セクション索引 PCR リアルタイムPCRシステム ．．．．．．．．．．．．．．．．388 RealTime ready ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．448 リアルタイムPCRシステムの概要 ．．．．．．．．．．．．． 388 RealTime ready qPCRアッセイおよびパネル ．．．．．．． 448 LightCycler® 1536システム ．．．．．．．．．．．．．．390 RealTime readyカスタムパネル ．．．．．．．．．．．．．． 449 High Throughput - Redefined ．．．．．．．．．．．．．． 390 RealTime readyフォーカスパネル ．．．．．．．．．．．．． 452 ® LightCycler 1536システム - インスツルメント ．．．．．． 391 RealTime ready関連試薬 ．．．．．．．．．．．．．．．．． 457 LightCycler® 1536システム - ソフトウェア ．．．．．．．． 392 Universal ProbeLibrary 概要 ．．．．．．．．．．．．．．． 458 LightCycler® 1536システム - 消耗品 ．．．．．．．．．．． 393 Universal ProbeLibrary ．．．．．．．．．．．．．．．．． 459 LightCycler® 1536システム - キット ．．．．．．．．．．． 394 リアルタイムPCR関連試薬 ．．．．．．．．．．．．．．．． 470 LightCycler® 480システム ．．．．．．．．．．．．．．．396 PCR ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．473 LightCycler® 480システム概要 ．．．．．．．．．．．．．． 396 リアルタイムPCR用マスターミックス（他社機器用）．．．．． 473 LightCycler® 480システム - インスツルメント ．．．．．．． 397 PCR/RT-PCR ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．478 LightCycler® 480システム - ソフトウェア ．．．．．．．．． 399 選択ガイド．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． 478 ® LightCycler 480システム - 消耗品 ．．．．．．．．．．．． 401 2ステップRT-PCR用製品 ．．．．．．．．．．．．．．．．． 480 LightCycler® 480システム - 追加用製品 ．．．．．．．．．． 407 1ステップRT-PCR用製品 ．．．．．．．．．．．．．．．．． 491 LightCycler® 480システム - キットと試薬 ．．．．．．．．． 408 PCR用酵素 ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． 496 LightCycler® 96システム ．．．．．．．．．．．．．．．415 PCR用酵素とマスターミックス ．．．．．．．．．．．．．． 508 LightCycler® 96システム概要 ．．．．．．．．．．．．．． 415 PCR用のマスターミックスとキット ．．．．．．．．．．．． 509 LightCycler® 96システム - インスツルメント ．．．．．．． 416 スタンダードPCRの至適化 ．．．．．．．．．．．．．．．． 515 LightCycler® 96システム - 消耗品 ．．．．．．．．．．．． 417 その他の試薬．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． 519 LightCycler® Nano システム ．．．．．．．．．．．．．．419 PCRとRT-PCR反応用のプライマー ．．．．．．．．．．．． 519 PCR 5 5 ® LightCycler Nano システム概要 ．．．．．．．．．．．．． 419 LightCycler® Nano システム ．．．．．．．．．．．．．．． 420 LightCycler® Nano システム - キット ．．．．．．．．．．． 422 LightCycler® Nano システム - 消耗品 ．．．．．．．．．．． 424 LightCycler® カローセルタイプシステム ．．．．．．．．．426 LightCycler® カローセルタイプシステム概要 ．．．．．．．． 426 LightCycler® カローセルタイプシステム - インスツルメント ．． 427 LightCycler® カローセルタイプシステム - ソフトウェア ．．． 429 LightCycler® カローセルタイプシステム - 消耗品 ．．．．．． 431 LightCycler® カローセルタイプシステム - 追加用製品 ．．．． 432 LightCycler® カローセルタイプシステム PCRマスターミックスと試薬 ．．．．．．．．．．．．．．． 435 LightCycler® カローセルタイプシステム リファレンス遺伝子セット．．．．．．．．．．．．．．．．． 447 規制やライセンス、免責条項についてはオンラインテクニカルサポートを参照ください。 http://technical-support.roche.com/default.aspx 387 5 リアルタイムPCRシステム リアルタイムPCRシステムの概要 リアルタイムPCRアプリケーションでは、正確で再現性の高い実験結果を求められます。ロシュ・ダイアグノスティックスでは、最適化され た迅速なリアルタイムPCRのシステムのために、調和の取れたワークフローを提供します。 LightCycler® 1536 システム 次世代のハイスループットリアルタイムPCRを実現します。 ・1ラン（約50分）で1536のデータを取得します。 ・1536ウェルフォーマットでの柔軟なPCRのセットアップが可能で す。 ・均一な熱伝導とゆがみのない光学システムを採用しています。 ・ハイスループットワークフローに最適なシステムです。 リアルタイム PCR LightCycler® 1536 システムについてのより詳し い情報は、390ページを参照ください。 LightCycler® 480システム ・LightCycler®システムの迅速で正確な実験をハイスループットで行 うことが可能です。40∼ 60分程度でPCRを完了します。 ・最速の温度サイクリングスピードを発揮しながら、最も優れたウェ ル間の温度均一性を実現しています。 ・あらゆるフォーマット、蛍光色素、アプリケーションに対応するよ うデザインされているため、検出、定量、ジェノタイピングを一台 のリアルタイムPCRシステムで行うことが可能です。 ・実験目的の変更に簡単に適応させることが可能です。96または 384ウェルプレートを選択することが可能です。アプリケーション に応じたソフトウェアを選択することも可能です。 LightCycler® 480システムについてのより詳しい 情報は、396ページを参照ください。 LightCycler® Nano システム ・コンパクト・軽量でセットアップもとても簡単です。 PCR ・パーソナルユースを意識し、静粛性にこだわった人にやさしいシス テムです。 ・高品質な定量リアルタイムPCR、ジェノタイピング、HRMデータ を取得できます。 ・プリズムの採用により幅広い蛍光色素に対応しました。 ・Windows、MacOSで動く親しみやすいソフトウェア、USBメモ リを用いたスタンドアローンでの使用も可能です。 LightCycler® Nanoシステムについてのより詳しい 情報は、419ページを参照ください。 388 アプリケーション、プロトコール、製品、マニュアルについてのより詳しい情報は、 LightCycletスペシャルサイトwww.lightcycler.comを参照ください。 リアルタイムPCRシステム リアルタイムPCRシステムの概要 5 LightCycler® カローセルタイプシステム 実績のあるスタンダードなLightCycler® 2.0インスツルメント ・わずか45分以内でLightCycler® PCRはランおよび解析を完了する ことが可能です。 ・非常に精密なハードウェアと最適化されたソフトウェアにより、正 確で再現性の高い実験結果をもたらします。 ・これまでに非常に多数の文献に採用された実績のある、信頼性の高 いインスツルメントです。 Universal ProbeLibrary リアルタイム定量PCRアッセイが一晩で実施可能になります。 ・オンラインのアッセイ・デザイン・センターで、その場でリアルタ イム定量PCRアッセイのデザインをすることが可能です。 ・Universal ProbeLibraryセットを使用すれば、バリデート済みのプ ローブがすぐに利用可能です。 リアルタイム PCR LightCycler® カローセルタイプシステムについての より詳しい情報は、426ページを参照ください。 ・あらゆる転写産物の定量が可能です。 ・特異性の高い加水分解プローブがSYBR GreenⅠと同程度の単価で 利用可能です(セットを利用した場合)。 PCR Universal ProbeLibraryについてのより詳しい情報 は、458ページを参照ください。 389 アプリケーション、プロトコール、製品、マニュアルについてのより詳しい情報は、 LightCycletスペシャルサイトwww.lightcycler.comを参照ください。 5 LightCycler® 1536システム High Throughput - Redefined 1998 年以来、ロシュの LightCycler® は、リアルタ イム PCR に、最先端の革新的な技術を提供してきまし た。LightCycler® リアルタイム PCR システムは、主 要なアプリケーションである遺伝子発現と、遺伝子多 型 解 析 に お い て、 広 く 使 用 さ れ ま す。LightCycler® 1536 の発売により、ロシュ・ダイアグノスティック スは、1536 サンプルを 50 分以内で処理できるハイ スループットシステムを、リアルタイム PCR の新しい スタンダードとして、世界で初めてご提供します。 先進的な技術開発により、ハイスループットアプリケーションに対 する完全なソリューションがうまれました。LightCycler® 1536 シ ステムは、最新のパワフルなソフトウェアと、次世代の試薬を使用し たフレキシブルな 1536 ウェルプレートデザインを備えた革新的な機 器システムです。 LightCycler® 1536 システムで得られる利点： • 1 ランを 4 倍のスループットに増加 わずか 50 分以内に、1536 サンプルの高感度かつ正確なデータが 得られます。 • データあたりのコストを削減 リアルタイム PCR LightCycler® 1536 リアルタイム PCR システム - 従来のリアルタイム PCR の限界を超越しました • LightCycler® リアルタイム PCR 機器シリーズに革新的な製品が加 わり、小容量化とハイスループットにより、リアルタイム PCR に 新しい道が開かれました。 • 1536 サ ン プ ル を 一 度 に 処 理 す る こ と で、 既 存 の 96 ウ ェ ル や 384 ウェルフォーマットの、それぞれ、16 倍及び 4 倍のスループッ トに増加します。 • LightCycler® 1536 インスツルメントは、遺伝子発現解析と遺伝 子変異解析について、1 ランで 1536 サンプルの正確で、簡便なアッ セイが実施できるリアルタイム PCR の次世代のスタンダードです。 ® • LightCycler 1536 インスツルメントは、ロシュ・ダイアグノ スティックスの定評のある 96 及び 384 ウェルプレートフォー マットのリアルタイム PCR プラットフォームである LightCycler® 480 インスツルメントで採用された高性能のテクノロジーを継 承しています。ハイスループットのために最適化されたサーマル ブロックサイクラーと、光学システムのテクノロジーを活用し、 LightCycler® 1536 インスツルメントは、全ての LightCycler® • 信頼性の高いリアルタイム PCR データを生成します。 極めて小さな反応容量でも、高性能なリアルタイム PCR により、 従来の反応系と同等の結果が得られます。 • 既存のワークフローのスループットを拡充 すでに実績のある LightCycler® 480 システムをベースに、新たに デザインされたシステムにより、ハイスループット処理が簡便に実 施いただけます。 LightCycler® 1536 システム 391 ページを参照ください LightCycler® 1536 システム 392 ページを参照ください LightCycler® 1536 システム 393 ページを参照ください LightCycler® 1536 システム 394 ページを参照ください PCR シリーズで培われた感度、正確性、再現性をご提供します。 反応量は 0.5 ∼ 2.0 μL であり、わずかな試薬とサンプルのみで済 みます。 390 アプリケーション、プロトコール、製品、マニュアルについてのより詳しい情報は、 LightCyclet スペシャルサイト www.lightcycler.com を参照ください。 インスツルメント ソフトウェア ディスポーザブル キット LightCycler® 1536システム LightCycler® 1536システム - インスツルメント LightCycler® 1536 Instrument 高速かつハイスループットのプレートタイプリアルタイム PCR 機 器 利点 ■ 1 回の PCR で 50 分以内に 1,536 個のデータポイ ントを取得することができる初めてのプレートベース リアルタイム PCR 機器です。 ■ 小容量の 1536 ウェルプレートフォーマット（0.5 ∼ 2.0 μL）を使用することで、従来の 96 ／ 384 フォーマットで得られるデータと同等の質の高いデー タを取得することができます。 ■ サンプル使用量を削減することができ、データポイン トあたりのコストを少なくとも 50% 削減することが できます。 ■ プレートあたりのスループットは従来の 4 倍であり、 複数のプレートにわたるアッセイ間エラーを軽減させ ることができます。 ■ カスタマイズ可能なプレートベースのフォーマットを 使用することで柔軟な PCR レイアウトが可能になり ます。 ■ハイスループットのニーズのために最適化された LightCycler® 1536 ソフトウェアにより信頼性の高 製品番号 05 334 276 001 包装単位 １台 希望販売価格 ¥12,800,000 製品構成 1. 2. 3. 4. 5. 6. LightCycler® LightCycler® LightCycler® LightCycler® LightCycler® 制御用 PC 1536 リアルタイム PCR インスツルメント 1536 サーマルブロックサイクラー 1536 ソフトウェア 1536 インスツルメント オペレーターマニュアル Xenon ランプ（スペアパーツ） サイズ 重量 サンプル数（1 ラン） サンプル反応容器 W 57.4 cm × D 58.8 cm × H 49.7 cm 55.6 kg 1536 1536 マルチウェルプレート Thermaxis® テクノロジー（2 コンポーネン トデザイン） マルチウェルプレート 自動ワークフロートラッキングのためのバー コード標識 反応液量 0.5 ‒ 2.0 μL ラン時間 50 分以内 温度制御レンジ 37 ‒ 95℃ 加熱速度 4.8℃ /sec 冷却速度 2.5℃ /sec 温度制御 ペルチェ素子 /Therma-Base 方式 励起光源 キセノンランプ 検出器 冷却モノクロ CCD カメラ 励起波長（nm）: 465、533 フィルタ 検出波長（nm）: 510、580 付属品 制御用 PC、基本ソフトウェアなど リアルタイム PCR LightCycler® 1536 インスツルメント 5 いリアルタイム PCR データを得ることができます。 製品概要 LightCycler® 1536 インスツルメントは、リアルタイムでのオン ライン検出機能を有するプレートベースの高速サーマルブロックサイ PCR クラーです。この新しいハイスループットプラットホームは、高性能 の光学ユニットおよびブロックサイクラーテクノロジーを搭載した実 績のある LightCycler® 480 インスツルメントを基本として構築され ています。 LightCycler® 1536 光学ユニットは、ユニバーサルプローブライ LightCycler® 1536 インスツルメント仕様 ブラリー（UPL）プローブ、加水分解プローブ、インターカレター色 素を含むフォーマットをサポートすることで、FAM、VIC ／ Yellow 555、BrightGreen などを使用した単色・デュアルカラーアッセイ を円滑に行うことができます。ユニークなサーマルブロックサイクラー のデザインは、LightCycler® 1536 マルチウェルプレートとの組み 合わせで、極めて高いウェル間均一性、アッセイ間の再現性を達成し ます。 LightCycler® 1536 ソフトウェアは、リアルタイム PCR による データ（例：Cp、エンドポイント蛍光値）の作成をサポートし、デー タを精緻化するための新しい threshold 機能、データのソート・表示 のための強力なツールが搭載されています。このシステムは、自動ハ イスループット研究ワークフローのために設計されており、機器のソ フトウェアを使用することで、ネットワーク・LIMS 環境におけるデー タ管理を容易に行うことができます。次世代のリアルタイム PCR 向 けの専用試薬と組み合わせることで、システムは、ピペッティングエ ラーを確認できる新しいサーベイランス機能を提供します。 391 アプリケーション、プロトコール、製品、マニュアルについてのより詳しい情報は、 LightCyclet スペシャルサイト www.lightcycler.com を参照ください。 5 LightCycler® 1536システム LightCycler® 1536システム - ソフトウェア LightCycler® 1536 ソフトウェア、バージョン 1.1 LightCycler® 1536 Software, Version 1.0 ハイスループットリアルタイム PCR アプリケーション・データ管 理のための専用ソフトウェア アプリケーション 製品番号 06 569 382 001 包装単位 1 ソフトウェア 製品構成 1. 2. 3. 4. LightCycler® 1536 ソフトウェア LightCycler® インスツルメント オペレーターマニュアル プログラマーガイド Software Development Kit LightCycler® 1536 ソ フ ト ウ ェ ア バ ー ジ ョ ン 1.1 は、 LightCycler® 1536 インスツルメントを使用したリアルタイム PCR リアルタイム PCR 実験のプログラミング、実行、解析に必要な機能を提供します。 利点 ■ ハイスループット研究のために開発されたソフトウェ アの使用により効率を改善できます。 ■ 高速データトラッキング用のユーザーフレンドリーな データスクリーニング機能の使用により 1,536 個の PCR データを解析することができます。 ■ 新しい threshold 機能により、データ解析をニーズに 合わせて精緻化することができます。 ■ LightCycler® 1536 ソフトウェアの新しいサーベイ ランス機能とリアルタイムレディ試薬との組み合わ せにより自動化された PCR セットアップにおけるエ ラートラッキング管理を改善することができます。 製品概要 LightCycler® 1536 ソフトウェアを使用することで、基本となる PCR のデータ（例：Cp、エンドポイント蛍光値）を作成することが できます。本ソフトウェアの新しい threshold 機能と、データのソー ト・表示のための強力なツール（例：ヒートマッププロット）を使用 PCR することでデータを容易に精緻化することができます。リアルタイム レディ試薬と組み合わせることで、ソフトウェアは、ピペッティン グエラーを確認できるユニークなサーベイランス機能を提供します。 LightCycler® 1536 ソフトウェアは、自動ハイスループット研究ワー クフローのために開発されており、ネットワーク・LIMS 環境でのデー タ管理をサポートします。 392 アプリケーション、プロトコール、製品、マニュアルについてのより詳しい情報は、 LightCyclet スペシャルサイト www.lightcycler.com を参照ください。 希望販売価格 ¥670,000 LightCycler® 1536システム LightCycler® 1536システム - 消耗品 LightCycler® 1536 マルチウェルプレート LightCycler® 1536 Multiwell Plate LightCycler® 1536 インスツルメント用に設計された高性能な反 応容器 製品番号 05 358 639 001 包装単位 10 × 10 プレート 5 希望販売価格 ¥600,000 製品構成 再開閉可能なシールつきの袋 10 個に、10 プレートずつ包装 アプリケーション LightCycler® 1536 マ ル チ ウ ェ ル プ レ ー ト は、LightCycler® 1536 インスツルメントを使用した小容量のサンプルのリアルタイム 利点 ■ 反応試薬の小容量化により、コストを 50% 以上削減 することができます。 ■ プレートあたりのサンプル数は従来の 4 倍（384 ウェ ルプレートとの比較）であり、複数のプレートにわた るアッセイ間エラーが軽減されます。 ■ カスタマイズ可能なプレートベースのフォーマットを 使用することで柔軟な PCR レイアウトが可能です。 リアルタイム PCR PCR 解析に使用されます。 製品概要 LightCycler® 1536 マルチウェルプレートは、Thermaxis® テク ノロジーを採用しており、LightCycler® 1536 インスツルメント用 にデザインされています。 Thermaxis® テクノロジーは、2 つのカスタムブレンドポリマーの 複合層から構成されており、優れた温度の正確性、速度、均一性が得 られます。熱伝導性の下側の層は、ブロックによる液体の正確な温度 制御のために、LightCycler® 1536 サーマルブロックサイクラーの プレートマウントのユニークな V 字型の溝にフィットするように精密 に加工されています。上側の断熱層は、安定かつ均一な温度制御のた たヒートリッドの熱から隔離します。 PCR めに、反応溶液を、反応中にプレート上部とシールを抑える加熱され 393 アプリケーション、プロトコール、製品、マニュアルについてのより詳しい情報は、 LightCyclet スペシャルサイト www.lightcycler.com を参照ください。 5 LightCycler® 1536システム LightCycler® 1536システム - キット LightCycler® 1536 DNA Green マスター 製品番号 05 573 092 001 LightCycler® 1536 DNA Green Master LightCycler® 1536 システムを使用してリアルタイムPCRを行う ためのHot Startタイプの使いやすい反応試薬 LightCycler 1536 DNA Green Master は、LightCycler 希望販売価格 ¥99,000 製品構成 アプリケーション ® 包装単位 1 キット （12,500 回× 2 µl 反応） ® 1536 インスツルメントで適切な遺伝子特異的なプライマーを用いた リアルタイム PCR に使用されます。 1. 2. 3. 4. LightCycler® 1536 DNA Green マスター、Master Mix（5 ×濃度） LightCycler® 1536 DNA Green マスター 、Setup Control（20 ×濃度） Water、PCR-grade LightCycler® 1536 DNA Green マスター、BrightGreen Dye（20 ×濃度） 品 質 リアルタイム PCR 利点 ■ ハイスループットの自動化用にデザインされたリアル タイム PCR 試薬キットを使用して、正確かつ高感度 な結果を得ることができます。 ■ 自動化された PCR ワークフローにおける、自動エラー トラッキングによるユニークなサーベイランス機能を 利用することができます。 ■ Fast PCR プロトコール用に開発された簡便な ready ‒ to-use のホットスタート試薬により、時間を節約で きます。 LightCycler® 1536 DNA Green Master は、LightCycler® 1536 システムを使用して機能試験されます。 製品概要 LightCycler® 1536 DNA Green Master は、LightCycler® 1536 インスツルメント（反応容量 : 0.5 ‒ 2 µl）を用いた少容量 の 2 ステップリアルタイム定量 PCR や定性 DNA 検出に最適な Hot Start タイプの使いやすい反応試薬です。 The LightCycler® 1536 DNA Green Master を使用すれば、マ スターミックスの適切なピペッティングの検証（Master Control）と、 核酸サンプル、プライマーなどの選択可能なコンポーネントについて PCR の適切なピペッティングの検証（Setup Control）を行うことがで き、ユニークな PCR セットアップのサーベイランスが可能です。こ の先進的なコントロール機能は、LightCycler® 1536 システムで使 用して自動的にデータ評価に使用することが出来ます。LightCycler® 1536 DNA Green Master は、少容量のリキッドハンドリングをサ ポートし、長時間にわたる試薬調製で非常に優れた室温安定性を提供 することで、自動化ハイスループット PCR ワークフローのアプリケー ションに対する要求に対応します。 394 アプリケーション、プロトコール、製品、マニュアルについてのより詳しい情報は、 LightCyclet スペシャルサイト www.lightcycler.com を参照ください。 LightCycler® 1536システム LightCycler® 1536システム - キット RealTime DNA Probes マスター RealTime ready DNA Probes Master 次世代の高性能リアルタイム PCR 試薬キット 製品番号 05 502 381 001 包装単位 5 × 1 ml （12,500 回× 2 μL 反応） 5 希望販売価格 ¥125,000 品 質 RealTime ready DNA Probes マスターの機能は、キットのプロ アプリケーション RealTime ready DNA Probes マスターは、LightCycler® 480 トコールに準拠し、LightCycler® 1536 インスツルメントを使用し て検査されます。 インスツルメント及び、LightCycler® 1536 インスツルメントによ る適切なプローブと遺伝子特異的なプライマーを組み合わせたリアル 製品構成 タイム PCR に使用されます。本キットは、遺伝子の検出、定量、エ 1. RealTime ready DNA Probes マスター、MasterMix（5 ×濃度） 2. RealTime ready DNA Probes マスター、Setup Control（20 ×濃度） 3. H2O、PCR グレード ンドポイントジェノタイピングのための Fast ホットスタート PCR 注意：RealTime ready DNA Probes マスターは、PCR におけるキャ リオーバー防止のために、LightCycler® ウラシル DNA グリコシラー ゼと併せて使用することができます。 利点 リアルタイム PCR アッセイに最適です。 製品概要 PCR ■ ハイスループットの自動化用にデザインされた次世代 のリアルタイム PCR 試薬キットを使用して、正確か つ高感度な結果を得ることができます。 ■ LightCycler® 1536 インスツルメントを用いた自動 化された PCR ワークフローにおける、自動エラート ラッキングによるユニークなサーベイランス機能を利 用することができます。 ■ PCR 反応をアッセイに合わせて容易にスケールアッ プすることができます（96、384、または 1536 ウェ ルプレート）。 ■ Fast PCR プロトコール用に開発された簡便な ready ‒to-use のホットスタート試薬により、時間を節約で きます。 RealTime ready DNA Probes マスターは、LightCycler® 480 イ ン ス ツ ル メ ン ト、 及 び LightCycler® 1536 イ ン ス ツ ル メ ン ト を用いた加水分解プローブ（例：リアルタイム PCR 用 Universal ProbeLibrary（UPL）プローブ）の検出用に開発された ready-touse の試薬キットで、反応容量を、簡単にアップまたはダウンスケー ルできます（例：96 ウェルプレート：10 ∼ 100 μL、384 ウェ ルプレート：5 ∼ 20 μL、1536 ウェルプレート：0.5 ∼ 2 μL）。 RealTime ready DNA Probes マスターは、自動ハイスループット PCR ワークフローに最適化されており、小容量の溶液調製や、長時 間にわたる溶液処理時での室温安定性で、優れた性能を発揮します。 RealTime ready DNA Probes マスターを使用すれば、マスターミッ クスの適切なピペッティングの検証（Master Control）と、核酸サ ンプル、プライマー、プローブなどの選択可能なコンポーネントにつ いての適切なピペッティングの検証（Setup Control）を行うことが でき、ユニークな PCR セットアップのサーベイランスが可能です。 この先進的なコントロール機能は、LightCycler® 1536 システムで 使用したときのみ、自動的にデータ評価に使用することが出来ます。 395 アプリケーション、プロトコール、製品、マニュアルについてのより詳しい情報は、 LightCyclet スペシャルサイト www.lightcycler.com を参照ください。 5 LightCycler® 480システム LightCycler® 480システム概要 LightCycler® 480システム LightCycler® 480インスツルメントは、革新的なハードウェアとソフトウェアをベースにした、定性、定量、核酸検出、変異検出、ジェノ タイピングが可能なモジュラー構成の機器です。マイクロアレイや、遺伝子ノックダウン、SNP解析などのゲノム研究の幅広いアプリケーショ ンのニーズにお応えします。 ロシュ・ダイアグノスティックスのLightCycler® 480リアルタイムPCRシステムでは、カローセルタイプのLightCycler®でのみ可能であっ た感度の高さと正確性を、96または384ウェルプレートで実現しました。 LightCycler® 480リアルタイムPCRシステム -Rapid by nature、accurate by design ・スピード −データの質を損ねることなく時間を節約することができます。 −精密で、迅速な温度変化により特異性と増幅効率を最大限に発揮 リアルタイム PCR します。 ・正確性 −新しく開発されたサーマルブロックとデータ取得テクノロジーで、 迅速で均一な温度変化と際立ったデータの均一性と正確性を実現 しました。 ・汎用性 −励起チャンネルと検出チャンネルを組合わせることで、あらゆる プローブフォーマットに対応できるほか、改良された解析ソフト ウェアと試薬で、あらゆる研究ニーズにお応えします。 ・コンパチビリティ −機器をLIMSを用いて自動化することで、現在ご使用のシステム LightCycler® 480システムは、現在リアルタイムPCRでよく使用 されているすべてのプローブフォーマットや遺伝子発現や変異解析に おけるアプリケーションに対応しており、ゲノム解析などの今後の研 究にも対応が可能です。 LightCycler® 480リアルタイムPCRシステムの構成 LightCycler® 480インスツルメント 397ページを参照ください。 LightCycler® 480システムのキット 408ページを参照ください。 LightCycler® 480のソフトウェア 399ページを参照ください。 LightCycler® 480関連のその他の製品 401ページを参照ください。 に組み込んだり、あらたにワークフローを組むことも可能です(オ PCR プション)。 396 アプリケーション、プロトコール、製品、マニュアルについてのより詳しい情報は、 LightCycletスペシャルサイトwww.lightcycler.comを参照ください。 LightCycler® 480システム LightCycler® 480システム - インスツルメント LightCycler® 480 Instrument Ⅱ 製品番号 05 015 278 001 リアルタイムPCRアプリケーションや検出のための迅速でハイス ループットのプレートタイプの機器 05 015 243 001 包装単位 1台 (96ウェルプレートタイプ) 1台 (384ウェルプレートタイプ) 希望販売価格 ¥6,800,000 ¥7,900,000 LightCycler® 480システムは、ハイパフォーマンス、ハイスルー (例；SYBR Green Ⅰ、ResoLight高分解能融解曲線分析用色素、 プットのPCRプラットフォーム(96または384マルチウェルプレー HybProbeプローブ、加水分解プローブ)を使用することができるた ト)のシステムで、あらゆる遺伝子検出や遺伝子発現解析、遺伝子型 め、核酸の定量や定性、ジェノタイピング、変異スキャンなどの実験 解析の方法を提供します。LightCycler® 480インスツルメントは、 において、最適な方法を利用して、迅速に正確なデータを取得するこ 用途の幅の広いプレートタイプのリアルタイムPCR装置で、マルチ とが可能です。励起・検出チャンネルとフィルターはあらゆる組み合 プレックスPCRや多色同時検出も可能です。ユーザーの要求に合わ わせが可能で、マルチプレックスアッセイをはじめ単色や、多色同時 せて、簡単にカスタマイズが可能なベンチトップ型の機器で、ロボッ 検出にフレキシブルに対応します。LightCycler® 480ソフトウェア ト制御を組み込んだハイスループットの自動制御にも対応可能です。 は、リアルタイムPCRのプログラミング、データ取得、データ解析に LightCycler 480インスツルメントは、研究用です。診断を目的と おいて直感的に分かりやすいナビゲート型のユーザーインターフェー して使用することはできません。 スの使いやすいソフトウェアです。用途の幅が広く、あらゆるデータ ® 解析に対応しているため、遺伝子発現解析や遺伝子変異研究に最適で す。LightCycler® 480ソフトウェアは、ベーシックな手動解析をは 利点 ■ 核酸の定量や定性、変異スキャン、SNP解析などにお いて、迅速に高感度で再現性の高いデータを得ること が可能です。 ■ 新しく開発されたサーマルブロックと光学システムテ クノロジーにより、あらゆる温度帯におけるウェル間 の均一性と、高感度の検出を実現し、正確なデータを 得ることが可能です。 ■ あらゆるプローブフォーマット(例；FRET/HybProbe プローブ、Universal ProbeLibraryプローブ、加水 分 解 プ ロ ー ブ)や、 蛍 光 色 素(例；SYBR Geen Ⅰ、 ResoLight高 分 解 能 融 解 曲 線 解 析 用 色 素、FAM、 HEX、Cy5、LightCycler® Red 610、LightCycler® Red 640、LightCycler® CYAN 500)を使用するこ とが可能です。 ■ アッセイフォーマットやアプリケーション、ワークフ ローに合わせて、マルチウェルプレートを選択するこ とが出来ます(ホワイトタイプまたはクリアタイプ)。 ■ 必要に応じて、構成(96または384ウェルプレート用 サーマルブロック、ソフトウェアなど)をアレンジする ことが可能です。 ■ 新しく開発されたデータ解析法により、必要なデータ のみを抽出することが可能です。 リアルタイム PCR LightCycler® 480シ ス テ ム は、 す べ て の 検 出 フ ォ ー マ ッ ト アプリケーション じめマクロ機能を使用した自動解析まで、実験の用途に合わせてユー ザーにより簡単にカスタマイズが可能です。 ハードウェアのサイズ、 57.4 cm W x 58.8 cm D x 49.7 cm H、 重さ(コンピュータなし) 約 55 kg コンピュータ Windows 7搭載のPC サンプル数 最大96または384/ラン 96ウェルPCRプレート、10∼ 100μL 反応容器 384ウェルPCRプレート、5∼ 20μL 励起光源 LED 488、510、580、610、640、660 検出フィルタ nm(System Ⅱ) 測定モード リアルタイム、オンライン 温度制御 ペルティエ素子による加熱／冷却 ラン時間 40分以下(384ウェルPCRプレート使用時) 表1：機器の仕様 製品構成 1. 2. 3. 4. 5 6. LightCycler® 480インスツルメント(96または384ウェル) LightCycler® 480ブロックサイクラーユニット(96または384ウェル) LightCycler® 480ソフトウェア * LightCycler® 480インスツルメントオペレータマニュアル LightCycler® 480マルチウェルプレート(96または384ウェル) 制御用デスクトップ型PC PCR LightCycler® 480インスツルメント Ⅱ 5 ＊絶対定量、Tmコーリング、相対定量、融解曲線によるジェノタイピング、エンドポイント ジェノタイピング機能を含む。 免責条項 527ページのno. 8を参照ください。 528ページのno. 13を参照ください。 528ページのno. 46を参照ください。 製品概要 LightCycler® 480インスツルメント Ⅱ は、リアルタイムオンラ イン検出可能な、迅速なプレートタイプのサーマルブロックサイク ラーです。全面的に改良されたペルティエ制御システムとシルバーブ ロックをベースにした、非常に優れたウェル間の温度均一性により、 ウェル内およびサイクル間のデータの高い再現性を実現しています。 特別に配置された光学コンポーネントにより、プレートからのシグナ ルを均一に取得出来るため、プレート上のサンプルポジションにかか わらず、それぞれ独立した解析も可能です。 397 アプリケーション、プロトコール、製品、マニュアルについてのより詳しい情報は、 LightCycletスペシャルサイトwww.lightcycler.comを参照ください。 5 LightCycler® 480システム LightCycler® 480システム - インスツルメント LightCycler® 480ブロックキット 96 シルバー LightCycler® 480 Block kit 96 Silver 製品番号 05 015 219 001 包装単位 1キット 希望販売価格 ¥706,000 簡単に交換することが出来るLightCycler® 480インスツルメント用 96ウェルプレートタイプのサーマルブロックサイクラーユニット PCR装置です。LightCycler® 480ブロックキット 96 シルバーは、 アプリケーション LightCycler® 480ブ ロ ッ ク キ ッ ト 96 シ ル バ ー は、96ウ ェ ル ブロックリッド(フタ)、アクセサリ収納用ケースを含む96ウェルPCR フォーマットアプリケーション(サンプル液量：10∼ 100μl)に必要 プレート用のサーマルブロックサイクラーユニットです。サーマルブ なコンポーネントを含む交換可能なLightCycler 480インスツルメ ロックとブロックリッドはユーザーが簡単に交換することが出来ます。 ントのアクセサリです。 交換されたブロックサイクラーユニットとブロックリッドは、機器の ® 電源を入れた後で自動的に検出、キャリブレートされます。時間をか けてキャリブレートする必要はありません。 製品概要 ® リアルタイム PCR LightCycler 480インスツルメントは、追加のサーマルブロック サイクラーユニット(96ウェルまたは384ウェルフォーマット)を使 用することの出来る用途の幅の広いカスタマイズ可能なリアルタイム 製品構成 1. LightCycler® 480サーマルブロックサイクラーユニット 96ウェル 2. LightCycler® 480ブロックリッド 96ウェル 3. LightCycler® 480保管用ケース 免責条項 527ページのno. 8を参照ください。 528ページのno. 46を参照ください。 LightCycler® 480ブロックキット 384 シルバー LightCycler® 480 Block kit 384 Silver 製品番号 05 015 197 001 包装単位 1キット 希望販売価格 ¥2,140,000 簡単に交換することの出来るLightCycler® 480インスツルメント 用384ウェルプレートタイプのサーマルブロックサイクラーユ ニット 置です。LightCycler® 480ブロックキット 384 シルバーは、ブロッ アプリケーション LightCycler 480ブロックキット 384 シルバーは、384ウェル クリッド(フタ)、アクセサリ収納用ケースを含む384ウェルPCRプ フォーマットアプリケーション(サンプル液量：5∼ 20μl)に必要なコ レート用のサーマルブロックサイクラーユニットです。サーマルブロッ ® ンポーネントを含む交換可能な、LightCycler 480インスツルメン クとブロックリッドは、ユーザーが簡単に交換することが出来ます。 トのアクセサリです。 交換されたブロックサイクラーユニットとブロックリッドは、機器の ® 電源を入れた後で自動的に検出、キャリブレートされます。時間をか けてキャリブレートする必要はありません。 製品概要 PCR ® LightCycler 480インスツルメントは、追加のサーマルブロック サイクラーユニット(96ウェルまたは384ウェルフォーマット)を使用 することの出来る用途の広いカスタマイズ可能なリアルタイムPCR装 製品構成 1. LightCycler® 480サーマルブロックサイクラーユニット 384ウェル 2. LightCycler® 480ブロックリッド 384ウェル 3. LightCycler® 480保管用ケース 398 アプリケーション、プロトコール、製品、マニュアルについてのより詳しい情報は、 LightCycletスペシャルサイトwww.lightcycler.comを参照ください。 LightCycler® 480システム LightCycler® 480システム - ソフトウェア LightCycler® 480 Geneスキャニングソフトウェア LightCycler® 480 Gene Scanning Software 製品番号 05 103 908 001 アプリケーション 背景情報 包装単位 1 ソフトウェア 5 希望販売価格 ¥670,000 LightCycler® 480 High Resolution Melting Master試薬を使 遺伝子スキャニングとは、PCRの増幅産物内における未知の遺伝子 用した融解曲線分析データを解析し、遺伝的多様性(例；SNP、変異、 型(SNP、変異、欠質など)を探索することです。 LightCycler® 480シ メチル化)が存在するPCR産物をスキャンするためのオプションソフ ステムを使用した遺伝子スキャニングは、高分解能の融解曲線分析を トウェアです。 ベースにしています。この高分解能融解曲線分析(High Resolution Melting : HRM)法では、2倍体における未知の配列のバリエーション 製品概要 をホモ(野生型や変異型)とヘテロの融解曲線がわずかに異なる波形を LightCycler® 480 Geneス キ ャ ニ ン グ ソ フ ト ウ ェ ア は、 融 解 示すことを利用して、区別します。 たLightCycler® 480システムのオプションソフトウェアの一つで 製品構成 す。グループ分けは、自動または既知配列のスタンダードサンプル 1. LightCycler® 480 Geneスキャニングソフトウェア CD 2. LightCycler® 480 Geneスキャニングソフトウェア マニュアル に基づいて行われます。グループ分けが行われる前に、融解曲線の 生データは以下の3ステップの処理が行われます。(i)normalization、 (ii)temperature-shifting、(iii)difference-plotting. LightCycler® 480 Hight Resolution Melting マ スターについてのより詳しい情報は、411ページを 参照ください。 リアルタイム PCR 曲線を型別にグループ分けする独自のアルゴリズムをベースとし 免責条項 528ページのno. 46を参照ください。 LightCycler® 480マルチプレート解析ソフトウェア LightCycler® 480 Multiple Plate Analysis Software 製品番号 05 075 122 001 アプリケーション 免責条項 ® LightCycler 480マルチウェルプレート解析ソフトウェアは、 包装単位 1 ソフトウェア 希望販売価格 ¥670,000 528ページのno. 46を参照ください。 ® LightCycler 480システムを使用して、マルチウェルプレートの結 果を遺伝子定量とジェノタイピング解析の両方を行うための、オプ ションソフトウェアです。Windows XPバージョンのみに対応してい PCR ます。Windows 7では使用できません。 より詳しい情報については、お問い合わせください。 LightCycler® 480 LIMSインターフェイスモジュール LightCycler® 480 LIMS Interface Module 製品番号 05 066 310 001 アプリケーション 免責条項 LightCycler® 480 LIMSインターフェイスモジュールは、 包装単位 1 ソフトウェア 希望販売価格 ¥670,000 528ページのno. 46を参照ください。 LightCycler ® 480システムをLIMS(Laboratory Information Management System)環境へ接続するためのオプションソフトウェ アです。 より詳しい情報については、お問い合わせください。 399 アプリケーション、プロトコール、製品、マニュアルについてのより詳しい情報は、 LightCyclet スペシャルサイト www.lightcycler.com を参照ください。 