ボスチニブ水和物
2.6.6 毒性試験の概要文
TABLE OF CONTENTS
LIST OF TABLES ......................................................................................................................................... 2
略語・用語の定義一覧................................................................................................................................ 3
2.6.6.1. まとめ.............................................................................................................................................. 4
2.6.6.1.1. 単回投与毒性試験 ................................................................................................................ 6
2.6.6.1.2. 反復投与毒性試験 ................................................................................................................ 6
2.6.6.1.3. 遺伝毒性試験 ........................................................................................................................ 7
2.6.6.1.4. がん原性試験 ........................................................................................................................ 7
2.6.6.1.5. 生殖発生毒性試験 ................................................................................................................ 8
2.6.6.1.6. 代謝物 M2 の毒性試験......................................................................................................... 8
2.6.6.1.7. 光毒性試験 ............................................................................................................................ 8
2.6.6.2. 単回投与毒性試験.......................................................................................................................... 9
2.6.6.2.1. マウス .................................................................................................................................... 9
2.6.6.2.2. ラット .................................................................................................................................... 9
2.6.6.2.3. イヌ ...................................................................................................................................... 10
2.6.6.3. 反復投与毒性試験........................................................................................................................ 10
2.6.6.3.1. ラット 7 日間経口投与用量設定試験............................................................................... 10
2.6.6.3.2. ラット 1 ヵ月間経口投与毒性試験................................................................................... 12
2.6.6.3.3. ラット 1 ヵ月間経口投与毒性試験および 1 ヵ月間回復性試験................................... 13
2.6.6.3.4. ラット 6 ヵ月間経口投与毒性試験................................................................................... 14
2.6.6.3.5. イヌ 10 日間経口投与用量設定試験................................................................................. 16
2.6.6.3.6. イヌ 1 ヵ月間経口投与毒性試験....................................................................................... 18
2.6.6.3.7. イヌ 2 週間経口投与忍容性試験....................................................................................... 18
2.6.6.3.8. イヌ 9 ヵ月間経口投与毒性試験および 1 ヵ月間回復性試験....................................... 19
2.6.6.4. 遺伝毒性試験................................................................................................................................ 20
2.6.6.4.1. in vitro.................................................................................................................................... 20
2.6.6.4.1.1. 細菌を用いた復帰突然変異試験 .......................................................................... 20
2.6.6.4.1.2. ヒト末梢血リンパ球を用いた染色体異常試験 .................................................. 20
2.6.6.4.2. in vivo..................................................................................................................................... 21
2.6.6.4.2.1. マウス小核試験...................................................................................................... 21
2.6.6.5. がん原性試験................................................................................................................................ 21
2.6.6.5.1. ラット 2 年間投与がん原性試験....................................................................................... 21
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ボスチニブ水和物
2.6.6 毒性試験の概要文
2.6.6.6. 生殖発生毒性試験........................................................................................................................ 23
2.6.6.6.1. ラットにおける受胎能及び胚・胎児発生に関する経口投与用量設定試験............... 23
2.6.6.6.2. ラットにおける受胎能及び着床までの初期胚発生に関する経口投与試験............... 24
2.6.6.6.3. ラットにおける胚・胎児発生に関する経口投与試験................................................... 25
2.6.6.6.4. ウサギにおける経口投与忍容性試験............................................................................... 26
2.6.6.6.5. ウサギにおける胚・胎児発生に関する経口投与用量設定試験................................... 27
2.6.6.6.6. ウサギにおける胚・胎児発生に関する経口投与試験................................................... 28
2.6.6.7. その他の毒性試験........................................................................................................................ 29
2.6.6.7.1. 代謝物の毒性試験 .............................................................................................................. 29
2.6.6.7.1.1. 代謝物 M2 のラット 2 週間反復経口投与毒性試験........................................... 30
2.6.6.7.1.2. 代謝物 M2 の細菌を用いた復帰突然変異試験................................................... 30
2.6.6.7.1.3. 代謝物 M2 のヒト末梢血リンパ球を用いた染色体異常試験........................... 31
2.6.6.7.2. 光毒性試験 .......................................................................................................................... 31
2.6.6.8. 考察および結論............................................................................................................................ 32
2.6.6.8.1. 消化管毒性 .......................................................................................................................... 32
2.6.6.8.2. 生殖発生毒性 ...................................................................................................................... 34
2.6.6.8.3. 結論 ...................................................................................................................................... 34
2.6.6.9. 表および図.................................................................................................................................... 34
LIST OF TABLES
Table 1.
ボスチニブの毒性試験の一覧.....................................................................................................5
Table 2.
マウスおよびラット単回投与毒性試験の概要 .......................................................................10
Table 3.
ラット 6 ヵ月間試験における途中死亡例の発現頻度および死因（RPT-63644）
.......................................................................................................................................................15
Table 4.
ラット胚・胎児発生試験における胎児の内臓および骨格所見（RPT-63107）.................26
Table 5.
ウサギ胚・胎児発生試験における胎児の内臓および骨格所見（RPT-65533）.................29
Table 6.
ボスチニブによる消化管障害のまとめ（反復投与毒性試験） ...........................................33
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ボスチニブ水和物
2.6.6 毒性試験の概要文
略語・用語の定義一覧
略語・用語
AUC
AUC(0-24)
Cmax
CML
DMSO
GLP
MCHC
8-MOP
NA
NOAEL
NOEL
NZW
PCE
SD
SOP
TK
Tmax
省略していない表現または用語の定義
Area under the plasma concentration - time curve，血漿中濃度－時間曲線下面積
Area under the plasma concentration - time curve from time 0 to 24 hours after dosing，投
与後 0 から 24 時間の血漿中濃度－時間曲線下面積
Maximum plasma concentration，最高血漿中濃度
Chronic myeloid leukemia，慢性骨髄性白血病
Dimethyl sulfoxide，ジメチルスルホキシド
Good Laboratory Practice，医薬品の安全性に関する非臨床試験の実施の基準
Mean cell hemoglobin concentration，平均赤血球血色素濃度
8-Methoxypsoralen，8-メトキシソラレン
Not applicable，適用せず
No-observed-adverse-effect-level，無毒性量
No-observed-effect-level，無影響量
New Zealand White，ニュージーランドホワイト
Polychromatic erythrocyte，多染性赤血球
Sprague-Dawley
Standard Operating Procedure，標準操作手順書
Toxicokinetics，トキシコキネティクス
Time to reach Cmax，最高血漿中濃度到達時間
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ボスチニブ水和物
2.6.6 毒性試験の概要文
2.6.6.1. まとめ
ボスチニブ（SKI-606；WAY-173606；PF-05208763）の毒性プロファイルを，Table 1 に示す試験
によって評価した。急性毒性はマウスおよびラットを用いた経口投与および腹腔内投与単回投与
試験，ならびにイヌを用いた用量設定試験により評価した。反復投与毒性試験は経口投与により，
ラットおよびイヌを用いて検討した。遺伝毒性は in vitro および in vivo 試験で検討した。がん原
性は経口投与によりラットを用いて検討した。生殖発生毒性試験としては，雌雄のラットを用い
た受胎能及び着床までの初期胚発生に関する試験ならびにラットおよびウサギを用いた胚・胎児
発生に関する試験を実施した。ヒトにおいてはボスチニブの主要な代謝物であるが，ラットまた
はイヌでは生成されない M2（酸化的脱塩素体；WAY-198760；PF-05898965）について，ラット
2 週間経口投与毒性試験および in vitro 遺伝毒性試験を実施した。有色 Long-Evans ラットを用い
て光安全性試験を実施した。
毒性試験の概要を毒性試験の概要表，2.6.7.1 に示す。
ボスチニブのトキシコキネティクス（TK）については、マウス（単回投与のみ），ラット，ウサ
ギおよびイヌを用いて，反復投与毒性試験，遺伝毒性試験，がん原性試験または生殖発生毒性試
験（胚・胎児発生に関する試験）の一環として評価した。TK 試験の概要を毒性試験の概要表，
2.6.7.2 に，データの概要を毒性試験の概要表，2.6.7.3 に示す。
すべての重要な毒性試験は医薬品の安全性に関する非臨床試験の実施の基準（GLP）に準拠して
実施した。重要でない試験についても，GLP または施設 SOP を遵守する試験施設において，GLP
基準に準じて実施した。
毒性試験および TK 試験の GLP 適用の有無をそれぞれ毒性試験の概要表，
2.6.7.1 および 2.6.7.2 に示す。
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ボスチニブ水和物
2.6.6 毒性試験の概要文
Table 1.
ボスチニブの毒性試験の一覧
試験の種類
動物種
投与経路
投与期間
単回投与毒性試験
マウス
マウス
ラット
ラット
経口
腹腔内
経口
腹腔内
単回
単回
単回
単回
反復投与毒性試験
ラット
ラット
ラット
ラット
イヌ
イヌ
イヌ
イヌ
経口
経口
経口
経口
経口
経口
経口
経口
7 日間
1 ヵ月間
1 ヵ月間 a
6 ヵ月間
10 日間
1 ヵ月間
2 週間
9 ヵ月間 a
ネズミチフス菌（TA98 およ
び TA100）
ネズミチフス菌（TA98，
TA100，TA1535 および
TA1537）；
大腸菌（WP2 uvrA）
ヒト末梢血リンパ球
マウス
in vitro
NA
in vitro
NA
in vitro
NA
経口
単回
遺伝毒性試験
細菌を用いた復帰突然変異
試験（スクリーニング）
細菌を用いた復帰突然変異
試験
染色体異常試験
小核試験
がん原性試験
ラット
経口
2 年間
生殖発生毒性試験
受胎能及び胚・胎児発生に
関する用量設定試験
ラット
経口
受胎能及び着床までの初期
胚発生に関する試験
ラット
経口
胚・胎児発生に関する試験
忍容性試験
胚・胎児発生に関する用量
設定試験
胚・胎児発生に関する試験
ラット
ウサギ
ウサギ
経口
経口
経口
雄： 約 7.5 週間（交配前 4
週間～妊娠末期の雌
の剖検）
雌： 5～6 週間（交配前 2
週間～妊娠 20 日）
雄： 約 7 週間（交配前 4 週
間～雌の妊娠判定に
基づく安楽殺前日）
雌： 3～6 週間（交配前 2
週間～妊娠 7 日）
12 日間（妊娠 6～17 日）
7 日間
14 日間（妊娠 6～19 日）
ウサギ
経口
14 日間（妊娠 6～19 日）
NA = 適用せず
a
1 ヵ月間の回復期間を含む。
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ボスチニブ水和物
2.6.6 毒性試験の概要文
Table 1.
ボスチニブの毒性試験の概要（続き）
試験の種類
動物種
投与経路
投与期間
ラット
経口
2 週間
ネズミチフス菌（TA98，TA100，
in vitro
NA
ヒト末梢血リンパ球
in vitro
NA
ラット（Long-Evans）
経口
2 日間
その他の毒性試験
M2 の反復投与毒性試験
M2 の細菌を用いた復帰突
然変異試験
TA1535 および TA1537），
大腸菌（WP2 uvrA）
M2 の染色体異常試験
光毒性試験
M2 = ボスチニブの酸化的脱塩素化体；NA = 適用せず
すべての経口投与毒性試験におけるボスチニブの投与液は，2%ポリソルベート 80，0.5%メチル
セルロースおよび 0.06%酢酸の精製水溶液からなる溶媒を用いて調製した。
2.6.6.1.1. 単回投与毒性試験
ボスチニブの単回経口投与による概略の致死量はマウスで 2000 mg/kg 以上，ラットで 700～
2000 mg/kg で，単回腹腔内投与による概略の致死量はマウスで 20～70 mg/kg，ラットで 70～
200 mg/kg であった。イヌにおける急性毒性を 10 日間経口投与用量設定試験において評価した結
果，明らかな急性毒性発現用量は 37.5 mg/kg と考えられた。
2.6.6.1.2. 反復投与毒性試験
ラット 1 ヵ月間反復投与毒性試験において，ボスチニブを 0，10，30 または 70 mg/kg/日の用量で
経口投与した。本試験ではいずれの用量においてもボスチニブ投与による死亡または毒性変化は
みられなかったことから，無毒性量（NOAEL）は最高用量の 70 mg/kg/日と考えられた。0，100
または 200 mg/kg/日の用量で追加実施したラット 1 ヵ月間反復投与毒性試験においては，
200 mg/kg/日で消化管毒性に伴う一般状態の悪化による死亡または安楽殺がみられた。100 mg/kg/
日では体重および摂餌量の減少ならびに消化管の病理組織学的変化（小腸杯細胞の肥大・過形成
および盲腸または結腸の粘膜過形成）が認められたことから，NOAEL は 100 mg/kg/日未満と考
えられた。なお，28 日間の休薬期間後においても雌の体重減少は回復しなかった。
ラット 6 ヵ月間反復投与毒性試験において，ボスチニブを 0，10，30 または 100/70 mg/kg/日の用
量で経口投与したa。30 mg/kg/日の雌 1 例ならびに 100/70 mg/kg/日の雄 3 例および雌 6 例で消化
管毒性に起因すると考えられる死亡が認められ，これらの死亡動物では一般状態変化（糞便異常
ならびに粗毛，自発運動低下，外観蒼白化および円背位など衰弱を示唆する変化），体重減少，
剖検所見（胃および腸管の粘膜赤色巣，びまん性粘膜変色，異常内容物または拡張）または病理
組織学的所見（腸管の出血，びらんおよび浮腫，混合炎症細胞浸潤，粘膜過形成など）が認めら
れた。100/70 mg/kg/日群の生存例では糞便異常などの一般状態変化，体重減少ならびに消化管毒
a
100 mg/kg/日では死亡，重度の一般状態の変化および体重減少がみられたため，投与 7 週より 70 mg/kg/
日に減量した。
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ボスチニブ水和物
2.6.6 毒性試験の概要文
性を示唆する剖検所見（腸壁の肥厚および小腸膨満）および病理組織学的所見（腸管の粘膜過形
成，杯細胞肥大・過形成および内腔拡張）がみられた。100/70 mg/kg/日で死亡，体重減少および
消化管毒性が発現したことから，雄の NOAEL は 30 mg/kg/日と考えられた。雌では 30 mg/kg/日
で本薬投与による死亡が 1 例みられたことから，NOAEL は 10 mg/kg/日と考えられた。
イヌ 1 ヵ月間反復投与毒性試験において，ボスチニブを 0，0.5，1.5 または 5 mg/kg/日の用量で摂
食下経口投与した。ボスチニブ投与による死亡は認められなかった。1.5 mg/kg/日以上で糞便異常
（粘液便，液状便，赤色物質含有便）の発現頻度または回数のわずかな増加が認められたのみで
あり，その他の検査項目に変化は認められなかったことから，NOAEL は 5 mg/kg/日と考えられ
た。
イヌ 2 週間反復投与忍容性試験において，ボスチニブを 10 および 20 mg/kg/日の用量で経口投与
した。死亡例は認められなかったが，20 mg/kg/日では顕著な体重減少および摂餌量減少等の所見
がみられ，忍容性は不良と考えられた。10 mg/kg/日では認められた一般状態変化は軽度であり，
体重，摂餌量ならびに血液学的検査および血液生化学的検査パラメータの変化も認められなかっ
た。
イヌ 9 ヵ月間反復投与毒性試験において，ボスチニブを 0，1，3 または 10 mg/kg/日の用量で経口
投与した。死亡例は認められなかった。10 mg/kg/日の雌で投与期間中の体重増加量の軽度な抑制
がみられたものの，雌雄とも投与終了時の体重にはボスチニブ投与による影響は認められなかっ
た。本薬投与による糞便異常（液状便，軟便）または嘔吐が，投与期間中に 1 および 3 mg/kg/日
群の雄の各 1 例ならびに 10 mg/kg/日群の雌雄に認められた。糞便異常に伴ってアルブミンおよび
総蛋白質が軽微に増加または減少し，病理組織学的検査では十二指腸に軽微な陰窩膿瘍が認めら
れた。しかしながら，これらの変化は散発的かつ一過性で，動物の全般的な健康状態に影響を及
ぼさなかったことから，毒性変化ではないと考えられた。NOAEL は 10 mg/kg/日と考えられた。
一連の反復投与毒性試験の結果，消化管がラットおよびイヌにおけるボスチニブの毒性の主たる
標的臓器であると考えられた。消化管毒性はラットではおおむね 30～70 mg/kg/日以上，イヌでは
20 mg/kg/日以上で発症し，数倍程度の用量増加で投与中止もしくは多数例の死亡発生に至る，急
峻な用量反応関係を示した。
2.6.6.1.3. 遺伝毒性試験
ボスチニブは in vitro（細菌を用いた復帰突然変異試験およびヒト末梢リンパ球を用いた染色体異
常試験）および in vivo（マウス小核試験）において遺伝毒性を示さなかった。
2.6.6.1.4. がん原性試験
ラット 2 年間がん原性試験において，ボスチニブを雄は 0，2.5，7.5 または 25 mg/kg/日の用量で，
雌は 1.5，5 または 15 mg/kg/日の用量で経口投与したところ，ボスチニブの投与に関連した腫瘍
性病変の発現率の増加は認められなかった。すべてのボスチニブ投与群で消化管に病理組織学的
変化（びらん/潰瘍，扁平上皮過形成/過角化または粘膜コラーゲン沈着など）が認められたこと
から，非腫瘍性変化に関する NOAEL は求められなかった。
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2.6.6 毒性試験の概要文
2.6.6.1.5. 生殖発生毒性試験
ラット受胎能及び着床までの初期胚発生に関する試験において，ボスチニブを雄ラットには 0，
10，30 または 70 mg/kg/日の用量で，雌ラットには 0，3，10 または 30 mg/kg/日の用量で経口投
与した。雄では 70 mg/kg/日で一般状態の悪化および体重減少による安楽殺，軟便および糞量減少
などの一般状態変化，体重および摂餌量の減少ならびに授胎能低下が認められたことから，雄動
物の一般毒性および生殖能に関する NOAEL はいずれも 30 mg/kg/日と考えられた。雌の高用量
（30 mg/kg/日）では母体毒性（流涎および補正体重増加量の減少）ならびに着床数の減少および
吸収胚数の増加がみられ，それにより生存胚数が減少したことから，母動物の一般毒性に関する
NOAEL は 10 mg/kg/日と考えられた。10 mg/kg/日で胚吸収率の増加が認められたことから，母動
物の生殖能および初期胚発生に関する NOAEL は 3 mg/kg/日と考えられた。
ラット胚・胎児発生に関する試験において，ボスチニブを妊娠ラットに 0，1，3 または 10 mg/kg/
日の用量で経口投与した。いずれの用量でも死亡例および母体毒性は認められなかった。
10 mg/kg/日で胎児に腎盂拡張ならびに前頭骨，頭頂骨および頭頂間骨の骨化不全の発現頻度増加
が認められたが，いずれも一時的かつ可逆的な発生の遅延を示すものであり，毒性学的意義は乏
しいと考えられた。したがって，母動物の一般毒性および胚・胎児発生に関する NOAEL は
10 mg/kg/日と考えられた。
ウサギ胚・胎児発生に関する試験において，ボスチニブを 0，3，10，または 30 mg/kg/日の用量
で経口投与した。ボスチニブ投与による死亡例は認められなかった。30 mg/kg/日で母体毒性（糞
便異常ならびに体重および摂餌量の減少）および胚・胎児毒性（胎児体重減少ならびに内臓およ
び骨格の異常の発現頻度増加）が認められたことから，母動物の一般毒性および胚・胎児発生に
関する NOAEL はいずれも 10 mg/kg/日と考えられた。
2.6.6.1.6. 代謝物 M2 の毒性試験
ボスチニブの代謝物 M2（酸化的脱塩素体）のラット 2 週間反復投与毒性試験において，M2 を 0，
70 または 210 mg/kg/日の用量で経口投与した結果，M2 投与による所見は認められず，NOAEL
は最高用量の 210 mg/kg/日と考えられた。
M2 は in vitro（細菌を用いた復帰突然変異試験およびヒト末梢リンパ球を用いた染色体異常試験）
において遺伝毒性を示さなかった。
2.6.6.1.7. 光毒性試験
ボスチニブを有色（Long-Evans）ラットに 10 または 100 mg/kg/日の用量で 2 日間経口投与した後
背部皮膚および眼に紫外線照射したところ，光毒性は認められなかった。
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ボスチニブ水和物
2.6.6 毒性試験の概要文
2.6.6.2. 単回投与毒性試験
ボスチニブの単回投与毒性は，マウスおよびラットを用いて，2000 mg/kg までの経口投与および
200 mg/kg までの腹腔内投与により検討した（毒性試験の概要表，2.6.7.5；Table 2）。それぞれの
試験において，動物を投与後 15 日まで観察した。検査項目は生死，一般状態，体重および剖検
とした。また，イヌにおける急性毒性は，10 日間経口投与用量設定試験（RPT-50039）の第 2 群
および第 3 群において評価した（2.6.6.3.5 項）。
2.6.6.2.1. マウス
4.2.3.1.1 RPT-52017，4.2.3.1.2 RPT-52016
マウス経口投与試験（投与量 0 および 2000 mg/kg，RPT-52017）では，2000 mg/kg までの用量で
死亡または本薬投与による一般状態の変化は認められず，概略の致死量は 2000 mg/kg 超と考えら
れた。
マウス腹腔内投与試験（投与量 0，20，70 または 200 mg/kg，RPT-52016）では，20 mg/kg では死
亡または本薬投与による一般状態の変化は認められなかったが，70 mg/kg 以上を投与した全例が
試験 2～4 日に死亡または安楽殺された。死亡例で認められた一般状態の変化は眼瞼下垂，皮膚
テント陽性（脱水の指標），自発運動低下，外観蒼白化，円背位，冷触感，爪先立ち歩行または
流涙で，剖検では胃，盲腸，十二指腸，回腸または空腸に膨満が認められた。以上の結果から概
略の致死量は 20～70 mg/kg と考えられた。
2.6.6.2.2. ラット
4.2.3.1.3 RPT-52013，4.2.3.1.4 RPT-52015
ラット経口投与試験（投与量 0，200，700 または 2000 mg/kg，RPT-52013）では，200 mg/kg では
死亡または本薬投与による一般状態の変化は認められなかった。700 mg/kg でも死亡例は認めら
れなかったが，雌においてのみ一般状態の変化（糞便異常，被毛への糞の付着）および体重減少
が認められた。2000 mg/kg で全例が投与 4～5 日に死亡または安楽殺された。同群で観察された
一般状態変化は，700 mg/kg でみられた上記の所見に加え，皮膚テント陽性，眼・鼻・口周囲の
赤色物質，会陰部被毛の黄色化，自発運動低下，円背位または眼瞼下垂であった。剖検では腸管
の赤色化および膨満が認められた。以上の結果から概略の致死量は 700～2000 mg/kg と考えられ
た。
ラット腹腔内投与試験（投与量 0，20，70 または 200 mg/kg，RPT-52015）では，70 mg/kg までの
用量では死亡または本薬投与による一般状態の変化は認められなかった。200 mg/kg では，雄の
全例および雌の 1/3 例を投与 6 日に安楽殺した。これらの死亡例に認められた一般状態変化は平
伏歩行，自発運動低下，皮膚テント陽性，眼・鼻・口周囲の赤色物質，勃起持続，腹部膨満，糞
便異常，被毛への糞の付着，外観蒼白化または頻呼吸であった。以上の結果から概略の致死量は
70～200 mg/kg と考えられた。
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ボスチニブ水和物
2.6.6 毒性試験の概要文
Table 2.
マウスおよびラット単回投与毒性試験の概要
マウス
経口
腹腔内
3
3
用量
(mg/kg)
0, 2000
0, 20, 70, 200
ラット
経口
腹腔内
3
3
0, 200, 700, 2000
0, 20, 70, 200
動物種
投与経路 動物数/性/群
概略の致死量
(mg/kg)
> 2000
20～70
700～2000
70～200
2.6.6.2.3. イヌ
イヌ 10 日間経口投与用量設定試験（RPT-50039）の第 2 群においてボスチニブを 150 mg/kg/日の
用量で投与したところ，全例で投与 1 日より嘔吐および液状便が認められ，投与 3 日の投与後ま
たは投与 4 日の投与前には，一般状態の悪化のため安楽殺に至った。第 3 群における 75 mg/kg
での単回投与（空腹時），37.5 mg/kg/日での投与 1 日（空腹時）および 37.5 mg/kg での単回投与
（摂食下）でも嘔吐，糞便異常，流涎または削痩が認められた。体重の変化はみられなかったが，
37.5 mg/kg の摂食下投与では摂餌量減少（無摂餌ないし給餌量の 4 分の 1）が認められた。第 4
群（5 mg/kg/日，10 日間投与）では散発的な糞便異常がみられたのみであったことから，本試験
でのイヌにおける明らかな急性毒性発現用量は 37.5 mg/kg と考えられた。
2.6.6.3. 反復投与毒性試験
ボスチニブの反復投与毒性を，ラットを用いた 7 日間投与用量設定試験，2 つの 1 ヵ月間投与毒
性試験（うち 1 試験は 1 ヵ月間の回復期間を含む）および 6 ヵ月間投与毒性試験ならびにイヌを
用いた 10 日間投与用量設定試験，1 ヵ月間投与毒性試験，2 週間投与忍容性試験および 9 ヵ月間
投与毒性試験（1 ヵ月間の回復期間を含む）で検討した。
2.6.6.3.1. ラット 7 日間経口投与用量設定試験
4.2.3.2.1 RPT-49310（参考），4.2.3.2.2 RPT-50258（参考）
ボスチニブを，Sprague-Dawley（SD）ラット（1 群雌雄各 5 匹）に，0（溶媒対照）または 100 mg/kg/
日の用量で 7 日間，300 mg/kg/日の用量で 3 日間あるいは 1000 mg/kg/日の用量で 2 日間経口投与
した（RPT-49310；毒性試験の概要表，2.6.7.6）。検査項目は生死，一般状態，体重，摂餌量，
血液学的検査，血液生化学的検査，器官重量，剖検および病理組織学的検査（溶媒対照群および
100 mg/kg/日群のみ）とした。別途トキシコキネティクス（TK）測定のためのサテライト群を設
け，投与 4 日（300 mg/kg/日群の雌雄各 9 例）および 7 日（100 mg/kg/日群の雌 9 例）に採血を行っ
た（RPT-50258；毒性試験の概要表，2.6.7.7）。1000 mg/kg/日群のサテライト動物（雌 9 例）は
試験 3 日に安楽殺し，これらの動物については TK 測定を実施しなかった。
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ボスチニブ水和物
2.6.6 毒性試験の概要文
300 mg/kg/日群は投与 4 日，1000 mg/kg/日群は投与 3 日の投与前に，すべての動物を安楽殺した。
これらの動物では本薬投与に関連した一般状態の変化として，糞便異常，爪先立ち歩行，円背位，
運動失調，自発運動低下，冷触感，脱水，眼瞼下垂，眼・鼻・口周囲の赤色物質，立毛，呼吸困
難，腹部膨満または会陰部被毛の黄色化が認められた。投与 3 日の投与前には 1000 mg/kg/日で体
重減少（雄で-13%，雌で-6.5%；溶媒対照群との比較，以下同じ）および摂餌量減少（雄で-77%，
雌で-71%）がみられ，300 mg/kg/日でも体重増加量減少（雄で-70%，雌で-97%）および摂餌量減
少（雄で-57%，雌で-67%）が認められた。剖検では，300 mg/kg/日以上の全例で，本薬投与に関
連した腺胃，前胃，十二指腸，空腸，回腸，盲腸および結腸の膨満が観察された。また，300 mg/kg/
日の雄 4/5 例，雌 4/5 例および 1000 mg/kg/日の雄 3/5 例，雌 4/5 例で腸間膜リンパ節の変色（赤
色または暗色）が，1000 mg/kg/日の雌 1/5 例で脾臓の小型化が認められた。
TK 群では 100 mg/kg/日の雌 2 例が投与 7 日の採血後に死亡したが，これらは後眼窩静脈叢採血
の手技による事故死と考えられた。
100 mg/kg/日群における一般状態の変化として，雌 2 例で糞便異常（軟便または粘液便）が投与 5
日から，雌 1 例で鼻・口周囲の赤色物質付着が投与 6 日から，いずれも投与期間終了時まで認め
られた。また，流涎および糞量減少がそれぞれ雌 1 例にみられたが，1 日間観察されたのみであっ
た。
100 mg/kg/日では体重の変化はみられなかった。摂餌量の減少（-19.9%）が投与 7 日に同群の雌
で認められたが，体重減少を伴わなかった。
100 mg/kg/日群の動物では，血液学的検査および血液生化学的検査において顕著な変化は認めら
れなかった。
100 mg/kg/日の雌で肝臓の絶対および相対重量（体重比および脳重量比）の増加（17%～23%）が
認められ，病理組織学的検査でも同群の雌の肝臓に肝細胞肥大がみられた。100 mg/kg/日の雌に
おいては副腎の絶対および相対（脳重量比）重量にもそれぞれ 16%および 20%の増加がみられた。
100 mg/kg/日群で観察された病理組織学的所見として，軽度から中等度の空腸，回腸または結腸
の内腔拡張（しばしば剖検でも膨満がみられた），軽度から中等度の十二指腸（雄 1 例），空腸，
回腸および結腸（雄 1 例）における杯細胞の肥大または過形成および脾臓における軽度から中等
度の辺縁帯枯渇が認められた。なお，剖検でみられた腸間膜リンパ節の赤色化または暗色化と関
連して軽度から重度のリンパ洞の赤血球増加が認められたが，赤血球パラメータ（赤血球数，ヘ
マトクリット，ヘモグロビン量）の減少あるいは腸管の出血を伴うものではなく，毒性変化では
ないと考えられた。
以上，100 mg/kg/日で腸管における杯細胞の肥大または過形成などの所見が，300 mg/kg/日以上で
一般状態の悪化を伴う安楽殺例が認められた。100 mg/kg/日群の雌における曝露量（AUC(0-24)）
は 16924 ng•h/mL であった。
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ボスチニブ水和物
2.6.6 毒性試験の概要文
2.6.6.3.2. ラット 1 ヵ月間経口投与毒性試験
4.2.3.2.3 RPT-52772，4.2.3.2.4 RPT-52934
ボスチニブを，SD ラット（1 群雌雄各 15 匹）に，0（溶媒対照），10，30 または 70 mg/kg/日の
用量で 1 ヵ月間経口投与した（RPT-52772；毒性試験の概要表，2.6.7.10）。高用量は先に実施し
たラット 7 日間投与用量設定試験（2.6.6.3.1 項）の結果に基づいて選択した。当該試験において
は，300 mg/kg/日以上の群で糞便異常による脱水ならびに体重または体重増加量および摂餌量の
減少がみられたため，投与 4 日までに全例を安楽殺した。100 mg/kg/日群の雌でも糞便異常およ
び摂餌量減少がみられ，300 mg/kg/日以上で安楽殺に至ったのと同じ消化管毒性が発現したこと
を示唆する所見であったため，100 mg/kg/日での 28 日間の投与には耐えられないものと予測され
た。したがって，本試験の高用量として 70 mg/kg/日を選択した。検査項目は，生死，一般状態，
体重，摂餌量，血液学的検査，血液生化学的検査，眼科学的検査，器官重量，剖検および病理組
織学的検査とした。別途サテライト群（1 群雌雄各 9 例）を設け，投与 1 日（30 mg/kg/日群）お
よび 28 日（10，30 および 70 mg/kg/日群）に TK 測定を実施した（RPT-52934；毒性試験の概要
表，2.6.7.11）。
本薬投与による死亡は認められなかった。溶媒対照群の雄 1 例および 70 mg/kg/日 TK 群の雌 1 例
が，それぞれ採血後および経口投与後に死亡したが，これらは事故死と判断された。
一般状態観察，体重，摂餌量，眼科学的検査または剖検では，本薬投与による変化は認められず，
血液学的検査，血液生化学的検査，器官重量または病理組織学的検査でも毒性変化は観察されな
かった。10 mg/kg/日以上の雌雄で腸間膜リンパ節のリンパ洞赤血球増加（軽微～顕著）およびヘ
モジデローシス（軽度～中等度）が認められた。このヘモジデローシスは，リンパ洞での赤血球
増加に伴う赤血球の破壊により生じたと考えられる。しかしながら，これらの変化は赤血球パラ
メータ（赤血球数，ヘマトクリット，ヘモグロビン量）の減少を伴わず，消化管の剖検および病
理組織学的検査でも出血が認められなかったことから，毒性変化ではないと考えられた。
曝露量は，雌雄ともにおおむね用量比を上回って増加した。吸収速度は中等度で，Tmax 値は 3～5
時間であった。投与 28 日の 10，30 および 70 mg/kg/日群における用量補正した曝露量（AUC/用
量）は，雌（それぞれ 147，167 および 201）において雄（それぞれ 32，56 および 59）より高かっ
た。ラットの曝露量における性差については，雄ラットにおける代謝が雌より速やかであること
に関連している可能性が考えられる（2.6.4.5.1.2 項）。30 mg/kg/日の 28 日間連日経口投与による
蓄積はほとんど認められなかった（蓄積比は雄で 1.3，雌で 1.0）。
以上，ボスチニブ投与による死亡および一般状態の毒性変化はみられず，体重，摂餌量，臨床検
査，眼科学的検査，器官重量，剖検および病理組織学的検査においても本薬投与による毒性変化
はみられなかったことから，本試験における無毒性量（NOAEL）は 70 mg/kg/日と考えられた。
NOAEL における曝露量（AUC(0-24)）は，雄で 4092 ng•h/mL，雌で 14090 ng•h/mL で，これは日本
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2.6.6 毒性試験の概要文
人 CML 患者に臨床用量の 500 mg を投与したときの AUC(0-)（3690 ng•h/mL）aのそれぞれ 1.1 倍
および 3.8 倍であった。
2.6.6.3.3. ラット 1 ヵ月間経口投与毒性試験および 1 ヵ月間回復性試験
4.2.3.2.5 RPT-57924
ボスチニブの標的器官毒性をさらに検討し，変化の回復性を評価するとともに，これ以降の毒性
試験における用量を適切に設定するために本試験を実施した（毒性試験の概要表，2.6.7.12）。ボ
スチニブを，SD ラット（1 群雌雄各 15 匹）に 0（溶媒対照），100 または 200 mg/kg/日の用量で
1 日 1 回，1 ヵ月間経口投与した。先に実施した 1 ヵ月間試験（RPT-52772）では，100 mg/kg/日
での 28 日間の投与には耐えられないものと予測し高用量を 70 mg/kg/日に設定したが，結果的に
は 70 mg/kg/日が NOAEL と判断され，また 7 日間試験（RPT-49310）では 300 mg/kg/日群が投与
4 日に全例安楽殺に至ったことから，本試験の投与量を 100 および 200 mg/kg/日に設定した。投
与期間終了後，溶媒対照群および 100 mg/kg/日群の一部の動物について 28 日間の休薬期間をおき，
本薬投与による変化の回復性を評価した。検査項目は生死，一般状態，体重，摂餌量，眼科学的
検査，血液学的検査，血液生化学的検査，器官重量，剖検および病理組織学的検査とした。
200 mg/kg/日群では，先の試験で認められた消化管毒性と関連すると考えられる重度の一般状態
変化（糞便異常，脱水，鼻・口周囲の赤色物質付着，会陰部被毛の黄色化，爪先立ち歩行，削痩
および円背位），体重減少（-27%～-38%）および摂餌量減少（-67%～-85%）が認められ，投与
14 日までに全例が死亡または安楽殺された。これらの動物では投与 7 日に本薬投与と関連する赤
血球パラメータ（赤血球数，ヘモグロビン量またはヘマトクリット）の増加（5%～11%）がみら
れ，これは主として脱水を反映した変化と考えられた。腸管粘膜の病理組織学的変化に伴う炎症
を示唆する臨床病理検査値の変化として，軽度から重度の好中球数増加（373%～1086%）および
フィブリノーゲン量の増加（25%～37%）がみられた。200 mg/kg/日群の死亡例における本薬投与
による病理組織学的変化として，消化管の変化（盲腸および結腸の出血，粘膜過形成，浮腫およ
び内腔拡張；十二指腸，空腸および回腸の絨毛萎縮，出血，内腔拡張および粘液性腺過形成；前
胃の潰瘍形成および過角化）および肝細胞肥大が観察された。また，消化管毒性に起因する衰弱
および体調の悪化により生じた二次的変化と考えられる病理組織学的変化として，胸腺および脾
臓のリンパ組織萎縮，副腎皮質の肥大などが認められた。
100 mg/kg/日群では本薬投与による死亡は認められなかった。雄 1 例および雌 1 例がそれぞれ投
与 7 日および 28 日に死亡したが，採血手技による事故死と考えられた。同群では，一般状態観
察，眼科学的検査，血液学的検査，血液生化学的検査，器官重量または剖検において毒性変化は
みられなかったが，投与 28 日には溶媒対照群と比較して体重の減少（雄で-13%，雌で-10%）お
よび体重増加量の減少（雄で-27%，雌で-29%）が認められ，それに関連して摂餌量減少（雄で-7%，
雌で-9%），腸管粘膜細胞のターンオーバーの加速を示唆する消化管の病理組織学的変化（小腸
杯細胞の肥大・過形成および盲腸または結腸の粘膜過形成）が認められた。その他の本薬投与に
よる病理組織学的所見として，腸間膜リンパ節のリンパ洞赤血球増加およびヘモジデローシス，
脾臓，リンパ節および胸腺のリンパ組織萎縮ならびに肝細胞肥大がみられたが，いずれも軽微な
a
3160A4-2203-JA 臨床試験（B1871007）において，日本人 CML 患者にボスチニブ 500 mg を 1 日 1 回反復
投与したときの投与 15 日の値（2.7.2.2.4.4 項）
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ボスチニブ水和物
2.6.6 毒性試験の概要文
変化であり，腸間膜リンパ節の所見は腸管の出血を伴っていないことからも，毒性変化ではない
と考えられた。100 mg/kg/日群でみられた本薬投与による変化の大部分には回復性が認められた
が，雌の体重減少は回復しなかった。
以上，100 mg/kg/日群で本薬投与による体重および摂餌量の減少がみられ，それに伴う消化管の
病理組織学的変化が認められたことから，本試験においてボスチニブを雌雄のラットに 28 日間
経口投与したときの NOAEL は 100 mg/kg/日未満と考えられた。なお，28 日間の休薬期間後にお
いても雌の体重減少は回復しなかった。
2.6.6.3.4. ラット 6 ヵ月間経口投与毒性試験
4.2.3.2.6 RPT-63644，4.2.3.2.7 RPT-64288
ボスチニブを雌雄の SD ラット（1 群雌雄各 20 匹）に 6 ヵ月間経口投与した（RPT-63644；毒性
試験の概要表，2.6.7.13）。試験開始時の用量は 0（溶媒対照），10，30 および 100 mg/kg/日であっ
たが，投与 6 週には 100 mg/kg/日群の動物で死亡例がみられ，重度の一般状態の変化および体重
減少が認められたことから，投与 7 週
（43 日）
より高用量群の投与量を 100 mg/kg/日から 70 mg/kg/
日に減量した（以後，高用量群を 100/70 mg/kg/日と記載する）。本試験における当初の投与量は，
2 回目の 1 ヵ月間試験（2.6.6.3.3 項）より 100 mg/kg/日の忍容性が良好と考えられたことから
100 mg/kg/日を高用量として設定した。検査項目は生死，一般状態，体重，摂餌量，血液学的検
査，血液生化学的検査，眼科学的検査，器官重量，剖検および病理組織学的検査とした。別途
（投与 5 時間後のみ）
，10，
30 および 100/70 mg/kg/
TK 用のサテライト群
［0 mg/kg/日では雌雄各 3 匹
日では雌雄各 9 匹］
を設け，投与 180 日に採血を行った
（RPT-64288；毒性試験の概要表，
2.6.7.14）
。
溶媒対照群を含むすべての投与群で死亡が認められた（Table 3）。18例の途中死亡動物のうち，
10例がボスチニブ投与による消化管毒性に起因する死亡と考えられ，30 mg/kg/日の雌1例で投与
168日に，100/70 mg/kg/日の雄3例，雌6例で投与36～159日に認められた（主試験群およびTK群の
合算）。これらの動物における一般状態の変化は，体重減少，糞便異常（無排便，糞量減少，液
状便，被毛への便付着），眼または鼻・口周囲の赤色物質，粗毛（100/70 mg/kg/日群のみ），自
発運動低下（雌のみ），外観蒼白化または円背位（雌のみ）ならびに会陰部被毛の黄色化
（100/70 mg/kg/日群の雌のみ）であった。薬物投与に関連する消化管の剖検および病理組織学的
所見は100/70 mg/kg/日の雌のみに認められ，剖検所見としては胃および腸管の粘膜赤色巣，び
まん性粘膜変色，異常内容物または拡張がみられた。病理組織学的所見としては，盲腸および結
腸の出血，びらんおよび浮腫，十二指腸，空腸および回腸の出血，びらん，混合炎症細胞浸潤お
よび粘膜過形成，腸間膜リンパ節のヘモジデローシスおよびリンパ洞の赤血球増加が観察され
た。また，消化管毒性に起因する衰弱および体調の悪化により生じた二次的変化と考えられる病
理組織学的変化として，胸腺および脾臓のリンパ組織萎縮，副腎皮質の肥大などが認められた。
その他，薬物投与に関連しない 8 例の途中死亡（溶媒対照群の雄 3 例，10 mg/kg/日の雄 2 例，
30 mg/kg/日の雄 2 例および 100/70 mg/kg/日の雌 1 例）のうち 7 例には事故による傷害の所見がみ
られた。10 mg/kg/日の雄 1 例における死因は不明であったが，ボスチニブ投与に起因する死亡例
にみられた体重減少，糞便異常，眼または鼻・口周囲の赤色物質，粗毛，自発運動低下等の一般
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ボスチニブ水和物
2.6.6 毒性試験の概要文
状態変化および薬物投与に関連する消化管の剖検および病理組織学的所見がみられなかったこ
とから，薬物投与との関連は低いものと考えられた。
Table 3.
ラット 6 ヵ月間試験における途中死亡例の発現頻度および死因（RPT-63644）
所見
------------------雄--------------------------用量（mg/kg/日）--------0
10
30
100/70
-----------------雌-------------------------用量（mg/kg/日）--------0
10
30
100/70
途中死亡
投与 1～42 日
投与 43～176 日
合計 a
1
2
3
1
1
2
0
2
2
1
2
3
0
0
0
0
0
0
0
1
1
3
4
7
死因
経口投与時の傷害
傷害
採血手技
薬物投与による消化管毒性
不明，投与との関連なし
2
1
-
1
1
2
-
3
-
-
-
1
-
1
6
-
a
主試験群と TK 群の合計（投与 1～176 日）
生存例におけるボスチニブ投与による一般状態の変化は，高用量（100/70 mg/kg/日）群で最も顕
著に認められた。投与 3 週頃よりみられた最も顕著な一般状態の変化としては，軟便，液状便，
流涎，鼻・口周囲の赤色物質付着，粗毛，被毛への便付着，会陰部被毛の黄色化ならびに頸部・
胸部の脱毛が認められた。これらの一般状態の変化は 70 mg/kg/日への減量後にはほとんど認めら
れなかったが，液状便は投与 18 週に再発し（70 mg/kg/日），投与期間終了時まで散発的に観察
された。100/70 mg/kg/日群においては雄で 18%，雌で 12%の体重減少（溶媒対照群との比較，投
与 26 週）が認められ，減少の程度が大きかったことから毒性変化と考えられた。同群の雄では
投与 19 週に摂餌量の減少（-7%～-8%）がみられたが，投与 26 週には溶媒対照群と同程度に回復
した。雌の摂餌量は 70 mg/kg/日への減量前の最後の 2 週間に 4%減少したのみであった。
血液学的検査値の変化として，30 mg/kg/日以上で好中球数増加（28%～894%），フィブリノーゲン
量増加（5%～89%），好酸球数増加（49%～191%）および単球数増加（51%～284%）が，100/70 mg/kg/
日ではさらに白血球数増加（32%～133%）および血小板数増加（19%～49%）が認められた。血
液生化学的検査値の変化としては，100/70 mg/kg/日でアルブミン減少（-8%～-34%）およびグロ
