国立感染症研究所における輸入デングウイルス
感染症の検査・診断状況と
通常RT-PCRプライマーの変更
平成23年6月29日
衛生微生物技術協議会 第32回研究会
田島茂、小滝徹、林 昌宏、モイ・メンリン、
高崎智彦、☆倉根一郎
（国立感染研・ウイルス第1部）
デングウイルス検査
デング感染症疑い患者血清・尿
（日本人帰国者、外国人入国者）
発熱、頭痛、発疹、筋肉痛、関節痛等
血小板数減少、CRP値増加など
１）抗体検査
抗デングウイルスIgM捕捉ELISA
(IgG)
２）遺伝子検出検査
国立感染症研究所
ウイルス第一部
Real-time PCR (TaqMan法)
第二室
Conventional PCR
３）ウイルス分離
蚊由来細胞c6/36への接種
４）ウイルス抗原検査
NS1抗原検出ELISA
・血清型の特定
・塩基配列の決定
・各地域の新規
各地域の新規
ウイルス株の分離
トレンドの把握
1
古典的RT
RT--PCR用プライマー配列
primer
New D2 プライマ
プライマー
sequence
gene
size(bps)
D1s
D1c
GGACTGCGTATGGAGTTTTG
ATGGGTTGTGGCCTAATCAT
E
NS1
490
DV2s
DV2c
AGRTTYGTCTGCAAACACTCC
GTGTTACTTTRATTTCCTTG
E
231
D2s
D2c
D2(TR)s
D2(TR)c
GTTCCTCTGCAAACACTCCA
GTGTTATTTTGATTTCCTTG
GCATAGAGGCTAAGCTGACC
AAGGGGACTCACTCCACAAT
E
E
E
E
230
D3s
D3c
GTGCTTACACAGCCCTATTT
TCCATTCTCCCAAGCGCCTG
E
NS1
320
D4s
D4c
CCATTATGGCTGTGTTGTTT
CTTCATCCTGCTTCACTTCT
NS2a
NS2b
398
Dus
Duc
TCAATATGCTGAAACGCGCGAGAAACCG
TTGCACCAACAGTCAATGTCTTCAGGTTC
C
PreM
511
263
D1,2,3,4;dengue type 1,2,3,4 s;sense primer, c;complimentary primer, u;universal primer
国内輸入デング感染症報告数
輸入デング感染症報告数
2001
2002
2003
2004
2005
2006
2007
2008
2009
2010
50
52
32
49
74
58
89
104
92
245
当室で実験室診断した
デング感染症例数
35
31
26
20
43
30
52
69
17
*2009年7月6日現在
2
No.
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
Total
ID
11-03
11-05
11-06
11-08
11-09
11-10
11-166
11-22
11-23
11-24
11-25
11-26
11-28
11-29
11-30
11-32
11-33
11-41
11-44
11-49
11-50
11-51
11-56
Virus Type
D1
D1D3
D1
D1
D2
D4
D1
D1
D4
-
Age
Sex
Philippines
21
Thailand
57
Indonesia(Bali)
25
Thailand
47
Indonesia(Bali)-singapore 31
Philippines
58
Philippines
40
Philippines
63
Indonesia
3
Indonesia(Bali)
46
Indonesia(Bali)
21
Indonesia(Bali)
35
Indonesia(Bali)
33
Thailand
57
Indonesia(Bali)
28
Indonesa(Bali)
31
Country
M
M
F
M
F
M
M
M
F
M
F
F
F
M
F
M
Vienam
Malaysia
Indonesia(Bali)
Bangradesh-Thailand
-
Philippines
Philippines
Singapore
CHIKV
2
41
M
31
31
21
22
27
22
M
F
F
F
M
M
receipt date
Prefecture
12.Jan
千葉県
13.Jan
千葉県
14.Jan
福岡県
18.Jan
埼玉県
18.Jan
東京都
13.Jan
東京都
28.Jan 神奈川県
15.Feb
東京都
18.Feb
滋賀県
21.Feb
東京都
22.Feb
東京都
23.Feb
北海道
02.Maｒ
兵庫県
03.Maｒ
大分県
04.Maｒ
東京都
16.Mar
東京都
22.Mar
東京都
04.Apr
東京都
08.Apr
大阪府
13.May
群馬県
13.May
沖縄県
16.May
東京都
13.Jun
埼玉県
Virus type
Type1
6
Positive
P
iti
21
Unknown
12
Type2
1
Type3
1
Negative
34
Type4
2
Age
Sex
50-59
3
60-69 0-9
1
1
20-29
6
Female
9
Male
12
40-49
4
30-39
6
3
8
7
Area
20
18
16
14
12
10
8
6
4
2
0
6
5
9
4
4
3
1
1
1
1
1
3
2
1
0
Jan
Feb
Mar
Apr
May
Jun
デング患者報告者数
6
45
40
5
35
30
4
25
3
20
週毎
累計
15
2
10
1
5
0
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22