5 LightCycler® 480システム LightCycler® 480システム - ソフトウェア LightCycler® 480ソフトウェア Ver.1.5.1 LightCycler® 480 Software, Version 1.5.1 製品番号 04 994 884 001 製品概要 免責条項 ® LightCycler 480ソ フ ト ウ ェ ア Ver. 1.5.1は、 リ ア ル タ イ ム 包装単位 1 ソフトウェア 528ページのno. 46を参照ください。 PCRのランニングに必要なPCRプロトコールの入力、サンプル情報の 編集、テンプレートやマクロの作成に必要なすべての機能を含んだソ フトウェアです。また、LightCycler® 480ソフトウェア Ver. 1.5.1 は、PCR産物の特徴づけ(SYBR Green Ⅰアッセイ、Tmコーリング)、 遺伝子定量(絶対定量、相対定量)、ジェノタイピング(エンドポイント 解析、融解曲線分析)が可能です。その他の特殊な解析ソフトウェア(例； れば、さらに解析の幅が広がります。 より詳しい情報については、お問い合わせください。 PCR リアルタイム PCR LightCycler® 480 Geneスキャニングソフトウェア)を追加で使用す 400 アプリケーション、プロトコール、製品、マニュアルについてのより詳しい情報は、 LightCyclet スペシャルサイト www.lightcycler.com を参照ください。 希望販売価格 ¥150,000 LightCycler® 480システム LightCycler® 480システム - 消耗品 LightCycler® 480マルチウェルプレート 96 ホワイト LightCycler® 480 Multiwell Plate 96, White 製品番号 04 729 692 001 テーラーメイドのLightCycler® 480インスツルメント用反応容器 96ウェル アプリケーション LightCycler® 480マ ル チ ウ ェ ル プ レ ー ト 96 ホ ワ イ ト は、 ® 包装単位 5×10プレート (シーリングホイルを含む) 5 希望販売価格 ¥50,000 製品構成 LightCycler® 480マルチウェルプレート 96は、シール可能な5 LightCycler 480インスツルメントを使用してリアルタイムPCRや つの袋の中に10プレートずつ包装されて提供されます。シーリングホ 融解曲線分析を行うための96ウェルの反応用プレートです。 イルはプレートパックの中に別に包装されて提供されます。 利点 させるためには、LightCycler® 480サーマルブロックに最適 ■ LightCycler® 480インスツルメント96ウェルタイ プの優れた温度制御と光学特性に完全にフィットする 96ウェルプレートです。 ■ ポジションエラーを避けるために角がカットされてい ます。 ■ サンプルトラッキングを容易にするためのバーコード があらかじめラベルされています。 ■ ロボットハンドリングに対応しています。 化されたLightCycler® 480マルチウェルプレートを使用する 製品概要 LightCycler® 480マルチウェルプレート 96 ホワイトは、バー コードがラベルされたハーフスカート型のポリプロピレン製の反応容 器です。寸法(ウェルの内部や外部)と素材は、LightCycler® 480イ ンスツルメント 96ウェルタイプ(反応液量：10∼ 100μl)に最適化 されています。 必要があります。シーリングホイルは、LightCycler® 480マ ルチウェルプレート 96および384で共通に使用可能です。ま た、別途購入も可能です(Cat. No. 4 729 757)。 LightCycler® マルチウェルプレート 384 ホワイト に関するより詳しい情報は、402ページを参照くだ さい。 LightCycler® 480マルチウェルプレート 96 クリ アに関するより詳しい情報は、403ページを参照く ださい。 LightCycler® 480マルチウェルプレート 384 クリ アに関するより詳しい情報は、404ページを参照く ださい。 LightCycler® 480シーリングホイルに関するより 詳しい情報は、405ページを参照ください。 リアルタイム PCR 注意：LightCycler® 480システムのアッセイパフォーマンスを発揮 背景情報 LightCycler® 480システムは、PCRアプリケーションの分野にお 免責条項 529ページのno. 51を参照ください。 いて卓越した加熱と冷却制御をもつ高性能のサーマルブロックをベー クに完全にフィットし、温度を最適に伝達するためにテーラーメイド された反応容器です。 PCR スとしたシステムです。本製品はその新しく開発されたサーマルブロッ 401 アプリケーション、プロトコール、製品、マニュアルについてのより詳しい情報は、 LightCycletスペシャルサイトwww.lightcycler.comを参照ください。 5 LightCycler® 480システム LightCycler® 480システム - 消耗品 LightCycler® 480 マルチウェルプレート 384 ホワイト LightCycler® 480 Multiwell Plate 384, White 製品番号 04 729 749 001 テーラーメイドのLightCycler® 480インスツルメント用反応容器 384ウェル アプリケーション LightCycler® 480 マ ル チ ウ ェ ル プ レ ー ト 384 ホ ワ イ ト は、 ® 包装単位 5×10プレート (シーリングホイルを含む) 希望販売価格 ¥50,000 製品構成 LightCycler® 480マルチウェルプレート 384は、シール可能な5 LightCycler 480インスツルメントを使用してリアルタイムPCRや つの袋の中に10プレートずつ包装されて提供されます。シーリングホ 融解曲線分析を行うための384ウェルの反応用プレートです。 イルはプレートパックの中に別に包装されて提供されます。 リアルタイム PCR 注意：LightCycler® 480システムのアッセイパフォーマンスを発揮 利点 させるためには、LightCycler® 480サーマルブロックに最適 ■ LightCycler® 480インスツルメント 384ウェルタ イプの優れた温度制御と光学特性に完全にフィットす る384ウェルプレートです。 ■ ポジションエラーを避けるために角がカットされてい ます。 ■ サンプルトラッキングを容易にするためのバーコード があらかじめラベルされています。 ■ ロボットハンドリングに対応しています。 化されたLightCycler® 480マルチウェルプレートを使用する 製品概要 LightCycler® 480マルチウェルプレート 384 ホワイトは、バー コードがラベルされたフルスカート型のポリプロピレン製の反応容器 です。寸法(ウェルの内部や外部)と素材は、LightCycler® 480イン スツルメント 384ウェルタイプ(反応液量：5∼ 20μl)に最適化され ています。 背景情報 LightCycler® 480システムは、PCRアプリケーションの分野にお 必要があります。シーリングホイルは、LightCycler® 480マ ルチウェルプレート 96および384で共通に使用可能です。ま た、別途購入も可能です(Cat. No. 4 729 757)。 LightCycler® 480マルチウェルプレート 96 ホワ イトに関するより詳しい情報は、401ページを参照 ください。 LightCycler® 480マルチウェルプレート 96 クリ アに関するより詳しい情報は、403ページを参照く ださい。 LightCycler® 480マルチウェルプレート 384 クリ アに関するより詳しい情報は、404ページを参照く ださい。 LightCycler® 480シーリングホイルに関するより 詳しい情報は、405ページを参照ください。 免責条項 529ページのno. 51を参照ください。 いて卓越した加熱と冷却制御をもつ高性能のサーマルブロックをベー PCR スとしたシステムです。本製品はその新しく開発されたサーマルブロッ クに完全にフィットし、温度を最適に伝達するためにテーラーメード された反応容器です。 402 アプリケーション、プロトコール、製品、マニュアルについてのより詳しい情報は、 LightCycletスペシャルサイトwww.lightcycler.comを参照ください。 LightCycler® 480システム LightCycler® 480システム - 消耗品 LightCycler® 480マルチウェルプレート 96 クリア LightCycler® 480 Multiwell Plate 96, Clear 製品番号 05 102 413 001 テーラーメイドのLightCycler® 480インスツルメント用反応容器 96ウェル アプリケーション 包装単位 5×10プレート (シーリングホイルを含む) 5 希望販売価格 ¥50,000 製品構成 LightCycler® 480マ ル チ ウ ェ ル プ レ ー ト 96 ク リ ア は、 ® LightCycler® 480マルチウェルプレート 96は、シール可能な5 LightCycler 480インスツルメントを使用してSYBR Green Ⅰや つの袋の中に10プレートずつ包装されて提供されます。シーリングホ 加水分解プローブなどのアッセイを行うための96ウェルの反応用プ イルはプレートパックの中に別に包装されて提供されます。 レートです。FRET(HybProbe)プローブや高分解能融解曲線分析を行 うアプリケーションには推奨しません。その場合は、ホワイトタイプ 注意：LightCycler® 480システムのアッセイパフォーマンスを発揮 させるためには、LightCycler® 480サーマルブロックに最適 のプレートをご使用ください。 注意：クリアタイプのLightCycler 480マルチウェルプレートは、 ® 必要があります。シーリングホイルは、LightCycler® 480マ LightCycler 480 Software Version 1.5がインストールさ ルチウェルプレート 96および384で共通に使用可能です。ま れているLightCycler® 480インスツルメントでのみ使用でき た、別途購入も可能です(Cat. No. 4 729 757)。 ます。 注意：FRET(HybProbe)プ ロ ー ブ や 高 分 解 能 融 解 曲 線 分 析 に は、 LightCycler® 480マルチウェルプレート ホワイト(96ウェル 利点 リアルタイム PCR 化されたLightCycler® 480マルチウェルプレートを使用する ® タイプCat. No. 4 729 692、および384ウェルタイプCat. ■ LightCycler 480インスツルメント96ウェルタイ プの優れた温度制御と光学特性に完全にフィットする 96ウェルプレートです。 ■ ポジションエラーを避けるために角がカットされてい ます。 ■ サンプルトラッキングを容易にするためのバーコード があらかじめラベルされています。 ■ ロボットハンドリングに対応しています。 ■ 透明なのでピペッティングが容易です。 製品概要 LightCycler® 480マルチウェルプレート 96 クリアは、バーコー ドがラベルされたハーフスカート型の透明なポリプロピレン製の反応 No. 4 729 749)を使用することを推奨します。 LightCycler® 480マルチウェルプレート 96 ホワ イトに関するより詳しい情報は、401ページを参照 ください。 LightCycler® マルチウェルプレート 384 ホワイト に関するより詳しい情報は、402ページを参照くだ さい。 LightCycler® 480マルチウェルプレート 384 クリ アに関するより詳しい情報は、404ページを参照く ださい。 LightCycler® 480シーリングホイルに関するより 詳しい情報は、405ページを参照ください。 容器です。寸法(ウェルの内部や外部)と素材は、LightCycler® 480 インスツルメント 96ウェルタイプ(反応液量：10∼ 100μl)に最適 免責条項 PCR ® 529ページのno. 51を参照ください。 化されています。 背景情報 LightCycler® 480システムは、PCRアプリケーションの分野にお いて卓越した加熱と冷却制御をもつ高性能のサーマルブロックをベー スとしたシステムです。本製品はその新しく開発されたサーマルブロッ クに完全にフィットし、温度を最適に伝達するためにテーラーメード された反応容器です。 403 アプリケーション、プロトコール、製品、マニュアルについてのより詳しい情報は、 LightCycletスペシャルサイトwww.lightcycler.comを参照ください。 5 LightCycler® 480システム LightCycler® 480システム - 消耗品 LightCycler® 480マルチウェルプレート 384 クリア LightCycler® 480 Multiwell Plate 384, Clear 製品番号 05 102 430 001 テーラーメイドのLightCycler® 480インスツルメント用反応容器 384ウェル アプリケーション 包装単位 5×10プレート (シーリングホイルを含む) 希望販売価格 ¥50,000 製品構成 LightCycler® 480マ ル チ ウ ェ ル プ レ ー ト 384 ク リ ア は、 ® LightCycler® 480マルチウェルプレート 384は、シール可能な5 LightCycler 480インスツルメントを使用してSYBR Green Ⅰや つの袋の中に10プレートずつ包装されて提供されます。シーリングホ 加水分解プローブなどのアッセイを行うための384ウェルの反応用プ イルはプレートパックの中に別に包装されて提供されます。 リアルタイム PCR レートです。 FRET(HybProbe)プローブや高分解能融解曲線分析を行うアプリ 注意：LightCycler® 480システムのアッセイパフォーマンスを発揮 ケーションには推奨しません。その場合は、ホワイトタイプのプレー させるためには、LightCycler® 480サーマルブロックに最適 トをご使用ください。 化されたLightCycler® 480マルチウェルプレートを使用する 必要があります。シーリングホイルは、LightCycler® 480マ ® 注意：クリアタイプのLightCycler 480マルチウェルプレートは、 LightCycler® 480 Software Version 1.5がインストールさ ルチウェルプレート 96および384で共通に使用可能です。ま た、別途購入も可能です(Cat. No. 4 729 757)。 れているLightCycler® 480インスツルメントでのみ使用でき 注意：FRET(HybProbe)プ ロ ー ブ や 高 分 解 能 融 解 曲 線 分 析 に は、 ます。 LightCycler® 480マルチウェルプレート ホワイト(96ウェル タイプCat. No. 4 729 692、および384ウェルタイプCat. 利点 No. 4 729 749)を使用することを推奨します。 ® ■ LightCycler 480インスツルメント 384ウェルタ イプの優れた温度制御と光学特性に完全にフィットす る384ウェルプレートです。 ■ ポジションエラーを避けるために角がカットされてい ます。 ■ サンプルトラッキングを容易にするためのバーコード があらかじめラベルされています。 ■ ロボットハンドリングに対応しています。 ■ 透明なのでピペッティングが容易です。 PCR 製品概要 LightCycler® 480マルチウェルプレート 384 クリアは、バー LightCycler® 480マルチウェルプレート 96 ホワ イトに関するより詳しい情報は、401ページを参照 ください。 LightCycler® マルチウェルプレート 384 ホワイト に関するより詳しい情報は、402ページを参照くだ さい。 LightCycler® 480マルチウェルプレート 96 クリ アに関するより詳しい情報は、403ページを参照く ださい。 LightCycler® 480シーリングホイルに関するより 詳しい情報は、405ページを参照ください。 コードがラベルされたフルスカート型の透明なポリプロピレン製の 反応容器です。寸法(ウェルの内部や外部)と素材は、LightCycler® 免責条項 529ページのno. 51を参照ください。 480インスツルメント 384ウェルタイプ(反応液量：5∼ 20μl)に最 適化されています。 背景情報 LightCycler® 480システムは、PCRアプリケーションの分野にお いて卓越した加熱と冷却制御をもつ高性能のサーマルブロックをベー スとしたシステムです。本製品はその新しく開発されたサーマルブロッ クに完全にフィットし、温度を最適に伝達するためにテーラーメード された反応容器です。 404 アプリケーション、プロトコール、製品、マニュアルについてのより詳しい情報は、 LightCycletスペシャルサイトwww.lightcycler.comを参照ください。 LightCycler® 480システム LightCycler® 480システム - 消耗品 LightCycler® 480シーリングホイル LightCycler® 480 Sealing Foil 製品番号 04 729 757 001 包装単位 50ホイル 5 希望販売価格 ¥12,000 LightCycler® 480マルチウェルプレートで反応する際に、蒸発や コンタミネーションを防ぐための粘着シール アプリケーション 製品構成 LightCycler® 480シーリングホイルは、LightCycler® 480イン LightCycler® 480シーリングホイルが50枚含まれています。 ® スツルメントを使用してLightCycler 480マルチウェルプレート上 でリアルタイムPCRを行う際に、蒸発やコンタミネーションを防ぎま す。 注意：LightCycler® 480シ ー リ ン グ ホ イ ル は、LightCycler® 480マ ル チ ウ ェ ル プ レ ー ト に あ ら か じ め 含 ま れ て い ま す (LightCycler® 480マルチウェルプレート 96 ホワイトCat. 利点 ト 96 クリアCat. No. 5 102 413、LightCycler® 480マ ■ 強い粘着力で、サーマルサイクリング中やサンプルを 保存する際の蒸発やコンタミネーションを防ぎます。 ■ 貼り／剥がしのしやすいように隅に余白があります。 ■ −40∼＋120℃に耐えることが出来ます。 ルチウェルプレート 384 ホワイトCat. No. 4 729 749、 製品概要 LightCycler® 480シ ー リ ン グ ホ イ ル は、 す べ て のLightCycler® 480マルチウェルプレート(例；96および384ウェル、ホワイトおよ びクリアタイプ)に対応しています。qPCRや融解曲線分析などの蛍光 解析をするのに適した透明タイプです。 LightCycler® 480マ ル チ ウ ェ ル プ レ ー ト 384 ク リ アCat. No. 5 102 430)。 LightCycler® 480マルチウェルプレート 96 ホワ イトに関するより詳しい情報は、401ページを参照 ください。 LightCycler® マルチウェルプレート 384 ホワイト に関するより詳しい情報は、402ページを参照くだ さい。 LightCycler® 480マルチウェルプレート 96 クリ アに関するより詳しい情報は、403ページを参照く ださい。 LightCycler® 480マルチウェルプレート 384 クリ アに関するより詳しい情報は、404ページを参照く ださい。 リアルタイム PCR No. 4 729 692、LightCycler® 480マ ル チ ウ ェ ル プ レ ー 免責条項 PCR 529ページのno. 51を参照ください。 405 アプリケーション、プロトコール、製品、マニュアルについてのより詳しい情報は、 LightCycletスペシャルサイトwww.lightcycler.comを参照ください。 5 LightCycler® 480システム LightCycler® 480システム - 消耗品 LightCycler® 480キセノンランプ LightCycler® 480 Xenon Lamp 製品番号 04 686 136 001 包装単位 1ランプ 希望販売価格 ¥65,000 製品番号 04 686 128 001 包装単位 4 フィルタ 希望販売価格 ¥1,900 製品番号 06 612 598 001 包装単位 1枚 希望販売価格 ￥24,800 アプリケーション LightCycler® 480キセノンランプは、LightCycler® 480インス ツルメントの交換パーツです。ランプはユーザー自身で簡単に交換が 可能です。より詳しい情報については、お問い合わせください。 LightCycler® 480 通気フィルタ リアルタイム PCR LightCycler® 480 Ventilation Dust Filter アプリケーション LightCycler® 480 通気フィルタは、LightCycler® 480 インス ツルメントの交換パーツです。通気フィルタは、ユーザー自身で簡単 に交換が可能です。より詳しい情報については、お問い合わせくださ い。 LightCycler® 8-Tube Strip Adapter Plate LightCycler® 8-Tube Strip Adapter Plate LightCycler® 480（96ウェル）で8-Tube Stripを使用するためのア ダプター アプリケーション こ の 製 品 はLightCycler® 480（96ウ ェ ル ） で8-Tube Strip （06612601001） を 使 用 す る た め の ア ダ プ タ ー で す。12本 の 8-Tube Stripを使用できます。 PCR LightCycler® 96では使用しないでください。 406 アプリケーション、プロトコール、製品、マニュアルについてのより詳しい情報は、 LightCycletスペシャルサイトwww.lightcycler.comを参照ください。 LightCycler® 480システム LightCycler® 480システム - 追加用製品 LightCycler® 480バーコードスキャナ LightCycler® 480 Bar-Code Scanner 製品番号 04 710 606 001 包装単位 1スキャナ 5 希望販売価格 ¥30,000 アプリケーション LightCycler® 480バーコードスキャナは、LightCycler®システム においてバーコード情報(例；LightCycler® 480マルチウェルプレー ト)をスキャンし、LightCycler® 480ソフトウェアへテキスト入力 するためのオプションアクセサリです。LightCycler®システムのデー タワークステーションに接続されたキーボードを介した、手持ち式の バーコードスキャナを使用して簡単にデータの入力やアッセイのト ラッキングを行うことが出来ます。より詳しい情報については、お問 PCR リアルタイム PCR い合わせください。 407 アプリケーション、プロトコール、製品、マニュアルについてのより詳しい情報は、 LightCycletスペシャルサイトwww.lightcycler.comを参照ください。 5 LightCycler® 480システム LightCycler® 480システム - キットと試薬 LightCycler® 480 SYBR GreenⅠ マスター LightCycler® 480 SYBR GreenⅠ Master 製品番号 04 707 516 001 LightCycler® 480インスツルメントを使用して、リアルタイム PCRを行うためのHot Startタイプの使いやすい反応溶液 04 887 352 001 10×5 ml (5,000反応分/20μl反応) アプリケーション 製品構成 ® LightCycler 480 SYBR GreenⅠ マ ス タ ー は、LightCycler ® 包装単位 5×1 ml (500反応分/20μl反応) 希望販売価格 ¥54,000 ¥296,500 1. LightCycler® 480 SYBR GreenⅠMaster、2×濃度 2. H2O、PCRグレード 480インスツルメントを使用してDNAを増幅検出するためのSYBR GreenⅠ色素を含んだ反応試薬です。このキットは、遺伝子の検出と 定量のためのHot Start PCRアッセイに適しています。 品 質 機能試験：L i g h t C y c l e r ® 4 8 0 S Y B R G r e e n Ⅰ マ ス タ ー は リアルタイム PCR LightCycler®480を使用し、キットのプロトコールに従っ て試験されています。 利点 ■ 2×濃度の使いやすいHot Startタイプの試薬で時間 と手間を省けます。 ■ ピペッティングのステップを最小限にし、コンタミ ネーションを防ぎます。 ■ LightCycler® 480インスツルメントを使用して、定 量PCRや検出を高感度に特異的に行うことが可能で す。 ■ MgCl2の最適化は不要で、時間を節約することが可能 です。 ■ LightCycler® 480インスツルメントとマルチウェル プレートを合わせて使用することで、高品質の結果を 再現性よく得ることが可能です。 注意：LightCycler® 480 SYBR GreenⅠマスターは、熱不安定性 ウラシル DNAグリコシラーゼと合わせて使用すれば、PCR産 物のキャリーオーバーを防ぐことが可能です。 さらに、Transcriptor Reverse Transcriptaseなどの逆転写 反応の後で使用することで、2ステップRT-PCRを行うことが 可能です。 LightCycler® ウラシル DNA グリコシラーゼに関す るより詳しい情報は、440ページを参照ください。 Transcriptor Reverse Transcriptase に関するよ り詳しい情報は、481ページを参照ください。 免責条項 製品概要 526ページのno. 5を参照ください。 528ページのno. 13を参照ください。 528ページのno. 46を参照ください。 LightCycler® 480 SYBR GreenⅠ マ ス タ ー は、PCRに 必 要 な コ ン ポ ー ネ ン ト が1つ に ま と ま っ たHot Startタ イ プ の 試 薬 で す。 FastStart Taq DNAポリメラーゼと、PCR産物の検出と特徴づけを PCR するために必要な、2本鎖DNAに特異的に結合するSYBR GreenⅠ色 素が含まれます。本製品は、使いやすいマスターミックスとして提供 されるため、反応溶液の調製はテンプレートDNAとプライマーを加え るだけです。異なるタイプのDNA(例；ゲノムDNA、cDNA)を使用す ることも可能なので、96や384ウェルプレートを使用したハイスルー プットの実験に適しています。 背景情報 SYBR GreenⅠは2本鎖DNAに特異的に結合する色素です。DNAが 合成される各段階で、反応試薬に含まれるSYBR GreenⅠ色素が増幅 されたPCR産物に結合し、蛍光強度が高くなったところを検出します。 LightCycler® 480 SYBR GreenⅠ マ ス タ ー は、 特 異 性 と 感 度、増幅収量を高めるHot Startプロトコールを採用しています。 FastStart Taq DNAポリメラーゼに修飾されたアミノ酸残基の一種 である熱不安定性の保護基は、室温においては酵素活性が不活化して います。そのため、プライマーが非特異的に結合しても増幅は起こり ません。FastStart Taq DNAポリメラーゼは高温(例；95℃ 5分のプ レインキュベーション)で保護基が除かれると活性化します。 408 アプリケーション、プロトコール、製品、マニュアルについてのより詳しい情報は、 LightCycletスペシャルサイトwww.lightcycler.comを参照ください。 LightCycler® 480システム LightCycler® 480システム - キットと試薬 LightCycler® 480インスツルメントを使用して、プローブを使用 したリアルタイムPCRを行うためのHot Startタイプの使いやすい 反応溶液 アプリケーション 製品番号 04 707 494 001 包装単位 5×1 ml (500反応分/20μl反応) 希望販売価格 ¥53,000 04 887 301 001 10×5 ml (5,000反応分/20μl反応) ¥296,500 04 902 343 001 1×50 ml (5,000反応分/20μl反応) ¥296,500 背景情報 LightCycler® 480 Probeマ ス タ ー は、LightCycler® 480イ ン 加水分解プローブアッセイとは、蛍光レポーター色素とクエン スツルメントと適したプローブ(例；加水分解プローブ、Universal チャーの2つでラベルされた、1つのプローブを使用するアッセイで ProbeLibraryプローブ、その他)と遺伝子特異的プライマーと組合わ す。プローブが完全(インタクト)な状態では、クエンチャーはレポー せてリアルタイムPCRに使用するためにデザインされています。こ ター色素に近接しているためレポーターの蛍光は抑制されています。 のキットは、遺伝子の定量やエンドポイント検出のジェノタイピング プローブがターゲット配列にハイブリダイズし、ポリメラーゼの5'ヌ アッセイなどのHot Start PCRアッセイに適しています。 クレアーゼ活性により分解されると、レポーターとクエンチャーが物 理的に離れます。PCRが進むにつれてターゲット配列の量が蓄積され、 より多くのプローブが分解されると、抑制されないレポーターの蛍光 利点 ■ 2×濃度の使いやすいHot Startタイプの試薬で時間 と手間を省けます。 ■ ピペッティングのステップを最小限にし、コンタミ ネーションを防ぎます。 ■ LightCycler® 480インスツルメントを使用して、定 量PCRやRT-PCRを高感度に特異的に行うことが可能 です。 ■ MgCl2の最適化は不要で、時間を節約することが可能 です。 ■ LightCycler® 480インスツルメントとマルチウェル プレートを合わせて使用することで、高品質の結果を 再現性よく得ることが可能です。 ■ Universal ProbeLibraryプローブを合わせて使用す ると、1色または多色同時検出の定量アッセイなどの 定量PCRアッセイを迅速に構築することが可能です。 シグナルが増加します。 本製品の2×濃度のマスターミックスは、殆どのプライマーがワー ク す る よ う にMgCl2濃 度 が 最 適 化 さ れ て い る た め プ ラ イ マ ー ご と にMgCl2濃度を最適化する必要はありません。マスターミックスの 他には、テンプレートDNA、PCRプライマー、加水分解プローブ (Universal ProbeLibrary等)を加えるだけです。 製品構成 1. LightCycler® 480 Probe Master、2×濃度 2. H2O、PCR-grade 品 質 機能試験：LightCycler® 480 Probeマ ス タ ー は、LightCycler® 480を使用し、キットのプロトコールに従って試験されて います。 注意：LightCycler® 480 Probesマ ス タ ー は、 加 水 分 解 プ ロ ー ブ (例；Universal ProbeLibraryプローブ)を使用するために特に 最適化されています。その他のプローブフォーマットについて も使用可能です(ハイブリダイゼーションプローブ、Molecular 製品概要 LightCycler® 480 Probeマ ス タ ー は、LightCycler® 480イ ン スツルメントでマルチウェルプレートを使用して、加水分解プローブ リアルタイム PCR LightCycler® 480 Probe Master PCR LightCycler® 480 Probeマスター 5 Beacon、Scorpionなど)。LightCycler® 480インスツルメン トの励起と検出波長に合う蛍光色素を使用すれば、どんな蛍光 色素でも使用可能です。 フォーマットにて反応させるために特に最適化された使いやすい反応 LightCycler® 480 Probesマスターは、PCR産物のキャリー 溶液です。この試薬には、PCRにおける非特異的な増幅産物の生成 オーバーコンタミネーションを防ぐために、熱不安定性ウラシ を最小限に抑え、特異性と感度を高めるために特に改良された、Hot ル DNA グリコシラーゼを使用することも可能です。さらに、 StartタイプのFastStart Taq DNAポリメラーゼが含まれます。 Transcriptor Reverse Transcriptaseなどの逆転写反応の後 で使用することで、2ステップRT-PCRを行うことが可能です。 LightCycler® ウラシル DNA グリコシラーゼに関す るより詳しい情報は、440ページを参照ください。 Transcriptor Reverse Transcriptaseに関するよ り詳しい情報は、481ページを参照ください。 Universal ProbeLibraryについてのより詳しい情報 は、458ページを参照ください。 免責条項 526ページのno. 4を参照ください。 528ページのno. 46を参照ください。 409 アプリケーション、プロトコール、製品、マニュアルについてのより詳しい情報は、 LightCycletスペシャルサイトwww.lightcycler.comを参照ください。 5 LightCycler® 480システム LightCycler® 480システム - キットと試薬 LightCycler® 480 Genotypingマスター 製品番号 包装単位 希望販売価格 04 707 524 001 4×384μl (384反応分/20μl反応) ¥48,000 LightCycler® 480 Genotyping Master LightCycler® 480インスツルメントを使用して、PCRの後に、ジェ ノタイピングを目的とした融解曲線分析を行うために最適化され た、Hot-Startタイプの使いやすい反応溶液 アプリケーション ® 製品概要 ® LightCycler 480 Genotypingマスターは、LightCycler 480 LightCycler® 480 Genotypingマ ス タ ー は、Hot Startタ イ プ インスツルメントを使用して、PCRの後にジェノタイピングを目的と のPCR溶 液 で す。 キ ッ ト に 同 梱 さ れ る 酵 素 は、N末 端 を 欠 如 さ せ した融解曲線分析を行うために特に最適化されています。 た、5'-3'ヌクレアーゼ活性がマイナスの熱耐性のリコンビナントTaq 一塩基多型(SNPs)のタイピング、1色だけでなく多色の変異解析に も適しています。 リアルタイム PCR LightCycler® 480 Genotypingマ ス タ ー は、 あ ら ゆ るDNAや cDNAターゲットの増幅と検出に使用することが出来ます。テンプ レートDNA、プライマー、配列特異的プローブ(HybProbeプローブ、 SimpleProbeプローブなど)をマスターミックスに加えるだけです。 DNAポリメラーゼで、化学修飾により室温下では不活化されていて、 95℃で10分間インキュベーションされることで活性化されます。 PCR後の融解曲線分析を行うHybProbeプローブやSimple Probeプ ローブフォーマットで使用することが出来ます。 本製品は、1本のバイアルで構成された使いやすいマスターミック スとして提供されるため、反応溶液の調製はテンプレートDNAとプラ イマー、プローブを加えるだけです。異なるタイプのDNA(例；ゲノ 注意：5'-3'ヌ ク レ ア ー ゼ 活 性 を 除 い て い る た め、LightCycler® 480 Genotyping マスターは、加水分解プローブに使用す ムDNA、cDNA)を使用することも可能なので、96や384ウェルプ レートを使用したハイスループットの実験に適しています。 ることが出来ません。 ユーザーによるMgCl2濃度の最適化は通常必要ありません。 キットに同梱されるMgCl2溶液は、特別な場合にのみ使用し ます。 背景情報 LightCycler® 480 Genotypingマスターは、LightCycler® 480 インスツルメントを使用して、PCR後に融解曲線分析を行うために特 に最適化されています。LightCycler® 480 インスツルメントの励起 と検出波長にあったHybProbeやSimpleProbeを使用して、単色／多 PCR 利点 ■ 2×濃度の使いやすいHot Startタイプの試薬で時間 と手間を省けます。 ■ ピペッティングのステップを最小限にし、コンタミ ネーションを防ぎます。 ■ LightCycler® 480イ ン ス ツ ル メ ン ト を 使 用 し て、 SNPsのジェノタイピングを自動化することが可能で す。 ■ LightCycler® 480インスツルメントとマルチウェル プレートを合わせて使用することで、高品質の結果を 再現性よく得ることが可能です。 ■ HybProbe(FRET)やSimple Probeプローブを利用し て、融解曲線分析に基づいたマルチプレックスSNP解 析が可能です。 色でSNPのバリアントを検出することが可能です。 製品構成 1. Master Mix: 5×濃度 4×384μl: リコンビナントのTaq DNAポリメラーゼ、反応バッファ、dNTPミックス(dTTPの代わ りにdUTPを含む)、15 mMのMgCl2を含む、Hot Startタイプの使いやすいマルチプ レックスPCR用反応溶液。 2. H2O、PCR-grade: 4×1 ml 3. MgCl2、25 mM: 1 ml 品 質 機能試験：LightCycler® 480 Genotypingマスターは、 LightCycler® 480を使用して機能試験が行われています。 免責条項 526ページのno. 2を参照ください。 528ページのno. 13を参照ください。 528ページのno. 46を参照ください。 410 アプリケーション、プロトコール、製品、マニュアルについてのより詳しい情報は、 LightCycletスペシャルサイトwww.lightcycler.comを参照ください。 LightCycler® 480システム LightCycler® 480システム - キットと試薬 LightCycler® 480 High Resolution Melting マスター 製品番号 04 909 631 001 包装単位 5×1 ml (500反応分/20μl反応) 5 希望販売価格 ¥70,000 LightCycler® 480 High Resolution Melting Master アプリケーション 製品概要 LightCycler® 480 Hight Resolution Meltingマスターは、新規 LightCycler® 480 High Resolution Meltingマ ス タ ー は、 の飽和型DNA色素であるResoLightとHot StartタイプのPCR酵素 LightCycler® 480リアルタイムPCRシステムに特に最適化されてい を含む試薬で、増幅とその後でPCR産物(例；変異スキャニング、メ ます。2×濃度の使いやすいHot Startタイプの反応試薬として提供 チレーション解析、ジェノタイピング)のヘテロ接合型を検出するため されます。別バイアルの25 mM MgCl2 stock溶液は、特に必要と に使用されます。本製品は、LightCycler® 480システムに最適化さ される場合に使用するために同梱されています。PCR産物のキャリー れていますが、光学的に対応する他の機器でも使用可能です。データ オーバーコンタミネーションを防ぐために、熱不安定性ウラシルDNA の取得は、SYBR GreenⅠアッセイで使用するのと同じ検出チャンネ グリコシラーゼを使用することも可能です。 製品構成 1. Master Mix、2×濃度、5×1 ml、高分解能色素ResoLightを含む。 2. MgCl2 Stock Solution、25 mM、2×1 ml 3. H2O、PCR-grade、5×1 ml ■ PCRに干渉、阻害することなく安定したパフォーマン スを示す、新規の色素ResoLightを含むマスターミッ クスです。 ■ 安定性が高く、ハンドリングしやすい最適化されたマ スターミックスで、ワークフローの自動化にも適して います。 ■ 2×濃度の使いやすいHot Startタイプの試薬で時間 と手間を省けます。 LightCycler® 480 ResoLight 色素 LightCycler® 480 ResoLight Dye PCR産物の高分解能融解曲線分析(High Resolution Melting)を行 うための遺伝子DNA染色用色素 アプリケーション ® LightCycler 480 ResoLight色素は、PCR産物の2本鎖を染色 するための色素です。融解曲線分析において、一般的な色素と比較し LightCycler® ウラシル DNA グリコシラーゼに関す るより詳しい情報は、440ページを参照ください。 製品番号 04 909 640 001 包装単位 希望販売価格 1 ml ¥80,000 （最大1,000反応分/20μl反応） LightCycler® 480 Hight Resolution Melting マ スターについてのより詳しい情報は、上記を参照くだ さい。 てシャープな蛍光シグナルをもたらし、PCR産物の融解曲線をより高 PCR 利点 リアルタイム PCR ルを使用します。 い精度で評価することが可能です。 411 アプリケーション、プロトコール、製品、マニュアルについてのより詳しい情報は、 LightCycletスペシャルサイトwww.lightcycler.comを参照ください。 5 LightCycler® 480システム LightCycler® 480システム - キットと試薬 LightCycler® 480 Controlキット 製品番号 04 710 924 001 LightCycler® 480 Control Kit LightCycler® 480インスツルメントを使用した、定量リアルタイ ムPCRとジェノタイピングのコントロール反応キット。 ® リアルタイム PCR LightCycler 480 Controlキットは、LightCycler 480インス ツルメントでリアルタイムPCRと融解曲線分析のパフォーマンスを確 認するためにデザインされたキットです。LightCycler® 480システム の速さ、正確さ、ウェル間の再現性などを検証することが出来ます。 適切なソフトウェアを使用して、HybProbeプローブを使用したSNP 解析や、2色の加水分解プローブを使用した定量実験のデモンストレー ションが可能です。 利点 ■ 機器や試薬のパフォーマンスを確認するために便利な キットです。 ■様 々 な ア プ リ ケ ー シ ョ ン で 使 用 で き る た め LightCycler® 480システムの汎用性と性能を確認す ることができます。 ■ スタンダードはあらかじめ希釈されているので、セッ トアップが簡単です。 ■ LightCycler® 480マ ル チ ウ ェ ル プ レ ー ト(96ま た は384の ク リ ア ま た は ホ ワ イ ト タ イ プ プ レ ー ト)と LightCycler® 480試薬(LightCycler® 480 Probes Master、LightCycler® 480 Genotyping Master、 LightCycler® 480 SYBR Green ⅠMaster)と合わ せて使用するためのコントロールアッセイ用キットで す。 PCR 製品概要 キットには、あらかじめ段階希釈されたヒトターゲット遺伝子サン プル(102、103、2×103、104、105、106コピー／ウェル)が含まれ、 定量を行うことが可能です。また、インターナルコントロールも含ま れます。プロトコールに従ったピペッティング手順で96または384 ウェルプレートへ24回分注することが可能です。スタンダードとター ゲットは、それぞれFAMとLightCycler® Red 610でラベルされた Universal ProbeLibraryの加水分解プローブを使用して検出します。 ターゲット遺伝子は、変異ホモ型とヘテロ型のSNPを含むため、融 解曲線分析によるSNPジェノタイピングのデモンストレーションも可 能です。本キットには、コントロール反応が3回行える量の試薬が含 まれています。SYBR GreenⅠや高分解能融解曲線分析用の試薬と合 わせて使用することも可能です。 背景情報 412 希望販売価格 ¥54,000 製品構成 アプリケーション ® 包装単位 1キット (3コントロール反応分) LightCycler® 480システムは、同一ラン内において高いPCRと 融解曲線分析の再現性をもたらすシステムで、1000コピーと2000 コピーの違いを区別することも可能で、マルチウェルプレート上の外 周(Edge)部分においてもウェル間誤差が最小限です。LightCycler® 480 Controlキットは、ユーザーがこれらの機能を確認したり、設置 時や定期的に機器のパフォーマンスを確認するために利用されます。 提供されるプロトコールは、もっとも重要な2つのアプリケーション (定量とジェノタイピング)と2つのプローブフォーマット(HybProbe プローブとUniversal ProbeLibrary由来の加水分解プローブ)につい て提供されます。 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7 8. 9. 10. 11. 12. 13. ターゲット遺伝子(野生型)、102コピー /5μl、45μl ターゲット遺伝子(野生型)、103コピー /5μl、405μl ターゲット遺伝子(野生型)、2×103コピー /5μl、405μl ターゲット遺伝子(野生型)、104コピー /5μl、45μl ターゲット遺伝子(野生型)、105コピー /5μl、90μl ターゲット遺伝子(野生型)、106コピー /5μl、45μl ターゲット遺伝子(ヘテロ型)、45μl ターゲット遺伝子(変異型)、45μl プライマーミックス、243μl ジェノタイピング用プローブ、80μl 定量用プローブ、10×濃度、450μl インターナルコントロール、10×濃度、450μl H2O、PCR-grade、1000μl 品 質 機能試験：LightCycler® 480 Controlキ ッ ト は、LightCycler® 480インスツルメントを使用して機能試験が行われていま す。 