RT-PCR 用プライマーの実用性確認および開発 概要 近年、植物ウイルス病の診断方法として、遺伝子診断法が多く利用されています。その中でも RT-PCR 法 1 は、非常に 高感度かつ迅速(約6時間)にウイルス病を診断することが可能です。本センターでは、既報のプライマーが実用的に使 用できるかどうかの確認を行い、さらに新たなプライマー2 を開発したので紹介します。 実用性が確認できたプライマーは、順次追加していく予定です。 1. RT-PCR 法によるウイルス診断 ウイルス RNA を利用し、植物内のウイルスの存在を判定する非常に精度の高い診断 2. プライマー ウイルス RNA 増幅の足場となる短い DNA 断片 表. 使用可能なプライマー一覧 宿主植物 チューリップ 検出対象ウイルス TMMMV BYMV FreMV フリージア FreSV ASGV CMV ユリ LSV LMoV クリスマスローズ HeNNV ブルグマンシア CDV ウメ CNSV プライマー名および塩基配列(5' to 3') ophio-CPf : GAAAGCTCAGAAAAATCAGC ophio-CPr : CCCTGGCTTTAGATCAAGA OP1 : GGAAGRTATTTYCATAGRGC OP2 : TGTTRTCCACTCCWCCTGTT BCPF : TCTGACCAAGAACAACTCAA BCPD : CTAAATACGAACACCAAGCA FMV-F : GGGATAGGATTGTACCCGAGTTG FMV-R : TCAGCGTCAAGTTGCTCTG ophio-CPf : GAAAGCTCAGAAAAATCAGC ophio-CPr : CCCTGGCTTTAGATCAAGA OP1 : GGAAGRTATTTYCATAGRGC OP2 : TGTTRTCCACTCCWCCTGTT CTLV-ON : ATTCAGCTCGTTTCTTGGAG ASCT-3' : AGAGTGGACAAACTATAGAC CTPALL5 : YASYTTTDRGGTTCAATTCC CTPALL3 : GACTGACCATTTTAGCCG CMVCPf : GCTTCTCCGCGAG CMVCPr : GCCGTAAGCTGGATGGAC LS1f : CTCTCACTTGTTACCGCAAG LS2r : CCGCGTGTTGTATTGGAAGC Potyvirid1 : CACGGATCCCGGG(T) 17VGC Potyvirid2 : ACCACAGGATCCGGBAAYAAYAGYGGDCARCC HeNNV 7226F : ATGCCGACTGAACAGGAAAT HeNNV 8138R : TTAGTCGCTCTCAGAACCG CDV-CP-131F : GTTCTAGTGGAACCTTTAGTGTA CDV-CP-344R : ATCTGTTCATCAGTAACTTCATAA RNA1 RdRp F : GAATGTTACTATTACTGATGGTAGT RNA1 RdRp R : ACATTTAGAGCTAATTCATAGAG 本センターで開発を行ったプライマー TMMMV:Tulip mild mottle mosaic virus, BYMV:Bean yellow mosaic virus, FreMV:Freesia mosaic virus, FreSV:Freesia sneak virus, ASGV:Apple stem grooving virus, CMV:Cucumber mosaic virus, LSV:Lily symptomless virus, LMoV:Lily mottle virus, HeNNV:Helleborus net necrosis virus, CDV:Colombian datura virus, CNSV:Cycas necrotic stunt virus <お問い合わせ> 本診断についてのお問い合わせはこちらから。 URL:https://cpscent.ws.hosei.ac.jp/wp/contact_form 引用または設計者* 長尾ら(2012) * Vaira et al ,(2003) Kumar et al ,(2009) 水田ら(2013) * 長尾ら(2012) * Vaira et al ,(2003) 吉川ら,(1996) Choi et al ,(1999) Nemat et al ,(2006) 佐藤ら,(2003) Gibbs & Mackenzie, (1997) 長尾ら(2011) * 諸橋ら(2014) * 丸山ら(2014) *
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