ブリン増加（雌で 20%）が認められた。これらの血液学的および血液生化学的検査値の変化は，
変化の程度が軽度であるか，あるいはボスチニブ投与による消化管における病理所見と関連した
炎症を示唆する二次的変化と考えられたことから，毒性変化ではないと考えられた。
眼科学的所見は認められなかった。
特に 100/70 mg/kg/日の雌の甲状腺において，絶対および相対重量（体重比および脳重量比）の増
加に伴って，剖検では甲状腺腫大が，病理組織学的検査では軽度から中等度のコロイド増加が認
められた。甲状腺の腫大はおおむね軽度または中等度であり，変性，過形成または再生性の変化
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ボスチニブ水和物
2.6.6 毒性試験の概要文
を伴わなかったことから，毒性変化ではないと考えられた。ラットは甲状腺ホルモン代謝の変化
の影響に対して特に感受性が高いことが知られておりa，ラットの甲状腺で観察された上記の変化
のヒトへの外挿性は低いものと考えられる。100/70 mg/kg/日の副腎においては，絶対および相対
重量（体重比および脳重量比）の増加に伴って，病理組織学的検査では副腎皮質の空胞化（軽微～
中等度）および肥大（軽微～軽度）が認められた。副腎におけるこれらの変化は，ボスチニブ投
与による全身状態の悪化に伴うストレス反応による可能性が考えられた。その他，心臓，肝臓，
卵巣，下垂体および精巣の重量（絶対または相対）増加が認められたが，いずれも関連する病理
組織学的所見を伴うものではなく，毒性変化ではないと考えられた。
消化管では，剖検所見として 100/70 mg/kg/日で腸壁の肥厚および小腸膨満が，病理組織学的所見
としては十二指腸（30 mg/kg/日以上）および空腸（100/70 mg/kg/日）における軽微から軽度の粘
膜過形成，回腸における軽微から軽度の杯細胞肥大・過形成（10 mg/kg/日以上），十二指腸，回
腸および空腸における軽微から軽度の内腔拡張（100/70 mg/kg/日，空腸は雄のみ），十二指腸お
よび空腸における軽微な粘膜出血（100/70 mg/kg/日，空腸は雄のみ）ならびに回腸における軽微
な粘膜出血（30 mg/kg/日以上の雄）が観察された。これらのうち，腸管粘膜出血ならびに 30 mg/kg/
日以下でみられた腸管粘膜の過形成，内腔拡張および杯細胞肥大・過形成は軽微な変化であるこ
とから，毒性変化ではないと考えられた。腸間膜リンパ節では，腫大および変色に伴う病理組織
学的所見として，10 mg/kg/日以上の雌雄で軽微から重度のリンパ洞赤血球増加またはヘモジデ
ローシスが認められたが，この所見は腸管粘膜の軽微な出血に伴う二次的変化であり，毒性変化
ではないと考えられた。
ボスチニブの曝露量は用量の増加に伴って増加したが，雌の増加は用量比を下回った。いずれの
用量においても，雌における曝露量は雄よりも統計学的に有意に高かった。
以上，
ボスチニブを雌雄のラットに 6 ヵ月間経口投与したときの NOAEL は，雄では 100/70 mg/kg/
日で死亡，体重減少および消化管毒性がみられたことから 30 mg/kg/日と考えられ，この用量にお
ける曝露量（AUC(0-24)）は 3810 ng•h/mL であった。雌では，さらに 30 mg/kg/日で本薬投与によ
ると考えられる死亡が 1 例みられたことから，NOAEL は 10 mg/kg/日と考えられ，この用量にお
ける曝露量（AUC(0-24)）は 4387 ng•h/mL であった。雄および雌の NOAEL における曝露量は，日
本人 CML 患者における曝露量のそれぞれ 1.0 倍および 1.2 倍であった。
2.6.6.3.5. イヌ 10 日間経口投与用量設定試験
4.2.3.2.8 RPT-50039（参考），4.2.3.2.9 RPT-53053（参考）
ボスチニブを雌ビーグル犬（1 群 2～3 匹）に，0（溶媒対照），5，37.5，75 または 150 mg/kg/
日の用量で投与した（RPT-50039；毒性試験の概要表，2.6.7.6）。投与群の構成は以下のとおり
とした。なお，第 2 群および第 3 群では，10 日間投与する予定であったところ，以下に詳述する
一般状態悪化により投与を中止し，安楽殺，減量または給餌の措置を実施した。
第 1 群（n = 3）：溶媒対照群。第 2 群以降の各薬物投与群と同じスケジュールで溶媒を投与した。
a
Capen CC. Comparative anatomy and physiology. In: Braverman LE, Utiger RD, eds. Werner & Ingbar’s The
Thyroid: A Fundamental and Clinical Text. 8th ed. Philadelphia, PA: Lippincott Williams & Wilkins; 2000:p.20-43.
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ボスチニブ水和物
2.6.6 毒性試験の概要文
第 2 群（n = 3）：ボスチニブ 150 mg/kg/日を 3 日間（空腹時）投与した。
第 3 群（n = 3）：ボスチニブを 75 mg/kg で単回（空腹時），37.5 mg/kg/日で 2 日間（空腹時）お
よび 37.5 mg/kg で単回（摂食下）投与した。各投与の間には 5～9 日間の休薬期間をおいた。
第 4 群（n = 2）：ボスチニブ 5 mg/kg/日を 10 日間（摂食下）投与した。
検査項目は生死，一般状態，体重，摂餌量，血液学的検査，血液生化学的検査，器官重量（第 1
および 4 群），剖検（第 1，2 および 4 群）および病理組織学的検査（第 1 および 4 群）とした。
TK 測定はすべてのボスチニブ投与群で投与 1 日に，また第 4 群（5 mg/kg/日）では投与 10 日に
も実施した（RPT-53053；毒性試験の概要表，2.6.7.9）。
第 2 群（150 mg/kg/日）の全例を，投与 3 日の投与後または投与 4 日の投与前に一般状態の悪化
のため安楽殺した。これらの動物では一般状態変化として，嘔吐，糞便異常（軟便，粘液便，液
状便，変色便，赤色物質含有便），削痩および流涎が認められた。体重減少（-0.5～-1.1 kg）が
全例にみられ，3 例中 2 例で摂餌量減少（給餌量の 4 分の 1 から 2 分の 1）が認められた。これ
らの動物でみられた血液学的検査パラメータの変化（フィブリノーゲン量増加，好中球数増加，
単球数減少など）は炎症を示唆するものであり，消化管関連の一般状態の変化および剖検所見と
関連したものと考えられた。同群の剖検所見として，結腸粘膜に多巣性の赤色線状変色が認めら
れた。1 匹の動物では，胃，十二指腸，回腸および盲腸にも赤色または褐色の粘膜変色がみられ
た。十二指腸および回腸の変色は，結腸の病変と同様に線状であった。また，この群の一部の動
物では，腸間膜リンパ節の暗色化ならびに腸間膜リンパ節および縦隔リンパ節の赤色化も観察さ
れた。
第 3 群における 75 mg/kg での単回投与（空腹時），37.5 mg/kg/日での 2 回投与（空腹時）および
37.5 mg/kg での単回投与（摂食下）でも嘔吐および糞便異常が認められた。体重の変化はみられ
なかったが，37.5 mg/kg の摂食下投与では摂餌量減少（無摂餌ないし給餌量の 4 分の 1）が認め
られた。
第 4 群（5 mg/kg/日）では，いずれの動物においても糞便異常（軟便，粘液便，液状便または赤
色物質含有便）がみられたが散発的であった。その他，体重，摂餌量，血液学的検査，血液生化
学的検査，器官重量，剖検または病理組織学的検査において薬物投与に関連する変化はみられな
かった。
ボスチニブの曝露量（Cmax および AUC(0-24)）は，5～37.5 mg/kg/日の範囲では用量に比例して増加
し，37.5～150 mg/kg/日の範囲では用量比を下回って増加した。37.5 mg/kg/日の用量で摂食時投与
したイヌにおける曝露量（AUC(0-24) = 13330 ng•h/mL）は，空腹時投与したイヌの曝露量（AUC(0-24)
= 6349 ng•h/mL）の約 2 倍であった。少数例（n = 2）によるデータではあるが，5 mg/kg/日にお
ける投与 10 日での蓄積係数は，投与 1 日と比較して 1.4 であった。
以上，37.5 mg/kg/日以上の用量で嘔吐または糞便異常がみられ，安楽殺または投与中止に至った
ことから，本試験における最大耐量は 5 mg/kg/日と考えられ，この用量における曝露量（AUC(0-24)）
は 3695 ng•h/mL であった。
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ボスチニブ水和物
2.6.6 毒性試験の概要文
2.6.6.3.6. イヌ 1 ヵ月間経口投与毒性試験
4.2.3.2.10 RPT-52074，4.2.3.2.11 RPT-53029
ボスチニブをビーグル犬（1 群雌雄各 3 匹）に，0（溶媒対照），0.5，1.5 または 5 mg/kg/日の用
量で摂食下 1 ヵ月間経口投与した（RPT-52074；毒性試験の概要表，2.6.7.15）。投与量は，先に
実施したイヌ 10 日間用量設定試験（2.6.6.3.5 項）において 37.5 mg/kg/日以上で忍容性が認められ
ず，5 mg/kg/日では糞便異常がみられたものの忍容性は良好であったことから，高用量を 5 mg/kg/
日に設定した。検査項目は生死，一般状態，体重，摂餌量，血液学的検査，血液生化学的検査，
尿検査，眼科学的検査，心電図，器官重量，剖検および病理組織学的検査とした。TK 測定は投
与 1 日および 28 日に実施した（RPT-53029；毒性試験の概要表，2.6.7.16）。
5 mg/kg/日群の雄 1 例が，投与 15 および 21 日に投与過誤により被験物質を吸引し，投与後 1～2
時間に全身の紅斑，目・鼻口部・脚・包皮および耳介の浮腫，脚・鼠径部・鼻口部および耳介の
蕁麻疹，口腔粘膜蒼白，嘔吐ならびに頻呼吸等のアナフィラキシー様反応aを示唆する症状を呈し
たため，投与 21 日に安楽殺した。
生存例では一般状態，体重，摂餌量，血液学的検査，血液生化学的検査，尿検査，眼科学的検査，
心電図，器官重量，剖検および病理組織学的検査において毒性変化は認められなかった。1.5 mg/kg/
日以上で糞便異常（粘液便，液状便，赤色物質含有便）の発現頻度または回数の増加が認められ
た。しかしながら，これらの変化は散発的で一過性かつ低頻度であり，体重または摂餌量の減少
を伴わず，血液学的検査，血液生化学的検査，剖検または病理組織学的検査においても毒性変化
は認められず，動物の全般的な健康状態に影響を及ぼさなかったことから，毒性変化ではないと
考えられた。
投与 28 日における曝露量（Cmax および AUC(0-24)）は，用量の増加にほぼ比例して増加した。曝
露量に性差は認められなかった。28 日間連日投与によるボスチニブの蓄積は，いずれの用量にお
いても軽度から中等度であった（蓄積係数 1.29～1.54）。
以上，本試験では毒性所見がみられなかったことから，NOAEL は最高用量の 5 mg/kg/日と考え
られた。NOAEL における曝露量（AUC(0-24)）は，雄で 3888 ng•h/mL，雌で 3450 ng•h/mL で，そ
れぞれ日本人 CML 患者における曝露量の 1.1 倍および 0.9 倍であった。
2.6.6.3.7. イヌ 2 週間経口投与忍容性試験
4.2.3.2.12 RPT-60569（参考）
ボスチニブの毒性プロファイルをさらに検討し，イヌ 9 ヵ月間毒性試験における用量を適切に設
定する目的で，ボスチニブを雄ビーグル犬（1 群 2 匹）に，10 または 20 mg/kg/日の用量で 1 日 1
回，2 週間，摂食下経口投与した（毒性試験の概要表，2.6.7.6）。検査項目は生死，一般状態，
体重，摂餌量，血液学的検査および血液生化学的検査とした。
a
投与液に含まれるポリソルベート 80 は，イヌにおいてヒスタミン遊離を促進することが報告されている
（Masini E, Planchenault J, Pezziardi F et al. Histamine-releasing properties of Polysorbate 80 in vitro and in vivo:
correlation with its hypotensive action in the dog. Agents Actions 1985;16:470-7)。
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ボスチニブ水和物
2.6.6 毒性試験の概要文
本試験において死亡例は認められなかった。
20 mg/kg/日群の 2 例では嘔吐（赤色物質を伴う場合もあり），糞便異常（赤色物質を伴う場合も
ある粘液便または液状便，無排便），自発運動低下および削痩が認められた。これらの一般状態
の変化に伴って，体重減少（投与前値と比較して-2 kg または-22%～-24%）および摂餌量減少（投
与の最後の 5 日間は無摂餌）が認められた。10 mg/kg/日でも液状便および嘔吐が観察されたが，
一過性であり，体重または摂餌量に変化はみられなかった。
20 mg/kg/日では赤血球パラメータ（ヘモグロビン量，ヘマトクリット，赤血球数，MCHC）の増
加（16%～34%），血中尿素窒素の増加（73%～86%）およびグルコースの減少（-22%～-40%）
が認められ，主として 20 mg/kg/日群の 2 例にみられたボスチニブ投与による消化管の変化（嘔吐
および糞便異常），摂餌量減少または脱水に起因するものと考えられた。また，総白血球数増加
（57%～136%），好中球数増加（70%～208%），単球数増加（137%～229%）およびフィブリノー
ゲン量増加（173%～174%）も認められた。10 mg/kg/日では血液学的検査および血液生化学的検
査パラメータに薬物投与に関連する変化は認められなかった。
以上，雄イヌにボスチニブ 20 mg/kg/日を摂食下 2 週間経口投与したときには顕著な体重減少およ
び摂餌量減少等の所見がみられ，忍容性は不良と考えられた。10 mg/kg/日では認められた一般状
態変化は軽度であり，体重，摂餌量ならびに血液学的検査および血液生化学的検査パラメータの
変化も認められなかった。
2.6.6.3.8. イヌ 9 ヵ月間経口投与毒性試験および 1 ヵ月間回復性試験
4.2.3.2.13 RPT-65542，4.2.3.2.14 RPT-66535
ボスチニブをビーグル犬に，0（溶媒対照），1，3 または 10 mg/kg/日の用量で 1 日 1 回，39 週間
経口投与した（RPT-65542；毒性試験の概要表，2.6.7.17）。投与量は，先に実施した 1 ヵ月間試
験
（2.6.6.3.6 項）
では最高用量の 5 mg/kg/日が NOAEL と判断され，
また 2 週間忍容性試験（2.6.6.3.7
項）では 20 mg/kg/日では忍容性が認められなかった一方で 10 mg/kg/日の忍容性は良好であった
ことから，高用量を 10 mg/kg/日に設定した。溶媒対照群および 10 mg/kg/日群の動物数は 1 群雌
雄各 7 匹とし，そのうち 1 群雌雄各 3 匹を回復試験に供した。1 および 3 mg/kg/日群の動物数は 1
群雌雄各 4 匹とした。検査項目は生死，一般状態，体重，摂餌量，血液学的検査，血液生化学的
検査，尿検査，眼科学的検査，心電図，器官重量，剖検および病理組織学的検査とした。TK 測
定を投与 1 日（投与 24 時間後）および 273 日（投与前および投与 24 時間後）に実施した
（RPT-66535；毒性試験の概要表，2.6.7.18）。
本試験において死亡例は認められなかった。
いずれの用量のいずれの試験パラメータ（一般状態観察，体重，摂餌量，血液学的検査，血液生
化学的検査，尿検査，眼科学的検査，心電図，器官重量，剖検および病理組織学的検査）におい
ても，毒性変化は認められなかった。10 mg/kg/日の雌で投与期間中の体重増加量の軽度な抑制が
みられたものの，雌雄とも投与終了時の体重にはボスチニブ投与による影響は認められなかった。
本薬投与による糞便異常（液状便，軟便）または嘔吐が，投与期間中に 1 および 3 mg/kg/日群の
雄の各 1 例ならびに 10 mg/kg/日群の雌雄に認められた。
糞便異常に伴ってアルブミン
（5%～28%）
および総蛋白質（2%～20%）が軽微に増加または減少し，病理組織学的検査では十二指腸に軽微
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ボスチニブ水和物
2.6.6 毒性試験の概要文
な陰窩膿瘍が認められた。しかしながら，これらの変化は散発的かつ一過性で，上述のとおり毒
性学的に意義のある体重または摂餌量の減少を伴わず，動物の全般的な健康状態に影響を及ぼさ
なかったことから，毒性変化ではないと考えられた。これらの所見は回復期間中には認められな
かった。
ボスニチブの曝露量は 1～10 mg/kg/日の範囲でほぼ用量の増加に比例して増加した。いずれの用
量でも曝露量に性差は認められなかった。
本試験ではいずれの用量においても毒性変化がみられなかったことから，NOAEL は最高用量の
10 mg/kg/日と考えられた。10 mg/kg/日における投与 273 日の AUC(0-24)は雄で 8265 ng•h/mL，雌
で 6657 ng•h/mL で，日本人 CML 患者における曝露量のそれぞれ 2.2 倍および 1.8 倍であった。
2.6.6.4. 遺伝毒性試験
ボスチニブの遺伝毒性を，細菌を用いた復帰突然変異試験およびヒト末梢リンパ球を用いた染色
体異常試験の各 in vitro 試験，ならびに in vivo マウス小核試験で検討した。遺伝毒性試験の要約
を毒性試験の概要表，2.6.7.19 に示す。
2.6.6.4.1. in vitro
2.6.6.4.1.1. 細菌を用いた復帰突然変異試験
4.2.3.3.1.1 RPT-46058（参考），4.2.3.3.1.2 RPT-49003
ネズミチフス菌（Salmonella typhimurium）株 TA98 および TA100 を用いたスクリーニング試験に
おいて，ボスチニブは代謝活性化（S9）の非存在下または存在下で，5000 g/プレートまでの濃
度で陰性であった（RPT-46058；毒性試験の概要表，2.6.7.20）。予備検討の結果 333～667 g/プ
レート以上の濃度で試験菌株に対して明らかな毒性がみられたことから，本試験（RPT-49003；
毒性試験の概要表，2.6.7.21）でのボスチニブの濃度範囲は 1.0～1000 g/プレートとした。本試験
では，ネズミチフス菌株 TA98，TA100，TA1535 および TA1537 ならびに大腸菌（Escherichia coli）
株 WP2 uvrA において，ボスチニブは S9 の非存在下および存在下のいずれにおいても，1000 g/
プレートまでの濃度で陰性であった。以上の結果から，ボスチニブは細菌を用いた復帰突然変異
試験において変異原性を示さなかった。
2.6.6.4.1.2. ヒト末梢血リンパ球を用いた染色体異常試験
4.2.3.3.1.3 RPT-50322
ヒト末梢血リンパ球培養細胞に 0.25～10 g/mL の濃度範囲のボスチニブを S9 非存在下で 4 また
は 20 時間，および S9 存在下で 4 時間処理した（毒性試験の概要表，2.6.7.22）。溶媒対照（DMSO）
および陽性対照［S9 非存在下ではマイトマイシン C（4 時間処理：0.6 g/mL，20 時間処理：
0.3 g/mL），S9 存在下ではシクロホスファミド（20 g/mL）］についても検討した。処理開始
の約 20 時間後に細胞の分裂を分裂中期で停止させ，染色体異常の有無を検討した。なお，分裂
指数の低下が 50%以下であったボスチニブの 2.5，1 および 0.5 g/mL，ならびに溶媒対照につい
て染色体の顕微鏡検査を行った。
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ボスチニブ水和物
2.6.6 毒性試験の概要文
陽性対照はいずれの曝露群でも統計学的に有意な染色体異常を誘発した。ボスチニブは，S9 の非
存在下または存在下のいずれの濃度においても，染色体構造異常または数的異常を有する細胞の
比率に統計学的に有意な増加を誘発しなかった。
以上，ボスチニブはヒト末梢血リンパ球に対して染色体異常誘発能を示さなかった。
2.6.6.4.2. in vivo
2.6.6.4.2.1. マウス小核試験
4.2.3.3.2.1 RPT-52501，4.2.3.3.2.2 RPT-52338
雄 CD-1 マウス（12 または 14 匹/群）にボスチニブを 0（溶媒対照），500，1000 または 2000 mg/kg
の用量で単回経口投与して，骨髄における小核を有する多染性赤血球（PCE）の誘導能を検討し
た（RPT-52501；毒性試験の概要表，2.6.7.23）。陽性対照としてシクロホスファミド 50 mg/kg を
6 匹のマウスに単回経口投与した。骨髄細胞の採取は，ボスチニブ投与群および溶媒対照群では
投与 24 および 48 時間後とし，陽性対照群では投与 24 時間後とした。それぞれの採取時に 1 群 5
匹のマウスを用いて，1 匹当たり 2000 個の PCE について小核を有する PCE の有無を検査し，1
匹当たり合計 1000 個の総赤血球中の PCE の比率も検討した。
ボスチニブ投与による死亡は認められなかった。一般状態の変化は，1000 mg/kg 以上での立毛お
よび 2000 mg/kg での嗜眠のみであった。ボスチニブ投与群では薬物投与による骨髄毒性が認めら
れたが，骨髄における小核を有する PCE の発現頻度にはいずれの用量でも溶媒対照群と比較して
統計学的に有意な増加は認められなかったことから，ボスチニブはマウス骨髄細胞において小核
誘発能がないものと考えられた。
別途実施した TK 試験において，ボスチニブをマウス小核試験の最高用量である 2000 mg/kg の用
量で雄 CD-1 マウスに単回経口投与した（RPT-52338；毒性試験の概要表，2.6.7.24）。血漿中薬
物動態検査用の血液試料を採取した。Cmax は 9811 ng/mL，Tmax は 2 時間，AUC(0-24)は 172495 ng•
h/mL であった。この AUC 値は日本人 CML 患者における曝露量の 47 倍であることから，マウス
小核試験においてボスチニブの曝露は十分であったことが示唆された。
以上，ボスチニブはマウス小核試験において変異原性を示さなかった。
2.6.6.5. がん原性試験
2.6.6.5.1. ラット 2 年間投与がん原性試験
4.2.3.4.1.1
-2185
SD ラット（雌雄各 60 匹/群）にボスチニブを 2 年間経口投与し，発がん性を評価した（毒性試験
の概要表，2.6.7.25）。ボスチニブ投与群として，雄には 2.5，7.5 および 25 mg/kg/日を 91 週間，
雌には 1.5，5 および 15 mg/kg/日を 100 週間投与した。対照群として，雌雄それぞれに精製水投
与群を 1 群，溶媒投与群を 2 群の計 3 群を設け，ボスチニブと同期間投与した。これとは別に，
雌雄各 9 匹/群（溶媒対照群は雌雄各 3 匹/群）からなるサテライト群を設け，TK 測定に供した。
TK はボスチニブならびに代謝物 M2 および M5 について，投与 182～183 日に評価した（毒性試
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ボスチニブ水和物
2.6.6 毒性試験の概要文
験の概要表，2.6.7.26）。評価項目は生死，一般状態，体重，摂餌量，剖検および病理組織学的検
査とした。
投与量は，先に実施したラット 6 ヵ月間試験（RPT-63644）の結果に基づいて設定した。当該試
験において，30 mg/kg/日の雌 1 例が投与 168 日に死亡し，一般状態変化からボスチニブ投与に関
連する死亡と考えられたが，剖検または病理組織学的検査において消化管毒性の兆候は観察され
なかった。30 mg/kg/日の他の雌雄ラットからは消化管毒性を示唆する体重または一般状態の変化
は認められず，病理組織学的検査においても毒性変化は認められなかった。しかし，70 mg/kg/
日では雌雄に死亡例が認められ，ボスチニブによる消化管毒性は 30～70 mg/kg/日の範囲で急峻な
用量反応性を示すと考えられた。以上のことから雄および雌の最高用量をそれぞれ 25 および
15 mg/kg/日に設定した 。なお，雄の高用量群では生存率の低下が認められたことから投与 78 週
より用量を 15 mg/kg/日に減量した。
ボスチニブの曝露量（AUC(0-24)）は雄の 2.5，7.5 および 25 mg/kg/日でそれぞれ 244，840 および
5127 ng•h/mL（日本人 CML 患者における曝露量の 0.07，0.23 および 1.4 倍），雌の 1.5，5 およ
び 15 mg/kg/日でそれぞれ 298，1902 および 10570 ng•h/mL（同 0.08，0.5 および 2.9 倍）であり，
雄より雌で高値を示した。特に高用量において，曝露量は雌雄ともに用量比を上回って増加した。
代謝物 M5 の曝露量（AUC(0-24)）は雄および雌でボスチニブのそれぞれ 30%および 2%であった。
高用量における M5 の曝露量（雄 1514 ng•h/mL，雌 246 ng•h/mL）は，ヒトにおける M5 曝露量
（580 ng•h/mL）aのそれぞれ 2.6 倍および 0.4 倍であった。M2 の曝露量は雄ではボスチニブの 3%
で，雌では定量下限値未満であった。高用量における雄での M2 の曝露量（175 ng•h/mL）はヒト
における M2 曝露量（440 ng•h/mL）a の 0.4 倍であった。
高用量（25/15 mg/kg/日）の雄では対照群と比較して統計学的に有意に生存率が減少した。同用
量では投与 79 週に生存動物数が 20 匹にまで減少した時点で投与を中止し，生存例は投与 86 週
に安楽殺した。他の群の雄は投与 90～91 週に安楽殺した。2.5 および 7.5 mg/kg/日群における雄
の生存率は対照群と同程度であった。雌の高用量（15 mg/kg/日）でも生存動物数が減少したため，
投与 92 週で投与を中止した。すべての群の雌は投与 97～100 週に安楽殺した。雌の生存率は，
いずれのボスチニブ投与群においても対照群と比較して統計学的に有意な差はみられなかった。
ボスチニブ投与に関連する一般状態変化は認められなかった。体重および体重増加量の統計学的
に有意な減少が，
25/15 mg/kg/日の雄では投与 6 週，
15 mg/kg/日の雌では投与 53 週より認められ，
投与期間終了時（溶媒対照群と比較して-17%）まで持続した。この体重減少は，摂餌量減少と相
関していた。
腫瘍性病変の発現率について，ボスチニブの投与に関連する増加は雌雄ともに認められなかった。
ボスチニブ投与に関連する非腫瘍性の毒性変化として，前胃のびらん/潰瘍および炎症/浮腫/出血
（雌 15 mg/kg/日）ならびに扁平上皮過形成/過角化（雄 7.5 mg/kg/日以上，雌 15 mg/kg/日），小
腸および大腸の粘膜うっ血/出血/びらん/潰瘍および壊死（雄 7.5 mg/kg/日以上，雌 5 mg/kg/日以上），
小腸粘膜固有層のコラーゲン沈着（すべてのボスチニブ投与群）および腺胃粘膜固有層のコラー
a
3160A4-1106-US 臨床試験（B1871023）において，健康被験者にボスチニブ 500 mg を単回経口投与したと
きの値。
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ボスチニブ水和物
2.6.6 毒性試験の概要文
ゲン沈着（雄 25/15 mg/kg/日）の発現率または重症度の増加が認められた。その他，慢性進行性
腎症（雄 7.5 mg/kg/日以上），腎尿細管萎縮（雄 25/15 mg/kg/日，雌 15 mg/kg/日），腸間膜リン
パ節でのリンパ管増殖，拡張および線維化（雄 2.5 mg/kg/日以上，雌 5 mg/kg/日以上），膵外分
泌腺での炎症および線維化を伴う多巣性小葉萎縮（雄 7.5 mg/kg/日以上，雌 15 mg/kg/日），腸間
膜リンパ節でのリンパ洞赤血球増加/貪食（雄 2.5 mg/kg/日以上，雌 5 mg/kg/日以上），ならびに
下顎および腸間膜リンパ節での形質細胞増加（雄 25/15 mg/kg/日，雌 15 mg/kg/日）が認められた
が，これらは変化の程度が軽度，ラットに特異的な変化の増強，臓器機能への影響が認められて
いない，もしくは消化管障害に伴う適応反応と考えられたことから，いずれも毒性変化ではない
と判断された。すべての用量で消化管にびらん/潰瘍，扁平上皮過形成/過角化または粘膜固有層
のコラーゲン沈着などの所見が認められたことから，本試験では非腫瘍性変化に関する NOAEL
は求められなかった。
2.6.6.6. 生殖発生毒性試験
2.6.6.6.1. ラットにおける受胎能及び胚・胎児発生に関する経口投与用量設定試験
4.2.3.5.1.1 RPT-61450
ボスチニブを雌雄 SD ラット（雌雄各 10 例/群）に 0（溶媒対照），10，30 または 100 mg/kg/日
の用量で経口投与した（毒性試験の概要表，2.6.7.27）。100 mg/kg/日の雌で下記に示すような過
度の毒性がみられたため，この用量群の雌雄はともに交配期間に先立って安楽殺した。10 および
30 mg/kg/日群では，ボスチニブを雄に 7.5 週間（交配前 4 週間，2 週間の交配期間および妊娠末
期の雌の剖検まで），雌に 5～6 週間（交配前 2 週間から妊娠 20 日まで）投与した。交配期間中
には，同用量の雄と雌を 1：1 で同居させた。
雌雄の動物について生死，一般状態および剖検ならびに体重および摂餌量を評価した。これに加
え性周期，生殖能パラメータ（交尾率および受胎率，交配所要期間），妊娠子宮重量，妊娠 21
日の帝王切開所見（黄体数，同腹児数，胚・胎児死亡率），胎児性別，胎児体重，胎児外表観察
（口蓋を含む）および胎盤外表観察を実施した。
雄では死亡例はなかった。100 mg/kg/日を 17 日間投与した雄では投与の最初の 1 週間に体重増加
量減少（-71%）がみられ，それにより投与 15 日には体重減少（-10%，溶媒対照群との比較）が
認められた。一般状態の変化としては，流涎が 10，30 および 100 mg/kg/日群でそれぞれ 2/10 例，
1/10 例および 7/10 例にみられたのみであった。10 および 30 mg/kg/日群の雄における忍容性は良
好で，体重，摂餌量または剖検にはボスチニブ投与による変化は認められなかった。10 および
30 mg/kg/日群では雄の全例で交尾が成立し，授胎能への影響は認められなかった。
100 mg/kg/日の雌では，ボスチニブ投与による一般状態の変化（軟便，糞量減少，被毛黄色化，
眼・鼻・口周囲の赤色物質など），体重減少（-4.3%，試験前値との比較）および摂餌量減少（-37%，
溶媒対照群との比較）が認められたことから，全例を投与 3 日に安楽殺した。これらの所見は母
体毒性を示唆するものであり，それにより受胎能または胎児発生への影響が生じると予想された。
雌の 10 および 30 mg/kg/日では死亡例はなかった。30 mg/kg/日群の雌にみられた一般状態の変化
として，軟便 （3/10 例）および流涎（6/10 例）が観察された。交配前から妊娠初期にかけては，
ボスチニブ投与による体重の変化は認められなかった。妊娠最終週（妊娠 13～20 日）には
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ボスチニブ水和物
2.6.6 毒性試験の概要文
30 mg/kg/日で溶媒対照群と比較して体重増加量の減少（-90%）がみられた。これは生存胎児数減
少による妊娠子宮重量減少を反映したものであった。10 mg/kg/日ではボスチニブ投与による体重
の変化はみられず，摂餌量の変化も認められなかった。10 または 30 mg/kg/日群のいずれの雌に
おいても，溶媒対照群と比較して，本薬投与による性周期または交配への影響は認められなかっ
た。10 および 30 mg/kg/日では妊娠子宮重量の減少（溶媒対照群と比較してそれぞれ-25%および
-84%）がみられた。これは生存胎児数の減少を反映したものであり，特に 30 mg/kg/日群で顕著
であった。
30 mg/kg/日では，ボスチニブにより妊娠動物数および母動物当たりの生存胎児数の減少が誘発さ
れ，生存胎児がみられた母動物の数は 0（溶媒対照），10 および 30 mg/kg/日でそれぞれ 9/10 例，
9/10 例および 3/10 例であった。10 および 30 mg/kg/日では，母動物当たりの生存胎児数が溶媒対
照群と比較してそれぞれ 25%および 90%減少した。これは着床数の減少（0，10 および 30 mg/kg/
日でそれぞれ 16.1，14.1 および 13.2）および初期吸収胚数の増加（0，10 および 30 mg/kg/日でそ
れぞれ 0.67，2.67 および 11.67）によるものであった。黄体数の増加 （10 および 30 mg/kg/日群
でそれぞれ 10%および 21%）がみられた。
胎児観察（胎児体重，性別または外表）または胎盤の形態において，変化は認められなかった。
2.6.6.6.2. ラットにおける受胎能及び着床までの初期胚発生に関する経口投与試験
4.2.3.5.1.2 RPT-63257
ボスチニブを雌雄 SD ラット（雌雄各 25 例/群）に 1 日 1 回経口投与した（毒性試験の概要表，
2.6.7.28）。雄には 0（溶媒対照），10，30 または 70 mg/kg/日の用量で 7 週間（無処置雌との交
配前 4 週間から雌の妊娠の判定に基づく安楽殺の 1 日前まで）投与した。雌には 0（溶媒対照），
3，10 または 30 mg/kg/日の用量で 3～6 週間（無処置雄との交配前 2 週間から妊娠 7 日まで）投
与した。雄の高用量はラット 1 ヵ月間毒性試験（2.6.6.3.2 項）における NOAEL が 70 mg/kg/日と
考えられたことから，雌の高用量は受胎能および胚·胎児発生に関する用量設定試験（2.6.6.6.1 項）
において 30 mg/kg/日での妊娠動物数が 3/10 例のみであり，母動物に明らかな影響を及ぼす用量
と考えられたことから設定した。検査項目は生死，一般状態，体重，摂餌量，性周期，生殖能パ
ラメータ（交尾率，受胎率，交配所要日数），妊娠子宮重量，妊娠 12 日の帝王切開所見（黄体
数，同腹児数，胚死亡率），前立腺および精巣の重量，剖検ならびに精巣，精巣上体，精嚢およ
び前立腺の病理組織学的検査（溶媒対照群および 70 mg/kg/日群のみ）とした。
雄では，70 mg/kg/日群の 1 例にボスチニブ投与による一般状態の変化［流涎，鼻・口周囲の赤色
物質，会陰部被毛の黄色化，削痩，糞便異常（糞量減少および液状便），被毛の便付着および皮
膚テント陽性］がみられ，投与 32～35 日に 17%の体重減少が認められたことから，投与 38 日に
安楽殺した。雄の生存例では，70 mg/kg/日で軟便，糞量減少，眼・鼻・口周囲の赤色物質および
被験物質投与前後の流涎が認められ，さらに体重減少（-12%，溶媒対照群との比較：以下同じ）
および体重増加量減少（-28%）ならびにこれと関連する摂餌量減少（-8%）がみられた。また，
同用量では授胎能の低下（30 mg/kg/日以下の 100%に対して 84%）が認められた。交配，器官重
量，剖検および雄性生殖器官の病理組織学的検査では変化は認められなかった。
投与雌に死亡例は認められなかった。一般状態の変化として，30 mg/kg/日以上で流涎が認められ
た。体重増加量は，投与期間中の最初の 1 週間は 10 および 30 mg/kg/日で増加したものの，試験
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ボスチニブ水和物
2.6.6 毒性試験の概要文
終了時の妊娠子宮重量で補正した体重増加量は 30 mg/kg/日で 16%減少した。30 mg/kg/日では着
床数の減少（-7%）および胚吸収率の増加（1780%）がみられ，それにより生存胚数が減少（-79%）
した。妊娠子宮重量の減少（-22%）は生存胚数減少によるものであった。10 mg/kg/日では胚吸収
率が 234%増加したが，生存胚数は溶媒対照群と同程度であった。性周期，交配，受胎能または
剖検では変化は認められなかった。
以上，雄では 70 mg/kg/日で瀕死期安楽殺，一般状態変化，体重および摂餌量の減少ならびに授胎
能低下が認められた。30 mg/kg/日の雄動物にみられた体重減少（-5%）は軽微で，授胎能または
1 腹当たりの生存胚数にも変化が認められなかった。したがって，雄動物の一般毒性および生殖
能に関する NOAEL はいずれも 30 mg/kg/日と考えられた。雌の高用量（30 mg/kg/日）では母体毒
性（一般状態の変化および補正体重増加量の減少）ならびに着床数の減少および吸収胚数の増加
がみられ，それにより生存胚数が減少したことから，母動物の一般毒性に関する NOAEL は
10 mg/kg/日と考えられた。10 mg/kg/日で胚吸収率の増加が認められたことから，母動物の生殖能
および初期胚発生に関する NOAEL は 3 mg/kg/日と考えられた。
2.6.6.6.3. ラットにおける胚・胎児発生に関する経口投与試験
4.2.3.5.2.1 RPT-63107，4.2.3.5.2.2 RPT-64286
ボスチニブを妊娠 SD ラット（25 匹/群）に 0（溶媒対照），1，3 または 10 mg/kg/日の用量で妊
娠 6 から 17 日までの 12 日間，経口投与した（RPT-63107；毒性試験の概要表，2.6.7.29）。本試
験の用量は，先に実施した用量設定試験（2.6.6.6.1 項）において，生存胎児がみられた母動物の
数が 0
（溶媒対照）
，
10 および 30 mg/kg/日でそれぞれ 9/10 例，9/10 例および 3/10 例で，
また 10 mg/kg/
日では母動物当たりの生存胎児数が 25%減少したことから，十分な胎児数が得られ，かつ胚・胎
児毒性を評価できると予想される最高用量として 10 mg/kg/日を設定した。検査項目は母動物の生
死，一般状態，体重，摂餌量，妊娠子宮重量，妊娠 21 日の帝王切開パラメータ（黄体数，同腹
児数，胚・胎児死亡数），剖検，胎児性別，胎児体重，胎児の外表（口蓋を含む），骨格，内臓
観察および胎盤外表観察とした。別途サテライト群（9 匹/群）を設け，妊娠 15 日に採血して TK
測定を実施した（RPT-64286；毒性試験の概要表，2.6.7.32）。
死亡例はみられず，一般状態，体重，妊娠子宮重量，摂餌量，帝王切開パラメータまたは胎盤の
外観においてもボスチニブ投与による変化は認められなかった。
胎児の内臓検査では腎盂拡張の増加が 10 mg/kg/日で認められた。しかし，胚期間終了時には尿管
の再疎通がみられることが知られているaことから，この腎盂拡張の増加は一時的かつ可逆的な発
生の遅延を示すもので，毒性変化ではないと考えられた。また，骨格検査では前頭骨，頭頂骨お
よび頭頂間骨に骨化不全の発現頻度増加が 10 mg/kg/日で認められたが，これらの骨化不全も一時
的かつ可逆的な発生の遅延を示すものであり，毒性学的意義は乏しいと考えられた。内臓および
骨格所見の発現頻度を Table 4 に示す。
a
Alcaraz A, Vinaixa F, Tejedo-Mateu A, et al. Obstruction and recanalization of the ureter during embryonic
development. J Urol. 1991;145:410-6.
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ボスチニブ水和物
2.6.6 毒性試験の概要文
Table 4.
ラット胚・胎児発生試験における胎児の内臓および骨格所見（RPT-63107）
背景値 a
平均（最小 – 最大）
用量（mg/kg/日）
内臓観察
検査例数
腎盂
拡張
骨格観察
検査例数
前頭骨
骨化不全
頭頂間骨
骨化不全
頭頂骨
骨化不全
0
1
3
10
母動物
胎児
25 / 154†
24 / 145
25 / 160
24 / 156
338
2995
0
0
1/1
5** / 5**
2.07 (0-7)
2.47 (0-11)
25 / 154
24 / 147
25 / 164
24 / 155
354
2729
0
0
0
2* / 2*
0.20 (0-1)
0.27 (0-2)
0
0
0
2* / 2*
0.07 (0-1)
0.07 (0-1)
0
1/1
1/1
3* / 3*
0.67 (0-4)
0.80 (0-4)
†表中の値は母動物数 / 胎児数を示す。
*p < 0.05，**p < 0.01（溶媒対照群との比較，ノンパラメトリック一元配置分散分析）
a
Wyeth 社（当時。現 Pfizer 社）で過去 5 年間（20 年 月～20 年 月）に実施された発生毒性評
価項目を含む 15 試験における溶媒対照群の発現数。
ボスチニブの曝露量（AUC(0-24)）は 1，3 および 10 mg/kg/日でそれぞれ 204，857 および 4463 ng
•h/mL（日本人 CML 患者における曝露量の 0.06，0.23 および 1.2 倍）で，1～3 mg/kg/日の用量範
囲ではほぼ用量に比例しており，10 mg/kg/日では 1 および 3 mg/kg/日と比較して用量比を上回る
増加を示した。
以上，試験の最高用量（10 mg/kg/日）までの用量において，母体毒性または胚・胎児発生に対す
る影響は認められなかった。したがって，母動物の一般毒性および発生に関する NOAEL は
10 mg/kg/日と考えられた。
2.6.6.6.4. ウサギにおける経口投与忍容性試験
4.2.3.5.2.3 RPT-61455（参考）
ボスチニブを雌雄ニュージーランドホワイト（NZW）ウサギ（雄 1 匹/群，雌 2 匹/群）に 0（溶
媒対照）
，10，
30 または 100 mg/kg/日の用量で 1 日 1 回経口投与した
（毒性試験の概要表，2.6.7.27）。
溶媒対照群には 10 日間，投薬群には 7 日間の投与を行った。検査項目は生死，一般状態，体重，
摂餌量および剖検（死亡例のみ）とした。
100 mg/kg/日では，ボスチニブ投与による一般状態悪化のため，雌雄全例を投与 2 日に安楽殺し
た。一般状態の変化として，自発運動低下，糞便異常（無排便，糞量減少，軟便，液状便，被毛
への便付着），呼吸困難，平伏歩行 ，散瞳，呼吸緩徐，冷触感，眼瞼下垂または外観蒼白化が
認められ，摂餌量減少［摂取量は雄 1 g，雌 0 および 6 g ；溶媒対照群は雄 120 g，雌 110.5 g（2
匹の平均）］がみられた。剖検では，雌雄各 1 例に十二指腸粘膜の暗色隆起巣または十二指腸の
変色が観察された。
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ボスチニブ水和物
2.6.6 毒性試験の概要文
生存例（30 mg/kg/日以下）では，体重にボスチニブ投与による影響は認められなかった。摂餌量
は 30 mg/kg/日の雄（投与 3 日までの摂取量 29～72 g）および雌の 1 例（摂取量 99～114 g）で減
少したが，それぞれ一過性および軽度の変化であり，これに伴う一般状態の変化はみられなかっ
た。
以上，100 mg/kg/日では一般状態の悪化および摂餌量減少がみられ，安楽殺に至ったが，30 mg/kg/
日では 7 日間の投与期間にわたり忍容性が認められた。
2.6.6.6.5. ウサギにおける胚・胎児発生に関する経口投与用量設定試験
4.2.3.5.2.4 RPT-62710，4.2.3.5.2.5 RPT-64285
ボスチニブを妊娠 NZW ウサギ（8 匹/群）に 0（溶媒対照），10，30 または 60 mg/kg/日の用量で
1 日 1 回，14 日間（妊娠 6～19 日）経口投与した（RPT-62710；毒性試験の概要表，2.6.7.27）。
先に実施した忍容性試験（2.6.6.6.4 項）において 100 mg/kg/日群は全例が安楽殺に至ったものの，
30 mg/kg/日での忍容性は良好であったことから，軽微な母体毒性が発現することが予想される用
量として本試験の最高用量を 60 mg/kg/日に設定した。検査項目は母動物の生死，
一般状態，体重，
摂餌量，妊娠子宮重量，妊娠 29 日の帝王切開パラメータ（黄体数，同腹児数，胚・胎児死亡率），
剖検，胎児体重，胎児の外表（口蓋を含む）観察ならびに胎盤外表観察とした。溶媒対照群を含
むすべての群の動物から妊娠 15 日に採血し，TK 測定を実施した（RPT-64285；毒性試験の概要
表，2.6.7.31）。
60 mg/kg/日の 2 例の母動物は，一般状態の変化（糞量減少および削痩），体重減少および摂餌量
減少のため，それぞれ妊娠 15 日および 16 日に安楽殺した。剖検では，これらの母動物の 1 例に
盲腸膨満（異常内容物を含む）および大腸膨満が認められた。いずれの死亡もボスチニブ投与に
よるものと考えられた。
一般状態観察では，60 mg/kg/日で尿中赤色物質および耳または口の局所的擦過傷の発現頻度増加
が認められた。投与期間中（妊娠 6～19 日）の体重増加量は 10，30 および 60 mg/kg/日でそれぞ
れ 12%，24%および 88%減少し，摂餌量もそれぞれ 5%，11%および 42%減少した。投与期間終
了後（妊娠 20～28 日）の摂餌量は溶媒対照群と同程度であった。30 mg/kg/日以上では，摂餌量
の変化により糞量減少の発現頻度が増加した。妊娠子宮重量は 10，30 および 60 mg/kg/日でそれ
ぞれ 10%，14%および 43%減少したが，これは生存胎児数減少および胎児体重減少によるもので
あった。
着床数にはボスチニブの影響は認められなかった。60 mg/kg/日群の生存した母動物 6 例中，帝王
切開時に妊娠が確認されたのは 2 例のみで，それぞれの腹において 6 匹の生存胎児が認められた
（溶媒対照群と比較して 22%の減少）。1 腹当たりの生存胎児数の減少は，平均早期吸収胚数の
増加（溶媒対照群の 0.14 に対して 60 mg/kg/日では 2.5）によるものであった。同群の 3 例の母動
物では，妊娠の早期中断［微小な着床部位（瘢痕）］が認められた。30 mg/kg/日以下では，妊娠
動物数または生存胎児数の変化はみられなかった。60 mg/kg/日では胎児体重の減少（-33%）が認
められた。胎児外表観察では特記すべき変化は観察されなかったが，胎盤観察では 60 mg/kg/日で
顆粒状胎盤の数が増加した。
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ボスチニブ水和物
2.6.6 毒性試験の概要文
ボスチニブの吸収は速やか（Tmax は 2 時間）で，曝露量（AUC(0-24)）はほぼ用量に比例して増加
した。
以上，ボスチニブの 60 mg/kg/日（AUC(0-24) = 40293 ng•h/mL）で，胚・胎児毒性（妊娠母動物数
および生存胎児数の減少ならびに顆粒状胎盤数および早期吸収胚数の増加）および母体毒性（一
般状態の変化ならびに体重増加量および摂餌量の減少）が誘発された。10 および 30 mg/kg/日で
も本薬により体重増加量および摂餌量に影響がみられたが，胚・胎児毒性は認められなかった。
2.6.6.6.6. ウサギにおける胚・胎児発生に関する経口投与試験
4.2.3.5.2.6 RPT-65533，4.2.3.5.2.7 RPT-66820
ボスチニブを，交尾が確認された雌の NZW ウサギ（1 群 20 例）に，0（溶媒対照），3，10 また
は 30 mg/kg/日の用量で妊娠 6～19 日の 14 日間，経口投与した（RPT-65533；毒性試験の概要表，
2.6.7.30）。本試験の用量は，先に実施した用量設定試験（2.6.6.6.5 項）において 60 mg/kg/日で死
亡例を含む母体毒性および胚・胎児毒性が認められ，30 mg/kg/日では体重増加量，摂餌量および
胎児体重の軽微な減少がみられたことから，30 mg/kg/日を高用量に設定した。検査項目は母動物
の生死，一般状態，体重，摂餌量，妊娠子宮重量，流産率，妊娠 29 日の帝王切開パラメータ（黄
体数，同腹児数，胚・胎児死亡数），剖検，胎児性別，胎児体重，胎児の外表（口蓋を含む），
内臓，骨格観察および胎盤外表観察とした。妊娠 15 日の投与後に採血を行い，TK 測定を実施し
た（RPT-66820；毒性試験の概要表，2.6.7.33）。
3 mg/kg/日の母動物 1 匹を経口投与時の傷害のため投与 11 日に安楽殺した。その他の死亡例は認
められなかった。
30 mg/kg/日では，母体毒性を示唆する一般状態の変化として，散発的な糞便異常（無排便，軟便，
糞量減少，糞中赤色物質および被毛の便付着），体重増加量の減少［投与期間中（妊娠 6～19 日）
は-10%，投与期間終了後（妊娠 20～28 日）は最大-21%］および摂餌量減少（-8%）が認められ
た。妊娠子宮重量で補正した体重の減少（減少幅は溶媒対照群 13.5 g，30 mg/kg/日群 39.3 g）が
認められた。剖検では結石を伴う膀胱膨満（30 mg/kg/日の 1 例）および子宮において左子宮角内
の赤色凝固物質または暗赤色液体貯留（10 mg/kg/日の 2 例）がみられたが，発現頻度が低く，用
量設定試験（2.6.6.6.5 項）では同様の所見がみられなかったことから，ボスチニブ投与による変
化である可能性は低いと考えられた。その他，3 および 10 mg/kg/日には母体の一般毒性変化は認
められなかった。
30 mg/kg/日では母体毒性に加え，胚・胎児毒性も認められた。妊娠子宮重量が 8%減少し，胎児
体重の軽微な減少（-5%～-7%）に起因するものと考えられた。また，胎児においては内臓異常（主
として 2 腹の胎児における胆嚢欠損，心肥大，肝腫大および水頭症）ならびに骨格異常（胸骨分
節癒合）が観察された。3 および 10 mg/kg/日では胎児体重変化ならびに胎児の内臓および骨格異
常はみられなかった。いずれの用量でも，帝王切開パラメータ，胎児性比または胎盤の形態には
変化がみられなかった。内臓および骨格所見の発現頻度を Table 5 に示す。
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ボスチニブ水和物
2.6.6 毒性試験の概要文
Table 5.
ウサギ胚・胎児発生試験における胎児の内臓および骨格所見（RPT-65533）
背景値 a
平均（最小 – 最大）
用量（mg/kg/日）
0
3
10
30
母動物
胎児
19 / 157†
18 / 135
18 / 142
18 / 145
260
2152
0
0
0
2/4
0.06 (0-1)
0.06 (0-1)
0
0
0
1/1
0.06 (0-1)b
0.06 (0-1)b
0
0
0
1/1
0 (0-0)
0 (0-0)
0
0
0
1/1
0.06 (0-1)
0.06 (0-1)
19 / 157
18 / 135
18 / 142
18 / 145
298
2484
0
1/1
2/2
4/7
1 (0-4)
1.16 (0-7)
内臓観察
検査例数
胆嚢
欠損
心臓
心肥大
肝臓
腫大
頭部
水頭症
骨格観察
検査例数
胸骨分節
癒合
†表中の値は母動物数 / 胎児数を示す。
a
Wyeth 社（当時。現 Pfizer 社）で過去 5 年間（20 年 月～20 年
価項目を含む 17 試験における溶媒対照群の発現数。
b
背景データでは心房および心室の拡大として記載されている。
月）に実施された発生毒性評
ボスチニブの曝露量（AUC(0-24)）は 3，10 および 30 mg/kg/日でそれぞれ 1308，5451 および 14002 ng
•h/mL（日本人 CML 患者における曝露量の 0.35，1.5 および 3.8 倍）とほぼ用量に比例して増加
し，Tmax は 2～4 時間であった。
30 mg/kg/日では妊娠期間中の一般状態の変化（糞便異常）ならびに体重および摂餌量の減少が認
められたことから，母動物の一般毒性に関する NOAEL は 10 mg/kg/日と考えられた。30 mg/kg/
日群で胎児体重減少ならびに胎児の内臓および骨格異常の発現頻度増加がみられたことから，
胚・胎児発生に関する NOAEL も 10 mg/kg/日と考えられた。
2.6.6.7. その他の毒性試験
2.6.6.7.1. 代謝物の毒性試験
ヒトにおける主要な血中代謝物は M2（酸化的脱塩素体）および M5（N-脱メチル体）で（それぞ
れ未変化体の AUC の 18%および 24%），微量代謝物（未変化体の AUC の 10%未満）として M6
（N-オキシド体）が認められている。M5 および M6 はラットおよびイヌの血漿中にみられたが，
ラットがん原性試験における雄を除き，ラットまたはイヌにボスチニブを経口投与しても M2 へ
の曝露は認められなかった。これらのことから，M2 代謝物については，ラットを用いた 2 週間
反復投与毒性試験および in vitro 遺伝毒性試験を実施した。
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ボスチニブ水和物
2.6.6 毒性試験の概要文
2.6.6.7.1.1. 代謝物 M2 のラット 2 週間反復経口投与毒性試験
4.2.3.7.5.1 RPT-74244
代謝物 M2（WAY-198760；PF-05898965）を，SD ラット（1 群雌雄各 8 匹）に 0（溶媒対照），
70 または 210 mg/kg/日の用量で 1 日 1 回，14 日間連日経口投与した
（毒性試験の概要表，2.6.7.34）
。
溶媒対照群には，2.0%ポリソルベート 80，0.5%メチルセルロースおよび注射用滅菌水からなる
溶媒を投与した。本試験の低用量は，ラットに M2 を 50 mg/kg の用量で単回投与したときの AUC
（雄および雌でそれぞれ 295 および 230 ng•h/mL）がヒトにおける M2 曝露量（440 ng•h/mL）よ
り低かった（2.6.4.3.2.4 項）ことから，ヒトと同程度の曝露量が得られると想定される用量とし
て 70 mg/kg/日を設定した。高用量の 210 mg/kg/日は，ヒトの M2 曝露量の 2～3 倍程度の曝露量
が得られると想定される用量として設定した。検査項目は生死，一般状態観察，体重，摂餌量，
眼科学的検査，血液学的検査，血液生化学的検査，器官重量，剖検および病理組織学的検査とし
た。別途サテライト群（溶媒対照群は雌雄各 3 匹，70 および 210 mg/kg/日群は 1 群雌雄各 9 匹）
を設け，投与 8 日に採血して TK 測定を実施した（毒性試験の概要表，2.6.7.35）。
本試験では死亡はみられなかった。M2 投与に関連する一般状態の変化はみられず，体重，摂餌
量，眼科学的検査，臨床病理学的検査，器官重量，剖検または病理組織学的検査においても変化
は認められなかった。
M2 への曝露量は雌雄ともにほぼ M2 の用量の増加に比例して増加した。雌では動物間のばらつ
きが大きかったが，全体として曝露量に有意な性差は認められなかった。
以上，M2 投与に関連する毒性変化がみられなかったことから，M2 をラットに 1 日 1 回，2 週間
経口投与したときの NOAEL は，最高用量の 210 mg/kg/日と考えられた。M2 の NOAEL でのラッ
トにおける曝露量（AUC(0-24)：雄で 929 ng•h/mL，雌で 1488 ng•h/mL）は，ヒトにボスチニブ 500 mg