注意：本 キ ッ ト に は、PCR酵 素 は 含 ま れ て い ま せ ん。 別 途、 LightCycler® 480用 試 薬 を ご 用 意 く だ さ い。 ま た、 LightCycler® 480マルチウェルプレート(96または384ウェ ル、クリアまたはホワイト)を別途ご用意ください。 本 コ ン ト ロ ー ル キ ッ ト は、LightCycler® 480 High Resolution Meltingマスター (Cat. No. 4 909 631)を使用 した高分解能融解曲線分析(High Resolution Melting)のデモ ンストレーションを行うことも可能です。 LightCycler® 480マルチウェルプレート 96 ホワ イトに関するより詳しい情報は、401ページを参照 ください。 LightCycler® 480マルチウェルプレート 384 ホワ イトに関するより詳しい情報は、402ページを参照 ください。 LightCycler® 480マルチウェルプレート 96 クリ アに関するより詳しい情報は、403ページを参照く ださい。 LightCycler® 480マルチウェルプレート 384 クリ アに関するより詳しい情報は、404ページを参照く ださい。 LightCycler® 480シーリングホイルに関するより 詳しい情報は、405ページを参照ください。 LightCycler® 480 SYBR GreenⅠマスターに関す るより詳しい情報は、408ページを参照ください。 LightCycler® 480 Probe マスターに関するより詳 しい情報は、409ページを参照ください。 LightCycler® 480 Genotyping マスターに関する より詳しい情報は、410ページを参照ください。 Universal ProbeLibraryに 関 す る よ り 詳 し い 情 報 は、458ページを参照ください。 免責条項 526ページのno. 3を参照ください。 528ページのno. 13を参照ください。 528ページのno. 46を参照ください。 アプリケーション、プロトコール、製品、マニュアルについてのより詳しい情報は、 LightCycletスペシャルサイトwww.lightcycler.comを参照ください。 LightCycler® 480システム LightCycler® 480システム - キットと試薬 LightCycler® 480 RNA マスター Hydrolysis Probes 製品番号 04 991 885 001 LightCycler® 480 RNA Master Hydrolysis Probes 包装単位 1キット (500反応分/20μl反応) 5 希望販売価格 ¥80,000 LightCycler® 480システムを使用して、1ステップRT-PCRを行う ための使いやすい反応溶液 アプリケーション 背景情報 LightCycler® 480 RNAマスター Hydrolysis Probesは、加水分 解プローブ(例；Universal ProbeLibraryプローブ)を使用して、迅速 アプタマーとTth DNAポリメラーゼを使用しているためHot Start 反応を行うことが可能です。 で正確なサイクリングコンディションのLightCycler® 480インスツ Tth DNAポ リ メ ラ ー ゼ は、 熱 耐 性 のRNA依 存 の 逆 転 写 活 性 と、 ルメントのマルチウェルプレート上で、1ステップRT-PCRを行うた DNA依存のポリメラーゼ活性をもつ酵素で、逆転写反応(RT)とPCR めに最適化された、使いやすい反応試薬です。 を1チューブ内で連続して行うことが可能です。 チドで、Tth酵素が最適な温度以下の温度においてターゲットDNAと 利点 結合することを防ぎます。そのため反応溶液の調製時や、RT前の温度 ■ 逆転写反応とサイクリングが短時間で行えるためアッ セイ時間を節約することが可能です。96または384 ウェルプレートを使用して45分以内で正確なqPCR のデータを得ることが出来ます。 ■ キットに同梱のエンハンサー溶液を使用すれば、シグ ナルのダイナミクスと感度(0.1 pgのトータルRNA) をさらに高めることも可能です。 ■ ターゲットとリファレンス遺伝子のマルチプレックス 検出も可能です。 ■ DNAとRNAウイルスをターゲットにした同時反応も 可能です。 においてプライマーの伸長が起こることはありません。温度が高温に 達すると、アプタマーは、酵素から外れ、RTやDNAポリメラーゼに よる反応が可能になります。RNAの2次構造に対応するためにRTの温 度は61℃にしてインキュベーションすることをお勧めします。高い特 リアルタイム PCR アプタマーは、ポリメラーゼの活性中心に結合するオリゴヌクレオ 異性と効率でcDNAを合成することは、より高い特異性と感度のPCR の結果をもたらします。 アプタマーを使用したHot Startは別途インキュベーション時間や ピペッティング、反応時間を延長する必要がないため便利で効果的な 方法です。アプタマーを使用したHot Startのプロトコールは、他の 酵素の処理を必要とせず、PCR産物のオンライン検出や、反応後のハ ンドリングに影響を与えません。 製品構成 製品概要 本キットには、RNAマスターミックス(バッファ、ヌクレオチド、 1. 2. 3. 4. LightCycler® 480 RNA Master Hydrolysis Probes 2.7×濃度、5×740μl Mn(OAC)2 Stock 溶液、50 mM、1 ml H2O、PCR-grade、5×1 ml エンハンサー溶液、20×濃度、500μl 溶 液 が 含 ま れ ま す。LightCycler® 480 RNAマ ス タ ー Hydrolysis 品 質 Probesは、PCR産物のキャリーオーバーコンタミネーションを防ぐ 機能試験：LightCycler® 480 RNAマ ス タ ー Hydrolysis Probes ために、熱不安定性ウラシル DNAグリコシラーゼを使用することも は、LightCycler® 480インスツルメントを使用して、ター 可能です。 ゲット遺伝子としてベータアクチン、HeLa細胞由来のトー PCR 酵 素)、Mn(OAc)2 stock溶 液、PCR-grade H2O、 エ ン ハ ン サ ー タルRNA、Universal ProbeLibraryプローブで機能試験 が行われています。 LightCycler® ウラシル DNA グリコシラーゼに関す るより詳しい情報は、440ページを参照ください。 Universal ProbeLibraryについてのより詳しい情報 は、458ページを参照ください。 413 アプリケーション、プロトコール、製品、マニュアルについてのより詳しい情報は、 LightCycletスペシャルサイトwww.lightcycler.comを参照ください。 5 LightCycler® 480システム LightCycler® 480システム - キットと試薬 LightCycler® 480 CYAN 500ラベリング試薬 LightCycler® 480 CYAN 500 Labeling Reagent 製品番号 04 764 153 001 包装単位 100μmol 希望販売価格 ¥58,000 LightCycler® 480インスツルメントで検出するためのラベルされ たオリゴヌクレオチドを調製するための試薬 アプリケーション LightCycler® 480 CYAN 500ラベリング試薬は、LightCycler® 480 CYAN 500色素をオリゴヌクレオチドの内部または末端にラベ 製品概要 本製品は、オリゴヌクレオチド合成機に対応したガラス容器に黄色 の固形物として供給されます。 ルするために使用する試薬です。合成されたHybProbeプローブや加 水分解プローブは、LightCycler® 480インスツルメントを使用した 遺伝子発現やジェノタイピングアッセイに使用することが出来ます。 背景情報 オリゴヌクレオチドは、LightCycler® 480 CYAN 500ラベリン グ試薬と固相リン酸アミダイト合成法により反応されます。ジメトキ リアルタイム PCR シトリチル基を含むため、この試薬は、一般的なリン酸アミダイト法 利点 を使用することが可能です。そのため、HPLCによる精製で簡単に産 ■ オリゴヌクレオチドの内部および末端へ効率よくラベ ルすることが出来ます。 ■ HPLC機器を使用して、確実に反応産物を精製してく ださい。 ■ 新しく開発されたCYAN 500色素でラベルされたプ ローブを使用すれば、優れたシグナルダイナミックス が得られます。 物を精製することが可能です。 LightCycler® 480 CYAN 500ラベリング試薬でラベルされた オリゴヌクレオチドは、最大励起波長450 nm、最大検出波長500 nm(50 mM Tris、pH 8.3)を示します。 製品構成 100μmolのラベリング試薬を含むボトル 注意：LightCycler® 480 CYAN 500ラベリング試薬で合成された プローブは、LightCycler® 480システムに特に適しています。 しかしながら、カローセルタイプのLightCycler®の検出フィル ターには適していないため使用することが出来ません。 免責条項 PCR 528ページのno. 15を参照ください。 414 アプリケーション、プロトコール、製品、マニュアルについてのより詳しい情報は、 LightCycletスペシャルサイトwww.lightcycler.comを参照ください。 LightCycler® 96 システム LightCycler® 96 システム概要 5 LightCycler® 96 システム LightCycler® 96システムは、ロシュ・ダイアグノスティックス社が10年以上の長きにわたり蓄積した知識と経験に基づいて開発されました。 この最新のリアルタイムPCR装置は、研究を成功に導くために十分なパフォーマンスを発揮します。 LightCycler® 96は、トップリサーチャーがリアルタイムPCR装置に期待するすべてを持ち合わせています。正確性、温度均一性、再現性の 全てにおける高い機器性能と、誰もが直観的に使用できるソフトウェアとのコンビネーションで構成されています。 相対定量や絶対定量、エンドポイントジェノタイピングなどのスタンダードな解析法に加え、定性検出（+/- 判定）プログラムとHigh Resolution Melting（HRM）のような応用的解析法にも対応しました。 信頼性が高く高機能なハイエンドクラスのリアルタイムPCRシステムが、すべての研究者にとって身近な存在になりました。 新たな高みへ導くオールインワンシステム 実験データは補正不要の高い品質で信頼性の高い結果を導きます。 ・スピーディで正確な温度制御と、グラスファイバーを用いた革新的 す。 ・LightCycler® という名にふさわしい正確性の高い結果が得られま す。 ・マルチプレックス遺伝子発現解析やHRM解析でもパッシブリファレ ンスダイを添加する必要はありません。また、ユーザーによる定期 的な色補正や温度補正も全く不要です。 リアルタイム PCR な光学ユニットにより、96ウェルのデータがバイアス無く得られま アッセイフォーマットとスループットに応じて、柔軟な実験デザイン が可能になるので、経済的です。 ・最適化された試薬と消耗品からなる、コストパフォーマンスの高い バリューパックをご用意しました。 ・実験に応じて96ウェルプレートと8連チューブが選択可能です。 ・ラン予約機能により装置がスタンバイ状態でもヒートリッドのプレ ヒート完了を待つ必要はありません。 ビギナーからエキスパートまでストレスなく使え、スピーディに結果 が得られます。 ・直観的に操作できるタッチスクリーンインターフェイスと強力な データ解析ソフトウェアが研究をサポートします。 ・ネットワークやUSBスティック、e-mailなど、仕様スタイルに合わ ・自動バックアップ機能を利用して、ランが完了した実験データを PCR せて様々な接続方法が選択できます。 ・e-mail経由で簡単にデータを取得し、すぐに解析できます。 ネットワーク上で共有できます。 415 新着情報・製品説明書は(研究用試薬・機器専用)ホームページ http://www.roche-biochem.jpを ご覧ください。 5 LightCycler® 96 システム LightCycler® 96 システム - インスツルメント LightCycler® 96インスツルメント LightCycler® 96 Instrument 製品番号 05 815 916 001 包装単位 1台 希望販売価格 ¥3,800,000 日常的な使い易さと利便性を追求した最新のリアルタイムPCR装置 ハードウェア アプリケーション ® LightCycler 96システムは、日常的な使い易さと利便性を追求し た最新のリアルタイムPCR装置です。独自の光学ユニットやサーマル ペルチェ素子、96ウェルブロック HRMにおいてもキャリブレーション不要 4.4℃ /sec. 2.2℃ /sec. 37 - 98℃ ±0.2℃ ±0.4℃（平均0.1℃以下） 搭載 37 - 98℃ 最大20℃ High-power broad spectrum LED ・わずか43dBの静寂性 加熱速度 冷却速度 温度制御レンジ 温度正確性 温度均一性 グラジエント機能 グラジエント制御レンジ グラジエント設定範囲 蛍光励起光源 測定時間 全ウェル同時データ取得（10 - 1,000ミリ秒） （インテグレーションタイム） 検出器 CCDカメラ ・光ファイバーシステム 光学システム ・4励起波長/4検出波長 ・非可動方式 日常的なメンテナンスは不要 メンテナンスとサポート オプションでのIQOQサービス完備 ・用途に合わせて8連チューブと96ウェルプレートも使用可能 解析ソフトウェア ブロックユニットなど、最新の機能を備えた高性能リアルタイムPCR がグッと身近になります。 利 点 ・デスクトップに収まる省スペース設計 ・迅速なPCR反応（40サイクル＜40分以内） リアルタイム PCR 温度制御方式 ・PC不要でタッチパネル操作だけでランニング可能（タッチパネル画 面でリアルタイムに増幅曲線の確認が可能） ・グラスファイバーを介した検出系によりウェル間差を抑えたシグナ ル検出が可能 OS 製品概要 LightCycler® 96 の革新的な光学系とサーマルブロックが、多くの データ解析 実験に求められるバイアスの無い結果を導きます。 高輝度LEDと96×2 本のグラスファイバーを搭載しており、96 ウェル全てにおいて同時に励起し、同時にデータ検出を行います。こ れにより、エッジ効果を排除し、光学スキャニングを用いる装置で発 データエクスポート データのインポートと エクスポート txtおよびcsv エラーフラグ ・オートフラグ機能（ポジティブコントロール/ネガティブコ ントロール） ・ユーザー定義可能（スタンダードカーブのエラー等） 生しがちな、データ取得時間のタイムラグによるデータ誤差を防止で きます。 Windows XP、7および8 ・絶対定量 ・相対定量 ・Tmコーリング ・エンドポイントジェノタイピング ・HRM ・定性的検出 ・Result table：テキストファイル ・Charts：テキストファイル、イメージファイル エレクトロフォーミング製法のシルバーブロックとヒートリッドに より、温度均一性が向上し、ウェル間差が最少になりました。 ソフトウェアは、ビギナーからエキスパートまで直観的に簡単に操 作できます。 PCR これからリアルタイムPCRを始める方でも、一般的な遺伝子発現解 ランモード スタンドアローン PC接続 析や遺伝子変異解析などは簡単にスタートできます。また、エキスパー LAN接続 外部デバイス トは、このシステムが持つ強力な解析機能を最大限に活用できます。 アクティブコミュニケーション System Specification アプリケーション 概要 ダイナミックレンジ 重量 サイズ 作動ノイズ 電源 反応液量 サンプルフォーマット PCR反応時間 約27 kg 幅40 cm×奥行き40 cm×高さ53 cm 43 dB以下 AC100 - 125 V±10%、600 W、50/60 Hz 10 - 50μl 96ウェルプレート、8連チューブ 3ステップ40サイクル：40分以内 HRM：90分以内 励起/検出波長（nm） 検出フォーマット マルチプレックス その他の色素 パッシブリファレンスダイ （ROXなど） タッチスクリーンで可能な操作：プログラミング、ランニン グ、装置設定、リアルタイムモニタリング PCで可能な操作：Cp値を標準偏差と併せた棒グラフとして 表示 オンラインモニタリング可能 USB接続バーコードスキャナ利用可能 機器からのEmail通知機能：ラン成否および実験結果ファイ ル添付 10 log 470/514（SYBR Green I、FAM、ResoLight） 533/572（VIC、Hex、Yellow555） 577/620（Red610、Texas Red） 645/697（Cy5） インターカレーター（SYBR Green I、ResoLight） 加水分解プローブ（UPLプローブ、TaqMan®プローブ） 4 チャンネルキャリブレーション済み（ユーザー操作不要） チャンネル別あるいは1 画面で同時にすべてのチャンネルの 確認が可能 ・モノカラーでは、検出波長500 - 720 nm ・デュアルカラーでは、キャリブレーション済みの色素のみ 使用可能 不要 製品構成 1. 2. 3. 4. 5. LightCycler® 96（本体） LightCycler® 96マニュアル LightCycler® 96 USBメモリスティック（ソフトウェアを含む） 電源ケーブル LANケーブル 416 新着情報・製品説明書は(研究用試薬・機器専用)ホームページ http://www.roche-biochem.jpを ご覧ください。 LightCycler® 96 システム LightCycler® 96 システム - 消耗品 LightCycler® 8-Tube Strip（white） 製品番号 06 612 601 001 LightCycler® 8-Tube Strips (white) LightCycler® 96 Instrument用に最適化された反応容器 アプリケーション 希望販売価格 ¥15,000 室温 製品概要 96や LightCycler® 8-Tube Stripsは、8連 ス ト リ ッ プ で つ な が っ 480を使用して遺伝子検出、遺伝子定量、エンドポイントジェノタイ た白色のポリプロピレン製の反応容器です。そのサイズと材質は ピングやHigh-Resolution Melting解析を行うための反応容器です。 LightCycler® 96インスツルメントを用いた反応容量10-100μl（推 LightCycler ® 包装単位 120 strips（white）と 120 caps（clear） 8-Tube Strips (white)は、LightCycler 5 ® 奨容量は20μl）でのアッセイに最適化されています。反応系はチュー 利 点 ブストリップとともに提供されるフラットキャップのストリップを用 ■一 般 的 な 反 応 容 器； 特 別 な ラ ッ ク や 遠 心 機 の 準 備 は 不 要 で す いて密閉されます。 （LightCycler® 480で 使 用 す る 場 合 は、 別 途Plate Adapter ® 背景情報 LightCycler® 96システムは高性能なサーマルブロックと光学シス ■LightCycler 96インスツルメントに最適です。 テムを採用しています。LightCycler® 8-Tube Strips (white)は、最 ■チューブストリップとキャップストリップが一緒に提供されるので 適な結果のためにブロックに完全にフィットし温度を最適に伝達する 便利です。 反応容器です。 製品構成 リアルタイム PCR Plateが必要です）。 ■同時に複数の反応を行うのに取り扱いのしやすい反応容器です。 LightCycler® 8-Tube Stripsは、10個の非滅菌のプラスチック バッグ中にチューブとフラットキャップがそれぞれ10ｘ12ストリッ PCR プ梱包されて提供されます。 417 新着情報・製品説明書は(研究用試薬・機器専用)ホームページ http://www.roche-biochem.jpを ご覧ください。 5 LightCycler® 96 システム LightCycler® 96 システム - 消耗品 LightCycler® 96 DNA Green Value Pack S LightCycler® 96 DNA Green Value Pack S 専用反応容器と純正qPCRマスターのパッケージ 製品番号 包装単位 希望販売価格 06 713 092 001 FastStart Essential DNA Green ¥225,000 Master(25ml)、LightCycler® 480 室温 Multiwell Plates 96(50) 製品構成 FastStart Essential DNA Green Master(1×5 ml)×5 LightCycler® 480 Multiplex Plates, 96 well(50 plates)×1 LightCycler® 96 DNA Green Value Pack L LightCycler® 96 DNA Green Value Pack L リアルタイム PCR 専用反応容器と純正qPCRマスターのパッケージ 製品番号 包装単位 希望販売価格 06 713 106 001 FastStart Essential DNA Green ¥650,000 Master(100ml)、LightCycler® 480 室温 Multiwell Plates 96(100) 製品構成 FastStart Essential DNA Green Master(1×5 ml)×20 LightCycler® 480 Multiplex Plates, 96 well(50 plates)×2 LightCycler® 96 DNA Probes Value Pack S LightCycler® 96 DNA Probes Value Pack S 専用反応容器と純正qPCRマスターのパッケージ 製品番号 包装単位 希望販売価格 06 713 076 001 FastStart Essential DNA Probe ¥225,000 Master(25 ml)、LightCycler® 480 室温 Multiwell Plates 96(50) 製品構成 FastStart Essential DNA Probes Master(1×5 ml)×5 LightCycler® 480 Multiplex Plates, 96 well(50 plates)×1 LightCycler® 96 DNA Probes Value Pack L LightCycler® 96 DNA Probes Value Pack L PCR 専用反応容器と純正qPCRマスターのパッケージ 製品番号 包装単位 希望販売価格 06 713 122 001 FastStart Essential DNA Probe ¥650,000 Master(100 ml)、LightCycler® 480 室温 Multiwell Plates 96(100) 製品構成 FastStart Essential DNA Probes Master(1×5 ml)×20 LightCycler® 480 Multiplex Plates, 96 well(50 plates)×2 418 新着情報・製品説明書は(研究用試薬・機器専用)ホームページ http://www.roche-biochem.jpを ご覧ください。 LightCycler® Nano システム LightCycler® Nano システム概要 5 LightCycler® Nano システム LightCycler® Nanoシステムはあなたの研究室を明るくします。LEDランプの色がPCRランの各ステージをお知らせします。人間工学に基づ いたなめらかな形状は毎日の作業を快適にし、あなたの作業効率を高めます。そして、正確で再現性の高い研究を後押しします。見た目を犠牲 にすることなく、迅速、高感度、正確なリアルタイムPCRを達成しました。 LightCycler® Nano リアルタイムPCRシステム Size: Reduced. Fun: Amplified. ® LightCycler Nanoは、リアルタイムPCRのスタンダードとして ® 高い評価をいただいているLightCycler シリーズのエントリーモデル です。 LightCycler® Nanoはあらゆるユーザー層にマッチングする製品コ ンセプトで開発されており、お求めやすい価格設定でありながら、エ ントリーマシンのカテゴリーに縛られない様々な魅力と価値を有して います。スペックや機能のみを重視するのではなく、「ユーザーにとっ てのメリット」を考え抜いて開発されたLightCycler® Nanoは、リア ルタイムPCRの普及にパラダイムシフトをもたらすことでしょう。 ・コンパクト ® LightCycler Nanoは、本体幅が240mmととてもコンパクトなの ならず、LAN接続やUSBメモリでの操作が可能など、あたかもコン ピュータの周辺機器の１つとして使える手軽さを有しています。重 さも約7kgと軽量なので、ケーブルを外すだけで、女性でも「机か ら机」「部屋から部屋」への移動がとても簡単です。 ・静音性 LightCycler® Nanoはパーソナルユースを意識して、静粛性にもこ リアルタイム PCR で、モニタやノートパソコンといっしょに机の上に置いても邪魔に だわりました。冷却用ファンの動作音を極力低減し、光学システム の可動部を廃することにより、作動音40dB以下を実現しました。 これは、図書館の静かさに匹敵し、動作していることをほとんど意 識させません。どこに置いてもランを行うことができるようになり、 本当のパーソナル化を成し遂げることが出来ました。 ・Windows、MacOS 対応のソフトウェア LightCycler® NanoはMac OSに も 対 応 し て い ま す。 ご 自 分 の MacでリアルタイムPCRのデータを解析できるようになったことは 画期的と言えるでしょう。LightCycler® Nanoは、マックを愛用す PCR る研究者には、オンリーワンのリアルタイムPCRになります。 419 新着情報・製品説明書は(研究用試薬・機器専用)ホームページ http://www.roche-biochem.jpを ご覧ください。 5 LightCycler® Nano システム LightCycler® Nano システム LightCycler® NanoInstrument 1ランで32サンプルまでのサンプルに対応したチューブベースの リアルタイムPCRシステム アプリケーション 製品番号 06 407 773 001 包装単位 1台 希望販売価格 ¥1,390,000 製品概要 LightCycler® Nanoインスツルメントは、32サンプルの遺伝子発現お LightCycler® Nanoシステムは設置、移動が簡単です。ストリップ よび遺伝子型解析をモノカラ―あるいはデュアルカラーアッセイで行う でつながった0.2 ml チューブで最大32サンプルを一度にアッセイで リアルタイムPCRシステムです。 本機器はそのコンパクトサイズ、軽量さ、 きます。ぺルティエ素子を用いて迅速な加熱と冷却を行います。さら 反応容器とソフトウェアの使いやすさ、きわめて静かな動作音により、日 にヒートリッドでアッセイのパフォーマンスをサポートします。一般 ® 常的なリアルタイムPCRでの使用に最適です。 LightCycler Nanoインス 的にqPCRで使用される既存のすべての蛍光プローブの励起が可能な ツルメントは研究用です。診断を目的として使用することはできません。 500 nm の光を供給できるようにフィルター処理した高輝度LEDで 励起を行います。蛍光検出のスペクトルを得るためにプリズムを使用 リアルタイム PCR します。これらのスペクトルはCMOSカメラで撮像されます。 直観的なソフトウェアは以下の要素を提供します。 ・主要なアプリケーションに対するテンプレートを使用した迅速な実 験の開始 ・簡単なサンプルとターゲット情報の編集と設定 ・わかりやすいラン中および解析時のプロット、プレートビューにお けるサンプルの色分け ・絶対定量、相対定量、融解曲線解析、エンドポイントジェノタイピ ング、High Resolution Meltingのための解析モジュール ・Windows と Mas システムに対する互換性 図1: LightCycler® Nano インスツルメント ・あらかじめ設定したrun definition fileを用いたUSBフラッシュド ライブからの機器の起動 PCR 利点 ■ LightCycler® Nanoインスツルメントと専用試薬、反 応容器を使って、感度と特異性の高い定量リアルタイ ムPCRを実施します。 ■ 使いやすいLightCycler® Nanoインスツルメントを用 いて、迅速、高感度、再現性の高い核酸の定性、定量 検出、融解曲線解析、SNPジェノタイピング、変異ス キャニング（試薬別売）の結果が得られます。 ■ LightCycler® Nanoシステムの優れた温度制御とシグ ナル検出技術で、ウェル間でのデータの均一性、幅広 い温度レンジにおける検出感度が得られます。 ■ 標識した加水分解プローブや蛍光色素により高度で多 様にLightCycler® Nanoインスツルメントをご使用い ただけます。 ■ 優れたデザイン、小さなサイズと最小限のノイズレベ ルを体感いただけます。 LightCycler® NanoソフトウェアはUSBフラッシュドライブで提 供され、簡単にインストールできます。ソフトウェアにはライセンス による制限はありません。ネットワークにインストールすればLANを 介して接続した複数台のLightCycler® Nanoインスツルメントをソフ トウェアで制御することが可能です。 試薬、消耗品については各製品のページを参照ください。 420 新着情報・製品説明書は(研究用試薬・機器専用)ホームページ http://www.roche-biochem.jpを ご覧ください。 LightCycler® Nano システム LightCycler® Nano システム 240 mm W×270 mm D×230 mm H 約7 kg 40 dB以下 100 - 240 V (単相) 電源 50/60 Hz 170 W サンプル数（1ラン） 最大32サンプル 8-tube strips (LightCycler ® 8-Tube 反応容器 Strips、clear、with caps) 反応液量 10 - 100 μl (20 μl 推奨) 温度制御方式 ぺルティエ素子 温度制御レンジ 40 - 99℃ 加熱冷却速度 加熱：5℃ /sec、冷却：4℃ /sec 温度均一性 ± 0.1℃ 温度正確性 ± 0.25℃ 反応時間 50 分以下 蛍光励起光源 青色LED (495 - 505 nm) 蛍光検出波長 510 - 750 nm (CMOS カメラ) インターカレーター (SYBR GreenⅠ等)、 アッセイフォーマット 加水分解プローブ（UPLプローブなど） SYBR GreenⅠ/ FAM / ResoLight; VIC キャリブレーション済み / HEX / Yellow555; LC RED 610 / 蛍光色素 Texas Red; Cy5 マルチプレックスラン 2色 ・絶対定量、相対定量 ・融解曲線分析 アプリケーション ・エンドポイントジェノタイピング ・High-Resolution Melting ・2倍差の判別 感度 ・9 log のダイナミックレンジ ・1コピーの検出 ・コンピュータとの直接接続 接続オプション ・PCフリー（USBによる制御） ・LAN接続 製品構成 1. LightCycler® Nano インスツルメント A) LightCycler® Nano インスツルメント B) LightCycler® Nano クイックガイド C) LightCycler® Nano USB stick containing ・Demo Data ・Documentation ・Experiment Templates ・Licenses ・Software D) Cable Mains Power (EU) E) Cable Mains Power (US) F) LAN Cable (2 m) G) ACアダプター 免責条項 規制やライセンス、免責条項についてはオンラインテクニカルサポー トを参照ください。 http://technical-support.roche.com/default.aspx PCR 本体サイズ 重さ 作動ノイズ リアルタイム PCR System specifications: 5 421 新着情報・製品説明書は(研究用試薬・機器専用)ホームページ http://www.roche-biochem.jpを ご覧ください。 5 LightCycler® Nano システム LightCycler® Nano システム - キット FastStart Essential DNA Probes Master 製品番号 06 402 682 001 LightCycler® Nano インスツルメント用。2 x 濃度で使いやすいプ ローブ用ホットスタートタイプのリアルタイムPCR反応ミックス 06 924 492 001 アプリケーション 製品構成 FastStart Essential DNA Probes Master FastStart Essential DNA Probes Masterは、適切なプローブ 包装単位 5 x 1 ml （500 反応分/ 20 µl 反応) 10 x 5 ml （5,000 反応分/ 20 µl 反応） 希望販売価格 ¥40,000 ¥320,000 1. FastStart Essential DNA Probes Master、2 x 濃度 2. 水、PCR グレード （Universal ProbeLibraryプローブ、加水分解プローブなど）と遺伝 子特異的なプライマーによるLightCycler® Nanoインスツルメントを 用いたリアルタイムPCRで使用するためにデザインされています。本 キットは遺伝子定量のためのホットスタートPCRに最適です。 品 質 Function test: The FastStart Essential DNA Probes Masterは、 LightCycler® リアルタイム PCR Nanoインスツルメントを使用し、キットのプロトコールに従って試 利点 験されています。 ■ 2 x 濃度の使いやすいホットスタートタイプの試薬で 時間と手間を省けます。 ■ LightCycler® Nanoインスツルメントを用いて高感度 で特異性の高い定量PCR、RT-PCRやエンドポイント ジェノタイピング解析を実施できます。 ■ MgCl2の最適化は不要で、時間を節約することが可能 注 意 です。 ■ LightCycler® NanoインスツルメントとLightCycler® 8-Tube Stripsを合わせて使用することで、高品質の 結果を再現性よく得ることが可能です。 ■ Universal ProbeLibraryプローブを合わせて使用す ると、新しい定量PCRアッセイを迅速に構築し、結果 を得ることが可能です。 TranscriptaseなどのcDNA合成反応の後で使用することで、2ステッ 製品概要 FastStart Essential DNA Probes Masterは、LightCycler® PCR NanoインスツルメントでLightCycler® 8-Tube Stripsを使用して、 加水分解プローブフォーマットにて反応させるために特に最適化され た使いやすい反応試薬です。この試薬には、PCRにおける非特異的な 増幅産物の生成を最小限に抑え、特異性と感度を高めるために特に改 良された、ホットスタートタイプのFastSart Taq DNAポリメラーゼ が含まれます。 背景情報 加水分解プローブアッセイは、蛍光レポーター色素とクエンチャー の2つでラベルされた、1つのプローブを使用するアッセイです。プ ローブが完全（インタクト）な状態では、クエンチャーはレポーター 色素に近接しているためレポーターの蛍光は抑制されています。プロー ブがターゲット配列にハイブリダイズして、ポリメラーゼの5’ ヌクレ FastStart Essential DNA Probes Masterは、加水分解プロー ブ(例；Universal ProbeLibraryプローブ)を使用するために特に最 適化されています。本キットはPCR産物のキャリーオーバーコンタ ミネーションを防ぐために、熱不安定性ウラシルDNAグリコシラー ゼと組み合わせて使用することも可能です。Transcriptor Reverse プリアルタイムPCRを行うのに最適です。 RealTime ready Cell Lysis Kitに関するより詳し い情報は、470ページを参照ください。 LightCycler 8-Tube Strips (clear)に関するより 詳しい情報は、424ページを参照ください。 LightCycler Nanoインスツルメントに関するより 詳しい情報は、420ページを参照ください。 LightCycler 480 RNA Master Hydrolysis Probesに関するより詳しい情報は、413ページを参 照ください。 Universal ProbeLibraryに 関 す る よ り 詳 し い 情 報 は、458ページを参照ください。 RealTime ready Catalog Assaysに関するより詳 しい情報は、449ページを参照ください。 RealTime ready Designer Assaysに関するより 詳しい情報は、449ページを参照ください。 Transcriptor Universal cDNA Masterに 関 す る より詳しい情報は、480ページを参照ください。 LightCycler ウラシルDNAグリコシラーゼに関す るより詳しい情報は、440ページを参照ください。 アーゼ活性により分解されると、レポーターとクエンチャーが物理的 に離れます。PCRが進むにつれてターゲット配列の量が蓄積され、よ り多くのプローブが分解されると、抑制されないレポーターの蛍光シ グナルが増加します。 本 製 品 の2 x 濃 度 の マ ス タ ー ミ ッ ク ス は、 殆 ど の プ ラ イ マ ー が 免責条項 規制やライセンス、免責条項についてはオンラインテクニカルサ ポートを参照ください。 http://technical-support.roche.com/default.aspx ワークするようにMgCl2濃度が最適化されているためプライマーご とにMgCl2濃度を最適化する必要はありません。マスターミックス の他には、テンプレートDNA、PCRプライマー、加水分解プローブ (Universal ProbeLibrary等)を加えるだけです。 422 新着情報・製品説明書は(研究用試薬・機器専用)ホームページ http://www.roche-biochem.jpを ご覧ください。 LightCycler® Nano システム LightCycler® Nano システム - キット 製品番号 06 402 712 001 FastStart Essential DNA Green Master FastStart Essential DNA Green Master LightCycler® Nanoインスツルメント用。2 x 濃度で使いやすい SYBR GreenⅠ用ホットスタートタイプのリアルタイムPCR反応 ミックス 06 924 204 001 アプリケーション 製品構成 FastStart Essential DNA Green Masterは、LightCycler ® 包装単位 5 x 1 ml （500 反応分/ 20 µl 反応) 10 x 5 ml （5,000 反応分/ 20 µl 反応） 5 希望販売価格 ¥40,000 ¥320,000 1. FastStart Essential DNA Green Master、2x 濃度 2. 水、PCR グレード Nanoインスツルメントを使用してDNAを増幅検出するためのSYBR GreenⅠ色素を含んだ反応試薬です。本キットは、遺伝子の検出と定 量のためのホットスタートPCRに最適です。 品 質 Function test: FastStart Essential DNA Green MasterはLightCycler® Nano 製品概要 FastStart Essential DNA Green Masterは、 定 性 お よ び 定 量 PCRに必要なコンポーネントが1つにまとまったホットスタートタイ プの反応試薬です。FastStart Taq DNAポリメラーゼとPCR産物の 検出と特徴づけをするために必要な2本鎖DNAに特異的に結合する SYBR GreenⅠ色素が含まれます。本キットは使いやすいマスター ミックスとして提供されます。反応溶液の調製はテンプレートDNA とプライマーを加えるだけです。異なるタイプのDNA(例；ゲノム DNA、cDNA)を使用することが可能です。 背景情報 SYBR GreenⅠは2本鎖DNAに特異的に結合する色素です。DNAが 合成される各段階で、反応試薬に含まれるSYBR GreenⅠ色素が増幅 されたPCR産物に結合します。アンプリコンはそれらの蛍光で検出さ れます。 FastStart Essential DNA Green Masterは、 特 異 性 と 感 度、 ています。 注 意 The FastStart Essential DNA Green Masterは、PCR産物の キャリーオーバーコンタミネーションを防ぐために、熱不安定性ウ リアルタイム PCR ■ LightCycler® Nanoインスツルメントを使用して、定 量PCRや検出を高感度に特異的に行うことが可能で す。 ■ LightCycler® NanoインスツルメントとLightCycler® 8-Tube Stripsを合わせて使用することで、高品質の 結果を再現性良く得ることが可能です。 ■ 2 x 濃度の使いやすいホットスタートタイプの試薬で 時間と手間を省けます。 インスツルメントを使用し、キットのプロトコールに従って試験され ラシルDNAグリコシラーゼと組み合わせて使用することが可能です。 Transcriptor Reverse TranscriptaseなどのcDNA合成反応の後で 使用することで、2ステップリアルタイムPCRを行うのに最適です。 LightCycler 8-Tube Strips (clear)に関するより 詳しい情報は、424ページを参照ください。 LightCycler 480 High Resolution Melting Masterに関するより詳しい情報は、411ページを参 照ください。 LightCycler Nanoインスツルメントに関するより 詳しい情報は、420ページを参照ください。 Transcriptor Universal cDNA Masterに 関 す る より詳しい情報は、480ページを参照ください。 LightCycler ウラシルDNAグリコシラーゼに関す るより詳しい情報は、440ページを参照ください。 PCR 利点 免責条項 規制やライセンス、免責条項についてはオンラインテクニカルサ ポートを参照ください。 http://technical-support.roche.com/default.aspx PCR収量を高めるホットスタートプロトコールを採用しています。 FastStart Taq DNAポリメラーゼに修飾されたアミノ酸残基の一種 である熱不安定性の保護基は、室温においては酵素活性が不活化して います。そのためポリメラーゼが非特異的に結合しても増幅は起こり ません。FastStart Taq DNAポリメラーゼは高温（例； 95℃、10 分のプレインキュベーション）で保護基が除かれると活性化します。 423 新着情報・製品説明書は(研究用試薬・機器専用)ホームページ http://www.roche-biochem.jpを ご覧ください。 5 LightCycler® Nano システム LightCycler® Nano システム- 消耗品 LightCycler® 8-Tube Strips (clear) 製品番号 06 327 672 001 LightCycler® 8-Tube Strips (clear) LightCycler® Nano インスツルメント用に最適化した反応容器 アプリケーション ® 包装単位 120 strips (clear) と 120 caps (clear) 希望販売価格 ¥15,000 室温 背景情報 ® LightCycler 8-Tube Strips (clear)は、LightCycler Nanoイ LightCycler® Nanoシステムは高性能なサーマルブロックと光学シ ンスツルメントを使用して遺伝子検出、遺伝子定量、エンドポイント ステムを採用しています。LightCycler® 8-Tube Strips (clear)は、 ジェノタイピングやHigh-Resolution Melting解析を行うための反応 最適な結果のためにブロックに完全にフィットし温度を最適に伝達す 容器です。 る反応容器です。 製品構成 リアルタイム PCR 利点 ■ 一般的な反応容器；特別なラックや遠心機の準備は不 要です。 ■ 同時に複数の反応を行うのに取り扱いのしやすい反応 容器です。 ■ LightCycler® Nanoインスツルメントに最適です。 ■ チューブストリップとキャップストリップが一緒に提 供されるので便利です。 製品概要 LightCycler® 8-Tube Stripsは、8連ストリップでつながった透明 な ポ リ プ ロ ピ レ ン 製 の 反 応 容 器 で す。 そ の サ イ ズ と 材 質 は LightCycler® Nanoインスツルメントを用いた反応容量10-100μl （推奨容量は20μl）でのアッセイに最適化されています。反応系は LightCycler® 8-Tube Stripsは、10個の非滅菌のプラスチック バッグ中にチューブとフラットキャップがそれぞれ10 ｘ 12スト リップ梱包されて提供されます。 品 質 Function test: LightCycler® 8-Tube Strips (clear)は、LightCycler® Nanoイ ンスツルメントを使用して機能試験されています。 FastStart Essential DNA Green Masterに 関 す るより詳しい情報は、423ページを参照ください。 FastStart Essential DNA Probes Masterに関す るより詳しい情報は、422ページを参照ください。 LightCycler Nano Instrumentに関するより詳し い情報は、420ページを参照ください。 チューブストリップとともに提供されるフラットキャップのストリッ プを用いて密閉されます。 免責条項 規制やライセンス、免責条項についてはオンラインテクニカルサ ポートを参照ください。 