ IHC and IHC2+/FISH+ expression. The initial
development of the HER2 scoring criteria was developed as a
precursor to the ToGA trial (Hoffman et al., 2008) with the
study group modifying the breast HER2 IHC scoring algorithm
to compensate for the incomplete membrane staining and
greater tumour heterogeneity seen in gastric cancers. A
different scoring system was also established for re-section
and core biopsies as illustrated in table 1. A more recent
article by Rüschoff et al., (2010) has validated the scoring
procedure further with a detailed approach to ’stepwise’ HER2
IHC scoring in gastric cancers. The article also compared the
Ventana 4B5 assay with the Herceptest and indicated “a
tendency towards higher sensitivity for 4B5 detecting positive
© UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent
34
The HER2 IHC Gastric Pilot Module
HER2 amplification” but “There was no difference between
both test platforms with respect to the ISH-negative cases with
the one equivocal case testing negative at some sites and as
positive at others”. Rüschoff and colleagues also used both
fluorescent (Dako pharmDX or PathVysion Vysis) and
chromogen (Ventana BDISH) to confirm their IHC findings.
Run 98
Methodologies
Of those participants who submitted methodology data (62),
the main methodology employed was the Ventana 4B5
antibody with 69% (43/62) of participants using this assay, and
showed an overall acceptable rate of 81% (35/43). The
second most popular method was a home-brew method using
the Dako polyclonal antibody (13%, n=8) which had a 100%
Acceptable & Unacceptable Staining (Figs 1-8) unacceptable rate. The Dako polyclonal was noted to be used
with a full range of retrieval methods, including water bath,
The samples distributed consisted of a single slide of four
microwave oven and
pressure cooker. The third most
gastric resection tissue samples denoted A-D arranged as
common methodology was the Dako Herceptest (n=6) with a
follows:
pass rate of 17% (1/6).
Sample A: 2+ Intestinal Gastric carcinoma (Fig 1)
The methodologies employed and their pass rates are further
Sample B: 3+ Intestinal Gastric carcinoma (Figs 2&5)
illustrated in the technical parameter tables. It is important to
Sample C: Negative intestinal Gastric carcinoma (Figs 3&7) and
Sample D: 2+ Intestinal Gastric carcinoma (Figs 4&6).
note that because of the small number of users for several
differing methodologies it is not possible to say whether such
Slides were assessed based on the resection/surgical criteria methods/antibodies are suitable for gastric IHC in the context
shown in table 1. It was noted that sample ’D’ showed of the UK NEQAS gastric assessment.
heterogeneous staining which was also seen on the ’Gold
Standard’ stained slides. ’D’ showed 2+ and a focal area of 3+ Control Tissue and Recommendations
staining. However, based on the 10% cut off value for the
membrane scoring of gastric resection tumours, overall, the In-house control slides were also requested for this module,
however, it was left open for laboratories to submit the control
section was interpreted as HER2 2+.
material of their choice. For this run 58/68 laboratories
submitted an in-house control, of which 35/58 (60%))
Please refer to images and associated legends for further submitted gastric cancer control tissue, with the majority of
information regarding the acceptable and unacceptable range these being composite control slides with 3+,2+ and 1+/0
of staining patterns that were submitted for assessment.
membrane staining.12/58 (21%) of laboratories submitted
breast tissue as their in-house controls, with 11/58 (19%) of
laboratories not specifying the tissue that was submitted.
Additional Comments
a. The Ventana 4B5 did show some epithelial staining Gastric controls would be the preferred tissue choice as in(intestinal metaplasia) (not illustrated). Participants were not house controls for this module, but it is quite understandable
scored down as the assessment team were aware that this is that laboratories may find it difficult to source good quality
one of the staining characteristics of the Ventana 4B5 controls, therefore laboratories were not penalised if they had
antibody and did not detract from the actual staining of the submitted breast carcinomas. Whether gastric or breast tissue
is used, laboratories should still submit in-house controls
gastric cancer
showing 3+, 2+ and 1+/0 levels of membrane expression. It is
b. The Leica Oracle HER2 IHC System is not currently
also acceptable to submit a heterogeneous in-house gastric
supported for gastric HER2 IHC and any laboratory using the
tumour control with areas of 3+ and areas of 2+ membrane
kit for gastric purposes should be aware that they are doing so
expression as long as the participant indicates the areas of
’off label usage’ and would need to fully validate the Leica
expected membrane staining.
Oracle system prior to diagnostic use.
Pass Rates
Of the 68 participants that took part in this assessment, results
from the NEQAS distributed samples showed an overall
acceptable pass rate of 56%, with 29% of participants scoring
a borderline pass and an unacceptable rate of 15%. The main
reasons for unacceptable scores were mostly due to understaining of the 2+ tumour sections, excessive cytoplasmic
staining, excessive counterstain, and false positive or nonspecific staining (see figs 1b,5b,6&7 ). Of the 68 participants
submitting NEQAS slides, 48 also submitted in-house control
material, of which 53% showed acceptable staining, 38 were
borderline, and 10% received an unacceptable score. The
main reasons for unacceptable scores for in-house material
were due to excessive cytoplasmic staining and excessive
counterstain. In some instances participants self-assessment
was discordant with that of the NEQAS assessment panel, for
example participant interpretation indicating a 2+ membrane
score on one of the in-house tumours, was interpreted as 1+
by the NEQAS assessors, indicating the possibility of overcalling of membrane scores, in this case possibly leading to
higher number of ISH being carried out.
References:
1. Hofmann M, Stoss O, Shi D et al., Assessment of a HER2 scoring
system for gastric cancer: results from a validation study.
Histopathology. 2008 52(7):797-805.
2. Rüschoff J, Dietel M, Baretton G etc al., HER2 diagnostics in gastric
cancer-guideline validation and development of standardized
immunohistochemical testing. Virchows Arch. 2010 457(3):299-307.
3. Bang YJ, Van Cutsem E, Feyereislova A, Chung HC, Shen L,
Sawaki A, Lordick F, Ohtsu A, Omuro Y, Satoh T, Aprile G, Kulikov
E, Hill J, Lehle M, Rüschoff J, Kang YK; ToGA Trial Investigators.
Trastuzumab in combination with chemotherapy versus
chemotherapy alone for treatment of HER2-positive advanced
gastric or gastro-oesophageal junction cancer (ToGA): a phase 3,
open-label, randomised controlled trial. Lancet. 2010 376(9742):687
-97
Acknowledgments
We would like to thank Dako, Ventana and Leica for agreeing to stain
the UK NEQAS gastric HER2 ICC ‘Gold standard’ samples with their
respective kits/assays.
© UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent
35
The HER2 IHC Gastric Pilot Module
Run 98
Assessment Procedure
Assessment is carried out around a multi-header microscope with each slide being assessed by 4 independent assessors and a
microscope lead. Each of the NEQAS samples (A,B,C,D) (as well as in-house samples where submitted) are individually
assessed, with each assessor providing membrane interpretation (see table 3), and an individual score out of 5 (see table 4)
based interpretability of membrane staining and technical feedback. The four assessors scores are then combined to give a an
overall score out of 20 it’s interpretation (see table 4).
Table 1: UK NEQAS Specific Membrane Scoring Criteria
UK NEQAS ICC & ISH uses an EQA specific scoring criteria when scoring the tissue sections, so as to provide participants
additional technical feedback, which is illustrated below.
Expected
membrane staining
Scoring criteria used by UK NEQAS ICC & ISH
3+
i) 3+: as expected
Ii) 2+/3+ or 3+/2+: Staining is slightly weaker than expected with membrane showing more 2+ compared to 3+
(2+/3+) or 3+ membrane staining is present but also showing 2+ staining (3+/2+).
2+
i) 1+/2+ or 2+/1+: Staining is slightly weaker than expected with membrane showing more 1+ compared to 2+
(1+/2+) or 2+ membrane staining is present but also showing 1+ staining (2+/1+).
ii) 2+/3+ or 3+/2+: Staining is slightly weaker than expected with membrane showing more 2+ compared to 3+
(2+/3+) or 3+ membrane staining is present but also showing 2+ staining (3+/2+).
1+
i) 0/1+: Staining is more towards the weaker end of 1+ staining but still acceptable.
ii) 1+/0: Staining is more towards the weaker end of 1+ staining but still acceptable.
Neg.
0/1+ or 1+/0 = Staining starting to show very weak membrane staining
‘U’ = Uninterpretable: Assessors may also give a score of 'U' which indicates that the cell lines / tissue sections were 'uninterpretable’ due
to the reasons set out below.
U/x = Borderline interpretable. A score of U/x e.g. U/3+ or U/2+ or U/1+ or U/0 indicates that the staining is just about readable and
further improvements are required.
Any other membrane score other that assigned for each of the expected scores are deemed as unacceptable
Table 2: Numeric Scoring Criteria used to Calculate the Overall Pass Mark
Individual
Assessor Score
Combined
Assessor Scores
0
0
1&2
4-9 = Unacceptable
3
10-12 = Borderline
4&5
13-15 = Acceptable
16-20 = Acceptable/
Excellent Standard
Overall Score Interpretation
Slide not submitted for assessment
Overall the samples are of unacceptable quality for clinical interpretation and technical
improvements need to be made. Marks may have been deducted due to:
 False positive / negative membrane staining
 Excessive cytoplasmic staining
 Excessive morphological damage
 Excessive staining of normal glands
Overall the samples are borderline interpretable indicating that technical improvements
need to be made. Marks may have been deducted due to:
 Weaker / stronger than expected membrane staining
 Some cytoplasmic staining
 Morphological damage
Overall the samples show acceptable membrane staining and are suitable for interpretation.
Further comments are also provided on individual participant reports. Other factors which may lead to a low score include: excessive /
insufficient haematoxylin staining ; Poor quality of in-house control tissue ; poor/inadequate choice of control tissue ; poor/inadequate
fixation ; Excessive antigen retrieval etc.
© UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent
36
RUN 98
GASTRIC HER2 ICC Module
Selected Images showing Optimal and Sub-optimal Immunostaining
Fig 1. (A) Expected level of staining of sample ‘A’; 2+ UK NEQAS gastric tumour section,
stained with Ventana 4B5, on the Benchmark XT CC1 mild and Ultraview kit. (B) Very Weak
staining of sample ‘A’; 2+ UK NEQAS gastric tumour section, stained using a ‘home-brew’
method using the Dako polyclonal antibody on the Leica Bond Max.
Fig 2. (A,B) Expected level of staining of sample ‘B’; 3+ UK NEQAS gastric tumour section.
(A,B) Both examples show complete membrane staining of high intensity. (A) stained with
Ventana 4B5, CC1 mild Benchmark XT. (B) stained with Dako Hercept kit, Dako PT Link and
autostainer.
Fig 3. (A,B) Two examples of sample ‘C’ showing negative gastric tumours from UK NEQAS
distributed slides. (A) from block 1 Shows no membrane staining whereas (B) from block-2
showed in some cases 0/1+ staining, which was also acceptable. Both sections stained with the
Ventana 4B5 on the Benchmark XT, CC1 mild and Ultraview kit.
Fig 4. (A,B) Expected level of staining of sample ‘D’ from the UK NEQAS distributed 2+ gastric
case. The staining is complete, membranous with lower intensity when compared to the 3+
(shown in Fig 1). (A) stained with the Dako Herceptest, using the PT link and (B)stained with
the Ventana 4B5, on the Benchmark XT CC1 mild and Ultraview kit.
Fig 5. (A) Weaker than expected 3+ staining of sample ‘B’, stained using the Leica Oracle kit.
(B) Excessive cytoplasmic staining in the 3+ distributed sample ‘B’, stained using the Ventana
4B5, on the Benchmark XT CC1 although stated as 8 mins retrieval
Fig 6. Two examples of unacceptable staining in the 2+ NEQAS tumour (sample ‘D’). both
sections are stained using a home brew method: (A) stained with the Dako polyclonal antibody
shows excessive background staining. (B) stained with Neomarkers antibody illustrates a false
negative result.
© Copyright UK NEQAS ICC & ISH
Not for publication without written permission.
Printed at 13:33 on Thursday, 23 August, 2012
37
RUN 98
GASTRIC HER2 ICC Module
Selected Images showing Optimal and Sub-optimal Immunostaining
Fig 7. Two examples of unacceptable staining in the 1+/0 NEQAS tumour (sample ‘C’; block-2).
Both sections are stained using a home brew method: (A) stained with Neomarkers antibody
shows false positive (2+) membrane staining. (B) stained with the Dako polyclonal antibody
shows excessive background staining.
Fig 8. Excellent example of an ‘in house’ composite gastric HER2 control. (A) 3+: Intense, crisp
membrane staining (B) and (C) 2+: weak to moderate membrane staining, and (D) negative
tumour remains unstained. Sections stained with Ventana 4B5 pathway.
Fig 9. Ventana DDISH staining carried out on sample ‘A’; 2+ UK NEQAS gastric tumour
section. The carcinoma is non-amplified for HER2, but contains multiple copies of HER2 and
Ch17 with an average of 3-4 HER2 signals per cell.
Fig 10. Ventana DDISH staining carried out on sample ‘B’; 3+ UK NEQAS gastric tumour
section. The carcinoma is highly amplified for HER2, as seen by the many large clusters of
HER2 SISH signals.
Fig 11. Ventana DDISH staining carried out on sample ‘C’; negative UK NEQAS gastric tumour
section. As expected, this tumour is non-amplified for the HER2, and shows HER2 and Ch17
signals visible as 1-2 copies per cell.
Fig 12. Ventana DDISH staining carried out on sample ‘D’; 2+ UK NEQAS gastric tumour
section. This carcinoma has a low level of amplification for HER2, with greater than 5 HER2
copies present per cell and on average only 2-3 Ch17 copies.
© Copyright UK NEQAS ICC & ISH
Not for publication without written permission.
Printed at 13:33 on Thursday, 23 August, 2012
38
Run 98
GASTRIC HER2 ICC Module
GRAPHICAL REPRESENTATION OF PASS RATES
RUN 98Gn Gastric HER2 IHC on NEQAS Sections
RUN 98Gh Gastric HER2 IHC on in-house Sections
Individual
Scores
4 = 1 (1%)
20
Individual
Scores
3 = 0 (0%)
20
5 = 0 (0%)
4 = 0 (0%)
6 = 0 (0%)
16
5 = 0 (0%)
16
7 = 0 (0%)
6 = 0 (0%)
9 = 4 (6%)
12
10 = 3 (4%)
11 = 7 (10%)
12 = 10 (15%)
8
13 = 1 (1%)
7 = 0 (0%)
no. of returns
no. of returns
8 = 5 (7%)
8 = 6 (10%)
12
9 = 0 (0%)
10 = 2 (3%)
11= 1 (2%)
8
12 = 19 (33%)
14 = 3 (4%)
13 = 1 (2%)
15 = 4 (6%)
4
16 = 20 (29%)
14 = 2 (3%)
4
15 = 1 (2%)
17 = 6 (9%)
16 = 7 (12%)
18 = 4 (6%)
0
4
5
6
7
8
9
10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
19 = 0 (0%)
20 = 0 (0%)
17 = 7 (12%)
0
3
4
5
6
7
8
9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
18 = 8 (14%)
19 = 1 (2%)
Scores
Scores
Summary
Summary
16 - 20 = 30 (44%)
16 - 20 = 26 (45%)
13 - 15 = 8 (12%)
13 - 15 = 4 (7%)
10 - 12 = 20 (29%)
10 - 12 = 22 (38%)
0 - 9 = 10 (15%)
0 - 9 = 6 (10%)
Median = 12.50
Median = 14.50
20 = 3 (5%)
ANTIBODIES AND OTHER TECHNICAL PARAMETERS EMPLOYED BY PARTICIPANTS IN THE
GASTRIC HER2 ICC MODULE
The following tables record the number of participants (N) using each primary antibody and the percentage (%) of these
participants achieving acceptable staining (a score >12/20) on UK NEQAS sections.
Gastric HER2 ICC Run: 98
Primary Antibody
Gastric HER2 ICC Run: 98
N
%
Dako A0485 C-erB-2 (poly)
8
0
Dako HercepTest K5207 (poly)
3
33
Automation
Gastric
HER2 IHC
Dako Autostainer
N
1
Dako Autostainer Link 48
4
0
Dako Autostainer plus
5
20
Dako Autostainer Plus Link
1
0
Leica Bond Max
3
0
%
0
Dako Link HercepTest SK001 (poly)
3
0
Labvision / Neomarkers RM-9103 (SP
2
0
Neomarkers MS-730-P
1
0
1
0
Novocastra NCL-L-CBE356 (10A7)
1
0
Ventana Benchmark ULTRA
13
77
Ventana Benchmark XT
34
74
Vector CB11 VP-C380
1
0
13
85
Ventana Pathway 790-100 (4B5)
3
100
Ventana Pathway 790-2991 (4B5)
27
78
Ventana Confirm 790/800-2996 (4B5)
Ventana Benchmark
© Copyright NEQAS Immunocytochemistry
Not for publication without written permission.
Printed at 13:34 on Thursday, 23 August, 2012
39
Run 98
Gastric HER2 ICC Run: 98
Gastric HER2
IHC
Heat Mediated Retrieval
Dako PTLink
N
5
Lab vision PT Module
2
Leica BondMax ER1
3
Microwave Oven
1
Other
3
Ventana Benk CC1 (Extended)
1
Ventana Benk CC1 (Mild)
11
Ventana Benk CC1 (Standard)
1
Ventana Benk CC1# (8mins)
1
Ventana Benk CC2 (mild)
1
Ventana Benk CC2 (Standard)
1
Ventana Benk ULTRA CC1 (Exten.)
1
Ventana Benk XT CC1 (Mild)
16
Ventana Benk XT CC1 (Standard)
2
Water bath 95-98 OC
2
Gastric HER2 ICC Run: 98
Gastric
HER2 IHC
Detection
0
0
0
0
33
100
64
100
0
100
100
100
81
50
50
AS PER KIT
N
2
%
0
Dako EnVision FLEX+ ( K8002/12)
1
0
Dako Envision HRP/DAB ( K5007)
3
0
Dako HerCep Test Auto'r (K5207)
3
33
Dako HerCep Test Auto'r (SK001)
2
0
Leica Bond Polymer Refine (DS9800)
2
0
Other
2
0
Ventana iView system (760-091)
4
25
Ventana OptiView Kit (760-700)
2
50
Ventana UltraView Kit (760-500)
36
81
Gastric HER2 ICC Run: 98
Chromogen
Gastric
HER2 IHC
N
1
N
%
100
AS PER KIT
7
14
14
50
DAKO DAB+
2
0
Dako EnVision Plus kits
2
50
Dako FLEX DAB
1
0
Dako REAL EnVision K5007 DAB
2
0
Other
4
25
VBS Bond Polymer Refine kit (DS9800)
1
0
Ventana iview
3
33
38
79
AS PER KIT
NOT APPLICABLE
Gastric HER2 ICC Run: 98
%
Gastric
HER2 IHC
Enzyme Retrieval
GASTRIC HER2 ICC Module
Ventana Protease 1 (760-2018)
1
%
0
Ventana Ultraview DAB
BEST METHODS
A selection from just a few of the best methods employed by participants
Gastric HER2 IHC - Method 1
Participant scored 18/20 (UK NEQAS Slide) and 18/20 (In House slide) using this method.
Primary Antibody: Ventana Pathway 790-2991 (4B5) , 16 Mins, 37 ºC Prediluted
Ventana Benchmark XT
Automation:
Main Buffer:
Ventana UltraView DAB
Ventana reaction buffer (950-300)
HMAR:
Ventana Benk XT CC1 (Mild)
Method:
EAR:
Chromogen:
Ventana Ultraview DAB, 37 ºC., Time 1: 8 Mins
Detection:
Ventana UltraView Kit (760-500) , 8 Mins, 37 ºC Prediluted
© Copyright NEQAS Immunocytochemistry
Not for publication without written permission.
Printed at 13:34 on Thursday, 23 August, 2012
40
Run 98
GASTRIC HER2 ICC Module
Gastric HER2 IHC - Method 2
Participant scored 18/20 (UK NEQAS Slide) and 19/20 (In House slide) using this method.
Primary Antibody: Ventana Pathway 790-100 (4B5)
Automation:
Ventana Benchmark XT
Method:
Main Buffer:
Ventana UltraView DAB
AS PER KIT
HMAR:
EAR:
Chromogen:
AS PER KIT
Detection:
Gastric HER2 IHC - Method 3
Participant scored 17/20 (UK NEQAS Slide) and 18/20 (In House slide) using this method.
Primary Antibody: Ventana Pathway 790-2991 (4B5) , 16 Mins, 37 ºC Prediluted
Automation:
Ventana Benchmark ULTRA
Method:
AS PER KIT
Ventana reaction buffer (950-300), PH: 7.4
Main Buffer:
HMAR:
Ventana Benk ULTRA CC1 (Mild)
EAR:
NOT APPLICABLE
Chromogen:
Ventana Ultraview DAB
Detection:
Ventana UltraView Kit (760-500)
© Copyright NEQAS Immunocytochemistry
Not for publication without written permission.
Printed at 13:34 on Thursday, 23 August, 2012
41
The Lymphoma Module
Run 98
David Blythe and David Fish
Gold Standard
Second Antibody
Antigens Assessed:
CD30
BCl6
Tissue Sections circulated:
Hodgkin's Lymphoma & Lymph Node
Reactive Tonsil & Lymph Node
Number of Registered Participants:
240
Introduction
Gold Standard: CD30
Malignant cells in Hodgkin lymphoma are termed Hodgkin
(mono-nuclear) or Reed-Sternberg (multi-nuclear) cells,
although they can also be referred to as Hodgkin ReedSternberg (HRS) cells. The origin of HRS cells became clear
when techniques were established to isolate single HRS cells
from biopsy specimens and analyse them for rearranged
immunoglobulin genes by single cell PCR. It is now known that
these cells represent clonal populations of transformed germinal
centre B-cells in both classical.
Hodgkin lymphoma (CHL) and nodular lymphocyte predominant
lymphoma (NLPHL), although in rare cases they can be derived
from T-cells. In summary, in CHL, the HRS cells are positive
with CD30, often positive with CD15 (in approximately 80% of
cases) and generally negative for B-cell antigens such as CD20
or CD79a (approximately 30% of CHL cases will show some
staining with these markers). In NLPHL, the HRS cells (also
known as L&H cells or popcorn cells) are negative for both
CD30 and CD15 and are generally positive for B-cell antigens.
CD30 staining is found in CHLs, anaplastic large cell
lymphomas, germ cell tumours and in a varying proportion of
activated T- and B-cells.
The staining pattern of CD30 in CHL is very similar to that of
CD15 but without the granulocyte positivity. Some plasma
cells will also stain with this antibody.