0
3/11
1月
2月
3月
4月
5月
4
2010年の我が国におけるデング熱輸入症例
243名
18
18
1/1
3/1
5/10
7/12
9/20
11/29
ヒトスジシマカの活動期
5
☆ 旅行期間の長期化 ★
長期滞在者を除く
平均滞在日数（短期滞在者）
2010年
2009年
9.4日
5.1日
（滞在一カ月以上の長期滞在者 海外駐在者は除いた）
（滞在一カ月以上の長期滞在者、海外駐在者は除いた）
円高の影響、夏休みの長期化は輸入
デング熱症例の増加につながる！
3rd JE Laboratory Network Meeting in WPRO
30 May -1 June, 2011
Vientiane, LAO
Country report
RRL activities and Current Status of
Japanese Encephalitis
in Korea
MyungGuk Han, DVM, PhD
Division of Arboviruses
Center for Immunology and Pathology
National Institute of Health
Korea Centers for Disease Control and Prevention
6
JE Epidemiology (1)
Annual JE cases (1984-2010)
30
No. of cases
25
20
15
10
5
2010
2008
2006
2004
2002
2000
1998
1996
1994
1992
1990
1988
1986
1984
0
JE Surveillance (2)
JE cases, 2003-2010
Year
2003
2004
2005
2006
2007
2008
2009
2010
No. of patient
1
0
6
0
7
6
6
26
No of sample
No.
171
217
202
253
258
311
324
388
Geographical distribution (2010)
Region
No. of patients
Seoul
3
Gyeonggi-do (GG)
7
Gangwon-do
g
((GW))
5
Chungcheongbuk-do (CB)
1
Chungcheongnam-do (CN)
3
Jeollanam-do (JN)
1
Gyeongsangbuk-do (GB)
3
Gyeongsangnam-do (GN)
3
7
JE cases are reducing -
ramatically special in recent years
D
JE has been reported in China, since 1951
In the history, big outbreaks 150 000 cases in 1966
180 000 cases in 1971
25
JE in China historically
20
15
10
5
年
2006
2005
2004
2003
2002
2001
2000
1999
1998
1997
1996
1995
1994
1993
1992
1991
1990
1989
1988
1987
1986
1985
1984
1983
1982
1981
1980
1979
1978
1977
1976
1975
1974
1973
1972
1971
1970
1969
1968
1967
1966
1965
1964
1963
1962
1961
1960
1959
1958
1957
1956
1955
1954
1953
1952
0
1951
发病率/10万
De. case
246
229
366
200
214
463
227
142
175
93
1950
Year Cases
2001 9795
2002 8769
2003 7860
2004 5425
2005 5104
2006 7643
2007 4331
2008 2979
2009 3927
2010 2536
In recent years
2000: 10000
2005: 5000
2010: 2536
Gao XY; PLoS Negl Trop Dis 2010
リアルタイムPCR（JEV用）
TaqMan primers & probe
First set (Envelope領域)
遺伝子型1&3共通セット
JEV primers & probs
JEen585p599s622c
Genotype
JEen562s-585pset
JEen562s
585pset
1&3
JEen623c-585pset
Seq. 5'-3'
ACTRAACACTGAAGCGT
CTGGAYTGTGARCCAAGGA
GAHCCCACGGTCATGA
8
リアルタイムPCR（JEV用）
Second set ((Envelope領域)
p 領域)
遺伝子型1&3型別セット
JEV primers & probs
JE1&3Env1052F-1082Pset
Genotype
JE1Env1082P
1
JE1Env 1119R-1082Pset
JE&3Env1052F-1082Pset
Genotype
JE3Env1082P
3
JE3Env 1119R-1082Pset
Seq. 5'-3'
Modified by
AB051292
ATGGGAATTAYTCAGCGCAAGT
CTCAAGCAGCAAA
GGGAGCGTTTGGAGTTACAGTAA JE1とJE3の
sence primer
sence　primer
ATGGGAATTAYTCAGCGCAAGT は共通
CCCAGGCGGCAAA
AGGAGCATTGGGTGTTACTGTAAA
9