PCR http://technical-support.roche.com/default.aspx 424 新着情報・製品説明書は(研究用試薬・機器専用)ホームページ http://www.roche-biochem.jpを ご覧ください。 LightCycler® Nanoシステム LightCycler® Nanoシステム - 消耗品 LightCycler® Nano DNA Green Value Pack S LightCycler® Nano DNA Green Value Pack S 専用反応容器と純正qPCRマスターのパッケージ 製品番号 包装単位 06 444 229 001 FastStart Essential DNA Green Master(10 ml)、LightCycler® 8-Tube Strips(120 reactions) 希望販売価格 ¥85,500 製品番号 包装単位 06 444 172 001 FastStart Essential DNA Green Master(20 ml)、LightCycler® 8-Tube Strips(240 reactions) 希望販売価格 ¥162,000 製品番号 包装単位 06 444 164 001 FastStart Essential DNA Probe Master(10 ml)、LightCycler® 8-Tube Strips(120 reactions) 希望販売価格 ¥85,500 製品番号 包装単位 06 444 156 001 FastStart Essential DNA Probe Master(20 ml)、LightCycler® 8-Tube Strips(240 reactions) 希望販売価格 ¥162,000 5 室温 製品構成 FastStart Essential DNA Green Master(1×5 ml)×2 LightCycler® Nano DNA Green Value Pack L LightCycler® Nano DNA Green Value Pack L 専用反応容器と純正qPCRマスターのパッケージ 室温 製品構成 FastStart Essential DNA Green Master(1×5 ml)×4 LightCycler® 8-Tube Strips(clear) (120 reactions)×2 LightCycler® Nano DNA Probes Value Pack S LightCycler® Nano DNA Probes Value Pack S 専用反応容器と純正qPCRマスターのパッケージ リアルタイム PCR LightCycler® 8-Tube Strips(clear) (120 reactions)×1 室温 製品構成 FastStart Essential DNA Probe Master(1×5 ml)×2 LightCycler® 8-Tube Strips(clear) (120 reactions)×1 LightCycler® Nano DNA Probes Value Pack L 専用反応容器と純正qPCRマスターのパッケージ 製品構成 室温 PCR LightCycler® Nano DNA Probes Value Pack L FastStart Essential DNA Probe Master(1×5 ml)×4 LightCycler® 8-Tube Strips(clear) (120 reactions)×2 425 新着情報・製品説明書は(研究用試薬・機器専用)ホームページ http://www.roche-biochem.jpを ご覧ください。 5 LightCycler® カローセルタイプシステム LightCycler® カローセルタイプシステム概要 ロシュ・ダイアグノスティックスのLightCycler® カローセルタイ プシステムは、1998年の発売開始より、その高いパフォーマンスと フレキシビリティで支持されてきました。成功を収めた数多くの研究 者が、このシステムの迅速さ、正確さ、感度の高さなどの利点を利用 して、様々な研究分野において、数多くのアプリケーションを開発し てきました。 リアルタイム PCR LightCycler® カローセルタイプシステムは、リアルタイムPCR のスタンダードのひとつとして確立されています。また、ハイブリ ダイゼーションプローブ法、綿密な融解曲線分析、2nd Derivative Maximum法、相対定量アッセイ、反応のリアルタイムモニタリング、 高感度なガラス製反応容器(キャピラリー )、45分以内でのアッセイ と解析、6チャンネル検出、マルチプレックス反応専用のPCR反応試 薬などを、初めて紹介したシステムでもあります。 LightCycler® カローセルタイプシステムの特長： ・一定のPCR効率：すべてのサンプルが同一のサーマルチャンバー内 で測定されるため、温度は均一で同じ条件で反応を行うことが可能 です。 ・正確性：精密なハードウェアと最適化されたソフトウェアのアルゴ リズムにより、再現性の高い正確なデータを得ることが可能です。 ・迅速なサイクリング：35サイクルのランを30分以下で行うことも 可能です。 ・広いダイナミックレンジ：1ランで10∼ 1010コピーを検出するこ 択することが出来るため、日常のアッセイと非常に低発現なター ゲットのための高感度検出アッセイの両方をフレキシブルに行うこ とが可能です。 ・最適化された温度コントロールエレメントと新しくデザインされた ファンにより、迅速で均一な熱伝導がもたらされるため、大小どち らのキャピラリーを使用しても最適で均一な温度制御が可能です。 LightCycler® カローセルタイプ PCRシステムの構成 LightCycler® 2.0 インスツルメント 427ページを参照ください。 LightCycler® カローセルタイプシステムの追加用製品 433ページを参照ください。 LightCycler® カローセルタイプシステムのソフトウェア 429ページを参照ください。 LightCycler® カローセルタイプシステムのPCRマスターミックスと試薬 435ページを参照ください。 ラベリング試薬と HybProbe プローブの2色同時検出 444ページを参照ください。 PCR とも可能です。 ・優れた感度：ヒト細胞由来の1 pgのトータルRNAから様々なター ゲット遺伝子を検出することも可能です。 ・高い再現性：クロッシングポイントの変動係数(CV)は、0.3 %以下 です。 よ り 高 い パ フ ォ ー マ ン ス と フ レ キ シ ビ リ テ ィ を 求 め る な ら、 LightCycler® 2.0 システムを。 ・上位バージョンであるLightCycler® ソフトウェア4.05以上のソフ トウェアでは、簡単に正確な相対定量解析を行うことが可能です。 ・6つの検出チャンネルにおいて530、560、610、640、670、 705 nm の蛍光を測定出来るので、マルチプレックスアッセイにお いて求められる高い感度と、検出フォーマットおよび使用可能な蛍 光物質のフレキシビリティを提供します。 ・2つのサイズのLightCycler® キャピラリー (20μlと100μl)を選 426 図1：LightCycler® 2.0インスツルメント アプリケーション、プロトコール、製品、マニュアルについてのより詳しい情報は、 LightCycletスペシャルサイトwww.lightcycler.comを参照ください。 LightCycler® カローセルタイプシステム LightCycler® カローセルタイプシステム - インスツルメント LightCycler® 2.0 Instrument 製品番号 03 531 414 001 リアルタイムPCRシステム 包装単位 1台 (アクセサリと制御用PC含む) 希望販売価格 ¥5,163,000 アプリケーション 背景情報 LightCycler® 2.0インスツルメントでは以下のことが可能です。 ・迅速で高感度なリアルタイムPCRおよびRT-PCR ・再現性の高い信頼性の高いDNA、cDNA、RNAのカイネティック定量 ・融解曲線分析によりPCR産物を容易に識別、特徴づけることが可能 ・特異性の高い変異解析とSNP(一塩基多型)ジェノタイピング LightCycler® 2.0インスツルメントは、以下の機能を提供します： ・6つの蛍光検出器で、530、560、610、640、670、705 nm の蛍光を測定することが可能です。 ・最新のソフトウェアで、機能の強化されたデータ解析と効率のよい データマネジメントが可能です。 ・アッセイのデザインに合わせて、20μlと100μlの2つのサイズの 反応容器をフレキシブルに選択することが可能です。 ・改良されたハードウェアのコンポーネントにより、高い正確性と再 現性をもたらす、迅速で、綿密な温度制御を実現しています。 利点 ■ 再現性の高いデータを迅速に、リアルタイム、オンラ インで得ることが可能です。 ■ 実験と解析に合わせてフレキシブルに、様々な蛍光 フォーマットを選択することが可能です。 ■ LightCycler® ソフトウェア 4.1では、データを効率 よくマネジメント、プロテクトすることが可能です。 ■ 高感度で特異的なリアルタイムPCRによる定量値は、 あらゆる研究のアプリケーションに用いることが可能 です。 ■ 正確な融解曲線分析により、効率的にPCR産物の識別 とデータの解釈が可能です。 ■ LightCycler® カ ロ ー セ ル タ イ プ シ ス テ ム の ソ フ ト ウェアと試薬を組合わせて使用することで、最高のパ フォーマンスをもたらします。 製品構成 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. LightCycler® LightCycler® LightCycler® LightCycler® LightCycler® LightCycler® LightCycler® LightCycler® 2.0 インスツルメント 2.0 サンプルカローセル(20μl) 2.0 インスツルメント オペレーターマニュアル ソフトウェア 4.1 ソフトウェア チュートリアル 遠心アダプターとクーリングブロック キャッピングツール キャピラリーリリーサー リアルタイム PCR LightCycler® 2.0インスツルメント 5 LightCycler® 2.0 インスツルメントには制御用PCが付属します。 免責条項 526ページのno. 7を参照ください。 528ページのno. 13を参照ください。 528ページのno. 14を参照ください。 製品概要 リーと空気による温度制御の組合わせにより、LightCycler® 2.0イン スツルメントは、迅速PCRが可能です。35サイクルのランを完了す るのに必要な時間はわずか約30分(20μlのキャピラリーを使用時)か ら60分(100μlのキャピラリーを使用時)です。 蛍光検出フォーマット：LightCycler® 2.0イ ン ス ツ ル メ ン ト で は、SYBR GreenⅠ、HybProbeプ ロ ー ブ、 加 水 分 解 プ ロ ー ブ の 3つの蛍光フォーマットを利用することが可能です。また、単色の SimpleProbeプ ロ ー ブ や 他 のFRET(fluorescence resonance energy transfer：蛍光共鳴エネルギー転移)をベースにした他の様々 な蛍光フォーマットを利用することも可能です。 ソフトウェア：LightCycler® 2.0インスツルメントは、データ解析 モジュールや能率的なデータマネジメント、効率のよいデータプロ テクションのLightCycler® ソフトウェア4.0と4.05を発展させた、 LightCycler® ソフトウェア4.1を使用します。 PCR LightCycler® 2.0インスツルメントは、6つの検出チャンネルにお いて、32サンプルのPCRの増幅を同時にリアルタイム・オンライン でモニタすることが可能です。LightCycler® ソフトウェア4.1では、 蛍光データを6つのチャンネルから各サイクルで取得すると同時に ディスプレイに表示します。この機能により、シグナルレベルが十分 に得られた場合にPCRを早く終了させたり、シグナルが低すぎる際に プログラムを延長することが可能です。 増幅は特別にデザインされた反応キャピラリ内で行われます。表面 積比の大きい反応容器により、非常に迅速な熱伝導が可能で、ハイス ピードな温度サイクリングを実現しています。LightCycler® キャピラ 図1：LightCycler® 2.0 インスツルメント LightCycler® ソフトウェア 4.1に関するより詳しい 情報は、429ページを参照ください。 アプリケーション、プロトコール、製品、マニュアルについてのより詳しい情報は、 LightCycletスペシャルサイトwww.lightcycler.comを参照ください。 427 5 LightCycler® カローセルタイプシステム LightCycler® カローセルタイプシステム - インスツルメント ハードウェアサイズ(コン ピュータを含まず)、重さ コンピュータ サンプル数 反応容器 反応容量 励起光源と波長 検出チャンネル 測定モード ラン時間 温度加熱／冷却速度 温度精度 280 mm W x 505 mm D x 385 mm H、約22 kg Windows XP 搭載のPentium PC 32 LightCycler® キャピラリー 20μlまたは100μl 青色LED、470 nm 530、560、610、640、670、710 nm リアルタイムオンライン 35サイクルを30分以下で完了 0.1∼ 20 ℃ /秒 ±0.4 ℃ PCR リアルタイム PCR 表1：LightCycler® 2.0インスツルメントの仕様 428 アプリケーション、プロトコール、製品、マニュアルについてのより詳しい情報は、 LightCycletスペシャルサイトwww.lightcycler.comを参照ください。 LightCycler® カローセルタイプシステム LightCycler® カローセルタイプシステム - ソフトウェア LightCycler® ソフトウェア 4.1 製品番号 04 898 915 001 LightCycler® Software 4.1 希望販売価格 ¥650,000 LightCycler® ソフトウェア4.1の解析モジュール アプリケーション ® 包装単位 1 パッケージ 5 ® LightCycler ソフトウェア4.1は、LightCycler 2.0インスツル 定量： メントのアクセサリの一つとして供給されますが、データ解析のため ・絶対定量 にスタンドアローンで別のPCへインストールすることも可能です。 ・相対定量 ・定性解析 システム 融解曲線分析： ・Tmコーリング Windows 2000、Service Pack 4(英 ・ジェノタイピング 語)またはWindows 2000 その他： ・最小限のPC要件：Pentium Ⅲ PC、600 MHz、256MB SDRAM ・核酸濃度の決定 製品概要 製品構成 ® ® LightCycler ソ フ ト ウ ェ ア4.1は、LightCycler ソ フ ト ウ ェ ア 1. CD-ROM 2. マニュアル 4.05がアップデートされたものです。4.05との違いはWindows XP で制御されることのみです。LightCycler® 2.0インスツルメントで使 用されるすべてのソフトウェアのモジュールがインテグレートされて います。 LightCycler® ソフトウェア4.1では、絶対定量と融解曲線分析をは リアルタイム PCR ・オペレーションシステム：Windows XP、Service Pack 2または 免責条項 528ページのno. 13を参照ください。 528ページのno. 14を参照ください。 528ページのno. 46を参照ください。 じめ、monoおよびdualカラーの相対定量、融解曲線分析に基づくジェ ノタイピングモジュールも含まれており、ほとんどの解析モジュール で自動解析が可能です。 LightCycler® ソフトウェア4.1では、LightCycler® ソフトウェア 4.05と同様のデータマネジメント、ユーザーマネジメント、セキュリ PCR ティが可能です。 429 アプリケーション、プロトコール、製品、マニュアルについてのより詳しい情報は、 LightCycletスペシャルサイトwww.lightcycler.comを参照ください。 5 LightCycler® カローセルタイプシステム LightCycler® カローセルタイプシステム - ソフトウェア LightCycler® プローブデザインソフトウェア 2.0 LightCycler® Probe Design Software 2.0 製品番号 04 342 054 001 アプリケーション 製品概要 包装単位 1 パッケージ 希望販売価格 ¥194,000 LightCycler® システムで、一般的な定性解析、遺伝子発現解析、 LightCycler® プローブデザインソフトウェア 2.0は、すべての 変異検出プライマーおよびプローブをデザインすることが可能です。 バージョンのLightCycler® カローセルタイプシステムのインスツ mono-プレックスまたはマルチプレックスアッセイ用のデザインに対 ルメントに対応した、定量や定性アッセイのためのプライマーと 応しています。加水分解プローブアッセイをデザインすることはでき HybProbeプローブやSimpleProbeプローブなどのプローブをデザ ません。 インするためのソフトウェアです。LightCycler® 480インスツルメ ントをはじめ他のリアルタイムPCRインスツルメントで使用するため リアルタイム PCR のデザインも可能です。このソフトウェアでは、プライマーとプロー 利点 ブだけでなくプライマーのみのデザインも可能で、モノプレックス反 ■ アプリケーションに応じて、簡単に配列をインポート し、デザインのパラメータを選択することが可能です。 ■ デザインされたプローブ配列を、デザインパラメータ に従って自動的に解析しスコアリングします。 ■ 検索されたプライマーとプローブがランク順に表示さ れます。 ■ アドバンスツールを使用すれば、相補性チェックや NCBI Blastウェブサイトでプローブ配列をダイレク トに検索することも可能です。 ■ ソフトウェアのマニュアルには、プライマー／プロー ブの最適化のための役立つヒントやガイドラインが記 載されています。 応をはじめ1ランに複数の異なるターゲットを検出するためのマルチ プレックス用のプライマーおよびプライマー／プローブをデザインす ることも可能です。デザインされたものは定量アッセイや変異検出に 使用することが可能です。このソフトウェアは、Windows 2000と Windows XP上で動作が確認されています。 OS CPU RAM ディスプレイ Windows 2000、Windows XP professional Pentium 4/750、Pentium 4/900以上 256 MB以上、256 MB以上 解像度 1024×768 表 1：システムに必要な条件 LightCycler® 480システムについてのより詳しい 情報は、396ページを参照ください。 製品構成 1. CD-ROM(ソフトウェア) 2. マニュアル 免責条項 PCR 528ページのno. 14を参照ください。 430 アプリケーション、プロトコール、製品、マニュアルについてのより詳しい情報は、 LightCycletスペシャルサイトwww.lightcycler.comを参照ください。 LightCycler® カローセルタイプシステム LightCycler® カローセルタイプシステム - 消耗品 LightCycler® キャピラリー (20μl) LightCycler® Capillaries (20μl) 製品番号 04 929 292 001 アプリケーション 製品概要 LightCycler® キャピラリー (20μl)は、LightCycler® カローセル タイプシステムのインスツルメント専用の反応容器です。 5 包装単位 希望販売価格 1 パック ¥32,500 (96本のキャピラリーとフタ×5 箱) ガラスキャピラリーは、ポリプロピレンを形成して作られた液受け により、簡単にキャピラリーへ溶液をローディングすることが可能で す。フタで確実にシールすることで、コンタミネーションの危険性を 注意：LightCycler® キャピラリー (20μl)は、LightCycler® 2.0 サ ® 大幅に減少させます。高品質のボロシリケートガラスは、優れたPCR ンプルカローセル(20μl)とLightCycler カローセルに対応し のパフォーマンスをもたらし、また蛍光の透過に最適です。キャピラ ています。 リーは、10∼ 20μlの反応溶液を保持することが可能です。 528ページのno. 14を参照ください。 529ページのno. 51を参照ください。 LightCycler® キャピラリー (100μl) LightCycler® Capillaries (100μl) 製品番号 03 337 090 001 アプリケーション 製品概要 包装単位 希望販売価格 1 パック ¥67,000 (96本のキャピラリーとフタ×8 箱) LightCycler® キャピラリー (100μl)は、LightCycler® 2.0 イン ガラスキャピラリーは、ポリプロピレンを形成して作られた液受け スツルメントを使用して、より大容量の反応容量が必要な場合(例；よ により、簡単にキャピラリーへ溶液をローディングすることが可能で り高感度が求められる場合など)に使用される専用の反応容器です。 す。高品質のボロシリケートガラスは、優れたPCRのパフォーマンス リアルタイム PCR 免責条項 をもたらし、また蛍光の透過に最適です。フタで確実にシールするこ 注意：LightCycler® キャ ピ ラ リ ー (100μl)は、LightCycler® 2.0 サンプルカローセル(100μl)に対応しています。 とで、コンタミネーションの危険性を大幅に減少させます。キャピラ リーは、100μlの反応溶液を保持することが可能です。 免責条項 PCR 528ページのno. 14を参照ください。 529ページのno. 51を参照ください。 431 アプリケーション、プロトコール、製品、マニュアルについてのより詳しい情報は、 LightCycletスペシャルサイトwww.lightcycler.comを参照ください。 5 LightCycler® カローセルタイプシステム LightCycler® カローセルタイプシステム - 追加用製品 LC カローセル遠心機 2.0 LC Carousel Centrifuge 2.0 製品番号 03 709 507 001 包装単位 1 遠心機とローター、バケット 希望販売価格 ¥540,000 アプリケーション LCカローセル遠心機 2.0は、PCRサンプルを充填した LightCycler® キャピラリを装填したLightCycler® 2.0サンプルカ ローセルを遠心するために使用されます。キャピラリをカローセル内 にセットした後、手動またはMagNA Pure LCインスツルメントを使 用して、キャピラリ上部のリザーバーへ反応溶液などをピペッティン グで加えます。その後、キャピラリをストッパーでフタをし、遠心機 内のバケットにカローセルをセットします。あらかじめセットされた リアルタイム PCR 30秒の遠心後、LightCycler® 2.0サンプルカローセルを、サンプル の反応のためにLightCycler® 2.0インスツルメントへセットします。 製品概要 LCカローセル遠心機 2.0は、特別にデザインされたロータを使用し て、LightCycler® 2.0サンプルカローセル(20 μl、100μlキャピラ リ)を簡単に遠心することが可能です。LCカローセル遠心機 2.0バケッ ト2.1を使用すれば、LightCycler® 1.5やそれ以前バージョンのサン プルカローセルを遠心することも可能です。 タイプ サイズ 重さ 処理能力 時間 スピード 電源 ベンチトップタイプの遠心機 315 nm W×380 nm D×285 nm H 20.6 kg(ローターなし) LightCycler® サンプルカローセルにセットし た1∼ 32本のLightCycler® キャピラリー 約30秒にセット済み 3,000 rpm(735×g) AC115∼ 230 V、50/60 Hz 表1：機器の仕様 注 意 LCカローセル遠心機 2.0のアクセサリ LightCycler® 2.0サンプルカローセルは、以前のバージョンのも 図1：LCカローセル遠心機 2.0 LCカローセル遠心機 2.0ローターセットについての より詳しい情報は、下記を参照ください。 LCカローセル遠心機 2.0バケット2.1についてのよ り詳しい情報は、下記を参照ください。 PCR のと異なります。LCカローセル遠心機、LCカローセル遠心機 2.0と LightCycler®カローセルのバージョンとの互換性のために以下の製品 を供給しています。 LCカローセル遠心機 2.0ローターセット LC Carousel Centrifuge 2.0 Rotor Set 製品番号 03 724 697 001 包装単位 1 ローターと 2 バケット 希望販売価格 ¥187,000 製品番号 03 724 689 001 包装単位 1 バケット 希望販売価格 ¥68,000 アプリケーション LCカ ロ ー セ ル 遠 心 機 2.0ロ ー タ ー セ ッ ト は、LCカ ロ ー セ ル 遠 心 機(Cat. No. 3 030 512)を 使 用 し てLightCycler® 2.0サ ン プ ル カ ロ ー セ ル お よ びLightCycler® サ ン プ ル カ ロ ー セ ル(Cat. No. 1 909 282)を遠心するために使用されます。 LCカローセル遠心機 2.0バケット2.1 LC Carousel Centrifuge 2.0 Bucket 2.1 アプリケーション LCカ ロ ー セ ル 遠 心 機 2.0バ ケ ッ ト2.1は、LCカ ロ ー セ ル 遠 心 機 2.0を 使 用 し て、LightCycler® サ ン プ ル カ ロ ー セ ル(Cat. No. 432 1 909 282)を遠心するために使用します。 アプリケーション、プロトコール、製品、マニュアルについてのより詳しい情報は、 LightCycletスペシャルサイトwww.lightcycler.comを参照ください。 LightCycler® カローセルタイプシステム LightCycler® カローセルタイプシステム - 追加用製品 LightCycler® 2.0キャピラリーリリーサー 製品番号 03 603 920 001 包装単位 1 リリーサー 希望販売価格 ¥5,200 LightCycler® 2.0 Sample Carousel (20μl) 製品番号 03 603 962 001 包装単位 1 サンプルカローセル 希望販売価格 ¥149,000 アプリケーション 製品概要 LightCycler® Capillary Releaser 5 アプリケーション LightCycler® 2.0キャピラリーリリーサーは、LightCycler® サン プルカローセルから1アクションで簡単にキャピラリーを外すことの 出来るツールです。 LightCycler® 2.0キャピラリーリリーサーは、すべての LightCycler® 2.0サンプルカローセル(20μl) LightCycler® 2.0サ ン プ ル カ ロ ー セ ル(20μl)は、LightCycler® LightCycler® 2.0サ ン プ ル カ ロ ー セ ル(20μl)は、LightCycler® キャピラリー (20μl)を保持し、LightCycler® 2.0インスツルメント キャピラリー (20μl)を最大32本保持することが可能です。カローセ にセットするためのアクセサリです。 ルは、特別なプラスティック素材(Peek)から成り、サーマルサイクリ リアルタイム PCR LightCycler® サンプルカローセルに対応しています。 ングの過程の温度に耐えるだけでなく、形状や寸法を一定に保つため、 注意：LightCycler® 2.0キャピラリーリリーサーが付属します。 正確な位置決めと再現性の高い検出を可能にします。 LightCycler® 2.0サンプルカローセル(20μl)には、確実に区別す ることのできるようにユニークなバーコードがラベルされています。 コンパチビリティ：LightCycler® サンプルカローセル(20μl)は、 LightCycler® キャピラリ(20μl)をLightCycler® 2.0インスツルメ ントに使用するときのみに対応しています。 LightCycler® 2.0 Sample Carousel (100μl) 製品番号 03 603 954 001 アプリケーション 製品概要 LightCycler® 2.0サンプルカローセル(100μl)は、LightCycler® ® 包装単位 1 サンプルカローセル 希望販売価格 ¥149,000 LightCycler® 2.0サンプルカローセル(100μl)は、LightCycler® キャピラリー (100μl)を保持し、LightCycler 2.0インスツルメン キャピラリー (100μl)を最大32本保持することが可能です。カロー トにセットするためのアクセサリです。 セルは、特別なプラスティック素材(Peek)から成り、サーマルサイク PCR LightCycler® 2.0サンプルカローセル(100μl) リングの過程の温度に耐えるだけでなく、形状や寸法を一定に保つた 注意：LightCycler® 2.0キャピラリーリリーサーが付属します。 め、正確な位置決めと再現性の高い検出を可能にします。 LightCycler® 2.0サンプルカローセル(100μl)には、確実に区別 することのできるようにユニークなバーコードがラベルされています。 コンパチビリティ：LightCycler® 2.0サンプルカローセル(100μl) は、LightCycler® キャピラリ(100μl)をLightCycler® 2.0インスツ ルメントに使用するときのみに対応しています。 433 アプリケーション、プロトコール、製品、マニュアルについてのより詳しい情報は、 LightCycletスペシャルサイトwww.lightcycler.comを参照ください。 5 LightCycler® カローセルタイプシステム LightCycler® カローセルタイプシステム - 追加用製品 LightCycler® キャッピングツール LightCycler® Capping Tool 製品番号 03 357 317 001 包装単位 1 キャッピングツール 希望販売価格 ¥3,100 アプリケーション LightCycler® キャッピングツールは、LightCycler® キャピラリー のフタを簡単につけることの出来るツールです。LightCycler® キャピ ラリーボックスからフタを取り、反応溶液を入れられたキャピラリー にフタをします。 LightCycler® キャッピングツールは、すべてのLightCycler® キャ リアルタイム PCR ピラリーに対応しています。 図1：LightCycler® キャッピングツール LightCycler® 遠心アダプター LightCycler® Centrifuge Adapters 製品番号 11 909 312 001 アプリケーション 製品構成 LightCycler® 遠心アダプターは、LightCycler® キャピラリーを分 包装単位 1 セット 希望販売価格 ¥56,000 32個のアダプターとアルミニウム製の冷却ブロック 注する際に保持したり、溶液をスピンダウンするための遠心中に保護 するためのツールです。各アダプタの外径は、エッペンドルフチュー ブと同じサイズに作られており、一般的な遠心機に対応しています。 冷却ブロックは、アダプターを8×4列保持することができ、一般的な マルチチャンネルピペッターに対応しています。さらに、冷却ブロッ クはPCRのセットアップ中に低温度を保持することができるため、プ ライマーダイマーの形成などのリスクを避けることが可能です。 コ ン パ チ ビ リ テ ィ：LightCycler® 遠 心 ア ダ プ タ ー は、 す べ て の PCR LightCycler® キャピラリーに対応しています。 図1：LightCycler® 遠心アダプターと冷却ブロック LightCycler® サンプルカローセル O-リング LightCycler® 2.0 Sample Carousel O-Ring 製品番号 03 603 989 001 アプリケーション 製品概要 包装単位 1 セット (2 O-リング) 希望販売価格 ¥3,900 LightCycler® サンプルカローセル O-リングは、LightCycler® サ LightCycler® サンプルカローセル O-リングは、LightCycler® サ ンプルカローセルのO-リングが劣化したときに交換するためのパーツ ンプルカローセルにLightCycler® キャピラリーを確実に保持するた です。 めのパーツです。 コンパチビリティ：LightCycler® サンプルカローセル O-リングは、 製品構成 すべてのバージョンのLightCycler® サンプルカローセルに対応して O-リング：2 個 います。 434 アプリケーション、プロトコール、製品、マニュアルについてのより詳しい情報は、 LightCycletスペシャルサイトwww.lightcycler.comを参照ください。 LightCycler® カローセルタイプシステム LightCycler® カローセルタイプシステム - PCRマスターミックスと試薬 LightCycler® キット 5 HybProbeプローブ リ ア ル タ イ ムPCRお よ びRT-PCRに 必 要 なLightCycler® RNA ユニークなLightCycler® HybProbeフォーマットは、蛍光共鳴エ AmplificationキットをはじめとするLightCycler® マスターミックス ネルギー転移(FRET)の原理を元にしています。異なる色素(ドナー は、HybProbeプローブ、SYBR GreenⅠ、加水分解プローブ(例； とアクセプター )でラベルされた、2つの配列特異的なオリゴヌクレ Universal ProbeLibrary)などの蛍光検出フォーマットのために最適 オチドプローブを、PCRプライマーとともに反応溶液に加えます。 化されています。 HybProbeプローブが、アニーリング期に増幅されたDNAフラグメン トのターゲット配列にハイブリダイズすると、2つの色素が近接しま SYBR Green I す。ドナー色素(フルオレセイン)は、青色LED光源で励起され、その ® SYBR GreenⅠ検出用のLightCycler マスターミックスにはあら 放射エネルギーがもう1つのHybProbeプローブにラベルされたアク かじめ SYBR GreenⅠ色素が含まれています。SYBR GreenⅠは、 セプター色素を励起し、異なる波長の蛍光を発します。蛍光強度は、 PCRの各サイクルにおいて、増幅されたPCR産物の2本鎖特異的に結 PCRによって合成されたターゲットDNAの量と比例します。 増幅をモニタリングすることが出来ます。増幅と融解曲線分析により 注 意： す べ て のLightCycler® マ ス タ ー ミ ッ ク ス は、LightCycler® 増幅産物の特異性と感度を高めることが可能です。 キャピラリー用にデザインされていて、キャピラリーを使用したとき にそのパフォーマンスと感度が発揮されます。 LightCycler® TaqMan® マスター LightCycler® TaqMan® Master 製品番号 04 535 286 001 LightCycler® カローセルタイプシステムで加水分解プローブを使 用するための使いやすいHot Start型のPCR 試薬 04 735 536 001 アプリケーション 背景情報 包装単位 1 キット (96 反応分/20μl 反応) 1 キット (480 反応分/20μl 反応) 希望販売価格 ¥26,300 ¥70,000 LightCycler® TaqMan® マスターは、LightCycler® カローセルタ LightCycler® TaqMan® マスターは、LightCycler® キャピラリー イプ システムのインスツルメントで、加水分解プローブアッセイ(例； タイプシステムのLightCycler® キャピラリーを使用して、加水分解 Universal ProbeLibraryアッセイ)を行うためのPCRまたは2ステッ プローブ検出フォーマットを行うためにデザインされた使いやすい反 プRT-PCRのためにデザインされています。LightCycler® TaqMan® 応試薬です。この試薬には、PCRにおける非特異的な増幅産物の生 マスターでは、PCR産物のキャリーオーバーコンタミネーションを防 成を最小限に抑え、特異性と感度を高めるために特に改良した、Hot ぐために、熱不安定性ウラシルDNAグリコシラーゼを使用することも StartタイプのFastStart Taq DNAポリメラーゼが含まれます。 可能です。 リアルタイム PCR 合するため、各サイクルの最後に取得する蛍光値を測定することで、 TaqMan® アッセイと呼ばれる加水分解プローブアッセイとは、蛍 ブを使用するアッセイです。プローブが完全(インタクト)な状態では、 原理に基づいています。そのため融解曲線分析を行うことは出来ませ クエンチャーは、レポーター色素に近接しているためレポーターの蛍 ん。 光は蛍光共鳴エネルギー転移(FRET)によって抑制されています。プ ローブがターゲット配列にハイブリダイズし、ポリメラーゼの5'ヌク LightCycler® ウラシル-DNAグリコシラーゼに関す るより詳しい情報は、440ページを参照ください。 レアーゼ活性により分解されると、レポーターとクエンチャーが物理 PCR 光レポーター色素とクエンチャーの2つでラベルされた、1つのプロー 注意：加水分解プローブアッセイは、PCR中にプローブが分解される 的に離れます。PCRが進むにつれてターゲット配列の量が蓄積され、 より多くのプローブが分解されると、抑制されないレポーターの蛍光 シグナルが増加します。 利点 ■ 5×濃度の使いやすいHot Startタイプの試薬で時間 と手間を省けます。 ■ LightCycler® カローセルタイプシステムでUniversal ProbeLibraryプローブを使用するためにデザインさ れた、本マスターミックスを使用すれば信頼性の高い 結果を得ることが可能です。 ■ MgCl2の最適化は不要で、時間を節約することが可能 です。 ■ LightCycler® カローセルタイプシステムインスツル メントで使用することで、高品質の結果を再現性よく 得ることが可能です。 製品構成 1a. LightCycler® FastStart 酵素 1b. LightCycler® FastStart TaqMan® 反応ミックス 2. H2O、PCR-grade、2×1 ml 品 質 機能試験：LightCycler® TaqMan® マスターは、LightCycler® カ ローセルタイプシステムインスツルメントを使用して機能試験されて います。 免責条項 526ページのno. 4を参照ください。 528ページのno. 14を参照ください。 435 アプリケーション、プロトコール、製品、マニュアルについてのより詳しい情報は、 LightCyclerスペシャルサイトwww.lightcycler.comを参照ください。 5 LightCycler® カローセルタイプシステム LightCycler® カローセルタイプシステム - PCRマスターミックスと試薬 LightCycler® マルチプレックスDNAマスター HybProbe 製品番号 04 340 019 001 LightCycler® Multiplex DNA Master HybProbe 包装単位 1 キット (96 反応分/20μl 反応) 希望販売価格 ¥46,900 LightCycler® 2.0インスツルメントを使用して、マルチプレックス PCRを行うためのHot Startタイプの使いやすい反応試薬 アプリケーション LightCycler® マ ル チ プ レ ッ ク スDNAマ ス タ ー HybProbeは、 LightCycler® キャピラリーとLightCycler® 2.0インスツルメントを 使用して、マルチプレックスリアルタイムPCRアッセイにおいて最適 化されている使い易い5×濃度の反応試薬です。本製品は、一塩基多 型(SNP)のタイピング、変異解析を目的としたマルチプレックス2ス リアルタイム PCR テップRT-PCRのアプローチが可能です。 背景情報 LightCycler® Red 640-NHSエステルについての より詳しい情報は、444ページを参照ください。 LightCycler® Red 610-NHSエステルについての より詳しい情報は、444ページを参照ください。 製品構成 1. マスターミックス、5×濃度、3×128μl 2. MgCl2、25 mM、1 ml 3. H2O、PCR-grade、3×1 ml LightCycler® 2.0インスツルメントに搭載されている6つの検出 チャンネルで、最大4色の異なる蛍光色素がラベルされたHybProbe 品 質 を1反 応 内 で 検 出 す る こ と が 可 能 で す。LightCycler® Red 610、 機能試験：LightCycler® マルチプレックスDNAマスター HybProbe LightCycler Red 640、LightCycler Red 670、Cy 5.5でラベ は、LightCycler® 2.0インスツルメントを使用して機能試験されてい ルされたプローブを使用して、異なる4つのDNAテンプレートを1本 ます。 ® ® のキャピラリ内で増幅し検出することが可能です。 キットに同梱されるマスターミックスには、N末端を欠如させた、 5'-3' ヌクレアーゼ活性がマイナスの熱耐性のリコンビナントTaq DNAポリメラーゼが含まれます。化学修飾により室温下では不活化さ 免責条項 526ページのno. 528ページのno. 528ページのno. 529ページのno. 2を参照ください。 13を参照ください。 14を参照ください。 50を参照ください。 れていて、95℃ 10分間のインキュベーションで活性化されます。 LightCycler® FastStart DNAマスター PLUS HybProbe 製品番号 03 515 575 001 LightCycler® FastStart DNA MasterPLUS HybProbe LightCycler® カローセルタイプシステムを使用してリアルタイム PCRを行うためのHot Startタイプの使いやすい反応試薬 03 515 567 001 PCR 03 752 178 001 アプリケーション LightCycler ® FastStart DNAマスターPLUS HybProbeは、 ® 包装単位 1 キット (96 反応分/20μl 反応) 1 キット (480 反応分/20μl 反応) 1 キット (1,920 反応分/20μl 反応) 希望販売価格 ¥24,600 ¥70,000 ¥250,000 背景情報 本マスターミックスは、FastStart Taq DNAポリメラーゼの化学 LightCycler キャピラリ内でHybProbeプローブ検出フォーマット 修飾されたTaq DNAポリメラーゼにより、室温では不活化されてい を使用して、高感度なPCRアプリケーションを行うことの出来る、使 て、高温(95℃ 5∼10分のプレインキュベーション)で活性化される、 いやすいHot Startタイプの反応試薬で、遺伝子の発現定量をはじめ Hot Startタイプのマスターミックスです。 とする2ステップRT-PCRに最適なマスター試薬です。 製品構成 注 意：LightCycler® FastStart DNAマ ス タ ー PLUS HybProbeは、 PCR産物のキャリーオーバーコンタミネーションを防ぐために、熱不 1a. LightCycler® FastStart 酵素 1b. LightCycler® FastStart 反応ミックス HybProbe 2. H2O、PCR-grade 安定性ウラシル DNA グリコシラーゼを使用することも可能です。 LightCycler® ウラシル-DNAグリコシラーゼに関す るより詳しい情報は、440ページを参照ください。 品 質 機能試験：LightCycler® FastStart DNAマスター PLUS HybProbe は、LightCycler® カローセルタイプシステムインスツルメントを使 用して機能試験されています。 利点 このマスターミックスは、MgCl2はあらかじめ含まれて いるため、時間のかかる最適化作業の必要のない使いや すい便利なマスターミックスです。PCRを向上させるよ うにバッファの組成が調製されています。 免責条項 526ページの 528ページの 528ページの 529ページの no. no. no. no. 2を参照ください。 13を参照ください。 14を参照ください。 50を参照ください。 436 アプリケーション、プロトコール、製品、マニュアルについてのより詳しい情報は、 LightCyclerスペシャルサイトwww.lightcycler.comを参照ください。 LightCycler® カローセルタイプシステム LightCycler® カローセルタイプシステム - PCRマスターミックスと試薬 製品番号 03 515 869 001 LightCycler® FastStart DNA MasterPLUS SYBR Green Ⅰ LightCycler® カローセルタイプシステムを使用してリアルタイム PCRを行うためのHot Startタイプの使いやすい反応試薬 03 515 885 001 03 752 186 001 アプリケーション 包装単位 1 キット (96反応分/20μl 反応) 1 キット (480反応分/20μl 反応) 1 キット (1920反応分/20μl 反応) 希望販売価格 ¥26,400 ¥70,000 ¥250,000 背景情報 LightCycler® FastStart DNAマスター PLUS SYBR GreenⅠは、 本マスターミックスは、FastStart Taq DNAポリメラーゼの化学 LightCycler® キャピラリ内でSYBR GreenⅠ検出フォーマットを使 修飾されたTaq DNAポリメラーゼにより、室温では不活化されてい 用して、高感度なPCRアプリケーションを行うことの出来る、使いや て、高温(95℃ 5∼10分のプレインキュベーション)で活性化される、 すいHot Startタイプの反応試薬で、遺伝子の発現定量をはじめとす Hot Startタイプのマスターミックスです。 る2ステップRT-PCRに最適なマスター試薬です。 注意：LightCycler® FastStart DNAマスター PLUS SYBR GreenⅠ は、PCR産物のキャリーオーバーコンタミネーションを防ぐために、 熱不安定性ウラシルDNAグリコシラーゼを使用することも可能です。 ® LightCycler ウラシル-DNAグリコシラーゼに関す るより詳しい情報は、440ページを参照ください。 製品構成 1a. LightCycler® FastStart 酵素 1b. LightCycler® FastStart 反応ミックス SYBR Green Ⅰ 2. H2O、PCR-grade 品 質 機能試験：LightCycler® FastStart DNAマスター PLUS SYBR Green Ⅰは、LightCycler® カローセルタイプシステムインスツルメントを使 用して機能試験されています。 免責条項 このマスターミックスは、MgCl2はあらかじめ含まれて いるため、時間のかかる最適化作業の必要のない使いや すい便利なマスターミックスです。PCRを向上させるよ うにバッファの組成が調製されています。 LightCycler® FastStart DNAマスター HybProbe 526ページのno. 5を参照ください。 528ページのno. 13を参照ください。 528ページのno. 14を参照ください。 LightCycler® FastStart DNA Master HybProbe 製品番号 03 003 248 001 LightCycler® カローセルタイプシステムを使用してリアルタイム PCRを行うためのHot Startタイプの使いやすい反応試薬 12 239 272 001 アプリケーション 背景情報 ® 包装単位 1 キット (96反応分/20μl 反応) 1 キット (480反応分/20μl 反応) 希望販売価格 ¥27,800 ¥111,400 FastStart DNAマスター HybProbeは、 本マスターミックスは、FastStart Taq DNAポリメラーゼの化学 LightCycler® キャピラリ内でHybProbeプローブ検出フォーマット 修飾されたTaq DNAポリメラーゼにより、室温では不活化されてい を使用して、高感度なPCRアプリケーションを行うことの出来る、 て、高温(95℃ 5∼10分のプレインキュベーション)で活性化される、 使いやすいHot Startタイプの反応試薬です。SNPや変異検出や定量 Hot Startタイプのマスターミックスです。MgCl2が別バイアルで提供 PCRを行うことが可能な、2ステップRT-PCR用のマスター試薬です。 されるのでアプリケーションに応じて濃度を最適化することが可能で PCR 利点 LightCycler リアルタイム PCR LightCycler® FastStart DNAマスター PLUS SYBR Green Ⅰ 5 す。 注意：LightCycler® FastStart DNAマスター HybProbeは、PCR 産物のキャリーオーバーコンタミネーションを防ぐために、熱不安定 性ウラシルDNAグリコシラーゼを使用することも可能です。 LightCycler® ウラシル-DNAグリコシラーゼに関す るより詳しい情報は、440ページを参照ください。 製品構成 1a. LightCycler® FastStart 酵素 1b. LightCycler® FastStart 反応ミックス HybProbe 2. MgCl2 Stock Solution、25 mM 3. H2O、PCR-grade 品 質 機 能 試 験：LightCycler® FastStart DNAマ ス タ ー HybProbeは、 利点 LightCycler® FastStart DNAマスター HybProbeは、 定量PCRにおいて高いパフォーマンスと再現性をもたら す便利な試薬です。 LightCycler® ControlキットDNAを使用して、キットのプロトコー ルに従って試験されています。 免責条項 526ページのno. 528ページのno. 528ページのno. 529ページのno. 2を参照ください。 13を参照ください。 14を参照ください。 50を参照ください。 アプリケーション、プロトコール、製品、マニュアルについてのより詳しい情報は、 LightCyclerスペシャルサイトwww.lightcycler.comを参照ください。 437 5 LightCycler® カローセルタイプシステム LightCycler® カローセルタイプシステム - PCRマスターミックスと試薬 LightCycler® FastStart DNAマスター SYBR Green Ⅰ 製品番号 03 003 230 001 LightCycler® FastStart DNA Master SYBR GreenⅠ LightCycler® カローセルタイプシステムを使用してリアルタイム PCRを行うためのHot Startタイプの使いやすい反応試薬 12 239 264 001 アプリケーション 背景情報 包装単位 1 キット (96反応分/20μl 反応) 1 キット (480反応/20μl 反応) 希望販売価格 ¥29,600 ¥118,400 LightCycler® FastStart DNAマ ス タ ー SYBR Green Ⅰ は、 本マスターミックスは、FastStart Taq DNAポリメラーゼの化学 LightCycler® キャピラリ内でSYBR Green Ⅰ検出フォーマットを使 修飾されたTaq DNAポリメラーゼにより、室温では不活化されてい 用して、高感度なPCRアプリケーションを行うことの出来る、使いや て、高温(95℃ 5∼10分のプレインキュベーション)で活性化される、 すいHot Startタイプの反応試薬です。 Hot Startタイプのマスターミックスです。MgCl2が別バイアルで提供 されるのでアプリケーションに応じて濃度を最適化することが可能で リアルタイム PCR 注意：LightCycler® FastStart DNAマスター SYBR Green Ⅰは、 す。 PCR産物のキャリーオーバーコンタミネーションを防ぐために、熱不 安定性ウラシルDNAグリコシラーゼを使用することも可能です。 ® LightCycler ウラシル-DNAグリコシラーゼに関す るより詳しい情報は、440ページを参照ください。 製品構成 1a. LightCycler® FastStart 酵素 1b. LightCycler® FastStart 反応ミックス SYBR Green Ⅰ 2. MgCl2 Stock Solution、25 mM 3. H2O、PCR-grade 品 質 利点 LightCycler® FastStart DNAマスター SYBR Green Ⅰは、定量PCRにおいて高いパフォーマンスと再現性を もたらす便利な試薬です。 機能試験：LightCycler® FastStart DNAマスター SYBR Green Ⅰ は、LightCycler® ControlキットDNAを使用して、キットのプロト コールに従って試験されています。 免責条項 526ページのno. 5を参照ください。 528ページのno. 13を参照ください。 528ページのno. 14を参照ください。 PCR LightCycler® DNAマスター HybProbe LightCycler® DNA Master HybProbe 製品番号 12 015 102 001 LightCycler® カローセルタイプシステムを使用してリアルタイム PCRを行うための使いやすい反応試薬 12 158 825 001 アプリケーション 背景情報 包装単位 1 キット (96反応分/20μl 反応) 1 キット (480反応分/20μl 反応) 希望販売価格 ¥29,400 ¥116,600 LightCycler® DNAマスター HybProbeは、LightCycler® キャピ LightCycler® DNAマスター HybProbeは、リアルタイムPCRを ラリ内でHybProbeプローブ検出フォーマットを使用して、高感度な 行うための使いやすい反応試薬です。本製品は、LightCycler® カ PCRアプリケーションを行うことの出来る、使いやすい反応試薬です。 ローセルタイプシステムとLightCycler® キャピラリーを使用して、 本キットは、SNPや変異検出や定量PCRを行うことが可能な2ステッ HybProbe検出フォーマットを利用してPCRを行うためにデザインさ プRT-PCR用のマスター試薬です。MgCl2が別バイアルで提供される れています。 ので、アプリケーションに応じて濃度を最適化することが可能です。 製品構成 利点 LightCycler® DNAマスター HybProbeは、一般的な定 量PCRアプリケーションに対応したマスターミックスで す。 1. LightCycler® DNA マスター HybProbe 2. MgCl2 Stock Solution、25 mM 3. H2O、PCR-grade 品 質 機能試験：LightCycler® DNAマスター HybProbeは、LightCycler® ControlキットDNAを使用して、キットのプロトコールに従って試験 されています。 免責条項 526ページのno. 2を参照ください。 528ページのno. 13を参照ください。 528ページのno. 14を参照ください。 438 アプリケーション、プロトコール、製品、マニュアルについてのより詳しい情報は、 LightCyclerスペシャルサイトwww.lightcycler.comを参照ください。 LightCycler® カローセルタイプシステム LightCycler® カローセルタイプシステム - PCRマスターミックスと試薬 LightCycler® DNAマスター SYBR Green Ⅰ LightCycler® DNA Master SYBR Green Ⅰ 製品番号 12 015 099 001 LightCycler® カローセルタイプシステムを使用してリアルタイム PCRを行うための使いやすい反応試薬 12 158 817 001 アプリケーション 背景情報 LightCycler® DNAマ ス タ ー SYBR Green Ⅰ は、LightCycler® キャピラリ内でSYBR Green Ⅰ検出フォーマットを使用して、高感 包装単位 1 キット (96反応分/20μl 反応) 1 キット (480反応分/20μl 反応) 5 希望販売価格 ¥31,500 ¥123,900 LightCycler® DNAマ ス タ ー SYBR Green Ⅰ は、 リ ア ル タ イ ム PCRを行うための使いやすい反応試薬です。 反応試薬です。本キットは、SNPや変異検出や定量PCRを行うこと 製品構成 が可能な2ステップRT-PCR用のマスター試薬です。MgCl2が別バイア 1. LightCycler® DNA マスター SYBR Green Ⅰ 2. MgCl2 Stock Solution、25 mM 3. H2O、PCR-grade ルで提供されるので、アプリケーションに応じて濃度を最適化するこ とが可能です。 品 質 機能試験：LightCycler ® DNAマスター SYBR Green Ⅰは、 利点 LightCycler® ControlキットDNAを使用して、キットのプロトコー LightCycler® DNAマスター SYBR Green Ⅰは、一般 的な定量PCRアプリケーションに対応したマスターミッ クスです。 ルに従って試験されています。 リアルタイム PCR 度なPCRアプリケーションを行うことの出来る、使いやすいタイプの 免責条項 526ページのno. 5を参照ください。 528ページのno. 13を参照ください。 528ページのno. 14を参照ください。 LightCycler® ControlキットDNA 製品番号 12 158 833 001 LightCycler® Control Kit DNA LightCycler® カローセルタイプシステムを使用して、リアルタイム PCRのコントロール反応を行うためのキット 希望販売価格 ¥32,400 製品構成 ® LightCycler ControlキットDNAは、LightCycler カローセルタ イプシステムを使用してリアルタイムPCRのパフォーマンスを確認す るためにデザインされた、ヒトDNAを対象としたアッセイ(キットに 同梱されるプライマーとHybProbeプローブを組合わせて)の確認に使 1. ヒトゲノム DNA(15 ng/μl)、3×50μl 2. β-グロビンプライマーミックス、10×濃度、2×50μl 3. β-グロビン HybProbe ミックス、LightCycler® Red 640 ラベル、10×濃度、2× 50μl 4. β-グロビン HybProbe ミックス、Cy 5.5 ラベル、10×濃度、2×50μl 5. H2O、PCR-grade、2×1 ml 用することが可能です。また、キットに同梱のヒトゲノムDNAを使用 して、特異的なプライマーとHybProbeの品質確認を行うことも可能 です。キットに同梱のLightCycler® Red 640とCy 5.5でラベルさ れた2つのHybProbeプローブをして、2色同時検出実験やその色補正 ファイルを作成することも可能です。 背景情報 LightCycler® Controlキ ッ トDNAは、LightCycler® カ ロ ー セ ル タイプシステムインスツルメントとLightCycler® DNAマスターキッ トまたはLightCycler® FastStart DNAマスターキットを使用して、 PCRのパフォーマンスを確認するためのコントロール実験を行うこと 品 質 PCR アプリケーション ® 包装単位 1 キット (50反応分/20μl 反応) 機能試験：LightCycler ® ControlキットDNAは、LightCycler ® DNAマ ス タ ー SYBR Green Ⅰ とLightCycler® DNAマ ス タ ー HybProbeを使用して、キットのプロトコールに従って機能試験され ています。LightCycler® カローセルタイプシステムを使用して、10 ゲノム相当(約30 pgのゲノムDNA)を再現性よく検出可能です。 免責条項 526ページのno. 2を参照ください。 528ページのno. 14を参照ください。 が可能です。 SYBR Green Ⅰ検出フォーマットでは、2本鎖特異的結合色素の存 在下で、ヒトゲノム DNA由来のβ-グロビン遺伝子の110 bpの領域 を特異的プライマーで増幅します。PCR産物量が増加するにつれて増 加する、蛍光シグナルをオンラインでモニタリングします。 HybProbe検 出 フ ォ ー マ ッ ト で は、 ヒ ト ゲ ノ ムDNA由 来 の βグ ロ ビ ン 遺 伝 子 の110 bpの 領 域 を 特 異 的 プ ラ イ マ ー で 増 幅 し、 HybProbeで検出します。 439 アプリケーション、プロトコール、製品、マニュアルについてのより詳しい情報は、 LightCyclerスペシャルサイトwww.lightcycler.comを参照ください。 5 LightCycler® カローセルタイプシステム LightCycler® カローセルタイプシステム - PCRマスターミックスと試薬 LightCycler® ウラシル-DNAグリコシラーゼ LightCycler® Uracil-DNA Glycosylase 製品番号 03 539 806 001 包装単位 100 U(50μl) 希望販売価格 ¥14,400 FastStart酵素を使用したLightCycler® キット用の試薬 アプリケーション 背景情報 LightCycler® ウラシル-DNAグリコシラーゼ(LightCycler® UNG) のウラシルグリコシド結合を加水分解することで、ウラシルを排除し、 めに適した試薬です。この方法は、すべての増幅反応にデオキシウリ DNA中にアルカリ感受性の脱塩基サイトを生成します。これらの脱塩 ジン3リン酸(dUTP)を取り込ませておき、それ以降のLightCycler® 基サイトは、エンドヌクレアーゼの作用や熱(例；一般的なPCR中)、 ® リアルタイム PCR ウラシル-DNAグリコシラーゼ(UNG)は、1本鎖および2本鎖DNA は、PCR産物によるキャリーオーバーコンタミネーションを防ぐた FastStart酵素を使用したPCRをLightCycler UNGを加えて行いま アルカリ処理などで加水分解されます。酵素は2本鎖DNAよりも1本 す。サーマルサイクリングの前に、LightCycler® UNGを反応試薬へ 鎖DNAにより高い活性を示します。LightCycler® ウラシル-DNAグリ 加えておき、40℃で10分間インキュベーションします。FastStart コシラーゼは、RNA、通常のウラシルを含有しないDNAには作用し DNAポリメラーゼの初期変性(95℃で10分間)の間に、LightCycler® ません。 UNGは不活化されます。 品 質 注意：LightCycler® UNGは、FastStart酵素または、FastStart酵 機能試験：LightCycler® UNGは、LightCycler® カローセルタイプ 素を使用したLightCycler® キットで使用するために最適化されてい システムを使用して、キャリーオーバーコンタミネーションを防ぐた ます。 めの試験を行われています。 PCRの た め の 酵 素 に つ い て の よ り 詳 し い 情 報 は、 478ページを参照ください。 LightCycler® RNAマスター HybProbe LightCycler® RNA Master HybProbe 免責条項 528ページのno. 14を参照ください。 528ページのno. 19を参照ください。 製品番号 03 018 954 001 LightCycler® カローセルタイプシステムを使用して、1ステップ RT-PCRを行うための使いやすい反応試薬 アプリケーション 包装単位 1 キット (96反応分/20μl 反応) 希望販売価格 ¥56,700 背景情報 LightCycler® RNAマスター HybProbeは、LightCycler® カロー アプタマーとTth DNAポリメラーゼを使用しているためHot Start セルタイプシステムインスツルメントを使用して、HybProbeプロー 反応を行うことが可能です。Tth DNAポリメラーゼは、熱耐性のRNA ブを検出フォーマットとした1ステップRT-PCRに最適化された使い 依存の逆転写活性と、DNA依存のポリメラーゼ活性をもつ酵素で、逆 やすいHot Startタイプの反応試薬です。 転写反応(RT)とPCRを1チューブ内で連続して行うことが可能です。 注意：LightCycler® RNAマ ス タ ー HybProbeは、PCR産 物 の キ ャ チドで、Tth酵素が最適な温度以下の温度においてターゲットDNAと リーオーバーコンタミネーションを防ぐために、熱不安定性ウラシル 結合することを防ぎます。そのため反応溶液の調製時や、RT前の温度 DNAグリコシラーゼを使用することも可能です。 においてプライマーの伸長が起こることはありません。温度が高温に PCR アプタマーは、ポリメラーゼの活性中心に結合するオリゴヌクレオ LightCycler® ウラシル-DNAグリコシラーゼに関す るより詳しい情報は、上記を参照ください。 達すると、アプタマーは、酵素から外れ、RTやDNAポリメラーゼに よる反応が可能になります。RNAの2次構造に対応するためにRTの温 度は61℃にしてインキュベーションすることをお勧めします。高い特 異性と効率でcDNAを合成することで、より高い特異性と感度のPCR の結果をもたらします。 利点 ■ 本キットは、RTステップのインキュベーション温度で 2次構造を克服しやすくするため、より困難なRNAに 適しています。また、Hot Start反応によりRTステッ プにおけるミスアニーリングを最小限に抑えます。 ■ LightCycler® RNAマ ス タ ー HybProbeは、 高 い パ フォーマンス、再現性の高い、コンタミネーションの 危険性が最小限の便利な反応試薬です。 製品構成 1. LightCycler® RNA マスター HybProbe、2.7×濃度、3×250μl 2. Mn(OAC)2 Stock 溶液、50 mM、1 ml 3. H2O、PCR-grade、2×1 ml 品 質 機能試験：LightCycler® RNAマスター HybProbeは、LightCycler® ControlキットRNAを使用して、キットのプロトコールに従って試験 されています。 免責条項 440 526ページのno. 526ページのno. 528ページのno. 528ページのno. 528ページのno. 529ページのno. 529ページのno. 1を参照ください。 2を参照ください。 13を参照ください。 14を参照ください。 33を参照ください。 50を参照ください。 52を参照ください。 アプリケーション、プロトコール、製品、マニュアルについてのより詳しい情報は、 LightCyclerスペシャルサイトwww.lightcycler.comを参照ください。 LightCycler® カローセルタイプシステム LightCycler® カローセルタイプシステム - PCRマスターミックスと試薬 LightCycler® RNAマスター SYBR Green Ⅰ LightCycler® RNA Master SYBR GreenⅠ 製品番号 03 064 760 001 LightCycler® カローセルタイプシステムを使用して、1ステップ RT-PCRを行うための使いやすい反応試薬 アプリケーション 包装単位 1 キット (96反応分/20μl 反応) 5 希望販売価格 ¥57,800 背景情報 LightCycler® RNAマ ス タ ー SYBR Green Ⅰ は、LightCycler® アプタマーとTth DNAポリメラーゼを使用しているためHot Start カ ロ ー セ ル タ イ プ シ ス テ ム イ ン ス ツ ル メ ン ト を 使 用 し て、SYBR 反応を行うことが可能です。Tth DNAポリメラーゼは、熱耐性のRNA Green Ⅰを検出フォーマットとした1ステップRT-PCRに最適化され 依存の逆転写活性と、DNA依存のポリメラーゼ活性をもつ酵素で、逆 た使いやすいHot Startタイプの反応試薬です。 転写反応(RT)とPCRを1チューブ内で連続して行うことが可能です。 注意：LightCycler® RNAマスター SYBR Green Ⅰは、PCR産物の チドで、Tth酵素が最適な温度以下の温度においてターゲットDNAと キャリーオーバーコンタミネーションを防ぐために、熱不安定性ウラ 結合することを防ぎます。そのため反応溶液の調製時や、RT前の温度 シルDNAグリコシラーゼを使用することも可能です。 においてプライマーの伸長が起こることはありません。温度が高温に 達すると、アプタマーは、酵素から外れ、RTやDNAポリメラーゼに LightCycler® ウラシル-DNAグリコシラーゼに関す るより詳しい情報は、440ページを参照ください。 よる反応が可能になります。RNAの2次構造に対応するためにRTの温 度は61℃にしてインキュベーションすることをお勧めします。高い特 異性と効率でcDNAを合成することで、より高い特異性と感度のPCR の結果をもたらします。 利点 ■ 本キットは、RTステップのインキュベーション温度で 2次構造を克服しやすくするため、より困難なRNAに 適しています。また、Hot Start反応によりRTステッ プにおけるミスアニーリングを最小限に抑えます。 ■ LightCycler® RNAマスター SYBR Green Ⅰは、高 いパフォーマンス、再現性の高い、コンタミネーショ ンの危険性が最小限の便利な反応試薬です。 リアルタイム PCR アプタマーは、ポリメラーゼの活性中心に結合するオリゴヌクレオ 製品構成 1. LightCycler® RNA マスター SYBR Green Ⅰ、2.7×濃度、3×250μl 2. Mn(OAC)2 Stock 溶液、50 mM、1 ml 3. H2O、PCR-grade、2×1 ml 品 質 機能試験：LightCycler ® RNAマスター SYBR Green Ⅰは、 LightCycler® ControlキットRNAを使用して、キットのプロトコー ルに従って試験されています。 免責条項 1を参照ください。 5を参照ください。 13を参照ください。 14を参照ください。 33を参照ください。 53を参照ください。 PCR 526ページのno. 526ページのno. 528ページのno. 528ページのno. 528ページのno. 529ページのno. 441 アプリケーション、プロトコール、製品、マニュアルについてのより詳しい情報は、 LightCyclerスペシャルサイトwww.lightcycler.comを参照ください。 5 LightCycler® カローセルタイプシステム LightCycler® カローセルタイプシステム - PCRマスターミックスと試薬 LightCycler® RNAアンプリフィケーションキット HybProbe 製品番号 12 015 145 001 LightCycler® RNA Amplification Kit HybProbe 包装単位 1 キット (96反応分/20μl 反応) 希望販売価格 ¥55,100 LightCycler® カローセルタイプシステムを使用して、1ステップ RT-PCRを行うための反応試薬 アプリケーション ® LightCycler RNAアンプリフィケーションキットHybProbeは、 LightCycler® キャピラリーでHybProbeプローブを検出フォーマッ トとした、1ステップRT-PCRに最適化されています。 製品構成 1. 2. 3. 4. LightCycler® RT-PCR 酵素、2×20μl LightCycler® RT-PCR 反応ミックス HybProbe、3×128μl MgCl2 Stock Solution、25 mM、1 ml H2O、PCR-grade、2×1 ml リアルタイム PCR 品 質 利点 機能試験：LightCycler® RNAア ン プ リ フ ィ ケ ー シ ョ ン キ ッ ト LightCycler® RNAア ン プ リ フ ィ ケ ー シ ョ ン キ ッ ト HybProbeは、高いパフォーマンスで再現性の高い、コ ンタミネーションの危険性が最小限に抑えられる便利な 反応試薬です。MgCl2が別バイアルで提供されるので、 アプリケーションに応じて濃度を最適化することが可能 です。 HybProbeは、LightCycler® ControlキットRNAを使用して、キッ LightCycler® RNAアンプリフィケーションキット SYBR Green Ⅰ トのプロトコールに従って試験されています。 免責条項 526ページのno. 526ページのno. 528ページのno. 528ページのno. 529ページのno. 529ページのno. 1を参照ください。 2を参照ください。 13を参照ください。 14を参照ください。 50を参照ください。 52を参照ください。 製品番号 12 015 137 001 LightCycler® RNA Amplification Kit SYBR GreenⅠ 包装単位 1 キット (96反応分/20μl 反応) 希望販売価格 ¥56,300 LightCycler® カローセルタイプシステムを使用して、1ステップ RT-PCRを行うための反応試薬 アプリケーション ® LightCycler RNAアンプリフィケーションキットSYBR Green Ⅰは、LightCycler® キャピラリーでSYBR Green Ⅰを検出フォー PCR マットとした、1ステップRT-PCRに最適化されています。 利点 LightCycler® RNAア ン プ リ フ ィ ケ ー シ ョ ン キ ッ ト SYBR Green Ⅰは、高いパフォーマンスで再現性の高 い、コンタミネーションの危険性が最小限の便利な反応 試薬です。MgCl2が別バイアルで提供されるので、アプ リケーションに応じて濃度を最適化することが可能です。 製品構成 1. 2. 3. 4. 5. LightCycler® RT-PCR 酵素、2×20μl LightCycler® RT-PCR 反応ミックス SYBR Green Ⅰ、3×128μl MgCl2 Stock Solution、25 mM、1 ml H2O、PCR-grade、2×1 ml 分解溶液、1 ml 品 質 機能試験：LightCycler® RNAアンプリフィケーションキットSYBR Green Ⅰは、LightCycler® ControlキットRNAを使用して、キット のプロトコールに従って試験されています。 免責条項 526ページのno. 526ページのno. 528ページのno. 528ページのno. 529ページのno. 1を参照ください。 5を参照ください。 13を参照ください。 14を参照ください。 53を参照ください。 442 アプリケーション、プロトコール、製品、マニュアルについてのより詳しい情報は、 LightCyclerスペシャルサイトwww.lightcycler.comを参照ください。 LightCycler® カローセルタイプシステム LightCycler® カローセルタイプシステム - PCRマスターミックスと試薬 LightCycler® ControlキットRNA 製品番号 12 158 841 001 LightCycler® Control Kit RNA LightCycler® カローセルタイプシステムを使用して、リアルタイ ムRT-PCRのコントロール反応を行うためのキット 包装単位 1キット (50反応分/20μl 反応) 5 希望販売価格 ¥36,300 製品構成 アプリケーション ® ® LightCycler Controlキ ッ トRNAで は、LightCycler カ ロ ー セ ル タ イ プ シ ス テ ム イ ン ス ツ ル メ ン ト を 使 用 し てRT-PCRの コ ン トロール反応を行うことが可能です。1ステップRT-PCRを行う際 には、LightCycler® RNAアンプリフィケーションキットまたは、 LightCycler® RNAマスターキットのどちらも使用することが可能で す。また2ステップRT-PCRを行うときには、LightCycler® DNAマ 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. サイトカイン RNA、ストック溶液 サイトカイン RNA、1:10 希釈ストック溶液 サイトカイン RNA、1:100 希釈ストック溶液 サイトカイン RNA、1:1000 希釈ストック溶液 サイトカインプライマーミックス、10×濃度 サイトカイン HybProbe ミックス、LightCycler® Red 640 ラベル、10×濃度 サイトカイン HybProbeミックス、Cy 5.5 ラベル、10×濃度 H2O、PCR-grade 品 質 を使用することが可能です。 キットに同梱のLightCycler Red 640とCy 5.5でラベルされた2 機能試験：LightCycler® ControlキットRNAは、LightCycler® RNA つのHybProbeプローブを使用して、2色同時検出実験と色補正の機 アンプリフィケーションキットSYBR Green ⅠおよびLightCycler® 能確認を行うことも可能です。 RNAアンプリフィケーションキットHybProbeを使用してキットのプ ® ロトコールに従って試験されています。LightCycler® カローセルタイ プシステムインスツルメントを使用して100∼1000コピーのサイト 製品概要 ® LightCycler ControlキットRNAには、コントロールテンプレー リアルタイム PCR スターキットまたは、LightCycler® FastStart DNAマスターキット カインRNAの検出が可能です。 トとしてサイトカインRNA、コントロールプライマー、HybProbe プローブ、PCRグレードH2Oが同梱されていて、LightCycler® カロー セルタイプシステムインスツルメントを使用してRT-PCRのコント 免責条項 526ページのno. 2を参照ください。 528ページのno. 14を参照ください。 ロール実験を行うことが可能です。本キットは、LightCycler® カロー セルタイプシステムインスツルメントを使用してリアルタイムRTPCRのパフォーマンスを確認することが可能です。 背景情報 SYBR Green Ⅰ検出フォーマットでは、2本鎖特異的結合色素の存 在下で、人工的に転写したサイトカインRNAの322 bpの領域を特異 的プライマーにより増幅します。PCR産物量が増加するにつれて増加 する、蛍光シグナルをオンラインでモニタリングします。 HybProbeプローブ検出フォーマットでは、人工的に転写したサイ す。増幅されたフラグメントの内側にハイブリダイズするHybProbe プローブによってターゲットDNAの増幅をモニタリングすることが可 PCR トカインRNAの322 bpの領域を特異的プライマーにより増幅しま 能です。2つのプローブがハイブリダイズし近接すると、2つの蛍光 物質の間に蛍光共鳴エネルギー転移(FRET)が起こります。あらかじめ プローブの一方の5'末端にLightCycler® Red蛍光物質(LC Red 640 またはCy 5.5色素)をラベルし、3'末端を伸長を防ぐためにリン酸化 しておきます。もう一方のプローブは、3'末端をフルオレセインでラ ベルしておきます。FRETが起こっている間は、ドナー蛍光色素であ るフルオレセインは、LightCycler® インスツルメントの励起光源に より励起されます。励起エネルギーの一部がアクセプター色素である LightCycler® Redへ転移します。励起されたLightCycler® Red蛍光 物質の蛍光値を測定します。 443 アプリケーション、プロトコール、製品、マニュアルについてのより詳しい情報は、 LightCyclerスペシャルサイトwww.lightcycler.comを参照ください。 5 LightCycler® カローセルタイプシステム LightCycler® カローセルタイプシステム - PCRマスターミックスと試薬 HybProbe プローブによる2色同時検出のためのラベリング試薬 LightCycler® フルオレセインCPG LightCycler® Fluorescein CPG 製品番号 03 138 178 001 アプリケーション 背景情報 LightCycler® フルオレセインCPGは、オリゴヌクレオチドの3'末 包装単位 1g 希望販売価格 ¥214,200 LightCycler® フルオレセインCPGは、純粋な色素のアイソマー由 端をラベルします。HybProbeプローブフォーマットを利用する際は、 来で、オリゴヌクレオチド合成の間安定な結合を介して付加されます。 5'末端をLightCycler® Redでラベルされたオリゴヌクレオチドと合 そのため、HPLCによる精製で簡単に、産物を精製することが可能で わせて使用します。この支持体は、ジメトキシトリチル基を含んでい す。LightCycler® フルオレセイン CPGを使用して合成されたプロー るため、一般的なヌクレオシド支持体と同様に使用することが可能で ブは、Taq DNAポリメラーゼの伸長とヌクレアーゼによる分解から す。 保護するために3'末端をブロックされます。このようにして合成され たプローブは、LightCycler® カローセルタイプシステムインスツル リアルタイム PCR 製品概要 メントを使用した単色、2色同時検出実験に適しています。 フルオレセインは長鎖アルキルアミノCPG(lcaa CPG、500Å)に より、オリゴヌクレオチドの3'末端がラベルされます。 LightCycler® フルオレセインでラベルされたオリゴヌクレオチド 製品構成 1 gの白い固形物 のスペクトル特性は、励起最大波長が494 nm、エミッションが最大 519 nm(2 mM Tris バッファ、pH 8.3) 免責条項 LightCycler® Red 640 NHS エステル LightCycler® Red 640-N-hydroxy-succinimide ester 製品番号 12 015 161 001 アプリケーション 製品構成 ® LightCycler Red 640 NHSエステルは、5'-アミノオリゴヌクレ 528ページのno. 15を参照ください。 包装単位 1 バイアル 希望販売価格 ¥24,500 青色の固形物。250 nmol以上のオリゴヌクレオチドをラベルすることが可能です。 オチドを標識し、3'末端をフルオレセインでラベルされたオリゴヌク レオチドと組合わせて、HybProbeプローブ検出のために使用されま 免責条項 528ページのno. 15を参照ください。 す。 製品概要 ラベル量：バイアルには、5×50 nmolのオリゴヌクレオチドをラベ ルするための LightCycler® Red 640 NHSエステルが含まれていま PCR す。 LightCycler® Red 640でラベルされたオリゴヌクレオチドのスペ クトル特性は、励起最大波長は、625 nm、エミッションが最大640 nm(2 mM Tris バッファ、pH 8.3)です。 LightCycler® Red 610 NHS エステル LightCycler® Red 610-N-hydroxy-succinimide ester 製品番号 03 561 488 001 包装単位 1 バイアル 希望販売価格 ¥23,000 LightCycler® Red 610でラベルされたオリゴヌクレオチドのスペ アプリケーション LightCycler® Red 610 NHSエステルは、5'-アミノオリゴヌクレ オチドを標識し、3'末端をフルオレセインでラベルされたオリゴヌク クトル特性は、励起最大波長は、590 nm、エミッションが最大610 nm(2 mM Tris バッファ、pH 8.3)です。 レオチドと組合わせて、HybProbeプローブ検出のために使用されま 製品構成 す。 青色の固形物。250 nmol以上のオリゴヌクレオチドをラベルすることが可能です。 製品概要 ラベル量：バイアルには、5×50 nmolのオリゴヌクレオチドをラベ ® ルするためのLightCycler Red 610 NHSエステルが含まれていま 免責条項 528ページのno. 15を参照ください。 528ページのno. 16を参照ください。 す。 444 アプリケーション、プロトコール、製品、マニュアルについてのより詳しい情報は、 LightCyclerスペシャルサイトwww.lightcycler.comを参照ください。 LightCycler® カローセルタイプシステム LightCycler® カローセルタイプシステム - PCRマスターミックスと試薬 HybProbe プローブによる2色同時検出のためのラベリング試薬 LightCycler® カラーコンペンゼーションセット LightCycler® Color Compensation Set 製品番号 12 158 850 001 包装単位 1 セット(5 ラン分) 5 希望販売価格 ¥16,900 LightCycler® カローセルタイプシステムインスツルメント上で、 色補正ファイルを作成するための使いやすい溶液 アプリケーション 原 理 LightCycler® Red 640およびCy 5.5でラベルされたHybProbe LightCycler® カラーコンペンゼーションセットは、クロストーク プローブを同一キャピラリー内で反応させる2色同時検出実験に必要 を補正するカラーコンペンゼーションファイルを簡単に作成できる使 な色補正ファイルを作成することが可能です。 いやすい溶液です。クロストークは、1本のキャピラリー内で異なる 色素でラベルされたHybProbeプローブを使用して、マルチプレック 背景情報 ス2色同時検出実験を行う際ににチャンネル間に見られます。作成さ LightCycler インスツルメントに搭載されている検出チャンネル れたカラーコンペンゼーションファイルは、特定のLightCycler® カ の光学フィルターは、異なるエミッション波長をもつフルオレセイン、 ローセルタイプシステムインスツルメント上でおこなわれる2色同時 LightCycler® Red 640、Cy 5.5色素について最適化されています 検出実験に使用し、蛍光の生データをラン中およびランの後で補正す が、チャンネル間にわずかなクロストークが見られます。このクロス ることが可能です。 トークを色補正ファイルを使用して補正します。 免責条項 製品構成 ブランク、100μl フルオレセインのキャリブレーター、100μl LightCycler® Red 640のキャリブレーター、100μl Cy 5.5 キャリブレーター、100μl PCR 1. 2. 3. 4. 526ページのno. 2を参照ください。 528ページのno. 14を参照ください。 リアルタイム PCR ® 445 アプリケーション、プロトコール、製品、マニュアルについてのより詳しい情報は、 LightCyclerスペシャルサイトwww.lightcycler.comを参照ください。 5 LightCycler® カローセルタイプシステム LightCycler® カローセルタイプシステム - PCRマスターミックスと試薬 HybProbe プローブによる2色同時検出のためのラベリング試薬 LightCycler® マルチカラーデモセット 製品番号 03 624 854 001 LightCycler® Multicolor Demo Set LightCycler® 2.0インスツルメントを使用して、マルチカラー検出 のデモンストレーションを行うことの出来るキット 製品構成 アプリケーション ® ® LightCycler マルチカラーデモセットは、LightCycler 2.0イン ® スツルメントとLightCycler ソフトウェア 4.0を使用して以下のよ うなデモンストレーションを行うためのセットです。 ・マルチカラーのワークフロー ・4チャンネルの色補正機能 ・マルチカラー検出 リアルタイム PCR 包装単位 希望販売価格 1 セット ¥26,000 (5 回のカラーコンペンゼーションおよび 20 回のマルチカラーコントロール実験) LightCycler® DNA マスター HybProbeについての より詳しい情報は、438ページを参照ください。 製品概要 LightCycler® マルチカラーデモセットでは、LightCycler® 2.0イ ンスツルメントを使用して以下の2つのことを行うことが可能です。 ・色補正ファイルの作成を目的としたカラーコンペンゼーションラン 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 検出ミックス、5×80μl テンプレート DNA、100μl キャリブレーターバッファ、100μl フルオレセインキャリブレーター、100μl LightCycler® Red 610 キャリブレーター、100μl LightCycler® Red 640 キャリブレーター、100μl LightCycler® Red 670 キャリブレーター、100μl Cyc 5.5 キャリブレーター、100μl 品 質 機能試験：LightCycler® マルチカラーデモセットは、LightCycler® 2.0インスツルメントとLightCycler® DNAマスター HybProbe キッ トを使用して機能試験されています。 免責条項 526ページのno. 2を参照ください。 528ページのno. 13を参照ください。 528ページのno. 14を参照ください。 本セットには、4色のFRET反応より生じたクロストークを効率よく 補正するための色補正データを作成するためのカラーコンペンゼー ションランを行うために必要なすべてのコンポーネント(キャリブ レーターセット)が含まれています。 ・4色の融解曲線検出を行うためのマルチカラーラン 本セットには、LightCycler® DNAマスター HybProbe反応試薬と 組合わせて使用し、4色のFRET反応(リアルタイム増幅、融解曲線 分析)を行うための試薬(検出ミックスとテンプレートDNA)が含まれ ます。本セットを使用してカラーコンペンゼーションファイルを作 成すると、610、640、670、705のチャンネルに特異的な融解ピー クの色補正が可能です。 背景情報 PCR LightCycler® マルチカラーデモセットは、LightCycler® 2.0イン スツルメントとLightCycler® DNAマスター HybProbeキットを使用 して、マルチカラー検出のデモンストレーションと、色補正ファイル 作成に必要なランを行うことが可能です。特異的なプライマーペアに より増幅されるプラスミドの479 bpのフラグメントは、それぞれに 特異的なHybProbeプローブの蛍光によって検出されます。 増幅の後の融解曲線分析で、融解温度の差により各検出サイトを区 別することが可能です。温度がゆっくりと上昇すると、検出用プロー ブはそれぞれ特異的な温度で乖離するので、LightCycler® 2.0インス ツルメントは、610、640、670、705の各チャンネルの減少する 蛍光値を検出します。特異的な融解温度をLightCycler® ソフトウェ ア 4.1の融解温度コーリング機能により決定します。 446 アプリケーション、プロトコール、製品、マニュアルについてのより詳しい情報は、 LightCyclerスペシャルサイトwww.lightcycler.comを参照ください。 LightCycler® カローセルタイプシステム LightCycler® カローセルタイプシステム - リファレンス遺伝子セット LightCycler® h-PBGDハウスキーピング遺伝子セット LightCycler® h-PBGD Housekeeping Gene Set 製品番号 03 146 073 001 LightCycler® カ ロ ー セ ル タ イ プ シ ス テ ム を 使 用 し て、RT-PCR アッセイにおいてPBGDのmRNAを検出、定量比較するためのプ ライマー／プローブの混合液とスタンダード RNA 希望販売価格 ¥39,100 ® LightCycler h-PBGDハウスキーピング遺伝子セットには、ヒト PBGD遺伝子特異的なプライマーとHybProbeプローブの混合液が含 転写されたRNAの段 階希釈されたスタンダード溶液が含まれます。 ・プライマーとHybProbeプローブは、ヒトPBGD遺伝子のmRNAの みを特異的に検出するように最適化されています。偽遺伝子や混入 DNAを検出することはありません。 ・すべての試薬は、特に最適化の必要のない混合溶液として提供され ます。本セットは、1ステップおよび2ステップRT-PCR法のどちら にも使用可能です。 1. h-PBGD 検出ミックス、10×濃度、200μlのPBGD mRNAに特異的なプライマーと プローブの混合溶液 2. MgCl2、25 mM、1 ml 3. h-PBGD RNA スタンダード 1、50μl、ヒト PBGD RNAの 転写産物を安定化 した混合溶液、約5×106コピー /5μl 4. h-PBGD RNA スタンダード 2、50μl、ヒト PBGD RNAの 転写産物を安定化 した混合溶液、約5×105コピー /5μl 5. h-PBGD RNA スタンダード 3、50μl、ヒト PBGD RNAの 転写産物を安定化 した混合溶液、約5×104コピー /5μl 6. h-PBGD RNA スタンダード 4、50μl、ヒト PBGD RNAの 転写産物を安定化 した混合溶液、約5×103コピー /5μl 7. h-PBGD RNA スタンダード 4、50μl、ヒト PBGD RNAの 転写産物を安定化 した混合溶液、約5×102コピー /5μl 8. H2O、PCR-grade、2×1 ml、ヌクレアーゼフリー 免責条項 製品の概要 526ページのno. 