Second Antigen: BCL-6
The Bcl-6 (B-cell CLL/lymphoma 6, zinc finger protein 51) protooncoprotein is a zinc-finger protein (95KD) transcription factor
required for for germinal centre formation. bcl-6 is involved in
the differentiation of normal germinal center B cells. As a
immuniohistochjemical marker Bcl-6 is used alongside a panel
of other lymphoma markers to determine lymphomas of B cell
origin. BCL6 is used to stain follicular, diffuse large B cell and
Burkitt's lymphoma. BCL-6 is also positive in lymphocyte
predominant Hodgkin's disease.
Features of optimal immunostaining
 Moderate-strong nuclear staining of all germinal centre B-cells
in the distributed tonsil and lymph node
 Clean background
Features of sub-optimal immunostaining
• Weak, uneven, partially missing staining of relevant cells
• Poor / diffuse nuclear localisation.
References
1. Zutter M, Hockenbery D, Silverman GA, Korsmeyer SJ.
Immunolocalization of the bcl-2 protein within hematopoietic neoplasms.
Features of optimal immunostaining
Blood 1991, 78:
In a CHL there should be:
1062-1068
• Membrane staining (granular) of most HRS cells
2. Ngan B-Y, Chen-Levy Z, Weiss LM et al. Expression in nonHodgkin’s lymphoma of the bcl-2 protein is associated with the t(14;18)
• Golgi staining of some HRS cells.
chromosomal translocation. New Engl J Med 1988, 318: 1638-1644
3. D C Brown, K C Gatter, D Y Mason. Proliferation in non-Hodgkin's
Features of sub-optimal immunostaining
• Most low scoring slides were marked down because the HRS lymphoma: a comparison of Ki-67 staining on fine needle aspiration and
cryostat sections. J Clin Pathol 1990;43:325-328
cells were either negative or very palely stained.
© UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent
42
LY ΡΥΝ 98
Α Μοδυλε
Σελεχτεδ Ιµαγεσ σηοωινγ Οπτιµαλ ανδ Συβ−οπτιµαλ Ιµµυνοσταινινγ
Φιγ 1. Οπτιµαλ δεµονστρατιον οφ Χ∆30 ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ Ηοδγκιν’σ λψµπηοµα σεχτιον. Τηε
στρονγ µεµβρανε ανδ παρανυχλεαρ σταινινγ ωιτη ωεακερ χψτοπλαµσιχ σταινινγ οφ τηε Ηοδγκιν’σ
χελλσ ισ σεεν το βεττερ αδϖανταγε ιν τηε ηιγη ποωερ ινσερτ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε ∆ακο Βερ−Η2
αντιβοδψ, 1:10, υσινγ τηε ∆ακο ΠΤ Λινκ, αυτοσταινερ ανδ ΦΛΕΞ δετεχτιον κιτ.
Φιγ 2. Γοοδ δεµονστρατιον οφ Χ∆30 ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ Ηοδγκιν’σ λψµπηοµα σεχτιον. Τηε ηιγη
ποωερ ινσερτ σηοωσ τηε ιντενσε µεµβρανουσ σταινινγ οφ τηε Ηοδγκιν’σ ανδ Ρεεδ−Στερνβεργ
χελλσ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε Νοϖοχαστρα 1Γ12 αντιβοδψ, 1:400, υσινγ τηε Λειχα ΒονδΜαξ
ΕΡ2 ανδ Ρεφινε κιτ.
Φιγ 3. Συβ−οπτιµαλ δεµονστρατιον οφ Χ∆30 ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ Ηοδγκιν’σ λψµπηοµα σεχτιον.
(Χοµπαρε το Φιγσ1&2). Τηε σταινινγ ισ ωεακ ανδ νοτ αλλ τηε χελλσ εξπεχτεδ το σταιν αρε
δεµονστρατεδ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε ∆ακο Βερ−Η2 αντιβοδψ, 1:50, πρε−τρεατεδ ωιτη τηε
δεχλοακινγ χηαµβερ ανδ σταινεδ ον τηε Μεναρινι Ιντελλιπατη ωιτη τηε Ξ−Χελλ Πολψµερ κιτ.
Φιγ 4. Συβ−οπτιµαλ Χ∆30 σταινινγ ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ Ηοδγκιν’σ λψµπηοµα σεχτιον. Αλτηουγη τηε
εξπεχτεδ χελλσ αρε δεµονστρατεδ, τηε σεχτιονσ σηοωσ νον−σπεχιφιχ ιναππροπριατε ενδοτηελιαλ χελλ
σταινινγ. Σεχτιονσ σταινεδ ωιτη τηε Νοϖοχαστρα 15Β3 αντιβοδψ, 1:20, υσινγ τηε ςεντανα
Βενχηµαρκ ΞΤ ΧΧ1 στανδαρδ ανδ ιςιεω κιτ.
Φιγ 5. Ποορ δεµονστρατιον οφ Χ∆30 ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ Ηοδγκιν’σ λψµπηοµα (Α,Β). Σταινινγ οφ
τηε εξπεχτεδ χελλσ ισ διφφυσε ανδ διφφιχυλτ το ιντερπρετ δυε το τηε εξχεσσιϖε νον−σπεχιφιχ
βαχκγρουνδ σταινινγ (σηοων µορε χλεαρλψ ατ ηιγη ποωερ, πανελ Β). Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε
∆ακο Βερ−Η2 αντιβοδψ, 1:30, υσινγ τηε ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ ΧΧ1 µιλδ ανδ Υλτραϖιεω κιτ.
Φιγ 6. Γοοδ εξαµπλε οφ αν ‘ιν ηουσε’ χοντρολ σταινεδ φορ Χ∆30, δεµονστρατινγ τηε ιντενσε
µεµβρανουσ σταινινγ ανδ δοτ−λικε ρεαχτιονσ σεεν ιν τηε Ηοδγκιν’σ λψµπηοµα. Σεχτιον σταινεδ
ωιτη τηε ςεντανα Βερ−Η2 πρε−διλυτεδ αντιβοδψ, υσινγ τηε ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ ΧΧ1 στανδαρδ
ανδ ιςιεω κιτ.
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 17:16 ον Τυεσδαψ, 31 ϑυλψ, 2012
43
Α Μοδυλε
ΡΥΝ 98
Σελεχτεδ Ιµαγεσ σηοωινγ Οπτιµαλ ανδ Συβ−οπτιµαλ Ιµµυνοσταινινγ
Φιγ 7. Οπτιµαλ δεµονστρατιον οφ ΒΧλ6 ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ διστριβυτεδ ρεαχτιϖε τονσιλ. Τηε σεχτιον
σηοωσ στρονγ, διστινχτ νυχλεαρ σταινινγ ιν ϖιρτυαλλψ αλλ τηε γερµιναλ χεντρε Β−χελλσ ανδ α χλεαν
βαχκγρουνδ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε Λειχα ΛΝ22 ΡΤΥ αντιβοδψ, υσινγ τηε Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ2
ανδ Ρεφινε κιτ.
Φιγ 8. Γοοδ δεµονστρατιον οφ ΒΧλ6 ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ διστριβυτεδ ρεαχτιϖε τονσιλ σεχτιον,
σηοωινγ διστινχτ νυχλεαρ σταινινγ ιν ϖιρτυαλλψ αλλ τηε γερµιναλ χεντρε Β−χελλσ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη
τηε Νοϖοχαστρα ΛΝ22 αντιβοδψ, 1:100, υσινγ τηε Λειχα Βονδ ΙΙΙ ΕΡ2 ανδ Ρεφινε κιτ.
Φιγ 9. Ποορ δεµονστρατιον οφ ΒΧλ6 ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ διστριβυτεδ ρεαχτιϖε τονσιλ. Τηε γερµιναλ
χεντρε Β−χελλσ ονλψ σηοω ϖερψ ωεακ εθυιϖοχαλ σταινινγ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε Βιοχαρε ΛΝ22
αντιβοδψ, πρε−τρεατεδ ιν τηε ωατερ βατη (98°Χ), ανδ σταινεδ ον τηε Μεναρινι Ιντελλιπατη ωιτη τηε
∆ακο ΡΕΑΛ κιτ.
Φιγ 10. Οπτιµαλ δεµονστρατιον οφ ΒΧλ6 ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ διστριβυτεδ φολλιχυλαρ λψµπηοµα
σεχτιον(Α,Β). ςιρτυαλλψ αλλ τηε νεοπλαστιχ χελλσ σηοω µοδερατε ορ στρονγ, διστινχτ νυχλεαρ
σταινινγ. Σηοων µορε χλεαρλψ ιν τηε ηιγη ποωερ πανελ (Β). Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε Λειχα ΛΝ22
ΡΤΥ αντιβοδψ, υσινγ τηε Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ2 ανδ Ρεφινε κιτ.
Φιγ 11. Συβ−οπτιµαλ δεµονστρατιον οφ ΒΧλ6 ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ φολλιχυλαρ λψµπηοµα σεχτιον(Α,Β).
Τηε σταινινγ ισ ποορλψ λοχαλισεδ ωιτη εξχεσσιϖε νον−σπεχιφιχ βαχκγρουνδ. Τηισ ισ µοστ λικελψ
χαυσεδ βψ εξχεσσιϖε αντιγεν ρετριεϖαλ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε ςεντανα ΓΙ191Ε/Α8 αντιβοδψ,
1:2000, πρε−τρεατεδ ιν τηε ΠΤ Μοδυλε (26 µινσ) ανδ υσινγ τηε ∆ακο αυτοσταινερ.
Φιγ 12. Γοοδ εξαµπλε οφ αν ‘ιν ηουσε’ τονσιλ χοντρολ σταινεδ ωιτη ΒΧλ6. Τηε γερµιναλ Β−χελλσ
σηοω στρονγ ανδ διστινχτ νυχλεαρ σταινινγ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε Νοϖοχαστρα ΛΝ22 αντιβοδψ,
1:40, υσινγ τηε Λειχα Βονδ ΙΙΙ ΕΡ2 ανδ Ρεφινε κιτ.
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 17:16 ον Τυεσδαψ, 31 ϑυλψ, 2012
44
ΛΨΜΠΗΟΜΑ Μοδυλε
Ρυν 98
ΓΡΑΠΗΙΧΑΛ ΡΕΠΡΕΣΕΝΤΑΤΙΟΝ ΟΦ ΠΑΣΣ ΡΑΤΕΣ
R
60
R
! Ινδιϖιδυαλ
Σχορεσ
Ινδιϖιδυαλ
Σχορεσ
60
4 = 0 (0%)
4 = 0 (0%)
5 = 0 (0%)
50
5 = 0 (0%)
50
6 = 0 (0%)
6 = 0 (0%)
7 = 0 (0%)
8 = 1 (0%)
40
9 = 0 (0%)
10 = 2 (1%)
11 = 1 (0%)
30
12 = 12 (6%)
13 = 10 (5%)
20
νο. οφ ρετυρνσ
νο. οφ ρετυρνσ
7 = 0 (0%)
8 = 5 (2%)
40
9 = 5 (2%)
10 = 1 (0%)
11 = 3 (1%)
30
12 = 24 (11%)
13 = 25 (12%)
20
14 = 17 (8%)
14 = 33 (16%)
15 = 28 (13%)
15 = 19 (9%)
16 = 54 (25%)
10
16 = 58 (27%)
10
17 = 32 (15%)
17 = 21 (10%)
18 = 32 (15%)
0
4
5
6
7
8
9
10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
Σχορεσ
18 = 8 (4%)
0
19 = 18 (8%)
4
5
6
7
8
9
20 = 5 (2%)
10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
Σχορεσ
Συµµαρψ
Συµµαρψ
16 − 20 = 141 (67%)
16 − 20 = 96 (45%)
13 − 15 = 55 (26%)
13 − 15 = 77 (36%)
10 − 12 = 15 (7%)
10 − 12 = 28 (13%)
0 − 9 = 1 (0%)
0 − 9 = 10 (5%)
Μεδιαν = 14.50
Μεδιαν = 14.00
ΡΥΝ 98Ν ΒΧΛ6 ον ΝΕΘΑΣ Σεχτιονσ
40
19 = 6 (3%)
20 = 3 (1%)
ΡΥΝ 98Π ΒΧΛ6 ον ιν−ηουσε Σεχτιονσ
Ινδιϖιδυαλ
Σχορεσ
Ινδιϖιδυαλ
Σχορεσ
35
4 = 1 (1%)
4 = 1 (1%)
5 = 0 (0%)
5 = 0 (0%)
35
6 = 0 (0%)
30
6 = 0 (0%)
7 = 0 (0%)
7 = 2 (1%)
8 = 10 (5%)
9 = 8 (4%)
25
10 = 4 (2%)
11 = 17 (9%)
20
12 = 31 (16%)
13 = 17 (9%)
15
8 = 12 (6%)
25
νο. οφ ρετυρνσ
νο. οφ ρετυρνσ
30
9 = 7 (4%)
10 = 7 (4%)
20
11 = 14 (7%)
12 = 23 (12%)
15
13 = 22 (11%)
14 = 22 (11%)
14 = 18 (9%)
15 = 13 (7%)
10
10
15 = 26 (14%)
16 = 33 (17%)
16 = 39 (20%)
17 = 16 (8%)
5
17 = 14 (7%)
5
18 = 6 (3%)
18 = 8 (4%)
0
19 = 7 (4%)
4
5
6
7
8
9
10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
Σχορεσ
20 = 2 (1%)
0
19 = 4 (2%)
4
5
6
7
8
9
10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
20 = 1 (1%)
Σχορεσ
Συµµαρψ
Συµµαρψ
16 − 20 = 72 (37%)
16 − 20 = 58 (30%)
13 − 15 = 48 (25%)
13 − 15 = 70 (36%)
10 − 12 = 52 (27%)
10 − 12 = 44 (23%)
0 − 9 = 21 (11%)
0 − 9 = 20 (10%)
Μεδιαν = 13.00
Μεδιαν = 13.50
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 13:09 ον Τηυρσδαψ, 23 Αυγυστ, 2012
45
ΛΨΜΠΗΟΜΑ Μοδυλε
Ρυν 98
ΑΝΤΙΒΟ∆ΙΕΣ ΑΝ∆ ΟΤΗΕΡ ΤΕΧΗΝΙΧΑΛ ΠΑΡΑΜΕΤΕΡΣ ΕΜΠΛΟΨΕ∆ ΒΨ ΠΑΡΤΙΧΙΠΑΝΤΣ ΙΝ ΤΗΕ
ΛΨΜΠΗΟΜΑ ΜΟ∆ΥΛΕ
Τηε φολλοωινγ ταβλεσ ρεχορδ τηε νυµβερ οφ παρτιχιπαντσ (Ν) υσινγ εαχη πριµαρψ αντιβοδψ ανδ τηε περχενταγε (%) οφ τηεσε
παρτιχιπαντσ αχηιεϖινγ αχχεπταβλε σταινινγ (α σχορε >12/20) ον ΥΚ ΝΕΘΑΣ σεχτιονσ.
Λψµπηοµα Ρυν: 98
Λψµπηοµα Ρυν: 98
Πριµαρψ Αντιβοδψ : Χ∆30
Πριµαρψ Αντιβοδψ : ΒΧΛ6
Αντιβοδψ ∆εταιλσ
Α.Μεναρινι ΜΠ−346 (κι−1)
ΒιοΓενεξ ΑΜ 327−5/10Μ (Βερ−Η2)
Χελλ Μαρθυε 130Μ (Βερ−Η2)
∆ακο ΙΡ/ΙΣ602 (Βερ−Η2)
∆ακο Μ0751 (Βερ−Η2)
∆ακο Ν1558 (Βερ−Η2)
λαβϖν/Τηερµο ΜΣ−1857−Π (ΗΡΣ4)
λαβϖν/Τηερµο ΜΣ−361−Σ (ΒΕΡ−Η2)
Λειχα/Νοϖοχαστρα Βονδ ΡΤΥ ΠΑ0153 (1Γ12)
Λειχα/Νοϖοχαστρα Βονδ ΡΤΥ ΠΑ0790 (ϑΧΜ182)
Λειχα/Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−Χ∆30 (1Γ12)
Λειχα/Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−Χ∆30−365 (15Β3)
Λειχα/Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−Λ−Χ∆30 (1Γ12)
Λειχα/Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−Λ−Χ∆30−591 (ϑΧΜ182)
Λειχα/Νοϖοχαστρα ΡΤΥ−Χ∆30 (1Γ12)
Οτηερ
ςεντανα 790 2926 (Βερ−Η2)
Ζψµεδ 18 0185 (Βερ−Η2)
Λψµπηοµα Ρυν: 98
H%&' (%)*&'%) +%',*%-&.
Βιοχαρε ∆εχλοακινγ Χηαµβερ
∆ακο Πασχαλ
∆ακο ΠΤΛινκ
Λαβ ϖισιον ΠΤ Μοδυλε
Λειχα Βονδ ΙΙΙ ΕΡ1
Λειχα Βονδ ΙΙΙ ΕΡ2
Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ1
Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ2
Μιχροωαϖε Οϖεν
Οτηερ
Πρεσσυρε Χοοκερ
Στεαµερ
ςεντανα Βενκ ΧΧ1 (Εξτενδεδ)
ςεντανα Βενκ ΧΧ1 (Μιλδ)
ςεντανα Βενκ ΧΧ1 (Στανδαρδ)
ςεντανα Βενκ ΥΛΤΡΑ ΧΧ1 (Εξτεν.)
ςεντανα Βενκ ΥΛΤΡΑ ΧΧ1 (Μιλδ)
ςεντανα Βενκ ΥΛΤΡΑ ΧΧ1 (Σταν.)
ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Εξτενδεδ)
ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Μιλδ)
ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Στανδαρδ)
Ωατερ βατη 68 ΟΧ
Ωατερ βατη 95−98 ΟΧ
Ν
%
1
1
3
11
107
3
1
1
7
6
3
5
11
13
7
4
27
1
100
0
100
100
96
100
0
100
100
100
67
60
82
100
100
75
89
0
4
0
34
3
2
18
1
60
5
5
4
1
3
1
11
4
1
6
8
4
13
1
3
%
50
0
38
67
50
78
100
82
0
60
75
0
0
0
55
50
100
50
38
75
77
100
33
Ν
4
1
38
4
2
16
22
46
6
5
6
0
5
3
8
4
2
7
3
9
21
0
1
Ν
∆ακο Βχλ−6 Μ7211 (ΠΓ−Β6Π) µµ
Λειχα ΡΤΥ ΠΑ0204 (ΛΝ22)
Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−ΒΧΛ−6 (Π1Φ6) µµ
Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−Λ−ΒΧΛ−6−564 (ΛΝ22) µµ
Οτηερ
ςεχτορ ΒΧΛ−6 (Π1Φ6 ) µµ
ςεντανα ΒΧΛ−6 (ΓΙ191Ε/Α8) µµ
Λψµπηοµα Ρυν: 98
E/012% (%)*&'%) +%',*%-&.