を投与したときの M2 曝露量のそれぞれ 2.1 倍および 3.4 倍であった。
2.6.6.7.1.2. 代謝物 M2 の細菌を用いた復帰突然変異試験
4.2.3.7.5.2 RPT-73086
M2 の変異原性の有無を，
ネズミチフス菌
（S. typhimurium）株 TA98，
TA100，TA1535 および TA1537
ならびに大腸菌
（E. coli）
株 WP2 uvrA を用いて，S9 の非存在下または存在下において 50～5000 g/
プレートの濃度範囲で検討した（毒性試験の概要表，2.6.7.34）。初回試験および確認試験の
1500 g/プレート以上で析出がみられ，確認試験の 1500 g/プレート以上で毒性が認められた。
TA100 を用いた初回試験においてのみ，S9 存在下の最高濃度 5000 g/プレートで対照値を 2.1 倍
上回る増加がみられたが，再現性は認められず，M2 の変異原性は陰性と判断された。
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ボスチニブ水和物
2.6.6 毒性試験の概要文
2.6.6.7.1.3. 代謝物 M2 のヒト末梢血リンパ球を用いた染色体異常試験
4.2.3.7.5.3 RPT-73087
ヒト末梢血リンパ球培養細胞を，M2 で S9 非存在下で 4 時間または 20 時間，および S9 存在下で
4 時間処理（顕微鏡検査を実施した濃度範囲はそれぞれ 10～25，5～15 および 5～15 g/mL）し
た（毒性試験の概要表，2.6.7.34）。陰性対照（DMSO）および陽性対照［S9 非存在下ではマイ
トマイシン C（4 時間処理：0.6 g/mL，20 時間処理：0.3 g/mL），S9 存在下ではシクロホスファ
ミド（20 g/mL）］についても検討した。処理開始の約 20 時間後に細胞の分裂を分裂中期で停
止させ，染色体異常の有無を検討した。それぞれの処理条件で顕微鏡検査を実施した最高濃度で
は，溶媒対照と比較して 50%以上の分裂指数の低下が認められた。
陽性対照はいずれの曝露群でも統計学的に有意な染色体異常を誘発した。ボスチニブは，S9 の非
存在下または存在下のいずれの濃度においても，染色体構造異常または数的異常を有する細胞の
比率に統計学的に有意な増加を誘発しなかった。
以上のことから，M2 のヒト末梢血リンパ球における染色体構造異常または数的異常誘発能は陰
性であった。
2.6.6.7.2. 光毒性試験
4.2.3.7.7.1 RPT-74360
ラット 6 ヵ月間反復投与毒性試験（2.6.6.3.4 項）およびイヌ 9 ヵ月間反復投与毒性試験（2.6.6.3.8
項）では，間接検眼鏡を用いた眼科学的検査，剖検または病理組織学的検査においてボスチニブ
投与による眼の所見は認められなかった。しかしながら，ボスチニブは 290～700 nm（UVA，UVB
および可視光線）の範囲で吸収を示し，また本薬およびその代謝物は有色（Long-Evans）ラット
の皮膚およびぶどう膜においてアルビノ（SD）ラットより高い曝露量を示し，メラニン含有組織
に高い親和性を有することが示唆される（2.6.4.4.1 項）ことから，in vivo 光毒性試験を実施した
（毒性試験の概要表，2.6.7.34）。
Long-Evans ラット（雌雄各 5 匹/群）にボスチニブを 0（溶媒対照），10 または 100 mg/kg/日の用
量で 2 日間経口投与した。2 回目の投与の約 4 時間後（皮膚および眼における Tmax と想定される
時間）にラットの背側正中近くの軽度着色部位および着色部位ならびに眼に約 30 分間紫外線照
射した。陽性対照群（雌雄各 3 匹）には光毒性物質である 8-メトキシソラレン（8-MOP）を 50 mg/kg
の用量で単回投与し，その 1 時間後に紫外線に曝露した。検査項目は生死，一般状態，体重，皮
膚観察，眼科学的検査および眼の病理組織学的検査とした。
死亡例はみられず，ボスチニブ投与による一般状態または体重の変化も認められなかった。溶媒
対照群およびボスチニブ投与群のいずれのラットにおいても，光毒性を示唆する皮膚反応，眼科
学的所見または眼の病理組織学的所見はみられなかった。一方，陽性対照の 8-MOP では，光毒
性を示唆する皮膚反応（紅斑および浮腫など），眼科学的所見（角膜浮腫）および眼の病理組織
学的変化（角膜における実質浮腫および上皮細胞間浮腫など）が認められた。
以上，ボスチニブを 10 または 100 mg/kg/日の用量で 2 日間投与し，その後皮膚および眼における
Tmax と想定される時間に紫外線照射しても光毒性は認められず，有色ラットの皮膚およびぶどう
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Page 31
ボスチニブ水和物
2.6.6 毒性試験の概要文
膜において本薬が高い曝露量を示したことと光毒性は関連しないものと考えられた。光毒性に関
する無影響量（NOEL）は最高用量の 100 mg/kg/日と考えられた。この用量におけるラットの推
定曝露量（Cmax）は雄 448 ng/mL，雌 1668 ng/mLaであり，これは日本人 CML 患者に 500 mg のボ
スチニブを投与したときの Cmax（226 ng/mL）bのそれぞれ 2.0 倍および 7.4 倍であった。
2.6.6.8. 考察および結論
2.6.6.8.1. 消化管毒性
一般状態所見および腸管における病理組織学的所見として，ラットおよびイヌで嘔吐，糞便異常
ならびに腸管の内腔拡張，粘膜過形成，杯細胞肥大･過形成，びらんまたは浮腫などが認められ
たことから，消化管はボスチニブの毒性の主たる標的臓器であると考えられた。ラットおよびイ
ヌの反復投与毒性試験で認められた消化管障害に関連する所見の要約を Table 6 に示す。
ラットにおいて最初に実施した 1 ヵ月間試験（2.6.6.3.2 項）の 10～70 mg/kg/日では消化管に毒性
変化は認められなかったが，6 ヵ月間試験（2.6.6.3.4 項）ではボスチニブの消化管毒性に関連す
ると考えられる死亡例が雄では 100/70 mg/kg/日，雌では 30 mg/kg/日以上で認められ，
100/70 mg/kg/日では腸管において消化管毒性を示唆する種々の所見（軟便，腸管の肥厚および膨
満，粘膜過形成，杯細胞肥大・過形成，内腔拡張，びらんおよび浮腫）が観察された。二度目の
1 ヵ月間試験（2.6.6.3.3 項）の 200 mg/kg/日ではこれらの変化がより重度にみられ，全例が死亡ま
たは安楽殺に至った。
イヌにおいては，1 ヵ月間（2.6.6.3.6 項）および 9 ヵ月間（2.6.6.3.8 項）試験ではそれぞれ 5 およ
び 10 mg/kg/日までの用量で消化管毒性は認められなかったが，2 週間忍容性試験（2.6.6.3.7 項）
の 20 mg/kg/日では嘔吐，糞便異常，体重減少および摂餌量減少が認められ，特に投与の最後の 5
日間は無摂餌であり，より長期間の投与には耐えられないものと考えられた。さらに 10 日間用
量設定試験（2.6.6.3.5 項）の 37.5 mg/kg/日以上では嘔吐，糞便異常などの一般状態悪化のため，
投与中止（150 mg/kg/日では安楽殺）に至った。
このように，ラット 6 ヵ月間およびイヌ 9 ヵ月間毒性試験における消化管毒性に関する NOAEL
での曝露量（AUC(0-24)：ラットは雄および雌でそれぞれ 3810 および 4387 ng•h/mL，イヌは雄およ
び雌でそれぞれ 8265 および 6657 ng•h/mL）はヒトにおける曝露量（3690 ng•h/mL）の少なくとも
1 倍以上と考えられたが，消化管毒性はラットではおおむね 30～70 mg/kg/日以上，イヌでは
20 mg/kg/日以上で発症し，数倍程度の用量増加で投与中止もしくは多数例の死亡発生に至る，急
峻な用量反応関係を示した。
a
ラットにボスチニブ 50 mg/kg を単回投与したときの Cmax（雄 224 ng/mL，雌 834 ng/mL；2.6.4.3.2.2 項）
より，曝露量の用量反応性が線形であると想定した推定値。
b
3160A3-2203-JA 臨床試験（B1871007）において，日本人 CML 患者にボスチニブ 500 mg を 1 日 1 回反復
投与したときの投与 15 日の値（2.7.2.2.4.4 項）。
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ボスチニブ水和物
2.6.6 毒性試験の概要文
Table 6.
ボスチニブによる消化管障害のまとめ（反復投与毒性試験）
用量（mg/kg/日）
ラット
消化管関連所見
10
毒性変化なし
30
毒性変化なし
毒性変化なし（雄），死亡 a（雌 1/20 例）
毒性変化なし
死亡 a（雄 3/20 例，雌 6/20 例）
一般状態変化（軟便，液状便など）；体重減少；腸壁肥
厚，小腸膨満；腸管の粘膜過形成，杯細胞肥大・過形成，
内腔拡張，びらん，浮腫
体重および体重増加量減少；摂餌量減少；小腸杯細胞の
肥大・過形成，盲腸または結腸の粘膜過形成
全例死亡または安楽殺 a
腸管の出血，粘膜過形成，浮腫，内腔拡張
70
100/70
100
200
試験番号
RPT-52772
RPT-63644
RPT-52772
RPT-63644
RPT-52772
RPT-63644
RPT-57924
RPT-57924
イヌ
0.5, 1.5, 5
1, 3, 10
10
20
37.5, 75
a
毒性変化なし
毒性変化なし
毒性変化なし
嘔吐；糞便異常；体重減少；摂餌量減少
嘔吐，糞便異常等による投与中止；摂餌量減少
嘔吐，糞便異常等による安楽殺；体重減少；摂餌量減少；
150
腸管粘膜の変色（赤色または褐色）
消化管障害によると考えられる死亡
RPT-52074
RPT-65542
RPT-60569
RPT-60569
RPT-50039
RPT-50039
ラット 2 年間がん原性試験では，最高用量（雄 25/15 mg/kg/日，雌 15 mg/kg/日）で体重減少が認
められているにもかかわらず，反復投与毒性試験で認められたような腸管の粘膜過形成や杯細胞
肥大・過形成といった増殖性変化はみられなかった。一方，小腸において粘膜固有層へのコラー
ゲン沈着が最低用量（雄 2.5 mg/kg/日，雌 1.5 mg/kg/日：曝露量は臨床の 1/10 未満）から認めら
れた。がん原性試験の低用量における Cmax（非結合型）は 2～3 nmol/Laであるが，ボスチニブが
CML 細胞に対して増殖阻害作用を発揮するには多くの細胞株においてこれより高濃度を要した
（2.6.2.2.1.2 項）ことから，がん原性試験の低用量で腸管にみられた所見は，経口投与されたボ
スチニブが腸管において局所的に作用している可能性が考えられる。また，がん原性試験におい
ては雌の方が曝露量が高いにもかかわらず雄に比べて忍容性が良好であった傾向があり，このこ
とからも，ボスチニブ経口投与時の消化管毒性には，血漿中曝露だけでなく，用量に依存した消
化管への局所作用が寄与している可能性が考えられる。
消化管毒性は臨床試験でも下痢および嘔吐等として高頻度で認められていることから，添付文書
（案）において「下痢（93.7%），嘔吐（36.5%）があらわれることがあるので，観察を十分に行
a
血漿中 Cmax 値（雄 18.8 ng/mL，雌 25.4 ng/mL）より，ボスチニブの分子量（530.45）およびラット血漿蛋
白に対する非結合分率（0.061；2.6.4.4.2.1 項）を用いて算出した。
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Page 33
ボスチニブ水和物
2.6.6 毒性試験の概要文
い，異常が認められた場合には，止しゃ薬の投与，補液などを行い，必要に応じ，休薬，減量又
は投与を中止するなど適切な処置を行うこと」と注意喚起する。
2.6.6.8.2. 生殖発生毒性
ラットを用いた受胎能および着床までの初期胚発生に関する試験において，雄の授胎能の低下，
雌の着床数の減少および吸収胚数増加に伴う生存胚数の減少が認められた。これらの変化に関す
る NOAEL（雄 30 mg/kg/日，雌 3 mg/kg/日）における曝露量（AUC(0-24)：雄 1686 ng•h/mL，雌 857 ng
•h/mL）aは，日本人 CML 患者に 500 mg の用量で投与したときの曝露量（3690 ng•h/mL）の 0.5
倍（雄）および 0.2 倍（雌）bであった。
ラットおよびウサギを用いた胚・胎児発生に関する試験においては，ラットでは 10 mg/kg/日まで
の用量で母体毒性または胚・胎児発生に対する影響は認められなかったが，ウサギでは 30 mg/kg/
日で母動物への毒性として一般状態の変化ならびに体重および摂餌量の減少が認められ，胚・胎
児毒性としては胎児体重減少ならびに胎児の内臓および骨格異常の発現頻度増加がみられた。
ラットおよびウサギの発生に関する NOAEL における母動物の曝露量（AUC(0-24)）は，それぞれ
4463 および 5451 ng•h/mL で，日本人 CML 患者における曝露量のそれぞれ 1.2 倍および 0.7 倍 b
であった。
ボスチニブ投与によってこれらの生殖発生毒性が認められたことから，添付文書（案）において
「妊婦又は妊娠している可能性のある婦人には投与しないこと。また妊娠可能な婦人に対しては
適切な避妊を行うよう指導すること」と注意喚起する。
2.6.6.8.3. 結論
以上，ボスチニブの非臨床毒性プロファイルは，単回投与毒性試験，反復投与毒性試験（ラット
最長 6 ヵ月間，イヌ最長 9 ヵ月間），遺伝毒性試験，がん原性試験，生殖発生毒性試験，代謝物
の毒性試験および光毒性試験により評価された。消化管毒性に伴って動物でみられた一般状態の
変化，体重減少および摂餌量減少は臨床的に管理可能であるか，本薬の適応対象患者（CML）へ
の投与に際しては容認できるリスクであると考えられる。
2.6.6.9. 表および図
毒性試験および TK 試験の結果に関する表を 2.6.7 毒性試験の概要表に示す。
a
ラットの受胎能および着床までの初期胚発生に関する試験では TK 測定を実施していないため，NOAEL
における曝露量は，雄は 1 ヵ月間毒性試験（RPT-52934）の 30 mg/kg/日群，雌は胚・胎児発生に関する試験
（RPT-64286）の 3 mg/kg/日群の値を示す。
b
ボスチニブの曝露量比較は，ヒトとラットでは蛋白結合率が同程度［非結合分率（fu 値）がそれぞれ 0.063
および 0.061］であるため血漿中総濃度に基づいて行い，ウサギの fu 値はそれより低い（0.028）ため，ヒトとの
比較は非結合画分に基づいて行った（2.6.4.4.2.1 項）。
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Page 34
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
TABLE OF CONTENTS
2.6.7.1. Toxicology Overview of Bosutinib................................................................................................... 3
2.6.7.2. Toxicokinetics: Overview of Toxicokinetics Studies ....................................................................... 9
2.6.7.3. Toxicokinetics: Overview of Toxicokinetic Data for Bosutinib .................................................. 11
2.6.7.4. Toxicology: Drug Substance........................................................................................................ 14
2.6.7.5. Summary of Single-Dose Toxicity Studies with Bosutinib ............................................................ 16
2.6.7.6. Summary of Dose-Ranging Studies with Bosutinib ....................................................................... 19
2.6.7.7. Mean ± SE Pharmacokinetic Parameters for Bosutinib in Rats in a 7-Day Oral
(Gavage) Dose-Ranging Study .............................................................................................................. 24
2.6.7.8. Mean ± SD Pharmacokinetic Parameters for Bosutinib and N-Desmethyl Bosutinib
(M5) in Male Rats in a 56-Day Oral Investigative Study ...................................................................... 25
2.6.7.9. Mean ± SD Pharmacokinetic Parameters for Bosutinib in Female Dogs in a 10-Day
Oral (Gavage) Dose-Ranging Study ...................................................................................................... 26
2.6.7.10. Repeat-Dose 28-Day Oral (Gavage) Toxicity Study in Rats ........................................................ 27
2.6.7.11. Mean ± SE Pharmacokinetic Parameters for Bosutinib in Rats in a 28-Day Oral
(Gavage) Toxicity Study........................................................................................................................ 29
2.6.7.12. Repeat-Dose Toxicity: 28-Day Oral (Gavage) Toxicity Study in Rats with a 28-Day
Recovery................................................................................................................................................ 30
2.6.7.13. Repeat-Dose Toxicity: 6-Month Oral (Gavage) Toxicity Study in Rats....................................... 37
2.6.7.14. Mean ± SE Pharmacokinetic Parameters for Bosutinib in Rats in a 6-Month Oral
(Gavage) Toxicity Study........................................................................................................................ 44
2.6.7.15. Repeat-Dose 28-Day Oral (Gavage) Toxicity Study in Dogs....................................................... 45
2.6.7.16. Mean ± SD Pharmacokinetic Parameters for Bosutinib in Dogs in a 28-Day Oral
(Gavage) Toxicity Study........................................................................................................................ 47
2.6.7.17. Repeat-Dose Toxicity: 9-Month Oral (Gavage) Toxicity Study in Fed Dogs with a
28-Day Recovery ................................................................................................................................... 49
2.6.7.18. Mean ± SD Pharmacokinetic Parameters for Bosutinib in Fed Dogs in a 9-Month Oral
(Gavage) Toxicity Study........................................................................................................................ 51
2.6.7.19. Summary of Genotoxicity Studies with Bosutinib........................................................................ 53
2.6.7.20. Salmonella typhimurium Reverse Mutation Screening Assay (Ames Test).................................. 55
2.6.7.21. Bacterial Reverse Mutation Test with Salmonella typhimurium and Escherichia coli ................. 57
2.6.7.22. In Vitro Mammalian Chrosome Aberration Test in Human Peripheral Blood
Lymphocytes.......................................................................................................................................... 59
2.6.7.23. Single Dose Oral (Gavege) Bone Marrow Micronucleus Study in Male Mice............................. 61
2.6.7.24. Mean ± SE Pharmacokinetic Parameters for Bosutinib in Male Mice after a Single
Oral Dose in a Micronucleus Support Study ......................................................................................... 62
2.6.7.25. Two Year Oral (Gavage) Carcinogenicity Study in Rats.............................................................. 63
2.6.7.26. Mean Pharmacokinetic Parameters for Bosutinib, M2 and M5 in Two Year Oral
(Gavage) Carcinogenicity Study in Rats................................................................................................ 73
2.6.7.27. Reproductive and Developmental Toxicity Studies: Non-Pivotal Studies.................................... 75
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Page 1
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.28. Reproductive and Developmental Toxicity: Oral Fertility Study in Male and Female
Rats ........................................................................................................................................................ 82
2.6.7.29. Reproductive and Developmental Toxicity: Effects on Embryo-Fetal Development:
Oral Developmental Toxicity Study in Rats.......................................................................................... 85
2.6.7.30. Reproductive and Developmental Toxicity: Effects on Embryo-Fetal Development:
Oral Developmental Toxicity Study in Rabbits..................................................................................... 88
2.6.7.31. Mean ± SE Pharmacokinetic Parameters for Bosutinib in an Oral Developmental
Toxicity Dose-Ranging Study in Female Rabbits.................................................................................. 91
2.6.7.32. Mean ± SE Pharmacokinetic Parameters for Bosutinib in an Oral Developmental
Toxicity Study in Female Rats............................................................................................................... 92
2.6.7.33. Mean ± SE Pharmacokinetic Parameters for Bosutinib in an Oral Developmental
Toxicity Study in Female Rabbits ......................................................................................................... 93
2.6.7.34. Other Toxicity Studies .................................................................................................................. 94
2.6.7.35. Mean ± SE Pharmacokinetic Parameters for Oxydechlorinated Bosutinib (M2) in Rats
in a 2-Week Oral (Gavage) Toxicity Study ........................................................................................... 96
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Page 2
Bosutinib
Module 2.6.7 Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.1.
Toxicology Overview of Bosutinib
Type of Study
Single-Dose
Repeat-Dose
Test Article: Bosutinib
Species and
Straina
Mice/CD-1
Method of
Administration
Oral
Duration of
Dosing
1 Day
Dosageb
(mg/kg)
0c
2000
GLP
Study
Yes
Testing
Facility
Wyeth Research
Report No.
Mice/CD-1
IP
1 Day
0c
20
70
200
Yes
Wyeth Research
RPT-52016
Rats/S-D
Oral
1 Day
0c
200
700
2000
Yes
Wyeth Research
RPT-52013
Rats/S-D
IP
1 Day
0c
20
70
200
Yes
Wyeth Research
RPT-52015
Rats/S-D
Oral
7 Days
0c
100
300
1000
No
Wyeth Research
RPT-49310
RPT-50258
3 Days
2 Days
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 3
RPT-52017
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.1
Toxicology Overview of Bosutinib (Cont’d)
Type of Study
Repeat- Dose
(cont’d)
Test Article: Bosutinib
Dosageb
(mg/kg)
0c
10
30
70
0c
100
200
GLP
Study
Yes
Testing
Facility
Wyeth Research
(Italy)
Report No.
Yes
Wyeth Research
RPT-57924
6 Months
0c
10
30
100/70e
Yes
Wyeth Research
(Italy)
RPT-63644
RPT-64288
Oral
10 Days
10 Days
1 Day
2 Days
1 Day
3 Days
0c
5 (Fed)
37.5 (Fed)
37.5 (Fasted)
75 (Fasted)
150 (Fasted)
No
Wyeth Research
RPT-50039
RPT-53053
Male Dogs/Beagle
Oral
14 Days
10
20
No
Wyeth Research
(Italy)
RPT-60569
Dogs/Beagle
Oral
28 Days
0c
0.5
1.5
5
Yes
Wyeth Research
RPT-52074
RPT-53029
Species and
Straina
Rats/S-D
Method of
Administration
Oral
Duration of
Dosing
28 Days
Rats/S-D
Oral
28 Daysd
Rats/S-D
Oral
Female Dogs/Beagle
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 4
RPT-52772
RPT-52934
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.1
Toxicology Overview of Bosutinib (Cont’d)
Test Article: Bosutinib
Oxydechlorinated Bosutinib (M2)
Species and
Straina
Dogs/Beagle
Method of
Administration
Oral
Duration of
Dosing
9 Monthsd
Dosageb
(mg/kg)
0c
1
3
10
GLP
Study
Yes
Testing
Facility
Wyeth Research
(Italy)
Report No.
Salmonella
typhimurium
(TA98, TA100)
In Vitro
NA
No
Wyeth Research
RPT-46058
Bacterial Reverse
Mutation Assay
with Bosutinib
S. typhimurium
(TA98, TA100,
TA1535, TA1537)
Escherichia coli
(WP2 uvrA)
In Vitro
NA
-S9 and +S9: 10,
33.3, 100, 333,
1000, 3330, and
5000 g/plate
-S9 and +S9: 1.0,
3.3, 10, 33, 100,
333, and
1000 g/plate
(initial and
confirmatory)
Chromosome
Aberration Assay
with Bosutinib
Human peripheral
blood lymphocytes
In Vitro
NA
Bacterial Reverse
Mutation Assay
with M2
S. typhimurium
(TA98, TA100,
TA1535, TA1537)
E. coli (WP2 uvrA)
In Vitro
NA
Type of Study
Repeat- Dose
(cont’d)
Genotoxicity
Bacterial Reverse
Mutation Screen
with Bosutinib
RPT-65542
RPT-66535
Yes
RPT-49003
-S9: 0.25, 0.5, 1,
2.5, 5, 7.5, and
10 g/mL
(4 and 20 hours
treatment)
+S9: 0.25, 0.5, 1,
2.5, 5, 7.5, and
10 g/mL
(4 hours treatment)
Yes
RPT-50322
-S9 and +S9: 50,
150, 500, 1500,
3000 (TA100 +S9),
and 5000 g/plate
(initial and
confirmatory)
Yes
RPT-73086
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 5
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.1
Toxicology Overview of Bosutinib (Cont’d)
Duration of
Dosing
Dosageb
(mg/kg)
GLP
Study
In Vitro
NA
-S9: 10, 15, 25, 50,
75, 100, 125 and
150 g/mL
(4 hours treatment)
5, 10, 15, 25, 35
and 50 g/mL
(20 hours treatment)
+S9: 5, 10, 15, 25,
35, 50, 60 and
75 g/mL
(4 hours treatment)
Yes
RPT-73087
Polychromatic
erythrocytes in
mouse (CD-1) bone
marrow
Oral
1 Day
0c
500
1000
2000
Yes
RPT-52501
RPT-52338
Rats/S-D
Oral
M: 91 Weeks
F: 100 Weeks
M: 0c, 0f, 2.5, 7.5,
25g
c
f
F: 0 , 0 , 1.5, 5, 15
Yes
Wyeth Research
10-2185
Oral
M: ~7.5 Weeks
(4 weeks PM to
GD 20)i.
F: 5 - 6 Weeks
(2 weeks PM to
GD 20).
0c
10
30
100h
Yes
Wyeth Research
RPT-61450
Type of Study
Genotoxicity (cont’d)
Human peripheral
Chromosome
blood lymphocytes
Aberration Assay
with M2
Carcinogenicity
Oxydechlorinated Bosutinib (M2)
Method of
Administration
Species and
Straina
Micronucleus
Assay
Test Article: Bosutinib
Reproductive and Developmental Toxicity
Fertility and
Rats/S-D
Develoopmental
Dose Ranging
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 6
Testing
Facility
Report No.
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.1
Toxicology Overview of Bosutinib (Cont’d)
Species and
Method of
Type of Study
Straina
Administration
Reproductive and Developmental Toxicity (cont’d)
Fertility
Rats/S-D
Oral
Developmental
Test Article: Bosutinib
Duration of
Dosing
Dosageb
(mg/kg)
GLP
Study
Testing
Facility
Report No.
M: ~7 Weeks
(4 weeks PM to
GD 7)
F: 3 - 6 Weeks
(2 weeks PM to
GD 7).
12 Days
(GD 6 through
GD 17)
0c
10
30
70
Yes
Wyeth Research
RPT-63257
0c
1
3
10
Yes
Wyeth Research
RPT-63107
RPT-64286
Female Rats/S-D
Oral
Tolerability
Rabbits/NZW
Oral
7 Daysj
0c
10
30
100
No
Wyeth Research
RPT-61455
Developmental
Dose-Ranging
Female
Rabbits/NZW
Oral
14 Days
(GD 6 through
GD 19)
0c
10
30
60
Yes
Wyeth Research
RPT-62710
RPT-64285
Developmental
Female
Rabbits/NZW
Oral
14 Days
(GD 6 through
GD 19)
0c
3
10
30
Yes
Wyeth Research
RPT-65533
RPT-66820
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 7
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.1
Toxicology Overview of Bosutinib (Cont’d)
Type of Study
Other Studies
M2 Qualification,
Repeat Dose with
M2
Phototoxicity
Test Article: Bosutinib
Species and
Straina
Method of
Administration
Duration of
Dosing
Dosageb
(mg/kg)
GLP
Study
Testing
Facility
Report No.
Rats/S-D
Oral
14 Days
0k
70 (M2)
210 (M2)
Yes
Wyeth Research
(Italy)
RPT-74244
Rats/Long Evans
Oral
2 Days
0c
10
100
Yes
RPT-74360
GD = Gestation day; IP = Intraperitoneal; M2 = oxydechlorinated bosutinib; NA = Not applicable; NZW = New Zealand White; PM = Premating, RPT
= Report; S9 = Aroclor™-induced rat liver metabolic activation; S-D = Sprague-Dawley.
a
b
c
d
e
f
g
h
i
j
k
Includes males and females unless otherwise indicated.
Dosages are in mg/kg unless otherwise indicated.
Vehicle control (2% polysorbate 80, 0.5% methylcellulose, and 0.06% acetic acid in purified water).
Followed by a 28-day recovery period.
Due to mortality, clinical signs and body weight loss, the high dosage was lowered from 100 mg/kg/day to 70 mg/kg/day from day 43 of
treatment.
Distilled water.
Based on reduced survival in males at 25 mg/kg/day bosutinib, the dose level was decreased to 15 mg/kg/day on week 78.
Due to excessive toxicity in females at 100 mg/kg/day, both the males and females at this dosage were euthanized prior to the cohabitation period.
Time of euthanasia was based on determination of female fertility.
All animals given 100 mg/kg/day (1 male and 2 females) were euthanized on day 2 due to bosutinib-related poor clinical condition. Control
animals were dosed for 10 days.
Vehicle control (2% polysorbate 80 and 0.5% methylcellulose and sterile water).
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 8
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.2. Toxicokinetics: Overview of Toxicokinetics Studies
Type of Study
7-Day Dose-Ranging Study
Test Systema
Male and Female
Rats
Routeb
Oral
56-Day Investigative Study
Male Rats
Oral
Test Article: Bosutinib, Imatinib
Dosage
(mg/kg)c
100
300
GLP
Study
No
Testing Facility
Wyeth Research
Report No.
RPT-50258
Bosutinib
50
No
PGRD
SP3810
Imatinibd
50
28-Day Toxicity Study
Male and Female
Rats
Oral
10
30
70
Yes
Wyeth Research
(Italy)
RPT-52934
6-Month Toxicity Study
Male and Female
Rats
Oral
10
30
100/70e
Yes
Wyeth Research
(Italy)
RPT-64288
Female Dogs
Oral
5
37.5
75
150
No
Wyeth Research
RPT-53053
28-Day Toxicity Study
Male and Female
Dogs
Oral
0.5
1.5
5
Yes
Wyeth Research
RPT-53029
9-Month Toxicity Study
Male and Female
Dogs
Oral
1
3
10
Yes
Wyeth Research
(Italy)
RPT-66535
10-Day Dose-Ranging Study
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 9
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.2
Toxicokinetics: Overview of Toxicokinetics Studies (Cont’d)
Test Article: Bosutinib
Oxydechlorinated Bosutinib (M2)
Dosage
(mg/kg)c
2000
GLP
Study
Yes
Testing Facility
Wyeth Research
Oral
Male: 2.5, 7.5, 25
Female: 1.5, 5, 15
Yes
Wyeth Research
Gravid Rats
Oral
1
3
10
Yes
Wyeth Research
RPT-64286
Developmental Dose-Ranging
Gravid Rabbits
Oral
10
30
60
Yes
Wyeth Research
RPT-64285
Developmental Toxicity Study
Gravid Rabbits
Oral
3
10
30
Yes
Wyeth Research
RPT-66820
Male and Female
Rats
Oral
M2
70
210
Yes
Wyeth Research
RPT-74244
Test Systema
Male Mice
Routeb
Oral
Male and Female
Rats
Developmental Toxicity Study
Type of Study
Single-Dose Toxicokinetics
(Micronucleus Support Study)
Carcinogenicity Study
2-Week Toxicity Study with
Oxydechlorinated Bosutinib (M2)f
GLP = Good Laboratory Practice; PGRD = Pfizer Global Research and Development; RPT = Report.
Includes males and females unless otherwise indicated.
b
Oral administration by gavage unless otherwise indicated.
c
Dosage units are mg/kg unless otherwise indicated.
d
Imatinib = PF-01677920.
e
Due to mortality, clinical signs, and body weight loss, the high dosage was lowered from 100 mg/kg/day to 70 mg/kg/day starting on day 43 of treatment.
f
Oxydechlorinated bosutinib [M2] = WAY-198760 and PF-05898965.
a
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 10
Report No.
RPT-52338
-2185
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.3. Toxicokinetics: Overview of Toxicokinetic Data for Bosutinib
Report No.:a
Species:
RPT-52338
Mice
RPT-52934
RPT-64288
RPT-64286
-2185
Rats
Test Article: Bosutinib
RPT-66820
Rabbits
RPT-53029
RPT-66535
Dogs
Dosage Groups
(mg/kg/day)
0.5
Study Type
Once-daily, 1-month
Gender
M
0.5
Once-daily, 1-month
F
232 ± 81
1
Once-daily, 9-month
M
575 ± 141
1
Once-daily, 9-month
F
823 ± 313
1
Once-daily, GD6 – GD17
F
1.5
Once-daily, 1-month
M
985 ± 197
1.5
Once-daily, 1-month
F
824 ± 48
1.5
Once-daily, 2-year
F
298 ± 33
2.5
Once-daily, 2-year
M
244 ± 76
3
Once-daily, 9-month
M
2008 ± 198
3
Once-daily, 9-month
F
2372 ± 280
3
Once-daily, GD6 – GD17
F
3
Once-daily, GD6 – GD19
F
5
Once-daily, 1-month
M
3888
5
Once-daily, 1-month
F
3450 ± 908
5
Once-daily, 2-year
F
1902 ± 203
7.5
Once-daily, 2-year
M
840 ± 94
10
Once-daily, 1-month
M
318 ± 35
---------------------------------Steady State AUC(0-24) (ng•h/mL)--------------------------------229 ± 55
204 ± 42
857 ± 87
1308 ± 282
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 11
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.3
Toxicokinetics: Overview of Toxicokinetic Data for Bosutinib (Cont’d)
Species:
Test Article: Bosutinib
Mice
Rats
Rabbits
Dogs
Dosage Groups
(mg/kg/day)
10
Study Type
Once-daily, 1-month
Gender
F
10
Once-daily, 6-month
M
807 ± 125
10
Once-daily, 6-month
F
4387 ± 470
10
Once-daily, GD6 – GD17
F
4463 ± 227
10
Once-daily, GD6 – GD19
F
10
Once-daily, 9-month
M
8265 ± 1981
10
Once-daily, 9-month
F
6657 ± 1340
15
Once-daily, 2-year
F
10570 ± 327
25
Once-daily, 2-year
M
5127 ± 1038
30
Once-daily, 1-month
M
1686 ± 171
30
Once-daily, 1-month
F
5017 ± 439
30
Once-daily, 6-month
M
3810 ± 423
30
Once-daily, 6-month
F
15405 ± 2363
30
Once-daily, GD6 – GD19
F
70
Once-daily, 1-month
M
4092 ± 423
Once-daily, 1-month
F
14090 ± 1757
Once-daily, 6-month
M
7630 ± 313
70
100/70
b
---------------------------------Steady State AUC(0-24) (ng•h/mL)--------------------------------1467 ± 97
5451 ± 1074
14002 ± 1344
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 12
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.3
Toxicokinetics: Overview of Toxicokinetic Data for Bosutinib (Cont’d)
Species:
Mice
Test Article: Bosutinib
Rats
Rabbits
Dogs
Dosage Groups
(mg/kg/day)
100/70b
Study Type
Once-daily, 6-month
Gender
F
---------------------------------Steady State AUC(0-24) (ng•h/mL)--------------------------------22692 ± 1737
2000
Single Dose
M
172495 ± 26050