2を参照ください。 528ページのno. 14を参照ください。 Porphobilinogen Deaminase(PBGD) リアルタイム PCR 製品構成 アプリケーション まれています。また、検量線作成用に、 包装単位 1 セット (96反応分/20μl 反応) 5 PBGDハウスキーピング遺伝子は、組織において広く発現している、 比較的安定に発現している遺伝子です。PBGDに偽遺伝子の報告はあ りません。 PBGDの発現レベルは異なる組織間で比較できますが、臨床サンプ ルにおいては発現がばらつくことがあります。PBGDハウスキーピン グ遺伝子は、低発現量のmRNAに属します。 LightCycler® h-G6PDHハウスキーピング遺伝子セット LightCycler® h-G6PDH Housekeeping Gene Set 製品番号 03 261 883 001 LightCycler® カ ロ ー セ ル タ イ プ シ ス テ ム を 使 用 し て、RT-PCR アッセイにおいてG6PDHのmRNAを検出、定量比較するためのプ ライマー／プローブの混合液とスタンダード RNA 希望販売価格 ¥39,100 ® LightCycler h-G6PDHハウスキーピング遺伝子セットには、ヒ トG6PDH遺伝子特異的なプライマーとHybProbeプローブの混合液 転写されたRNA の段階希釈されたスタンダード溶液が含まれます。 ・プライマーとHybProbeプローブは、ヒトG6PDH遺伝子のmRNA のみを特異的に検出するように最適化されています。偽遺伝子や混 入DNAを検出することはありません。 ・すべての試薬は、特に最適化の必要のない混合溶液として提供され ます。本セットは、1ステップおよび2ステップRT-PCR法のどちら にも使用可能です。 製品概要 Glucose-6-phosphate dehydrogenase(G6PDH) 1. h-G6PDH 検出ミックス、10×濃度、200μlのG6PDH mRNAに特異的なプライマー とプローブの混合溶液 2. MgCl2、25 mM、1 ml 3. h-G6PDH RNA スタンダード 1、50μl、ヒト G6PDH RNAの 転写産物を安 定化した混合溶液約5×106コピー /5μl 4. h-G6PDH RNA スタンダード 2、50μl、ヒト G6PDH RNAの 転写産物を安 定化した混合溶液、約5×105コピー /5μl 5. h-G6PDH RNA スタンダード 3、50μl、ヒト G6PDH RNAの 転写産物を安 定化した混合溶液、約5×104コピー /5μl 6. h-G6PDH RNA スタンダード 4、50μl、ヒト G6PDH RNA の 転写産物を安 定化した混合溶液、約5×103コピー /5μl 7. h-G6PDH RNA スタンダード 4、50μl、ヒト G6PDH RNAの 転写産物を安 定化した混合溶液、約5×102コピー /5μl 8. H2O、PCR-grade、2×1 ml、ヌクレアーゼフリー PCR 製品構成 アプリケーション が含まれています。また、検量線作成用に、 包装単位 1セット (96反応分/20μl 反応) 免責条項 526ページのno. 2を参照ください。 528ページのno. 14を参照ください。 グルコース 6 リン酸デヒドロゲナーゼは、広範囲に発現しています が、発現レベルは均一ではありません。組織間において発現量は異な ります。細胞のタイプ(肝臓、脂肪、肺、増殖細胞など)によって、細 胞のG6PDHのレベルは多くの刺激により制御されています。G6PDH ハウスキーピング遺伝子は、中発現量のmRNAに属します。 447 アプリケーション、プロトコール、製品、マニュアルについてのより詳しい情報は、 LightCyclerスペシャルサイトwww.lightcycler.comを参照ください。 5 RealTime ready RealTime ready qPCRアッセイおよびパネル LightCycler® 480 による高速かつ簡単な遺伝子発現 解析 オンラインでのアッセイ検索・プレートの設定 RealTime ready Configurator を使用することで、わずか数クリッ リアルタイム PCR クで、ヒトをターゲットとした機能検証済みの qPCR アッセイを入手 LightCycler® システムを使用した遺伝子発現解析プロ ファイリングは、更に簡単になりました。ユニバーサル プローブライブラリーテクノロジーに基づく、機能検証 済みの qPCR アッセイが、マイクロアレイまたは遺伝 子ノックダウンデータを高い信頼性で評価したり、生物 学的経路・シグナル伝達カスケードにおける標的の発現 解析を可能にします。 オンラインの RealTime ready Configurator で、シ ングルアッセイまたは LightCycler® 480 マルチウェ ルプレートのカスタムプレートを選択できます。 機能検証済みの qPCR アッセイによる最適な結果 することができます。オンラインのアッセイ選択とオーダーツールを 使用することで、シングルアッセイ、または PCR 反応がセットアッ プされたカスタム LightCycler® 480 マルチウェルプレートを注文す ることができます。 包括的な検索機能、ターゲット選択とアッセイに関する詳細情報に より、研究に最適なアッセイを選択することができます。生物学的経路・ シグナル伝達カスケードにおけるターゲットとその他の遺伝子との相 互作用を解析するために、関連ターゲットの定義、アッセイ選択肢の 絞り込み、カスタムプレートの設定などを行うことができます。 グラフィカルインターフェースによるプレート設定 RealTime ready Configrator は、直観的に使用できるグラフィカ ルインターフェースを採用しています。様々なレイアウトで任意のアッ セイを選択することができます。コンフィグレーション中の変更・編 ヒト遺伝子定量用 RealTime ready アッセイは、標的特異的プライ 集は、ステップごとに自動的に保存されます。購入後は、パネルの内 マーおよびユニバーサルプローブライブラリープローブに基づいてい 容を、LightCycler® 480 ソフトウェア用に *.txt ファイルとしてダ ます。すべてのアッセイは、設計プロセス後、機能検証を行い、PCR ウンロードできます。 効率、直線性、特異性などの厳格な性能基準に基づき選択されます。アッ セイは、RealTime ready シングルアッセイ（最大 300 × 20 μL 反応） 、または任意のリファレンス遺伝子 3 個およびオプションの RT および PCR コントロールも含めセットされた LightCycler® マルチ ウェルプレートで提供されます。 設定の最終確認後、ショッピングカートからオンラインで e-mail を 介して注文することができます。 詳細については、www.realtimeready.roche.com の簡単なチュー トリアルビデオを参照するか、RealTime ready Configurator を直 PCR 接訪ねてください。 448 アプリケーション、プロトコール、製品、マニュアルについてのより詳しい情報は、 RealTime ready スペシャルサイト www.realtimeready.roche.com を参照ください。 RealTime ready RealTime readyカスタムパネル RealTime ready カスタムシングルアッセイ 5 製品概要 RealTime ready カスタムシングルアッセイには、標的特定プライ 任意のヒト遺伝子用の機能検証済みの qPCR アッセイです。 マーとユニバーサルプローブライブラリープローブが含まれています。 すべてのアッセイは、LightCycler® 480 インスツルメントを使用し、 用 途 RealTime ready カスタムシングルアッセイを使用することで任意 のヒト遺伝子の発現をリアルタイム PCR システムで定量的に測定す ることができます。 ユニバーサル cDNA による標準的な PCR 反応で機能を検証済みです。 PCR 効率、感度、特異性に関する厳格な基準をパスし、極めて高い再 現性を保証します。 ウェブベースの RealTime ready Configurator を使用して、任意 の標的用のアッセイを簡単に検索し選択できます。包括的な検索機能 により、研究に適したアッセイを素早く選択し、オンラインオーダー ■ ユニバーサルプローブライブラリープローブに基づく 機能検証済みの qPCR アッセイを使用できます。 ■ 使いやすいウェブベースの Configurator サイトを使 用することで、ヒト qPCR アッセイを簡単に検索、選 択、注文することができます。 ■ すべてのアッセイに関する詳細な説明と生物学的情報 を利用することができます。 RealTime ready カタログアッセイ RealTime ready Catalog Assays できます。 カタログアッセイは既にデザインして機能検証済みのアッセイです。 選択したターゲットのカタログアッセイが存在しない場合、弊社がデ ザイナーアッセイとして設計し検証します。 注意：デザイナーアッセイは、一度お手元に届いたら、以降のカスタ ムオーダー時にカタログアッセイとなり、Configurator から選択す ることができます。したがって、アッセイの選択および（再）注文には、 正しいカタログ番号が自動的に入力される Configurator を使用する ことを推奨しています。 製品番号 05 532 957 001 包装単位 300 反応分 /20 μL 反応 希望販売価格 ¥24,000 製品番号 05 583 055 001 包装単位 300 反応分 /20 μL 反応 希望販売価格 ¥30,000 リアルタイム PCR 利点 RealTime ready カタログアッセイは、任意のヒト、マウス、ラッ ト遺伝子の機能検証済みの qPCR アッセイです。 RealTime ready デザイナーアッセイ RealTime ready Designer Assays 選択したターゲットのカタログアッセイが存在しない場合、弊社が PCR 任意のヒト、マウス、ラット遺伝子の機能検証済みの qPCR アッセ イです。 デザイナーアッセイを設計して検証します。 注意：デザイナーアッセイは、一度お手元に届いたら、以降のカスタ ムオーダー時にカタログアッセイとなり、Configurator から選択す ることができます。したがって、アッセイの選択および（再）注文には、 正しいカタログ番号が自動的に入力される Configurator を使用する ことを推奨しています。 449 アプリケーション、プロトコール、製品、マニュアルについてのより詳しい情報は、 RealTime ready スペシャルサイト www.realtimeready.roche.com を参照ください。 5 RealTime ready RealTime readyカスタムパネル RealTime ready カスタムパネル 製品概要 RealTime ready カスタムパネルは、選択したヒト qPCR アッセ RealTime ready カスタムパネルは、あらかじめ 96 ウェルまたは イを 96 ウェルまたは 384 ウェルの LightCycler® 480 マルチウェ 384 ウェルの LightCycler® 480 マルチウェルプレートにプレート ルプレートに分注し、安定して保管できるように凍結乾燥させたもの 化された機能検証済みのヒト qPCR アッセイです。 です。すべてのアッセイは、LightCycler® 480 インスツルメントと 用 途 PCR 効率、感度、特異性に関する厳格な基準をパスし、極めて高い再 ユニバーサル cDNA による標準的な PCR 反応で機能検証済みです。 リアルタイム PCR LightCycler® 480 インスツルメントを使用したヒト遺伝子の遺伝 現性を保証します。 子発現プロファイリングのために RealTime ready qPCR アッセイ 各プレートはシーリングフォイルで密封され、個別に包装されて がロードされた RealTime ready カスタムパネルを使用することがで います。各パッケージには、PCR 反応用のシーリングフォイルが含 きます。無料のウェブベースの RealTime ready Configurator を使 まれています。カスタムパネルの内容と構成は、RealTime ready 用して任意のアッセイおよびプレートレイアウトを選択することがで Configurator から LightCycler® 480 ソフトウェアにダウンロード きます。 することができます。必要な操作は、cDNA およびマスターミックス を加え、LightCycler® 480 にロードするのみです。 利点 ■ ユニバーサルプローブライブラリープローブに基づく 機能検証済みの qPCR アッセイを使用できます。 ■ 使いやすいウェブベースの Configurator サイトを使 用することで、ヒト qPCR アッセイを簡単に検索、選 択、注文することができます。 ■ すべてのアッセイに関する詳細な説明と生物学的情報 を利用することができます。 ■ LightCycler® 480 インスツルメントへのハードウェ ア・ソフトウェアの追加を不要とし、予めプレート 化したアッセイを使用することができます。操作は cDNA およびマスターミックスを添加するだけです。 RealTime ready カスタムパネル 96 PCR RealTime ready Custom Panel 96 RealTime ready Custom Panel 96 - 96 製品番号 05 532 949 001 包装単位 10 プレート 希望販売価格 ¥500,000 RealTime ready Custom Panel 96 - 96+ 05 582 563 001 10 プレート ¥500,000 RealTime ready Custom Panel 96 - 48 05 532 914 001 10 プレート ¥400,000 RealTime ready Custom Panel 96 - 48+ 05 582 571 001 10 プレート ¥400,000 RealTime ready Custom Panel 96 - 32 05 532 906 001 10 プレート ¥400,000 RealTime ready Custom Panel 96 - 32+ 05 582 598 001 10 プレート ¥400,000 RealTime ready Custom Panel 96 - 24 05 532 884 001 6 プレート ¥240,000 RealTime ready Custom Panel 96 - 24+ 05 582 610 001 6 プレート ¥240,000 RealTime ready Custom Panel 96 - 16 05 532 868 001 6 プレート ¥240,000 RealTime ready Custom Panel 96 - 16+ 05 582 628 001 6 プレート ¥240,000 RealTime ready Custom Panel 96 - 8 05 532 850 001 6 プレート ¥210,000 450 アプリケーション、プロトコール、製品、マニュアルについてのより詳しい情報は、 RealTime ready スペシャルサイト www.realtimeready.roche.com を参照ください。 RealTime ready RealTime readyカスタムパネル 5 RealTime ready カスタムパネル 384 製品番号 05 532 833 001 包装単位 40 プレート 希望販売価格 ¥2,000,000 RealTime ready Custom Panel 384 - 384+ 05 582 644 001 40 プレート ¥2,000,000 RealTime ready Custom Panel 384 - 192 05 582 652 001 40 プレート ¥2,000,000 RealTime ready Custom Panel 384 - 192+ 05 582 822 001 40 プレート ¥2,000,000 RealTime ready Custom Panel 384 - 128 05 582 849 001 20 プレート ¥1,000,000 RealTime ready Custom Panel 384 - 128+ 05 582 865 001 20 プレート ¥1,000,000 RealTime ready Custom Panel 384 - 96 05 582 873 001 10 プレート ¥500,000 RealTime ready Custom Panel 384 - 96+ 05 582 881 001 10 プレート ¥500,000 RealTime ready Custom Panel 384 - 64 05 582 890 001 10 プレート ¥500,000 RealTime ready Custom Panel 384 - 64+ 05 582 903 001 10 プレート ¥500,000 RealTime ready Custom Panel 384 - 48 05 582 911 001 10 プレート ¥500,000 RealTime ready Custom Panel 384 - 48+ 05 582 938 001 10 プレート ¥500,000 RealTime ready Custom Panel 384 - 32 05 582 962 001 10 プレート ¥500,000 RealTime ready Custom Panel 384 - 32+ 05 582 989 001 10 プレート ¥500,000 RealTime ready Custom Panel 384 - 16 05 583 004 001 6 プレート ¥300,000 RealTime ready Custom Panel 384 - 16+ 05 583 039 001 6 プレート ¥300,000 予め 384 ウェル LightCycler® 480 マルチウェルプレートに分注 された機能検証済みのヒト qPCR アッセイです。 PCR RealTime ready Custom Panel 384 - 384 リアルタイム PCR RealTime ready Custom Panel 384 451 アプリケーション、プロトコール、製品、マニュアルについてのより詳しい情報は、 RealTime ready スペシャルサイト www.realtimeready.roche.com を参照ください。 5 RealTime ready RealTime readyフォーカスパネル RealTime ready ヒトアポトーシスパネル、384 RealTime ready Human Apoptosis Panel, 384 アポトーシスに関与する 372 個のヒト遺伝子の発現プロファイリ ングができる LightCycler® 480 インスツルメント用 qPCR アッセ 製品番号 包装単位 希望販売価格 05 339 316 001 2 ×ウェルプレート（384 ウェル）と ¥98,000 シーリングフォイル （ターゲット遺伝子 372 種、コントロー ル 5 ウェル、リファレンス遺伝子 7 種） 背景情報 本製品では、ヒトのアポトーシス現象に関連する 372 種の遺伝子 イパネルです。 の発現プロファイリングを行うことができます。 用 途 伝子が以下のとおりグループ化されています。 アポトーシスに関連したタンパク質ファミリーや、パスウェイの遺 リアルタイム PCR RealTime ready ヒトアポトーシスパネル 384 と LightCycler® 480 インスツルメントを使用して 372 個のヒトアポトーシス関連遺 プロアポトーシス 伝子の発現レベルが定量できます。 カスパーゼファミリー Bcl-2 ファミリー IAP ファミリー 利点 ■ 確かな結果：付属のコントロールと事前に検証された アッセイを使用することで、最適な性能を保証します。 ■ 効率的なワークフロー：予めプレート化されたアッセ イのセットアップに必要なのは、サンプル cDNA と マスターミックスの添加だけです。 ■ サンプル情報インポート：オンラインでプレート情報 をダウンロードし、LightCycler® 480 ソフトウェア にインポートできます。 ■ 簡単な相対定量：各プレートには、7 個のリファレン ス遺伝子アッセイが含まれています。 p53 シグナル伝達 抗アポトーシス CARD ファミリー TNFR ファミリー NF- κB シグナル伝達経路 Fas シグナル伝達経路 製品概要 本 製 品 は、372 個 の 検 証 済 み の qPCR ア ッ セ イ で 構 成 さ れ、 LightCycler® 480 マルチウェルプレート 384 で供給されます。各 アッセイには、特異的なプライマーと LNA を含むユニバーサルプ PCR ローブライブラリープローブが含まれています。添加する必要があ る コ ン ポ ー ネ ン ト は、 サ ン プ ル cDNA と マ ス タ ー ミ ッ ク ス（ 例： LightCycler® 480 プローブマスター）のみです。 また、パネルには 7 個のヒトリファレンス遺伝子アッセイも含ま れ て お り（ACTB、 β 2M、GAPDH、HPRT1、RPL13A、18S、 YWHAZ） 、簡単に相対定量が行えます。逆転写（RT）反応の 3 個の 陽性コントロールアッセイと 2 個の陰性コントロールアッセイも含ま れています。RT 陽性コントロールは、RNA サンプルの分解の有無に 関する判定と RT ステップの品質評価に使用されます。RT 陰性コン トロールは、残存ゲノム DNA を検出します。 452 アプリケーション、プロトコール、製品、マニュアルについてのより詳しい情報は、 RealTime ready スペシャルサイト www.realtimeready.roche.com を参照ください。 RealTime ready RealTime readyフォーカスパネル RealTime ready ヒトアポトーシスパネル、96 RealTime ready Human Apoptosis Panel, 96 アポトーシスに関与する 84 個のヒト遺伝子の発現プロファイリン グができる LightCycler® 480 インスツルメント用 qPCR アッセイ 5 製品番号 05 392 063 001 包装単位 希望販売価格 2 ×ウェルプレート（96 ウェル）と ¥79,000 シーリングフォイル （ターゲット遺伝子 84 種、コントロール 5 ウェル、リファレンス遺伝子 7 種） 背景情報 本製品では、ヒトのアポトーシス現象に関連する 84 種の遺伝子の パネルです。 発現プロファイリングを行うことができます。 用 途 伝子が以下のとおりグループ化されています。 アポトーシスに関連したタンパク質ファミリーや、パスウェイの遺 480 インスツルメントを使用して、84 個のヒトアポトーシス関連遺 プロアポトーシス 伝子の発現レベルが定量できます。 カスパーゼファミリー Bcl-2 ファミリー IAP ファミリー 利点 ■ 確かな結果：付属のコントロールと事前に検証された アッセイを使用することで、最適な性能を保証します。 ■ 効率的なワークフロー：予めプレート化されたアッセ イのセットアップに必要なのは、サンプル cDNA と マスターミックスの添加だけです。 ■ サンプル情報インポート：オンラインでプレート情報 をダウンロードし、LightCycler® 480 ソフトウェア にインポートできます。 ■ 簡単な相対定量：各プレートには、7 個のリファレン ス遺伝子アッセイが含まれています。 p53 シグナル伝達 抗アポトーシス リアルタイム PCR RealTime ready ヒ ト ア ポ ト ー シ ス パ ネ ル 96 と LightCycler® CARD ファミリー TNFR ファミリー NF- κB シグナル伝達経路 Fas シグナル伝達経路 製品概要 本 製 品 は、84 個 の 検 証 済 み の qPCR ア ッ セ イ で 構 成 さ れ、 LightCycler® 480 マルチウェルプレート 96 で供給されます。各アッ セイには、特異的なプライマーと LNA を含むユニバーサルプローブ ネントは、サンプル cDNA と反応液（例：LightCycler® 480 プロー ブマスター）のみです。 PCR ライブラリープローブが含まれています。添加する必要があるコンポー また、パネルには 7 個のヒトリファレンス遺伝子アッセイも含ま れ て お り（ACTB、 β 2M、GAPDH、HPRT1、RPL13A、18S、 YWHAZ） 、簡単に相対定量が行えます。逆転写（RT）反応の 3 個の 陽性コントロールアッセイと 2 個の陰性コントロールアッセイも含ま れています。RT 陽性コントロールは、RNA サンプルの分解の有無に 関する判定と RT ステップの品質評価に使用されます。RT 陰性コン トロールは、残存ゲノム DNA を検出します。 453 アプリケーション、プロトコール、製品、マニュアルについてのより詳しい情報は、 RealTime ready スペシャルサイト www.realtimeready.roche.com を参照ください。 5 RealTime ready RealTime readyフォーカスパネル RealTime ready ヒト ABC トランスポーターパネル RealTime ready Human ABC Transporter Panel ヒト ABC トランスポーター スーパーファミリーの 42 個の遺伝子 の発現プロファイリングができる LightCycler® 480 インスツルメン ト用 qPCR アッセイパネルです。 製品番号 05 339 324 001 包装単位 希望販売価格 2 ×ウェルプレート（96 ウェル）と ¥79,000 シーリングフォイル （ターゲット遺伝子 42 種（duplicates）、 コントロール 5 ウェル、リファレンス遺 伝子 7 種） 背景情報 ATP-binding cassette (ATP 結合カセット：ABC) ファミリーは、 ATP 結合ドメインを持つ細胞膜貫通型タンパク質であり、様々な物質 （代謝産物、脂質やステロール、イオン、低分子、薬剤）の能動輸送に 用 途 リアルタイム PCR RealTime ready ABC トランスポーターパネルと LightCycler® 関与しています。 がん細胞株や多剤耐性腫瘍等では本ファミリー遺伝子の過剰発現が 480 インスツルメントを使用して、ヒト ABC トランスポーター スー 見られることがあり、また、細菌における多剤耐性や嚢胞性繊維症、 パーファミリーの 42 個の遺伝子の発現レベルを定量できます。 ヒトの遺伝病などにも関連していることが明らかになっています。 利点 ■ 確かな結果：付属のコントロールと事前に検証された アッセイを使用することで、最適な性能を保証します。 ■ 効率的なワークフロー：予めプレート化されたアッセ イのセットアップに必要なのは、サンプル cDNA と マスターミックスの添加だけです。 ■ サンプル情報インポート：オンラインでプレート情報 をダウンロードし、LightCycler® 480 ソフトウェア にインポートできます。 ■ 簡単な相対定量：各プレートには、7 個のリファレン ス遺伝子アッセイが含まれています。 製品概要 本 製 品 は、42 個 の 検 証 済 み の qPCR ア ッ セ イ で 構 成 さ れ、 LightCycler® 480 マルチウェルプレート 96 で供給されます。各アッ PCR セイには、特異的なプライマーと LNA を含むユニバーサルプローブ ライブラリープローブが含まれています。添加する必要があるコンポー ネントは、サンプル cDNA と反応液（例：LightCycler® 480 プロー ブマスター）のみです。 また、パネルには 7 個のヒトリファレンス遺伝子アッセイも含ま れ て お り（ACTB、 β 2M、GAPDH、HPRT1、RPL13A、18S、 YWHAZ） 、簡単に相対定量が行えます。逆転写（RT）反応の 3 個の 陽性コントロールアッセイと 2 個の陰性コントロールアッセイも含ま れています。RT 陽性コントロールは、RNA サンプルの分解の有無に 関する判定と RT ステップの品質評価に使用されます。RT 陰性コン トロールは、残存ゲノム DNA を検出します。 454 アプリケーション、プロトコール、製品、マニュアルについてのより詳しい情報は、 RealTime ready スペシャルサイト www.realtimeready.roche.com を参照ください。 RealTime ready RealTime readyフォーカスパネル RealTime ready Human Cell Cycle Regulation Panel 製品番号 05 339 359 001 細胞周期制御に関連する 84 個のヒト遺伝子の発現プロファイリング 背景情報 RealTime ready ヒト細胞周期制御パネル ができる LightCycler® 480 インスツルメント用 qPCR アッセイパ ネルです。 5 包装単位 希望販売価格 2 ×ウェルプレート（96 ウェル）と ¥79,000 シーリングフォイル （ターゲット遺伝子 84 種、コントロール 5 ウェル、リファレンス遺伝子 7 種） プレート上の 84 個の細胞周期関連遺伝子は、以下の遺伝子ファミ リー、細胞周期制御関連の機能から選定しました。 • 細胞周期（Phase） RealTime ready 細胞周期制御パネルと LightCycler® 480 イン スツルメントを使用して、ヒト細胞周期制御プロセスに関与する 84 • 細胞周期制御（例：cyclin、CDK ファミリー） • 細胞周期インヒビター • 細胞周期チェックポイント 個の遺伝子の発現レベルを定量できます。 利点 ■ 確かな結果：付属のコントロールと事前に検証された アッセイを使用することで、最適な性能を保証します。 ■ 効率的なワークフロー：予めプレート化されたアッセ イのセットアップに必要なのは、サンプル cDNA と マスターミックスの添加だけです。 ■ サンプル情報インポート：オンラインでプレート情報 をダウンロードし、LightCycler® 480 ソフトウェア にインポートできます。 ■ 簡単な相対定量：各プレートには、7 個のリファレン ス遺伝子アッセイが含まれています。 リアルタイム PCR 用 途 製品概要 本 製 品 は、84 個 の 検 証 済 み の qPCR ア ッ セ イ で 構 成 さ れ、 LightCycler® 480 マルチウェルプレート 96 で供給されます。各アッ セイには、特異的なプライマーと LNA を含むユニバーサルプローブ ネントは、サンプル cDNA と反応液（例：LightCycler® 480 プロー ブマスター）のみです。 PCR ライブラリープローブが含まれています。添加する必要があるコンポー また、パネルには 7 個のヒトリファレンス遺伝子アッセイも含ま れ て お り（ACTB、 β 2M、GAPDH、HPRT1、RPL13A、18S、 YWHAZ） 、簡単に相対定量が行えます。逆転写（RT）反応の 3 個の 陽性コントロールアッセイと 2 個の陰性コントロールアッセイも含ま れています。RT 陽性コントロールは、RNA サンプルの分解の有無に 関する判定と RT ステップの品質評価に使用されます。RT 陰性コン トロールは、残存ゲノム DNA を検出します。 455 アプリケーション、プロトコール、製品、マニュアルについてのより詳しい情報は、 RealTime ready スペシャルサイト www.realtimeready.roche.com を参照ください。 5 RealTime ready RealTime readyフォーカスパネル RealTime ready ヒトリファレンス遺伝子パネル RealTime ready Human Reference Gene Panel 製品番号 05 339 545 001 包装単位 希望販売価格 2 ×ウェルプレート（96 ウェル）と ¥79,000 シーリングフォイル （リファレンス遺伝子 19 種、コントロール 5 ウェル、4 プレックス） 05 467 675 001 2 ×ウェルプレート（384 ウェル）と シーリングフォイル （リファレンス遺伝子 19 種、コントロール 5 ウェル、16 プレックス） 19 個のヒトリファレンス遺伝子の発現プロファイリングができる LightCycler® 480 インスツルメント用 qPCR アッセイパネルです。 ¥89,000 製品概要 本 製 品 は、19 個 の 検 証 済 み の qPCR ア ッ セ イ で 構 成 さ れ、 リアルタイム PCR LightCycler® 480 マルチウェルプレート 96 または 384 で供給 用 途 RealTime ready ヒトリファレンス遺伝子パネルを使用することで、 されます。各アッセイには、特異的なプライマーと LNA を含むユ ニバーサルプローブライブラリープローブが含まれています。添加 リファレンス遺伝子として使用されている 19 個のヒト遺伝子の発現 する必要があるコンポーネントは、サンプル cDNA と反応液（例： レベルを定量化することができます。このパネルは、LightCycler® LightCycler® 480 プローブマスター）のみです。 480 インスツルメントに直接ロードすることができます。リファレン それぞれのリファレンス遺伝子は 96 ウェルプレートでは 4 プレッ ス遺伝子は、相対定量においてターゲット遺伝子の発現レベルを決定 クス、384 ウェルでは 16 プレックスで搭載されています。パネルに するために使用されます。パネルのリファレンス遺伝子のうちターゲッ はリファレンス遺伝子の他に、逆転写（RT）反応の 3 個の陽性コン ト遺伝子と同等レベルで発現しているものを、ターゲット遺伝子の相 トロールアッセイと 2 個の陰性コントロールアッセイも含まれていま 対定量に用いることができます。 す。RT 陽性コントロールは、RNA サンプルの分解の有無に関する判 定と RT ステップの品質評価に使用されます。RT 陰性コントロールは、 残存ゲノム DNA を検出します。 利点 PCR ■ 確かな結果：付属のコントロールと事前に検証された アッセイを使用することで、最適な性能を保証します。 ■ 効率的なワークフロー：予めプレート化されたアッセ イのセットアップに必要なのは、サンプル cDNA と マスターミックスの添加だけです。 ■ サンプル情報インポート：オンラインでプレート情報 をダウンロードし、LightCycler® 480 ソフトウェア にインポートできます。 パネルで定量化可能な 19 個のヒトリファレンス遺伝子には以下が 含まれます：18S、ACTB（β-actin）、ALAS、β 2M、β-globin、 G6PD、GAPDH、GUSB（β-glucronidase）、HPRT1、IPO8、 PBGD、PGK1、PPIA（cyclophilin A）、RPL13A、RPLP0 （large-Ribosomal protein）、SDHA、TBP（TATA Box binding protein）、TFRC、YWHAZ。 背景情報 ハウスキーピングまたはリファレンス遺伝子は、通常、一定のレベ ルで転写されている構成性の遺伝子です。一般に、これらの遺伝子発 現は、異なるサンプル間における RNA の量と質に関する潜在的な差 異を補正するために使用されています。ハウスキーピング遺伝子の発 現は、ほとんどの条件下において一定ですが、一部の細胞処理によっ て差異が生じることがあります。実験条件下で安定している適切なリ ファレンス遺伝子を選択することは、信頼性の高い結果を得るために 欠かせません。 456 アプリケーション、プロトコール、製品、マニュアルについてのより詳しい情報は、 RealTime ready スペシャルサイト www.realtimeready.roche.com を参照ください。 RealTime ready RealTime ready関連試薬 RealTime ready Pre-Amp cDNA Master RealTime ready Pre-Amp cDNA Master 製品番号 06 720 455 001 包装単位 40反応 5 希望販売価格 ¥68,200 わずかなcDNAをバイアス無く増幅するためのPre-PCRマスター アプリケーション 原 理 RealTime ready cDNA Pre-Amp Masterは、遺伝子発現解析に RealTime ready assaysに 対 応 す るRealTime ready Pre-Amp 際して少量（1∼ 250ng）のcDNAをPre-PCRで増幅するためにデ Primer Poolsを用い、cDNAをマルチプレックスのPre-PCRで増幅 ザインされています。ホルマリン固定パラフィン包埋組織（FFPET） します。この製品で得られる増幅産物には、Whole Transcriptome や生検サンプル、希少な細胞など、限られたわずかなスタートサンプ Amplificationの増幅産物でよく見られるようなバイアスはありませ ルを使用する場合に最適な製品です。オンラインのRealTime ready ん。増幅したcDNAは、RealTime ready Assaysに最適です。 Configurator（www.configurator.realtimeready.roche.com） で カスタムオーダーできるRealTime ready Pre-Amp Primer Poolと リアルタイム PCR 合わせて使用します。 利点 ■ わずかなcDNAをターゲット特異的に約4,000倍まで 増幅します。 ■ ターゲットをPre-PCRで効率的に増幅します。 ■ ホルマリン固定パラフィン包埋組織サンプルなどから 精製した少量のRNA由来のcDNAのPCRに最適です。 RealTime ready Pre-Amp Primer Pool RealTime ready Pre-Amp Primer Pool 製品番号 06 725 309 001 包装単位 希望販売価格 40回（6∼ 96プライマーペア） ¥19,800 わずかなcDNAをバイアス無く増幅するためのプライマーミックス 原 理 本 製 品 は、RealTime ready cDNA Pre-Amp Master用 に 濃 度 目的のRealTime ready Assaysに対応した6∼ 96の特異的プラ 調整されたプライマーミックスです。カスタマイズしたRealTime イマーペアのRealTime ready Pre-Amp Primer Poolsを用いてマル ready Assays専 用 の プ ラ イ マ ー ミ ッ ク ス が 含 ま れ て い ま す。 チプレックスPCRでcDNAを増幅します。この製品で得られる増幅産 RealTime ready cDNA Pre-Amp Masterと 合 わ せ て 使 用 し て く 物には、Whole Transcriptome Amplification の増幅産物でよく見 だ さ い。 増 幅 し たcDNAは、 対 応 す るRealTime ready Custom られるようなバイアスはありません。増幅したcDNAは、RealTime Panelで 使 用 で き ま す。RealTime ready Pre-Amp Primer Poolは ready Assaysに最適です。 RealTime ready Configuratorでカスタマイズしてオーダーできま PCR アプリケーション す。 利点 ■ RealTime ready Custom Panelに対応したプライ マーミックスを選んでオーダーできます。 ■ 実際にバイアスが無いことを確認した、ターゲット特 異的に増幅するためのプライマーミックスです。 ■ ホルマリン固定パラフィン包埋組織サンプルなどから 精製した少量のRNA由来のcDNAのPCRに最適です。 457 新着情報・製品説明書は(研究用試薬・機器専用)ホームページ http://www.roche-biochem.jpを ご覧ください。 5 RealTime ready Universal ProbeLibrary 概要 qPCR アッセイデザインとプローブ Universal ProbeLibrary リファレンス遺伝子アッセイ 定量PCR(qPCR)のスループットと効率を高めるための、高い特異 性と感度をもたらす新しいqPCRのテクノロジーを提供します。 Universal ProbeLibrary リファレンス遺伝子アッセイを使用する と、2色同時検出マルチプレックスアッセイによりターゲット遺伝子 の発現レベルを内在性のリファレンス遺伝子の発現レベルに対する発 ・アッセイデザインの時間を短縮：多くの種類の生物種においてイン 現レベルとして定量することが可能です。 トロンを挟んだ、特異的なアッセイデザインをわずかな時間で行う ことが可能です。 アクセス無料の ProbeFinder ソフトウェア上で、ヒト、マウス、 ・特異的プローブセットをあらかじめフリーザーに準備しておけば、 カスタムプローブのように合成を待つ必要はありません。 ・あらゆるリアルタイムPCR インスツルメントにおいて使用可能な ザインすることが可能です。マルチプレックスのオプションを選択す ると、ProbeFinder ソフトウェアは、リファレンス遺伝子とターゲッ スタンダードプロトコールを採用 : 機器や反応系の制限はありませ ト遺伝子について ん。 UPL リファレンス遺伝子アッセイと対象の遺伝子とのマルチプレック ・遺伝子発現アプリケーションにおいて一貫したデータを得ることが リアルタイム PCR ラットについて、ターゲット遺伝子とのマルチプレックス PCRをデ テストを行います。これにより対象となる ス反応が可能になります。 可能：使用するプローブをマイクロアレイでの評価や遺伝子ノック アッセイデザイン ダウン定量などのアプリケーションに応用可能です。 Universal ProbeLibrary リアルタイム qPCR アッセイは、ウェブ Universal ProbeLibrary(UPL)を使用したqPCR アッセイ ユニークなアクセス無料のウェブ上のProbeFinder アッセイデザイ 上のアクセス無料のUniversal ProbeLibrary アッセイデザインセン ター (www.universalprobelibrary.com)のProbeFinder ソフトウェ アを使用して、2ステップで簡単にデザインすることが可能です。 ンソフトウェア(詳細は「アッセイデザイン」を参照ください)と165個 のプレバリデートされたリアルタイムPCR用プローブで、ヒト、マウ ス、ラット、霊長類、ショウジョウバエ、線虫、シロイヌナズナ、ト ステップ 1：生物種を選択し、配列、遺伝子名、アクセッション番号 のいずれかを入力します。 ウモロコシ、イネ、酵母、ゼブラフィッシュにおけるほぼすべての転 ステップ 2：ProbeFinder ソフトウェアが、ターゲット遺伝子に対 写産物について定量することが可能です。その他の生物種についても する、イントロンを挟んだUPL プローブとプライマー Assay Design Center において、"Other Organism"を選択すれば、 を検索し、最適なqPCR アッセイデザインをします。 アッセイのデザインが可能です。より詳細な情報と実際のアッセイデ ザインは、www.universalprobelibrary.comへアクセスしてくださ ProbeFinder アッセイによるデザインの過程には、ソフトウェアに よる自動処理が含まれます。ソフトウェアは、最初にターゲット配列 い。 のすべてのイントロンの箇所をみつけ、すべてのプローブ結合サイト を検索します。PCR プライマーは、その後で各プローブを考慮してデ Universal ProbeLibrary プローブ PCR 165個のUniversal ProbeLibrary プローブの配列は、ゲノムの ザインされます。候補に挙がった qPCR アッセイは、 PCR 転写産物に対して、特異的で最適にカバーするように選択されていま により、PCR プライマーペアのゲノム上や他の転写産物への結合の す。UPL プローブは、リアルタイムPCRのフォーマットである加水分 クロス相補性の可能性がテストされます。ProbeFinder ソフトウェア 解プローブフォーマットです。プローブは、5'末端をフルオレセイン は、特異性、イントロンを介在しているか、アンプリコンサイズなど (FAM)、3'末端付近をダーククエンチャーでラベルされています。 の様々なパラメータを考慮して、ランク付けします。 UPL プローブは、広範囲の転写産物をカバーするために、短い塩基 生物種特異的 Universal ProbeLibrary セット 対(8∼ 9塩基)から成ります。Locked Nucleic Acid(LNA)は、2本鎖 Universal ProbeLibrary セットは、ヒトについて各 90種類のプ DNAを安定化させるアナログで、UPL プローブに取り込まれたLNA ローブから成ります。165種類のプローブからなる完全セットは、 は、qPCR のプローブとしてハイブリダイズするのに必要な特異性と #1∼ #90ま で が 含 ま れ る Universal ProbeLibrary セ ッ ト ヒ ト 融解温度(Tm)を維持しています。 と、#91∼ #165の プ ロ ー ブ が 含 ま れ るUniversal ProbeLibrary エクステンションセットの組合わせになります。すべてのUniversal この短く安定なプローブによりあらゆる転写産物を認識することが ProbeLibrary プローブは単体でも提供しています。 可能になります。各UPL プローブは、理論的に約7,000の転写産物 に結合することが可能です。また、各転写産物に対して、約16の異 RealTime ready Custom UPL AssaysとPanels なるUPL プローブが結合することになります。そのため、このqPCR ヒト、マウス、ラットの各遺伝子についてウェットバリデート済 アッセイでは、1つの転写産物のみを検出するために、特異的なPCR みのUPLアッセイ（プライマー、プローブ）を、各遺伝子ごとにシ プライマーを使用します。 ングルチューブ、あるいはLightCycle® 480マルチプレートにあら かじめ充填したカスタム製品として提供いたします。オンラインの ® Universal ProbeLibrary アッセイは、LightCycler カローセル RealTime ready Configuratorを使用して製品を選択、注文いただ タイプシステムや LightCycler® 480 システムをはじめとする、フ けます。