%
75
100
97
100
100
100
95
98
67
100
83
0
80
33
88
75
100
100
100
67
95
0
0
ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
%
85
1
2
4
55
21
1
22
Λαβϖισιον Βχλ−6 Αβ−1 (Π1Φ6) µµ
C"#$
ΒΧΛ6
Ν
Αντιβοδψ ∆εταιλσ
45
0
100
100
87
62
0
64
C"#$
ΒΧΛ6
Ν
%
Ν
%
0
53
0
57
4
72
100
94
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 13:09 ον Τηυρσδαψ, 23 Αυγυστ, 2012
46
ΛΨΜΠΗΟΜΑ Μοδυλε
Ρυν 98
3456
Λψµπηοµα Ρυν: 98
ΒΧΛ6
Λψµπηοµα Ρυν: 98
Χηροµογεν
D78798:;<
Ν
Α Μενερινι Πολψµερ (ΜΠ−ΞΧΠ)
ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ
ΒιοΓενεξ ΣΣ Πολψµερ (Θ∆ 420−ΨΙΚΕ)
ΒιοΓενεξ ΣΣ Πολψµερ (Θ∆ 430−ΞΑΚΕ)
∆ακο Ενςισιον ΦΛΕΞ ( Κ8000/10)
∆ακο Ενςισιον ΦΛΕΞ+ ( Κ8002/12)
∆ακο Ενϖισιον ΗΡΠ/∆ΑΒ ( Κ5007)
∆ακο Ενϖισιον+ ΗΡΠ µουσε Κ4004/5/6/7
∆ακο ρβ−α−µο Ιγ (Ε0354)
∆ακο ΡΕΑΛ ΗΡΠ/∆ΑΒ (Κ5001 )
Λαβςισιον Υλτραςισιον ΛΠ ΗΡΠ (ΤΛ 125 ΗΛϑ)
Λαβςισιον Υλτραςισιον ΛΠ ΗΡΠ (ΤΣ 125 Η∆)
Λαβςισιον Υλτραςισιον ΟΝΕ Πολψµερ ( ΤΛ−012/5−Η∆ϑ/Τ
Λειχα Βονδ Ιντενσε Ρ ∆ετεχτιον (∆Σ9263)
Λειχα Βονδ Πολψµερ ∆εφινε (∆Σ9713)
Λειχα Βονδ Πολψµερ Ρεφινε (∆Σ9800)
ΜεναΠατη Ξ−Χελλ Πλυσ (ΜΠ−ΞΧΠ)
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
Νοϖοχαστρα Νοϖολινκ Π∆Σ (ΡΕ7−140/150/280/290−Κ)
Οτηερ
ςεχτορ ΙµµΠΡΕΣΣ Υνιϖερσαλ (ΜΠ−7500)
ςεντανα ιςιεω σψστεµ (760−091)
ςεντανα Οπτιςιεω Κιτ (760−700)
ςεντανα Υλτραςιεω Κιτ (760−500)
2
17
1
0
6
18
4
2
1
2
0
0
1
0
1
61
3
1
1
6
1
9
7
37
%
Ν
0
59
100
0
50
50
0
0
100
50
0
0
0
0
100
79
67
0
0
67
0
67
100
49
1
15
1
1
5
25
3
2
1
4
1
1
0
1
0
72
4
2
1
7
1
10
8
42
Λψµπηοµα Ρυν: 98
ΒιοΓενεξ ΓενοΜΞ 6000ι
ΒιοΓενεξ Οπτιµαξ
∆ακο Αυτοσταινερ
∆ακο Αυτοσταινερ Λινκ 48
∆ακο Αυτοσταινερ πλυσ
∆ακο Αυτοσταινερ Πλυσ Λινκ
∆ακο ΤεχηΜατε 500
Λαβςισιον Αυτοσταινερ
Λειχα Βονδ Μαξ
Λειχα Βονδ Ξ
Λειχα Βονδ−ΙΙΙ
Μεναρινι − Ιντελλιπατη ΦΛΞ
Νονε (Μανυαλ)
Οτηερ
Σηανδον Σεθυενζα
ςεντανα Βενχηµαρκ
ςεντανα Βενχηµαρκ ΥΛΤΡΑ
ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ
0
100
100
100
100
96
100
100
100
50
100
0
0
100
0
97
100
100
100
86
100
70
100
90
Α. Μεναρινι Λιθυιδ Σταβλε ∆ΑΒ κιτ
ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ
ΒιοΓενεξ ΑΕΧ
ΒιοΓενεξ ∆ΑΒ (Θ∆430)
ΒιοΓενεξ Λιθυιδ ∆ΑΒ (ΗΚ153−5Κ)
∆ΑΚΟ ∆ΑΒ+
∆ακο ∆ΑΒ+ Λιθυιδ (Κ3468)
∆ακο ∆ΑΒ+ ΡΕΑΛ ∆ετεχτιον (Κ5001)
∆ακο Ενςισιον Πλυσ κιτσ
∆ακο ΦΛΕΞ ∆ΑΒ
∆ακο ΡΕΑΛ Ενςισιον Κ5007 ∆ΑΒ
∆ακο ΡΕΑΛ Κ5001 ∆ΑΒ
Λαβςισιον (ΤΑ−125−Η∆)
Λαβςισιον ∆ΑΒ
µεναπατη ξχελλ κιτ ∆ΑΒ (ΜΠ−860)
Οτηερ
Σιγµα ∆ΑΒ (∆5637)
Σιγµα ∆ΑΒ (∆5905)
ςΒΣ Βονδ Πολψµερ Ρεφινε κιτ (∆Σ9800)
ςεντανα ∆ΑΒ
ςεντανα ιϖιεω
ςεντανα Υλτραϖιεω ∆ΑΒ
ςισιον ΒιοΣψστεµσ Βονδ Ξ ∆ΑΒ
Ν
%
Ν
%
2
26
0
0
1
1
2
1
1
23
6
2
1
0
3
7
0
1
64
6
5
37
4
0
62
0
0
100
0
50
100
0
48
17
50
0
0
67
86
0
100
78
50
60
51
75
2
29
1
1
0
2
3
1
1
26
3
2
0
1
3
8
1
1
67
3
9
48
1
50
97
0
100
0
100
100
0
100
96
100
50
0
100
100
100
0
100
99
67
78
88
100
3456
ΒΧΛ6
Αυτοµατιον
%
3456
ΒΧΛ6
Ν
%
Ν
%
1
1
4
27
5
4
1
3
55
0
26
4
2
2
0
3
17
36
100
0
0
37
60
25
100
33
80
0
81
25
50
50
0
67
53
58
2
0
4
29
6
6
0
4
59
1
24
5
3
2
1
3
18
44
50
0
75
97
100
100
0
75
97
100
100
80
100
50
100
100
83
86
_`ab c`bdefa g hijk almnkmok pnlqriks
Α σελεχτιον φροµ ϕυστ α φεω οφ τηε βεστ µετηοδσ εµπλοψεδ βψ παρτιχιπαντσ
VDWX Z [78\;] ^
Παρτιχιπαντ σχορεδ 19/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 16/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
∆ακο Μ0751 (Βερ−Η2) , 20 Μινσ, 23 ≡Χ
Αυτοµατιον:
Λειχα Βονδ Μαξ
M=>?@AB
MFGI JKNN=OB
PMQSB
∆ιλυτιον 1: 40
Οτηερ
Βονδ Ωαση Βυφφερ (ΑΡ9590)
Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ1
ΕΑΡ:
Χηροµογεν:
T=>=U>G@IB
ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ, 23 ≡Χ., Τιµε 1: 10 Μινσ
Λειχα Βονδ Πολψµερ Ρεφινε (∆Σ9800) , 20 Μινσ, 23 ≡Χ Πρεδιλυτεδ
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 13:09 ον Τηυρσδαψ, 23 Αυγυστ, 2012
47
ΛΨΜΠΗΟΜΑ Μοδυλε
Ρυν 98
tuvw x yz{|}~ 
Παρτιχιπαντ σχορεδ 20/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 17/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
∆ακο Μ0751 (Βερ−Η2) , 30 Μινσ, ρτ ≡Χ
Αυτοµατιον:
∆ακο Αυτοσταινερ Λινκ 48
∆ιλυτιον 1: 50
Μετηοδ:
∆ακο ΦΛΕΞ+ κιτ
Μαιν Βυφφερ:
∆ακο ΦΛΕΞ ωαση βυφφερ
ΗΜΑΡ:
∆ακο ΠΤΛινκ, Βυφφερ: Φλεξ Ταργετ Ρετριεϖαλ Σολυτιον Ηιγη πΗ
ΕΑΡ:
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
Χηροµογεν:
∆ακο ΦΛΕΞ ∆ΑΒ, ρτ ≡Χ., Τιµε 1: 5 Μινσ, Τιµε 2: 5 Μινσ
∆ετεχτιον:
∆ακο Ενςισιον ΦΛΕΞ+ ( Κ8002/12) , 15 Μινσ, ρτ ≡Χ Πρεδιλυτεδ
tuvw x yz{|}~ v
Παρτιχιπαντ σχορεδ 19/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 16/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
ςεντανα 790 2926 (Βερ−Η2) , 92 Μινσ, 37 ≡Χ Πρεδιλυτεδ
Αυτοµατιον:
ςεντανα Βενχηµαρκ ΥΛΤΡΑ
€‚ƒ„…†
€‡ˆ‰ Š‹ŒŒ†
Ž€†
ςεντανα Υλτραςιεω ∆ΑΒ
ςεντανα ρεαχτιον βυφφερ (950−300), ΠΗ: 7.6
ςεντανα Βενκ ΥΛΤΡΑ ΧΧ1 (Σταν.), Βυφφερ: Υλτρα ΧΧ1 (950−224), ΠΗ: 9
ΕΑΡ:
Χηροµογεν:
‘‚’‚ˆ„‰†
tuvw x yz{|}~ “
ςεντανα Υλτραϖιεω ∆ΑΒ, 36 ≡Χ., Τιµε 1: 8 Μινσ, Τιµε 2: 4 Μινσ
ςεντανα Υλτραςιεω Κιτ (760−500) , 8 Μινσ, 36 ≡Χ Πρεδιλυτεδ
Παρτιχιπαντ σχορεδ 20/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 16/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
ςεντανα 790 2926 (Βερ−Η2) , 16 Μινσ, 37 ≡Χ Πρεδιλυτεδ
Αυτοµατιον:
ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ
€‚ƒ„…†
€‡ˆ‰ Š‹ŒŒ†
Ž€†
Οτηερ
ςεντανα ρεαχτιον βυφφερ (950−300), ΠΗ: 7.4
Οτηερ, ΠΗ: 8
ΕΑΡ:
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
Χηροµογεν:
Οτηερ, 37 ≡Χ., Τιµε 1: 8 Μινσ
‘‚’‚ˆ„‰†
ςεντανα Οπτιςιεω Κιτ (760−700) , 8 Μινσ, 37 ≡Χ Πρεδιλυτεδ
˜™š› œ™›žŸš š¡¢£¤¥¦§¨ ©¤ª«¬£¥¨
Α σελεχτιον φροµ ϕυστ α φεω οφ τηε βεστ µετηοδσ εµπλοψεδ βψ παρτιχιπαντσ
”t•– x yz{|}~ —
Παρτιχιπαντ σχορεδ 19/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 18/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−Λ−ΒΧΛ−6−564 (ΛΝ22) µµ , 15 Μινσ, ΡΤ ≡Χ
Αυτοµατιον:
Λειχα Βονδ−ΙΙΙ
€‚ƒ„…†
€‡ˆ‰ Š‹ŒŒ†
Ž€†
∆ιλυτιον 1: 100
ςΒΣ ΒονδΜΑξ Ρεφινε ΚΙΤ
Βονδ Ωαση Βυφφερ (ΑΡ9590)
Λειχα Βονδ ΙΙΙ ΕΡ2, ΠΗ: 9
ΕΑΡ:
Χηροµογεν:
‘‚’‚ˆ„‰†
ςΒΣ Βονδ Πολψµερ Ρεφινε κιτ (∆Σ9800), ΡΤ ≡Χ., Τιµε 1: 10 Μινσ
Λειχα Βονδ Πολψµερ Ρεφινε (∆Σ9800) , 8 Μινσ, ΡΤ ≡Χ Πρεδιλυτεδ
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 13:09 ον Τηυρσδαψ, 23 Αυγυστ, 2012
48
ΛΨΜΠΗΟΜΑ Μοδυλε
Ρυν 98
­®¯° ± ²³´µ¶· ¸
Παρτιχιπαντ σχορεδ 19/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 19/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
∆ακο Βχλ−6 Μ7211 (ΠΓ−Β6Π) µµ , 15 Μινσ, 20 ≡Χ
Αυτοµατιον:
Λειχα Βονδ Μαξ
Μετηοδ:
ςΒΣ ΒονδΜΑξ Ρεφινε ΚΙΤ
Μαιν Βυφφερ:
Βονδ Ωαση Βυφφερ (ΑΡ9590), ΠΗ: 7
ΗΜΑΡ:
Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ2, ΠΗ: 9
∆ιλυτιον 1: 40
ΕΑΡ:
Χηροµογεν:
ςΒΣ Βονδ Πολψµερ Ρεφινε κιτ (∆Σ9800), 20 ≡Χ., Τιµε 1: 10 Μινσ
∆ετεχτιον:
Λειχα Βονδ Πολψµερ Ρεφινε (∆Σ9800) , 8 Μινσ, 20 ≡Χ Πρεδιλυτεδ
­®¯° ± ²³´µ¶· Ì
Παρτιχιπαντ σχορεδ 19/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 11/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−Λ−ΒΧΛ−6−564 (ΛΝ22) µµ , 30 Μινσ, ΡΤ ≡Χ
Αυτοµατιον:
∆ακο Αυτοσταινερ Λινκ 48
¹º»¼½¾¿
¹ÀÁ ÃÄÅźƿ
ǹÈÉ¿
∆ιλυτιον 1: 1:50
∆ακο ΦΛΕΞ+ κιτ
∆ακο ΦΛΕΞ ωαση βυφφερ, ΠΗ: 7.4
∆ακο ΠΤΛινκ, ΠΗ: 9
ΕΑΡ:
Χηροµογεν:
ʺ»ºË»Á½Â¿
∆ακο ΦΛΕΞ ∆ΑΒ, ΡΤ ≡Χ., Τιµε 1: 5 Μινσ, Τιµε 2: 5 Μινσ
∆ακο Ενςισιον ΦΛΕΞ+ ( Κ8002/12) , 15 Μινσ, ΡΤ ≡Χ Πρεδιλυτεδ
­®¯° ± ²³´µ¶· Í
Παρτιχιπαντ σχορεδ 20/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 16/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
Λειχα ΡΤΥ ΠΑ0204 (ΛΝ22) , 15 Μινσ, 20 ≡Χ Πρεδιλυτεδ
Αυτοµατιον:
Λειχα Βονδ Μαξ
¹º»¼½¾¿
¹ÀÁ ÃÄÅźƿ
ǹÈÉ¿
ςΒΣ ΒονδΜΑξ Ρεφινε ΚΙΤ
Βονδ Ωαση Βυφφερ (ΑΡ9590)
Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ2, Βυφφερ: 0
ΕΑΡ:
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
Χηροµογεν:
ςΒΣ Βονδ Πολψµερ Ρεφινε κιτ (∆Σ9800), 20 ≡Χ., Τιµε 1: 10 Μινσ
ʺ»ºË»Á½Â¿
Λειχα Βονδ Πολψµερ Ρεφινε (∆Σ9800) , 8 Μινσ, 20 ≡Χ Πρεδιλυτεδ
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 13:09 ον Τηυρσδαψ, 23 Αυγυστ, 2012
49
The Neuropathology Module
Run 98
Neil Bilbe, Robert Fincham and Steve McQuaid
Antigens Assessed:
Tissue Sections circulated:
Gold Standard
Second Antibody
Synaptophysin
Tau
Germocysitc Oligodendroglioma
Alzheimer Brain
Tumour
Number of Registered Participants:
66
Summary Graphs - Pass Rate Tables
Best Method - Selected Images
© UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent
50
ÎÏÐÑÐÒÓ Μοδυλε
ΝΕΥΡΟΠΑ
ΡΥΝ 98
Σελεχτεδ Ιµαγεσ σηοωινγ Οπτιµαλ ανδ Συβ−οπτιµαλ Ιµµυνοσταινινγ
ÔÕÖ õØ ÙÚÛÕÜÝÞ ßàÜáâãÛäÝÛÕáâ áå ãæâÝÚÛáÚçæãÕâ Õâ Ûçàèé êëìíî ÖàäÜáïæãÛÕï
ÛçààâÛÝâÝýàâïçÜÝäô
åÕöäÕÞ ÝäæöÝïôÖäáñâßØîàïÛ
ó Õáâ ãÛÝÕâàß÷ÕÛç ÛçàêáøáïÝãÛäÝ ×ùúõ× ÝâÛÕöáßæðõû×üð ñãÕâÖ Ûçà
ÔÕÖ ×Ø ÙÚÛÕÜÝÞ ßàÜáâãÛäÝÛÕáâ áå ãæâÝÚÛáÚçæãÕâ Õâ Ûçàèé êëìíî ÖàäÜáïæãÛÕï
ð ÝñÛáãÛÝÕâàä Ýâß Ôòëó ôÕÛØ
Φιγ 3. Τωο εξαµπλεσ οφ συβ−οπτιµαλ σψναπτοπηψσιν δεµονστρατιον ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ
γερµοχψστιχ ολιγοδενδογλιοµα τυµουρ. Βοτη σεχτιονσ σηοω ωεακ σταινινγ, ανδ τηε ιµαγε ιν
Φιγ 4. Ποορ δεµονστρατιον οφ σψναπτοπηψσιν ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ γερµοχψστιχ ολιγοδενδογλιοµα
τυµουρ, σηοωινγ ωεακ σταινινγ οφ τηε φιβριλλαρψ ελεµεντσ ανδ εξχεσσιϖε ιναππροπριατε
βαχκγρουνδ σταινινγ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε Νεοµαρκερσ ΣΠ11 αντιβοδψ, 1:100, υσινγ τηε
ΒονδΜαξ ΕΡ2 ανδ Ρεφινε κιτ.
ολιγοδενδογλιοµα σεχτιον. Τηε σταινινγ ισ ιντενσε ανδ πυνχτατε, ωιτη α ϖαριαβλε διστριβυτιον ιν
ς
Τ ΧΧ1 στανδαρδ ανδ Υλτραϖιεω δετεχτιον κιτ.
ÚÝâàÞý ÝÞãáÕÞ ñãÛäÝÛàã àþïàããÕøàïáñâÛàäãÛÝÕ
âàß÷ÕÛç áâæÜàß
ÝâÛÕöáßæðýáâß
ÝâÛÕöáßæðââáØÿíÚäàpãÛÝÕaÛäàÝÛÜàâÛ
ÛçàýàâïçÜÝäô
óØ Ýþ ëõØ
(Β)σταινεδ ωιτη ςεντανα ΡΤΥ ΣΠ11
ÔÕÖ üØ
÷ÕÛç ÛçàêáøáïÝãÛäÝ ×ùúõ× ÝâÛÕöáßæðõû×üð ñãÕâÖ Ûçàýáâß www ë× Ýâß àåÕâà ôÕÛØ
Γοοδ εξαµπλε οφ σψναπτοπηψσιν δεµονστρατεδ ον αν ‘ιν ηουσε’ χοντρολ. Τηε
µεδυλλοβλαστοµα σηοωσ στρονγ χψτοπλασµιχ σταινινγ ωιτη α χλεαν βαχκγρουνδ. Σεχτιον σταινεδ
ολιγοδενδογλιοµα τυµουρ σεχτιον, σηοωινγ στρονγ, χψτοπλασµιχ σταινινγ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη
Νοϖοχαστρα 27Γ12 αντιβοδψ, 1:100, υσινγ τηε ∆ακο ΠΤ Λινκ
Φιγ 6. Γοοδ εξαµπλε οφ αν ‘ιν ηουσε’ χοντρολ φορ σψναπτοπηψσιν, σηοωινγ στρονγ χψτοπλασµιχ
σταινινγ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε Νοϖοχαστρα 27Γ12 αντιβοδψ, υσινγ τηε ςεντανα Βενχηµαρκ
Τ ΧΧ1 στανδαρδ ανδ Υλτραϖιεω δετεχτιον κιτ.
ó
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 16:32 ον Τυεσδαψ, 31 ϑυλψ, 2012
51
ΝΕΥΡΟΠΑTY Μοδυλε
ΡΥΝ 98
Σελεχτεδ Ιµαγεσ σηοωινγ Οπτιµαλ ανδ Συβ−οπτιµαλ Ιµµυνοσταινινγ
Φιγ 7. O
Ταυ ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ διστριβυτεδ A
ρ’σ βραιν. Τηε
σεχτιον σηοωσ στρονγ διστινχτ χψτοπλασµιχ σταινινγ ιν τηε νευροφιβριλλαρψ τανγλεσ. Σεχτιον σταινεδ
ωιτη τηε Νοϖοχαστρα Ταυ−2 αντιβοδψ, υσινγ τηε Βονδ ΙΙΙ ΕΡ1 ανδ Ρεφινε κιτ.
Φιγ 8. O
Ταυ ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ διστριβυτεδ A
ρ’σ βραιν, σηοωινγ
ωελλ λοχαλισεδ σταινινγ ιν τηε νευροφιβριλλαρψ τανγλεσ ανδ προχεσσεσ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε
∆ακο πολψχλοναλ αντιβοδψ, 1:3200, νο πρε−τρεατµεντ ον τηε Βενχηµαρκ ΥΛΤΡΑ ωιτη τηε αλκαλινε
πηοσπηατασε κιτ.
Φιγ 9. Συβ−οπτιµαλ σταινινγ οφ Ταυ ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ διστριβυτεδ A
ρ’σ βραιν. Αλτηουγη τηε
νευροφιβριλλαρψ τανγλεσ ανδ προχεσσεσ αρε δεµονστρατεδ τηε σταινινγ ισ ωεακ (χοµπαρε ωιτη Φιγ
1). Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε Τηερµο Σχιεντιφιχ ΑΤ8 αντιβοδψ, νο πρε−τρεατµεντ ον τηε
Βενχηµαρκ ΥΛΤΡΑ ανδ Υλτραϖιεω κιτ.
Φιγ 10. Ποορ δεµονστρατιον οφ Ταυ ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ διστριβυτεδ A
ρ’σ βραιν. Τηε σεχτιον
σηοωσ εξχεσσιϖε νον−σπεχιφιχ ανδ βαχκγρουνδ σταινινγ µακινγ τηε σλιδε υν−ιντερπρεταβλε.
Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε ΥΣ Βιολογιχαλσ αντιβοδψ, 1:100, πρε−τρεατεδ 1µιν ιν τηε πρεσσυρε
χοοκερ, ανδ υσινγ τηε ∆ακο αυτοσταινερ ανδ Λειχα Ποωερϖισιον κιτ.
Φιγ 11. Γοοδ εξαµπλε οφ Ταυ δεµονστρατεδ ον αν ‘ιν ηουσε’ χοντρολ. Τηε A
ρ’σ βραιν
σεχτιον σηοωσ στρονγ διστινχτ χψτοπλασµιχ σταινινγ ιν τηε νευροφιβριλλαρψ τανγλεσ. Σεχτιον σταινεδ
ωιτη τηε Αυτογεν Βιοχλεαρ αντιβοδψ, 1:800, πρε−τρεατεδ ιν τηε µιχροωαϖε ανδ σταινεδ υσινγ τηε
ςεχτορ Ελιτε ΑΒΧ κιτ.
Φιγ 12. Γοοδ εξαµπλε οφ αν ιν−ηουσε χοντρολ φορ Ταυ, σηοωινγ στρονγ χψτοπλασµιχ σταινινγ ιν
τηε νευροφιβριλλαρψ τανγλεσ ανδ προχεσσεσ οφ τηε A
ρ’σ βραιν. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε
Νοϖοχαστρα Ταυ−2 αντιβοδψ, υσινγ τηε ΒονδΜαξ ΕΡ2 ανδ Ρεφινε κιτ.
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 16:32 ον Τυεσδαψ, 31 ϑυλψ, 2012
52
ΝΕΥΡΟΠΑΤΗΟΛΟΓΨ Μοδυλε
Ρυν 98
ΓΡΑΠΗΙΧΑΛ ΡΕΠΡΕΣΕΝΤΑΤΙΟΝ ΟΦ ΠΑΣΣ ΡΑΤΕΣ
ΡΥΝ 98Γ Σψναπτοπηψσιν ον ΝΕΘΑΣ Σεχτιονσ
16
14
ΡΥΝ 98Η Σψναπτοπηψσιν ον ιν−ηουσε Σεχτιονσ
Ινδιϖιδυαλ
Σχορεσ
4 = 0 (0%)
4 = 0 (0%)
5 = 0 (0%)
5 = 0 (0%)
6 = 0 (0%)
7 = 0 (0%)
8 = 0 (0%)
8 = 0 (0%)
9 = 1 (2%)
10
10 = 0 (0%)
11 = 3 (5%)
8
12 = 3 (5%)
6
6 = 0 (0%)
16
7 = 0 (0%)
13 = 6 (9%)
νο. οφ ρετυρνσ
νο. οφ ρετυρνσ
12
Ινδιϖιδυαλ
Σχορεσ
20
9 = 0 (0%)
12
10 = 1 (2%)
11 = 1 (2%)
12 = 0 (0%)
8
13 = 1 (2%)
14 = 4 (6%)
4
14 = 3 (5%)
15 = 6 (9%)
15 = 9 (14%)
4
16 = 16 (25%)
2
16 = 20 (32%)
17 = 8 (13%)
17 = 17 (27%)
18 = 12 (19%)
0
4
5
6
7
8
9
10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
Σχορεσ
18 = 6 (10%)
0
19 = 5 (8%)
4
5
6
7
8
9
20 = 0 (0%)
10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
Σχορεσ
Συµµαρψ
Συµµαρψ
16 − 20 = 41 (64%)
16 − 20 = 48 (76%)
13 − 15 = 16 (25%)
13 − 15 = 13 (21%)
10 − 12 = 6 (9%)
10 − 12 = 2 (3%)
0 − 9 = 1 (2%)
0 − 9 = 0 (0%)
Μεδιαν = 14.50
Μεδιαν = 15.50
R !"#$% !% &'() )#*"$!%+
16
19 = 4 (6%)
20 = 1 (2%)
ΡΥΝ 98Κ Ταυ Προτειν ον ιν−ηουσε Σεχτιονσ
Ινδιϖιδυαλ
Σχορεσ
Ινδιϖιδυαλ
Σχορεσ
20
4 = 1 (2%)
4 = 0 (0%)
5 = 1 (2%)
5 = 0 (0%)
14
6 = 0 (0%)
6 = 0 (0%)
16
7 = 0 (0%)
7 = 1 (2%)
8 = 0 (0%)
8 = 1 (2%)
9 = 1 (2%)
10
10 = 0 (0%)
11 = 0 (0%)
8
12 = 4 (8%)
13 = 2 (4%)
6
νο. οφ ρετυρνσ
νο. οφ ρετυρνσ
12
9 = 1 (2%)
10 = 0 (0%)
12
11 = 2 (4%)
12 = 0 (0%)
13 = 0 (0%)
8
14 = 3 (6%)
14 = 1 (2%)
16 = 16 (33%)
2
0
15 = 12 (26%)
15 = 8 (17%)
4
17 = 12 (25%)
17 = 3 (6%)
18 = 1 (2%)
18 = 3 (6%)
19 = 1 (2%)
4
5
6
7
8
9
10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
Σχορεσ
16 = 20 (43%)
4
20 = 0 (0%)
0
19 = 0 (0%)
4
5
6
7
8
9
10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
20 = 1 (2%)
Σχορεσ
Συµµαρψ
Συµµαρψ
16 − 20 = 30 (63%)
16 − 20 = 27 (57%)
13 − 15 = 11 (23%)
13 − 15 = 15 (32%)
10 − 12 = 4 (8%)
10 − 12 = 2 (4%)
0 − 9 = 3 (6%)
0 − 9 = 3 (6%)
Μεδιαν = 14.00
Μεδιαν = 14.50
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 13:11 ον Τηυρσδαψ, 23 Αυγυστ, 2012
53
ΝΕΥΡΟΠΑΤΗΟΛΟΓΨ Μοδυλε
Ρυν 98
ΑΝΤΙΒΟ∆ΙΕΣ ΑΝ∆ ΟΤΗΕΡ ΤΕΧΗΝΙΧΑΛ ΠΑΡΑΜΕΤΕΡΣ ΕΜΠΛΟΨΕ∆ ΒΨ ΠΑΡΤΙΧΙΠΑΝΤΣ ΙΝ ΤΗΕ
ΝΕΥΡΟΠΑΤΗΟΛΟΓΨ ΜΟ∆ΥΛΕ
Τηε φολλοωινγ ταβλεσ ρεχορδ τηε νυµβερ οφ παρτιχιπαντσ (Ν) υσινγ εαχη πριµαρψ αντιβοδψ ανδ τηε περχενταγε (%) οφ τηεσε
παρτιχιπαντσ αχηιεϖινγ αχχεπταβλε σταινινγ (α σχορε >12/20) ον ΥΚ ΝΕΘΑΣ σεχτιονσ.