AUC = Area under the concentration-versus-time curve; GD = Gestation day; M = Male; F = Female; RPT = Report.
a
Only toxicokinetic data from pivotal repeat-dose studies, developmental and reproductive toxicity studies, and toxicokinetic support for the mouse micronucleus assay are
included in this overview table.
b
At the start of the study, the dosage was 100 mg/kg/day. However, based on the incidence of mortality, the severity of the clinical observations, and the magnitude of the
decreased body weight that occurred in animals administered 100 mg/kg/day through the first 6 weeks of the study, the high dosage of 100 mg/kg/day was lowered to
70 mg/kg/day (referred to as 100/70 mg/kg/day) starting in week 7 (day 43).
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 13
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.4.
Toxicology: Drug Substance
Batch No.
MP030203
MP030203
MP030203
MP030203
19
MP030203
MP030203
RB5626
MP030050
MP030203
MP030203
RB5626
L23445-136
L23445-136
MP030203
Release
Date
20
20
2003
20
Not
Reported
20
20
20
Not
Reported
20
20
20
20
20
20
Total
Impurities
(%)
%
Test Article: Bosutinib
Largest Single
Impurity (%)
%
Type of Study
Single-dose oral (gavage) in mice
Report No.
RPT-52017
%
%
Single-dose IP in mice
RPT-52016
%
%
Single-dose oral (gavage) in rats
RPT-52013
%
%
Single-dose IP in rats
RPT-52015
%
%
7-Day oral (gavage) toxicity in rats
RPT-49310
%
%
28-Day oral (gavage) toxicity in rats
RPT-52772
%
%
28-Day w/recovery oral (gavage) toxicity in rats
RPT-57924
%
%
6-Month oral (gavage) toxicity in rats
RPT-63644
%
%
10-Day oral (gavage) dose-ranging in dogs
RPT-50039
%
%
1-Month oral (gavage) toxicity in dogs
RPT-52074
%
%
14-Day oral (gavage) toxicity in dogs
RPT-60569
%
%
9-Month oral (gavage) toxicity in dogs
RPT-65542
%
%
In vitro bacterial reverse mutation
RPT-49003
%
%
RPT-50322
%
%
In vitro human peripheral blood lymphocyte
chromosome aberration
In vivo mouse micronucleus
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 14
RPT-52501
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.4
Batch No.
MR090034
RB5626
RB5626
RB5626
RB5626
RB5626
MP030203
RB5626
Toxicology: Drug Substance (Cont’d)
Release
Date
20
20
20
20
20
20
20
20
Total
Impurities
(%)
<
%
Largest Single
Impurity (%)
<
%
Test Article: Bosutinib
Type of Study
Carcinogenicity in rats
Report No.
-2185
%
%
Fertility and developmental dose-ranging in rats
RPT-61450
%
%
Fertility in rats
RPT-63257
%
%
Developmental toxicity in rats
RPT-63107
%
%
Tolerability in rabbits
RPT-61455
%
%
Developmental dose-ranging in rabbits
RPT-62710
%
%
Developmental toxicity in rabbits
RPT-65533
%
%
Phototoxicity in rats
RPT-74360
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 15
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.5. Summary of Single-Dose Toxicity Studies with Bosutinib
Test Article: Bosutinib
Species/Strain
Report No.
Cross-Reference
Mice/CD-1
RPT-52017
Mice/CD-1
RPT-52016
N/Gender/
Group
3
3
Route
Oral
(gavage)
IP
Dosage
(mg/kg)
0a
2000
Days of
Observation
15
0a
20
70
200
15
Results
The maximum non-lethal dosage and NOAEL of bosutinib was
2000 mg/kg, the highest dosage tested.
All animals at 70 mg/kg were electively euthanized or found dead on days
2 through 4. Clinical signs in these animals were ptosis, positive skin tent,
decreased motor activity, pale appearance, hunched appearance, cool to the
touch, high carriage, and/or lacrimation. Macroscopic findings consisted
of distention of the stomach, cecum, duodenum, ileum, and/or jejunum.
The findings were considered non-specific changes resulting from
debilitation.
Based on mortality and adverse clinical signs at  70 mg/kg, the maximum
non-lethal dosage and NOAEL was 20 mg/kg.
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 16
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.5 Summary of Single-Dose Toxicity Studies with Bosutinib (Cont’d)
Species/Strain
Report No.
Cross-Reference
Rats/S-D
RPT-52013
N/Gender
/ Group
3
Route
Oral
(gavage)
Dosage
(mg/kg)
0a
200
700
2000
Days of
Observation
15
Test Article: Bosutinib
Results
All animals at 200 mg/kg/day survived to scheduled necropsy. There were
no bosutinib-related clinical signs, effects on body weight, or macroscopic
findings observed in these animals.
All animals at 700 mg/kg survived to scheduled necropsy. No
bosutinib-related clinical signs were observed in males, but
bosutinib-related and adverse fecal alterations (soft or liquid) and feces
adhered to fur were observed in 2 of 3 females on days 5 through 8.
Adverse body weight loss (11% decrease compared with day 1) was
observed in 1 of 3 females on day 7. There were no bosutinib-related
macroscopic findings.
All animals at 2000 mg/kg were electively euthanized or found dead on day
4 or 5. Clinical signs observed in these animals included positive skin tent,
red pigment around the nose/mouth and/or eyes, fecal alterations (soft,
mucoid, liquid), feces adhered to fur, yellow discoloration of the perineal
pelage, decreased motor activity, hunched appearance, and/or ptosis.
Bosutinib-related macroscopic findings consisted of intestinal discoloration
and distention.
Based on the absence of adverse clinical signs, effects on body weight,
and/or macroscopic observations during visceral examination, the NOAEL
of a single dosage of bosutinib when administered by oral gavage was
700 mg/kg in males and 200 mg/kg in females.
Based on mortality observed at 2000 mg/kg, the maximum non-lethal
dosage of bosutinib was 700 mg/kg in both males and females.
Rats/S-D
RPT-52015
3
IP
0a
20
70
200
15
There were no bosutinib-related deaths, clinical signs, or effects on body
weight observed in animals given 20 mg/kg. There were no adverse
macroscopic observations.
Three (3) of 3 males and 1 of 3 females at 200 mg/kg were electively
euthanized on day 6. Adverse clinical signs observed in these animals
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 17
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.5 Summary of Single-Dose Toxicity Studies with Bosutinib (Cont’d)
Species/Strain
Report No.
Cross-Reference
N/Gender
/ Group
Route
Dosage
(mg/kg)
Days of
Observation
Test Article: Bosutinib
Results
included low carriage, decreased motor activity, positive skin tent, red
pigment around the nose/mouth and eyes, priapism, distended abdomen,
feces adhered to fur, fecal alterations (soft feces), pale appearance, and
tachypnea.
In the 2 females given 200 mg/kg that survived to scheduled necropsy,
clinical signs were low carriage, distended abdomen, and positive skin tent,
which were not considered adverse because they were infrequent, sporadic,
and transient. One animal (at 200 mg/kg) had a 20% decreases in
body-weight gain compared with controls, but this effect on body weight
was not considered adverse because it was not associated with adverse
clinical signs, and body weight of this animal on day 15 was within the range
of controls.
Macroscopically, adhesions and/or fluid in the abdominal cavity were
observed in all animals at 200 mg/kg and were attributed to a non-specific
reaction to the presence of an irritating foreign material in the abdominal
cavity.
Based on mortality at 200 mg/kg, and on the absence of mortality or adverse
clinical signs or effects on body weight at 70 mg/kg, the maximum
non-lethal dose and the NOAEL was 70 mg/kg.
IP = Intraperitoneal; N = Number of animals; NOAEL = No-observed-adverse-effect level; RPT = Report; S-D = Sprague-Dawley.
a
Vehicle control (2% polysorbate 80, 0.5% methylcellulose, 0.06% acetic acid in purified water).
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Page 18
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.6. Summary of Dose-Ranging Studies with Bosutinib
Species/Strain
Report No.
Cross-Reference
Rats/S-D
RPT-49310
RPT-50258
Test Article: Bosutinib
N/Gender/
Group
5
Route
Duration
Oral (gavage)
7 Days
3 Days
2 Days
Dosage
(mg/kg/day)
0a
100
300
1000
Results
300 and 1000 mg/kg/day groups
All animals at 300 and 1000 mg/kg/day were electively euthanized prior to dosing on
days 4 and 3, respectively.
Bosutinib-related and dose-limiting clinical observations in these animals were: fecal
alterations, high carriage, hunched appearance, ataxia, decreased motor activity, cool to
the touch, dehydration, ptosis, red pigment around the eyes/nose/mouth, piloerection,
dyspnea, distended abdomen, and/or yellow discoloration of perineal pelage. At
1000 mg/kg/day, bosutinib-related and toxicologically significant decreases in body
weight (-13% and -6.5% in males and females, respectively) and food consumption
(-77% and -71%) were observed prior to dosing on day 3. At 300 mg/kg/day, decreases
in body-weight gain (-70% and -97% in males and females, respectively) and food
consumption (-57% and -67%) were observed. Bosutinib-related distention of the
glandular and squamous stomach, duodenum, jejunum, ileum, cecum, and colon was
observed macroscopically in all animals at ≥ 300 mg/kg/day. Discolored (red or dark)
mesenteric lymph nodes were observed in 4 of 5 males and 4 of 5 females at
300 mg/kg/day, and in 3 of 5 males and 4 of 5 females at 1000 mg/kg/day. A small
spleen was observed in 1 of 5 females at 1000 mg/kg/day. Microscopic examinations
were not done on tissues from the 300 and 1000 mg/kg/day dosage groups because these
dosages exceeded a tolerated dosage.
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Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.6
Summary of Dose-Ranging Studies with Bosutinib (Cont'd)
Species/Strain
Report No.
Cross-Reference
N/Gender/
Group
Route/
Duration
Dosage
(mg/kg/day)
Test Article: Bosutinib
Results
100 mg/kg/day group
Clinical observations included (100 mg/kg/day) were fecal alterations (soft or mucoid)
in 2 females from day 5 until scheduled necropsy and red pigment around the
nose/mouth in 1 female from day 6 until scheduled necropsy.
Decreased (-19.9%) food consumption, compared with controls, was observed on day 7
in females at 100 mg/kg/day, but was not considered dose limiting because there was no
concomitant decrease in body weight.
Mean absolute and relative (to body and brain) liver weights were increased 17% to 23%
in females at 100 mg/kg/day. Microscopically, hepatocellular hypertrophy was noted
in the livers of females at this dosage. The changes in weight and microscopic
appearance of the liver were not accompanied by any toxicologically meaningful
changes in clinical chemistry parameters and were not considered to be dose limiting.
Mean absolute and relative (to brain) weights of adrenal glands were increased 16% and
20%, respectively, in females at 100 mg/kg/day. These bosutinib-related adrenal
weight changes were not considered to be dose limiting because there were no
microscopic effects in adrenal glands.
Bosutinib-related microscopic observations in males and/or females at 100 mg/kg/day
consisted of: slight to moderate dilation of the lumen of the jejunum, ileum, or colon
(which was often correlated with macroscopic distention); slight to moderate
hypertrophy/hyperplasia of goblet cells in the duodenum (1 male), jejunum, ileum, and
colon (1 male); slight to marked sinusoidal erythrocytosis in mesenteric lymph nodes
(which correlated macroscopically with red or dark discoloration); and slight to
moderate marginal zone depletion in the spleen. These changes were not dose limiting
at 100 mg/kg/day because they did not affect the overall health of the animals.
In conclusion, based on clinical observations that resulted in elective euthanasia and on
macroscopic observations at necropsy, bosutinib dosages of 300 and 1000 mg/kg/day
were not tolerated in this study. Based on the lack of dose-limiting clinical
observations, effects on body weight, food consumption, clinical pathology parameters,
organ weights, or microscopic changes, 100 mg/kg/day was tolerated. Exposure
(AUC(0-24)) at 100 mg/kg/day in females was 16924 ng•h/mL.
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Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.6
Summary of Dose-Ranging Studies with Bosutinib (Cont'd)
Species/Strain
Report No.
Cross-Reference
Dogs/Beagle
RPT-50039
RPT-53053
N/Gender/
Group
2 or 3 F
Route/
Duration
Oral (gavage)
10 Days
10 Days
1 Day
2 Days
1 Day
3 Days
Dosage
(mg/kg/day)
0a
5 (fed)
37.5 (fed)
37.5 (fasted)
75 (fasted)
150 (fasted)
Test Article: Bosutinib
Results
150 mg/kg/day group
All animals given 150 mg/kg/day were electively euthanized after dosing on day 3, or
prior to dosing on day 4.
The dose-limiting clinical observations in these animals were emesis, fecal alterations
(soft, mucoid, liquid, discolored, containing red pigment), thin appearance, and
salivation. Dose-limiting decreases (-0.5 to -1.1 kg) in body weight were observed in
all animals and concomitant decreases in food consumption (1/4 to 1/2 of food ration
consumed) were observed in 2 of 3 animals. Alterations in clinical pathology
parameters observed in these animals were suggestive of inflammation and were
generally consistent with clinical observations and macroscopic findings associated
with the GI tract. All electively euthanized animals had multifocal red linear
discoloration of the colonic mucosa. One (1) animal also had red or brown
discoloration of the mucosa in the stomach, duodenum, ileum, and cecum. The
duodenal and ilial discolorations were linear in shape, similar to the colonic lesion.
There was also dark discoloration of the mesenteric lymph nodes and reddened
mesenteric and mediastinal lymph nodes in individual animals in this group.
37.5 mg/kg/day group
Bosutinib was not tolerated after 2 dosages of 37.5 mg/kg/day (fasted), a single dose of
37.5 mg/kg (fed), or a single dose of 75 mg/kg (fasted).
In these fed animals, dose-limiting clinical observations were emesis and/or fecal
alterations. Salivation and/or thin appearance were also observed in these animals but
were not considered dose limiting because they were sporadic and they did not affect the
overall health of the animals. There were no effects on body weight; however,
dose-limiting decreases in food consumption (0 to 1/4 of food ration consumed) were
observed in fed animals at 37.5 mg/kg/day. Clinical pathology and macroscopic and
microscopic examinations were not conducted in these 3 animals because these dosages
exceeded a tolerated dosage.
5 mg/kg/day group
At 5 mg/kg/day, there were no dose-limiting changes in clinical observations, clinical
pathology parameters, organ weights, or macroscopic or microscopic observations.
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Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.6
Summary of Dose-Ranging Studies with Bosutinib (Cont'd)
Species/Strain
Report No.
Cross-Reference
N/Gender/
Group
Route/
Duration
Dosage
(mg/kg/day)
Test Article: Bosutinib
Results
Fecal alterations (soft, mucoid, liquid, and/or containing red pigment) were observed in
both animals. The fecal alterations were not considered to be dose limiting because
they were sporadic and there were no concomitant decreases in body weight or food
consumption.
Exposure (Cmax and AUC) to bosutinib increased with increasing dosage in a
dose-proportional manner in fed animals from 5 to 37.5 mg/kg/day and in a less than
dose-proportional manner in fasted animals from 37.5 mg/kg/day to 150 mg/kg/day.
At 37.5 mg/kg/day, exposure in fed dogs (AUC(0-24) = 13330 ng•h/mL) was
approximately 2 times that in fasted dogs (AUC(0-24) = 6349 ng•h/mL). With limited
data and number of animals (N = 2) at 5 mg/kg/day, the mean accumulation ratio was
1.4 on day 10 relative to day 1.
In conclusion, based on dose-limiting emesis and/or fecal alterations that resulted in
either elective euthanasia or cessation of dosing, dosages ≥ 37.5 mg/kg/day were not
tolerated; the dosage of 5 mg/kg/day was tolerated. Exposure (AUC(0-24)) at
5 mg/kg/day was 3695 ng•h/mL.
Dogs/Beagle
RPT-60569
2M
Oral (gavage)
14 days
10
20
There were no unscheduled deaths in this study.
Dose-limiting emesis (with or without red pigment), fecal alterations (mucoid or liquid
with or without red pigment, no feces), decreased motor activity, and thin appearance
occurred in both dogs given 20 mg/kg/day of bosutinib.
The clinical signs observed at 20 mg/kg/day were associated with dose-limiting
body-weight loss (approximately -2 kg, or -22% to -24% compared with last pretest
measurement) and decreases in food consumption (no food consumed for the last 5 days
of dose administration).
Changes in clinical pathology parameters were primarily attributed to bosutinib-related
GI alterations (emesis and fecal alterations), and decreases in food consumption that
occurred in both animals administered 20 mg/kg/day. These alterations included
increases in parameters of red cell mass (hemoglobin, hematocrit, RBC count, cell
hemoglobin; [16% to 34%]) and blood urea nitrogen (73% to 86%), and decreases in
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Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.6
Summary of Dose-Ranging Studies with Bosutinib (Cont'd)
Species/Strain
Report No.
Cross-Reference
N/Gender/
Group
Route/
Duration
Dosage
(mg/kg/day)
Test Article: Bosutinib
Results
glucose (-22% to -40%). Alterations also included increases in total white blood cell
counts (57% to 136%), neutrophils (70% to 208%), and monocytes (137% to 229%),
and increases in fibrinogen (173% to 174%), suggestive of inflammation.
In conclusion, based on dose-limiting body-weight loss, a dosage of 20 mg/kg/day was
not tolerated when administered by oral gavage to fed male dogs for 2 weeks. Based on
the absence of dose-limiting mortality, clinical observations, effects on body weight,
food consumption, and clinical pathology parameters, 10 mg/kg/day was tolerated when
administered by oral gavage to fed male dogs for 14 days.
AUC = Area under the concentration-versus-time curve; Cmax = Maximum concentration; F = Female; GI = Gastrointestinal; M= Male; N = Number of animals; RBC = Red
blood cell; RPT = Report; S-D = Sprague-Dawley; TK = Toxicokinetic.
a
Vehicle control (2% polysorbate 80, 0.5% methylcellulose, 0.06% acetic acid in purified water).
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Page 23
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.7. Mean ± SE Pharmacokinetic Parameters for Bosutinib in Rats in a 7-Day Oral (Gavage) Dose-Ranging Study
Test Article: Bosutinib
Species/Strain: Rats/S-D
No. and Gender (M/F): 9/gender/group at 300 mg/kg/day and 9 F/group at 100 and 1000 mg/kg/day.a
Feeding Condition: Fed
Method of Administration: Oral (gavage)
Vehicle/Formulation: 2% Polysorbate 80, 0.5% methylcellulose, 0.06% acetic acid, and purified water
Day
7
Dosage
(mg/kg/day)
100
4
300
Gender
F
M
F
Cmax (ng/mL)
Total
Unboundb
1200 ± 124
73 ± 7.6
1264 ± 230
1782 ± 181
77 ± 14
109 ± 11
Report No.: RPT-50258
Matrix: Plasma
Analyte: Bosutinib
Assay: LC/MS/MS
Tmax
(h)
7.0
7.0
7.0
AUC(0-24) (ng•h/mL)
Total
Unboundb
16924 ± 798
1032 ± 49
23012 ± 2428
34823 ± 2283
1404 ± 148
2124 ± 139
Note: The in-life portion of this study is described in RPT-49310.
M = Male; F = Female; AUC = Area under the concentration-versus-time curve; Cmax = Maximum concentration; LC/MS/MS = Liquid chromatography/tandem mass
spectrometry; RPT = Report; S-D = Sprague-Dawley; SE = Standard error; Tmax = Time to reach maximum concentration.
a
Animals given 1000 mg/kg/day were electively euthanized on day 3, and pharmacokinetic parameters were not evaluated in these animals.
b
Cmax or AUC (total) × 0.061 (mean fraction unbound; RPT-54418) = Cmax or AUC unbound.
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Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.8. Mean ± SD Pharmacokinetic Parameters for Bosutinib and N-Desmethyl Bosutinib (M5) in Male Rats in a 56-Day Oral Investigative
Study
Test Article:Bosutinib
Species/Strain: Rats/S-D
Report No.: SP3810
No. and Gender (M/F): 3M/group
Matrix: Plasma
Feeding Condition: Fed
Analyte: Bosutinib; M5; Imatinib
Dosage: 50 mg/kg bosutinib or imatiniba
Assay: LC/MS/MS
Method of Administration: Oral
Vehicle/Formulation: 2% Polysorbate 80, 0.5% methylcellulose, 0.06% acetic acid, and purified water for
bosutinib; Water for imatinib
Cmax (ng/mL)
AUC(0-24) (ng•h/mL)
Bosutinib Dosage
Tmax
Day
(mg/kg/day)
Total
Unbound
(h)
Total
Unbound
--------------------------------Mean ( SD) PK Parameters for Bosutinib------------------------------1
50
491 ± 73
30 ± 4.5b
3.7 ± 1.2
3530 ± 701
215 ± 43 b
436 ± 65
27 ± 4.0 b
3.7 ± 1.2
4350 ± 1390
265 ± 85 b
28
50
56
50
1
50
28
50
56
50
1
50
225 ± 75
14 ± 4.7 c
3.7 ± 1.2
2020 ± 362
125 ± 22 c
--------------------Mean ( SD) PK Parameters for Imatinib-------------------4460 ± 282
NC
3.0 ± 0.0
49500 ± 9230
NC
28
50
4550 ± 1850
NC
4.7 ± 3.5
58200 ± 21800
NC
56
50
5300 ± 327
NC
3.0 ± 0.0
66500 ± 8070
NC
560 ± 130
34 ± 7.9 b
3.7 ± 1.2
5370 ± 1650
328 ± 101 b
--------------------Mean ( SD) PK Parameters for N-Desmethyl Bosutinib (M5)------------------187 ± 79
12 ± 4.9c
3.0 ± 0.0
1270 ± 99
79 ± 6.1 c
122 ± 9.5
7.6 ± 0.6 c
4.3 ± 1.2
1250 ± 253
78 ± 16 c
M = Male; F = Female; AUC(0-24) = Area under the concentration-versus-time curve from time 0 to 24 hours after dosing; Cmax = Maximum concentration; LC/MS/MS =
Liquid chromatography/tandem mass spectrometry; M5 = N-desmethyl bosutinib (WAY-173607; PF-05312061); NC = Not calculated; SD = Standard deviation; S-D =
Sprague-Dawley; Tmax = Time to reach maximum concentration.
a
Imatinib = PF-01677920, b Cmax or AUC (total) × 0.061 (mean fraction unbound; RPT-54418) = Cmax or AUC unbound.
c
Cmax or AUC (total) × 0.062 (mean fraction unbound; PF-05312061/
/122621) = Cmax or AUC unbound.
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Page 25
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.9. Mean ± SD Pharmacokinetic Parameters for Bosutinib in Female Dogs in a 10-Day Oral (Gavage) Dose-Ranging Study
Test Article:Bosutinib
Species/Strain: Dogs/Beagle
No. and Gender (M/F): 3 F at 37.5, 75, or 150 mg/kg/day; 2 F at 5 mg/kg/day.
Feeding Condition: 3 animals received 150 mg/kg/day for 3 days in the fasted state. 3 animals received
dosages of 75 mg/kg for 1 day in the fasted state, 37.5 mg/kg/day for 2 days in the fasted state, and
37.5 mg/kg for 1 day in the fed state, and dosages were separated by bosutinib-free periods of 5 to 9 days.
2 animals received 5 mg/kg/day for 10 days in the fed state.
Method of Administration: Oral (gavage)
Vehicle/Formulation: 2% Polysorbate 80, 0.5% methylcellulose, 0.06% acetic acid, and purified water
Day
1
10
Dosage
(mg/kg/day)
5
Cmax (ng/mL)
Total
Unbounda
154
6.3
Tmax
(h)
3.0
Report No.: RPT-53053
Matrix: Plasma
Analyte: Bosutinib
Assay: LC/MS/MS
AUC(0-24) (ng•h/mL)
Total
Unbounda
1872
77
AUC(0-)
(ng•h/mL)
2472
t½
(h)
11
Rb
NA
37.5 (fasted)
37.5 (fed)
614 ± 317
940 ± 460
25 ± 13
39 ± 19
3.0 ± 0.6
3.3 ± 1.2
6349 ± 2813
13330 ± 6749
260 ± 115
547 ± 277
7678 ± 3142
25718 ± 13093
10 ± 1
23 ± 8
NA
NA
75
507 ± 407
21 ± 17
1.3 ± 0.6
5151 ± 2942
211 ± 121
6350 ± 2918
12 ± 5
NA
150
917 ± 897
38 ± 37
1.0 ± 1.0
15973 ± 3047
655 ± 125
19560 ± 4718
10 ± 1
NA
5
225
9.2
3.0
3008
123
3695
9.3
1.41
Note: The in-life portion of this study is described in RPT-50039.
M = Male; F = Female; AUC = Area under the concentration-versus-time curve; Cmax = Maximum concentration; LC/MS/MS = Liquid chromatography/tandem mass
spectrometry; R = Accumulation ratio; RPT = Report; SD = Standard deviation; t½ = Elimination half-life; Tmax = Time to reach maximum concentration.
a
Cmax or AUC (total) × 0.041 (mean fraction unbound; RPT-54418) = Cmax or AUC unbound.
b
AUC(0-24) (day 10)/AUC(0-24) (day 1).
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Page 26
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.10. Repeat-Dose 28-Day Oral (Gavage) Toxicity Study in Rats
Species/Strain: Rats/S-D
Initial Age: 6 Weeks
Date of First Dose:
20
Special Features: None
Conclusion: The NOAEL was 70 mg/kg/day,
the highest dosage administered.
Dosage (mg/kg/day)
No. of Animals
Additional Animals for TK
Toxicokinetics
(RPT-52934)
Cmax ± SE (ng/mL)
Day 1
Day 28
AUC(0-24) ± SE
(ng·h/mL)
Day 1
Day 28
Noteworthy Findings
Died or Sacrificed Moribund
Clinical Observations
Body Weight
Food Consumption
Ophthalmoscopy
Duration of Dosing: 28 days
Duration of Postdose: NA
Method of Administration: Oral (gavage), once daily
Vehicle/Formulation: 0.5% Methylcellulose, 2% polysorbate 80, and
0.06% acetic acid in purified water
------0 (Control)---M:15
F:15
NA
NA
Test Article: Bosutinib
Report No.: RPT-52772
GLP Study: Yes
--------------10------------M:15
F:15
9
9
--------------30------------M:15
F:15
9
9
--------------70------------M:15
F:15
9
9
NA
NA
NA
NA
ND
31.0 ± 3.7
ND
126 ± 6
154 ± 16
156 ± 13
607 ± 74
539 ± 125
ND
314 ± 27
ND
1500 ± 500
NA
NA
NA
NA
ND
318 ± 35
ND
1467 ± 97
1293 ± 172
1686 ± 171
5023 ± 673
5017 ± 439
ND
4092 ± 423
ND
14,090 ± 1757
1a