詳細はRealTime ready 562ページ、または以下のURLを ルオレセイン、FITC、FAM、SYBR Green Ⅰを検出することの可能 参照ください。 な、他社製のリアルタイム PCR インスツルメントで使用が可能です。 http://www.roche-biochem.jp/sis/realtimeready/ 注意：PCR プライマーは、Universal ProbeLibrary セットおよび単 品のプローブには含まれません。別途、オリゴヌクレオチド合 458 成会社へ合成の依頼をお願いします。 新着情報・製品説明書は(研究用試薬・機器専用)ホームページ http://www.roche-biochem.jpを ご覧ください。 RealTime ready Universal ProbeLibrary Universal ProbeLibrary Set, Human 製品番号 04 683 633 001 リアルタイム PCRでヒト遺伝子の発現レベルを定量するためのプ レバリデートされたプローブ アプリケーション 包装単位 1 セット(90 プローブ。 20μl反応で各312 反応分) 希望販売価格 ¥470,000 製品概要 Universal ProbeLibrary セ ッ ト ヒ ト は、NCBIの シ ー ケ ン ス Universal ProbeLibrary セット ヒトには、165種類あるプローブ データベースを利用して、迅速でフレキシブルにヒト遺伝子の発現 のうち、プローブ#1∼ #90が含まれます。アッセイデザインセンター 定量を行えるプローブのセットで、LightCycler® 480 システムや のユニークなProbeFinder ソフトウェアとこれらのプレバリデートさ LightCycler® カローセルタイプシステムをはじめ、その他の他社 れた90種類の加水分解プローブで、NCBI データベースに登録された 製リアルタイムPCR インスツルメントに使用することが可能です。 約37,000のヒト遺伝子の転写産物の98%以上についてリアルタイ Universal ProbeLibrary セット ヒト から選択されたプローブを使用 ムPCRアッセイが可能です。 したアッセイは、LightCycler® システムでは LightCycler® 480 プ プローブは、レポーター蛍光物質(FAM)とダーククエンチャーで2 ローブマスターまたはLightCycler® TaqMan® マスターを、または 重ラベルされています。一般的なリアルタイム PCR インスツルメン 他社製リアルタイムPCR機器では、FastStart TaqMan® プローブマ トを使用して、リアルタイム PCR アッセイが可能です。 スター (または他のリアルタイムPCR用試薬)を使用したプロトコール で使用可能です。 ア ク セ ス 無 料 の ウ ェ ブ サ イ ト、 ア ッ セ イ デ ザ イ ン セ ン タ ー の ProbeFinder ソフトウェアを使用して、遺伝子特異的発現定量アッセ イのデザインを簡単に行うことが可能です。 製品構成 90バイアル、各10μMで125μl、5'末端がフルオレセイン(FAM)、 3'末端がダーククエンチャーでラベルされています。 リアルタイム PCR Universal ProbeLibrary セット、ヒト 5 Universal ProbeLibrary セット ヒトに含まれる各バイアルには、 312回分(20μl反応)のリアルタイム PCR アッセイが行えるプロー ブが含まれています。 利点 Universal ProbeLibrary エクステンションセット、 プローブ #91∼ #165 品 質 各プローブは、イオン交換HPLCおよびMALDI-MSにより純度と精 製度が確認されています。 免責条項 526ページのno. 3を参照ください。 529ページのno. 47を参照ください。 製品番号 04 869 877 001 Universal ProbeLibrary Extension Set, Probes #91 to #165 リアルタイムPCRで遺伝子の発現レベルを定量するためのプレバ リデートされたプローブ 包装単位 1 セット (75プローブ、 20μl反応で各312 反応分) 希望販売価格 ¥391,000 アプリケーション 製品概要 Universal ProbeLibrary エ ク ス テ ン シ ョ ン セ ッ ト をUniversal ProbeLibrary セ ッ ト ヒ ト と 組 合 わ せ る と、Universal ProbeLibrary プローブの165種類の完全セットとなります。この完 全セットは、オンラインのUniversal ProbeLibrary アッセイデザイ ンセンターにおいて、すべての生物種の転写産物を定量することが可 能になります。また、この完全セットは、Universal ProbeLibrary ア ッ セ イ デ ザ イ ン セ ン タ ー に な い 生 物 種 の デ ザ イ ン を、"Other Organism"で検索する際にも利用可能です。 本セットには、Universal ProbeLibrary #91∼ #165が含まれま す。プローブは、レポーター蛍光物質(FAM)とダーククエンチャーで 2重ラベルされています。一般的なリアルタイム PCR インスツルメ ントを使用して、リアルタイム PCR アッセイが可能です。 利点 ■ アッセイデザインと結果を得られるまでの時間を短縮 ■ アッセイの特異性とフレキシビリティを両方備えた利 便性 ■ 特別なハードウェアや反応条件は必要なく、一般的な リアルタイムPCR機器で使用が可能 PCR ■ アッセイデザインと結果を得られるまでの時間を短縮 ■ アッセイの特異性とフレキシビリティを両方備えた利 便性 ■ 特別なハードウェアや反応条件は必要なく、一般的な リアルタイムPCR機器で使用が可能 製品構成 75バイアル、各10μMで125μl、5'末端がフルオレセイン(FAM)、 3'末 端 が ダ ー ク ク エ ン チ ャ ー で ラ ベ ル さ れ て い ま す。Universal ProbeLibrary エクステンションセットに含まれる各バイアルには、 312回分(20μl反応)のリアルタイム PCR アッセイが行えるプロー ブが含まれています。 品 質 各プローブは、イオン交換HPLCおよびMALDI-MSにより純度と精 製度が確認されています。 免責条項 526ページのno. 3を参照ください。 529ページのno. 47を参照ください。 459 新着情報・製品説明書は(研究用試薬・機器専用)ホームページ http://www.roche-biochem.jpを ご覧ください。 5 RealTime ready Universal ProbeLibrary ユニバーサルプローブライブラリーヒト遺伝子アッセイ 品 質 Universal ProbeLibrary リファレンス遺伝子アッセイに含まれる デュアルカラーリアルタイム PCR を使用した遺伝子発現レベルの 定量化用の遺伝子特異的プローブおよびプライマーです。 プライマーとプローブは、リアルタイム PCR を使用した性能試験済 みで、イオン交換 HPLC および MALDI-MS で純度と精製度が確認 されています。 用 途 Universal ProbeLibrary (UPL) リファレンス遺伝子アッセイ を使 用すると、2 色同時検出マルチプレックスアッセイにより、ヒト、マ ウス、ラットについてターゲット遺伝子の発現レベルを内在性のリファ レンス遺伝子の発現レベルに対する発現レベルとして定量することが 可能です。 アクセス無料のウェブサイト、アッセイデザインセンター（www. リアルタイム PCR universalprobelibrary.com）ProbeFinder ソ フ ト ウ ェ ア を 使 用 し て、ターゲット遺伝子および UPL リファレンス遺伝子のマルチプレッ クスアッセイのデザインを簡単に行うことが可能です。マルチプレッ クスのオプションを選択すると、オンラインの ProbeFinder ソフト ウェアは、ターゲット遺伝子に対する UPL アッセイを検索します。 同時に、各アッセイが、 PCR チェックされ、対象の生物種 の UPL リファレンス遺伝子アッセイとのマルチプレックス反応を評 価します。 利点 ■ アッセイの設計に要する時間と、その結果が得られる までの時間を大きく短縮します。 ■ デュアルカラー qPCR アッセイを行うことで遺伝子発 現解析のコストを削減することができます。 ■In silico PCR で確認したアッセイの組み合わせを使用 することで最適化された特異性を得ることができます。 製品概要 各 Universal ProbeLibrary リファレンス遺伝子アッセイは、特別 PCR にデザインされた、12 mer の UPL リファレンス遺伝子プローブと それに対応する遺伝子特異的プライマーペアのセットです。 LightCycler® Yellow 555 で 5' 末端を、3' 末端付近をダークク エンチャーでラベルされた、UPL リファレンス遺伝子プローブは、リ アルタイム PCR 機器を使用して、 励起波長 470 ∼ 530 nm、 検出フィ ルター 550 ∼ 610 nm で検出することが可能です。マルチプレック スアッセイでは、FAM ラベルされた UPL プローブでターゲット遺 伝子を検出するために、一般的によく使用される FAM または SYBR Green I のフィルターチャンネルを 使用し、より長波長側の検出フィ ルター (例；560 nm や 568 nm) を UPL リファレンス遺伝子プ ローブの検出用として使用します。 460 アプリケーション、プロトコール、製品、マニュアルについてのより詳しい情報は、 www.universalprobelibrary.com を参照ください。 RealTime ready Universal ProbeLibrary Universal ProbeLibrary ヒト ACTB 遺伝子アッセイ Universal ProbeLibrary Human ACTB Gene Assay 製品番号 05 046 165 001 プレバリデートされたリファレンス遺伝子特異的プローブとプラ イマー。ACTB(β-actin)を2色同時検出リアルタイムPCRで発現レ ベルを定量 アプリケーション 包装単位 1 セット (500 反応分/20μl反応) 5 希望販売価格 ¥58,000 製品概要 Universal ProbeLibrary(UPL)リファレンス遺伝子アッセイを使用 各 Universal ProbeLibrary リファレンス遺伝子アッセイは、特別 すると、2色同時検出マルチプレックスアッセイにより、ヒト、マウス、 にデザインされた、12 merの UPL リファレンス遺伝子プローブと ラットについてターゲット遺伝子の発現レベルを内在性のリファレン それに対応する遺伝子特異的プライマー対です。 ス遺伝子の発現レベルに対する発現レベルとして定量することが可能 です。 LightCycler® Yellow 555で5'末端を、3'末端付近をダーククエン イムPCRインスツルメントを使用して、励起波長470∼ 530 nm、 ProbeFinder ソ フ ト ウ ェ ア を 使 用 し て、 タ ー ゲ ッ ト 遺 伝 子 お よ 検出フィルター 550∼ 610 nmで検出することが可能です。マルチ び UPL リ フ ァ レ ン ス 遺 伝 子 の マ ル チ プ レ ッ ク ス ア ッ セ イ の デ プレックスアッセイを行う場合は、一般的によく使用されるFAMま ザ イ ン を 簡 単 に 行 う こ と が 可 能 で す。 ア ク セ ス は こ ち らwww. たはSYBR Green ⅠのフィルターチャンネルをFAMでラベルされた universalprobelibrary.comまたは我々のホームページ UPL プローブでターゲット遺伝子を検出するために使用し、より長波 www.roche-biochem.jp/UPLへ。 長側の検出フィルター (例；560 nmや568 nm)を UPL リファレン マ ル チ プ レ ッ ク ス の オ プ シ ョ ン を 選 択 す る と、 オ ン ラ イ ン の ス遺伝子プローブの検出用として使用します。 リアルタイム PCR チャーでラベルされたUPL リファレンス遺伝子プローブは、リアルタ ア ク セ ス 無 料 の ウ ェ ブ サ イ ト、 ア ッ セ イ デ ザ イ ン セ ン タ ー の ProbeFinder ソフトウェアは、ターゲット遺伝子に対する UPL アッ セイを検索します。同時に、各アッセイが、 PCR チェック され、対象の生物種の UPL リファレンス遺伝子アッセイとのマルチ プレックス反応を評価します。 製品構成 各 Universal ProbeLibrary リファレンス遺伝子アッセイのパッ ケージには、4つのバイアルが含まれています : 100μlの20μM のプレバリデートされた1対のプライマー×2バイアル、100μlの 10μMのプレバリデートされたプローブ×2バイアル。 利点 ■ アッセイデザインと結果を得られるまでの時間を短縮 ■ 2色同時検出のqPCR アッセイにより、遺伝子発現解 析にかかるコストを削減 ■ PCRで特異性が確認されます 品 質 Universal ProbeLibrary リファレンス遺伝子アッセイに含まれる プライマーとプローブは、リアルタイムPCRを使用したパフォーマン ステスト済みで、イオン交換HPLCおよびMALDI-MSで純度と精製度 が確認されています。 免責条項 PCR 526ページのno. 3を参照ください。 529ページのno. 47を参照ください。 461 新着情報・製品説明書は(研究用試薬・機器専用)ホームページ http://www.roche-biochem.jpを ご覧ください。 5 RealTime ready Universal ProbeLibrary 本ページ掲載の製品の詳細情報については、461 ページの「Universal ProbeLibrary ヒト ACTB 遺伝子アッセイ」を参照してください。 ユニバーサルプローブライブラリーヒト G6PD 遺伝子 アッセイ 製品番号 05 046 246 001 包装単位 1 セット （500 反応分 /20 μL 反応） 希望販売価格 ¥58,000 製品番号 05 190 541 001 包装単位 1 セット （500 反応分 /20 μL 反応） 希望販売価格 ¥58,000 製品番号 05 190 525 001 包装単位 1 セット （500 反応分 /20 μL 反応） 希望販売価格 ¥58,000 製品番号 05 046 157 001 包装単位 1 セット （500 反応分 /20 μ l 反応） 希望販売価格 ¥58,000 製品番号 05 046 149 001 包装単位 1 セット （500 反応分 /20 μ l 反応） 希望販売価格 ¥58,000 製品番号 05 046 173 001 包装単位 1 セット （500 反応分 /20 μ l 反応） 希望販売価格 ¥58,000 Universal ProbeLibrary Human G6PD Gene Assay デュアルカラーリアルタイム PCR を使用した遺伝子発現定量用の G6PD（グルコース -6- リン酸デヒドロゲナーゼ）の遺伝子特異的プ ローブおよびプライマーです。 リアルタイム PCR ユニバーサルプローブライブラリーヒト GAPD 遺伝子 アッセイ Universal ProbeLibrary Human GAPD Gene Assay デュアルカラーリアルタイム PCR を使用した遺伝子発現定量用の GAPD（グリセルアルデヒド 3 リン酸脱水素酵素）の遺伝子特異的プ ローブおよびプライマーです。 ユニバーサルプローブライブラリーヒト GUSB 遺伝子 アッセイ Universal ProbeLibrary Human GUSB Gene Assay デュアルカラーリアルタイム PCR を使用した遺伝子発現定量用の GUSB（β - グルクロニダーゼ）の遺伝子特異的プローブおよびプラ イマーです。 Universal ProbeLibrary ヒト HPRT 遺伝子アッセイ Universal ProbeLibrary Human HPRT Gene Assay PCR デュアルカラーリアルタイム PCR を使用した遺伝子発現定量用の HPRT（hypoxanthine-phosphoribosyl-transferase）の遺伝子特 異的プローブおよびプライマーです。 Universal ProbeLibrary ヒト PBGD 遺伝子アッセイ Universal ProbeLibrary Human PBGD Gene Assay デュアルカラーリアルタイム PCR を使用した遺伝子発現定量用の PBGD（porphobilinogen deaminase）の遺伝子特異的プローブお よびプライマーです。 Universal ProbeLibrary ヒト PGK1 遺伝子アッセイ Universal ProbeLibrary Human PGK1 Gene Assay デュアルカラーリアルタイム PCR を使用した遺伝子発現定量用の PGK1（phosphoglycerate kinase 1）の遺伝子特異的プローブお よびプライマーです。 462 アプリケーション、プロトコール、製品、マニュアルについてのより詳しい情報は、 www.universalprobelibrary.com を参照ください。 RealTime ready Universal ProbeLibrary 5 本ページ掲載の製品の詳細情報については、461 ページの「Universal ProbeLibrary ヒト ACTB 遺伝子アッセイ」を参照してください。 ユニバーサルプローブライブラリーヒト PPIA 遺伝子 アッセイ 製品番号 05 189 268 001 包装単位 1 セット （500 反応分 /20 μL 反応） 希望販売価格 ¥58,000 製品番号 05 189 284 001 包装単位 1 セット （500 反応分 /20 μL 反応） 希望販売価格 ¥58,000 製品番号 05 189 390 001 包装単位 1 セット （500 反応分 /20 μL 反応） 希望販売価格 ¥58,000 Universal ProbeLibrary Human PPIA Gene Assay デュアルカラーリアルタイム PCR を使用した遺伝子発現定量用の PPIA（ペプチジルプロリルイソメラーゼ A ／サイクロフィリン A） の遺伝子特異的プローブおよびプライマーです。 ユニバーサルプローブライブラリーヒト TBP 遺伝子 アッセイ リアルタイム PCR Universal ProbeLibrary Human TBP Gene Assay デュアルカラーリアルタイム PCR を使用した遺伝子発現定量用の TBP（TATAA ボックス結合タンパク質）の遺伝子特異的プローブお よびプライマーです。 ユニバーサルプローブライブラリーヒトβ 2M 遺伝子 アッセイ Universal ProbeLibrary Human beta2M Gene Assay デュアルカラーリアルタイム PCR を使用した遺伝子発現定量用の β 2M（β 2 ミクログロブリン）の遺伝子特異的プローブおよびプラ PCR イマーです。 463 アプリケーション、プロトコール、製品、マニュアルについてのより詳しい情報は、 www.universalprobelibrary.com を参照ください。 5 RealTime ready Universal ProbeLibrary ユニバーサルプローブライブラリーセット、 ヒトリファレンス遺伝子アッセイ 製品番号 05 046 114 001 Universal ProbeLibrary Set, Human Reference Gene 10 種類のヒトリファレンス遺伝子特異的なプローブとプライマー が含まれています。 品 質 Universal ProbeLibrary リファレンス遺伝子アッセイに含まれる プライマーとプローブは、リアルタイム PCR を使用した性能試験済 ンス遺伝子を選択するためのキットです。また、ターゲット遺伝子と みで、イオン交換 HPLC および MALDI-MS で純度と精製度が確認 組み合わせて２色同時に検出することも可能です。 されています。 用 途 内 容 ことは、データの精度と再現性を得るために非常に重要です。本セッ ユニバーサルプローブライブラリーセット、ヒトリファレンス遺伝 子アッセイは以下のヒトリファレンス遺伝子のアッセイを含みます。 トには 10 種類の遺伝子のプライマーとプローブがそれぞれ含まれて います。 1. Human G6PD Gene Assay 本セットで 10 種類を同時に評価することによって、最も変動の少 ないリファレンス遺伝子をスピーディに選択することが可能です。 また、Universal ProbeLibrary (UPL) リファレンス遺伝子アッセ イを使用すると、2 色同時検出マルチプレックスアッセイにより、ヒ ト、マウス、ラットについてターゲット遺伝子の発現レベルを内在性 のリファレンス遺伝子の発現レベルに対する発現レベルとして定量す ることが可能です。 universalprobelibrary.com）の ProbeFinder ソフトウェアを使用 して、ターゲット遺伝子および UPL リファレンス遺伝子のマルチプ レックスアッセイのデザインを簡単に行うことが可能です。マルチプ レックスのオプションを選択すると、オンラインの ProbeFinder ソ フトウェアは、ターゲット遺伝子に対する UPL アッセイを検索しま す。同時に、各アッセイが、 （glucose-6-phosphate-1-dehydrogenase） 2. Human PPIA Gene Assay （peptidylprolyl isomerase A / cyclpohilin A） 3. Human GAPD Gene Assay （glycelaldehyde-3-phosphate dehydrogenase） 4. Human TBP Gene Assay （TATAA-box-binding protein） アクセス無料のウェブサイト、アッセイデザインセンター（www. PCR チェックされ、対象の生 物種の UPL リファレンス遺伝子アッセイとのマルチプレックス反応 を評価します。 5. Human β 2 M Gene Assay （β 2 microglobulin） 6. Human GUSB Gene Assay （β -glucronidase） 7. Human PBGD Gene Assay （porphobilinogen deaminase） 8. Human HPRT Gene Assay （hupoxantine-guanidine phosphoribosyltransferase） 9. Human ACTB Gene Assay （β -actin） 10. Human PGK1 Gene Assay 利点 PCR 希望販売価格 ¥98,000 リアルタイム PCR による遺伝子発現定量の実験に適切なリファレ リアルタイム PCR において適切なリファレンス遺伝子を選択する リアルタイム PCR 包装単位 1 セット （各 250 反応分 /20 μL 反応） （phosphoglyceratekinase 1） ■ アッセイの設計に要する時間と、その結果が得られる までの時間を大きく短縮します。 ■ デュアルカラー qPCR アッセイを行うことで遺伝子発 現解析のコストを削減することができます。 ■In silico PCR で確認したアッセイの組み合わせを使用 することで最適化された特異性を得ることができます。 製品概要 各 Universal ProbeLibrary リファレンス遺伝子アッセイは、特別 にデザインされた、12 mer の UPL リファレンス遺伝子プローブと それに対応する遺伝子特異的プライマーペアのセットです。 LightCycler® Yellow 555 で 5' 末端を、3' 末端付近をダークク エンチャーでラベルされた、UPL リファレンス遺伝子プローブは、リ アルタイム PCR 機器を使用して、 励起波長 470 ∼ 530 nm、 検出フィ ルター 550 ∼ 610 nm で検出することが可能です。マルチプレック スアッセイでは、FAM ラベルされた UPL プローブでターゲット遺 伝子を検出するために、一般的によく使用される FAM または SYBR Green I のフィルターチャンネルを使用し、より長波長側の検出フィ ルター ( 例；560 nm や 568 nm) を UPL リファレンス遺伝子プ ローブの検出用として使用します。 464 アプリケーション、プロトコール、製品、マニュアルについてのより詳しい情報は、 www.universalprobelibrary.com を参照ください。 RealTime ready Universal ProbeLibrary 5 本ページ掲載の製品の詳細情報については、461ページの「Universal ProbeLibrary ヒト ACTB 遺伝子アッセイ」を参照してください。 Universal ProbeLibrary マウス ACTB 遺伝子アッセイ Universal ProbeLibrary Mouse ACTB Gene Assay 製品番号 05 046 190 001 包装単位 1 セット (500 反応分/20μl反応) 希望販売価格 ¥58,000 製品番号 05 046 211 001 包装単位 1 セット (500 反応分/20μl反応) 希望販売価格 ¥58,000 製品番号 05 046 220 001 包装単位 1 セット (500 反応分/20μl反応) 希望販売価格 ¥58,000 製品番号 05 046 203 001 包装単位 1 セット (500 反応分/20μl反応) 希望販売価格 ¥58,000 デュアルカラーリアルタイムPCR を使用した遺伝子発現定量用の マウス ACTB（β-actin）の遺伝子特異的プローブおよびプライマー Universal ProbeLibrary マウス GAPD 遺伝子アッセイ Universal ProbeLibrary Mouse GAPD Gene Assay リアルタイム PCR です。 デュアルカラーリアルタイムPCR を使用した遺伝子発現定量 用のマウス GAPD（GAPDH、glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase）の遺伝子特異的プローブおよびプライマーです。 Universal ProbeLibrary ラット GAPD 遺伝子アッセイ Universal ProbeLibrary Rat GAPD Gene Assay デュアルカラーリアルタイムPCR を使用した遺伝子発現定量 用のラット GAPD（GAPDH、glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase）の遺伝子特異的プローブおよびプライマーです。 Universal ProbeLibrary ラット ACTB 遺伝子アッセイ Universal ProbeLibrary Rat ACTB Gene Assay デュアルカラーリアルタイムPCR を使用した遺伝子発現定量用の ラット ACTB（β-actin）の遺伝子特異的プローブおよびプライマー PCR です。 465 アプリケーション、プロトコール、製品、マニュアルについてのより詳しい情報は、 www.universalprobelibrary.comを参照ください。 5 RealTime ready Universal ProbeLibrary Universal ProbeLibrary プローブ 製品番号 04 684 974 001 包装単位 Probe #1 希望販売価格 ¥30,000 04 684 982 001 Probe #2 ¥30,000 04 685 008 001 Probe #3 ¥30,000 04 685 016 001 Probe #4 ¥30,000 04 685 024 001 Probe #5 ¥30,000 04 685 032 001 Probe #6 ¥30,000 04 685 059 001 Probe #7 ¥30,000 04 685 067 001 Probe #8 ¥30,000 04 685 075 001 Probe #9 ¥30,000 04 685 091 001 Probe #10 ¥30,000 04 685 105 001 Probe #11 ¥30,000 04 685 113 001 Probe #12 ¥30,000 04 685 121 001 Probe #13 ¥30,000 04 685 130 001 Probe #14 ¥30,000 04 685 148 001 Probe #15 ¥30,000 04 686 896 001 Probe #16 ¥30,000 04 686 900 001 Probe #17 ¥30,000 04 686 918 001 Probe #18 ¥30,000 04 686 926 001 Probe #19 ¥30,000 Universal ProbeLibrary プ ロ ー ブ は、Universal ProbeLibrary セットの中の単品です。プローブは、レポーター蛍光物質(FAM)とダー ククエンチャーで2重ラベルされています。一般的なリアルタイム PCR インスツルメントを使用して、リアルタイム PCR アッセイが可 能です。 04 686 934 001 Probe #20 ¥30,000 04 686 942 001 Probe #21 ¥30,000 04 686 969 001 Probe #22 ¥30,000 製品構成 04 686 977 001 Probe #23 ¥30,000 04 686 985 001 Probe #24 ¥30,000 04 686 993 001 Probe #25 ¥30,000 04 687 574 001 Probe #26 ¥30,000 04 687 582 001 Probe #27 ¥30,000 04 687 604 001 Probe #28 ¥30,000 リアルタイムPCRで遺伝子の発現レベルを定量するためのプレバリ デートされたプローブ2バイアル(各2×312反応分/20μl反応）、各 10μlMで125μl、5'末端がフルオレセイン(FAM)で、3'末端がダー ククエンチャーでラベルされています。 注意：Universal ProbeLibrary プローブの製品番号などの詳細は、 プローブリストを参照ください。 リアルタイム PCR アプリケーション Universal ProbeLibrary プローブを使用して、オンラインのアッ セイデザインセンターでアッセイをデザインして、あらゆる生物種 の遺伝子の発現レベルの定量を迅速でフレキシブルに行うことが可 能 で す。 ま た、 こ の プ ロ ー ブ は、Universal ProbeLibrary ア ッ セ イデザインセンターにない生物種のデザインを、"Other Organism" で 検 索 す る 際 に も 利 用 可 能 で す。Universal ProbeLibrary プ ロ ー ブを使用したアッセイは、LightCycler® カローセルタイプシステ ム で はLightCycler® 480 プ ロ ー ブ マ ス タ ー ま た はLightCycler® TaqMan® マスターを、または他社製リアルタイムPCR機器では、 FastStart TaqMan® プローブマスター (または他のリアルタイム PCR用試薬)を使用したプロトコールで使用可能です。 ア ク セ ス 無 料 の ウ ェ ブ サ イ ト、 ア ッ セ イ デ ザ イ ン セ ン タ ー の ProbeFinder ソフトウェアを使用して、遺伝子特異的発現定量アッセ イのデザインが簡単に行うことが可能です。アクセスはこちらwww. universalprobelibrary.comまたは我々のホームページwww.rocheapplied-science.comへ。 利点 PCR ■ アッセイデザインと結果を得られるまでの時間を短縮 ■ アッセイの特異性とフレキシビリティを両方備えた利 便性 ■ 特別なハードウェアや反応条件は必要なく、一般的な リアルタイムPCR機器で使用が可能 製品概要 2バイアル、各10μMで125μl、5'末端がフルオレセイン(FAM)、 3'末端がダーククエンチャーでラベルされています。 Universal ProbeLibrary プ ロ ー ブ に 含 ま れ る 各 バ イ ア ル に は、 312回分(20μl反応)のリアルタイム PCR アッセイが行えるプロー ブが含まれています。 品 質 各プローブは、イオン交換HPLCおよびMALDI-MSにより純度と精 製度が確認されています。 免責条項 466 526ページのno. 3を参照ください。 529ページのno. 47を参照ください。 アプリケーション、プロトコール、製品、マニュアルについてのより詳しい情報は、 www.universalprobelibrary.comを参照ください。 包装単位 Probe #29 希望販売価格 ¥30,000 製品番号 04 688 546 001 包装単位 Probe #57 希望販売価格 ¥30,000 04 687 639 001 Probe #30 ¥30,000 04 688 554 001 Probe #58 ¥30,000 04 687 647 001 Probe #31 ¥30,000 04 688 562 001 Probe #59 ¥30,000 04 687 655 001 Probe #32 ¥30,000 04 688 589 001 Probe #60 ¥30,000 04 687 663 001 Probe #33 ¥30,000 04 688 597 001 Probe #61 ¥30,000 04 687 671 001 Probe #34 ¥30,000 04 688 619 001 Probe #62 ¥30,000 04 687 680 001 Probe #35 ¥30,000 04 688 627 001 Probe #63 ¥30,000 04 687 949 001 Probe #36 ¥30,000 04 688 635 001 Probe #64 ¥30,000 04 687 957 001 Probe #37 ¥30,000 04 688 643 001 Probe #65 ¥30,000 04 687 965 001 Probe #38 ¥30,000 04 688 651 001 Probe #66 ¥30,000 04 687 973 001 Probe #39 ¥30,000 04 688 660 001 Probe #67 ¥30,000 04 687 990 001 Probe #40 ¥30,000 04 688 678 001 Probe #68 ¥30,000 04 688 007 001 Probe #41 ¥30,000 04 688 686 001 Probe #69 ¥30,000 04 688 015 001 Probe #42 ¥30,000 04 688 937 001 Probe #70 ¥30,000 04 688 031 001 Probe #43 ¥30,000 04 688 945 001 Probe #71 ¥30,000 04 688 040 001 Probe #44 ¥30,000 04 688 953 001 Probe #72 ¥30,000 04 688 058 001 Probe #45 ¥30,000 04 688 961 001 Probe #73 ¥30,000 04 688 066 001 Probe #46 ¥30,000 04 688 970 001 Probe #74 ¥30,000 04 688 074 001 Probe #47 ¥30,000 04 688 988 001 Probe #75 ¥30,000 04 688 082 001 Probe #48 ¥30,000 04 688 996 001 Probe #76 ¥30,000 04 688 104 001 Probe #49 ¥30,000 04 689 003 001 Probe #77 ¥30,000 04 688 112 001 Probe #50 ¥30,000 04 689 011 001 Probe #78 ¥30,000 04 688 481 001 Probe #51 ¥30,000 04 689 020 001 Probe #79 ¥30,000 04 688 490 001 Probe #52 ¥30,000 04 689 038 001 Probe #80 ¥30,000 04 688 503 001 Probe #53 ¥30,000 04 689 046 001 Probe #81 ¥30,000 04 688 511 001 Probe #54 ¥30,000 04 689 054 001 Probe #82 ¥30,000 04 688 520 001 Probe #55 ¥30,000 04 689 062 001 Probe #83 ¥30,000 04 688 538 001 Probe #56 ¥30,000 04 689 089 001 Probe #84 ¥30,000 リアルタイム PCR 製品番号 04 687 612 001 5 PCR RealTime ready Universal ProbeLibrary 467 アプリケーション、プロトコール、製品、マニュアルについてのより詳しい情報は、 www.universalprobelibrary.comを参照ください。 PCR リアルタイム PCR 5 RealTime ready Universal ProbeLibrary 製品番号 04 689 097 001 包装単位 Probe #85 希望販売価格 ¥30,000 製品番号 04 693 477 001 包装単位 Probe #113 希望販売価格 ¥30,000 04 689 119 001 Probe #86 ¥30,000 04 693 485 001 Probe #114 ¥30,000 04 689 127 001 Probe #87 ¥30,000 04 693 493 001 Probe #115 ¥30,000 04 689 135 001 Probe #88 ¥30,000 04 693 507 001 Probe #116 ¥30,000 04 689 143 001 Probe #89 ¥30,000 04 693 515 001 Probe #117 ¥30,000 04 689 151 001 Probe #90 ¥30,000 04 693 523 001 Probe #118 ¥30,000 04 692 080 001 Probe #91 ¥30,000 04 693 531 001 Probe #119 ¥30,000 04 692 098 001 Probe #92 ¥30,000 04 693 540 001 Probe #120 ¥30,000 04 692 101 001 Probe #93 ¥30,000 04 693 558 001 Probe #121 ¥30,000 04 692 110 001 Probe #94 ¥30,000 04 693 566 001 Probe #122 ¥30,000 04 692 128 001 Probe #95 ¥30,000 04 693 574 001 Probe #123 ¥30,000 04 692 136 001 Probe #96 ¥30,000 04 693 582 001 Probe #124 ¥30,000 04 692 144 001 Probe #97 ¥30,000 04 693 604 001 Probe #125 ¥30,000 04 692 152 001 Probe #98 ¥30,000 04 693 612 001 Probe #126 ¥30,000 04 692 179 001 Probe #99 ¥30,000 04 693 639 001 Probe #127 ¥30,000 04 692 187 001 Probe #100 ¥30,000 04 693 647 001 Probe #128 ¥30,000 04 692 195 001 Probe #101 ¥30,000 04 693 655 001 Probe #129 ¥30,000 04 692 209 001 Probe #102 ¥30,000 04 693 663 001 Probe #130 ¥30,000 04 692 217 001 Probe #103 ¥30,000 04 694 155 001 Probe #131 ¥30,000 04 692 225 001 Probe #104 ¥30,000 04 694 163 001 Probe #132 ¥30,000 04 692 241 001 Probe #105 ¥30,000 04 694 171 001 Probe #133 ¥30,000 04 692 250 001 Probe #106 ¥30,000 04 694 180 001 Probe #134 ¥30,000 04 692 268 001 Probe #107 ¥30,000 04 694 198 001 Probe #135 ¥30,000 04 692 276 001 Probe #108 ¥30,000 04 694 201 001 Probe #136 ¥30,000 04 692 284 001 Probe #109 ¥30,000 04 694 210 001 Probe #137 ¥30,000 04 692 306 001 Probe #110 ¥30,000 04 694 228 001 Probe #138 ¥30,000 04 693 442 001 Probe #111 ¥30,000 04 694 236 001 Probe #139 ¥30,000 04 693 469 001 Probe #112 ¥30,000 04 694 244 001 Probe #140 ¥30,000 468 アプリケーション、プロトコール、製品、マニュアルについてのより詳しい情報は、 www.universalprobelibrary.comを参照ください。 包装単位 Probe #141 希望販売価格 ¥30,000 04 694 287 001 Probe #142 ¥30,000 04 694 295 001 Probe #143 ¥30,000 04 694 309 001 Probe #144 ¥30,000 04 694 317 001 Probe #145 ¥30,000 04 694 325 001 Probe #146 ¥30,000 04 694 333 001 Probe #147 ¥30,000 04 694 341 001 Probe #148 ¥30,000 04 694 350 001 Probe #149 ¥30,000 04 694 368 001 Probe #150 ¥30,000 04 694 376 001 Probe #151 ¥30,000 04 694 384 001 Probe #152 ¥30,000 04 694 392 001 Probe #153 ¥30,000 04 694 406 001 Probe #154 ¥30,000 04 694 414 001 Probe #155 ¥30,000 04 694 422 001 Probe #156 ¥30,000 04 694 449 001 Probe #157 ¥30,000 04 694 457 001 Probe #158 ¥30,000 04 694 465 001 Probe #159 ¥30,000 04 694 473 001 Probe #160 ¥30,000 04 694 481 001 Probe #161 ¥30,000 04 694 490 001 Probe #162 ¥30,000 04 694 503 001 Probe #163 ¥30,000 04 694 511 001 Probe #164 ¥30,000 04 694 520 001 Probe #165 ¥30,000 リアルタイム PCR 製品番号 04 694 279 001 5 PCR RealTime ready Universal ProbeLibrary 469 アプリケーション、プロトコール、製品、マニュアルについてのより詳しい情報は、 www.universalprobelibrary.comを参照ください。 5 RealTime ready リアルタイムPCR関連試薬 RealTime ready Cell Lysis Kit 製品番号 06 366 821 001 2ステップリアルタイムPCRの前に細胞を溶解させて直接cDNA合 成を実施するための試薬 05 943 523 001 アプリケーション 製品概要 RealTime ready Cell Lysis Kit RealTime ready Cell Lysis Kitは、2ステップリアルタイムPCR 包装単位 1 キット 50 回反応/ 40μl 反応 1 キット 500 回反応/ 40μl 反応 希望販売価格 ¥30,000 ¥180,000 逆転写前の便利な細胞溶解用試薬 法における、培養細胞を用いた迅速で簡便な遺伝子発現研究用にデ ザインされています。このキットは高度なワンステップ・プロト コールを使用しており、3∼ 30,000個の細胞を室温で5分以内に リアルタイム PCR 溶解させます。これにより得られた細胞溶解液はそのままcDNA合 背景情報 RealTime ready Cell Lysis Kitは、以下のcDNA合成およびリア ルタイムPCR解析に最適化されています。 成に利用でき、時間のかかるRNA生成ステップを省くことができ Transcriptor cDNA Synthesis Kits / Transcriptor Universal ま す。 こ のcDNAは さ ま ざ ま な ス ル ー プ ッ ト の リ ア ル タ イ ムPCR cDNA Master、LightCycler® 480 Masters / RealTime ready 実験（例、LightCycler® 480 Instrument、96および384ウエル、 DNA Probes Master/各種リアルタイムPCRマスターミックス試薬、 LightCycler® 1536 Instrument、1536ウエル）で解析可能です。 およびUniversal ProbeLibrary probes / RealTime ready assays。 簡便で使いやすいパッケージ及びプロトコールによって、RealTime ready Cell Lysis Kitは、実験上およびスループット上の様々な要望 に簡単にお応えします。また、このキットは、細胞を対象とした全て のマニュアルまたは自動化された遺伝子発現ワークフローに容易に統 品質管理 RealTime ready Cell Lysis Kitは、リアルタイムPCRの規格に適 合することを試験しています。 