Prof. Daniela Cabibi - Fitelab Federazione Italiana Tecnici di

Laboratorio e diagnostica nel
carcinoma della mammella
Prof.ssa Daniela Cabibi
Università degli Studi di Palermo
Le risposte che il clinico si attende dall’Anatomia Patologica sono
sempre più numerose, specie per quanto riguarda le neoplasie
mammarie
IN PASSATO:
Diagnosi di neoplasia su basi morfologiche e stadiazione TNM
Immunoistochimica
Fattori prognostici
Ibridazione in Situ
Markers predittivi di risposta alla terapia
Sottotipizzazione molecolare della neoplasia
All’ Anatomia Patologica si chiede sempre di più, fornendo
sempre meno
Resecati chirurgici
Core biopsy, microbiopsie in sede metastatica
Campioni citologici da agoaspirato ( FNA)
Era delle « Biopsie liquide »!?!
( ricerca di alleli mutati circolanti nel sangue)
Diagnosi di istotipo in base alla morfologia
talora difficile
Immunoistochimica:
e-caderina : carcinoma duttale = +
lobulare = –
Alcuni carcinomi lobulari possono essere +
Immunoistochimica nella diagnosi differenziale
tra carcinoma invasivo e carcinoma in
situ/proliferazioni non neoplastiche
actina P63, CD10, CK5/6 :
evidenziano la persistenza dello strato di cellule
basali nelle proliferazioni non neoplastiche e nel
carcinoma in situ
Adenosi florida
Carcinoma tubulare
A
CK5/6
P63
Fattori prognostici e predittivi di risposta alla
terapia
Recettori ormonali per estrogeni e progesterone
Ki67
HER2
Importanza di una corretta fase pre-analitica:
tempo di “ischemia fredda”
Molti Ag si distruggono in circa 20 min. se non fissati
immediatamente implementare la tecnica del sottovuoto
estrog+
Core biopsy mammella
estrog-
Stessa pz: resecato chirurgico fissato tardivamente
Sottotipi molecolari
breast cancer derived from two main cell types: NSG
1) luminal-like cell compartment. Non-basal-like cancers
luminal A ( 73%) : ER/ PR+ HER2 neg.
luminal B(10%): positivo per ER e/o PR, HER2 + o -
Ki67 ≤14%.
Ki67 ≥14%
HER2 type (5%) : ER / PR neg, HER2. +
2) compartimento basale/myoepiteliale carcinomi basal-like
Triplo negativo (12%): ER/PR/HER2 neg, CK5/6 o EGFR= spesso +
→ basal-like
HER2 (HER2/neu o c-erb2)
proto-oncogene situato nel braccio lungo del cromosoma 17
che codifica una proteina della famiglia dei “Recettori dei
Fattori di crescita epidermici ( Epidermal Grown Factor
Receptors =EGFR) con attività tirosin-kinasica
dimerizzazione attivazione
Meccanismi di attivazione di recettori della famiglia di ErbB
A
B
+
P Src
PI3K
-
P
PIP3
P
+
P P
P
P
P
P
SOS
+
PTEN
RAF
+
P
mTOR
P
MEK1
+
P
P
MEK2
+
P
P
P P
sopravvivenza
P
GBR2
RAS
P
AKt
P
ERH 1
P
ERH 3
ERH 2
P
P
Proliferazione
HER 2 risulta amplificato/ iperespresso in 15-20% di
carcinomi della mammella
targeted HER2 therapy= terapia personalizzata
-> evidente miglioramento delle curve di sopravvivenza in donne
con cancro HER2+
Linea guide ASCO-CAP 2013
raccomandazioni per migliorare l'accuratezza dei test per HER2
per far sì che nessun donna venga esclusa da questa “potential
life-saving therapy” con farmaci per HER2
Tutti i carcinomi infiltranti della mammella devono essere
sottoposti a test per HER2
Un anno di trattamento negli USA= $70,000
Necessità di identificare le donne HER2 negative per
evitare un trattamento inutile, potenzialmente tossico e
COSTOSO
HER2:
metodi attualmente impiegati
IPERESPRESSIONE PROTEICA
IMMUNOISTOCHIMICA
AMPLIFICAZIONE GENICA
IBRIDIZZAZIONE IN SITU (FISH/CISH/SISH)
Score immunoistochimico ASCO-CAP2013
HER2 negativi (0-1+): positività di membrana, assente o
incompleta, appena percettibile in <10% delle cellule
HER2 positivi ( score 3+): positività forte e completa in
> 10% delle cellule
Casi 2+: modificati rispetto allo score FDA e ASCO-CAP 2007
a)positività debole/moderata anche se incompleta in>10%
b) positività forte e completa in<10% delle cellule
Nei casi 2+, ripetere il test con ISH
Nel valutare il risultato di HER2, bisogna sempre
tenere in mente il quadro clinico generale
p.es: fare attenzione al tumore G1, positivo per
recettori ormonali, basso ki67 ma HER2+
O, viceversa, al tumore G3, negativo per recettori
ormonali, alto Ki67 ma HER2-
HER2-negative (1+) breast cancer with
unfavorable prognostic features: to FISH or not
to FISH? (Iorfida et al. Ann.Oncol. 2012)
Il 13% dei casi 1+ ma che presentano almeno un
ulteriore fattore di rischio risultano amplificati in ISH
Fattori di rischio
alto grado, alto Ki 67,
invasione vascolare estesa,
LN+,