0




0




0




0




0




0




1b




PFIZER CONFIDENTIAL
Page 27
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.10 Repeat-Dose 28-Day Oral (Gavage) Toxicity Study in Rats (Cont’d)
Dosage (mg/kg/day)
No. of Animals
Noteworthy Findings (continued)
Hematology
-------0 (Control)------M:15
F:15
Test Article: Bosutinib
------------10-----------M:15
F:15
------------30-----------M:15
F:15
Report No.: RPT-52772
------------70-----------M:15
F:15








Clinical Chemistry








Organ Weights








Macroscopic Pathology








14
15
15
15
15
15
15
15
0
0
0
0
3
1
5
1
2
2
7
3
10
4
11
7
Histopathology
Number Examined
Mesenteric Lymph Nodes
Sinus erythrocytosis
Hemosiderosis
M = Male; F = Female; AUC = Area under the concentration-versus-time curve; Cmax = Maximum concentration; GLP = Good Laboratory Practices; NA = Not applicable;
ND = Not determined; NOAEL = No-observed-adverse-effect level; RPT = Report; S-D = Sprague-Dawley; SE = Standard error; TK = Toxicokinetics.
 No noteworthy finding.
a
One (1) toxicity study animal was found dead after blood collection; the death was considered accidental.
b
One (1) toxicokinetic animal was found dead after gavage; the death was considered accidental.
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Page 28
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.11. Mean ± SE Pharmacokinetic Parameters for Bosutinib in Rats in a 28-Day Oral (Gavage) Toxicity Study
Test Article: Bosutinib
Species/Strain: Rats/S-D
No. and Gender (M/F): 9/gender/group at 30 mg/kg/day (day 1) and 10, 30, and 70 mg/kg/day (day 28)
Feeding Condition: Fed
Method of Administration: Oral (gavage)
Vehicle/Formulation: 2% Polysorbate 80, 0.5% methylcellulose, 0.06% acetic acid, and purified water
Cmax (ng/mL)
Total
Unbounda
154 ± 16
9.4 ± 1.0
607 ± 74
37 ± 4.5
AUC(0-24) (ng•h/mL)
Total
Unbounda
1293 ± 172
79 ± 10
5023 ± 673
306 ± 41
Rb
NA
NA
5
5
318 ± 35
1467 ± 97
19 ± 2.1
89 ± 5.9
ND
ND
9.5 ± 0.8
33 ± 7.6
3
5
1686 ± 171
5017 ± 439
103 ± 10
306 ± 27
1.3
1.0
19 ± 1.6
92 ± 31
5
5
4092 ± 423
14090 ± 1757
250 ± 26
859 ± 107
ND
ND
Day
1
Dosage
(mg/kg/day)
30
28
10
M
F
31 ± 3.7
126 ± 6
1.9 ± 0.2
7.7 ± 0.4
30
M
F
156 ± 13
539 ± 125
70
M
F
314 ± 27
1500 ± 500
Gender
M
F
Report No.: RPT-52934
Matrix: Plasma
Analyte: Bosutinib
Assay: LC/MS/MS
Tmax
(h)
3
3
Note: The in-life portion of this study is described in RPT-52772.
M = Male; F = Female; AUC = Area under the concentration-versus-time curve; Cmax = Maximum concentration; LC/MS/MS = Liquid chromatography/tandem mass
spectrometry; NA = Not applicable; ND = Not determined; R = Accumulation ratio; RPT = Report; S-D = Sprague-Dawley; SE = Standard error; Tmax = Time to reach
maximum concentration.
a
Cmax or AUC (total) × 0.061 (mean fraction unbound; RPT-54418) = Cmax or AUC unbound.
b
AUC(0-24) (day 28)/AUC(0-24) (day 1).
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 29
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.12. Repeat-Dose Toxicity: 28-Day Oral (Gavage) Toxicity Study in Rats with a 28-Day Recovery
Test Article: Bosutinib
Species/Strain: Rats/S-D
Initial Age: 7 Weeks
Date of First Dose:
Special Features: None.
Duration of Dosing: 28 days
Duration of Postdose: 28 days
20
Method of Administration: Oral (gavage), once daily
Vehicle/Formulation: 2% Polysorbate 80,
0.5% methylcellulose, 0.06% acetic acid, and purified
water
Conclusion: The NOAEL was <100 mg/kg/day (600 mg/m2) based on gastrointestinal toxicity at both 100 and 200 mg/kg/day.
Dosage: (mg/kg/day)
No. of Animals
---------0 (Control)--------M:15
F:15
--------------100-------------M:15
F:15
Report No.: RPT-57924
GLP Study: Yes
--------------200-------------M:15
F:15
Noteworthy Findings
Died or Sacrificed Moribund
0
0
1e
1e
15
15
Clinical Observations
Fecal alterations
Dehydration
Red pigment, nose/mouth
Yellow discoloration, perineal pelage
High carriage
Thin, hunched appearance
–
–
–
–
–
–
–
–
–
–
–
–
–
–
–
–
–
–
–
–
–
–
–
–
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 30
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.12 Repeat-Dose Toxicity: 28-Day Oral (Gavage) Toxicity Study in Rats with a 28-Day Recovery (Cont’d)
Test Article: Bosutinib
Dosage: (mg/kg/day)
No. of Animals
Noteworthy Findings
Body Weight (%)a
Dosing Phase
Day 7
Day 10
Day 14
Day 21
Day 28
Recovery Phase
Day 7
Day 14
Day 21
Day 28
--------0 (Control)-------M:15
F:15
Body Weight Gain (Pretreatment – Day 28)
Food Consumption (%)a
Dosing Phase
Day 8
Day 15
Day 22
Day 28
Recovery Phase
Day 8
Day 15
Day 22
Day 28
Ophthalmoscopy
-------------100------------M:15
F:15
Report No.: RPT-57924
-------------200------------M:15
F:15
281 g
300 g
330 g
375 g
407 g
197 g
200 g
212 g
233 g
251 g
-5%
-6%**
-7%**
-11%**
-13%**
-5%*
-4%
-4%
-7%**
-10%**
-18%**
-31%**
-38%**
NA
NA
-18%**
-27%**
NA
NA
NA
414 g
446 g
469 g
487 g
266 g
272 g
280 g
287 g
-3%
-3%
-3%
-2%
-15%**
-11%*
-11%**
-13%**
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
177 g
79 g
-27%**
-29%**
NA
NA
26.63 g
26.01 g
27.35 g
28.79 g
17.46 g
18.33 g
21.35 g
20.97 g
-19%
-4%
-8%
-7%
-14%
-12%
-26%
-9%
-50%
-67%
NA
NA
-56%
-85%
NA
NA
25.67 g
28.07 g
26.98 g
26.19 g
20.62 g
19.88 g
19.02 g
18.89 g
+18%
+8%
+10%
+5%
-16%
-11%
-10%
-18%
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
–
–
–
–
–
–
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 31
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.12 Repeat-Dose Toxicity: 28-Day Oral (Gavage) Toxicity Study in Rats with a 28-Day Recovery (Cont’d)
Test Article: Bosutinib
--------0 (Control)-------M:15
F:15
-------------100------------M:15
F:15
Report No.: RPT-57924
-------------200------------M:15
F:15
6.76
7.62
8.41
7.03
7.57
7.92
6.60*
7.59
8.35
6.66**
7.13**
8.12
7.52**
NA
NA
7.71**
NA
NA
14.2
15.0
15.8
14.3
14.8
14.8
13.6**
14.9
15.2
13.5**
13.6**
15.4
15.3**
NA
NA
15.3**
NA
NA
43.9
45.9
49.1
44.1
45.2
46.2
42.0**
44.9
47.1
41.7**
42.5**
48.1*
46.4*
NA
NA
46.1
NA
NA
2.03
1.51
1.35
1.32
1.06
0.85
3.32**
3.90**
1.24
4.61**
4.26**
0.97
9.62**
NA
NA
15.64**
NA
NA
194.2
186.5
182.8
184.3
176.8
177.0
199.4
213.6**
195.0*
219.2**
198.9**
177.3
243.6**
NA
NA
252.1**
NA
NA
Clinical Chemistry
–
–
–
–
–
–
Organ Weights
–
–
–
–
–
–
Dosage: (mg/kg/day)
No. of Animals
Hematologyb
RBC (M/μL)
Day 7
Day 28
Recovery Day 28
Hemoglobin (g/dL)
Day 7
Day 28
Recovery Day 28
Hematocrit (%)
Day 7
Day 28
Recovery Day 28
Neutrophils (K/μL)
Day 7
Day 28
Recovery Day 28
Fibrinogen (mg/dL)
Day 7
Day 28
Recovery Day 28
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 32
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.12 Repeat-Dose Toxicity: 28-Day Oral (Gavage) Toxicity Study in Rats with a 28-Day Recovery (Cont’d)
Test Article: Bosutinib
Dosage: (mg/kg/day)
No. of Animals
Macroscopic Pathologyc
Unscheduled Necropsy
Cecumd
Mucosal discoloration
Distended
Thickened wall
--------0 (Control)-------M:15
F:15
-------------100------------M:15
F:15
Report No.: RPT-57924
-------------200------------M:15
F:15
0
0
0
0
0
0
0
0
1
0
0
0
1
0
0
0
15
5
4
1
15
5
9
0
Colond
Mucosal discoloration
Distended
Thickened wall
0
0
0
0
0
0
0
0
1
0
0
0
1
0
0
0
15
6
4
6
15
7
7
0
Duodenumd
Mucosal discoloration
Distended
Thickened wall
0
0
0
0
0
0
0
0
1
0
0
0
1
0
0
0
15
1
4
6
15
0
5
0
Ileumd
Mucosal discoloration
Distended
Thickened wall
0
0
0
0
0
0
0
0
1
0
0
0
1
0
0
0
15
1
5
6
15
1
10
0
Jejunumd
Mucosal discoloration
Distended
Thickened wall
0
0
0
0
0
0
0
0
1
0
0
0
1
0
0
0
15
1
5
6
15
0
10
0
Squamous Stomachd
Mucosal discoloration
Distended
Ulcerations
0
0
0
0
0
0
0
0
1
0
0
0
1
0
0
0
15
3
1
0
15
0
3
2
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 33
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.12 Repeat-Dose Toxicity: 28-Day Oral (Gavage) Toxicity Study in Rats with a 28-Day Recovery (Cont’d)
Test Article: Bosutinib
Dosage: (mg/kg/day)
No. of Animals
Stomachd
Distended
--------0 (Control)-------M:15
F:15
-------------100------------M:15
F:15
Report No.: RPT-57924
-------------200------------M:15
F:15
0
0
0
0
1
0
1
0
15
1
15
3
Final Necropsy
–
–
–
–
–
–
Recovery Necropsy
–
–
–
–
–
–
Histopathologyc
Unscheduled Necropsy
Cecumd
Hemorrhage
Mucosal hyperplasia
Edema
Lumenal dilatation
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
1
0
0
0
0
1
0
0
0
0
15
6
14
4
13
15
8
9
4
8
Colond
Hemorrhage
Mucosal hyperplasia
Edema
Lumenal dilatation
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
1
0
0
0
0
1
0
0
0
0
15
5
5
4
5
15
6
5
5
6
Duodenumd
Villus atrophy
Hemorrhage
Lumenal dilatation
Mucinous glandular hyperplasia
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
1
0
0
0
0
1
0
0
0
0
15
14
7
13
15
14
10
6
8
12
Ileumd
Villus atrophy
Hemorrhage
Lumenal dilatation
0
0
0
0
0
0
0
0
1
0
0
0
1
0
0
0
15
13
6
11
14
12
4
8
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 34
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.12 Repeat-Dose Toxicity: 28-Day Oral (Gavage) Toxicity Study in Rats with a 28-Day Recovery (Cont’d)
Test Article: Bosutinib
Dosage: (mg/kg/day)
No. of Animals
Mucinous glandular hyperplasia
Goblet cell
hypertrophy/hyperplasia
--------0 (Control)-------M:15
F:15
0
0
-------------100------------M:15
F:15
0
0
Report No.: RPT-57924
-------------200------------M:15
F:15
14
12
0
0
0
1
0
0
Jejunumd
Villus atrophy
Hemorrhage
Lumenal dilatation
Mucinous glandular hyperplasia
Goblet cell
hypertrophy/hyperplasia
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
1
0
0
0
0
1
0
0
0
0
15
11
4
8
14
12
9
4
7
11
0
0
0
1
0
0
Squamous Stomachd
Ulceration
Hyperkeratosis
0
0
0
0
0
0
1
0
0
1
0
0
15
4
3
15
1
6
Final Necropsy
Cucumd
Mucosal hyperplasia
Luminal dilatation
10
0
0
10
0
0
10
2
0
9
4
1
0
0
0
0
0
0
Colond
Mucosal hyperplasia
10
0
10
0
10
3
9
4
0
0
0
0
Duodenumd
Glandular hyperplasia – mucinous
10
0
10
0
10
0
9
1
0
0
0
0
Ileumd
Goblet cell
hypertrophy/hyperplasia
10
10
10
9
0
0
0
0
10
9
0
0
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 35
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.12 Repeat-Dose Toxicity: 28-Day Oral (Gavage) Toxicity Study in Rats with a 28-Day Recovery (Cont’d)
Test Article: Bosutinib
Dosage: (mg/kg/day)
No. of Animals
--------0 (Control)-------M:15
F:15
-------------100------------M:15
F:15
Report No.: RPT-57924
-------------200------------M:15
F:15
Jejunumd
Goblet cell
hypertrophy/hyperplasia
10
10
10
9
0
0
0
0
2
6
0
0
Squamous stomachd
Hyperkeratosis
Edema
10
0
0
10
1
0
10
0
1
9
1
1
0
0
0
0
0
0
Stomachd
Edema
Mixed cell inflammation
Glandular dilatation
10
0
0
0
10
0
0
0
10
1
1
0
9
0
0
1
0
0
0
0
0
0
0
0
–
–
–
–
–
–
Recovery Necropsy
* p ≤ 0.05, ** p ≤ 0.01 (statistical significance was determined by group pair-wise comparisons).
– No noteworthy finding; + Noteworthy finding present.
M = Male; F = Female; GLP = Good Laboratory Practice; NA = Not applicable; NOAEL = No-observed-adverse-effect level; RBC = Red blood cells; RPT = Report; S-D =
Sprague-Dawley.
a
For control groups, group means are shown. For treated groups, percent differences from controls are shown. Statistical significance is based on actual data (not percent
differences).
b
Data reported as absolute group mean values.
c
Data reported as absolute group incidence.
d
Number of animals examined.
e
Death associated with blood collection procedures.
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 36
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.13. Repeat-Dose Toxicity: 6-Month Oral (Gavage) Toxicity Study in Rats
Test Article: Bosutinib
Species/Strain: Rats/S-D
Duration of Dosing: 26 Weeks
Report No.: RPT-63644
Initial Age: 7 Weeks
Duration of Postdose: None
Date of First Dose:
20
Method of Administration: Oral (gavage), once daily
GLP Study: Yes
Vehicle/Formulation: 2% Polysorbate 80, 0.5% methylcellulose,
Special Features: Due to mortality, clinical signs,
and body weight loss, the high dosage was lowered 0.06% acetic acid, and sterile water
from 100 mg/kg/day to 70 mg/kg/day from day 43
of treatment.
Conclusion: Based on the mortality and decreases in mean body weights observed at 100/70 mg/kg/day, the NOAEL was 30 mg/kg/day in males. Based on the
bosutinib-related death in 1 female administered 30 mg/kg/day, the NOAEL in females was 10 mg/kg/day.
Dosage: (mg/kg/day)
No. of Animals
Additional TK Animals
Toxicokinetics
(RPT-64288)
Day 180
Cmax ± SE (ng/mL)
AUC(0-24) ± SE (ng•h/mL)
--------0 (Control)-------M:20
F:20
3
3
-------------10------------M:20
F:20
9
9
-------------30 ------------M:20
F:20
9
9
-----------100/70----------M:20
F:20
9
9
NA
NA
NA
NA
84.5 ± 9.1
807 ± 125
394 ± 130
4387 ± 470
346 ± 82
3810 ± 423
1222 ± 395
15405 ±
2363
503 ± 18
7630 ± 313
1474 ± 68
22692 ±
1737
Noteworthy Findings
Died or Sacrificed Moribunda
3b
0
2b
0
2b
1c
3c
7d
Clinical Observations
Soft/liquid feces
Salivation
Red pigment, nose/mouth
Rough hair coat
–
–
–
–
–
–
–
–
–
–
–
–
–
–
–
–
–
–
–
–
–
–
–
–
+
+
+
+
+
+
+
+
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 37
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.13 Repeat-Dose Toxicity: 6-Month Oral (Gavage) Toxicity Study in Rats (Cont’d)
Dosage: (mg/kg/day)
No. of Animals
Noteworthy Findings (cont’d)
Clinical Observations (cont’d)
Feces adhered to fur
Yellow discoloration,
perineal pelage
Alopecia, neck/thorax
Decreased motor activity
Pale and/or hunched
appearance
Body Weight (%)e
Day 182
Food Consumption (%)e
Days 175 to 181
Ophthalmoscopy
Hematologyf
Neutrophils (K/μL)
Day 90
Day 176
Fibrinogen (mg/dL)
Day 90
Day 176
Eosinophils (K/μL)
Day 90
Day 176
Monocytes (K/μL)
Day 90
Day 176
--------0 (Control)-------M:20
F:20
-------------10------------M:20
F:20
Test Article: Bosutinib
-------------30------------M:20
F:20
Report No.: RPT-63644
-----------100/70----------M:20
F:20
–
–
–
–
–
–
–
+
–
–
–
–
–
–
–
–
–
–
–
–
–
–
–
–
–
–
–
–
–
+
+
+
–
–
–
–
–
–
–
+
620 g
324 g
-2%
+6%
+1%
-4%
-18%**
-12%**
24.1 g/day
17.3 g/day
+4%
+5%
+1%
-2%
+4%
+14%
–
–
–
–
–
–
–
–
1.37
1.56
0.97
1.03
1.46
1.53
1.11
1.16
1.75*
2.05
1.29**
2.07**
2.79**
4.53**
5.91**
10.19**
294.7
294.7
192.4
196.7
296.9
308.0
211.6*
210.9
310.2*
346.3**
250.2**
266.5**
340.2**
352.2**
305.6**
371.6**
0.13
0.12
0.09
0.10
0.14
0.15
0.12*
0.13
0.21**
0.18*
0.14**
0.15**
0.19*
0.22**
0.25**
0.27**
0.26
0.32
0.20
0.26
0.26
0.28
0.24
0.28
0.29
0.37
0.27
0.38**
0.44**
0.61**
0.68**
0.98**
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 38
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.13 Repeat-Dose Toxicity: 6-Month Oral (Gavage) Toxicity Study in Rats (Cont’d)
Dosage: (mg/kg/day)
No. of Animals
Noteworthy Findings (cont’d)
Hematology (cont’d)f
WBC (K/μL)
Day 90
Day 176
--------0 (Control)-------M:20
F:20
-------------10------------M:20
F:20
Test Article: Bosutinib
-------------30------------M:20
F:20
Report No.: RPT-63644
-----------100/70----------M:20
F:20
13.7
12.4
9.4
8.6
13.5
12.2
9.9
8.7
13.8
13.0
8.9
9.3
14.5
16.4**
15.2**
20.0**
991.2
963.1
935.3
905.3
960.0
938.9
939.6
931.3
1063.2*
1079.5**
1089.4**
1083.1**
1180.9**
1153.6**
1390.9**
1289.5**
4.5
4.4
5.4
5.6
4.6
4.6**
5.3
5.5
4.6
4.4
5.4
5.3**
4.1**
4.0**
4.2**
3.7**
2.6
2.8
2.4
2.5
2.6
2.9
2.5
2.7**
2.7
3.0*
2.6**
2.8**
2.5*
2.6
2.8**
3.0**
Organ Weights (%)e
Adrenals
Absolute
Relative to Body Weight
Relative to Brain Weight
0.054 g
0.92%g
2.43%
0.07 g
2.18%g
3.26%
0%
+1%
+2%
+6%
-1%
+7%
+9%
+9%
+10%
+2%
+5%
+4%
+15%
+41%**
+18%**
+33%**
+54 %**
+38%**
Heart
Absolute
Relative to Body Weight
Relative to Brain Weight
1.71 g
0.29%
77.13%
1.18 g
0.38%
57.97%
+7%*
+9%**
+9%*
+9%*
+3%
+10%*
+19%**
+18%**
+19%**
+14%**
+19%**
+17%**
+9%**
+35%**
+12%**
+25%**
+44%**
+30%**
Liver
Absolute
Relative to Body Weight
Relative to Brain Weight
14.34 g
2.41%
647.60%
8.00 g
2.60%
394.10%
+1%
+2%
+3%
+11%*
+5%*
+12%*
+10%
+9%**
+10%
+11%*
+16%**
+14%**
+4%
+28%**
+6%
+36%**
+58%**
+42%**
Platelets (K/μL)
Day 90
Day 176
Clinical Chemistryf
Albumin (g/dL)
Day 90
Day 176
Globulin (g/dL)
Day 90
Day 176
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 39
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.13 Repeat-Dose Toxicity: 6-Month Oral (Gavage) Toxicity Study in Rats (Cont’d)
Dosage: (mg/kg/day)
No. of Animals
Noteworthy Findings (cont’d)
Organ Weights (cont’d) (%)e
Ovaries
Absolute
Relative to Body Weight
Relative to Brain Weight
--------0 (Control)-------M:20
F:20
-------------10------------M:20
F:20
Test Article: Bosutinib
-------------30------------M:20
F:20
Report No.: RPT-63644
-----------100/70----------M:20
F:20
NA
NA
NA
0.12 g
3.94%g
5.87%
NA
NA
NA
+8%
+2%
+10%
NA
NA
NA
+32%**
+37%**
+35%**
NA
NA
NA
+46%**
+65%**
+53%**
Pituitary
Absolute
Relative to Body Weight
Relative to Brain Weight
0.01 g
0.19%g
0.50%
0.02 g
0.58%g
0.88%
+9%
+11%*
+13%*
+6%
+3%
+11%
+9%
+11%*
+13%*
-17%*
-9%
-11%
+18%
+42%**
+18%**
-22%**
-13%
-21%**
Testes
Absolute
Relative to Body Weight
Relative to Brain Weight
3.63 g
0.62%
163.84%
NA
NA
NA
+4%
+5%
+6%
NA
NA
NA
+6%
+5%
+6%
NA
NA
NA
+8%
+32%**
+11%
NA
NA
NA
Thyroid
Absolute
Relative to Body Weight
Relative to Brain Weight
0.02 g
0.38%g
1.02%
0.02 g
0.56%g
0.84%
-17%*
-16%*
-15%
-12%
-15%*
-9%
+4%
+6%
+5%
+18%*
+22%**
+19%**
0%
+26%**
+5%
+65%**
+94%**
+73%**
Brain
Absolute
Relative to Body Weight
2.22 g
0.38%
2.03 g
0.67%
-2%
-1%
-1%
-7%
0%
-1%
-2%
+2%
-2%
+20%**
-4%
+10%**
17
20
19
20
18
19
19
14
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
8
11
7
7
Macroscopic Pathologyh
Number Examined
Duodenum
Distended
Thickened wall
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 40
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.13 Repeat-Dose Toxicity: 6-Month Oral (Gavage) Toxicity Study in Rats (Cont’d)
Dosage: (mg/kg/day)
No. of Animals
Noteworthy Findings (cont’d)
Macroscopic Pathology (cont’d)h
Number Examined
Jejunum
Distended
Thickened wall
Ileum
Distended
Thickened wall
Mesenteric Lymph Nodes
Enlarged
Discoloration
Thyroid
Enlarged
Histopathologyh
Duodenum
Number Examined
Mucosal hyperplasia
Lumenal dilatation
Hemorrhage
Jejunum
Number Examined
Mucosal hyperplasia
Lumenal dilatation
Hemorrhage
Ileum
Number Examined
Goblet cell hypertrophy/
hyperplasia
Lumenal dilatation
Hemorrhage
--------0 (Control)-------M:20
F:20
-------------10------------M:20
F:20
Test Article: Bosutinib
-------------30------------M:20
F:20
Report No.: RPT-63644
-----------100/70----------M:20
F:20
17
20
19
20
18
19
19
14
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
2
10
0
4
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
4
11
2
6
0
0
0
0
0
3
0
3
1
17
0
17
11
19
0
13
0
0
0
0
2
0
0
3
17
0
0
0
20
0
0
0
19
0
0
0
20
0
0
0
18
1
0
0
19
6
0
0
19
16
9
11
14
13
10
2
17
0
0
0
20
0
0
0
19
0
0
0
20
0
0
0
17
0
0
0
19
0
0
0
18
11
1
1
14
1
0
0
17
20
19
20
18
19
19
14
4
0
0
1
0
0
16
0
0
17
0
0
15
0
2
17
0
0
19
6
7
12
3
0
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 41
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.13 Repeat-Dose Toxicity: 6-Month Oral (Gavage) Toxicity Study in Rats (Cont’d)
Dosage: (mg/kg/day)
No. of Animals
Noteworthy Findings (cont’d)
Histopathology (cont’d)h
Mesenteric Lymph Nodes
Number Examined
Sinus erythrocytosis
Pigment (hemosiderin)
Adrenal Cortex
Number Examined
Vacuolation
Hypertrophy
Thyroid
Number Examined
Increased colloid
Mammary Gland
Number Examined
Atrophy
Spleen
Number Examined
Lymphoid atrophy
Thymus
Number Examined
Lymphoid atrophy
--------0 (Control)-------M:20
F:20
-------------10------------M:20
F:20
Test Article: Bosutinib
-------------30------------M:20
F:20
Report No.: RPT-63644
-----------100/70----------M:20
F:20
17
3
0
20
1
1
19
10
7
20
7
4
18
17
18
19
19
18
19
19
19
14
14
14
17
5
0
20
0
0
19
2
0
1
0
0
18
7
0
19
0
0
19
18
0
14
11
4
17
0
20
0
0
0
0
0
2
0
19
0
19
0
14
7
14
0
20
1
0
0
0
0
0
0
18
1
19
0
14
6
17
0
20
0
0
0
0
0
0
0
19
0
19
0
14
9
17
0
20
3
0
0
0
0
0
0
19
0
19
2
14
9
* p ≤ 0.05, ** p ≤ 0.01 (statistical significance was determined by group pair-wise comparisons).
– No noteworthy finding; + Noteworthy finding present.
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 42
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.13 Repeat-Dose Toxicity: 6-Month Oral (Gavage) Toxicity Study in Rats (Cont’d)
Dosage: (mg/kg/day)
No. of Animals
Noteworthy Findings (cont’d)
--------0 (Control)-------M:20
F:20
-------------10------------M:20
F:20
Test Article: Bosutinib
-------------30------------M:20
F:20
Report No.: RPT-63644
-----------100/70----------M:20
F:20
M = Male; F = Female; AUC = Area under the concentration-versus-time curve; Cmax = Maximum concentration; GLP = Good Laboratory Practice; NA = Not applicable;
NOAEL = No-observed-adverse-effect level; RPT = Report; TK = Toxicokinetics.
a
b
c
d
e
f
g
h
Toxicology and Toxicokinetics groups combined.
Deaths not bosutinib-related.
Bosutinib-related; gastrointestinal toxicity.
Six (6) deaths bosutinib-related; 1 death related to blood collection procedure.
For control groups, group means are shown. For treated groups, percent differences from controls are shown. Statistical significance is based on actual data (not percent
differences).
Data reported as absolute group mean values.
The % of body weight values for adrenals, ovaries, pituitary, and thyroids were multiplied by 100.
Data reported as absolute group incidence.
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 43
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.14. Mean ± SE Pharmacokinetic Parameters for Bosutinib in Rats in a 6-Month Oral (Gavage) Toxicity Study
Test Article: Bosutinib
Species/Strain: Rats/S-D
No. and Gender (M/F): 9/gender at 10, 30, and 100/70 mg/kg/daya
Feeding Condition: Fed
Method of Administration: Oral (gavage)
Vehicle/Formulation: 2% Polysorbate 80, 0.5% methylcellulose, 0.06% acetic acid, and purified water
Day
180
Dosage
(mg/kg/day)
10
Gender
M
F
Cmax (ng/mL)
Total
Unboundb
85 ± 9
5.2 ± 0.5
394 ± 130
24 ± 7.9
Tmax
(h)
5
3
Report No.: RPT-64288
Matrix: Plasma
Analyte: Bosutinib
Assay: LC/MS/MS
AUC(0-24) (ng•h/mL)
Total
Unboundb
807 ± 125
49 ± 7.6
4387 ± 470
268 ± 29
30
M
F
346 ± 82
1222 ± 395
21 ± 5.0
75 ± 24
3
3
3810 ± 423
15405 ± 2363
232 ± 26
940 ± 144
100/70c
M
F
503 ± 18
1474 ± 68
31 ± 1.1
90 ± 4.1
10
5
7630 ± 313
22692 ± 1737
465 ± 19
1384 ± 106
Note: The in-life portion of this study is described in RPT-63644.
M = Male; F = Female; AUC = Area under the concentration-versus-time curve; Cmax = Maximum concentration; LC/MS/MS = Liquid chromatography/tandem mass
spectrometry; NA = Not applicable; RPT = Report; S-D = Sprague-Dawley; SE = Standard error; Tmax = Time to reach maximum concentration.
a
At the start of the study, the dosages were 0, 10, 30, and 100 mg/kg/day. However, based on the incidence of mortality, the severity of the clinical observations, and the
magnitude of the decreased body weight that occurred in animals administered 100 mg/kg/day through the first 6 weeks of the study, the high dosage of 100 mg/kg/day
was lowered to 70 mg/kg/day (referred to as 100/70 mg/kg/day) starting in week 7 (day 43).
b
Cmax or AUC (total) × 0.061 (mean fraction unbound; RPT-54418) = Cmax or AUC unbound.
c
The high dosage of 100 mg/kg/day was lowered to 70 mg/kg/day (expressed as 100/70 mg/kg/day) starting in week 7 (day 43).
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 44
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.15. Repeat-Dose 28-Day Oral (Gavage) Toxicity Study in Dogs
Species/Strain: Dogs/Beagle
Initial Age: 9 to 11 Months
Date of First Dose:
Special Features: None
Duration of Dosing: 28 Days
Duration of Postdose: NA
20
Method of Administration: Oral (gavage)
Vehicle/Formulation: 0.5% Methylcellulose, 2% polysorbate 80, and 0.06%
acetic acid and purified water
Conclusion: The NOAEL was 5 mg/kg/day, the highest dosage administered.
Report No.: RPT-52074
GLP Study: Yes
Dosage (mg/kg/day)
No. of Animals
------0 (Control)---M:3
F:3
--------------0.5------------M:3
F:3
Toxicokinetics (RPT-53029)
Cmax ± SD (ng/mL)
Day 1
Day 28
AUC(0-24) ± SD (ng·h/mL)
Day 1
NA
NA
NA
NA
13.0 ± 2.4
16.7 ± 2.8
16.0 ± 1.1
20.8 ± 5.6
56.4 ± 5.2
77.6 ± 11.1
52.3 ± 18.3
68.8 ± 5.4
257 ± 46
364 (N = 2)
177 ± 66
291 ± 77
NA
NA
149 ± 12
154 ± 18
758 ± 102
599 ± 118
2954 ± 322
NA
NA
229 ± 55
232 ± 81
985 ± 197
824 ± 48
3888 (N = 2)
2405 ±
892
3450 ±
908
0
0
0
0
0
0
1a
0




















