Suggerimenti per ottenere di più dalla Nucleofection™

BioResearch
Nucleofection™: Protocollo Ottimizzato
Passo 1
Raccogliere le cellule di interesse.
Passo 2
Mescolare e combinare:
Soluzione de Nucleofector™
con supplementi
Cellule
+
Passo 3
Selezionare il programma sul Nucleofector™.
Inserire la cuvetta. Premere il pulsante di
avvio (X).
www.lonza.com/research
Trasferire in una cuvetta
certificata Lonza.
Passo 4
Aggiungere terreno
di coltura.
DNA o siRNA
+
o
Passo 5
Trasferire in piastra a pozzetti. L’espressione può essere
osservata a partire da 3 ore dopo la Nucleofection™.
Suggerimenti per ottenere di più dalla Nucleofection™
–– Prepara una piastra a pozzetti con terreno
fresco ed equilibra a 37° e 5% CO2 prima
dell’esperimento
–– Centrifuga a temperatura ambiente ed alla
velocità (80-100 xg) e per il tempo suggerito dal protocollo
–– Utilizza cellule con un basso numero di
passaggi ed alla raccomandata densità
(in crescita logaritmica)
–– Dopo aver centrifugato risospendi le cellule delicatamente evitando di pipettare
il pellet
–– Limita il tempo di esposizione alla tripsina
monitorando il distacco delle cellule
–– Dopo la Nucleofection™ aggiungi 500 μl
di terreno preriscaldato alle cellule in
cuvetta tramite la pasteur in dotazione
–– Raggiungi delicatamente il fondo della
cuvetta con la punta della pasteur e
raccogli le cellule
–– Semina delicatamente la sospensione
cellulare nella piastra con terreno
precedentemente riscaldato
–– NON mescolare le cellule pipettando
nel pozzetto
–– Conta le cellule ed utilizzane il numero suggerito dal protocollo; meno cellule significa
maggior mortalità
–– Utilizza DNA di alta qualità, purificato e
senza endotossina; verifica la purezza
dei plasmidi misurando il rapporto
A260 : A280
Per maggiori informazioni consulta i nostri Protocolli Ottimizzati sul sito
www.lonza.com/cell-database o contatta il nostro Supporto Scientifico.
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Scientific Support: 8
00 521 0390 (toll free)
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FL-NucleoTips 08/12 CD-KI011_IT

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