rec.ormonali assenti
CISH Chromogenic In Situ Hybridization
Permette di individuare al microscopio ottico in
campo chiaro specifiche sequenze geniche a
livello della singola cellula tramite la deposizione
di un cromogeno
Definizione ibridizzazione
Reazione specifica di una sonda
con un acido nucleico target
Marcatura
fluorescente/cromogenica
Sonda
3’
DNA Target
T
5’
T A
G A
T
C
T
G A
A A
T
T
G T
C A
C
G
T
G C A
A
T C
C G
5’
3’
Ibridazione
Ibrido
T A
T
G A
T
Marcatura
fluorescente/cromogenica
C T A
A
G T
C G T A
G A
T
C A
G C A T
T
C
C G
CISH: la procedura
Il pretrattamento
La dispensazione della sonda
La denaturazione
L’ibridizzazione
I lavaggi di stringenza
La rivelazione
La controcolorazione
L’interpretazione dei risultati
I controlli
Le sonde
cromosoma 17
(centromero)
HER2
Sonde a DNA
coniugate con
Digossigenina
Biotina/digossigenina
Il segnale
Una copia del gene HER2 appare come un piccolo, singolo
“dot” brunastro
Patterns riscontrabili (63x(63x-100x)
Singoli “dot”
Clusters
Risultati (ASCO/CAP 2013)
Da osservare in una popolazione omogenea e contigua
Risultato amplificato:
Single-probe: > = 6.0 segnali di HER2/cell in media
Dual-probe : HER2/CEP17 ratio > = 2.0
HER2/CEP17 ratio < 2.0 con numero medio di segnali HER2
> = 6.0 segnali/cell
Risultato equivoco:
Single-probe: numero di segnali di HER2 compreso tra 4.0 e 6.0 /cell
Dual-probe: HER2/CEP17 ratio < 2.0 con numero medio di segnali HER2
compreso tra 4.0 and 6.0 segnali/cell.
Risultato negativo:
Single-probe; numero medio di segnali HER2 < 4.0 segnali/cell
Dual-probe HER2/CEP17 ratio < 2.0 con numero medio di segnali HER2
< 4.0 segnali/cell
Artefatti tecnici:
CDI diagnosticato come HER2 3+ su core biopsy nel 2008
MTS epatica HER2 negativa dopo 2 anni
Falso positivo:
aspecificità causata
dall’incompatibilità tra
anticorpo e sistema di
rivelazione
Carcinoma duttale infiltrante
ampia area centrale HER2 neg
Linfonodo HER2 3+
focolai HER 2=3+ nel grasso peri-linfonodale
Eterogeneità tumorale ??
Falsa negatività del tumore primitivo per inadeguata fissazione??
A
nno 2006: Donna di 65 anni:
Carcinoma lobulare infiltrante (G3) metastatico al linfonodo sent.
Her 2 neg 1+
HER2 neg anche sul LNS
Dopo 6 anni mts cutanea
addominale HER2 =3+
ripetendo Her2 sul tumore primitivo: rare cellule 3+
Possibili variazioni di HER2 tra mts e tumore primitivo ( 5-15% dei
casi)
Ipotesi
Cause biologiche: Vero cambiamento della biologia del tumore?
Etereogeneità tumorale?
Cause tecniche: Casi 1+ con fattori di rischio ma non testati all’ISH?
Diverse modalità di esecuzione di HER2 nel corso degli anni?
Diversi criteri di lettura con le nuove linee guida ASCO-CAP 2013
Testare HER2 anche nelle recidive e nelle metastasi, specie se
il tumore primitivo era negativo (ESMO), (ASCO), (NCCN)
La re-biopsia ha portato ad un cambiamento della terapia nel 14%
delle pazienti
"A bad test can be just as bad as a
bad drug."
Non può esistere un buon patologo senza un
buon laboratorio di Anatomia Patologica
GRAZIE!
It is essential to ensure that time to fixation (cold ischemic time) and
time in fixative
(which has increased from 6 to 48 hours to 6 to 72 hours in this
Update
on the basis of available data and to conform with the ASCO/CAP) are
recorded and considered in defining the test result.
COMMENT: Fixation time and HER2/neu assessment.
Bohn OL, Sanchez-Sosa S (Am J Clin Pathol. 2011)
The authors evaluated only 3+ carcinomas and did not include 2+ equivocal cases,
Numerous studies have shown high concordance between FISH and ICH 3+tumors;
in contrast, 2+ cases are the most likely to be discordant by FISH.
Time and type of fixation and the postfixation treatment contribute to the quality of
ISH staining results
.
further studies on preanalytic factors including 2+ equivocal cases are necessary to
demonstrate that formalin fixation time has little or no impact on HER2/neu
expression
ma anche le altre avrebbero avuto score 2+ secondo ASCO-CAP
2013 e amplificazione alla SISH
-> caso di etereogeneità tumorale
Etereogeneità tumorale:
Efficacia della “targeted” terapia adiuvante per
Her2 anche nei tumori luminal-type (positivi per
estrogeni e negativi per HER2 )
-->blocca la piccola popolazione di stem cells,
HER2+ che pur costituendo solo 1-5% del
tessuto tumorale, potrebbe essere responsabile
della crescita tumorale e delle metastasi!
Hasan Korkaya , Max S. Wicha, Cancer Research 2013

Download Report