+




+




+




+




Day 28
Noteworthy Findings
Died or Sacrificed Moribund
Clinical Observations
Fecal alterationsb
Body Weight
Food Consumption
Ophthalmoscopy
ECG
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 45
--------------1.5------------M:3
F:3
Test Article: Bosutinib
--------------5------------M:3
F:3
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.15 Repeat-Dose 28-Day Oral (Gavage) Toxicity Study In Dogs (Cont’d)
Dosage (mg/kg/day)
No. of Animals
Noteworthy Findings (cont’d)
Hematology
-------0 (Control)------M:3
F:3
Test Article: Bosutinib
------------0.5-----------M:3
F:3
------------1.5-----------M:3
F:3
Report No.: RPT-52074
------------5-----------M:3
F:3








Clinical Chemistry








Urinalysis








Organ Weights








Macroscopic Pathology








Histopathology








 No noteworthy finding; + Noteworthy finding present.
M = Male; F = Female; AUC = Area under the concentration-versus-time curve; Cmax = Maximum concentration; ECG = Electrocardiogram; GLP = Good Laboratory
Practices; NA = Not applicable; NOAEL = No-observed-adverse-effect level; RPT = Report; SD = Standard deviation.
a
b
This animal was electively euthanized on study day 21 due to gavage accidents on days 15 and 21 that resulted in aspiration of test material, and ultimately, clinical signs
consistent with an anaphylactoid response.
Increased (relative to control) incidence and/or frequency
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 46
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.16. Mean ± SD Pharmacokinetic Parameters for Bosutinib in Dogs in a 28-Day Oral (Gavage) Toxicity Study
Test Article: Bosutinib
Species/Strain: Dogs/Beagle
No. and Gender (M/F): 3/gender/group at dosages of 0.5, 1.5, and 5 mg/kg/day
Feeding Condition: Fed
Method of Administration: Oral (gavage)
Vehicle/Formulation: 2% Polysorbate 80, 0.5% methylcellulose, 0.06% acetic acid, and purified water
Day
1
Dosage
(mg/kg/day)
0.5
Gender
M
F
Report No.: RPT-53029
Matrix: Plasma
Analyte: Bosutinib
Assay: LC/MS/MS
Cmax (ng/mL)
Total
Unbounda
13 ± 2
0.5 ± 0.1
16 ± 1
0.7 ± 0.0
Tmax
(h)
5.3 ± 2.3
2.0 ± 0.0
AUC(0-24) (ng•h/mL)
Total
Unbounda
149 ± 12
6.1 ± 0.5
154 ± 18
6.3 ± 0.7
AUC(0-)
(ng•h/mL)
182 ± 8
185 ± 23
t½
(h)
7.5 ± 0.9
7.7 ± 0.4
Rb
NA
NA
1.5
M
F
56 ± 5
52 ± 18
2.3 ± 0.2
2.1 ± 0.7
4.0 ± 0.0
4.7 ± 3.1
758 ± 102
599 ± 118
31 ± 4.2
25 ± 4.8
1292 ± 313d
811 ± 98d
19.0 ± 6.7c
13.1 ± 2.2c
NA
NA
5
M
F
257 ± 46
177 ± 66
11 ± 1.9
7.3 ± 2.7
4.0 ± 0.0
4.0 ± 0.0
2954 ± 322
2405 ± 892
121 ± 13
99 ± 37
3838 ± 483d
3278 ± 1388d
11.6 ± 0.8c
12.2 ± 2.6c
NA
NA
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 47
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.16 Mean ± SD Pharmacokinetic Parameters for Bosutinib in Dogs in a 28-Day Oral (Gavage) Toxicity Study (Cont’d)
Test Article: Bosutinib
Day
28
Dosage
(mg/kg/day)
0.5
Gender
M
F
Cmax (ng/mL)
Total
Unbounda
17 ± 3
0.7 ± 0.1
21 ± 6
0.9 ± 0.2
Tmax
(h)
4.0 ± 0.0
2.0 ± 0.0
AUC(0-24) (ng•h/mL)
Total
Unbounda
229 ± 55
9.4 ± 2.3
232 ± 81
9.5 ± 3.3
AUC(0-)
(ng•h/mL)
NA
NA
Report No.: RPT-53029
t½
(h)
Rb
c
10.8 ± 4.4
1.54 ± 0.40
8.2 ± 3.3c
1.52 ± 0.61
1.5
M
F
78 ± 11
69  5
3.2 ± 0.5
2.8  0.2
3.3 ± 1.2
3.3 ± 1.2
985 ± 197
824 ± 48
40 ± 8.1
34 ± 2.0
NA
NA
16.7 ± 5.7c
13.7 ± 2.9c
1.29 ± 0.09
1.40 ± 0.23
5
Me
F
364
291  77
15
12  3.2
3.0
2.7 ± 1.2
3888
3450 ± 908
159
141 ± 37
NA
NA
11.4c
12.8 ± 2.1c
1.29
1.49 ± 0.21
Note: The in-life portion of this study is described in RPT-52074.
M = Male; F = Female; AUC = Area under the concentration-versus-time curve; Cmax = Maximum concentration; LC/MS/MS = Liquid chromatography/tandem mass
spectrometry; R = Accumulation ratio; RPT = Report; SD = Standard deviation; t½ = Elimination half-life; Tmax = Time to reach maximum concentration.
a
Cmax or AUC (total) x 0.041 (mean fraction unbound; RPT-54418) = Cmax or AUC unbound.
b
AUC(0-24) Day 28/ AUC(0-24) Day 1.
c
Values should be interpreted cautiously since the sampling period was too short (24 hours) to adequately characterize the terminal half-life with a dosing interval of 24 hours.
d
Estimated from the elimination rate constant (long t½) obtained from a short sampling period that was too short to adequately characterize the terminal phase and hence
should be interpreted with caution.
e
n=2 (One male was electively euthanized on study day 21).
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 48
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.17. Repeat-Dose Toxicity: 9-Month Oral (Gavage) Toxicity Study in Fed Dogs with a 28-Day Recovery
Test Article: Bosutinib
Species/Strain: Dogs/Beagle
Initial Age: 8 to 9 Months
Date of First Dose:
Special Features: None
Duration of Dosing: 39 Weeks
Duration of Postdose: 28 Days
20
Method of Administration: Oral (gavage)
Vehicle/Formulation: 2% Polysorbate 80,
0.5% methylcellulose, 0.06% acetic acid, and distilled water
Conclusion: The NOAEL was 10 mg/kg/day based on the absence of adverse events at any dosage.
Dosage: (mg/kg/day)
No. of Animals
Toxicokinetics
(RPT-66535)
Day 1
Cmax ±SD (ng/mL)
AUC(0-24) ±SD
(ng•h/mL)
Day 273
Cmax ±SD (ng/mL)
AUC(0-24) ±SD
(ng•h/mL)
-------0 (Control)------M:7a
F:7 a
------------1-----------M:4
F:4
------------3-----------M:4
F:4
Report No.: RPT-65542
GLP Study: Yes
------------10-----------M:7 a
F:7 a
NA
NA
34.2 ±11.6
38.9 ± 6.6
142 ± 27
154 ± 20
652 ± 166
419 ± 77
NA
NA
396 ± 51
506 ± 26
1670 ± 200
1686 ± 176
6805 ± 1180
4891 ± 621
NA
NA
34.9 ± 9.4
66.4 ± 44.6
133 ± 12
160 ± 20
583 ± 166
513 ± 112
NA
NA
575 ± 141
823 ± 313
2008 ± 198
2372 ± 280
8265 ± 1981
6657 ± 1340
Noteworthy Findings
Died or Sacrificed Moribund
0
0
0
0
0
0
0
0
Clinical Observations
–
–
–
–
–
–
–
–
Body Weight (%)
–
–
–
–
–
–
–
–
Food Consumption
–
–
–
–
–
–
–
–
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 49
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.17 Repeat-Dose Toxicity: 9-Month Oral (Gavage) Toxicity Study in Fed Dogs with a 28-Day Recovery (Cont’d)
Test Article: Bosutinib
Dosage: (mg/kg/day)
No. of Animals
Noteworthy Findings (cont’d)
-------0 (Control)------M:7 a
F:7 a
------------1-----------M:4
F:4
------------3-----------M:4
F:4
Report No.: RPT-65542
------------10-----------M:7 a
F:7 a
Ophthalmoscopy
–
–
–
–
–
–
–
–
ECG
Hematology
–
–
–
–
–
–
–
–
–
–
–
–
–
–
–
–
Clinical Chemistry
–
–
–
–
–
–
–
–
Urinalysis
–
–
–
–
–
–
–
–
Organ Weights (%)
–
–
–
–
–
–
–
–
Macroscopic Pathology
–
–
–
–
–
–
–
–
Histopathology
–
–
–
–
–
–
–
–
 No noteworthy finding.
M = Male; F = Female; AUC = Area under the concentration-versus-time curve; Cmax = Maximum concentration; ECG = Electrocardiogram; GLP = Good Laboratory Practice;
NA = Not applicable; NOAEL = No-observed-adverse-effect level; RPT = Report.
a
Three dogs were assigned to the 28-day recovery period.
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 50
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.18. Mean ± SD Pharmacokinetic Parameters for Bosutinib in Fed Dogs in a 9-Month Oral (Gavage) Toxicity Study
Test Article: Bosutinib
Species/Strain: Dogs/Beagle
No. and Gender (M/F): 4/gender/group at 1 and 3 mg/kg/day; 7/gender/group at 10 mg/kg/day
Feeding Condition: Fed
Method of Administration: Oral (gavage)
Vehicle/Formulation: 2% Polysorbate 80, 0.5% methylcellulose, 0.06% acetic acid, and distilled water
Day
1
Dosage
(mg/kg/day)
1
Gender
M
F
Cmax (ng/mL)
Total
Unbounda
34.2 ± 11.6
1.4 ± 0.5
38.9 ± 6.6
1.6 ± 0.3
Tmax
(h)
2.5 ± 1.0
3.0 ± 1.2
Report No.: RPT-66535
Matrix: Plasma
Analyte: Bosutinib
Assay: LC/MS/MS
AUC(0-24) (ng•h/mL)
Total
Unbounda
396 ± 51
16 ± 2.1
506 ± 26
21 ± 1.1
AUC(0-)
(ng•h/mL)
NRc
NRc
t½
(h)
14.4d ± 3.9
18.3d ± 1.6
Rb
NA
NA
3
M
F
142 ± 27
154 ± 20
5.8 ± 1.1
6.3 ± 0.8
2.8 ± 1.5
2.5 ± 1.0
1670 ± 200
1686 ± 176
68 ± 8.2
69 ± 7.2
2152 (N = 1)
NRc
15.2d ± 2.8
13.2d ± 2.6
NA
NA
10
M
F
652 ± 166
419 ± 77
27 ± 6.8
17 ± 3.2
2.6 ± 1.4
3.7 ± 0.8
6805 ± 1180
4891 ± 621
279 ± 48
201 ± 25
7393 (N = 1)
5763 ± 801
13.7d ± 2.9
9.3 ± 1.3
NA
NA
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 51
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.18 Mean ± SD Pharmacokinetic Parameters for Bosutinib in Fed Dogs in a 9-Month Oral (Gavage) Toxicity Study (Cont’d)
Test Article: Bosutinib
Day
273
Dosage
(mg/kg/day)
1
Gender
M
F
Cmax (ng/mL)
Total
Unbounda
34.9 ± 9.4
1.4 ± 0.4
66.4 ± 44.6
2.7 ± 1.8
Tmax
(h)
3.5 ± 1.0
2.3 ± 1.3
AUC(0-24) (ng•h/mL)
Total
Unbounda
575 ± 141
24 ± 5.8
823 ± 313
34 ± 13
AUC(0-)
(ng•h/mL)
NA
NA
Report No.: RPT-66535
t½
(h)
Rb
d
18.3 ± 2.7 1.47 ± 0.42
20.2d ± 6.0 1.61 ± 0.54
3
M
F
133 ± 12
160 ± 20
5.5 ± 0.5
6.6 ± 0.8
3.5 ± 1.0
2.8 ± 1.5
2008 ± 198
2372 ± 280
82 ± 8.1
97 ± 11
NA
NA
17.6d ± 5.4
16.0d ± 4.4
1.23 ± 0.26
1.41 ± 0.16
10
M
F
583 ± 166
513 ± 112
24 ± 6.8
21 ± 4.6
3.3 ± 1.3
2.1 ± 0.9
8265 ± 1981
6657 ± 1340
339 ± 81
273 ± 55
NA
NA
14.7d ± 4.1
14.3d ± 2.3
1.25 ± 0.40
1.36 ± 0.22
Note: The in-life portion of this study is described in RPT-65542.
M = Male; F = Female; AUC = Area under the concentration-versus-time curve; Cmax = Maximum concentration; LC/MS/MS = Liquid chromatography/tandem mass
spectrometry; NA = Not applicable; NR = Not reported; R = Accumulation ratio; RPT = Report; SD = Standard deviation; t½ = Elimination half-life; Tmax = Time to reach
maximum concentration.
a
Cmax or AUC (total) × 0.041 (mean fraction unbound; RPT-54418) =Cmax or AUC unbound.
b
AUC(0-24) (day 273)/AUC(0-24) (day 1).
c
Extrapolated portion > 25%.
d
t½ values should be interpreted with caution as they were obtained from a sampling period (24 hours) that was too short to adequately characterize the terminal phase
reported by this t½.
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 52
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.19. Summary of Genotoxicity Studies with Bosutinib
Test Article: Bosutinib
Test
Report No.
Cross-Reference
Test System
or Species
Compound Concentration
or Dosage
Salmonella typhimurium
(TA98, TA100)
-S9 and +S9: 10, 33.3, 100, 333, 1000, 3330, and
5000 g/plate
Negative
In Vitro Bacterial
Reverse Mutation
Assay with Bosutinib
RPT-49003
S. typhimurium
(TA98, TA100, TA1535,
TA1537)
Escherichia coli (WP2 uvrA)
-S9 and +S9: 1.0, 3.3, 10, 33, 100, 333, and 1000 g/plate
(initial and confirmatory)
Negativea
In Vitro Chromosome
Aberration Assay with
Bosutinib
RPT-50322
Human peripheral blood
lymphocytes
-S9: 0.25b, 0.5, 1, 2.5, 5b, 7.5b, and 10b g/mL
(4 and 20 hours treatment)
+S9: 0.25b, 0.5, 1, 2.5, 5b, 7.5b, and 10b g/mL
(4 hours treatment)
Negative
In Vitro Bacterial
Reverse Mutation
Screening with
Bosutinib
RPT-46058
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 53
Results
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.19 Summary of Genotoxicity Studies with Bosutinib (Cont'd)
Test
Report No.
Cross-Reference
In Vivo Mouse
Micronucleus
RPT-52501
RPT-52338
Test System
or Species
Mouse (CD-1) bone marrow
cells
Compound Concentration
or Dosage
0c, 500, 1000, or 2000 mg/kg in a single
oral (gavage) dosage
Test Article: Bosutinib
Results
The results of this study were negative, indicating that
bosutinib was non-mutagenic in the mouse
micronucleus assay.
In a supporting toxicokinetic study, bosutinib was
administered orally (gavage) to male mice at a dosage of
2000 mg/kg. The mean ± standard error (SE) Cmax
value was 9811 ± 3998 ng/mL, the mean Tmax was
2 hours, and the mean AUC(0-24) value was
172495 ± 26050 ng•h/mL. This AUC value is
approximately 47-fold the clinical exposure of
3690 ng•h/mL, indicating that adequate exposure to
bosutinib was achieved in the mouse micronucleus
study.
AUC = Area under the concentration-versus-time curve; Cmax = Maximum concentration; M2 = oxydechlorinated bosutinib; RPT = Report; S9 = Aroclor-induced rat liver
metabolic activation; SE = Standard error; Tmax = Time to reach maximum concentration; TK = toxicokinetic.
a
b
c
Due to significant toxicity at 333 or 667 g/plate in the preliminary toxicity assessment assay, this study was conducted with bosutinib concentrations up to 1000 g/plate.
These concentrations were not evaluated microscopically.
Vehicle control (2% polysorbate 80, 0.5% methylcellulose, and 0.06% acetic acid and purified water).
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 54
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.20. Salmonella typhimurium Reverse Mutation Screening Assay (Ames Test)
Test Article: Bosutinib
Test for Induction of: Reverse mutation in
Number of Independent Assays: 1
Study Number: RPT-46058
bacterial cells
Species/Strains: Salmonella typhimurium
Number of Replicate Cultures: 3
Lot Number: WAY-173606-11
Metabolizing System: Aroclor-induced rat liver S9
Vehicles: DMSO
GLP Compliance: No
Treatment: 48 to 72 hours at 37  1oC
Date of Treatment:
20
Cytotoxic Effects: Toxicity occurred in TA98 with metabolic activation at 1000 μg per plate. Toxicity
occurred in TA100 with and without metabolic activation and in TA98 without metabolic activation at 333 μg
per plate.
Genotoxic Effects: No positive increases in the number of revertants occurred after treatment with WAY-173606-11 with either strain in the presence or
absence of S9 metabolic activation.
Test Article
Without Metabolic Activation
DMSO
Bosutinib
2-Nitrofluorene
Sodium azide
Dose
(g/plate)
Revertant Colony Counts (Mean of 3 plates  SD)
Salmonella typhimurium
TA98
TA100
50 L/plate
10
33.3
100
333
1000
3330
5000
1
5
26  2
28  2
23  2
23  6
17  3
00
00
00
216  24
Not tested
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 55
103  14
102  7
101  13
111  13
70  5
00
00
00
Not tested
733  27
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.20. Salmonella typhimurium Reverse Mutation Screening Assay (Ames Test) (Cont’ d)
Test Article
With Metabolic Activation
DMSO
Bosutinib
2-Aminoanthracene
Test Article: Bosutinib
Dose
(g/plate)
Revertant Colony Counts (Mean of 3 plates  SD)
Salmonella typhimurium
TA98
TA100
50 L/plate
10
33.3
100
333
1000
3330
5000
2.5
39  3
39  9
40  4
38  4
29  5
00
00
00
1113  359
DMSO = Dimethyl Sulfoxide; GLP = Good Laboratory Practice; SD = Standard Deviation.
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 56
88  9
100  10
104  12
102  17
84  10
00
00
00
324  95
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.21. Bacterial Reverse Mutation Test with Salmonella typhimurium and Escherichia coli
Test Article: Bosutinib
Test for Induction of: Reverse mutation in
Number of Independent Assays: 3
Study Number: RPT-49003
bacterial cells
Species/Strains: Salmonella typhimurium,
Number of Replicate Cultures: 3
Lot Number: L23445-136
Escherichia coli
Metabolizing System: Aroclor-induced rat liver S9
Vehicles: DMSO
GLP Compliance: Yes
Treatment: 48 to 72 hours at 37  2oC
Cytotoxic Effects: In the initial mutagenicity assay via plate incorporation method, toxicity was observed
Date of Treatment:
20
20
beginning at 333 or at 1000 g per plate. In the confirmatory mutagenicity assay via preincubation, toxicity
20
was observed at 333 or at 1000 g per plate. In the repeat confirmatory assay, toxicity was observed at 100,
20
333 or at 1000 g per plate.
Genotoxic Effects: There was no evidence of significant dose-related increases in the number of revertant colonies compared to the negative controls with
any of the strains tested in either the absence or presence of S9 metabolic activation.
Revertant Colony Counts (Mean of 3 plates  SD)
Dose
Test Article
Salmonella typhimurium
Escherichia coli
(g/plate)
TA 98
TA 100
TA 1535
TA 1537
WP2 uvrA
Without Metabolic Activation
DMSO
50 L/plate
12  3
139  11
10  2
10  4
12  2
Bosutinib
1.0
11  2
164  15
10  2
13  3
93
3.3
10  3
150  4
11  1
14  3
11  2
10
11  2
154  11
91
17  3
13  2
33
12  4
157  18
11  1
15  4
10  7
100
13  3
118  15
10  2
74
12  0
333
61
00
00
00
00
1000
00
00
00
00
00
2-Nitrofluorene
1.0
Not tested
Not tested
Not tested
Not tested
305  34
Sodium azide
1.0
Not tested
Not tested
Not tested
733  19
391  28
9-Aminoacridine
75
Not tested
Not tested
Not tested
Not tested
84  3
Methyl methanesulfonate
1000
Not tested
Not tested
Not tested
Not tested
472  83
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 57
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.21. Bacterial Reverse Mutation Test with Salmonella typhimurium and Escherichia coli (Cont’ d)
Test Article: Bosutinib
Test Article
With Metabolic Activation
DMSO
Bosutinib
2-Aminoanthracene
2-Aminoanthracene
Dose
(g/plate)
TA 98
50 L/plate
1.0
3.3
10
33
100
333
1000
1.0
10
12  1
18  4
20  6
19  2
19  2
20  3
19  3
42
862  13
Not tested
Revertant Colony Counts (Mean of 3 plates  SD)
Salmonella typhimurium
TA 100
TA 1535
TA 1537
161  12
176  32
177  9
176  6
177  17
195  23
61  5
00
1666  165
Not tested
DMSO = Dimethyl Sulfoxide, GLP = Good Laboratory Practice; SD = Standard Deviation.
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 58
92
91
10  2
91
92
11  1
10  1
00
122  7
Not tested
10  2
10  2
91
10  3
12  2
71
10  2
00
146  12
Not tested
Escherichia coli
WP2 uvrA
11  1
11  2
11  1
12  2
12  1
13  1
13  1
11  3
Not tested
550  50
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.22. In Vitro Mammalian Chrosome Aberration Test in Human Peripheral Blood Lymphocytes
Test Article: Bosutinib
Test for Induction of: Chromosome aberrations
Number of Independent Assays: 3
Study Number: RPT-50322
Test Cells: Human lymphocyte
Number of Replicate Cultures: 2
Lot Number: L23445-136
Metabolizing System: Aroclor-induced rat liver S9 Number of Cells Analyzed/Culture: 200
Vehicles: DMSO
Treatment: 4 hours with and without metabolic activation, and 20 hours without metabolic activation
GLP Compliance: Yes
Cytotoxic Effects: Substantial toxicity, indicated by a 50% or greater reduction in the mitotic index relative Date of Treatment:
20
to the corresponding solvent control, was achieved at the hightest dose level.
Genotoxic Effects: For each of the exposure groups, there was no statistically significant increase in the percentage of cells with structural or numerical
chromosome aberrations compared with the corresponding solvent control at any of the test article concentrations evaluated microscopically.
Mean Mitotic
Index
Cells Scored
4-Hour Treatment without Metabolic Activation
DMSO
10 L/mL
Bosutinib
0.5
1
2.5
Mitomycin C
0.6
Aberrations Per
Cella
Mean  SD
8.7
7.1
6.2
4.1
5.4
200
200
200
200
200
0.000  0.000
0.000  0.000
0.005  0.071
0.000  0.000
0.145  0.380
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
13.5**
4-Hour Treatment with Metabolic Activation
DMSO
10 L/mL
Bosutinib
0.5
1
2.5
Cyclophosphamide
20
7.2
6.0
5.3
3.4
3.3
200
200
200
200
200
0.000  0.000
0.005  0.071
0.000  0.000
0.000  0.000
0.195  0.478
0.0
0.0
0.0
0.5
0.0
0.0
0.5
0.0
0.0
16.5**
Test Article
Dose
(g/mL)
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 59
Cells with Aberrations
Numerical
Structural
Mean %
Mean %
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.22. In Vitro Mammalian Chrosome Aberration Test in Human Peripheral Blood Lymphocytes (Cont’ d)
Test Article
Dose
(g/mL)
20-Hour Treatment without Metabolic Activation
DMSO
10 L/mL
Bosutinib
0.5
1
2.5
Mitomycin C
0.3
a
Mean Mitotic
Index
Cells Scored
Aberrations Per
Cella
Mean  SD
10.0
6.8
7.3
4.7
4.9
200
200
200
200
200
0.000  0.000
0.000  0.000
0.000  0.000
0.000  0.000
0.090  0.287
Severely damaged cells were counted as 10 aberrations.
** p<0.01; Fisher’s exact test.
DMSO = Dimethyl Sulfoxide; GLP = Good Laboratory Practice; SD = Standard Deviation.
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 60
Test Article: Bosutinib
Cells with Aberrations
Numerical
Structural
Mean %
Mean %
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
9.0**
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.23. Single Dose Oral (Gavege) Bone Marrow Micronucleus Study in Male Mice
Test Article: Bosutinib
Test for Induction of: Bone marrow micronuclei
Species/Strain: Mouse/CD-1
Age: Approximately 6-8 weeks
Cells Evaluated: PCEs
Treatment Schedule: Single dose
Sample Time: 24 and 48 hours postdose
Method of Administration: Oral gavage
Vehicle/Formulation: 0.5% Mrthylcellulose, 2%
polysorbate 80, and 0.06% acetic acid in purified water
2000 PCEs for micronuclei; 1000 ECs for PCEs/ECs ratio
Study Number: RPT-52501
Lot Number: MP030203
GLP Compliance:
Yes
Number of Cells Analyzed/Animal:
Date of Treatment:
20
Special Features: None.
Toxic/Cytotoxic Effects: Bone marrow cytotoxicity was indicated by reductions of % PCE at all treatment levels compared to the concurrent control value.
Genotoxic Effects: There was no compound-related, statistically significant increase in the frequency of micronucleated PCEs in the bone marrow of male
mice at bosutinib dosages up to 2000 mg/kg.
Evidence of Exposure: Toxicokinetic parameters are presented in 2.6.7.24.
Test Article
Vehicle
Bosutinib
Cyclophosphamide
Vehicle
Bosutinib
Dose
(mg/kg)
0
500
1000
2000
50
0
500
1000
2000
Number of Mice
24 hours postdose
5
5
5
5
5
48 hours postdose
5
5
5
5
PCE/Total ECs
Mean  SD
MNPCEs per 1000 PCEs
Mean  SD
0.511  0.09
0.439  0.08
0.457  0.04
0.464  0.08
0.342  0.02
0.6  0.22
0.7  0.45
0.7  0.45
0.7  0.27
18.8  3.55*
0.485  0.06
0.482  0.08
0.451  0.03
0.433  0.07
0.3  0.27
0.7  0.27
0.6  0.42
0.6  0.42
*p<0.05; Kastenbaum-Bowman Tables
EC = Erythrocyte, GLP = Good Laboratory Practice, MNPCE = Micronucleated Polychromatic Erythrocytes, PCE = Polychromatic Erythrocytes, SD =
Standard Deviation.
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 61
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.24. Mean ± SE Pharmacokinetic Parameters for Bosutinib in Male Mice after a Single Oral Dose in a Micronucleus Support Study
Species/Strain: Mice/CD-1
No. and Gender (M/F): 24 M at 2000 mg/kg
Feeding Condition: Fed
Method of Administration: Oral (gavage)
Vehicle/Formulation: 2% Polysorbate 80, 0.5% methylcellulose, 0.06% acetic acid, and purified water
Cmax (ng/mL)
Unbounda
Day
Dosage
(mg/kg)
Total
1
2000
9811 ± 3998
579 ± 236
Tmax
(h)
2.0
Test Article: Bosutinib
Report No.: RPT-52338
Matrix: Plasma
Analyte: Bosutinib
Assay: LC/MS/MS
AUC(0-24) (ng•h/mL)
Total
Unbounda
172495 ± 26050
10177 ± 1537
M = Male; AUC = Area under the concentration-versus-time curve; Cmax = Maximum concentration; LC/MS/MS = Liquid chromatography/tandem mass spectrometry;
RPT = Report; SE = Standard error; Tmax = Time to reach maximum concentration.
a
Cmax or AUC (total) × 0.059 (mean fraction unbound; RPT-54418) = Cmax or AUC unbound.
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 62
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.25. Two Year Oral (Gavage) Carcinogenicity Study in Rats
Species/Strain:
Test Article: Bosutinib
Males: high-dose – 79 weeks
Report Number:
-2185
Remaining males – 90-91 weeks
Females high-dose – 92 weeks
Remaining females – 97-100 weeks
Initial Age: 7 weeks
Method of Administration: Oral gavage, QD, 10 mL/kg Lot Number: MR090034
Date of First Dose:
20
Vehicle/Formulation: 0.5% methylcellulose (4000 cps) GLP Compliance: Yes
(w/v), 2.0% polysorbate 80, NF (w/v), 0.06% glacial acetic
acid, NF (W/V), and distilled water/Suspension
Treatment of Controls: Group 1 – Water
Groups 2 and 3 – Vehicle
Basis for High-Dose Selection: Females: Based on the maximum tolerated dosage (MTD) from the chronic toxicity study.
Males: Selected for males due to the lower exposures observed in males when compared with females in the repeat-dose
toxicity studies.
Special Features: None.
Rats/S-D
Treatment Group
Dosea (mg/kg/day)
Sex
Number of Animals
Carcinogenicity
Died (Found Dead or Died Accidentally) or
Sacrificed Moribund or for Humane Reasons
Carcinogenicity
Survival of Carcinogenicity Animals (%)
Body Weight (grams)c
Week 25 (6 months)
Week 57d
Week 65e
Week 85f
Week 97g
Food Consumption (grams/animal/day)c
Week 25 (6 months)
Duration of Dosing:
Water Control
M
0
F
Combined Vehicle
Controls
0
M
F
Low Dose
Mid Dose
High Dose
2.5
M
1.5
F
7.5
M
5
F
25/15b
M
15
F
60
60
120
120
60
60
60
60
60
60
40
33.3
40
33.3
63
47.5
84
30.0
35
41.7
41
31.7
36
40.0
42
30.0
45
25.0***
43
28.3
784.1
987.8
1088.7
-
419.9
654.0
735.9
702.4
787.7
1009.8
1055.7
-
413.3
651.4
710.3
721.7
+3
+2
+0.2
-
+2
+0.3
+1
-4
+1
+2
-2
-
+1
+0.4
-2
-3
-4*
-10***
-17***
-
-0.1
-11***
-18***
-17***
30.0
20.1
29.8
20.5
+4
+3
+3
0.0
+0.3
-2
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 63
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.25. Two Year Oral (Gavage) Carcinogenicity Study in Rats (Cont’d)
Treatment Group
Dosea (mg/kg/day)
Sex
Neoplastic Lesions - Drug-Relatedh
Neoplastic Lesions - Incidental/Spontaneous
Number Examined
Adipose Tissuei
B-hemangioma
N-metastatic/invasive neoplasm
Adrenals
B-cortex: adenoma
B-pheochromocytoma
M-pheochromocytoma
M-medulla ganglioneuroma
M-cortex: carcinoma
N-metastatic/invasive neoplasm
Brain
B-granular cell tumor
M-astrocytoma
