□ 2 穴チェック □危険ライン □ロゴチェック 6 フナコシニュース 2010 年 4 月 15 日号 ● http://www.funakoshi.co.jp/ トランスフェクション試薬特集 siRNA のトランスフェクション遺伝子工学核酸／タンパク質導入試薬炭酸アパタイトナノ粒子による遺伝子導入遺伝子機能解析アパキャリー 1 siRNA 炭酸アパタイトナノ粒子を用いて細胞内へ目的遺伝子を効率良く導入し，同時にタンパク質発現効率も向上させることができる試薬です。アパタイトナノ粒子 - DNA コンプレックス形成新世代の siRNA トランスフェクション試薬 INTERFERin 少量の siRNA（1 nM）でも高効率で，様々な細胞での遺伝子発現抑制が可能な，新世代のトランスフェクション試薬です。目的タンパク質生産 DNA 含有炭酸アパタイトナノ粒子翻訳ナノ粒子崩壊による DNA のエンドソームからの速やかな離脱細胞核核内移行特長 ◆ 接着細胞株，初代培養細胞では 90％以上，浮遊細胞株でも 80％の遺伝子発現抑制が可能です（下表参照）。ナノサイズによる効率的な貪食の発生 ◆ 使用する siRNA の量が少なくて済むため，細胞毒性やオフターゲッエンドソームの形成と pH 低下によるナノ粒子の崩壊ト効果が低くなっています。 ◆ 本製品 1 ml で 24 ウェルプレート 500 ∼ 1,000 回のトランスフェクションが可能です。操作も非常に簡便です。細胞質 INTERFERin で導入実績のある細胞アパキャリー 1 による効率的遺伝子発現機構いくつかの標的遺伝子に対する siRNA（1 nM または 5 nM）を様々な細胞に導入し， mRNA レベルで抑制効率を測定した。多くの細胞で高い抑制効果が見られた。特長 ◆ 炭酸アパタイトとは，水酸化アパタイト Ca10(PO4)6(OH)2 を構成する陰イオンの一部を CO32 −で置換し，結晶性を下げたものです。炭酸アパタイトナノ粒子の生成時，水酸化アパタイトよりも結晶成長が遅いため，細胞が取り込みやすいナノサイズでの調製が容易です。 ◆ アパキャリー 1 は，酸性溶液中において容易に溶解するため，エンドソーム中で目的遺伝子との複合体が速やかに分解し，目的遺伝子を効率良く細胞質中に放出します。このため，遺伝子の発現効率を向上させることができます。 ◆ アパキャリー 1・タンパク質の複合体も調製でき，タンパク質を変性・分解させずに細胞質に導入することもできます。・ ◆ Fibronectin（Integrin を介する）・E-Cad Fc（E-cadherin と結合）アパキャリー 1 の複合体による，細胞表面レセプターを介した遺伝子導入の実績もあり，タンパク質との修飾・複合化により導入細胞に特異性を付与することも可能です。 NIH3T3 アパキャリー 1 アパキャリー 1 リン酸カルシウム沈澱法リン酸カルシウム沈澱法 A 社製品（脂質系）試薬ＦＡＸ０３５ - ６８４１ - ７７５ＴＥＬ０３５ - ６８４１ - ６２０ 108 109 107 Luciferase expression (RLU/mg of protein) 接着細胞 A549-GL3-Luc HeLa CaSki MCF7 MRC-5 NIH-3T3 RAW 264.7 SiHa SKOV-3 HEK-293 HepG2 初代培養細胞標的遺伝子（1 nM siRNA） Luciferase GAPDH, Lamin A/C GAPDH, Lamin A/C GAPDH, Lamin A/C GAPDH Vimentin Eg5 GAPDH, Lamin A/C GAPDH GAPDH GAPDH 標的遺伝子（1 nM siRNA） Human fibroblast Human hepatocyte 浮遊細胞 K562 THP-1 ＞ 95 % ＞ 80 % 60 ∼ 70 % 抑制効果 A 社製品（脂質系） 108 109 107 Luciferase expression (RLU/mg of protein) ＞ 90 % 抑制効果＞ 80 % A549-GL3Luc cells/24 wells INTERFERin 試薬 H 試薬 S 試薬 T 80 60 40 20 0 1 nM 100 pM 10 pM siRNA 濃度品名 100415s_P06_k_i.indd 6 ＞ 90 % GAPDH, Lamin A/C GAPDH 標的遺伝子（5 nM siRNA） GAPDH GAPDH 100 アパキャリー 1 の各種細胞に対するトランスフェクション効率メーカー商品コード抑制効果 MEF GAPDH （Murine embryonic fibroblast）発現抑制効果（％）お問い合わせ先初代肝細胞アパキャリー 1 CLG Celap1 導入試薬包装 / 価格（￥） 10×1 ml / 35,000 本製品および他社製品を使用して，GL3Luc を発現する A549 細胞に，GL3Luc に対する siRNA を血清存在下で導入し，48 時間後にルシフェラーゼ活性を測定した。品名メーカー商品コード INTERFERin 409-01 PPU 409-05 PPU 409-10 PPU 409-50 PPU 包装 / 価格（￥） 50-100 250-500 500-1,000 2,500-5,000 transfections transfections transfections transfections 8,000 0.1 ml / 0.5 ml / 29,000 1 ml / 47,000 5×1 ml / 184,000 2010/03/30 13:44:55