Νευροπατηολογψ Ρυν: 98
Νευροπατηολογψ Ρυν: 98
Πριµαρψ Αντιβοδψ : Σψναπτοπηψσιν
Πριµαρψ Αντιβοδψ : Ταυ Προτειν
Αντιβοδψ ∆εταιλσ
ΒιοΓενεξ ΑΜ 6 (χλονε ΣΝΠ )
Βιογενεξ ΜΥ 363 ΥΧ
Χελλ Μαρθυε 336Α−74/75/776/77/78/70 (Πολψ)
∆ακο Α0010 (πολψχλοναλ)
∆ΑΚΟ ΦΛΕΞ ΙΡ776 (ΣΨ38)
∆ακο Μ0776 (χλονε ΣΨ38 )
Λαβ ςισιον ΡΜ 9111 ΣΟ
ΝεοΜαρκερσ ΣΠ11
Νοϖοχαστρα Βονδ ΡΤΥ ΠΑ0299 (ρβ πολψ)
Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−Λ−ΣΨΝΑΠ−299 (27Γ12)
Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−ΣΨΝΑΠ−299 (27Γ12)
Οτηερ
Τηερµο Σχι/Πιερχε ΠΑ5−16417 (Πολψ)
ςεχτορ ςΠ−ΡΜ09 (ΣΠ11)
ςεντανα ΧΟΝΦΙΡΜ 790−4407 (ΣΠ−11)
Ζψµεδ 18−0130
Νευροπατηολογψ Ρυν: 98
Ηεατ Μεδιατεδ Ρετριεϖαλ
Βιοχαρε ∆εχλοακινγ Χηαµβερ
∆ακο ΠΤΛινκ
Λειχα Βονδ ΙΙΙ ΕΡ1
Λειχα Βονδ ΙΙΙ ΕΡ2
Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ1
Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ2
Μιχροωαϖε Οϖεν
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
Οτηερ
Πρεσσυρε Χοοκερ
ςεντανα Βενκ ΧΧ1 (Εξτενδεδ)
ςεντανα Βενκ ΧΧ1 (Μιλδ)
ςεντανα Βενκ ΧΧ1 (Στανδαρδ)
ςεντανα Βενκ ΧΧ1# (8µινσ)
ςεντανα Βενκ ΥΛΤΡΑ ΧΧ1 (Εξτεν.)
ςεντανα Βενκ ΥΛΤΡΑ ΧΧ1 (Μιλδ)
ςεντανα Βενκ ΥΛΤΡΑ ΧΧ1 (Σταν.)
ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Εξτενδεδ)
ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Μιλδ)
ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Στανδαρδ)
Ωατερ βατη 95−98 ΟΧ
Ν
%
1
2
2
1
2
19
1
2
1
11
8
3
1
1
8
1
100
100
100
100
100
89
100
100
100
91
100
33
100
100
88
0
Σψναπτοπηψσιν
Αντιβοδψ ∆εταιλσ
∆ακο Α0024 (ρβ πολψ)
Ιννογεν.Αυτογεν Βιοχλεαρ ΒΡ−003 (ΑΤ8)
Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−ΤΑΥ 2 (Ταυ−2)
Οτηερ
Σιγµα Τ5530 (Ταυ−2)
Σιγµα Τ6402 (ΑΤ8)
Τηερµο Σχιεν. ΜΝ1020 ΠΗΦ−ταυ (ΑΤ8)
ΥΣ Βιολογιχαλ Τ1029 (2Β2.100)
Ταυ Προτειν
Νευροπατηολογψ Ρυν: 98
1
13
4
2
4
11
4
0
1
1
1
0
4
1
1
3
3
1
4
5
0
%
100
92
75
100
50
100
75
0
100
100
100
0
100
0
100
67
100
100
100
100
0
Ν
0
2
4
1
4
6
4
12
0
2
0
1
0
0
0
0
1
0
0
1
1
%
0
100
100
100
75
100
50
92
0
50
0
100
0
0
0
0
0
0
0
100
100
∆ακο Προτεινασε Κ (κ1492)
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
ςεντανα Προτεασε
ςεντανα Προτεασε 1 (760−2018)
%
17
2
9
5
2
3
1
5
1
Ιν Ηουσε προδυχεδ
Ενζψµε Μεδιατεδ Ρετριεϖαλ
Ν
Ν
94
100
100
80
50
67
100
80
0
Σψναπτοπηψσιν
Ταυ Προτειν
Ν
%
Ν
%
1
21
0
0
0
95
0
0
0
13
1
1
0
92
0
100
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 13:11 ον Τηυρσδαψ, 23 Αυγυστ, 2012
54
ΝΕΥΡΟΠΑΤΗΟΛΟΓΨ Μοδυλε
Ρυν 98
Νευροπατηολογψ Ρυν: 98
Νευροπατηολογψ Ρυν: 98
Σψναπτοπηψσι
ν
Χηροµογεν
∆ετεχτιον
Ν
ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ
ΒιοΓενεξ ΣΣ Πολψµερ (Θ∆ 420−ΨΙΚΕ)
ΒιοΓενεξ ΣΣ Πολψµερ (Θ∆ 430−ΞΑΚΕ)
∆ακο Ενςισιον ΦΛΕΞ ( Κ8000/10)
∆ακο Ενςισιον ΦΛΕΞ+ ( Κ8002/12)
∆ακο Ενϖισιον ΗΡΠ/∆ΑΒ ( Κ5007)
Λαβςισιον Υλτραςισιον ΟΝΕ Πολψµερ ( ΤΛ−012/5−Η∆ϑ/Τ
Λειχα Βονδ Πολψµερ Ρεφινε (∆Σ9800)
ΜεναΠατη Ξ−Χελλ Πλυσ (ΜΠ−ΞΧΠ)
Νονε
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
Νοϖοχαστρα Νοϖολινκ Π∆Σ (ΡΕ7−140/150/280/290−Κ)
Οτηερ
Ποωερ ςισιον ∆ΠςΒ999 ΗΡΠ
ςεχτορ Ελιτε Υνιϖερσαλ ΑΒΧ (ΠΚ−6200)
ςεντανα ιςιεω σψστεµ (760−091)
ςεντανα Οπτιςιεω Κιτ (760−700)
ςεντανα Υλτραςιεω Κιτ (760−500)
7
1
0
3
8
1
1
17
0
1
1
0
2
0
1
3
2
16
Σψναπτοπηψσιν
Ταυ Προτειν
Ταυ Προτειν
%
Ν
100
100
0
67
100
100
100
82
0
100
100
0
50
0
100
67
100
94
6
1
1
3
2
4
1
15
1
0
0
1
2
1
1
1
0
7
%
100
100
100
100
100
100
0
93
100
0
0
100
100
0
0
100
0
71
ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ
ΒιοΓενεξ ∆ΑΒ (Θ∆430)
ΒιοΓενεξ Λιθυιδ ∆ΑΒ (ΗΚ153−5Κ)
∆ακο ∆ΑΒ+ Λιθυιδ (Κ3468)
∆ακο ∆ΑΒ+ ΡΕΑΛ ∆ετεχτιον (Κ5001)
∆ακο Ενςισιον Πλυσ κιτσ
∆ακο ΦΛΕΞ ∆ΑΒ
∆ακο ΡΕΑΛ Ενςισιον Κ5007 ∆ΑΒ
Λαβςισιον ∆ΑΒ
µεναπατη ξχελλ κιτ ∆ΑΒ (ΜΠ−860)
Οτηερ
Σιγµα ∆ΑΒ (∆4168)
Σιγµα ∆ΑΒ (∆5637)
ςΒΣ Βονδ Πολψµερ Ρεφινε κιτ (∆Σ9800)
ςεντανα ∆ΑΒ
ςεντανα ιϖιεω
ςεντανα Υλτραϖιεω ∆ΑΒ
Ν
%
Ν
%
10
1
0
2
0
1
8
1
1
0
1
0
1
17
2
2
17
90
100
0
50
0
100
88
100
100
0
100
0
100
82
50
100
100
9
0
1
0
1
1
4
3
1
1
2
1
1
15
0
2
7
100
0
100
0
100
100
75
100
0
100
50
100
0
93
0
50
71
Νευροπατηολογψ Ρυν: 98
Σψναπτοπηψσιν
Αυτοµατιον
ΒιοΓενεξ ΓενοΜΞ 6000ι
∆ακο Αυτοσταινερ
∆ακο Αυτοσταινερ Λινκ 48
∆ακο Αυτοσταινερ πλυσ
∆ακο Αυτοσταινερ Πλυσ Λινκ
Λαβςισιον Αυτοσταινερ
Λειχα Βονδ Μαξ
Λειχα Βονδ−ΙΙΙ
Μεναρινι − Ιντελλιπατη ΦΛΞ
Νονε (Μανυαλ)
Οτηερ
Σηανδον Σεθυενζα
ςεντανα Βενχηµαρκ
ςεντανα Βενχηµαρκ ΥΛΤΡΑ
ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ
Ταυ Προτειν
Ν
%
Ν
%
1
0
6
1
5
1
13
8
1
3
2
0
2
9
12
100
0
100
100
80
100
85
88
100
67
100
0
50
89
100
1
2
7
0
2
1
10
7
1
8
0
1
1
3
5
100
100
86
0
50
0
90
100
100
88
0
100
100
33
80
ΒΕΣΤ ΜΕΤΗΟ∆Σ − Γολδ Στανδαρδ Αντιβοδψ
Α σελεχτιον φροµ ϕυστ α φεω οφ τηε βεστ µετηοδσ εµπλοψεδ βψ παρτιχιπαντσ
Σψναπτοπηψσιν − Μετηοδ 1
Παρτιχιπαντ σχορεδ 18/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 17/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
ςεντανα ΧΟΝΦΙΡΜ 790−4407 (ΣΠ−11) , 40 Μινσ, 37 ≡Χ Πρεδιλυτεδ
Αυτοµατιον:
ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ
Μετηοδ:
ςεντανα Υλτραςιεω ∆ΑΒ
Μαιν Βυφφερ:
ςεντανα ρεαχτιον βυφφερ (950−300)
ΗΜΑΡ:
ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Μιλδ)
ΕΑΡ:
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
Χηροµογεν:
ςεντανα Υλτραϖιεω ∆ΑΒ, 37 ≡Χ., Τιµε 1: 12 Μινσ, Τιµε 2: 12 Μινσ
∆ετεχτιον:
ςεντανα Υλτραςιεω Κιτ (760−500) , 8 Μινσ, 37 ≡Χ Πρεδιλυτεδ
Σψναπτοπηψσιν − Μετηοδ 2
Παρτιχιπαντ σχορεδ 18/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 19/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
Νοϖοχαστρα Βονδ ΡΤΥ ΠΑ0299 (ρβ πολψ)
Αυτοµατιον:
Λειχα Βονδ Μαξ
Μετηοδ:
Ινδιρεχτ
Μαιν Βυφφερ:
Βονδ Ωαση Βυφφερ (ΑΡ9590)
ΗΜΑΡ:
Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ2
ΕΑΡ:
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
Χηροµογεν:
ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ
∆ετεχτιον:
ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ
Πρεδιλυτεδ
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 13:11 ον Τηυρσδαψ, 23 Αυγυστ, 2012
55
ΝΕΥΡΟΠΑΤΗΟΛΟΓΨ Μοδυλε
Ρυν 98
Σψναπτοπηψσιν − Μετηοδ 3
Παρτιχιπαντ σχορεδ 18/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 18/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
ςεχτορ ςΠ−ΡΜ09 (ΣΠ11) , 30 Μινσ, ΡΟΟΜ ≡Χ
∆ιλυτιον 1: 1/10
Αυτοµατιον:
∆ακο Αυτοσταινερ Λινκ 48
Μετηοδ:
∆ακο ΦΛΕΞ+ κιτ
Μαιν Βυφφερ:
∆ακο ΦΛΕΞ ωαση βυφφερ, ΠΗ: 7.6
ΗΜΑΡ:
∆ακο ΠΤΛινκ, Βυφφερ: Ενςισιον ταργετ ρετριεϖαλ σλν ηιγη πΗ, ΠΗ: 9
ΕΑΡ:
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
Χηροµογεν:
∆ακο Ενςισιον Πλυσ κιτσ, ΡΟΟΜ ≡Χ., Τιµε 1: 5 Μινσ, Τιµε 2: 5 Μινσ
∆ετεχτιον:
∆ακο Ενςισιον ΦΛΕΞ+ ( Κ8002/12) , 30 Μινσ, ΡΟΟΜ ≡Χ Πρεδιλυτεδ
Σψναπτοπηψσιν − Μετηοδ 4
Παρτιχιπαντ σχορεδ 19/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 20/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−Λ−ΣΨΝΑΠ−299 (27Γ12) , 60 Μινσ, 37 ≡Χ
Αυτοµατιον:
ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ
Μετηοδ:
ςεντανα Υλτραςιεω ∆ΑΒ
Μαιν Βυφφερ:
ςεντανα ρεαχτιον βυφφερ (950−300), ΠΗ: 7.6
ΗΜΑΡ:
ςεντανα Βενκ ΧΧ1 (Στανδαρδ)
∆ιλυτιον 1: 1/25
ΕΑΡ:
Χηροµογεν:
ςεντανα Υλτραϖιεω ∆ΑΒ, 37 ≡Χ., Τιµε 1: 8 Μινσ, Τιµε 2: 8 Μινσ
∆ετεχτιον:
ςεντανα Υλτραςιεω Κιτ (760−500) , 8 Μινσ, 37 ≡Χ
ΒΕΣΤ ΜΕΤΗΟ∆Σ − Σεχονδαρψ Αντιβοδψ
Α σελεχτιον φροµ ϕυστ α φεω οφ τηε βεστ µετηοδσ εµπλοψεδ βψ παρτιχιπαντσ
Ταυ Προτειν − Μετηοδ 1
Παρτιχιπαντ σχορεδ 17/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 18/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
Τηερµο Σχιεν. ΜΝ1020 ΠΗΦ−ταυ (ΑΤ8) , 50 Μινσ, 25 ≡Χ
Αυτοµατιον:
∆ακο Αυτοσταινερ Λινκ 48
∆ιλυτιον 1: 800
Μετηοδ:
∆ακο ΦΛΕΞ+ κιτ
Μαιν Βυφφερ:
∆ακο ΦΛΕΞ ωαση βυφφερ
ΗΜΑΡ:
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
ΕΑΡ:
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
Χηροµογεν:
∆ακο ΦΛΕΞ ∆ΑΒ, 25 ≡Χ., Τιµε 1: 10 Μινσ, Τιµε 2: 10 Μινσ
∆ετεχτιον:
∆ακο Ενςισιον ΦΛΕΞ+ ( Κ8002/12) , 30 Μινσ, 25 ≡Χ Πρεδιλυτεδ
Ταυ Προτειν − Μετηοδ 2
Παρτιχιπαντ σχορεδ 17/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 16/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
∆ακο Α0024 (ρβ πολψ) , 48 Μινσ, 21 ≡Χ
Αυτοµατιον:
ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ
Μετηοδ:
ςεντανα Υλτραςιεω ∆ΑΒ
Μαιν Βυφφερ:
ςεντανα ρεαχτιον βυφφερ (950−300)
ΗΜΑΡ:
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
ΕΑΡ:
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
Χηροµογεν:
ςεντανα Υλτραϖιεω ∆ΑΒ
∆ετεχτιον:
ςεντανα Υλτραςιεω Κιτ (760−500)
∆ιλυτιον 1: 2000
Πρεδιλυτεδ
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 13:11 ον Τηυρσδαψ, 23 Αυγυστ, 2012
56
ΝΕΥΡΟΠΑΤΗΟΛΟΓΨ Μοδυλε
Ρυν 98
Ταυ Προτειν − Μετηοδ 3
Παρτιχιπαντ σχορεδ 19/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 17/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
Σιγµα Τ5530 (Ταυ−2) , 15 Μινσ
Αυτοµατιον:
Λειχα Βονδ−ΙΙΙ
Μετηοδ:
ςΒΣ ΒονδΜΑξ Ρεφινε ΚΙΤ
Μαιν Βυφφερ:
Βονδ Ωαση Βυφφερ (ΑΡ9590)
ΗΜΑΡ:
Λειχα Βονδ ΙΙΙ ΕΡ1
∆ιλυτιον 1: 4000
ΕΑΡ:
Χηροµογεν:
ςΒΣ Βονδ Πολψµερ Ρεφινε κιτ (∆Σ9800), Τιµε 1: 10 Μινσ
∆ετεχτιον:
Λειχα Βονδ Πολψµερ Ρεφινε (∆Σ9800) , 10 Μινσ Πρεδιλυτεδ
Ταυ Προτειν − Μετηοδ 4
Παρτιχιπαντ σχορεδ 17/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 17/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
∆ακο Α0024 (ρβ πολψ) , 20 Μινσ, 21 ≡Χ
Αυτοµατιον:
∆ακο Αυτοσταινερ Λινκ 48
∆ιλυτιον 1: 800
Μετηοδ:
∆ακο ΦΛΕΞ+ κιτ
Μαιν Βυφφερ:
∆ακο ΦΛΕΞ ωαση βυφφερ
ΗΜΑΡ:
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
ΕΑΡ:
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
Χηροµογεν:
ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ, 21 ≡Χ., Τιµε 1: 5 Μινσ, Τιµε 2: 5 Μινσ
∆ετεχτιον:
ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ , 20 Μινσ Πρεδιλυτεδ
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 13:11 ον Τηυρσδαψ, 23 Αυγυστ, 2012
57
C,Τ-.-/,
ΡΥΝ 98
Μοδυλε
Σελεχτεδ Ιµαγεσ σηοωινγ Οπτιµαλ ανδ Συβ−οπτιµαλ Ιµµυνοσταινινγ
F01 \3 ]Q;08=V 67859:;<=;059 5> ?@BD 59 ;E7 GH IJKLM NP;5:Q093 [E7 7^=8QV7 :E5U: :;<591
F01 23 4556 67859:;<=;059 5> ?@BD 59 ;E7 GH IJKLM NP;5:Q09S :E5U091 U7VV V5N=V0:76
λοχαλισεδ µεµβρανε σταινινγ ιν τηε τυµουρ χελλσ ανδ α γοοδ λεϖελ οφ νυχλεαρ χουντερ−σταιν.
Σεχτιον σταινεδ ωιτη ∆ακο 2Β11+Π∆7/26 αντιβοδψ, 1:100, υσινγ τηε ∆ακο ΠΤ Λινκ, αυτοσταινερ
ανδ Φλεξ δετεχτιον κιτ.
µεµβρανε σταινινγ οφ τυµουρ χελλσ ανδ τηε αππροπριατε ιντενσιτψ οφ νυχλεαρ χουντερσταιν.
Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε ςεντανα Χονφιρµ ΡΠ2/18 πρε−διλυτεδ αντιβοδψ, ον τηε ςεντανα
W79NE8=<X Z[S ??\ µιλδ ανδ ιςιεω δετεχτιον κιτ.
F01 _3 4556 67859:;<=;059 5> ?@BD 59 ;E7 GH IJKLM NP;5:Q09 `:091 ;E7 =VX=V097
F01 B3 M`bc5Q;08=V 67859:;<=;059 5> ?@BD 59 ;E7 GH IJKLM NP;5:Q093 [E7 :;=09091 0: U7=X
πηοσπηατασε µετηοδ. Τηε σταινινγ ισ στρονγ ανδ ωελλ λοχαλισεδ ιν τηε µεµβρανεσ οφ τηε τυµουρ
χελλσ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε ∆ακο 2Β11+Π∆7/26 αντιβοδψ, 1:10, νο πρε−τρεατµεντ ανδ υσινγ
τηε ∆ακο αυτοσταινερ ανδ ΑΠΑΑΠ δετεχτιον κιτ.
ωιτη σοµε χελλσ εξπεχτεδ το βε ποσιτιϖε νοτ δεµονστρατεδ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε Νοϖοχαστρα
Z\deff =9;0b56PS \g\hhS 95 Q<7cτρεατµεντ ανδ υσινγ τηε ς79;=9= W79NE8=<X ZΤ ανδ ιςιεω κιτ.
F01 D3 i55< 67859:;<=;059 5> ?@BD 59 ;E7 GH IJKLM NP;5:Q09 jLSWkS :E5U091 09=QQ<5Q<0=;7
Φιγ 6. Γοοδ εξαµπλε οφ αν ‘ιν ηουσε’ χοντρολ φορ Χ∆BD jVP8QE 9567 FILkjLSWk3[E7 878b<=97
σταινινγ ισ στρονγ, ανδ τηερε ισ α γοοδ λεϖελ οφ νυχλεαρ χουντερ−σταιν ωιτη α χλεαν βαχκγρουνδ.
Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε ∆ακο 2Β11+Π∆7/26 αντιβοδψ, 1:1000, νο πρε−τρεατµεντ ον τηε ςεντανα
IJZJM =96 0ςιεω κιτ.