M-oligodendroglioma
N-metastatic/invasive neoplasm
Cecumj
N-metastatic/invasive neoplasm
Cervical SC
N-metastatic/invasive neoplasm
Colonj
B-leiomyoma
Duodenumj
M-adenocarcinoma
Epididymides
N-metastatic/invasive neoplasm
Esophagus
N-metastatic/invasive neoplasm
Extremityi
B-hemangioma
Water Control
M
-
0
F
-
Test Article: Bosutinib
Combined Vehicle
Controls
0
M
F
-
Low Dose
Mid Dose
High Dose
2.5
M
-
1.5
F
-
7.5
M
-
5
F
-
25/15b
M
-
15
F
-
60
60
120
120
60
60
60
60
60
60
0 [2]
0 [2]
0 [2]
0 [2]
0 [4]
0 [4]
NE
NE
0 [2]
0 [2]
0 [1]
0 [1]
1 [2]
1 [2]
0 [2]
0 [2]
0 [3]
0 [3]
NE
NE
0
5
1
0
1
0
1
1
0
0
0
1
1
11
1
1
0
0
4
0
0
0
1
1
1
6
0
0
0
0
3
3
0
0
2
0
2
3
0
0
0
0
2
0
0
0
0
0
0
3
0
0
0
0
0
0
0
0
0
2
0
0
0
0
0
1
0
2
0
1
1
4
0
1
0
5
0
0
0
0
0
0
1
2
0
0
0
0
1
0
0
2
0
0
0
0
1
0
0
3
0 (59)
0
1 (119)
0
0
0 (59)
0 (59)
0
1 (57)
0
0
1
0
0
0
0
0
0
0
0
0 (59)
0
0
0
0
0
0 (58)
0
0
1
0 (58)
0 (59)
0 (116)
0
1
0 (59)
0 (58)
0
0 (58)
0
0
NA
1
NA
0
NA
0
NA
1
NA
0
0
2
0
0
0
0
0
0
0
0 [16]
0 [8]
1 [30]
0 [15]
0 [8]
0 [14]
0 [19]
0 [10]
0 [10]
0 [10]
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 64
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.25. Two Year Oral (Gavage) Carcinogenicity Study in Rats (Cont’d)
Treatment Group
Dosea (mg/kg/day)
Sex
Neoplastic Lesions - Incidental/Spontaneous
Number Examined
Eyesj
N-metastatic/invasive neoplasm
Femoral Marrowi
N-metastatic/invasive neoplasm
Femoral-Tib Jnt
N-metastatic/invasive neoplasm
Harderian Gl
N-metastatic/invasive neoplasm
Headi
M-fibrosarcoma
M-squamous cell carcinoma
M-schwannoma
Heart
B-endocardial schwannoma
M-endocardial schwannoma
M-myxoma
N-metastatic/invasive neoplasm
Ileumj
N-metastatic/invasive neoplasm
Kidneys
B-hemangioma
B-lipoma
M-liposarcoma
M-hemangiosarcoma
M-mesenchymal tumor
M-transitional cell carcinoma
N-metastatic/invasive neoplasm
Larynxk
N-metastatic/invasive neoplasm
Water Control
M
0
F
Test Article: Bosutinib
Combined Vehicle
Controls
0
M
F
Low Dose
Mid Dose
High Dose
2.5
M
1.5
F
7.5
M
5
F
25/15b
M
15
F
60
60
120
120
60
60
60
60
60
60
0
0
0
0 (118)
0 (58)
1 (59)
0
0 (59)
1 (59)
0
0 [1]
0 [1]
1 [2]
1 [1]
NE
1 [1]
1 [1]
NE
NE
0 [1]
0
0
0
0
0
0
0
0
1
0
0
0
2
1
0
1
0
0
1
0
NE
NE
NE
NE
NE
NE
0 [1]
0 [1]
1 [1]
2 [2]
0 [2]
0 [2]
NE
NE
NE
0 [1]
1 [1]
0 [1]
0 [1]
1 [1]
0 [1]
NE
NE
NE
0 [1]
1 [1]
0 [1]
NE
NE
NE
0
1
0
0
0
0
0
0
2
3
1
1
0
1
0
2
0
0
0
0
0
1
0
0
0
0
0
0
0
1
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0 (57)
0 (59)
1 (119)
0 (119)
0
0 (56)
0 (58)
0
0 (58)
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
1
0
0
0
0
3
0
2
0
0
0
1
0
1
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
1
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
1
0
0
1
0
1
1
0
1
0
0
0 (42)
0 (41)
1 (64)
0 (87)
0 (35)
0 (42)
0 (36)
0 (43)
1 (47)
0 (44)
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 65
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.25. Two Year Oral (Gavage) Carcinogenicity Study in Rats (Cont’d)
Treatment Group
Dosea (mg/kg/day)
Sex
Neoplastic Lesions - Incidental/Spontaneous
Number Examined
Liver
B-hepatocellular adenoma
M-hepatocellular carcinoma
N-metastatic/invasive neoplasm
Lumbar SC
N-metastatic/invasive neoplasm
Lungs
B-bronchiolo/alveolar adenoma
N-metastatic/invasive neoplasm
Lymph Node otheri
M-hemangiosarcoma
N-metastatic/invasive neoplasm
Lymph/Retic Sys
M-granulocytic leukemia
M-histiocytic sarcoma
M-malignant lymphoma
Mammary (other)i
B-fibroadenoma
B-adenoma
M-adenocarcinoma
N-metastatic/invasive neoplasm
Mammary protocol
B-fibroadenoma
B-adenoma
M-adenocarcinoma
N-metastatic/invasive neoplasm
Mandibular LNj
N-metastatic/invasive neoplasm
Water Control
M
0
F
Test Article: Bosutinib
Combined Vehicle
Controls
0
M
F
Low Dose
Mid Dose
High Dose
2.5
M
1.5
F
7.5
M
5
F
25/15b
M
15
F
60
60
120
120
60
60
60
60
60
60
0
0
2
1
0
1
1
4
4
0
0
1
0
0
1
0
0
1
0
1
1
0
0
0
1
0
1
0
0
0
0
1
0
0
0
0
0
0
0
0
0
2
0
2
1
5
2
7
1
1
1
4
0
1
0
3
0
1
0
2
0 [13]
0 [13]
0 [6]
0 [6]
1 [15]
1 [15]
0 [20]
3 [20]
0 [8]
2 [8]
0 [14]
2 [14]
0 [10]
1 [10]
0 [10]
1 [10]
0 [7]
0 [7]
0 [9]
0 [9]
1
3
0
0
0
2
0
4
1
0
1
2
0
1
0
0
0
2
0
1
0
0
0
0
0
0
1
0
0
0
1 [2]
1 [2]
0 [2]
0 [2]
37 [43]
0 [43]
17 [43]
0 [43]
2 [3]
0 [3]
0 [3]
0 [3]
73 [91]
1 [91]
33 [91]
0 [91]
1 [1]
0 [1]
0 [1]
0 [1]
33 [42]
0 [42]
17 [42]
0 [42]
NE
NE
NE
NE
28 [41]
0 [41]
20 [41]
1 [41]
NE
NE
NE
NE
11 [20]
1 [20]
10 [20]
0 [20]
0
0
0
0
5
0
1
0
0
0
0
0
2
1
1
0
0
0
0
0
6
2
1
1
0
0
0
0
5
0
0
0
0
0
0
0
2
0
1
0
0
0
2 (118)
2
0 (59)
2 (59)
0 (58)
0
1 (59)
1
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 66
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.25. Two Year Oral (Gavage) Carcinogenicity Study in Rats (Cont’d)
Treatment Group
Dosea (mg/kg/day)
Sex
Neoplastic Lesions - Incidental/Spontaneous
Number Examined
Mediastinal tissi
B-paraganglioma
M-schwannoma
N-metastatic/invasive neoplasm
Mesenteric LN
N-metastatic/invasive neoplasm
Mesentery/Peritoi
B-benign mesothelioma
B-fibroma
M-hemangiosarcoma
Muscle (Diaph)j
N-metastatic/invasive neoplasm
Muscle (Thigh)j
N-metastatic/invasive neoplasm
Muscle (other)i
M-hemangiosarcoma
Optic Nervej
N-metastatic/invasive neoplasm
Ovaries
B-sertoliform/stromal tumor
B-luteoma
M-leiomyosarcoma
N-metastatic/invasive neoplasm
Oviductsj
M-adenocarcinoma
Palatei
N-metastatic/invasive neoplasm
Water Control
M
0
F
Test Article: Bosutinib
Combined Vehicle
Controls
0
M
F
Low Dose
Mid Dose
High Dose
2.5
M
1.5
F
7.5
M
5
F
25/15b
M
15
F
60
60
120
120
60
60
60
60
60
60
0 [2]
1 [2]
0 [2]
NE
NE
NE
0 [1]
0 [1]
1 [1]
0 [2]
0 [2]
0 [2]
NE
NE
NE
NE
NE
NE
1 [2]
0 [2]
0 [2]
NE
NE
NE
0 [1]
0 [1]
0 [1]
0 [1]
0 [1]
0 [1]
0
0
0
1
0
0
1
0
0
0
1 [2]
0 [2]
0 [2]
0 [1]
0 [1]
1 [1]
0 [1]
0 [1]
0 [1]
0 [2]
1 [2]
0 [2]
0 [2]
0 [2]
0 [2]
NE
NE
NE
0 [2]
0 [2]
0 [2]
0 [2]
0 [2]
0 [2]
NE
NE
NE
0 [2]
0 [2]
0 [2]
0
1
2
0 (119)
0
0 (59)
1
0
0
0
1
0
1
0 (119)
0
0
1
0
0
0
0 [1]
NE
0 [3]
NE
0 [1]
NE
NE
1 [1]
NE
NE
0
1
0
0
0
0 (59)
0
0 (59)
0 (59)
0
NA
NA
NA
NA
1
0
0
0
NA
NA
NA
NA
0
1
1
0
NA
NA
NA
NA
0
0
0
1
NA
NA
NA
NA
0
0
0
0
NA
NA
NA
NA
0
0
0
0
NA
0 (59)
NA
0
NA
0 (59)
NA
0 (59)
NA
1
NE
NE
NE
NE
NE
NE
1 [1]
NE
NE
NE
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 67
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.25. Two Year Oral (Gavage) Carcinogenicity Study in Rats (Cont’d)
Treatment Group
Dosea (mg/kg/day)
Sex
Neoplastic Lesions - Incidental/Spontaneous
Number Examined
Pancreas
B-islet cell adenoma
M-islet cell carcinoma
N-metastatic/invasive neoplasm
Parathyroidj
B-adenoma
Pituitary
B-pars distalis-adenoma
B-pars intermedia: adenoma
M-pars distalis: carcinoma
N-metastatic/invasive neoplasm
Prostate
B-adenoma
M-adenocarcinoma
M-schwannoma
M-fibrosarcoma
N-metastatic/invasive neoplasm
Seminal Vesicles
M-carcinosarcoma
Skin (other)i
B-keratoacanthoma
B-squamous cell papilloma
B-benign basal cell tumor
B-benign trichoepithelioma
B-fibroma
B-lipoma
B-hemangioma
Water Control
M
0
F
Test Article: Bosutinib
Combined Vehicle
Controls
0
M
F
Low Dose
Mid Dose
High Dose
2.5
M
1.5
F
7.5
M
5
F
25/15b
M
15
F
60
60
120
120
60
60
60
60
60
60
3
2
0
1
2
0
7
7
2
2
6
0
1
5
0
1
3
1
1
5
0
2
0
0
0
4
0
0
2
0
0 (54)
0 (46)
1 (96)
0 (98)
0 (47)
0 (45)
0 (47)
0 (44)
0 (57)
0 (44)
30
1
0
0
47
0
2
0
63
2
2
1
82
2
5
1
31
0
0
0
47
2
2
1
41
2
0
0
49
0
2
0
33
1
0
1
45
1
2
1
0
0
1
0
0
NA
NA
NA
NA
NA
0
1
0
1
1
NA
NA
NA
NA
NA
0
0
0
0
0
NA
NA
NA
NA
NA
0
0
0
0
0
NA
NA
NA
NA
NA
1
0
0
0
1
NA
NA
NA
NA
NA
1
NA
0
NA
0
NA
1
NA
0
NA
3 [17]
0 [17]
0 [17]
1 [17]
4 [17]
0 [17]
0 [17]
1 [43]
0 [43]
0 [43]
0 [43]
6 [43]
1 [43]
0 [43]
16 [47]
4 [47]
1 [47]
0 [47]
4 [47]
5 [47]
0 [47]
0 [85]
0 [85]
0 [85]
0 [85]
2 [85]
0 [85]
0 [85]
0 [20]
1 [20]
0 [20]
0 [20]
9 [20]
1 [20]
0 [20]
0 [42]
1 [42]
0 [42]
0 [42]
1 [42]
2 [42]
0 [42]
4 [13]
0 [13]
0 [13]
0 [13]
3 [13]
0 [13]
1 [13]
0 [43]
0 [43]
0 [43]
0 [43]
5 [43]
2 [43]
0 [43]
2 [19]
3 [19]
0 [19]
0 [19]
0 [19]
0 [19]
0 [19]
1 [25]
0 [25]
0 [25]
0 [25]
1 [25]
0 [25]
0 [25]
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 68
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.25. Two Year Oral (Gavage) Carcinogenicity Study in Rats (Cont’d)
Treatment Group
Dosea (mg/kg/day)
Sex
Neoplastic Lesions - Incidental/Spontaneous
Number Examined
Skin (other)(continued)i
M-squamous cell carcinoma
M-fibrous histiocytoma
M-fibrosarcoma
M-liposarcoma
M-leiomyosarcoma
M-malignant schwannoma
M-hemangiosarcoma
N-metastatic/invasive neoplasm
Skin protocolj
B-keratoacanthoma
N-metastatic/invasive neoplasm
Spleen
M-hemangiosarcoma
N-metastatic/invasive neoplasm
Sternal Marrow
N-metastatic/invasive neoplasm
Stomach
N-metastatic/invasive neoplasm
Submandibular SGj
N-metastatic/invasive neoplasm
Testes
B-leydig cell adenoma
M-mesothelioma
N-metastatic/invasive neoplasm
Thymusj
B-benign thymoma
N-metastatic/invasive neoplasm
Water Control
M
0
F
Test Article: Bosutinib
Combined Vehicle
Controls
0
M
F
Low Dose
Mid Dose
High Dose
2.5
M
1.5
F
7.5
M
5
F
25/15b
M
15
F
60
60
120
120
60
60
60
60
60
60
1 [17]
0 [17]
0 [17]
0 [17]
0 [17]
2 [17]
0 [17]
1 [17]
0 [43]
0 [43]
1 [43]
0 [43]
0 [43]
1 [43]
0 [43]
0 [43]
2 [47]
1 [47]
4 [47]
1 [47]
1 [47]
0 [47]
0 [47]
1 [47]
0 [85]
1 [85]
3 [85]
0 [85]
0 [85]
2 [85]
0 [85]
0 [85]
1 [20]
0 [20]
3 [20]
0 [20]
0 [20]
1 [20]
0 [20]
0 [20]
0 [42]
0 [42]
1 [42]
1 [42]
0 [42]
0 [42]
1 [42]
0 [42]
1 [13]
0 [13]
0 [13]
0 [13]
0 [13]
1 [13]
0 [13]
0 [13]
0 [43]
2 [43]
0 [43]
0 [43]
0 [43]
0 [43]
0 [43]
0 [43]
0 [19]
1 [19]
0 [19]
1 [19]
0 [19]
2 [19]
0 [19]
0 [19]
1 [25]
2 [25]
1 [25]
0 [25]
0 [25]
0 [25]
0 [25]
0 [25]
0
0
0
0
0
1
0
0
0 (59)
0 (59)
0 (59)
0 (59)
1
0
0
0
0 (58)
0 (58)
0 (59)
0 (59)
0
4
0
1
0
3
0
1
1
0
0
1
0
0
1
0
0
1
0
0
1
0
2
1
0
1
0
0
1
0
0
0
1
0
0
0
0
0
0
0
0
0
1 (118)
1
0
0 (59)
0 (59)
0 (59)
0 (59)
0
5
1
0
NA
NA
NA
5
0
1
NA
NA
NA
2
0
0
NA
NA
NA
2
0
0
NA
NA
NA
1
0
0
NA
NA
NA
0
0
0
1
0
1
1
2
0
0
0
1
0 (59)
0 (59)
0
0
0
1
1
0
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 69
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.25. Two Year Oral (Gavage) Carcinogenicity Study in Rats (Cont’d)
Treatment Group
Dosea (mg/kg/day)
Sex
Neoplastic Lesions - Incidental/Spontaneous
Number Examined
Thyroidj
B-c-cell adenoma
B-follicular cell adenoma
M-c-cell carcinoma
M-follicular cell carcinoma
N-metastatic/invasive neoplasm
Trachea
N-metastatic/invasive neoplasm
Uretersi
N-metastatic/invasive neoplasm
Urinary Bladderj
B-transitional cell papilloma
B-granular cell tumor
Uterus w/ Cervix
B-hemangioma
B-granular cell tumor
B-endometrial stromal polyp
M-malignant schwannoma
N-metastatic/invasive neoplasm
Vaginaj
B-granular cell tumor
B- stromal polyp
M-squamous cell carcinoma
N-metastatic/invasive neoplasm
Vascular Tissue
C-hemangioma
C-hemangiosarcoma
Zymbal's Glandi
N-metastatic/invasive neoplasm
Water Control
M
0
F
Test Article: Bosutinib
Combined Vehicle
Controls
0
M
F
Low Dose
Mid Dose
High Dose
2.5
M
1.5
F
7.5
M
5
F
25/15b
M
15
F
60
60
120
120
60
60
60
60
60
60
5
2
0
1
0
4 (59)
0 (59)
1 (59)
0 (59)
0 (59)
10
5
0
2
1
8
0
3
2
0
4
2
0
0
0
5
2
0
0
0
4
2
0
2
0
4
1
1
1
0
2
3
1
3
1
1
1
0
0
0
0
0
1
0
0
1
0
0
1
0
NE
NE
0 [1]
NE
NE
NE
NE
NE
NE
1 [1]
0
0
0 (59)
0 (59)
1
1
0
0
0
0
0 (59)
0 (59)
0
1
0
0
0
0
1 (59)
0 (59)
NA
NA
NA
NA
NA
0
0
2
0
0
NA
NA
NA
NA
NA
1
1
4
2
0
NA
NA
NA
NA
NA
0
1
1
0
1
NA
NA
NA
NA
NA
0
0
1
0
0
NA
NA
NA
NA
NA
0
2
3
0
0
NA
NA
NA
NA
2
0
0
0
NA
NA
NA
NA
1 (119)
0 (119)
0 (119)
2 (119)
NA
NA
NA
NA
2 (59)
1 (59)
0 (59)
0 (59)
NA
NA
NA
NA
2
0
0
0
NA
NA
NA
NA
3
0
1
0
0
0
0
1
1
1
2
0
1
1
0
1
2
0
0
2
0
1
0
0
NE
NE
NE
1 [1]
NE
NE
NE
NE
NE
NE
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 70
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.25. Two Year Oral (Gavage) Carcinogenicity Study in Rats (Cont’d)
Treatment Group
Dosea (mg/kg/day)
Sex
Noteworthy Findings
Gross Pathology
Number Examined
Mesenteric lymph nodes
Water Control
M
0
F
Test Article: Bosutinib
Combined Vehicle
Controls
0
M
F
Low Dose
Mid Dose
High Dose
2.5
M
1.5
F
7.5
M
5
F
25/15b
M
15
F
60
60
120
120
60
60
60
60
60
60
0
0
0
0
0
0
4
1
14
8
60
60
120
120
60
60
60
60
60
60
Chronic progressive nephropathy
Tubular atrophy
47
0
26
0
62
1
28
2
43
0
12
1
55
0
18
2
46
6
27
7
Lobular Atrophy/fibrosis/inflammation:
exocrine pancreas
Prominent acinar cell apoptosis
7
0
5
0
6
0
5
0
9
0
0
0
12
0
5
0
19
4
16
0
Limiting ridge: Epithelial
hyperplasia/hyperkeratosis (slight)
Epithelial hyperplasia/hyperkeratosis
Erosions/ulceration
Inflammation/edema/hemorrhage
1
3
5
5
0
4
3
4
3
6
12
11
4
15
9
16
3
4
4
7
2
11
7
11
6
5
6
6
2
5
3
6
7
4
6
7
8
15
9
13
1
0
0
1
1
0
1
0
5
0
0 (58)
0 (59)
0 (116)
0
32
16 (59)
46 (58)
54
44 (58)
58
0 (57)
0 (59)
0 (119)
0 (119)
0
0 (56)
5 (58)
13
14 (58)
36
0 (58)
0 (57)
0 (118)
0
0
0 (59)
9 (58)
18 (58)
31 (57)
50
Discolored
Nonneoplastic Histopathology
Number Examined
Kidney
Pancreas
Forestomach
Stomach
Collagen deposition (slight)j
Duodenum
Collagen depositionj
Ileum
Collagen depositionj
Jejunum
Collagen depositionj
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 71
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.25. Two Year Oral (Gavage) Carcinogenicity Study in Rats (Cont’d)
Treatment Group
Dosea (mg/kg/day)
Sex
Nonneoplastic Histopathology
Number Examined
Small and Large Intestines
Erosions/ulceration/necrosis
Mucosal congestion/hemorrhage
Mesenteric lymph node
Lymphatic vessel proliferation/ectasia/fibrosis
Erythrocytosis/erythrophagocytosis
Brown pigment containing histiocytes
Increased plasma cells
Mandibular lymph node
Increased plasma cells
Water Control
M
0
F
Test Article: Bosutinib
Combined Vehicle
Controls
0
M
F
Low Dose
Mid Dose
High Dose
2.5
M
1.5
F
7.5
M
5
F
25/15b
M
15
F
60
60
120
120
60
60
60
60
60
60
0 (59)
0 (59)
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
1 (59)
1 (59)
2
0
8
9
4
1
1
5
0
4
1
7
0
5
4
5
0
4
0
8
0
4
7
9
1
3
0
7
0
3
4
20
5
4
4
28
7
1
6
41
27
9
0
36
22
4
33
32
67 (118)
71
27 (59)
35 (59)
35 (58)
37
44 (59)
52
* = p<0.05, *** = p<0.001 significantly different from vehicle control based on appropriate trend or pairwise comparison. A full description of the statistical decision tree can
be found in the final report for this study.
- = No noteworthy findings; B- = Benign; C- = Multi-centric; Diaph = Diaphragm; F = Female; Gl = Gland; GLP = Good Laboratory Practice; LN = Lymph node; Lymph/Retic
Sys = Lymphoreticular system; M = Male; M- = Malignant; N- = Metastatic; NA = Not applicable; NE = None examined; Pertio = Peritoneum; QD = daily; SC = Spinal cord;
SG = Salivary gland; Tib Jnt = Tibial Joint; Tiss = Tissue; w/ = with.
a
All dose levels are expressed as mg of active drug moiety per kg of body weight per day.
b
Dose level was decreased to 15 mg/kg/day at Week 78 due to decreased survivorship.
Group means are shown for water and vehicle controls. Percent differences from vehicle controls are shown for treated groups. Statistical significance is
based on actual data and not on the percent differences. The pre-dose body weight and food consumptions data (value recorded nearest to the start of the
study) was used as a covariate in the analyses and comparisons were performed on the adjusted means following the analysis of covariance.
d
First time point with ≥10% decrease in body weight in the 25/15 mg/kg/day group (males).
e
First time point with ≥10% decrease in body weight in the 15 mg/kg/day group (females).
c
f
Time point with maximum decrease in body weight in the 7.5 mg/kg/day group (males) and 5 mg/kg/day group (females).
Time point with maximum decrease in body weight in the 1.5 mg/kg/day group (females).
h
There were no test article-related neoplastic lesions.
i
Not a protocol required organ/tissue. Organs/Tissues were examined grossly; number in [ ] indicates number of organs/tissues examined microscopically.
j
Missing protocol-required organs/tissues in some groups; number in ( ) indicates number of organs/tissues examined microscopically.
k
Examined for unscheduled necropsy animals only.
g
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 72
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.26. Mean Pharmacokinetic Parameters for Bosutinib, M2 and M5 in Two Year Oral (Gavage) Carcinogenicity Study in Rats
Test Article: Bosutinib
Species/Strain: Rats/S-D
Initial Age: 7 weeks
Date of First Dose:
Duration of Dosing: 26 weeks
Report Number:
-2185
Method of Administration: Oral gavage, QD, 10 mL/kg Lot Number: MR090034
20
Vehicle/Formulation: 0.5% methylcellulose (4000 cps) GLP Compliance: Yes
(w/v), 2.0% polysorbate 80, NF (w/v), 0.06% glacial acetic
acid, NF (W/V), and distilled water/Suspension
Treatment of Controls: Vehicle
Basis for High-Dose Selection: Females: Based on the maximum tolerated dosage (MTD) from the chronic toxicity study.
Males: Selected for males due to the lower exposures observed in males when compared with females in the repeat-dose
toxicity studies.
Special Features: None.
Treatment Group
Dosea (mg/kg/day)
Sex
Number of Animals
Toxicokinetics
Died or Sacrificed Moribund
Toxicokinetics
Toxicokinetics:
Cmax (ng/mL)
Day 182
AUC(0-24) (ng•hr/mL)
Day 182
M5 Metabolite b,c:
Cmax (ng/mL)
Day 182
AUC(0-24) (ng•hr/mL)
Day 182
Vehicle Control
0
M
F
Low Dose
2.5
1.5
M
F
7.5
M
Mid Dose
5
F
High Dose
25
15
M
F
3
3
9
9
9
9
9
9
0
0
1
0
1
0
1
0
NAd
NAd
18.8
25.4
87.6
162
349
724
NAd
NAd
244
298
840
1902
5127
10570
NAd
NAd
2.62
ND
26.8
ND
103
28.1
NAd
NAd
9.44
ND
255
ND
1514
246
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 73
Bosutinib
Module 2.6.7 Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.26.
Mean Pharmacokinetic Parameters for Bosutinib , M2 and M5 in Two Year Oral (Gavage) Carcinogenicity Study in Rats (Cont’d)
Test Article: Bosutinib
Treatment Group
Dosea (mg/kg/day)
Sex
M2 Metabolitec,e:
Cmax (ng/mL)
Day 182
AUC(0-24) (ng•hr/mL)
Day 182
Vehicle Control
0
M
F
Low Dose
2.5
1.5
M
F
7.5
M
Mid Dose
NAd
NAd
ND
ND
6.50
ND
12.0
1.75
NAd
NAd
ND
ND
17.7
ND
175
3.50
5
F
High Dose
25
15
M
F
AUC(0-24) = Area under concentration-time curve from time 0 to 24 hours postdose; Cmax = Maximum (peak) observed drug concentration; F = Female; GLP = Good
Laboratory Practice; M = Male; ND = Not Determined (no quantifiable concentration); QD = daily.
a
All dose levels are expressed as mg of active drug moiety per kg of body weight per day.
b
M5 Metabolite = N-desmethyl bosutinib.
c
The M2 and M5 concentration-time profiles in most of the animals given bosutinib at 1.5, 2.5, and 5 mg/kg/day (both M2 and M5 concentration-time profiles) and 7.5 and 15
mg/kg/day (M2 concentration-time profiles) had less than 3 consecutive quantifiable postdose data points; therefore, the estimated pharmacokinetic parameters are reported for
information purposes only.
d
NA = Not applicable; samples were collected but not analyzed for plasma drug concentrations.
e
M2 Metabolite = oxydechlorinated bosutinib.
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 74
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.27. Reproductive and Developmental Toxicity Studies: Non-Pivotal Studies
Study Type
Report No.
Cross-Reference
Fertility and
Developmental
Dose-Ranging
RPT-61450
Test Article: Bosutinib
Species/
Strain
Rats/S-D
Route
Oral
(gavage)
Duration
of Dosing
M: 7.5 Weeksa
F: 5 to 6
Weeksa
Dosage
(mg/kg/day)
0b
10
30
100c
N/Gender/
Group
10
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 75
Noteworthy Findings
100 mg/kg/day Dosage Group
This dosage group was terminated prior to cohabitation
due to excessive toxicity in females. Males given
100 mg/kg/day for 17 days had decreased mean body
weight gain (-71%) and food consumption (up to -26%)
during the first week of dosing resulting in decreased
body weight (-10% compared with controls) by day 15.
All female animals given 100 mg/kg/day were electively
euthanized after 3 dosages due to bosutinib-related and
dose-limiting clinical observations (e.g., loose/decreased
feces, yellow fur discoloration, red pigment around
eyes/nose/mouth), body-weight loss (average loss of
11 g, compared with pretest values), and reduced food
consumption (37% less than controls). These findings
were indicative of maternal toxicity, which would be
expected to alter fertility and/or fetal development.
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.27 Reproductive and Developmental Toxicity Studies: Non-Pivotal Studies (Cont’d)
Study Type
Report No.
Cross-Reference
Species/
Strain
Route
Duration
of Dosing
Dosage
(mg/kg/day)
N/Gender/
Group
Test Article: Bosutinib
Noteworthy Findings
Paternal Effects
In the remaining male dosage groups, there were no
unscheduled deaths. Clinical observations were limited
to salivation in 2 of 10, 1 of 10, and 7 of 10 animals at 10,
30, and 100 mg/kg/day, respectively. Dosages of 10
and 30 mg/kg/day were well tolerated by the males, with
no bosutinib-related effects on body weight, food
consumption, or macroscopic postmortem examination.
All males mated. There were no effects on fertility.
Maternal Effects
In females administered 10 or 30 mg/kg/day, there were
no unscheduled deaths.
Clinical observations were fecal changes (3 of 10) and
salivation (6 of 10) females given 30 mg/kg/day.
There were no bosutinib-related effects on mean body
weight from precohabitation through early gestation.
During the last week of gestation (GD 13 to GD 20),
body-weight gain was decreased (-90%) at
30 mg/kg/day, compared with controls, reflective of
decreased gravid uterine weights due to decreased
number of viable fetuses (see below). There were no
bosutinib-related effects on body weight at
10 mg/kg/day.
There were no dose-limiting effects on food
consumption.
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 76
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.27 Reproductive and Developmental Toxicity Studies: Non-Pivotal Studies (Cont’d)
Study Type
Report No.
Cross-Reference
Species/
Strain
Route
Duration
of Dosing
Dosage
(mg/kg/day)
N/Gender/
Group
Test Article: Bosutinib
Noteworthy Findings
There were no bosutinib-related effects on the estrous
cycles or on mating of female rats administered either 10
or 30 mg/kg/day of bosutinib, compared with controls.
Gravid uterine weights were decreased at 10 and
30 mg/kg/day (25% and 84% lower than controls,
respectively) reflective of a reduction in the number of
viable fetuses, most notably at 30 mg/kg/day (see
below).
Cesarean Section and Fetal Data
Bosutinib elicited a dose-limiting decrease in numbers of
pregnant dams and numbers of viable fetuses per dam at
30 mg/kg/day. Only 3 dams given 30 mg/kg/day had
viable fetuses compared to 9 of 10 in the control and
10 mg/kg/day groups. The numbers of viable fetuses
per dam were decreased 25% and 90% at 10 and
30 mg/kg/day, respectively, compared with controls,
which was attributed to a decrease in numbers of
implantations (16.1, 14.1, and 13.2 at 0, 10, and
30 mg/kg/day, respectively) and an increased incidence
of early resorptions (0.67, 2.67, and 11.67 at 0, 10, and
30 mg/kg/day, respectively). The numbers of
implantations were decreased in all bosutinib-treated
groups despite a bosutinib-related increase (10% and
21% at 10 and 30 mg/kg/day, respectively) in numbers of
corpora lutea.
There were no effects on fetal gross or placental
morphologic (fetal body weight, sex distribution or
external) development.
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 77
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.27 Reproductive and Developmental Toxicity Studies: Non-Pivotal Studies (Cont’d)
Study Type
Report No.
Cross-Reference
Tolerability
RPT-61455
Species/
Strain
Rabbits/
NZW
Route
Oral
(gavage)
Duration
of Dosing
10 Days
7 Days
7 Days
7 Days
Dosage
(mg/kg/day)
0b
10
30
100
N/Gender/
Group
1M
2F
Test Article: Bosutinib
Noteworthy Findings
All animals given 100 mg/kg/day (1 male and 2 females)
were euthanized on day 2 due to bosutinib-related poor
clinical condition. Clinical observations included
decreased motor activity, fecal alterations (no feces,
decreased feces, soft-liquid feces, feces adhered to fur),
dyspnea, low carriage, mydriasis, bradypnea, cool to the
touch, ptosis, and/or pale appearance. The male and 1
female lost body weight (-22 g and -77 g, respectively)
and food consumption was decreased in all animals (0,
1, or 6 g consumed). Macroscopically, a dark elevated
focus in the duodenal mucosa, and/or discoloration of the
duodenum were observed in 1 male and 1 female.
In surviving animals (≤ 30 mg/kg/day), there were no
dose-limiting clinical observations or effects on body
weight or food consumption. Body-weight loss at
≥ 10 mg/kg/day (-10 to -44 g) and decreased food
consumption at 30 mg/kg/day (29 to 114 g consumed)
were not considered dose limiting because they were
sporadic, transient, of low magnitude, not associated
with clinical observations and/or did not affect the
overall health of the animals.
In conclusion, based on dose-limiting clinical
