Application No. L2104 エイコサノイド類の一斉分析 Analysis of Eicosanoides by LC/MS/MS エイコサノイドはアラキドン酸から生合成される生理活性物質でプロスタグランジン（PG)、ロイコトリエン（LT)、トロンボキサン（TX)等が含まれ、炎症反応、気管支喘息等の発症において重要な役割を担う脂質メディエーターとして知られています。ここではエイコサノイド類とその代謝物を液体クロマトグラフィー/質量分析法（LC/MS/MS）を用いて、一斉分析を行いました。キーワード : プロスタグランジン; ロイコトリエン; トロンボキサン; 代謝物; 液体クロマトグラフィー/質量分析法 Key words : Prostsglandins; Leukotrienes; Thromboxans; Metabolites; Liquid Chromatography/Mass spectrometry; UHPLC Column : L-column2 ODS (USP category : L1) Sample : 6-Keto-PGF1 TXB2 LTC4 PGF2 LTB4 PGE2 12-HPETE LTD4 5-HETE LTE4 14,15-EET in C2H5OH/H2O (50/50) (0.5 mg/L each) [Analytical conditions] Column : L-column2 ODS (C18, 2μm, 12 nm) Column size : 2.1 mm I.D. ×150 mm L. Mobile phase : A: CH3CN; B: 0.1％ HCOOH in H2O A/B, 30/70-80/20 (0-30 min) Flow rate : 0.4 mL/min Temperature : 40℃ Detection : ESI-MS（-） Inj. Vol. : 2 μL System : LC: Ultimate 3000 Bio RS (Thermo Fisher Scientific K.K.); MS/MS: 3200 Q TRAP (AB Sciex) ■エイコサノイド類の一斉分析 29 3 25 34 4 13 10 24 1 26 36 42 6 17,18 4, 5 2 1 6 31 8 12 20 3 19 2 5 7 14 35 7 37 8 23 15,16 21 38 22 32 9 11 33 28 27 30 40 39 45 41 43 44 4647 48 Fig. Mass chromatogram of Eicosanoides and the metabolites using LC/MS/MS 1/4 無断転用禁止 Application Data Sheet for LC Application No. 2104 ■MRMクロマトグラム 2,3-Dinor-8-iso PGF2 6-Keto-PGF1 20-COOH-LTB4 6-Keto-PGE1 20-OH-LTB4 TXB2 PGF2 PGE2 LXB4 PGD2 11-Dehydro-TXB2 15-Keto-PGF2 6.0 6.5 7.0 7.5 8.0 LTD4 LXA4 8 PGA2 LTF4 9 6.0 6.5 7.0 7.5 8.0 LTE4 LTC4 PGJ2 Delta-12-PGJ2 10 9 10 11 9 10 11 2/4 無断転用禁止 Application Data Sheet for LC Application No. 2104 ■MRMクロマトグラム PGB2 LTB4 12-Keto-LTB4 14,15-DHET 11,12-DHET 8,9-DHET HXA3 19-HETE 15-Deoxy-delta-12,14-PGJ2 20-HETE 5,6-DHET 16-HETE 15-HETE 11-HETE 15-HPETE 15-OxoETE 12-HETE 8-HETE 9-HETE 12-HPETE 20 21 22 3/4 無断転用禁止 Application Data Sheet for LC Application No. L2104 ■MRMクロマトグラム 12-OxoETE 5-HETE 5-OxoETE 11,12-EET 5-HPETE 8,9-EET 14,15-EET 5,6-EET Table MRM transitions and retenstion time of Eicosanoides and the metabolites Name No 1 2,3-Dinor-8-iso PGF2 2 6-Keto-PGF1 3 20-COOH-LTB4 4 6-Keto-PGE1 5 20-OH-LTB4 6 TXB2 7 PGF2 8 PGE2 9 11-Dehydro-TXB2 10 15-Keto-PGF2 11 LXB4 12 PGD2 13 LTD4 14 LXA4 15 LTE4 16 LTC4 17 PGA2 18 LTF4 19 PGJ2 20 Delta-12-PGJ2 21 PGB2 22 LTB4 23 12-Keto-LTB4 24 14,15-DHET Q1(m/z) Q3(m/z) 324.8 237.1 368.9 163.0 365.0 129.0 367.0 143.1 351.0 195.2 369.1 169.1 353.1 309.3 351.0 271.1 367.0 305.2 351.0 315.1 351.0 221.1 351.0 271.1 495.1 143.0 351.0 115.0 438.1 115.1 624.2 143.1 333.0 271.2 567.2 171.2 333.0 271.2 333.0 271.2 333.0 175.1 335.0 195.1 333.0 179.0 337.0 207.0 Time(min) 3.04 3.36 3.60 3.79 3.89 5.06 5.99 6.50 6.72 6.85 6.97 7.10 7.61 8.75 9.68 9.68 10.12 10.15 10.27 10.39 10.53 12.90 14.37 14.53 No 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 Name 11,12-DHET 8,9-DHET HXA3 19-HETE 15-Deoxy-delta-12,14-PGJ2 20-HETE 5,6-DHET 16-HETE 15-HETE 11-HETE 15-HPETE 15-OxoETE 12-HETE 8-HETE 9-HETE 12-HPETE 12-OxoETE 5-HETE 5-HPETE 14,15-EET 5-OxoETE 11,12-EET 8,9-EET 5,6-EET Q1(m/z) Q3(m/z) 337.0 167.1 337.0 127.0 335.0 126.9 318.8 275.2 315.0 271.2 318.8 275.2 337.1 145.1 319.0 233.0 318.9 219.2 318.9 167.1 316.9 113.1 316.9 113.1 319.0 178.9 319.0 154.9 318.9 167.1 316.9 273.3 316.9 273.3 318.8 115.1 317.0 203.1 318.9 219.2 317.0 203.1 318.9 167.1 318.8 127.0 318.9 191.1 Time(min) 15.44 16.21 16.55 16.83 17.06 17.13 17.22 17.96 19.27 19.92 20.00 20.20 20.36 20.44 20.80 20.85 21.14 21.22 22.03 22.20 22.98 23.14 23.48 23.82 エイコサノイド類は異性体が多く、Q1とQ3が同じMRMトランジションのものも多いのでカラムでの分離が重要になります。そこで高分離を誇るL-column2 ODS 2μm を使用したところ、異性体の分離も良好で、シャープなピークを示しました。また、カラム圧もUHPLCカラムにしては低く、今回の条件で最大50 MPaでした。このアプリケーションデータは、CERI・安全性評価技術研究所と共同で採取しました。これらに関する受託分析もご相談ください。詳細はこちらです。 http://www.cerij.or.jp/service/03_omics/metabolomics.html Saka1401 東京事業所クロマト技術部 Chromatography Department, CERI Tokyo 4/4 〒345-0043 埼玉県北葛飾郡杉戸町下高野1600番地 / TEL: 0480-37-2601 / FAX: 0480-37-2521 / E-mail: [email protected] 無断転用禁止