ανδ εξχεσσιϖε βαχκγρουνδ σταινινγ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε ∆ακο 2Β11+Π∆7/26 αντιβοδψ,
1:180, υσινγ τηε ∆ακο ΠΤ Λινκ (ηιγη πΗ βυφφερ), αυτοσταινερ ανδ Φλεξ δετεχτιον κιτ.
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 16:38 ον Τυεσδαψ, 31 ϑυλψ, 2012
58
lmΤnonqm
ΡΥΝ 98
Μοδυλε
Σελεχτεδ Ιµαγεσ σηοωινγ Οπτιµαλ ανδ Συβ−οπτιµαλ Ιµµυνοσταινινγ
rst uv xyzs{|} ~{€‚zƒ|zs€ €„ …|}ƒzs € z† ‡ˆ ‰Š‹Œ Žz€‚ys Œ‘’“v”† •|{y}
σηοωσ γοοδ χψτοπλασµιχ σταινινγ οφ µεσοτηελιαλ χελλσ ωιτη α χλεαν βαχκγρουνδ ανδ α γοοδ λεϖελ
οφ νυχλεαρ χουντερ−σταιν. Σεχτιον σταινεδ ωιτη ∆ακο ΡΤΥ αντιβοδψ, νο πρε−τρεατµεντ ανδ υσινγ
τηε ∆ακο αυτοσταινερ ανδ Φλεξ δετεχτιον κιτ.
Φιγ 8. Γοοδ δεµονστρατιον οφ Χαλρετενιν ον τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ χψτοσπιν (Α,Β). Τηε στρονγ ωελλ
λοχαλισεδ χψτοπλασµιχ σταινινγ στανδσ ουτ νιχελψ αγαινστ τηε χλεαν βαχκγρουνδ. Σεχτιον σταινεδ
ωιτη τηε ∆ακο αντιβοδψ, νο πρε−τρεατµεντ ον τηε ςεντανα ΥΛΤΡΑ ωιτη τηε Υλτραϖιεω δετεχτιον
κιτ.
Φιγ 9. Ποορ δεµονστρατιον οφ Χαλρετενιν ον τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ χψτοσπιν (Α,Β). Τηε σταινινγ ισ ϖερψ
ωεακ, µακινγ ιντερπρετατιον ϖερψ διφφιχυλτv Žzs€ ‚z|s~ ˜sz† z† ‰€™€Ž|‚zƒ| š›› |zsœ€~‘
1:100, πρε−τρεατεδ ιν τηε µιχροωαϖε ανδ υσινγ τηε ∆ακο αυτοσταινερ ωιτη τηε ΑΠΑΑΠ δετεχτιον
κιτ.
Φιγ 10. Συβ−οπτιµαλ δεµονστρατιον οφ Χαλρετενιν ον τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ χψτοσπιν. Αλτηουγη τηε
εξπεχτεδ µεσοτηελιαλ χελλσ αρε σταινινγ, τηε σεχτιον αλσο σηοωσ νον−σπεχιφιχ ιναππροπριατε
σταινινγ οφ οτηερ χελλ τψπεσ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε ςεντανα πρεδιλυτεδ αντιβοδψ, ωιτη νο
πρε−τρεατµεντ ον τηε ςz|| ’Ž†{|ƒ– —Τ ανδ Υλτραϖιεω κιτ.
Φιγ 11. Γοοδ εξαµπλε οφ αν ‘ιν ηουσε’ χοντρολ φορ Χαλρετενιν (Α,Β) (πλευραλ φλυιδ χψτοσπιν) (Α,Β),
σηοωινγ στρονγ χψτοπλασµιχ σταινινγ ανδ α χλεαν βαχκγρουνδ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε ςεντανα
πρε−διλυτεδ αντιβοδψ, νο πρε−τρεατµεντ ον τηε ςz|| ‰Š—Š |~ sςιεω κιτ.
Φιγ 12. Εξχελλεντ εξαµπλε οφ α χελλ βλοχκ ‘ιν ηουσε’ χοντρολ φροµ α πλευραλ φλυιδ οφ α
µεσοτηελιοµα δεµονστρατεδ ωιτη Χαλρετενιν. Τηε στρονγ χψτοπλασµιχ σταινινγ ισ σηοων το βεττερ
|~™|z|t s z† †st† y€˜ƒ s‚ƒzv Žzs€ ‚z|s~ ˜sz† z† ‰€™€Ž|‚zƒ| šŒš |zsœ€~‘ žšŸ‘ €
πρε−τρεατµεντ ον τηε ςεντανα ΥΛΤΡΑ |~ xyzsςιεω κιτ.
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 16:38 ον Τυεσδαψ, 31 ϑυλψ, 2012
59
Ρυν 98
ΧΨΤΟΛΟΓΨ Μοδυλε
ΓΡΑΠΗΙΧΑΛ ΡΕΠΡΕΣΕΝΤΑΤΙΟΝ ΟΦ ΠΑΣΣ ΡΑΤΕΣ
¡¢ £¤ ¥¦§¨ © ª¥« ¬­ ¢®¯«° °±²³´¬­µ
Ινδιϖιδυαλ
Σχορεσ
4 = 0 (0%)
28
4 = 0 (0%)
32
5 = 0 (0%)
5 = 0 (0%)
6 = 0 (0%)
24
6 = 0 (0%)
28
7 = 0 (0%)
7 = 0 (0%)
8 = 2 (3%)
20
8 = 0 (0%)
24
9 = 0 (0%)
10 = 1 (1%)
11 = 3 (4%)
16
12 = 5 (7%)
13 = 6 (8%)
12
14 = 8 (11%)
νο. οφ ρετυρνσ
νο. οφ ρετυρνσ
Ινδιϖιδυαλ
Σχορεσ
¡¢ £¤° ¥¦§¨ © ª¥« ¬­ ´­¶·¬¸µ± °±²³´¬­µ
9 = 2 (3%)
20
10 = 0 (0%)
11 = 2 (3%)
16
12 = 4 (6%)
13 = 8 (11%)
12
14 = 6 (8%)
15 = 7 (10%)
8
15 = 5 (7%)
8
16 = 26 (36%)
16 = 29 (41%)
17 = 11 (15%)
4
17 = 9 (13%)
4
18 = 1 (1%)
18 = 2 (3%)
19 = 2 (3%)
0
4
5
6
7
8
9
10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
19 = 1 (1%)
0
20 = 0 (0%)
4
5
6
7
8
9
Σχορεσ
Σχορεσ
Συµµαρψ
Συµµαρψ
16 − 20 = 40 (56%)
16 − 20 = 44 (62%)
13 − 15 = 21 (29%)
13 − 15 = 19 (27%)
10 − 12 = 9 (13%)
10 − 12 = 6 (8%)
0 − 9 = 2 (3%)
0 − 9 = 2 (3%)
Μεδιαν = 14.00
Μεδιαν = 15.00
ΡΥΝ 98Τ Χαλρετινιν ον ΝΕΘΑΣ Σεχτιονσ
12
ΡΥΝ 98Υ Χαλρετινιν ον ιν−ηουσε Σεχτιονσ
Ινδιϖιδυαλ
Σχορεσ
28
4 = 0 (0%)
5 = 0 (0%)
6 = 0 (0%)
6 = 0 (0%)
24
7 = 1 (1%)
7 = 0 (0%)
9 = 0 (0%)
10 = 1 (1%)
11 = 1 (1%)
6
12 = 7 (10%)
13 = 7 (10%)
8 = 2 (3%)
20
νο. οφ ρετυρνσ
νο. οφ ρετυρνσ
8 = 3 (4%)
8
9 = 1 (1%)
10 = 0 (0%)
16
11 = 2 (3%)
12 = 3 (4%)
12
13 = 2 (3%)
14 = 8 (11%)
4
15 = 8 (11%)
14 = 3 (4%)
8
15 = 2 (3%)
16 = 11 (15%)
2
17 = 10 (14%)
16 = 27 (39%)
17 = 12 (17%)
4
18 = 7 (10%)
0
19 = 4 (6%)
4
5
6
7
8
9
10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
Σχορεσ
20 = 4 (6%)
Ινδιϖιδυαλ
Σχορεσ
4 = 0 (0%)
5 = 0 (0%)
10
20 = 3 (4%)
10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
18 = 7 (10%)
0
19 = 2 (3%)
4
5
6
7
8
9
10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
20 = 7 (10%)
Σχορεσ
Συµµαρψ
Συµµαρψ
16 − 20 = 36 (50%)
16 − 20 = 55 (79%)
13 − 15 = 23 (32%)
13 − 15 = 7 (10%)
10 − 12 = 9 (13%)
10 − 12 = 5 (7%)
0 − 9 = 4 (6%)
0 − 9 = 3 (4%)
Μεδιαν = 14.00
Μεδιαν = 14.50
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 13:08 ον Τηυρσδαψ, 23 Αυγυστ, 2012
60
Ρυν 98
ΧΨΤΟΛΟΓΨ Μοδυλε
ΑΝΤΙΒΟ∆ΙΕΣ ΑΝ∆ ΟΤΗΕΡ ΤΕΧΗΝΙΧΑΛ ΠΑΡΑΜΕΤΕΡΣ ΕΜΠΛΟΨΕ∆ ΒΨ ΠΑΡΤΙΧΙΠΑΝΤΣ ΙΝ ΤΗΕ ΧΨΤΟΛΟΓΨ
ΜΟ∆ΥΛΕ
Τηε φολλοωινγ ταβλεσ ρεχορδ τηε νυµβερ οφ παρτιχιπαντσ (Ν) υσινγ εαχη πριµαρψ αντιβοδψ ανδ τηε περχενταγε (%) οφ τηεσε
παρτιχιπαντσ αχηιεϖινγ αχχεπταβλε σταινινγ (α σχορε >12/20) ον ΥΚ ΝΕΘΑΣ σεχτιονσ.
Χψτολογψ Ρυν: 98
Χψτολογψ Ρυν: 98
¹º»¼½º¾ ¿ÀÁ»ÂÃľ Å ÆÇÈÉ Ê ËÆ¿
Πριµαρψ Αντιβοδψ : Χαλρετινιν
Αντιβοδψ ∆εταιλσ
∆ακο Μ00742 (χλονε ΥΧΗΛ1) Χ∆45ΡΟ
Ν
%
1
100
ÌÍÎÏÐÑÒÓ ÔÕÎÖÏ×Ø
Ν
%
Χελλ Μαρθυε − ΧΜΧ759 χαλρετινιν
1
100
55
87
Χελλ Μαρθυε 232Α−78
2
50
∆ακο Μ0833 (χλονε Π∆7/26) Χ∆45ΡΒ
1
100
∆ακο ΙΡ627
1
100
∆ακο Ν1514
1
100
∆ακο Μ7245 Χαλρετινιν
15
87
∆ακο ΡΤΥ ΦΛΕΞ ΛΙΝΚ ΙΡ751 (2Β11 + Π∆7/26)
1
100
Ινϖιτρογεν 18−0211
4
75
Λειχα/Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−Λ−ΛΧΑ (Ξ16/99)
3
33
Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−ΧΑΛΡΕΤ (5Α5)
9
78
Λειχα/Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−ΛΧΑ−ΡΠ (ΡΠ2/18 + 2/22)
1
100
Νοϖοχαστρα/Λειχα ΝΧΛ−Λ−ΧΑΛΡΕΤ−566
6
50
Λειχα/Νοϖοχαστρα ΡΤΥ−ΛΧΑ−ΡΠ (ΡΠ2/18 + 2/22)
1
100
Νοϖοχαστρα/Λειχα ΡΤΥ−Χαλρετινιν (5Α5)
2
50
Οτηερ
1
0
Οτηερ
2
50
ςεντανα ΧΟΝΦΙΡΜ 760−2505 (ΡΠ2/18)
7
86
ςεχτορ ςΠ−Χ306 χαλρετινιν
4
75
ςεντανα 250 2700 Χαλρετινιν
4
75
ςεντανα 790−4467
7
100
15
100
∆ακο Μ0701 (χλονεσ 2Β11+Π∆7/26)
Ζψµεδ 18 0211 Χαλρετινιν
Χψτολογψ Ρυν: 98
Χψτολογψ Ρυν: 98
¹º»¼½º¾ ¿ÀÁ»ÂÃľ Å ÆÇÈÉ Ê ËÆ¿
Πριµαρψ Αντιβοδψ : Χαλρετινιν
Αντιγεν Ρετριεϖαλ
Ν
%
Αντιγεν Ρετριεϖαλ
Ν
%
ΨΕΣ
15
21
ΨΕΣ
16
22
ΝΟ
57
79
ΝΟ
56
78
Βρεακδοων οφ παρτιχιπαντσ ρεπορτινγ ΨΕΣ
Ν
Βρεακδοων οφ παρτιχιπαντσ ρεπορτινγ ΨΕΣ
Ν
Ηεατ Μεδιατεδ
0
Ηεατ Μεδιατεδ
0
Ενζψµε
0
Ενζψµε
Βοτη
Νοτ Σπεχιφιεδ
15
0
Βοτη
Νοτ Σπεχιφιεδ
Χψτολογψ Ρυν: 98
Χψτολογψ Ρυν: 98
ÙÚ½Á ÛÚÄ»½ÁÚÄ ÜÚÁº»ÚݽÞ
ÙÚ½Á ÛÚÄ»½ÁÚÄ ÜÚÁº»ÚݽÞ
Χψτολογψ Ρυν: 98
ßÀà¾¼Ú ÛÚÄ»½ÁÚÄ ÜÚÁº»ÚݽÞ
0
16
0
Χψτολογψ Ρυν: 98
ßÀà¾¼Ú ÛÚÄ»½ÁÚÄ ÜÚÁº»ÚݽÞ
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 13:08 ον Τηυρσδαψ, 23 Αυγυστ, 2012
61
Ρυν 98
Χψτολογψ Ρυν: 98
Χψτολογψ Ρυν: 98
Χαλρετινιν
áâãä å æáç
Ν
%
Ν
%
ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ
2
50
3
100
èéêëìíìî ïï ðêñòóìô õö÷ øùúûüýþÿB
2
50
2
100
÷D ê ÿíééêí ÿü õ þúúúúB
2
100
2
100
÷D ê ÿíééêí ÿü õ þúúB
ΧΨΤΟΛΟΓΨ Μοδυλε
10
90
9
89
÷D ê ÿí
ééêí ð óêì þøúúø
2
50
3
100
÷D ê ÿí
ééêí ð ôDé þøúúú
1
0
0
0
÷D ê ÿý õ þúúB
1
0
1
100
Dééêí LñôDééêí ð ð õï ÷B
1
100
1
100
ìéD èêí ðêñòóìô ÷ìéíì õ÷ïùB
0
0
1
100
ìéD èêí ðêñòóìô ìéíì õ÷ïúúB
20
70
19
79
0
0
1
100
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
1
100
1
100
Οτηερ
3
100
3
33
ðêPìô ééêí ÷ðè ð
1
100
1
0
ìíDíD ééìP òìó õúûúB
8
100
9
89
ìíDíD VééìP þé õúûúúB
2
100
1
100
ìíDíD LñôDéìP þé õúûúúB
12
100
13
85
Νονε
Χαλρετινιν
áâãä å æáç
ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ
Ν %
4 100
Ν %
4 100
èéêëìíìî ÷ýè õö÷øùúB
1
0
1 100
èéêëìíìî é é ÷ýè õþùûþB
1 100
1 100
÷ýþV ÷ýè
1
1 100
÷D ê ÷ýè é é õþùøB
1 100
Χηροµογεν
÷D ê ÿü ÷ýè
0
2 100
11
91
÷D ê ÿý ÿíééêí þúú ÷ýè
0
0
1 100
÷D ê ÿý þúú ýñ Dñéíì !ê!DDì 1
0
1 100
Οτηερ
4 100
2
ïéSóD ÷ýè õ÷øB
1
1 100
ïéSóD ÷ýè õ÷ùB
èï èêí ðêñòóìô ìéíì é õ÷ïúúB
0
2 100
21
67
ìíDíD ÷ýè
3 100
ìíDíD é
éìP
5 100
ìíDíD LñôD
éìP ÷ýè
ééêí èéêïòìó èêí ü ÷ýè
16
94
0
0
10
Χαλρετινιν
2
50
81
3 100
7
86
14
86
1 100
áâãä å æáç
Ν
%
Ν
èéêëìíìî ëìíê"ü úúúé
%
1
100
1
100
ΒιοΓενεξ Οπτιµαξ
1
0
1
100
÷D ê ýêDéíìô
2
0
1
100
÷D ê ýêDéíìô éí ø
9
100
8
88
÷D ê ýêDéíìô ñ
2
100
3
100
÷D ê ýêDéíìô ðñ éí
1
0
2
100
Dééêí ýêDéíìô
1
100
1
100
15
60
17
88
Λειχα Βονδ−ΙΙΙ
8
88
7
71
Nêíì õ"DíDñB
4
75
3
33
ìíDíD èìí!óDô
4
100
5
60
ìíDíD èìí!óDô Lý
5
100
4
75
18
94
17
94
1
100
1
100
ìéD èêí "Dî
ìíDíD èìí!óDô ü
ìíDíD Nìîÿï
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 13:08 ον Τηυρσδαψ, 23 Αυγυστ, 2012
0
21
Χψτολογψ Ρυν: 98
Αυτοµατιον
90
62
Ρυν 98
ΧΨΤΟΛΟΓΨ Μοδυλε
1234 5246783 9 :;<= 3>?@=?A= E@>FG;=H
Α σελεχτιον φροµ ϕυστ α φεω οφ τηε βεστ µετηοδσ εµπλοψεδ βψ παρτιχιπαντσ
C#$% & 'C( ) *+,-./ 0
Παρτιχιπαντ σχορεδ 17/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 18/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
∆ακο Μ0701 (χλονεσ 2Β11+Π∆7/26) , 32 Μινσ, 37 ≡Χ
Αυτοµατιον:
Λειχα Βονδ Μαξ
Μετηοδ:
ςΒΣ ΒονδΜΑξ Ρεφινε ΚΙΤ
Μαιν Βυφφερ:
Βονδ Ωαση Βυφφερ (ΑΡ9590)
ΗΜΑΡ:
Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ1
ΕΑΡ:
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
Χηροµογεν:
ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ
∆ετεχτιον:
ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ
∆ιλυτιον 1: 1/500
C#$% & 'C( ) *+,-./ 0
Παρτιχιπαντ σχορεδ 17/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 18/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
∆ακο Μ0701 (χλονεσ 2Β11+Π∆7/26) , 20 Μινσ, 22 ≡Χ
Αυτοµατιον:
∆ακο Αυτοσταινερ Λινκ 48
MIJKOQR
∆ακο ΦΛΕΞ+ κιτ
MTUW XYZZI[R
∆ακο ΦΛΕΞ ωαση βυφφερ
\M]^R
∆ακο ΠΤΛινκ, Βυφφερ: ΦΛΕΞ ΤΡΣ Ηιγη πΗ
∆ιλυτιον 1: 400
ΕΑΡ:
Χηροµογεν:
∆ακο ΦΛΕΞ ∆ΑΒ, 22 ≡Χ., Τιµε 1: 10 Μινσ
_IJI`JUOWR
∆ακο Ενςισιον ΦΛΕΞ+ ( Κ8002/12) , 20 Μινσ, 22 ≡Χ Πρεδιλυτεδ
C#$% & 'C( ) *+,-./ 0
Παρτιχιπαντ σχορεδ 19/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 15/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
ςεντανα ΧΟΝΦΙΡΜ 760−2505 (ΡΠ2/18) , 32 Μινσ, 37 ≡Χ Πρεδιλυτεδ
Αυτοµατιον:
ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ
MIJKOQR
ςεντανα ιςιεω Κιτ
MTUW XYZZI[R
ςεντανα ρεαχτιον βυφφερ (950−300), ΠΗ: 7.6
\M]^R
ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Μιλδ), Βυφφερ: ΧΧ1
ΕΑΡ:
Χηροµογεν:
ςεντανα ιϖιεω, Τιµε 1: 8 Μινσ
_IJI`JUOWR
ςεντανα ιςιεω σψστεµ (760−091) , 8 Μινσ, 37 ≡Χ Πρεδιλυτεδ
C#$% & 'C( ) *+,-./ 0
Παρτιχιπαντ σχορεδ 16/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 20/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
∆ακο Μ0701 (χλονεσ 2Β11+Π∆7/26) , 32 Μινσ, 37 ≡Χ Πρεδιλυτεδ ∆ιλυτιον 1: 1000
Αυτοµατιον:
ςεντανα ΝεξΕΣ
MIJKOQR
ςεντανα ιςιεω Κιτ
MTUW XYZZI[R
ςεντανα απκ Ωαση (250−042)
\M]^R
ΕΑΡ:
Χηροµογεν:
ςεντανα ιϖιεω
_IJI`JUOWR
ςεντανα ιςιεω σψστεµ (760−091)
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 13:08 ον Τηυρσδαψ, 23 Αυγυστ, 2012
63
The Cytology Module
Run 98
Neil Bilbe and Suzanne Parry
Gold Standard
Second Antibody
Antigens Assessed:
CD45
Calretenin
Tissue Sections circulated:
Effusion containing lymphocytes,
Effusion containing malignant cells
macrophages, erythrocytes and mes- mesothelial cells and lymphocytes
othelial cells
and erythrocytes
Number of Registered Participants:
73
Summary Graphs - Pass Rate Tables
Best Method - Selected Images
© UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent
64
Ρυν 98
ΧΨΤΟΛΟΓΨ Μοδυλε
ΒΕΣΤ ΜΕΤΗΟ∆Σ − Σεχονδαρψ Αντιβοδψ
Α σελεχτιον φροµ ϕυστ α φεω οφ τηε βεστ µετηοδσ εµπλοψεδ βψ παρτιχιπαντσ
Χαλρετινιν − Μετηοδ 1
Παρτιχιπαντ σχορεδ 20/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 17/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
∆ακο ΙΡ627 , 20 Μινσ, ΡΤ ≡Χ Πρεδιλυτεδ
Αυτοµατιον:
∆ακο Αυτοσταινερ Λινκ 48
Μετηοδ:
∆ακο ΦΛΕΞ κιτ
Μαιν Βυφφερ:
∆ακο ΦΛΕΞ ωαση βυφφερ, ΠΗ: 7.7
ΗΜΑΡ:
∆ακο ΠΤΛινκ
ΕΑΡ:
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
Χηροµογεν:
∆ακο ΦΛΕΞ ∆ΑΒ, ΡΤ ≡Χ., Τιµε 1: 10 Μινσ
∆ετεχτιον:
∆ακο Ενςισιον ΦΛΕΞ ( Κ8000/10) , 10 Μινσ, ΡΤ ≡Χ Πρεδιλυτεδ
Χαλρετινιν − Μετηοδ 1
Παρτιχιπαντ σχορεδ 20/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 18/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
∆ακο Μ7245 Χαλρετινιν , 40 Μινσ, 37 ≡Χ
Αυτοµατιον:
ςεντανα Βενχηµαρκ ΥΛΤΡΑ
Μετηοδ:
ςεντανα Υλτραςιεω ∆ΑΒ
Μαιν Βυφφερ:
ςεντανα ρεαχτιον βυφφερ (950−300)
ΗΜΑΡ:
ςεντανα Βενκ ΥΛΤΡΑ ΧΧ1 (Σταν.)