observations, body-weight loss, and decreased food
consumption that resulted in moribund condition at
100 mg/kg/day, this dosage was not tolerated. The next
lower dosage (30 mg/kg/day) was tolerated for 7 days.
Developmental
Dose-Ranging
RPT-62710
RPT-64285
Female
Rabbits/
NZW
Oral
(gavage)
GD 6 through
GD 19
0b
10
30
60
8F
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 78
Two (2) does in the 60 mg/kg/day group were euthanized
on GD 15 or GD 16 due to clinical signs, body weight
loss, and decreased food consumption. Macroscopic
examination showed distended cecum (with abnormal
content) and large intestine in 1 of these dams. Both
mortalities were attributed to bosutinib.
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.27 Reproductive and Developmental Toxicity Studies: Non-Pivotal Studies (Cont’d)
Study Type
Report No.
Cross-Reference
Species/
Strain
Route
Duration
of Dosing
Dosage
(mg/kg/day)
N/Gender/
Group
Test Article: Bosutinib
Noteworthy Findings
Clinical observations included increased incidence of red
pigment in urine and focal lesions at 60 mg/kg/day.
Body weight was decreased in the 2 pregnant does in the
60 mg/kg/day group at the end of the dosing (GD 20) and
non-dosing period (GD 29) by 9% to 10% compared
with controls, respectively. Mean body-weight gains
during dosing (GD 6 through GD 19) were decreased
12%, 24%, and 88%, and food consumption was
decreased 5%, 11%, and 42% in does given 10, 30, or
60 mg/kg/day, respectively. Food consumption was
similar to controls after the dosing period (GD 20
through GD 28). Effects on food consumption at
≥ 30 mg/kg/day resulted in an increased occurrence of
decreased feces.
Adjusted (for gravid uterine weight) mean body-weight
gains were -31, -83, -53, and -51 grams in does given 0,
10, 30, or 60 mg/kg/day, respectively.
Mean gravid uterine weights at 10, 30, or 60 mg/kg/day
were decreased 10%, 14%, and 43%, respectively,
resulting from decreased numbers of fetuses and
decreased fetal body weights (see below).
Postmortem findings in the uterus occurred at
60 mg/kg/day and were associated with pregnancy
interruption.
There were no effects of bosutinib on numbers of
implantations.
Of the 6 surviving does in the 60 mg/kg/day group, 2
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 79
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.27 Reproductive and Developmental Toxicity Studies: Non-Pivotal Studies (Cont’d)
Study Type
Report No.
Cross-Reference
Species/
Strain
Route
Duration
of Dosing
Dosage
(mg/kg/day)
N/Gender/
Group
Test Article: Bosutinib
Noteworthy Findings
were pregnant at cesarean section, and each litter
consisted of 6 viable fetuses (decreased 22% compared
with controls). The decreased numbers of viable fetuses
per litter were attributed to an increase in mean numbers
of early resorptions (2.5) compared with controls (0.14).
Three (3) does at 60 mg/kg/day displayed early
interruption of pregnancy (minute implantation sites
[scars]).
There were no effects on numbers of pregnancies or
viable fetuses at ≤ 30 mg/kg/day.
Mean fetal body weight was decreased at 30 and
60 mg/kg/day (-7% and -33%, respectively).
There were no remarkable alterations in fetal external
morphology.
The number of granular placentas was increased at
60 mg/kg/day.
Bosutinib was rapidly absorbed after oral administration
(Tmax of 2 hours). The exposure (AUC(0-24)) increased
with increasing dose in an approximately
dose-proportional manner.
In conclusion, bosutinib elicited dose-limiting
embryo-fetal (decreased numbers of pregnant females
and decreased numbers of fetuses per female) and
maternal (clinical signs and decreased body weight and
food consumption) toxicity at 60 mg/kg/day
(40293 ng•h/mL). At the remaining dosages (10 and
30 mg/kg/day), bosutinib elicited maternal toxicity, but
no embryo-fetal toxicity was observed.
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 80
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.27 Reproductive and Developmental Toxicity Studies: Non-Pivotal Studies (Cont’d)
Study Type
Report No.
Cross-Reference
Species/
Strain
Route
Duration
of Dosing
Dosage
(mg/kg/day)
N/Gender/
Group
Test Article: Bosutinib
Noteworthy Findings
M = Male; F = Female; AUC = Area under the concentration-versus-time curve; Cmax = Maximum concentration; GD = Gestation day; N = Number of animals; NZW = New
Zealand White; RPT = Report; S-D = Sprague-Dawley.
a
Males were dosed for 4 weeks prior to cohabitation, during the 2-week cohabitation period, and until evaluation of females at the end of the gestation period; females were
dosed 2 weeks prior to cohabitation through GD 20.
b
Vehicle control (2% polysorbate 80, 0.5% methylcellulose, 0.06% acetic acid in purified water).
c
Due to excessive toxicity observed in females administered 100 mg/kg/day, both the male and female groups at this dosage were euthanized prior to the cohabitation period.
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 81
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.28. Reproductive and Developmental Toxicity: Oral Fertility Study in Male and Female Rats
Design Similar to ICH S5A: Yes, Sections 4.1.1 and 4.3
Test Article: Bosutinib
Duration of Dosing: M: 7 weeks (4 weeks PM to GD 7).
F: 3 – 6 weeks (2 weeks PM to GD 7).
Day of Mating: Day 0
Report No.: RPT-63257
Species/Strain: Rats/S-D
Initial Age: M: 7 to 9 Weeks; F 10 to 12 Weeks
Date of First Dose: M:
20 ; F:
20
Method of Administration: Oral (gavage)
Special Features: None
Vehicle/Formulation: 2% Polysorbate 80, 0.5%
No-Observed-Adverse-Effect Level:
methylcellulose, 0.06% acetic acid, and purified water
F0 Males: 30 mg/kg/day for both general and reproductive toxicity
F0 Females: 10 and 3 mg/kg/day for general and reproductive toxicity, respectively
Dosage (mg/kg/day)
Treated F0 Males
No. Evaluated
No. Died or Sacrificed Moribund
Clinical Observations
Salivation
Red pigment around nose/mouth
Red pigment around eyes
Yellow discoloration, perineal pelage
Thin appearance
Fecal alterations
Feces adhered to fur
Positive skin tent
Necropsy Observations
Organ Weights
Macroscopic Pathology
Histopathology
GLP Study: Yes
---0 (Control)---
---------10---------
---------30---------
---------70---------
25
0
25
0
25
0
25
1
–
–
–
–
–
–
–
–
–
–
–
–
–
–
–
–
+
+
–
–
–
+
–
+
+
+
+
+a
+a
+
+a
+
–
–
–
–
–
–
–
–
–
–
–
–
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 82
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.28 Reproductive and Developmental Toxicity: Oral Fertility Study in Male and Female Rats (Cont’d)
Test Article: Bosutinib
Dosage (mg/kg/day)
Treated F0 Males
Premating Body Weight (%)b
Day 1
Day 29
Cohabitation Body Weight (%)b
Day 50
Body-Weight Gain (%)b
Day 1 to 28
Day 1 to 49
Premating Food Consumption (%)b
Premating Days 1 to 28
Mean Time to Mating (days)
Fertility Index (%)b
---0 (Control)---
---------10---------
---------30---------
Report No.: RPT-63257
---------70---------
296.60 g
451.04 g
-0.3%
-0.8%
+0.4%
-0.3%
0.0%
-6%
511.76 g
-1.2%
-1.9%
-12%
154.44 g
215.16 g
-2%
-2%
-2%
-5%
-19%**
-28%**
28.88 g/day
2.56
1.00
0%
2.72
0%
0%
2.76
0%
-8%**
2.56
-16%**
Dosage (mg/kg/day)
Treated F0 Females
No. Evaluated
No. Died or Sacrificed Moribund
Clinical Observations
Salivation
Yellow discoloration, perineal pelage
Necropsy Observations
Macroscopic Pathology
Mean Premating Body Weight Gain, days 1-14 (%)b
Mean Premating Food Consumption, days 1-14 (%)b
No. of Pregnant Females
Mean Gestation Weight Gain (%)b
Mean Gestation Food Consumptionb
GD 0 to 7
GD 8 to 11
Mean Gravid Uterus Weight (g)
---0 (Control)---
---------3---------
---------10---------
---------30---------
25
0
25
0
25
0
25
0
–
–
–
+
+
+
+
+
–
10.32 g
18.64 g/day
24
61.17 g
–
+20%
+3%
25
-1%
–
+61%**
+6%*
24
-3%
–
+69%**
+8%**
25
-16%**
22.19 g/day
24.66 g/day
7.38 g
-1%
0%
7.52 g
+2%
0%
7.63 g
-3%
-5%
5.76 g**
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 83
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.28 Reproductive and Developmental Toxicity: Oral Fertility Study in Male and Female Rats (Cont’d)
Test Article: Bosutinib
Report No.: RPT-63257
Dosage (mg/kg/day)
Treated F0 Females (cont’d)
Number Evaluated (GD 12)
Total Resorptions
Mean No. Corpora Lutea
Mean % Pre-implantation Loss
Litters from Treated F0 Females (GD 12)
Total Number of Litters Evaluated
Mean No. Implantations
Mean No. Live Embryos
Mean No. Total Resorptions
Mean No. % Resorptions
Mean No. Resorbed or Dead
Mean No. % Resorbed or Dead
---0 (Control)---
---------3---------
---------10---------
---------30---------
24
0.63
16.67
9%
25
1.04
17.08
6%
24
2.29**
16.96
3%
25
11.00**
16.76
15%*
24
15.25
14.58
0.63
4
0.67
5
25
16.16
15.04
1.04
6
1.12
6
24
16.38
14.04
2.29**
14**
2.33**
14**
25
14.16
3.00**
11.00**
78**
11.16**
79**
* p ≤ 0.05, ** p ≤ 0.01 (statistical significance was determined by pairwise comparisons).
– No noteworthy finding; + Noteworthy finding present.
M = Male; F = Female; GD = Gestation day; GLP = Good Laboratory Practice; ICH = International Conference on Harmonisation; PM = Premating; RPT = Report; S-D =
Sprague-Dawley.
a
b
Seen only in animal that was electively euthanized on day 38.
For controls, group means are shown. For treated groups, percent differences from controls are shown. Statistical significance is based on actual data (not on the percent
differences).
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 84
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.29. Reproductive and Developmental Toxicity: Effects on Embryo-Fetal Development: Oral Developmental Toxicity Study in Rats
Design Similar to ICH S5A: Yes, 4.1.3.
Species/Strain: Rats/S-D
Initial Age: 9 to 11 Weeks
Date of First Dose:
20
Special Features: None
No-Observed-Adverse-Effect Level:
F0 Females: 10 mg/kg/day
F1 Litters: 10 mg/kg/day
Dosage (mg/kg/day)
Number of Females
Toxicokinetics (RPT-64286)
Number of Additional Females
Gestation Day 15 AUC(0-24) (ng•h/mL)
Treated F0 Dams
Number Mated
Number Pregnant
Number Died or Sacrificed Moribund
Number Aborted or with Total Resorption
Clinical Observations
Necropsy Observations
Body Weight (%)a
GD 6
GD 17
GD 21
Body-Weight Gain (%)a
GD 6 to 17
GD 6 to 20
Food Consumption (%)a
GD 6 to 17
Duration of Dosing: GD 6 through GD 17 (12 days)
Day of Mating: GD 0
Day of C-Section: GD 21
Method of Administration: Oral (gavage)
Vehicle/Formulation: 2% Polysorbate 80, 0.5% methylcellulose,
0.06% acetic acid, and purified water
Test Article: Bosutinib
Report No.: RPT-63107
GLP Study: Yes
------0 (Control)----25
-----------1--------25
----------3---------25
----------10---------25
0
NA
9
204 ± 42
9
857 ± 87
9
4463 ± 227
25
25
0
0
–
–
25
24
0
0
–
–
25
25
0
0
–
–
25
24
0
0
–
–
246.44 g
326.92 g
366.80 g
-1%
0%
0%
-1%
0%
0%
-1%
-1%
-2%
93.88 g
120.36 g
+4%
+2%
+4%
+1%
0%
-3%
25.41 g/day
0%
-1%
-2%
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 85
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.29
(Cont’d)
Reproductive and Developmental Toxicity: Effects on Embryo-Fetal Development: Oral Developmental Toxicity Study in Rats
Test Article: Bosutinib
Report No.: RPT-63107
Dosage (mg/kg/day)
Treated F0 Dams (cont’d)
Uterine Findings
Number Examined
Mean Number Corpora Lutea
Mean Number Implantations
Mean % Preimplantation Loss
Mean Gravid Uterine Weight (g)
Litters from Treated F0 Females
Number Litters Evaluated
Mean Number Live Fetuses
Mean Number Resorptions
Mean Number Early Resorptions
Mean Number Late Resorptions
Mean Number of Dead Fetuses
Mean % Postimplantation Loss
Mean Fetal Weight (g)
Males
Females
Fetal Sex Ratio (% males)
Fetal Anomalies
Gross External
Number Litters/Fetuses Examined
Noteworthy Findings
------0 (Control)------
-----------1---------
----------3----------
----------10----------
25
14.16
13.00
9%
87.84
24
14.29
13.13
7%
87.29
25
14.52
13.68
5%
92.56
24
14.75
13.54
7%
91.58
25
12.32
24
12.17
25
12.96
24
12.96
0.68
0.00
0.00
6%
0.96
0.00
0.00
7%
0.72
0.00
0.00
5%
0.58
0.00
0.00
4%
5.46
5.21
50%
5.49
5.16
54%
5.54
5.23
51%
5.44
5.11
52%
25/308
–
24/292
–
25/324
–
24/311
–
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 86
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.29
(Cont’d)
Reproductive and Developmental Toxicity: Effects on Embryo-Fetal Development: Oral Developmental Toxicity Study in Rats
Test Article: Bosutinib
Report No.: RPT-63107
Dosage (mg/kg/day)
Litters from Treated F0 Females (cont’d)
Visceral
Number Litter/Fetuses Examined
Dilated renal pelvis
Skeletal
Number Litter/Fetuses Examined
Reduced ossification
Frontal
Interparietal
Parietal
------0 (Control)------
-----------1---------
----------3----------
----------10----------
25/154
0
24/145
0
25/160
1/1
24/156
5**/5**
25/154
24/147
25/164
24/155
0
0
0
0
0
1/1
0
0
1/1
2*/2*
2*/2*
3*/3*
– No noteworthy finding; + Noteworthy finding present.
*p < 0.01, **p < 0.05; Nonparametric one way analysis of variance
AUC = Area under the concentration-versus-time curve; F0 = Parental; F1 = First filial; GD = Gestation day; GLP = Good Laboratory Practice; ICH = International Conference on
Harmonisation; NA = Not applicable; RPT = Report; S-D = Sprague-Dawley.
a
For controls, group means are shown. For treated groups, percent differences from controls are shown. Statistical significance is based on actual data (not on the percent
differences).
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 87
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.30. Reproductive and Developmental Toxicity: Effects on Embryo-Fetal Development: Oral Developmental Toxicity Study in Rabbits
Test Article: Bosutinib
Design Similar to ICH S5A: Yes
Species/Strain: Rabbits/NZW
Initial Age: 5.5 Months
Date of First Dose:
20
Special Features: None
No-Observed-Adverse-Effect Level:
F0 Females: 10 mg/kg/day
F1 Litters: 10 mg/kg/day
Dosage (mg/kg/day)
Number of Females
Toxicokinetics (RPT-66820)
Gestation Day 15 AUC(0-24) (ng•h/mL)
Treated F0 Dams/Does
Number Mated
Number Pregnant
Number Died or Sacrificed Moribund
Number Aborted
Clinical Observations
Fecal alterations
No feces
Loose
Decreased
Red pigment in feces
Feces adhered to fur
Duration of Dosing: GD 6 through GD 19
Day of Mating: Day 0
Day of C-Section: GD 29
Method of Administration: Oral (gavage)
Vehicle/Formulation: 2% Polysorbate 80, 0.5% methylcellulose,
0.06% acetic acid, and purified water
Report No.: RPT-65533
GLP Study: Yes
------0 (Control)-----20
-----------3--------20
----------10---------20
----------30---------20
NA
1308 ± 282
5451 ± 1074
14002 ±1344
20
19
0
0
20
18
1a
0
20
18
0
0
20
18
0
0
0
4
1
0
0
0
6
0
0
0
0
3
1
1
0
1
7
1
1
1
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 88
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.30 Reproductive and Developmental Toxicity: Effects on Embryo-Fetal Development: Oral Developmental Toxicity Study in Rabbits
(Cont’d)
Test Article: Bosutinib
Report No.: RPT-65533
Dosage (mg/kg/day)
Treated F0 Dams/Does (cont’d)
Necropsy Observations
Urinary bladder
Distended with calculus
Uterus
Red clotted material or dark red fluid
Body Weight (%)b
GD 6
GD 19
GD 29
Body-Weight Gain (%)b
GD 6 to 19
GD 6 to 28
GD 20 to 28
Body Wt. Gain Adjusted for Gravid Uterine Wt.
Food Consumption (%)b
GD 6 to 19
GD 20 to 28
Uterine Findings
Number Examined
Mean Number Corpora Lutea
Mean Number Implantations
Mean % Preimplantation Loss
Mean Gravid Uterine Weight (g)
Litters from Treated F0 Females
Number Litters Evaluated
Mean Number Live Fetuses
------0 (Control)------
-----------3---------
----------10----------
----------30----------
0
0
0
1
0
0
2
0
3352.89 g
3636.79 g
3839.84 g
0%
0%
-1%
-1%
0%
+1%
-1%
-2%
-3%
304.26 g
486.95 g
182.68 g
-13.53 g
-7%
-7%
-8%
-11.06 g
+9%
+11%
+15%
+52.56 g
-10%
-14%
-21%
-39.28 g
163.08 g/day
138.58 g/day
-3%
-3%
0%
+1%
-8%
-8%
19
9.00
8.42
7%
500.47
18
8.67
7.67
11%
461.50
18
9.56
9.00
6%
487.44
18
9.33
8.50
10%
458.06
19
8.21
18
7.50
18
7.89
18
8.06
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 89
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.30 Reproductive and Developmental Toxicity: Effects on Embryo-Fetal Development: Oral Developmental Toxicity Study in Rabbits
(Cont’d)
Test Article: Bosutinib
Report No.: RPT-65533
Dosage (mg/kg/day)
Litters from Treated F0 Females (cont’d)
Mean Number Resorptions
Mean Number Early Resorptions
Mean Number Late Resorptions
Mean Number of Dead Fetuses
Mean % Postimplantation Loss
Mean Fetal Weight (g)
Males
Females
Fetal Sex Ratio (% males)
Fetal Anomalies
Gross External
Number Litter/Fetuses Examined
Noteworthy Findings
Visceral
Number Litter/Fetuses Examined
Gallbladder absent
Cardiomegaly
Enlarged liver
Hydrocephaly
Skeletal
Number Litter/Fetuses Examined
Fused sternebrae
------0 (Control)------
-----------3---------
----------10----------
----------30----------
0.05
0.11
0.05
3%
0.17
0.00
0.00
2%
0.83**
0.28
0.00
13%**
0.22
0.22
0.00
6%
42.46
41.71
50%
43.37
41.96
52%
43.85
42.31
55%
39.42
39.37
50%
19/157
–
18/135
–
18/142
–
18/145
–
19/157
0
0
0
0
18/135
0
0
0
0
18/142
0
0
0
0
18/145
2/4
1/1
1/1
1/1
19/157
0
18/135
1/1
18/142
2/2
18/145
4/7
** p ≤ 0.01 (statistical significance was determined by pairwise comparisons).
– No noteworthy finding; + Noteworthy finding present.
AUC = Area under the concentration-versus-time curve; F0 = Parental; F1 = First filial; GD = Gestation day; GLP = Good Laboratory Practice;
ICH = International Conference on Harmonisation; NA = Not applicable; NZW = New Zealand White; RPT = Report.
a
b
Electively euthanized on day 11 of dosing as a result of gavage trauma.
For controls, group means are shown. For treated groups, percent differences from controls are shown. Statistical significance is based on actual data (not on the percent
differences).
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 90
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.31. Mean ± SE Pharmacokinetic Parameters for Bosutinib in an Oral Developmental Toxicity Dose-Ranging Study in Female Rabbits
Test Article: Bosutinib
Species/Strain: Gravid rabbits/NZW
No. and Gender (M/F): 8 F/group at 10 and 30 mg/kg/day; 7 F at 60 mg/kg/day
Feeding Condition: Fed
Method of Administration: Oral (gavage)
Vehicle/Formulation: 2% Polysorbate 80, 0.5% methylcellulose, 0.06% acetic acid, and purified water
Cmax (ng/mL)
Dosage
Tmax
Day
(mg/kg/day)
Total
Unbounda
(h)
GD15 (Day 10)
10
706 ± 41
20 ± 1.1
2.0
Report No.: RPT-64285
Matrix: Plasma
Analyte: Bosutinib
Assay: LC/MS/MS
AUC(0-24) (ng•h/mL)
Total
Unbounda
6235 ± 493
175 ± 14
30
2325 ± 161
65 ± 4.5
2.0
20750 ± 485
581 ± 14
60
3389 ± 892
95 ± 25
2.0
40293 ± 287
1128 ± 8.0
Note: The in-life portion of this study is described in RPT-62710.
F = Female; AUC = Area under the concentration-versus-time curve; Cmax = Maximum concentration; GD = Gestation day; LC/MS/MS = Liquid chromatography/tandem mass
spectrometry; NZW = New Zealand white; RPT = Report; SE = Standard error; Tmax = Time to reach maximum concentration.
a
Cmax or AUC (total) × 0.028 (mean fraction unbound; RPT-54418) = Cmax or AUC unbound.
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 91
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.32. Mean ± SE Pharmacokinetic Parameters for Bosutinib in an Oral Developmental Toxicity Study in Female Rats
Test Article: Bosutinib
Species: Gravid rats/S-D
No. and Gender (M/F): 9 F/Group at 1, 3, and 10 mg/kg/day
Feeding Condition: Fed
Method of Administration: Oral (gavage)
Vehicle/Formulation: 2% Polysorbate 80, 0.5% methylcellulose, 0.06% acetic acid, and purified water
Cmax (ng/mL)
Dosage
Tmax
Day
(mg/kg/day)
Total
Unbounda
(h)
GD15 (Day 10)
1
17.3 ± 5.1
1.1 ± 0.3
7.0
Report No.: RPT-64286
Matrix: Plasma
Analyte: Bosutinib
Assay: LC/MS/MS
AUC(0-24) (ng•h/mL)
Total
Unbounda
204 ± 42
12 ± 2.6
3
70.4 ± 12.8
4.3 ± 0.8
7.0
857 ± 87
52 ± 5.3
10
377 ± 33
23 ± 2.0
7.0
4463 ± 227
272 ± 14
Note: The in-life portion of this study is described in RPT-63107.
F = Female; AUC = Area under the concentration-versus-time curve; Cmax = Maximum concentration; GD = Gestation day; LC/MS/MS = Liquid chromatography/tandem mass
spectrometry; RPT = Report; S-D = Sprague Dawley; SE = Standard error; Tmax = Time to reach maximum concentration.
a
Cmax or AUC (total) × 0.061 (mean fraction unbound; RPT-54418) = Cmax or AUC unbound.
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 92
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.33. Mean ± SE Pharmacokinetic Parameters for Bosutinib in an Oral Developmental Toxicity Study in Female Rabbits
Test Article: Bosutinib
Species: Gravid rabbits/NZW
No. and Gender (M/F): 8 F/group at 3, 10, and 30 mg/kg/day
Feeding Condition: Fed
Method of Administration: Oral (gavage)
Vehicle/Formulation: 2% Polysorbate 80, 0.5% methylcellulose, 0.06% acetic acid, and purified water
Cmax (ng/mL)
Dosage
Tmax
Day
(mg/kg/day)
Total
Unbounda
(h)
GD15 (Day 10)
3
129 ± 22
3.6 ± 0.6
4.0
Report No.: RPT-66820
Matrix: Plasma
Analyte: Bosutinib
Assay: LC/MS/MS
AUC(0-24) (ng•h/mL)
Total
Unbounda
1308 ± 282
37 ± 7.9
10
505 ± 98
14 ± 2.7
2.0
5451 ± 1074
153 ± 30
30
1857 ± 155
52 ± 4.3
2.0
14002 ± 1344
392 ± 38
Note: The in-life portion of this study is described in RPT-65533.
F = Female; AUC = Area under the concentration-versus-time curve; Cmax = Maximum concentration; GD = Gestation day; LC/MS/MS = Liquid chromatography/tandem mass
spectrometry; NZW = New Zealand White; RPT = Report; SE = Standard error; Tmax = Time to reach maximum concentration.
a
Cmax or AUC (total) × 0.028 (mean fraction unbound; RPT-54418) = Cmax or AUC unbound.
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 93
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.34. Other Toxicity Studies
Study Type
Metabolite
Species/
Strain
Rats/S-D
Route
Oral
Gavage
Duration
of Dosing
14 Days
Dosage
(mg/kg/day)
0, 70, 210
N/Gender/
Group
8M, 8F
Test Article: Oxydechlorinated Bosutinib (M2)
Metabolite,
In Vitro
Bacterial
Reverse
Mutation
Assay with M2
(oxydechlorina
ted metabolite
of bosutinib)
S.
typhimurium
(TA 98,
TA100,
TA1535,
TA1537)
E. coli
(WP2 uvrA)
NA
NA
-S9 and +S9:
50, 150, 500,
1500, 3000
(TA100 +S9),
and
5000 g/plate
(initial and
confirmatory)
NA
Noteworthy Findings
There were no M2 (oxydechlorinated
metabolite of bosutinib) related effects in the
study. The NOAEL was 210 mg/kg/day with
associated male and female Cmax and
AUC(0-24) of 93.8 and 120 and 929 and 1488
ng•h/mL, respectively.
Negative
Metabolite In
Vitro
Chromosome
Aberration
Assay with M2
(oxydechlorina
ted metabolite
of bosutinib)
Human
peripheral
blood
lymphocytes
NA
NA
-S9: 10, 15,
25, 50a, 75a,
100a, 125a, and
150a g/mL
(4 hours)
5, 10, 15, 25a,
35a, and
a
50 g/mL (20
hours)
+S9: 5, 10, 15,
25a, 35a, 50a,
60a, and
a
75 g/mL (4
hours)
NA
Negative
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 94
Report No.
RPT-74244
RPT-73087
RPT-73086
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.34. Other Toxicity Studies (Cont’d)
Phototoxicity
Rats/Long
Evans
Oral
Gavage
Test Article: Bosutinib
2 Days
QD
0, 10, 100
5M, 5F
No phototoxicity was observed. Based on the
absence of skin reactions, ophthalmologic and
histopathologic findings, the
no-observed-effect level was 100 mg/kg/day
(600 mg/m2).
M = Male; F= Female; NA = Not Applicable; QD = Once daily; RPT = Report; S-D = Sprague-Dawley.
a
These concentrations were not evaluated microscopically.
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 95
RPT-74360
Bosutinib
Module 2.6.7. Toxicology Tabulated Summary
2.6.7.35. Mean ± SE Pharmacokinetic Parameters for Oxydechlorinated Bosutinib (M2) in Rats in a 2-Week Oral (Gavage) Toxicity Study
Test Article: Oxydechlorinated Bosutinib (M2)
Species/Strain: Rats/S-D
No. and Gender (M/F): 9/gender/group at 70 and 210 mg/kg/day
Feeding Condition: Fed
Method of Administration: Oral (gavage)
Vehicle/Formulation: 2% Polysorbate 80, 0.5% methylcellulose, and purified water
Day
M2 Dosage
(mg/kg/day)
8
Report No.: RPT-74244
Matrix: Plasma
Analyte: Oxydechlorinated Bosutinib (M2)a
Assay: LC/MS/MS
Gender
Cmax
(ng/mL)
Tmax
(h)
AUC(0-24)
(ng•h/mL)
AUC/Dose
70
M
F
37 ± 10
110 ± 65
2.0
1.0
354 ± 60
631 ± 346
5.0 ± 0.9
9.0 ± 4.9
210
M
F
94 ± 20
120 ± 19
1.0
1.0
929 ± 98
1488 ± 657
4.4 ± 0.5
7.1 ± 3.1
AUC = Area under the concentration-versus-time curve; Cmax = Maximum concentration; LC/MS/MS = Liquid chromatography/tandem mass spectrometry; RPT = Report; S-D
= Sprague-Dawley; SE = Standard error; Tmax = Time to reach maximum concentration.
a
Oxydechlorinated bosutinib [M2] = WAY-198760 and PF-05898965.
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 96

透析情報管理システムの カスタマイズと業務効率について

女性の活躍を応援するイベント「さかえgirls day 2016」を今年も開催

英連邦戦死者墓地から 平和を考える

とき…3 月20日（金） おひさまルーム

創薬研究の取り組み（pdf 1.7MB）

自分のお医者さんとの良いコミュニケート の仕方

体外受精のスケジュール（アンタゴニスト）

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