IVD FSHR/LHR Screen Kit per la genotipizzazione molecolare di Asn680Ser, Thr307Ala, Asp567Asn in FSHR R554X in LHR Polimorfismi nel recettore FSH Il genotipo del recettore dell’FSH (FSHR) svolge un ruolo importante nel determinare la risposta ovarica ad una stimolazione con l’ormone FSH, permettendo di modulare in maniera individuale la somministrazione di FSH e quindi di aumentare l’efficacia e la sicurezza della terapia. Esistono tre polimorfismi a singolo nucleotide del gene FSHR: Il polimorfismo Asn680Ser, Asn680Ser che consiste in una variazione nucleotidica A/G in posizione 2039, produce una variazione aminoacidica da Asn a Ser in posizione 680. Diversi studi hanno associato la variante Ser680 ad una ridotta risposta alla stimolazione ovarica a seguito di somministrazione di FSH, dovuta ad una parziale resistenza del recettore all’ormone. Quindi individui con la variante Ser680 richiedono un dosaggio maggiore di FSH ricombinante per produrre una crescita follicolare ottimale ed un’adeguata concentrazione sierica di Estradiolo. S i D q e Il polimorfismo Thr307Ala Thr307Ala, che consiste in una variazione nucleotidica A/G in posizione 919, produce una variazione aminoacidica da Thr ad Ala in posizione 307. Questo polimorfismo è in linkage disequilibrium con Asn680Ser, rendendo molto frequenti due combinazioni alleliche delle quattro possibili: Thr307/Asn680 e Ala307/Ser680. o M Il polimorfismo Asp567Asn Asp567Asn, che consiste in una variazione nucleotidica G/A in posizione 1765, produce una variazione aminoacidica da Asp ad Asn in posizione 567; è correlata con un aumentato rischio di OHSS. Polimorfismi nel recettore LH Il polimorfismo Arg554Ter Arg554Ter, che consiste in una variazione nucleotidica C/T in posizione 1660, produce una variazione aminoacidica da Arg a codone di stop in posizione 554. La presenza della variante Arg554Ter causa una resistenza elevata all’ormone LH che nella donne porta amenorrea primaria e secondaria ed infertilità e , se in omozigosi, rappresenta uno dei fattori determinati del fallimento della stimolazione ovarica. MoDiSeq TM Molecular Diagnostic Sequencing IVD FSHR/LHR Screen Kit per la genotipizzazione molecolare di Asn680Ser, Thr307Ala, Asp567Asn in FSHR R554X in LHR Il kit è basato su una amplificazione in PCR Multiplex, purificazione dell’amplificato mediante reazione enzimatica con EXOSAP* e successiva reazione SnapShot/minisequencing “single base extension” mediante Kit SnapShot Multiplex Ready Reaction Mix*. La chimica è basata sull’estensione di una singola base dideossi di uno o più oligonucleotidi primers non marcati. Ciascun primer si lega al templato complementare in presenza di un ddNTP fluorescinato e Taq. La polimerasi estende il primer di un oligonucleotide aggiungendo un singolo ddNTP nella posizione 3’. L’interpretazione dei dati avviene mediante elettroforesi capillare su un sequenziatoreautomatico, che consente di evidenziare e separare i prodotti di PCR come in Figura 1. * non inclusi nel kit FSHR N680S WT MUT FSHR D567N WT FSHR T307A MUT WT MUT LHR R554X WT MUT Figura 1. Profilo elettroforetico di una corsa ottenuta con FSHR/LHR Screen Kit. I picchi elettroforetici relativi agli alleli wild type e mutati di ciascuna delle 4 mutazioni indagate vengono separate per peso molecolare e visualizzate con colori differenti per una chiara e rapida interpretazione dei dati. Nell’ immagine è mostrato il profilo elettroforetico di un soggetto eterozigote per la FSHR N680S; wild type per la FSHR D567N ; eterozigote per la FSHR T307A e wild type per la LHR R554X . FSHR/LHR Screen kit: Ogni kit da 50 determinazioni contiene: -Fornisce tutti i reagenti necessari per la PCR - N° 2 vials contenenti 1x Mastermix ( 2 x 580 µl ) Multiplex - N° 1 vial contenente 5U/µl Hot Resque Plus -Consente una analisi rapida, affidabile ed DNA Polymerase ( 1 x 20 µl ) economica - N° 4 vials contentei SNAP Primers ( 4 x 2 µl ) -Permette di interpretare i dati in modo semplice e riproducibile Produttore: Orga Bio Human S.r.l. Sede legale: Via Helsinki 21, 00144 - Roma Tel. 06 97998273 Fax. 06 52246148 www.orgabiohuman.it [email protected] Codice Prodotto: MDS-FSLR-001
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