ΕΑΡ:
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
Χηροµογεν:
ςεντανα Υλτραϖιεω ∆ΑΒ
∆ετεχτιον:
ςεντανα Οπτιςιεω Κιτ (760−700)
Χαλρετινιν − Μετηοδ 1
Παρτιχιπαντ σχορεδ 18/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 20/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
ςεντανα 790−4467 , 32 Μινσ, 37 ≡Χ Πρεδιλυτεδ
Αυτοµατιον:
ςεντανα ΝεξΕΣ
Μετηοδ:
ςεντανα ιςιεω Κιτ
Μαιν Βυφφερ:
ςεντανα ρεαχτιον βυφφερ (950−300)
ΗΜΑΡ:
ΕΑΡ:
Χηροµογεν:
ςεντανα ιϖιεω
∆ετεχτιον:
ςεντανα ιςιεω σψστεµ (760−091)
Χαλρετινιν − Μετηοδ 1
Παρτιχιπαντ σχορεδ 20/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 19/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
Ινϖιτρογεν 18−0211 , 30 Μινσ, 38 ≡Χ
Αυτοµατιον:
ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ
Μετηοδ:
ςεντανα ιςιεω Κιτ
Μαιν Βυφφερ:
ςεντανα ρεαχτιον βυφφερ (950−300)
∆ιλυτιον 1: 50
ΗΜΑΡ:
ΕΑΡ:
Χηροµογεν:
ςεντανα ιϖιεω
∆ετεχτιον:
ςεντανα ιςιεω σψστεµ (760−091)
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 13:08 ον Τηυρσδαψ, 23 Αυγυστ, 2012
65
The Alimentary Tract Module: GIST
Run 98
Suzanne Parry and Mark Pitt
Gold Standard
Second Antibody
Antigens Assessed:
CD117
DOG1
Tissue Sections circulated:
GIST, Appendix &
Desmoid
GIST, Appendix &
Desmoid
Number of Registered Participants:
103
Gold Standard - CD117
CD117 (c-kit) is a transmembrane tyrosine kinase growth factor
receptor involved in cell differentiation and is expressed by
melanocytes, mast cells and interstitial cells of Cajal. CD117 is
also expressed in gastrointestinal stromal tumors (GIST). Until
recently, patients with GIST faced a limited choice of treatment
regimes, which included radiotherapy and surgery, with limited
success. However, Glivec (imatinib), which was originally
developed for chronic myeloid leukemia (CML), has proved
effective in the targeted treatment of GISTs, by directly inhibiting
the action of CD117.
Features of sub-optimal immunostaining (see Figs 8B & 11)
Weak and Patchy Staining of the tumour cells of the GIST
Note: Mast cells are not stained with DOG-1

References
1. Cordless et al., Biology of Gastrointestinal Stromal Tumours. J Clin
Oncol 2004, 22(18): 3813-3825.
2. Blay et al., Consensus meeting for the management of
gastrointestinal stromal tumors. Report of the GIST Consensus
Conference of 20-21 March 2004, under the auspices of ESMO. Ann
Oncol 2005 6: 566-578.
3. Parfitt JR, Rodriguez-Justo M, Feakins R, Novelli MR (2008)
Tissue Distribution
Gastrointestinal Kaposi's sarcoma: CD117 expression and the
Circulated tissue comprised of GIST, appendix and a desmoid
potential for misdiagnosis as gastrointestinal stromal tumour.
tumour, which participants requested to stain the samples using
Histopathology 2008, 52: 816-23.
their normal protocol, whether with or without heat mediated 4. West RB, Corless CL, Chen X et al. The novel marker, DOG1, is
expressed ubiquitously in gastrointestinal stromal tumors irrespective
antigen retrieval.
of KIT or PDGFRA mutation status. Am. J. Pathol. 2004; 65; 107–
113.
5. Espinosa I, Lee CH, Kim MK et al. A novel monoclonal antibody
Features of optimal immunostaining (see Fig2 1, 3-6)
against DOG1 is a sensitive and specific marker for gastrointestinal
 Good localisation of CD117 to cells of the GIST
stromal tumors. Am. J. Surg. Pathol. 2008; 32; 210– 218.
 Good localisation of CD117 to mast cells
6. Novelli M, Rossi S, Rodriguez-Justo M, Taniere P, Seddon B,
 Good localisation of CD117 to interstitial cells of Cajal
Toffolatti L, Sartor C, Hogendoorn PC, Sciot R, Van Glabbeke M,
Verweij J, Blay JY, Hohenberger P, Flanagan A, Dei Tos AP. DOG1
 No staining of desmoid tumour
and CD117 are the antibodies of choice in the diagnosis of
gastrointestinal stromal tumours. Histopathology 2010, 57(2):259Features of sub-optimal immunostaining (see Figs 2A & B)
270.
 Weak and Patchy Staining of the tumour cells of the GIST
7. Parfitt JR, Rodriguez-Justo M, Feakins R, Novelli MR.
Little or no staining of the Mast Cells
Gastrointestinal Kaposi’s sarcoma: CD117 expression and the
 Excessive background / non specific staining
potential for misdiagnosis as gastrointestinal stromal tumour.
Histopathology 2008; 52; 816–823.
Second Antibody - DOG1
“Discovered on GIST 1” (DOG1) antibody was initially described
in 20044 and has now started to be recognized as a more
specific marker of GISTs than CD117 4,5,6 . A recent study has
shown DOG1 sensitivity of 99% and found to be strong and
easier to interpret than CD1176 . The groups also showed that
seven CD117 negative GIST cases were found to be DOG1
positive, and six of the tumours had PDGFRA mutations.
Furthermore, DOG1 is not expressed in Kaposi sarcomas of the
GI tract which have been shown to stain for CD1177.
In more cases, combined CD117 and DOG1
immunohistochemistry has been suggested as a sufficient panel
to confirm diagnosis, with CD117 and DOG1 negative cases
tested further with a panel of antibodies including SMA, desmin,
S100 and molecular analysis, should be considered6 .
Tissue Distribution
Circulated tissue were from sequential sections used for the
CD117 distribution as show above and comprised of GIST,
appendix and a desmoid tumour.
Features of optimal immunostaining (see Figs 7,8A,9,10 & 12)
 Good localisation of DOG1 to cells of the GIST
 Good localisation of DOG1 to interstitial cells of Cajal
 No staining of desmoid tumour
© UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent
66
ΡΥΝ 98
abcdefΤΑΡg
ΤΡΑΧΤ hΑijkbklg Μοδυλε
Σελεχτεδ Ιµαγεσ σηοωινγ Οπτιµαλ ανδ Συβ−οπτιµαλ Ιµµυνοσταινινγ
|x} ~ €qwxus z‚rvƒw„uwxrv r… †‡117 ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ διστριβυτεδ ΓΙΣΤ σεχτιον, σηοωινγ
ιντενσε ωελλ λοχαλισεδ πρεδοµιναντλψ µεµβρανουσ ανδ χψτοπλασµιχ σταινινγ. Σεχτιον σταινεδ
ωιτη τηε ∆ακο Αmnop qrst uvwxyrzt{ ~ˆ‰oo{ ον τηε ςεντανα ΥΛΤΡΑ , ΧΧ1 στανδαρδ ανδ
Υλτραϖιεω κιτ.
Φιγ 2. Γοοδ δεµονστρατιον οφ µαστ χελλσ ωιτη Χ∆117 ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ διστριβυτεδ
αππενδιξ σεχτιον αφτερ ηεατ ρετριεϖαλ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε ∆ακο Αmnop qrst uvwxyrzt{
1:300, ον τηε ςεντανα ΥΛΤΡΑ , ΧΧ1 στανδαρδ ανδ Υλτραϖιεω κιτ.
Φιγ 3. Γοοδ δεµονστρατιον οφ τηε (Α) χελλσ οφ Χαϕαλ ιν τηε µυσχυλαρισ προπρια οφ τηε αππενδιξ,
ανδ τηε εξπεχτεδ δεµονστρατιον οφ (Β) µαστ χελλσ ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ διστριβυτεδ δεσµοιδ
σεχτιον σταινεδ ωιτη Χ∆117. Τηε σταινινγ ισ στρονγ ανδ διστινχτ ανδ τηε βαχκγρουνδ ρεµαινσ
υνσταινεδ ανδ χλεαν.
Φιγ 4. Τωο εξαµπλεσ οφ ποορλψ δεµονστρατεδ Χ∆117 ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΓΙΣΤ σεχτιον (Χοµπαρε
ωιτη Φιγ 2.). Τηε σταινινγ ιν (Α) ισ ωεακ, ανδ (Β) σηοωσ υνεϖεν σταινινγ. Βοτη σεχτιονσ ωερε
σταινεδ ωιτη τηε ∆ακο Αmnop qrst uvwxyrzt{ Š‹Œ ~ˆpoo uvz ŠŒ ~ˆpo{ uvz vr q„‚Žw„‚uw‚vw rv
τηε ς‚vwuvu ‚vu„‘ ’Τ ανδ Υλτραϖιεω κιτ.
|x} n “rr„ z‚rvƒw„uwxrv r… †‡117 ον τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ διστριβυτεδ αππενδιξ. Αλτηουγη τηε
Φιγ 6. Εξχελλεντ δεµονστρατιον οφ Χ∆117 φροµ παρτιχιπαντσ ‘ιν−ηουσε’ ΓΙΣΤ χοντρολ σεχτιον.
Σταινεδ ωιτη ∆ακο Αmnop qrst uvwxyrzt{ ~ˆpoo{ ον τηε ς‚vwuvu ‚vu„‘ ’Τ ΧΧ1 µιλδ ανδ
Υλτραϖιεω δετεχτιον κιτ.
µαστ χελλσ αρε σταινινγ ασ εξπεχτεδ, τηε νον−σπεχιφιχ βαχκγρουνδ σταινινγ ισ εξχεσσιϖε. Φαλσε
ποσιτιϖε σταινινγ ωασ αλσο σεεν ιν τηε δεσµοιδ τυµουρ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε ∆ακο Αmnop
qrst uvwxyrzt{ ~ˆno{ υσινγ τηε ∆ακο ΠΤ Λινκ{ u”wrƒwuxv‚„ uvz |•–’ ‘xw
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
—˜™š›œ ž› Ÿ ¡¢£
ον Τυεσδαψ, 31 ϑυλψ, 2012
67
¤¥¦§¨©ΤΑΡª
ΡΥΝ 98
ΤΡΑΧΤ «Α¬­®¥®¯ª Μοδυλε
Σελεχτεδ Ιµαγεσ σηοωινγ Οπτιµαλ ανδ Συβ−οπτιµαλ Ιµµυνοσταινινγ
°±² ɴƺ»±¼½¾ ¿À¼¹Á»ý»±¹Á ¹Ä ÅÆÇ¸È ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ διστριβυτεδ ΓΙΣΤ σεχτιον, σηοωινγ
°±² ³´ µ¶·¸¹º»±¼½¾ ¿À¼¹Á»ý»±¹Á ¹Ä ÅÆÇ¸È ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ διστριβυτεδ ΓΙΣΤ σεχτιον
ιντενσε ωελλ λοχαλισεδ χψτοπλασµιχ ανδ µεµβρανουσ σταινινγ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε Λειχα Κ9
αντιβοδψ, 1:40, υσινγ τηε ςÀÁ»½Á½ ÊÀÁË̼½ÃÍ ÎÏ, ΧΧ1 στανδαρδ ανδ Υλτραϖιεω κιτ.
(Χοµπαρε ωιτη Φιγ 7). Αλτηουγη τηε τυµουρ ισ ποσιτιϖε ασ εξπεχτεδ, τηε σταινινγ ισ ωεακ.
Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε Λειχα Κ9 πρε−διλυτεδ αντιβοδψ, υσινγ τηε ςεντανα ΥΛΤΡΑ, ΧΧ1 µιλδ
ανδ Υλτραϖιεω κιτ.
Φιγ 9. Γοοδ δεµονστρατιον οφ τηε χελλσ οφ Χαϕαλ ιν τηε µυσχυλαρισ προπρια οφ τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ
°±² Èд ÑÒºÀË»À¿ ÅÆÇ¸È ÀÒºÃÀ±¹Á ±Á »ÌÀ ÓÔ ÕÑÖ×µ ØÙÙ ¿±Â»Ã±·¶»À¿ ¿À¼¹±¿ ÂÀË»±¹Á´ ÏÌÀ
½ººÀÁ¿±Ò ÂÀË»±¹Á »½±ÁÀ¿ Ú±»Ì ÅÆǸȴ ÏÌÀ ¼¹¹»Ì ¼¶Â˾À ÃÀ¼½±Á ¶Á»½±ÁÀ¿ ½Á¿ ˾À½Á´
Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε Λειχα Κ9 αντιβοδψ, 1:40, υσινγ τηε ςÀÁ»½Á½ ÊÀÁË̼½ÃÍ ÎÏ, ΧΧ1
δεσµοιδ ανδ µαστ χελλσ ρεµαιν υνσταινεδ ωιτη µινιµαλ βαχκγρουνδ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε
Λειχα Κ9 αντιβοδψ, 1:40, υσινγ τηε ςÀÁ»½Á½ ÊÀÁË̼½ÃÍ ÎÏ, ΧΧ1 στανδαρδ ανδ Υλτραϖιεω κιτ.
στανδαρδ ανδ Υλτραϖιεω κιτ.
Φιγ 11´ µ¶·¸¹º»±¼½¾ ¿À¼¹Á»ý»±¹Á ¹Ä ÅÆÇ¸È ±Á »ÌÀ ÓÔ ÕÑÖ×µ ØÙÙ ¿±Â»Ã±·¶»À¿ ¿À¼¹±¿ »¶¼¹¶Ã
(Χοµπαρε ωιτη Φιγ 10). Τηε σεχτιον σηοωσ ιναππροπριατε φαλσε ποσιτιϖε σταινινγ. Σεχτιον σταινεδ
ωιτη τηε Λειχα Κ9 αντιβοδψ, 1:200, υσινγ τηε ∆ακο ΠΤ ΛινκÜ ½¶»¹Â»½±ÁÀà ½Á¿ °ÝÑΠͱ»´
Φιγ 12. Εξχελλεντ εξαµπλε οφ αν ιν−ηουσε χοντρολ σεχτιον, σηοωινγ γοοδ δεµονστρατιον οφ α
ÅÆǸÈÛ ΓΙΣΤ αλονγ ωιτη χελλσ οφ Χαϕαλ ιν τηε αδϕαχεντ νορµαλ τισσυε. Σταινεδ ωιτη ςεντανα
ΣΠ31 πρε−διλυτεδ αντιβοδψ, υσινγ τηε ςÀÁ»½Á½ ÊÀÁË̼½ÃÍ ÎÏ, ΧΧ1 εξτενδεδ ανδ ιςιεω
δετεχτιον κιτ.
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Þßàáâãä åâ æçèéê
ον Τυεσδαψ, 31 ϑυλψ, 2012
68
ΑΛΙΜΕΝΤΑΡΨ ΤΡΑΧΤ ΠΑΤΗΟΛΟΓΨ Μοδυλε
Ρυν 98
ΓΡΑΠΗΙΧΑΛ ΡΕΠΡΕΣΕΝΤΑΤΙΟΝ ΟΦ ΠΑΣΣ ΡΑΤΕΣ
ëìí îïð ñòóóô õö í÷øùú úûüýþõöÿ
35
ëìí îïR ñòóóô õö þö õÿû úûüýþõöÿ
Ινδιϖιδυαλ
Σχορεσ
Ινδιϖιδυαλ
Σχορεσ
35
4 = 0 (0%)
4 = 1 (1%)
5 = 0 (0%)
30
5 = 0 (0%)
30
6 = 0 (0%)
6 = 0 (0%)
7 = 1 (1%)
7 = 0 (0%)
25
8 = 2 (2%)
9 = 3 (3%)
20
10 = 2 (2%)
11 = 2 (2%)
12 = 6 (6%)
15
13 = 9 (9%)
νο. οφ ρετυρνσ
νο. οφ ρετυρνσ
25
14 = 7 (7%)
10
8 = 0 (0%)
9 = 0 (0%)
20
10 = 4 (4%)
11 = 0 (0%)
12 = 4 (4%)
15
13 = 6 (6%)
14 = 9 (9%)
10
15 = 11 (11%)
15 = 9 (9%)
16 = 31 (31%)
5
16 = 31 (31%)
5
17 = 18 (18%)
17 = 10 (10%)
18 = 5 (5%)
0
4
5
6
7
8
9
10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
Σχορεσ
18 = 12 (12%)
0
19 = 3 (3%)
4
5
6
7
8
9
20 = 0 (0%)
10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
Σχορεσ
Συµµαρψ
Συµµαρψ
16 − 20 = 57 (57%)
16 − 20 = 67 (67%)
13 − 15 = 27 (27%)
13 − 15 = 24 (24%)
10 − 12 = 10 (10%)
10 − 12 = 8 (8%)
0 − 9 = 6 (6%)
0 − 9 = 1 (1%)
Μεδιαν = 13.00
Μεδιαν = 15.00
ëìí îïð òó õö í÷øùú úûüýþõöÿ
40
19 = 7 (7%)
20 = 7 (7%)
ëìí îïR òó õö þö õÿû úûüýþõöÿ
Ινδιϖιδυαλ
Σχορεσ
Ινδιϖιδυαλ
Σχορεσ
40
4 = 0 (0%)
4 = 1 (1%)
5 = 0 (0%)
5 = 0 (0%)
35
35
6 = 0 (0%)
6 = 0 (0%)
7 = 0 (0%)
7 = 0 (0%)
30
8 = 1 (1%)
9 = 0 (0%)
25
10 = 0 (0%)
11 = 2 (3%)
20
12 = 5 (7%)
13 = 1 (1%)
15
νο. οφ ρετυρνσ
νο. οφ ρετυρνσ
30
8 = 1 (1%)
9 = 0 (0%)
25
10 = 0 (0%)
11 = 1 (1%)
20
12 = 3 (4%)
13 = 4 (5%)
15
14 = 4 (5%)
14 = 6 (8%)
15 = 4 (5%)
10
15 = 10 (14%)
10
16 = 36 (49%)
16 = 36 (49%)
17 = 9 (12%)
5
17 = 5 (7%)
5
18 = 1 (1%)
18 = 3 (4%)
0
19 = 3 (4%)
4
5
6
7
8
9
10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
Σχορεσ
20 = 4 (5%)
0
19 = 4 (5%)
4
5
6
7
8
9
10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
20 = 4 (5%)
Σχορεσ
Συµµαρψ
Συµµαρψ
16 − 20 = 55 (74%)
16 − 20 = 50 (68%)
13 − 15 = 11 (15%)
13 − 15 = 18 (24%)
10 − 12 = 7 (9%)
10 − 12 = 4 (5%)
0 − 9 = 1 (1%)
0 − 9 = 2 (3%)
Μεδιαν = 15.00
Μεδιαν = 14.50
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 13:06 ον Τηυρσδαψ, 23 Αυγυστ, 2012
69
ΑΛΙΜΕΝΤΑΡΨ ΤΡΑΧΤ ΠΑΤΗΟΛΟΓΨ Μοδυλε
Ρυν 98
ΑΝΤΙΒΟ∆ΙΕΣ ΑΝ∆ ΟΤΗΕΡ ΤΕΧΗΝΙΧΑΛ ΠΑΡΑΜΕΤΕΡΣ ΕΜΠΛΟΨΕ∆ ΒΨ ΠΑΡΤΙΧΙΠΑΝΤΣ ΙΝ ΤΗΕ
ΑΛΙΜΕΝΤΑΡΨ ΤΡΑΧΤ ΠΑΤΗΟΛΟΓΨ ΜΟ∆ΥΛΕ
Τηε φολλοωινγ ταβλεσ ρεχορδ τηε νυµβερ οφ παρτιχιπαντσ (Ν) υσινγ εαχη πριµαρψ αντιβοδψ ανδ τηε περχενταγε (%) οφ τηεσε
παρτιχιπαντσ αχηιεϖινγ αχχεπταβλε σταινινγ (α σχορε >12/20) ον ΥΚ ΝΕΘΑΣ σεχτιονσ.
Αλιµενταρψ Τραχτ Πατηολογψ Ρυν: 98
Αλιµενταρψ Τραχτ Πατηολογψ Ρυν: 98
Πριµαρψ Αντιβοδψ : Χ∆117
Πριµαρψ Αντιβοδψ : ∆ΟΓ1
Αντιβοδψ ∆εταιλσ
Χελλ Μαρθυε 117Ρ/Σ−ξξ (ΨΡ145)
∆ακο Α4502 (ρβ πολψ)
∆ιαγνοστιχ Βιοσψστεµσ (ΡΠ63)
Επιτοµιχσ ΑΧ−0029 (ΕΠ10)
Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−Χ∆117 (Τ595)
Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−Λ−Χ∆117 (Τ595)
Νοϖοχαστρα ΡΤΥ−Χ∆117 (Τ595)
ςεντανα 790−2939 (ρβ πολψ)
ςεντανα 790−2951 (9.7)
Αλιµενταρψ Τραχτ Πατηολογψ Ρυν: 98
H
∆ακο ΠΤΛινκ
Λαβ ϖισιον ΠΤ Μοδυλε
Λειχα Βονδ ΙΙΙ ΕΡ1
Λειχα Βονδ ΙΙΙ ΕΡ2
Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ1
Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ2
Μιχροωαϖε Οϖεν
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
Οτηερ
Πρεσσυρε Χοοκερ
ςεντανα Βενκ ΧΧ1 (Μιλδ)
ςεντανα Βενκ ΧΧ1 (Στανδαρδ)
ςεντανα Βενκ ΧΧ1# (8µινσ)
ςεντανα Βενκ ΧΧ2 (µιλδ)
ςεντανα Βενκ ΧΧ2 (Στανδαρδ)
ςεντανα Βενκ ΥΛΤΡΑ ΧΧ1 (Εξτεν.)
ςεντανα Βενκ ΥΛΤΡΑ ΧΧ1 (Μιλδ)
ςεντανα Βενκ ΥΛΤΡΑ ΧΧ1 (Σταν.)
ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Εξτενδεδ)
ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Μιλδ)
ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Στανδαρδ)
ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1# (8µινσ)
Ωατερ βατη 95−98 ΟΧ
Ν
%
2
86
1
1
1
3
1
1
4
100
90
0
100
100
0
0
0
75
C
Αντιβοδψ ∆εταιλσ
Αβχαµ ΤΜΕΜ16Α (αβ53212)
Χελλ Μαρθυε 244Ρ−17/18 (ΣΠ31)
Λειχα ΝΧΛ−Λ−∆ΟΓ−1 (Κ9)
Λειχα ΠΑ0219 (Κ9)
Μεναρινι ΜΠ−385−ΧΜ01/1
Σπρινγ Βιοσχιενχεσ Μ3310 (ρβ πολψ)
Σπρινγ Βιοσχιενχεσ Μ3311 (ΣΠ31)
ςεντανα (ΣΠ31) 760−4590
D
15
3
3
6
9
15
1
7
3
2
10
4
1
0
0
1
2
2
1
6
7
1
0
%
93
67
67
100
78
93
0
14
67
100
100
100
0
0
0
100
100
100
100
100
100
100
0
Ν
Αλιµενταρψ Τραχτ Πατηολογψ Ρυν: 98
12
0
1
6
5
17
0
0
3
2
4
6
0
1
1
1
3
2
1
2
6
0
1
%
92
0
100
100
80
100
0
0
100
100
50
83
0
100
0
100
33
100
100
100
100
0
100
ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
%
1
1
2
54
7
1
1
1
5
Χελλ Μαρθυε 244Ρ−14/15/16 (ΣΠ31)
E
Ν
Ν
100
100
100
89
100
100
100
100
80
C
D
Ν
%
Ν
%
1
42
100
81
1
30
100
90
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 13:06 ον Τηυρσδαψ, 23 Αυγυστ, 2012
70
ΑΛΙΜΕΝΤΑΡΨ ΤΡΑΧΤ ΠΑΤΗΟΛΟΓΨ Μοδυλε
Ρυν 98
Αλιµενταρψ Τραχτ Πατηολογψ Ρυν: 98
Αλιµενταρψ Τραχτ Πατηολογψ Ρυν: 98
Χηροµογεν
! "#$
Ν
ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ
ΒιοΓενεξ ΣΣ Πολψµερ (Θ∆ 420−ΨΙΚΕ)
ΒιοΓενεξ ΣΣ Πολψµερ (Θ∆ 430−ΞΑΚΕ)
∆ακο Ενςισιον ΦΛΕΞ ( Κ8000/10)
∆ακο Ενςισιον ΦΛΕΞ+ ( Κ8002/12)
∆ακο Ενϖισιον ΗΡΠ/∆ΑΒ ( Κ5007)
Λαβςισιον Υλτραςισιον ΟΝΕ Πολψµερ ( ΤΛ−012/5−Η∆ϑ/Τ
Λειχα Βονδ Πολψµερ Ρεφινε (∆Σ9800)
ΜεναΠατη Ξ−Χελλ Πλυσ (ΜΠ−ΞΧΠ)
Νονε
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
Οτηερ
Ποωερ ςισιον ∆ΠςΒ999 ΗΡΠ
ςεχτορ Ελιτε ΑΒΧ Κιτ (ΠΚ−7200)
ςεντανα ιςιεω σψστεµ (760−091)
ςεντανα Οπτιςιεω Κιτ (760−700)
ςεντανα Υλτραςιεω Κιτ (760−500)
6
0
1
2
10
1
1
30
1
1
1
2
1
1
4
4
29
%
Ν
83
0
100
100
80
100
0
83
0
100
0
100
0
0
100
100
90
9
1
0
0
8
1
0
23
1
0
1
2
1
0
3
4
20
%
ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ
ΒιοΓενεξ Λιθυιδ ∆ΑΒ (ΗΚ153−5Κ)
ΒιοΓενεξ λιθυιδ ∆ΒΑ (ΗΚ−124−7Κ)
∆ακο ∆ΑΒ+ Λιθυιδ (Κ3468)
∆ακο Ενςισιον Πλυσ κιτσ
∆ακο ΦΛΕΞ ∆ΑΒ
∆ακο ΡΕΑΛ Ενςισιον Κ5007 ∆ΑΒ
Λαβςισιον ∆ΑΒ
µεναπατη ξχελλ κιτ ∆ΑΒ (ΜΠ−860)
Οτηερ
Σιγµα ∆ΑΒ (∆5637)
ςΒΣ Βονδ Πολψµερ Ρεφινε κιτ (∆Σ9800)
ςεντανα ∆ΑΒ
ςεντανα ιϖιεω
ςεντανα Υλτραϖιεω ∆ΑΒ
89
100
0
0
88
100
0
100
100
0
0
50
100
0
67
100
85
Ν
%
Ν
%
16
1
0
1
2
12
1
1
1
3
1
24
1
4
32
75
100
0
0
50
92
100
0
0
100
0
92
100
100
88
11
0
1
0
2
8
1
0
1
3
1
21
1
3
21
82
0
100
0
100
88
100
0
100
100
100
100
100
67
81
Αλιµενταρψ Τραχτ Πατηολογψ Ρυν: 98
Αυτοµατιον
ΒιοΓενεξ ΓενοΜΞ 6000ι
∆ακο Αυτοσταινερ
∆ακο Αυτοσταινερ Λινκ 48
∆ακο Αυτοσταινερ πλυσ
∆ακο Αυτοσταινερ Πλυσ Λινκ
Λαβςισιον Αυτοσταινερ
Λειχα Βονδ Μαξ
Λειχα Βονδ−ΙΙΙ
Μεναρινι − Ιντελλιπατη ΦΛΞ
Νονε (Μανυαλ)
Οτηερ
ςεντανα Βενχηµαρκ
ςεντανα Βενχηµαρκ ΥΛΤΡΑ
ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ
Ν
%
Ν
%
1
3
11
1
4
2
25
10
1
1
1
3
8
28
100
100
91
100
75
0
80
90
0
0
100
100
88
89
1
1
7
1
4
0
21
8
1
1
1
1
8
19
100
100
86
100
100
0
95
100
100
100
0
100
75
84
B>?@ A>@FGI? J KLNO ?PQSOQTO USPVWLOX
Α σελεχτιον φροµ ϕυστ α φεω οφ τηε βεστ µετηοδσ εµπλοψεδ βψ παρτιχιπαντσ
7889 : ; <#= 8
Παρτιχιπαντ σχορεδ 19/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 17/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
∆ακο Α4502 (ρβ πολψ) , 30 Μινσ, ΡΤ ≡Χ
Αυτοµατιον:
∆ακο Αυτοσταινερ Λινκ 48
∆ιλυτιον 1: 600
M%&'()*
∆ακο ΦΛΕΞ+ κιτ
M+,- ./00%1*
ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ
2M34*
∆ακο ΠΤΛινκ, Βυφφερ: ΤΑΡΓΕΤ ΡΕΤΡΙΕςΑΛ ΣΟΛΥΤΙΟΝ, ΠΗ: 9
ΕΑΡ:
Χηροµογεν:
ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ, ΡΤ ≡Χ., Τιµε 1: 10 Μινσ, Τιµε 2: 10 Μινσ
5%&%6&,(-*
∆ακο Ενςισιον ΦΛΕΞ+ ( Κ8002/12) , 20 Μινσ, ΡΤ ≡Χ Πρεδιλυτεδ
7889 : ; <#= Y
Παρτιχιπαντ σχορεδ 17/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 19/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
Επιτοµιχσ ΑΧ−0029 (ΕΠ10) , 25 Μινσ, 22 ≡Χ
Αυτοµατιον:
Λειχα Βονδ Μαξ
M%&'()*
ςΒΣ ΒονδΜΑξ Ρεφινε ΚΙΤ
M+,- ./00%1*
Βονδ Ωαση Βυφφερ (ΑΡ9590)
2M34*
Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ2
∆ιλυτιον 1: 100
ΕΑΡ:
Χηροµογεν:
ςΒΣ Βονδ Πολψµερ Ρεφινε κιτ (∆Σ9800), 22 ≡Χ., Τιµε 2: 10 Μινσ
5%&%6&,(-*
Λειχα Βονδ Πολψµερ Ρεφινε (∆Σ9800) , 15 Μινσ, 22 ≡Χ Πρεδιλυτεδ
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 13:06 ον Τηυρσδαψ, 23 Αυγυστ, 2012
71
ΑΛΙΜΕΝΤΑΡΨ ΤΡΑΧΤ ΠΑΤΗΟΛΟΓΨ Μοδυλε
Ρυν 98
Z[\\] ^ _`abcd e
Παρτιχιπαντ σχορεδ 18/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 20/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
∆ακο Α4502 (ρβ πολψ) , 30 Μινσ, 20 ≡Χ
Αυτοµατιον:
∆ακο Αυτοσταινερ Πλυσ Λινκ
∆ιλυτιον 1: 200
Μετηοδ:
∆ακο ΦΛΕΞ+ κιτ
Μαιν Βυφφερ:
∆ακο ΦΛΕΞ ωαση βυφφερ, ΠΗ: 7.6
ΗΜΑΡ:
∆ακο ΠΤΛινκ, Βυφφερ: ΗΙΓΗ ΠΗ ΤΡΣ, ΠΗ: 9
ΕΑΡ:
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
Χηροµογεν:
∆ακο ΦΛΕΞ ∆ΑΒ, 20 ≡Χ., Τιµε 1: 10 Μινσ, Τιµε 2: 10 Μινσ
∆ετεχτιον:
Νονε
Z[\\] ^ _`abcd y
Παρτιχιπαντ σχορεδ 17/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 18/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
Χελλ Μαρθυε 117Ρ/Σ−ξξ (ΨΡ145) , 30 Μινσ, 20 ≡Χ Πρεδιλυτεδ
Αυτοµατιον:
Λειχα Βονδ Μαξ
fghijkl
ςΒΣ ΒονδΜΑξ Ρεφινε ΚΙΤ
fmno pqrrgsl
Βονδ Ωαση Βυφφερ (ΑΡ9590)
tfuvl
Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ1
ΕΑΡ:
ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ
Χηροµογεν:
ςΒΣ Βονδ Πολψµερ Ρεφινε κιτ (∆Σ9800), 20 ≡Χ., Τιµε 1: 10 Μινσ, Τιµε 2: 5 Μινσ
wghgxhnjol
Λειχα Βονδ Πολψµερ Ρεφινε (∆Σ9800) , 15 Μινσ, 20 ≡Χ
|}~ €}‚ƒ~ „ ~…†‡ˆ‰Š‹Œ ˆŽ‡‰Œ
Α σελεχτιον φροµ ϕυστ α φεω οφ τηε βεστ µετηοδσ εµπλοψεδ βψ παρτιχιπαντσ
[z{\ ^ _`abcd \
Παρτιχιπαντ σχορεδ 20/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 17/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
Λειχα ΝΧΛ−Λ−∆ΟΓ−1 (Κ9) , 32 Μινσ, 37 ≡Χ
Αυτοµατιον:
ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ
fghijkl
ςεντανα Υλτραςιεω ∆ΑΒ
fmno pqrrgsl
ςεντανα ρεαχτιον βυφφερ (950−300)
tfuvl
ςεντανα Βενκ ΧΧ1 (Στανδαρδ)
∆ιλυτιον 1: 1/40
ΕΑΡ:
Χηροµογεν:
ςεντανα Υλτραϖιεω ∆ΑΒ
wghgxhnjol
ςεντανα Υλτραςιεω Κιτ (760−500)
Πρεδιλυτεδ
[z{\ ^ _`abcd ‘
Παρτιχιπαντ σχορεδ 20/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 16/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
Λειχα ΠΑ0219 (Κ9) , 25 Μινσ, 22 ≡Χ Πρεδιλυτεδ
Αυτοµατιον:
Λειχα Βονδ Μαξ
fghijkl
ςΒΣ ΒονδΜΑξ Ρεφινε ΚΙΤ
fmno pqrrgsl
Βονδ Ωαση Βυφφερ (ΑΡ9590)
tfuvl
Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ2
ΕΑΡ:
Χηροµογεν:
ςΒΣ Βονδ Πολψµερ Ρεφινε κιτ (∆Σ9800), 22 ≡Χ., Τιµε 2: 10 Μινσ
wghgxhnjol
Λειχα Βονδ Πολψµερ Ρεφινε (∆Σ9800) , 15 Μινσ, 22 ≡Χ Πρεδιλυτεδ
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 13:06 ον Τηυρσδαψ, 23 Αυγυστ, 2012
72
ΑΛΙΜΕΝΤΑΡΨ ΤΡΑΧΤ ΠΑΤΗΟΛΟΓΨ Μοδυλε
Ρυν 98
∆ΟΓ1 − Μετηοδ 3
Παρτιχιπαντ σχορεδ 17/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 17/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
Λειχα ΝΧΛ−Λ−∆ΟΓ−1 (Κ9) , 15 Μινσ, 37 ≡Χ
Αυτοµατιον:
Λειχα Βονδ−ΙΙΙ
Μετηοδ:
ςΒΣ ΒονδΜΑξ Ρεφινε ΚΙΤ
Μαιν Βυφφερ:
Βονδ Ωαση Βυφφερ (ΑΡ9590)
ΗΜΑΡ:
Λειχα Βονδ ΙΙΙ ΕΡ2
∆ιλυτιον 1: 100
ΕΑΡ:
Χηροµογεν:
ςΒΣ Βονδ Πολψµερ Ρεφινε κιτ (∆Σ9800)
∆ετεχτιον:
Λειχα Βονδ Πολψµερ Ρεφινε (∆Σ9800) , 8 Μινσ, ΡΤ ≡Χ Πρεδιλυτεδ
∆ΟΓ1 − Μετηοδ 4
Παρτιχιπαντ σχορεδ 19/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 15/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ.
Πριµαρψ Αντιβοδψ:
ςεντανα (ΣΠ31) 760−4590 , 32 Μινσ
Αυτοµατιον:
ςεντανα Βενχηµαρκ ΥΛΤΡΑ
Μετηοδ:
ςεντανα Υλτραςιεω ∆ΑΒ
Μαιν Βυφφερ:
ςεντανα ρεαχτιον βυφφερ (950−300)
ΗΜΑΡ:
ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Στανδαρδ)
ΕΑΡ:
Χηροµογεν:
ςεντανα Υλτραϖιεω ∆ΑΒ
∆ετεχτιον:
ςεντανα Υλτραςιεω Κιτ (760−500)
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 13:06 ον Τηυρσδαψ, 23 Αυγυστ, 2012
73
74
The HER2 ISH Module - Interpretive
Run 27
Merdol Ibrahim, Suzanne Parry and 9 Reference Centres
Gene Assessed:
HER2
Sections circulated:
Composite block containing 4 breast tissue sections (see below)
Number of Registered Participants:
176
The Summary Box below gives details of the HER2 phenotype and genotype of the cell lines circulated for these
assessments, which comprised of formalin fixed and paraffin processed sections from a composite block of four
human breast carcinomas.
Tissue
Section
HER2 status by
IHC1
HER2 status by FISH2
A
3+
Amplified
B
3+
Amplified
C
1+
Not amplified
D
1+
Not amplified
AN IMPORTANT NOTE ABOUT THE TYPES OF PREPARATIONS WHICH ARE ASSESSED IN THIS MODULE
Although this module has been up until this time entitled HER2 FISH, the organizers would like to make it clear that the
submission of results from slides stained using chromogenic in-situ hybridisation (CISH) and silver in-situhybridisation (SISH) are equally acceptable, and are welcomed. Copy number data produced from slides stained using
this approach will be assessed in a similar way to that produced by single colour FISH users i.e. against the copy number
data produced by the reference centres.
Tissue Section Positioning:
Tissue sections are positioned on microscope slides, as illustrated below. Any variation in this
pattern is indicated on distribution of the slides
Slide
Label
A
B
C
D
Introduction
Recommendations
After successful conclusion of the pilot phase we are pleased to
announce that this is now a full UK NEQAS module. The results
of the first pilot and a three year follow-up have now been
published[1,2]. Furthermore, the scheme has allowed multiple
‘ring studies’ to be undertaken and have allowed new
methodologies, for example the Ventana silver ISH (SISH)[3],
Kreatech FISH probes[4] and the Ventana Dual ISH (BDISH)[5] to
be analysed. With the growing importance of colourimetric
assays, both chromogenic and silver based in situ detection
systems, the scheme has changed from a FISH to an ISH
based scheme, where all molecular in situ assays for HER2
gene copy/amplification determination are included. This move
reflects an on-going development in chromogenic assay
systems which it is envisaged will lead to a wider uptake of
these assays within the diagnostic community. For UK
laboratories
carrying out diagnostic HER2 ISH testing
participation is therefore mandatory under Clinical Pathology
Accreditation (UK), and National Quality Assurance Advisory
Panel (NQAAP) regulations. It should also be emphasised that
the scheme remains very-much open to non-UK laboratories as
an aid to monitoring and improving performance.
Diagnostic testing recommendations for HER2 ISH was
originally published by Walker et at [6] but a more recent
publication covering recommendations for both breast and
gastric in-situ hybridisation methods is now available[7].
Assessment of Slides (rationale behind the
adopted scoring system)
Cell lines were selected to cover diagnostic intervals for the
HER2 FISH test, where gene amplification is recognised if the
ratio of HER2 signals to Chromosome 17 signals exceeds 2.0.
Previous evidence suggests that inter-observer error in scoring
FISH signals can be controlled within 10% for both HER2 and
other solid tissue analyses (Bartlett et al., 2001, Bartlett, 2005
for review). This results in a small population of cases (<2.0% of
cases, unpublished observations; FISH used as frontline test)
where the result reported lies within a 10% range of the
diagnostic interval, i.e. between 1.80 and 2.20. Whilst this
compares favourably with the approximately 15% of cases
reported as borderline by immunohistochemistry it highlights the
need to rigorously control scoring approaches. Data suggest
that allowing variation to increase by 5% (to 15%) would double
the number of equivocal cases (to 4%) and allowing an increase
© UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent
75
The HER2 ISH Module - Interpretive
Run 27
How the scoring system works
Schematic representation of the scoring system; the example illustrated uses the Reference Centre set of HER2/Ch17 ratios obtained
for the SK-BR3 (3+ Amplified) cell line at run 4. In this case the lowest ratio obtained by a Reference Centre was 3.19, and the
highest 4.10; participants submitting ratios within this range were judged to have achieved an appropriate result (score = 3). The
lower cut-off for acceptable ratios (score = 2) was calculated as 3.19 minus 10% of 3.19, that is 2.87; and the upper cut-off was
calculated as 4.10 plus 10% of 4.10, that is 4.51. Participants who submitted ratios out-with these 10% cut-offs were judged to have
achieved an inappropriate and received a score of 1. Except in the case of the MDA-MB-453 cell line, misdiagnosis (amplified
reported as non-amplified, and visa versa) resulted in a score of 0. Superscript notation and abbreviation used in figure: * = does not
apply to results obtained for MDA-MB-453 (2+ Borderline: Amplified to Non-Amplified) cell line; RC = Reference Centre.
to 20% variation at the diagnostic interval would lead to a fourfold increase in equivocal cases (Bartlett unpublished
observations). These observations underpin the approach taken
in assessing participants results.
For each tissue section, participants scored 3 points if the result
reported fell within the range observed by the reference
laboratories. These reference laboratory results already reflect
the acceptable observer variation of 10% for inter-observer
variation in scoring discussed above since they are collated
from seven different laboratories, each of which presents two
scores (up to 14 observations per cell line per assessment).
Thus results must fall within this range to be regarded as
appropriate.
For each tissue section, participants scored 2 points if results
lay within a further 10% of the range of results observed by the
reference centres. These results reflect a band approximating to
the 20% variation described above. Such results reflect
acceptable performance with the potential for improvement.
For results, which lay out with this second band of variation one
point was given, representing inappropriate performance. For
such specimens it is important to note that despite the correct
diagnosis being given in many cases, a degree of variation
>20% from the accepted result is indicative of a high degree of
potential for error in diagnosis. In cases where results were not
only deviating to this degree from the accepted result but were
also misdiagnosed (e.g. where a non-amplified case is reported
as amplified) a score of 0 was recorded in recognition of the
negative impact this has on the laboratories likely performance
on diagnostic samples.
2. Bartlett JM, Ibrahim M, Jasani B, Morgan JM, Ellis I, Kay E, Connolly Y,
Campbell F, O'Grady A, Barnett S, Miller K. (2009) External quality assurance
of HER2 FISH and ISH testing: three years of the UK national external quality
assurance scheme. Am J Clin Pathol; 131:106-11.
3. Bartlett JM, Campbell FM, Ibrahim M, Wencyk P, Ellis I, Kay E, Connolly Y,
O'Grady A, Di Palma S, Starczynski J, Morgan JM, Jasani B, Miller K. (2009)
Chromogenic in situ hybridization: a multicenter study comparing silver in situ
hybridization with FISH. Am J Clin Pathol; 132: 514-520.
4. Bartlett JM, Campbell FM, Ibrahim M, Thomas J, Wencyk P, Ellis I, Kay E,
Connolly Y, O'Grady A, Barnett S, Starczynski J, Cunningham P, Miller K.
(2010) A UK NEQAS ICC and ISH multicentre study using the Kreatech
Poseidon HER2 FISH probe: intersite variation can be rigorously controlled
using FISH. Histopathology; 56:297-304.
5. Bartlett JM, Campbell FM, Ibrahim M, O'Grady A, Kay E, Faulkes C, Collins N,
Starczynski J, Morgan JM, Jasani B, Miller K. (2011) A UK NEQAS ISH
multicenter ring study using the Ventana HER2 dual-color ISH assay. Am J Clin
Pathol; 135:157-162.
6. Walker RA, Bartlett JM, Dowsett M, Ellis IO, Hanby AM, Jasani B, M i l l e r
K,
Pinder SE. (2008) HER2 testing in the UK: further update to recommendations.
J Clin Pathol;61818-824.
7. Bartlett JM, Starczynski J, Atkey N, Kay E, O'Grady A, Gandy M, Ibrahim M,
Jasani B, Ellis IO, Pinder SE, Walker RA. (2011) HER2 testing in the UK:
recommendations for breast and gastric in-situ hybridisation methods. J Clin
Pathol; 64: 649-653.
References
1. Bartlett JMS, Ibrahim M, Jasani B, et al. (2007) External quality assurance of
HER2 FISH testing: Results of a UK NEQAS pilot scheme. J Clin Pathol; 60:816
-819
© UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent
76
ΙΣΗ Μοδυλε
Ρυν 27
’“” •– —˜’™• š›— ™ œ žŸ ¡¢£¢¤Ÿ¥¡¦
’“” •– —˜’™• š›— ™ “§ Ÿ¨¦ ©¥ª
Ινδιϖιδυαλ
Σχορεσ
40
4 = 1 (1%)
4 = 1 (2%)
5 = 0 (0%)
35
5 = 0 (0%)
12
6 = 1 (1%)
6 = 0 (0%)
7 = 3 (2%)
30
7 = 1 (2%)
10
νο. οφ ρετυρνσ
8 = 14 (11%)
νο. οφ ρετυρνσ
Ινδιϖιδυαλ
Σχορεσ
14
9 = 11 (9%)
25
10 = 29 (24%)
11 = 24 (20%)
20
12 = 40 (33%)
15
Συµµαρψ
10
8 = 3 (7%)
9 = 5 (12%)
10 = 10 (24%)
8
11 = 9 (21%)
12 = 13 (31%)
6
Συµµαρψ
4
12 − 12 = 40 (33%)
12 − 12 = 13 (31%)
9 − 11 = 64 (52%)
5
9 − 11 = 24 (57%)
2
4 − 8 = 19 (15%)
4 − 8 = 5 (12%)
Μεδιαν = 11.00
0
4
5
6
7
8
9
10
11
Μεδιαν = 11.00
0
12
4
5
6
7
8
9
10
11
12
Σχορεσ
Σχορεσ
’“” •– «¬¡­©® ˜¯¤©ª¬® ™ œ žŸ ¡¢£¢¤Ÿ¥¡¦ ¨ª ž¬ £¬¥¡Ÿ°¬ ©± žŸ ¡¢£¢¤Ÿ¥¡¦
100
100
90
100
100
90
83
81
80
78
80
70
58
60
60
50
50
50
42
40
40
33
30
30
25
19
20
9
10
0
1
0
1
0
Χοπψ Νο.:
ςεντανα
Ινφορµ
Χοπψ Νο.:
Ζψµεδ /
Ινϖιτρογεν:
σποτ−λιγητ
% Πασσ Ρατε
70
% οφ Παρτιχιπαντσ
100
3
20
7
4
3
2
Ρατιο:
Κρεατεχη
Προβεσ
Ρατιο: Λειχα
ΗΕΡ2 ΦΙΣΗ
ΤΑ9217
Ρατιο: Οτηερ
5
10
4
0
Ρατιο: ∆ακο
∆υοΧΙΣΗ
Ρατιο: ∆ακο
Πηαρµ ∆ξ
Ρατιο:
Πατηϖψσιον
ςψσισ Κιτ
Ρατιο: ςεντανα Ρατιο: ςεντανα Ρατιο: ςεντανα
Ινφορµ ΣΙΣΗ
Ινφορµ ∆υαλ
∆υαλ ΙΣΗ
ΙΣΗ 780−4422
(Β∆ΙΣΗ)
(∆∆ΙΣΗ)
Ρατιο:
Ζψτοϖισιον
ΖψτοΛιγητ
’“” •– «¬¡­©® ˜¯¤©ª¬® ™ “§ ²Ÿ¨¦ ©¥ª ¨ª ž¬ £¬¥¡Ÿ°¬ ©± žŸ ¡¢£¢¤Ÿ¥¡¦
100
100
100
100
100
100
89
90
90
80
70
70
67
60
60
50
50
50
50
43
40
40
30
30
24
20
20
12
10
0
Χοπψ Νο.: Ζψµεδ /
Ινϖιτρογεν:
σποτ−λιγητ
7
5
2
0
2
2
10
2
0
Ρατιο: ∆ακο Πηαρµ
∆ξ
Ρατιο: Κρεατεχη
Προβεσ
Ρατιο: Λειχα ΗΕΡ2
ΦΙΣΗ ΤΑ9217
Ρατιο: Πατηϖψσιον
ςψσισ Κιτ
Ρατιο: ςεντανα ∆υαλ
ΙΣΗ (Β∆ΙΣΗ)
Ρατιο: ςεντανα
Ινφορµ ∆υαλ ΙΣΗ
780−4422 (∆∆ΙΣΗ)
Ρατιο: ςεντανα
Ινφορµ ΣΙΣΗ
Ρατιο: Ζψτοϖισιον
ΖψτοΛιγητ
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 13:07 ον Τηυρσδαψ, 23 Αυγυστ, 2012
77
% Πασσ Ρατε
% οφ Παρτιχιπαντσ
80
ΙΣΗ Μοδυλε
Ρυν 27
³´µ ¶· ¸¹º»¼½ ¾¿ÀÁ¼Â¹½ à ÄÁÁ ÅÆǺÈÉÈÀÆÊºË Ì µÍ¿Ì¹Ç ¼Î ÅÆǺÈÉÈÀÆʺË
100
100
90
100
100
90
83
81
80
78
80
70
70
58
60
60
53
50
50
40
50
40
33
30
25
30
24
20
20
12
10
0
% Πασσ Ρατε
Νυµβερ οφ Παρτιχιπαντσ
100
1
0
1
0
Χοπψ Νο.:
ςεντανα
Ινφορµ
Χοπψ Νο.:
Ζψµεδ /
Ινϖιτρογεν:
σποτ−λιγητ
4
9
5
4
3
Ρατιο:
Κρεατεχη
Προβεσ
Ρατιο: Λειχα
ΗΕΡ2 ΦΙΣΗ
ΤΑ9217
Ρατιο: Οτηερ
6
10
5
0
Ρατιο: ∆ακο
∆υοΧΙΣΗ
Ρατιο: ∆ακο
Πηαρµ ∆ξ
Ρατιο:
Πατηϖψσιον
ςψσισ Κιτ
Ρατιο: ςεντανα Ρατιο: ςεντανα Ρατιο: ςεντανα
Ινφορµ ΣΙΣΗ
∆υαλ ΙΣΗ
Ινφορµ ∆υαλ
(Β∆ΙΣΗ)
ΙΣΗ 780−4422
(∆∆ΙΣΗ)
Ρατιο:
Ζψτοϖισιον
ΖψτοΛιγητ
³´µ ¶· ¸¹º»¼½ ¾¿ÀÁ¼Â¹½ à ´Ï ÐÆÌË ¼ÊÁ Ì µÍ¿Ì¹Ç ¼Î ÅÆǺÈÉÈÀÆʺË
100
100
100
100
100
100
89
90
90
80
70
70
67
60
60
50
50
50
50
40
40
30
30
18
20
10
0
20
10
1
0
2
Χοπψ Νο.: Ζψµεδ /
Ινϖιτρογεν: σποτ−λιγητ
Ρατιο: ∆ακο Πηαρµ
∆ξ
5
1
10
3
1
1
0
Ρατιο: Κρεατεχη
Προβεσ
Ρατιο: Λειχα ΗΕΡ2
ΦΙΣΗ ΤΑ9217
Ρατιο: Πατηϖψσιον
ςψσισ Κιτ
Ρατιο: ςεντανα ∆υαλ
ΙΣΗ (Β∆ΙΣΗ)
Ρατιο: ςεντανα
Ινφορµ ∆υαλ ΙΣΗ
780−4422 (∆∆ΙΣΗ)
Ρατιο: ςεντανα
Ινφορµ ΣΙΣΗ
Ρατιο: Ζψτοϖισιον
ΖψτοΛιγητ
♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ
Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον.
Πριντεδ ατ 13:07 ον Τηυρσδαψ, 23 Αυγυστ, 2012
78
% Πασσ Ρατε
Νυµβερ οφ Παρτιχιπαντσ
80
The HER2 ISH Module - Technical (pilot)
Run 27
Merdol Ibrahim, Suzanne Parry and 9 Reference Centres
Gene Assessed:
HER2 ISH
Sections circulated:
Composite slide consisting of 4 breast tumours with differing levels of
HER2 expression (see table below)
Number of Participants Taking Part
105 (45 Chromogenic & 60 Fluorescent)
The Summary Box below gives details of the HER2 phenotype and genotype of the cell lines circulated for these
assessments, which comprised of formalin fixed and paraffin processed sections from a composite block of four
human breast carcinomas.
Tissue
Section
HER2 status by
IHC1
HER2 status by FISH2
A
3+
Amplified
B
3+
Amplified
C
1+
Not amplified
D
1+
Not amplified
Tissue Section Positioning:
Tissue sections are positioned on microscope slides, as illustrated below. Any variation in this
pattern is indicated on distribution of the slides
Slide
Label
A
B
C
D
CEP17 and HER 2 copy numbers (e.g. Ventana/Roche SISH),
then the assessors regard this as a single result, and as such,
Chromogen ISH (CISH / SISH / BDISH / DDISH etc.) was combined comments are placed in a single results column.
assessed around a multi-header microscope with each slide
being assessed by 4 independent assessors each providing Results Summary
overall scores out of 5 for the slide as a whole (not the individual
tissue samples) . The scores are added together to give a score CISH Results
out of 20, along with an overall pass rate comment.
Selected images showing the acceptable and unacceptable
levels of staining for the different methods are illustrated in
Fluorescent ISH (FISH) was assessed by a single assessor figures 5-35.
from one of the UK NEQAS reference centres and given a score
out of 20 for the slide as a whole (not the individual tissue Overall the CISH staining appeared to be of better quality this
samples), along with an overall pass rate comment.
time round with an increase in acceptable scores. Participants
showed an overall acceptable rate of 60% (27/45), which was
A summary of the assessment scoring criteria and it’s up by 23% from the previous assessment, accompanied by a
interpretation is shown on the next page
decrease in borderline results to 20% compared to 37% from
the previous assessment. And the unacceptable rates fell by 7%
Each of the UK NEQAS tissues (A,B,C,D) (as well as in-house this time round to 20% compared to 27% from the previous
samples where submitted) are individually assessed for the assessment. (See Fig 1). The main CISH method of choice was
quality of ISH staining for each NEQAS tissue section (or the Ventana Dual ISH with 29/45 (64%) participants using this
control tissue if in-house samples were submitted) and scored kit (See Figure 2).
according to the criteria shown in the table below.
Assessors do not count the HER2/CEP17 signals. The The improvement in pass rates was also reflected in the inaccuracy of signal enumeration is assessed in the 'interpretive' house control material submitted by participants, with the data
section of the HER2 ISH module.
showing an overall increase in acceptable rate of 52%
compared to 21% from the previous assessment. In parallel,
Important: If two separate slides are submitted with separate there was a decrease in unacceptable rates to 16% for this run
Assessment Procedure
© UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent
79
The HER2 ISH Module - Technical (pilot)
Run 27
Table below shows a summary of the assessment scoring criteria and interpretation.
Individual
Assessor
Score
Combined
Assessor Scores &
Results
0
0
1&2
4-9 = Unacceptable
3
10-12 = Borderline
4&5
13-15 = Acceptable
16-20 = Acceptable
(Gold standard)
Score Interpretation
Slide not submitted for assessment
The cell line/s and/or in-house tissue is unacceptable for interpretation with
at least 3 out of the 4 assessors indicating that there are hybridisation
issues, which could be due to:
Excessive / Weak Nuclear staining
Poor probe hybridisation
Missing Her2 copy no. / CEP 17
Excessive background staining
Please also see assessor comments on your report
The cell line/s and/or in-house tissue is borderline interpretable with 2 out of
the 4 assessors indicating that improvements can be made with respect for
example:
Excessive / Weak Nuclear staining
Level of probe hybridisation
Excessive background staining
Please also see assessor comments on your report
The cell line/s and/or in-house tissue show a good/very good standard of
staining and are suitable for interpretive analyses.
compared to 42% from the previous run. Of the 16% of
participants who also submitted a ‘kit control’ 57% of these
achieved an acceptable rate and the rest (43%) were all
borderline.
compared to 22% in the previous run. The next most popular
method was the Dako Pharm DX showing an acceptable rate
of 67%, which was a great improvement on the acceptable
rate of 14% for the previous run. However, the number of
labs using this method is still quite low (n=6).
The data shows an encouraging overall improvement,
however, it is still apparent that many participants still need Comparing CISH and FISH Methods
to optimise their methodology to allow for more accurate Both CISH and FISH results improved significantly during
clinical interpretation.
this assessment and we hope that this was due to the
recommendations provided (see below). However, it is still
Note that although percentage pass rates are shown, the advisable not to over-compare these results until further data
number of participants using certain methods are overall is gathered from forthcoming assessments.
quite low, n=1 for some methods.
IMPORTANT
Selected images showing the acceptable and unacceptable Recommendations for Returning FISH Slides
levels of staining for the different methods are illustrated in for NEQAS Assessments
FISH Results
figures 25-35.
a. Section should be mounted using a fluorescence antifade
Overall FISH pass rates showed a marked increase of 70%
mounting media, which prevents loss/quenching of
(42/60) compared to 51% from the previous assessment,
fluorescence e.g. Vectashield (Vector labs), Dako
with a drop in the unacceptable rate from 25% to 20%. InFluorescence Mounting Medium (Dako), Fluoromount
house control material showed a similar pass rate to the
(SIGMA/Aldrich, VWR). Note: The Abbott Vysis kit already
previous run; 68% to 69% during this assessment. This is
contains DAPI in phenylenediamine dihydrochloride,
much the same for the unacceptable in-house scores, which
which is an anti fading reagent, but we have found that
increased slightly to 11% from 10%, as seen in the previous
some laboratories also used the above mentioned
assessment. Only 12% of participants submitted a kit control,
mounting media.
and of these there was an
increased unacceptable rate of b. Seal the coverslip edges onto the slide using clear varnish
29% compared to the previous run of only 8%. (see Figure
or another sealing agent, which will stop the slide from
3).
drying out.
c. Send back FISH slides as soon as you have finished your
The FISH methodologies used and respective pass rates are
own interpretation.
illustrated in Figure 4. Of the methods submitted the d. There is no need to send back slides packed in ice/dry
Pathvysion Vysis kit remains the method of choice, used by
ice. Please return in the slide mailer that is provided.
68% of participants. This time round the Vysis kit showed a
slightly higher acceptable rate of 63% compared to the
previous assessment of 57%. However, the unacceptable
rate still needs improving, and actually increased to 29%
© UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent
80
The HER2 ISH Module - Technical (pilot)
Run 27
Fig. 1 Chromogen ISH Overall Pass Rates
Fig. 2 Chromogen ISH: Pass Rate Related to Methods
45 Participants submitted slides for the CISH technical assessments of which 31 (69%) submitted an in-house control
and 7 (16%) submitted a kit control (e.g. xenograft or cell line controls within kits).
© UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent
81
The HER2 ISH Module - Technical (pilot)
Run 27
Fig. 3 Fluorescent ISH Overall Pass Rates
Fig. 4 Fluorescent ISH Pass Rate Related to Methods
There were 60 submissions for NEQAS cell line FISH slides, of which 35 (58%) submitted an in-house control and 7
(12%) submitted kit control slides .
© UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent
82
The HER2 ISH Module - Technical (pilot)
Run 27
How to Use this Report to Compare NEQAS Cell Line ‘Technical’ & ‘Interpretive’ Results:
Once you have your results for both the ‘Interpretive’ and ‘Technical’ HER2 ISH modules, use both results to troubleshoot
whether there are interpretive and/or technical issues with your ISH methodology.
The table below shows a brief troubleshooting guide, which we hope will assistant you further.
UK NEQAS ICC & ISH recommends that laboratories should continually monitor their performance to make sure that both
technical and interpretive results are frequently audited.
Interpretive & Technical Troubleshooting Guide
Interpretive
Result
Appropriate or
Acceptable
Unacceptable
Technical
Result
(pre-pilot module)
Acceptable
Acceptable
Appropriate or
Acceptable
Borderline
Unacceptable
Borderline
Appropriate or
Acceptable
Unacceptable
Unacceptable
Unacceptable
The cell lines show a good standard of staining and have been interpreted
correctly
The cell lines show a good standard of staining BUT there appears to be
issues with interpretation i.e. HER2 copy number and/or CEP17
overestimated/underestimated.
Recommend that scoring/counting criteria is reviewed
The cell lines are of borderline acceptability for staining quality.
Recommend that technical method (kit/assay) is further optimised.
The technical staining can be improved as this may be effecting
interpretation.
Recommend that technical method (kit/assay) is optimised (or where
relevant a standardised kit is used as per instructions) as
interpretation may be effected by the borderline quality of staining.
The cell lines are unacceptable for interpretation and caution should be
taken when interpreting from these slides.
Recommend that technical method (kit/assay) is optimised (or where
relevant a standardised kit is used as per instructions) as
interpretation, although appears correct, may lead to incorrect
interpretation of clinical cases
The cell lines are unacceptable for technical staining and interpretation.
Reporting from such cases is very likely to lead to incorrect
interpretation of clinical cases.
If there is persistent underperformance:
- seek assistance from kit/assay manufacturer
- seek assistance from UK NEQAS or colleagues
- re-validate protocol (retrospectively and prospectively)
- review scoring criteria
- send clinical cases to a reference centre to confirm your results
© UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent
83
The HER2 ISH Module - Technical (pilot)
Run 27
Selected CHROMOGEN Based Images From Assessed slides
Ventana DDISH & BDISH
Fig 5. Excellent standard of staining in
the UK NEQAS amplified section A.
The distinct HER2 signals (black) and
Ch17 signals (red) are clearly
demonstrated. The HER2 copy no.
signals appear as large and small
clusters (DDISH).
Fig 6. Excellent standard of staining in
the UK NEQAS amplified section B,
showing distinct HER2 signals (black)
and Ch17 signals (red). The HER2
copy no. signals appear as large and
small clusters (DDISH).
Fig 9. Unacceptable staining pattern
seen in the UK NEQAS amplified
section A. Although the nuclei appear
to demonstrate the expected level of
amplification, the Ch17 signal is very
weak and unreadable. The slide is
therefore unquantifiable (BDISH).
Fig 12. Excellent standard of staining
of an in-house SKBR3 cell line
control. The amplified cells show
strong small and large clusters of
HER2 copy no. The Ch17 signals are
also clearly demonstrated (DDISH).
Fig 7. Excellent standard of staining in
the UK NEQAS non-amplified section
C. The HER2 and Ch17 signals are
strong and clear, with the expected
level of copies per nuclei being
demonstrated (DDISH).
Fig 10. Unacceptable staining pattern
seen in the UK NEQAS non-amplified
section C. The HER2 signal is very
weak and therefore unreadable
(BDISH).
Fig 13. Excellent standard of staining
of a non-amplified in-house control,
showing strong distinguishable and
countable HER2 and Ch17 signals
(DDISH).
Fig 8. Excellent standard of staining in
the UK NEQAS non-amplified section
D, showing strong and clear HER2
and Ch17 signals at the expected
level of copies per cell (DDISH).
Fig 11. Borderline pass staining in the
UK NEQAS amplified section B.
Although the HER2 and Ch17 signals
are clear and visible, there is a slight
leaching of the Ch17 probe and
excessive dust deposit (DDISH).
Fig 14. Excellent standard of staining
of the Ventana Xenograft amplified
control. The signals are clearly
demonstrated with HER2 copy no.’s
appearing as large and small clusters
(DDISH).
Fig 15. Excellent standard of staining
of the Ventana Xenograft nonamplified control. The HER2 and
Ch17 signals are strong with the
expected level of signals seen as 1-2
copies per cell (BDISH).
© UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent
84
The HER2 ISH Module - Technical (pilot)
Run 27
Selected CHROMOGEN Based Images From Assessed slides
Ventana Inform SISH
Fig 16.Acceptable HER2 copy no.
demonstrated in the UK NEQAS
amplified section B. The signals are
strong and appear as large clusters.
Fig 17.Acceptable CEP17 in the UK
NEQAS amplified section B, showing
strong, distinct probe signals (same
lab as Fig 12)
Fig 18. Acceptable copy no.
demonstrated in the UK NEQAS nonamplified section D. The signals are
strong and discrete at the expected
level of 1-2 copies per cell.
Fig 19.Acceptable CEP17 in the UK
NEQAS amplified section D. The
nuclei show strong and distinct probe
signals (same lab as Fig 14)
Dako Duo CISH
Fig 20.Borderline pass staining in the
UK NEQAS amplified section B.
Although the HER2 (red) and Ch17
(blue) signals are visible, there is too
much background staining and the
cell borders are not very well defined,
making it difficult to single out cells.
Fig 21.Acceptable pass staining in the
UK NEQAS non-amplified section D.
Both the HER2 (red) and Ch17 (blue)
signals are visible at the expected
level of 1-2 copies per cell.
Fig 22.Unaccepatable staining pattern
seen in the UK NEQAS non-amplified
section D. The HER2 signals are
difficult to read due to leaching of the
probe and excessive background
staining. Some of the cells are also
displaying inappropriate ‘bubbling’
artefact.
Invitrogen Spotlight
Fig 23.
Unacceptable
staining pattern
seen in the UK
NEQAS nonamplified section C,
showing an
unreadable HER2
copy no. and
nuclear morphology
damage.
Fig 24.Unaccepatable
staining pattern seen
in the UK NEQAS non
-amplified section D.
The HER2 copy no. is
unreadable with
background staining
obscuring the signals.
© UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent
85
The HER2 ISH Module - Technical (pilot)
Run 27
Selected FLUORESENCE Based Images From Assessed slides
Fig 25. Excellent staining in the UK
NEQAS amplified section B. The Her2
(red) and Cep17 (green) signals are
strong and clearly demonstrated, with
the expected level of probes per cell.
The background is also very clean
(Rembrandt probes).
Fig 26. Excellent staining in the UK
NEQAS amplified section B. The Her2
(red) and Cep17 (green) signals
show the expected level of probes per
cell, with clean background (Vysis kit).
Fig 29. Acceptable staining in the UK
NEQAS amplified section B. Both the
HER2 (green) and Cep17 (red)
signals are clearly demonstrated.
(Zytovision Zytolight kit).
Fig 30. Acceptable staining in the UK
NEQAS non-amplified section D.
Allthough the DAPI is slightly weak
(compare to fig 24), the HER2 (green)
and Cep17 (red) signals are clearly
seen. (Zytovision Zytolight kit).
Fig 33. Unacceptable staining in the
UK NEQAS amplified section B.
Although the nuclei appear to
demonstrate the expected level of
amplification, there is no Cep17
signal, and therefore unquantifiable.
Fig 27. Excellent staining in the UK
NEQAS non-amplified section C. The
HER2 and Ch17 signals are strong
and clear, with the expected level of
copies per nuclei being demonstrated
(Kreatech probes).
Fig 31. Borderline pass staining in the
UK NEQAS amplified section A. The
HER2 signals are weak, and the
section appears to have insufficient
pre-treatment (Kreatech probes).
Fig 34. Unacceptable staining in the
UK NEQAS amplified section A. The
HER2 signal is weak and there is
excessive background. The slide
appears to have insufficient pretreatment (Vysis kit).
Fig 28. Excellent standard of staining
in the UK NEQAS non-amplified
section D, showing strong and clear
HER2 and Ch17 signals at the
expected level of copies per cell
(Vysis kit).
Fig 32. Borderline pass staining in the
UK NEQAS non-amplified section D.
Although the signals are clearly
demonstrated, there is morphology
damage and the cell borders are not
very well defined, making it difficult to
single out cells (Vysis kit).
Fig 35.Unacceptable staining in the
UK NEQAS non-amplified section C.
There is morphology damage and the
cell borders are not very well defined,
making it difficult to single out cells
((Zytovision Zytolight kit).
© UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent
86
END
© UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent
87

Run 96 - UKNEQAS - Immunocytochemistry

ςισιτινγ ψουρσελφ ιν τηε παστ. Ρεωριτινγ τηε γενεσ

εδώ

Καταλογος

Σεαρχηινγ φορ στρανγε θυαρκ µαττερ. Α γλιµπσε ατ

PathoDxtra EN Extraction Reagents [EL]

Copyright 1995 Scientific American, Inc.

Ηοω χανχερσ δεφεατ δρυγ τηεραπψ. Ρε−χρεατινγ τηε

∆ο αεροσολσ σλοω χλιµατιχ ωαρµινγ? Ηαλτινγ τηε