合できます。 製品構成 PCR 利点 1. RealTime ready Cell Lysis Buffer 2. Protector RNase Inhibitor 3. Thermolabile Nuclease ■ 利便性向上：煩わしいマルチステップRNA精製プロト コールの代わりに、簡単なワンステップ細胞溶解法を 提供。 ■ 結果取得までの時間を短縮：室温にてわずか5分でサ ンプルを溶解、他のステップが不要。 ■ 中間ステップを削減：cDNA合 成 時 にDNase処 理 を 行うことで、より早く、高品質の結果を獲得。 ■ 幅広い用途で利用可能：自動化または非自動化96∼ 1536ウェルフォーマットのリアルタイムPCRで、3 個から30,000個の培養細胞に対応可能。 470 新着情報・製品説明書は(研究用試薬・機器専用)ホームページ http://www.roche-biochem.jpを ご覧ください。 RealTime ready リアルタイムPCR関連試薬 RealTime ready RNA Virus Master RealTime ready RNA Virus Master アプリケーション 製品番号 05 619 416 001 包装単位 100 反応分/20μl 05 992 877 001 1,000 反応分/20μl 5 希望販売価格 ¥25,000 ¥240,000 製品概要 RealTime ready RNA Virus Masterは、ウイルスRNAの迅速か RealTime ready RNA Virus Masterは、ウイルスRNAの迅速か つ高感度な特異的ワンステップRT-qPCR解析用にデザインされてい つ高感度な特異的ワンステップRT-qPCR解析用にデザインされてい ます。 ます。 TranscriptorとTaq DNA Polymeraseの50倍濃縮混合液、およ イルスRNAの検出に特に適しています。独自の反応バッファーにより、 背景情報 RealTime ready RNA Virus Masterには、 Transcriptor Reverse Taq DNA Polymeraseを事前に長時間加熱活性化することなく、迅 Transcriptaseおよび95℃での活性化が不要になる独自の添加剤を 速かつ簡便に「ホットスタート」qPCRを行うことができます。この 含有する特別なTaq DNA Polymeraseが含まれています。 キ ッ ト は、HybProbeプ ロ ー ブ と 加 水 分 解 プ ロ ー ブ、 な ら び に Universal ProbeLibrary（UPL） プ ロ ー ブ に 最 適 化 さ れ て お り、 MgCl2濃度の最適化は不要です。 品質管理 RealTime ready RNA Virus Masterの各ロットは、リアルタイ ムPCRの規格に適合することを 転写A型肝炎ウイルス（HAV） リアルタイム PCR びdNTPとMgCl2入りの5倍濃度反応バッファーを含む本製品は、ウ RNAを用いて試験しています。 利点 ■ 迅速かつ簡単なワンステップ「ホットスタート」プロ トコールで、特異性の高い逆転写およびqPCR検出が 可能。 ■ さまざまなサンプルから10∼ 106コピーのウイルス RNAを特異的に検出。 製品構成 1. 50 x 濃度Enzyme Blend：Transcriptor RT、Taq DNA Polymerase、独自の添加 剤を含む 2. 5 x 濃度反応バッファー：RT-PCR反応バッファー、dATP、dCTP、dGTP、dUTP、 MgCl2、独自の添加剤を含む 3. 水、PCR グレード 免責条項 526ページのno. 4を参照ください。 527ページのno. 8を参照ください。 一般研究用 LightCycler® Multiplex RNA Virus Master ワンステップRT-qPCR用マスターミックス 製品番号 06 754 155 001 07 083 173 001 包装単位 200反応/20μl反応 1,000反応/20μl反応 希望販売価格 ¥39,800 ¥178,000 PCR LightCycler® Multiplex RNA Virus Master 製品説明 独自の逆転写酵素とアプタマーによるホットスタートPCR酵素 AptaTaq Fast DNA Polymeraseの組み合わせにより、迅速で特異 性の高いワンステップRT-qPCRを実現します。様々なヒトサンプル 由来のウイルスRNAを検出するためにデザインされています。 3つ以上のターゲットとインターナルコントロールのマルチプレッ クスPCRで使えるように、逆転写反応ミックスは200×濃度、qPCR 反応ミックスは5×濃度と高濃度になっています。AptaTaqはアプタ マー技術を採用した熱安定性の高い組換え型の可逆的ホットスタート Taq DNA Polymeraseです。熱を加えればすぐに活性化し増幅反応 をスタートし、ミスプライミングの無い特異性の高いPCRを実行しま す。 利点 ■ 独自の組換え型逆転写酵素は様々なサンプル（全血、 血漿、血清、糞便など）から精製されるウイルスRNA を効率的かつ安定的に逆転写します。 ■ 高感度な逆転写反応と、マルチプレックスqPCRが可 能です。 ■ アプタマーによるホットスタートqPCRにより、迅速 で特異性の高い結果が得られます。 ■ 逆転写酵素とPCR酵素に高い安定性が求められるオー トメーション化された実験にも最適です。 製品構成 1. RT-Enzyme Solution, 200x conc. 2. RT-PCR Reaction Mix, 5x conc. 3. Water, PCR grade 471 新着情報・製品説明書は(研究用試薬・機器専用)ホームページ http://www.roche-biochem.jpを ご覧ください。 5 RealTime ready リアルタイムPCR関連試薬 RNA Process Control Kit RNA Process Control Kit RT-qPCR用のインターナルコントロールキット 製品番号 07 099 622 001 07 099 592 001 包装単位 200反応/20μl反応 600反応/20μl反応 希望販売価格 ¥48,900 ¥128,500 製品説明 利点 ウイルスRNAの遺伝子検出から偽陰性の可能性を排除するための キットです。 このキットに含まれるコントロールRNAは様々な特長を 持っています。 ■ コントロールRNAはMS2バクテリア莢膜タンパクに 被われており、そのままRNA精製前スタートサンプル に添加できるヌクレアーゼ抵抗性RNAです。 ■ 精製からRT-qPCR検出まで、いずれのステップにお いてもウイルスRNAの検出に影響を及ぼしません ■ RNA配列は哺乳動物の配列と相同性が無く、それら由 来のウイルスRNAの検出に影響を及ぼしません。 qPCRでウイルスRNAを検出するには、RNA精製や逆転写、PCR など様々なステップが関与します。そのため、確定的な判断を行うに は、各ステップをモニタリングすることが求められます。もし陰性結 リアルタイム PCR 果が得られても、各ステップでのエラーの可能性を排除できなければ 偽陰性の可能性を排除できません。 このキットでは、精製前のスタートサンプルにコントロールRNAを 添加し、RNA精製からRT-qPCRまでをモニタリングします。このコ ントロールRNAのRT-qPCR検出が陰性であれば、各ステップのどこ かでエラーが起こっている可能性があり、ターゲット遺伝子の検出結 果が疑わしくなります。サンプル中にRT-qPCR阻害物質が混入して いる可能性や、RNA精製からRT-qPCRのステップで何らかのエラー が発生している可能性があります。 RNA精製からRT-qPCRまでの全ステップのコントロールとして、 スタートサンプルにRNase抵抗性コントロールRNAを加えることが できます。 RNA Process Control Detection Kit RNA Process Control Detection Kit 製品構成 1. 2. 3. 4. 5. RNA Process Control, conc. RNA Process Control Dilution Buffer RNA Process Control Detection Mix LightCycler® Multiplex RNA Virus Master Water, PCR grade 製品番号 07 099 606 001 包装単位 400反応/20μl反応 希望販売価格 ¥81,600 プライマーとプローブ（Cy5標識）、LightCycler® Multiplex RNA Virus Masterのキット 製品説明 ウイルスRNAの遺伝子検出から偽陰性の可能性を排除するための PCR キットです。 製品構成 1. LightCycler® Multiplex RNA Virus Master 2. RNA Process Control Detection Mix3. Water, PCR grade ※ RNase耐性コントロールRNAはRNA Process Control Kitにのみ含まれます。 qPCRでウイルスRNAを検出するには、RNA精製や逆転写、PCR など様々なステップが関与します。そのため、確定的な判断を行うに は、各ステップをモニタリングすることが求められます。もし陰性結 果が得られても、各ステップでのエラーの可能性を排除できなければ 偽陰性の可能性を排除できません。 このキットでは、精製前のスタートサンプルにコントロールRNAを 添加し、RNA精製からRT-qPCRまでをモニタリングします。このコ ントロールRNAのRT-qPCR検出が陰性であれば、各ステップのどこ かでエラーが起こっている可能性があり、ターゲット遺伝子の検出結 果が疑わしくなります。サンプル中にRT-qPCR阻害物質が混入して いる可能性や、RNA精製からRT-qPCRのステップで何らかのエラー が発生している可能性があります。 472 新着情報・製品説明書は(研究用試薬・機器専用)ホームページ http://www.roche-biochem.jpを ご覧ください。 PCR リアルタイムPCR用マスターミックス（他社機器用） 5 リアルタイムPCRマスターミックス選択ガイド ■素晴らしいパフォーマンスを示します。 ROXリファレンス色素を必要とするすべての装置で、高感度な qPCRやジェノタイピングが行えます。 ■ご使用中のアッセイから、簡単に切り替えできます。 様々なサンプルタイプで、すぐに再現性のある結果が得られます。 ■自動化できます。 マスターミックスは室温で24時間安定なので、分注装置での使用に 適しています。 トランスクリプターファーストストランドcDNA合成キットと組み 合わせることで、高感度の2ステップqPCRが行えます。 ト ラ ン ス ク リ プ タ ー フ ァ ー ス ト ス ト ラ ン ドcDNA合 成 キ ッ ト は、 qPCRにより機能試験されています。 ユニバーサルプローブライブラリーの詳細は下記URLをご覧くださ い。 www.universalprobelibrary.com ライトサイクラーインスツルメントには、最適化された専用試薬を ご使用ください。 ProbeFinderソフトウェアとユニバーサルプローブライブラリー、 トランスクリプターファーストストランドcDNA合成キット、ファス トスタートリアルタイムPCR マスターミックスを組み合わせること で、革新的なリアルタイムPCRのデザインとアッセイが行えます。 これらの試薬の詳細は、下記URLをご覧ください。 ユニバーサルプローブライブラリーの詳細は、458 ページをご覧ください。 Transcriptor Universal cDNA Masterの詳細は、 480ページをご覧ください。 トランスクリプターファーストストランドcDNA合成 キットの詳細は、484ページをご覧ください。 リアルタイム PCR ライトサイクラーインスツルメントを除くすべてのリ アルタイムPCR装置でリアルタイムPCRにおいては、 よりよいデータを最大限に引きだします。ROXリファ レンス色素による補正を必要とする装置には、ファスト スタート ユニバーサルSYBR Greenマスター (ROX)、 またはファストスタートユニバーサルプローブ マス ター (ROX)をご使用ください。ROXリファレンス色素 による補正を必要としないリアルタイムPCRにはファ ストスタート TaqMan®プローブ マスター、またはファ ストスタート SYBR Greenマスターをご使用ください。 これらのホットスタートマスターミックスは、お手頃な 価格で高い感度と高い特異性、再現性のある結果をもた らします。 www.roche-applied-science.com/qpcr ROXリファレンス色素による補 正が必要な装置 ○ フ ァ ス ト ス タ ー トTaqMan® プ ローブ マスター ファストスタートユニバーサル SYBR Greenマスター (ROX) ファストスタートSYBR Green マスター ライトサイクラーインスツルメント ○ ○ 各機種毎に専用のキット、試 薬、マスターミックスをご用意 し て お り ま す（394、408、 422、435ページ参照）。 PCR ファストスタートユニバーサル プローブマスター (ROX) ROXリファレンス色素による補 正が必要でない装置 ○ 473 新着情報・製品説明書は(研究用試薬・機器専用)ホームページ http://www.roche-biochem.jpを ご覧ください。 5 PCR リアルタイムPCR用マスターミックス（他社機器用） ファストスタートユニバーサルプローブマスター (ROX) 製品番号 04 913 949 001 リアルタイム PCR FastStart Universal Probe Master (ROX) ROXリファレンス色素を必要とするリアルタイムPCRシステムで のqPCRやqRT-PCRのためのready-to-useなホットスタートqPCR 用マスターミックスです。 04 913 957 001 アプリケーション 製品概要 04 914 058 001 包装単位 2×1.25ml (20μlの反応液で250回分) 10×1.25ml (20μlの反応液で1,250回分) 10×5ml (20μlの反応液で5,000回分) 希望販売価格 ¥19,500 ¥90,000 ¥310,000 ファストスタートユニバーサルプローブマスター (ROX)は、ROX ファストスタートユニバーサルプローブマスター (ROX)は、qPCR による補正が必要なすべてのリアルタイムPCR装置において、特別な やqRT-PCRの反応の準備を簡略化したready-to-use試薬ミックスで 装置やプロトコールの調整や改良を必要としない新しいリファレンス す。リアルタイムPCR装置と適切なPCRプライマー、加水分解プロー 色素を含んでいます。このready-to-useの2倍濃度のマスターミック ブ、本製品を組み合わせることで、高感度な検出と定量が可能です。 スは、加水分解プローブ検出フォーマットにおけるqPCRやqRT-PCR に必要なすべての試薬(プライマーとプローブ、テンプレートを除く) を含んでいます。ファストスタートユニバーサルプローブマスター (ROX)は、Applied Biosystems 7900 HT Fast Real-Time PCR SystemやApplied Biosystems 7500 Real-Time PCR System などの装置で使用可能です。 この製品はライトサイクラーインスツルメントでは使用しないでく ださい。 原理的に、GC-リッチやAT-リッチを含むすべてのDNAやcDNAの 増幅と検出に使用可能です。 トランスクリプターファーストストランドcDNA合成キットと組み 合わせることで、高感度の2ステップqRT-PCRが行えます。トランス クリプターファーストストランドcDNA合成キットは、qPCRにより 機能試験されています。 PCR 利点 ■ このマスターミックスは補正が必要なすべてのリアル タイムPCRで使用できます：マスターミックスには、 様々なプラットフォームでよりよいパフォーマンス を示す特別に開発されたリファレンス色素が含まれま す。 ■ qPCRにおいて高い感度と特異性をもたらします： ホットスタート酵素ファストスタートTaq DNAポリ メラーゼとマスターミックスに含まれる高精製された ヌクレオチドにより、より低い定量サイクル(Ct)をも たらします。 ■ あらゆるプローブアッセイに使用できます：ユニバー サル プローブライブラリープローブや他の加水分解プ ローブを用いたアッセイにおいて、高い感度と高い特 異性が得られます。 ■ 幅広い濃度レンジのDNAやcDNAの増幅と検出：GCリッチやAT-リッチを含む500bpまでの断片を増幅し ます。 ・アガロースゲルで増幅産物を可視化できます。 ・PCR反応のセットアップでのロボットピペッティン グステーションを使用可能：マスターミックスは長 いセットアップ時間の間も安定です。 ■ キャリーオーバーの防止：マスターミックスはdUTP を含むため、キャリーオーバーコンタミネーションに 起因する偽陽性を防止するためのウラシルDNAグリコ シラーゼを使用することが可能です。 背景情報 ホットスタートプロトコールは、PCRの感度、特異性、収量を顕著 に増加させます。ファストスタートTaq DNAポリメラーゼのアミノ 残基における熱不安定性ブロッキング基は室温で修飾酵素を不活化さ せます。それゆえ、プライマーが非特異的に結合した場合に伸長が起 こりません。ファストスタートTaq DNAポリメラーゼは高温(95℃で のプレインキュベーションステップ)でブロッキング基を外すことによ り活性化します。 内 容 ファストスタートTaq DNAポリメラーゼ、反応バッファー、ヌク レオチド(dATP、dCTP、dGTP、dUTP)、リファレンス色素のROX を含むマスターミックス。 品 質 機能試験：各ロットはGC-リッチテンプレート、AT-リッチテンプレー ト、長鎖テンプレート(約440bp)の3種類のテンプレートを使用して のqPCRで性能を試験されています。 ユニバーサルプローブライブラリーの詳細は、458 ページをご覧ください。 トランスクリプターファーストストランドcDNA合成 キットの詳細は、484ページをご覧ください。 ライトサイクラーウラシルDNAグリコシラーゼの詳 細は、440ページをご覧ください。 免責条項 526ページのno. 4を参照ください。 474 新着情報・製品説明書は(研究用試薬・機器専用)ホームページ http://www.roche-biochem.jpを ご覧ください。 PCR リアルタイムPCR用マスターミックス（他社機器用） FastStart TaqMan Probe Master 製品番号 04 673 409 001 ライトサイクラー以外のリアルタイムPCRシステムでのqPCR やqRT-PCT用のready-to-useのホットスタート反応ミックス 04 673 417 001 04 673 433 001 希望販売価格 ¥19,500 ¥90,000 ¥319,000 ターマニュアルの推奨をご覧ください。 ファストスタートTaqManマスターは、ready-to-useの2倍濃度の これらのマスターミックスとトランスクリプター ファーストストラ マスターミックスで、加水分解ブローブフォーマットでqPCRや2ス ンドcDNA合成キットを組み合わせることで、2ステップqRT-PCRで テップRT-PCRを含む定量的、リアルタイムDNA検出アッセイを実行 素晴らしい結果を得ることができます。機能試験済みで、すべてのリ するためのすべての必要な試薬(テンプレートとプライマー、プローブ アルタイムPCR機器で効率的にデザインされている、トランスクリプ 以外)を含んでいます。ライトサイクラー以外のリアルタイムqPCR機 ター ファーストストランドcDNA合成キットをご使用ください。 器で使用してください。 背景情報 ホットスタートプロトコールは顕著にPCRの感度、特異性、収量を 利点 ■ qPCRの感度と特異性を増加します：マスターミック ス中のホットスタート酵素であるファストスタート DNAポリメラーゼと高度に精製されたヌクレオチドに よりより低い定量サイクル(Ct)を達成します。 ■ ほとんどのプローブをベースにしたアッセイで使用で きます：ユニバーサルプローブライブラリーやその他 の加水分解プローブで、高感度で特異的な結果を達成 します。 ■ 広い範囲のDNAやcDNAの増幅と検出：GC-リッチお よびAT-リッチの500 bpまでのターゲットを増幅で きます。 ■ ライトサイクラー以外のすべてのリアルタイムqPCR 機器での使用：リファレンス色素であるROXを含むか 含まないかの二種類の組成から選択して下さい。 ■ アガロースゲルで増幅産物を可視化できます。 ■ PCR反応のセットアップでのロボットピペッティング ステーションの使用：マスターミックスは長いセット アップ時間の間も室温で安定です。 ■ キャリーオーバーの防止：ミックスはdUTPを含むた め、キャリーオーバーコンタミネーションに起因する 擬陽性を防止するためにはウラシルDNAグリコシラー ゼを使用します。 増加させます。ファストスタートTaq DNAポリメラーゼのアミノ残 基における熱感受性ブロッキング基は室温で修飾酵素を不活化させま リアルタイム PCR アプリケーション 包装単位 2×1.25 ml (20μlの反応液で250回分) 10×1.25 ml (20μlの反応液で1,250回分) 10×5 ml (20μlの反応液で5,000回分) す。それゆえ、プライマーが非特異的に結合した場合に伸長が起こり ません。ファストスタートTaq DNAポリメラーゼは高温(95℃でのプ レインキュベーションステップ)でブロッキング基を外すことにより活 性化します。 内 容 ファストスタートTaq DNAポリメラーゼ、反応バッファー、ヌク レオチド(dATP、dCTP、dGTP、dTTP)を含むマスターミックス。 品 質 機能試験：各ロットはGC-リッチテンプレート、AT-リッチテンプレー ト、長鎖テンプレート(約440 bp)の3種類のテンプレートを使用して のqPCRで性能を試験済みです。 ユニバーサルプローブライブラリーの詳細は、458 ページをご覧ください。 ファストスタートTaq DNAポリメラーゼの詳細は、 496ページをご覧ください。 トランスクリプター ファーストストランドcDNA合 成キットの詳細は、484ページをご覧ください。 PCR ファストスタートTaqManプローブマスター 5 免責条項 526ページのno. 4を参照ください。 製品概要 ファストスタートTaqManプローブマスターは、定量PCR(qPCR) や2ステップ定量逆転写PCR(RT-PCR)反応の調製を容易にする、新 しいready-to-useの試薬ミックスです。リアルタイムPCR機器や適 切なプライマー、加水分解プローブとの組み合わせで、本マスターは 一定のDNAシークエンスの高感度検出と定量を可能にします。 この製品はライトサイクラーインスツルメントでは使用しないでく ださい。 原理的に、ファストスタートTaqManプローブマスターは、GC-リッ チやAT-リッチを含むすべてのDNAやcDNAの増幅と検出に使用可能 です。しかしながら、使用するリアルタイムPCR機器の反応条件に検 出プロトコールを適用し、各ターゲットに対する特異的な加水分解プ ローブやプライマーをデザインする必要があります。機器のオペレー 新着情報・製品説明書は(研究用試薬・機器専用)ホームページ http://www.roche-biochem.jpを ご覧ください。 475 5 PCR リアルタイムPCR用マスターミックス（他社機器用） ファストスタートユニバーサルSYBR Greenマスター (ROX) 製品番号 04 913 850 001 FastStart Universal SYBR Green Master (ROX) ROXリファレンス色素を必要とするリアルタイムPCRシステムで のqPCRやqRT-PCRのためのready-to-useなホットスタートqPCR 用マスターミックスです。 アプリケーション 04 913 914 001 包装単位 4×1.25ml (20μlの反応液で500回分) 10×5ml (20μlの反応液で5,000回分) 希望販売価格 ¥36,000 ¥310,000 トランスクリプターファーストストランドcDNA合成キットと組み ファストスタートユニバーサルSYBR Greenマスター (ROX)は、 合わせることで、高感度の2ステップqRT-PCRが行えます。トランス ROXによる補正が必要なすべてのリアルタイムPCR装置において、特 クリプターファーストストランドcDNA合成キットは、qPCRにより 別な装置やプロトコールの調整を必要としない新しいリファレンス色 機能試験されています。 素を含んでいます。このready-to-useの2倍濃度のマスターミックス リアルタイム PCR は、SYBR Geen Ⅰ検出フォーマットにおけるqPCRやqRT-PCRに 背景情報 必要なすべての試薬(プライマーとテンプレートを除く)を含んでいま SYBR GreenⅠは二重鎖特異的DNA蛍光色素です。DNA合成の間 す。ファストスタートユニバーサルSYBR Greenマスター (ROX)は、 に反応ミックスに含まれるSYBR GreenⅠがPCR産物に結合し、そ Applied Biosystems 7900 HT Fast Real-Time PCR Systemや のアンプリコンが蛍光により検出できます。 Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR Systemなどの装置 で使用可能です。 ホットスタートプロトコールは、PCRの感度、特異性、収量を顕著 に増加させます。ファストスタートTaq DNAポリメラーゼのアミノ 残基における熱不安定性ブロッキング基は室温で修飾酵素を不活化さ せます。それゆえ、プライマーが非特異的に結合した場合に伸長が起 PCR 利点 ■ このマスターミックスは補正が必要なすべてのリアル タイムPCRで使用できます：マスターミックスには、 様々なプラットフォームでよりよいパフォーマンス を示す特別に開発されたリファレンス色素が含まれま す。 ■ qPCRにおいて高い感度と特異性をもたらします： ファストスタートTaq DNAポリメラーゼにより非特 異的な増幅産物の形成を最小限にします。 ■ qPCRの過大評価を防止します：SYBR GreenⅠの結 合量を増加させる非特異的増幅産物やプライマーダイ マーの形成を抑えます。 ■ 幅広い濃度レンジのDNAやcDNAの増幅と検出：GCリッチおよびAT-リッチを含む500bpまでの断片を増 幅します。 ■ qPCRの準備での時間と手間の節約：成分の混合や MgCl2の滴定、時間のかかる至適化ステップなどを省 略できる2倍濃度のready-to-useマスターミックスの 採用。 ■ キャリーオーバーの防止：マスターミックスはdUTP を含むため、キャリーオーバーコンタミネーションに 起因する偽陽性を防止するためのウラシルDNAグリコ シラーゼを使用することが可能です。 こりません。ファストスタートTaq DNAポリメラーゼは高温(95℃で のプレインキュベーションステップ)でブロッキング基を外すことによ り活性化します。 内 容 ファストスタートTaq DNAポリメラーゼ、反応バッファー、ヌク レオチド(dATP、dCTP、dGTP、dUTP)、SYBR GreenⅠ、リファ レンス色素のROXを含むマスターミックス。 品 質 機能試験：各ロットはGC-リッチテンプレート、AT-リッチテンプレー ト、長鎖テンプレート(約440bp)の3種類のテンプレートを使用して qPCRで性能を試験されています。 トランスクリプターファーストストランドcDNA合成 キットの詳細は、484ページをご覧ください。 ライトサイクラーウラシルDNAグリコシラーゼの詳 細は、440ページをご覧ください。 免責条項 526ページのno. 5を参照ください。 528ページのno. 13を参照ください。 製品概要 ファストスタートユニバーサルSYBR Greenマスター (ROX)は、 qPCRやqRT-PCRの反応の準備を省略できるready-to-use試薬ミッ クスです。リアルタイムPCR装置と適切なPCRプライマー、ファスト スタートユニバーサルSYBR Greenマスター (ROX)を組み合わせる ことで、高感度な検出と定量が可能です。 この製品はライトサイクラーインスツルメントでは使用しないでく ださい。 原理的に、GC-リッチやAT-リッチを含むすべてのDNAやcDNAの 476 増幅と検出に使用可能です。 新着情報・製品説明書は(研究用試薬・機器専用)ホームページ http://www.roche-biochem.jpを ご覧ください。 PCR リアルタイムPCR用マスターミックス（他社機器用） FastStart SYBR Green Master 製品番号 04 673 484 001 ライトサイクラー以外のリアルタイムPCRシステムでのqPCR やqRT-PCT用のready-to-useのホットスタート反応ミックス 04 673 492 001 ファストスタートSYBR Greenマスター アプリケーション 包装単位 5 ml(4×1.25 ml) (20μlの反応液で500回分) 50 ml(10×5 ml) (20μlの反応液で5,000回分) 5 希望販売価格 ¥36,000 ¥319,000 これらのマスターミックスとトランスクリプター ファーストストラ ファストスタートSYBR Greenマスターは、ready-to-useの2倍濃 ンドcDNA合成キットを組み合わせることで、2ステップqRT-PCRで 度のマスターミックスで、SYBR GreenⅠ検出フォーマットでqPCR 素晴らしい結果を得ることができます。機能試験済みで、すべてのリ や2ステップRT-PCRを含む定量的、リアルタイムDNA検出アッセイ アルタイムPCR機器で効率的にデザインされている、トランスクリプ を実行するためのすべての必要な試薬(テンプレートとプライマー以 ター ファーストストランドcDNA合成キットをご使用ください。 外)を含んでいます。ライトサイクラー以外のリアルタイムqPCR機器 SYBR GreenⅠは二重鎖特異的DNA蛍光色素です。DNA合成の間 に反応ミックスに含まれるSYBR GreenⅠが増幅PCR産物に結合し、 利点 ■ qPCRの感度と特異性を改善します：マスターミック ス中のホットスタート酵素であるファストスタート DNAポリメラーゼにより、非特異的な反応産物の形成 を最小限にします。 ■ qPCR結果の過大評価を防止します：SYBR GreenⅠ の結合量を増加させる非特異的増幅産物やプライマー ダイマーを除外します。 ■ 広い範囲のDNAやcDNAの増幅と検出：GC-リッチお よびAT-リッチの500 bpまでのターゲットを増幅で きます。 ■ ライトサイクラー以外のすべてのリアルタイムqPCR 機器での使用：リファレンス色素であるROXを含むか 含まないかの二種類の組成から選択して下さい。 ■ アガロースゲルで増幅産物を可視化できます。 ■ qPCRの準備での時間と手間の節約：成分の混合や MgCl2の滴定、時間のかかる至適化ステップなどを除 外できる2倍濃度のready-to-useマスターミックスの 採用。 ■ キャリーオーバーの防止：ミックスはdUTPを含むた め、キャリーオーバーコンタミネーションに起因する 擬陽性を防止するためにはウラシルDNAグリコシラー ゼを使用します。 そのアンプリコンが蛍光により検出できます。 ホットスタートプロトコールはPCRの特異性、感度、収量を顕著に 改善します。ファストスタートTaq DNAポリメラーゼのアミノ酸残 基上の熱感受性ブロッキング基が、室温で修飾酵素を不活化します。 リアルタイム PCR 背景情報 それゆえ、プライマーが非特異的に結合した場合に伸長が起こりませ ん。ファストスタートTaq DNAポリメラーゼは高温(95℃でのプレイ ンキュベーションステップ)でブロッキング基が外れることにより活性 化されます。 内 容 ファストスタートTaq DNAポリメラーゼ、反応バッファー、ヌク レオチド(dATP、dCTP、dGTP、dTTP)、SYBR GreenⅠを含む2 倍濃度のマスターミックス。 品 質 機能試験：各ロットはGC-リッチテンプレート、AT-リッチテンプレー ト、長鎖テンプレート(約440 bp)の3種類のテンプレートを使用して のqPCRで性能を試験済みです。 ファストスタートTaq DNAポリメラーゼの詳細は、 496ページをご覧ください。 トランスクリプター ファーストストランドcDNA合 成キットの詳細は、484ページをご覧ください。 PCR で使用してください。 免責条項 526ページのno. 5を参照ください。 528ページのno. 13を参照ください。 製品概要 ファストスタートSYBR Greenマスターは、DNAの検出と分析に SYBR GreenⅠを使用する、定量PCR(qPCR)や2ステップ定量逆転 写PCR(RT-PCR)反応の調製を容易にする、新しいready-to-useの試 薬ミックスです。リアルタイムPCR機器や適切なプライマーとの組み 合わせで、本マスターは一定のDNAシークエンスの高感度検出と定量 を可能にします。 この製品はライトサイクラーインスツルメントでは使用しないでく ださい。 原理的に、ファストスタートSYBR Greenマスターは、GC-リッチ やAT-リッチを含むすべてのDNAやcDNAの増幅と検出に使用可能で す。しかしながら、使用するリアルタイムPCR機器の反応条件に検出 プロトコールを適用し、各ターゲットに対する特異的なプライマーを デザインする必要があります。機器のオペレーターマニュアルの推奨 をご覧ください。 新着情報・製品説明書は(研究用試薬・機器専用)ホームページ http://www.roche-biochem.jpを ご覧ください。 477 5 PCR/RT-PCR 選択ガイド PCR用酵素セレクションガイド FastStart HiFi PCR System 詳細は497ページをご覧ください。 FastStart Taq DNA Polymerase 詳細は496ページをご覧ください。 Expand HiFi PCR/RT-PCR PCR System 詳細は506ページをご覧ください。 Expand HiFiPLUS PCR System 詳細は500ページをご覧ください。 Expand Long Range 詳細は501ページをご覧ください。 Expand 20kbPLUS PCR System 詳細は503ページをご覧ください。 GC-Rich PCR System 詳細は498ページをご覧ください。 Pwo SY DNA Polymerase PCR 詳細は499ページをご覧ください。 Taq DNA Polymerase 詳細は504ページをご覧ください。 最大増幅鎖長 ○kb 正確性 ○倍 ホット スタート 最大増幅鎖長 正確性 5kb 4倍 最大増幅鎖長 正確性 3kb 1倍 最大増幅鎖長 正確性 5kb 3倍 最大増幅鎖長 正確性 5kb 6倍 最大増幅鎖長 正確性 ホット スタート GC dNTP ホット スタート GC dNTP リッチ 5kb 5倍 最大増幅鎖長 正確性 正確性 3kb 1倍 コントロール反応によって確認される最大の 増幅鎖長です。 場合によって、これ以上の増幅も可能です。 Lac I検定によるTaq DNA Polymeraseの正 確性を基準として、比較した正確性の値です。 化学修飾による不活化処理を行っています。 95℃ 2分間のプレインキュベーションにより 活性化されます。 MIX マスター MIX 付き GC dNTP リッチ 付き dNTP 付き GC dNTP リッチ 付き GC dNTP 3kb 18倍 最大増幅鎖長 マスター dNTP 35kb 3倍 正確性 付き 付き 正確性 最大増幅鎖長 付き dNTP 25kb 3倍 最大増幅鎖長 リッチ リッチ 付き dNTP 付き GC リッチ マスター MIX マスター MIX GCリッチ専用のバッファーを同梱していま す。高次構造を持つテンプレートなど、増幅 の困難なPCRに最適です。 dNTP dNTP付きの包装形態もご用意しております。 付き マスター MIX プレミックスタイプの酵素もご用意しており ます。テンプレートとプライマーを加えてメ スアップするだけです。 最少のピペッティングでPCRが行えます。 478 新着情報・製品説明書は(研究用試薬・機器専用)ホームページ http://www.roche-biochem.jpを ご覧ください。 PCR/RT-PCR 選択ガイド 5 逆転写酵素セレクションガイド 最大合成鎖長 Reverse transcriptase 詳細は491ページをご覧ください。 AMV 詳細は488ページをご覧ください。 M-MuLV 詳細は488ページをご覧ください。 Expand 詳細は487ページをご覧ください。 Tth DNA polymerase 詳細は495ページをご覧ください。 最大合成鎖長 ○kb 最高反応温度 ○℃ 1 Step 2 Step Kit 最高反応温度 2 Step 最高反応温度 2 Step 14kb 50℃ 最大増幅鎖長 最高反応温度 1kb 70℃ コントロール反応によって確認される最大の 合成鎖長です。 場合によって、これ以上の合成も可能です。 最高の反応温度を示します。 一般的な実験に推奨される反応温度は括弧内 に示します。 1 Step 2 Step 2 Step Kit 逆転写酵素単品をご用意しております。 2 Step用にご使用頂けます。 オールインワンキットをご用意しております。 逆転写反応に必要なプライマーやRNase阻害 剤が1つのキットにオールインワン！ 1 Step用キットをご用意しております。 PCR 1 Step Kit 10kb 37℃ 最大増幅鎖長 Reverse transcriptase 最高反応温度 12kb 60℃ 最大増幅鎖長 Reverse transcriptase 2 Step 14kb 65℃ 最大合成鎖長 Reverse transcriptase 最高反応温度 PCR/RT-PCR Transcriptor 479 新着情報・製品説明書は(研究用試薬・機器専用)ホームページ http://www.roche-biochem.jpを ご覧ください。 5 PCR/RT-PCR 2ステップRT-PCR用製品 トランスクリプターユニバーサルcDNAマスター Transcriptor Universal cDNA Master 製品番号 05 893 151 001 包装単位 100 回反応 希望販売価格 ¥65,000 あらゆるリアルタイムPCRシステムにおける2ステップリアルタ イムPCR用の使いやすい反応ミックス PCR PCR/RT-PCR アプリケーション 製品概要 逆転写は、分子生物学でよく活用される反応です。定性的・定量的 Transcriptor Universal cDNA Masterは、2ステップリアルタイ なRNA解析のため、PCRやリアルタイムPCRを用いてRNAをDNA ムPCRにおいて短時間でのcDNA合成ができる簡便なマスターミック に変換する方法は、遺伝子発現解析に革命的な変革をもたらしまし スです。cDNA合成に必要な全ての試薬（ランダムヘキサマープライ た。RT-PCRまたはリアルタイムPCRは現在、mRNAの検出と定量 マー、ヌクレオチド、バッファー、酵素）をわずか2本のバイアルで の標準法となっており、わずか1個の細胞のRNAを定量できる感度 提供しており、最小限のピペッティング操作で実験が可能です。この を備えています。RT-PCRは、cDNAライブラリー作製、PCRによる マスターミックスとRealTime ready Cell Lysis Kitを組み合わせれ 分子クローニング、およびシークエンシングにも利用されています。 ば最大の利便性が得られ、細胞溶解液を直接使用して、リアルタイム Transcriptor Universal cDNA Masterは、cDNA合成とリアルタ PCRをさらに加速することができます。本キットに含まれる独自の酵 イムPCR解析のための、簡便かつ迅速なソリューションです。わずか 素は幅広い温度範囲での使用が可能で、高温での逆転写に最適です。 2本のバイアルで提供されるこのマスターミックスは、使用している Transcriptor Universal cDNA Masterは、複雑な構造のRNAテン PCR機器にかかわらず、利用できます。 プレートでも、高い特異性と感度を提供します。低コピーおよび高コ ピーの遺伝子の両方で、リアルタイムPCRにおける優れたパフォーマ ンスと直線性が得られます。Transcriptor Universal cDNA Master 利点 は、LightCycler® シリーズ及びROX補正が必要なその他すべてのリ ■ 簡単なセットアップで手間がかからない。このキッ トに含まれる2本のバイアルには、逆転写反応に必要 な全てのコンポーネント（ランダムヘキサマープライ マー、ヌクレオチド、緩衝液、酵素）が入っており、 必要な操作はテンプレートRNAを添加するだけです。 ■ 迅速なプロトコールで時間を節約 最適化されたマス ターミックスは、逆転写反応時間（10分）とセット アップ時間を大きく短縮します。このマスターミック スと組み合わせて、RNA精製不要のRoche社の細胞 溶 解 用RealTime ready Cell Lysis Kitを 利 用 す れ ば、利便性が最大になります。 ■ 最も困難なテンプレートでも力を発揮 Transcriptor Reverse Transcriptaseの高い熱安定性と特別に最 適化されたバッファーシステムにより、インキュベー ション温度を最高60℃にでき、困難な二次構造でも 正確に転写できます。 ■ 定量リアルタイムPCR実験を高い信頼性で実行 6桁 以上の線形ダイナミックレンジにわたって、高感度で 再現性の高い結果が得られます。 ■ 2ステップ定量リアルタイムPCRの感度と特異性を改 善 Total RNA 量0.1 pg の少量のターゲット量でも、 定量サイクル（Ct）値を得ることが可能です。 アルタイムPCR機器で使用できます。 背景情報 高感度かつ正確なリアルタイムPCRアッセイは、有意義な分子遺伝 学解析に必須です。逆転写およびcDNA合成のための正しい酵素の選 択は、細胞のRNAの高品質な全長cDNAを高収率で得るために不可欠 です。 Roche Applied Scienceは、以下のような包括的なTranscriptor 逆転写製品を提供しています。 ・リアルタイムPCRで優れた性能と幅広いダイナミックレンジを示す 酵素 ・複雑な高次構造を持つRNAからcDNAを合成する高温での逆転写酵 素 ・配列に対する高い正確性を必要とするアプリケーション用の、プ ルーフリーディング活性を持つHigh Fidelity Transcriptor製品 製品構成 1. Transcriptor Universal Reverse Transcriptase、20 x 濃度 2. Transcriptor Universal Reaction Buffer、5 x 濃度 480 新着情報・製品説明書は(研究用試薬・機器専用)ホームページ http://www.roche-biochem.jpを ご覧ください。 PCR/RT-PCR 2ステップRT-PCR用製品 Transcriptor Reverse Transcriptase 製品番号 03 531 317 001 包装単位 250 U(25回) 希望販売価格 ¥16,000 14 kbまでのRNAの頑健な転写を行うためのリコンビナントの逆 転写酵素 03 531 295 001 500 U(50回) ¥27,000 03 531 287 001 4×500 U(200回) ¥100,000 トランスクリプター リバーストランスクリプターゼ アプリケーション 5 機能試験 トランスクリプターは、従来のサーマルサイクラーやライトサイ トランスクリプターの各ロットはRT-PCRで機能試験済みです。品 クラーなどを使用しての、様々な由来からのRNA(mRNA、トータル 質管理はルーチン的に以下の方法で行われます： RNA、ウイルスRNA、 ■従来のサーマルサイクラーにより、ヒト骨格筋のトータルRNAか 転写RNA)を逆転写するために選択さ れる製品で、次のアプリケーションに適します： ら、ヒトジストロフィンの10 kbのフラグメントを検出。 ■ライトサイクラーにより、5×102から5×106コピーのヒトの転写 ■GC-リッチRNAテンプレートのRT-PCR PBGD RNAを検出。結果は、固定クロッシングポイントと固定蛍 ■cDNA合成間でのCy3、Cy5、アミノアリル、DIG、ビオチンの標 光強度により定義。 識 ■RACE法によるmRNAの5'および3'末端の回復とクローニング ■巨大インサートのcDNAライブラリーの作成 PCR/RT-PCR ■その後の増幅反応に使用されるファーストストランドcDNAの合成 ■ジデオキシシークエンシング ■RNAシークエンシング ■DNAフラグメントの3'-末端ラベル ■ゲノムフットプリント用の1本鎖プローブの作成 容量活性は20ユニット/μlで、酵素は保存バッファー中で供給され ます。5倍濃度の反応バッファーが酵素と共に供給されます。 背景情報 トランスクリプター リバーストランスクリプターゼは、 で発 現させたリコンビナント酵素（RT）です。酵素はRNA依存性DNAポ リメラーゼ、DNA依存性DNAポリメラーゼ、巻き戻し活性、RNase H活性を示します。一本鎖DNAとRNA分子は共にプライマーの存在下 で、テンプレートとして認識されます。 トランスクリプターの特別なリコンビナント構造により、その酵素 図1. 2ステップRT-PCRでの感度。 様々な量のマウス肝臓トータルRNAが、20μlの反応液中、oligo(dT)プライミングと トランスクリプター リバーストランスクリプターゼを使用して、逆転写された。5μl のRT反応液をマウスβ-アクチン遺伝子の324-bpの増幅に使用された。ファストス タートHi Fi酵素ブレンドをPCRの構成分として使用した。 レーン1：50 ngのマウス肝臓トータルRNA レーン2：25 ngのマウス肝臓トータルRNA レーン3：10 ngのマウス肝臓トータルRNA レーン4：5 ngのマウス肝臓トータルRNA レーン5：1 ngのマウス肝臓トータルRNA レーン6：500 pgのマウス肝臓トータルRNA レーン7：250 pgのマウス肝臓トータルRNA レーン8：100 pgのマウス肝臓トータルRNA レーン9：0 pgのマウス肝臓トータルRNA すべての反応は2回行われた。 活性は様々な利点を持ちます： ■RNAの高感度検出：1ステップRT-PCRで、わずか1 pgのトータル PCR 規 格 RNAや100 fgのmRNAが検出できます(Expand ハイフィディリ ティ PCRシステムとの組み合わせ)。2ステップRT-PCRで、わず か100 pgのトータルRNAが検出できます(ファストスタートハイ フィディリティ PCRシステムとの組み合わせ)。 ■14 kbまでのmRNAの逆転写 ■GC-リッチのRNAテンプレートのRT-PCR ■その高い熱安定性(65℃まで)による、強い二次構造を持つGC-リッ チRNAの逆転写 トランスクリプターはまた、ライトサイクラーとの組み合わせで、 素晴らしい結果を与えます：108レンジ以上のRNAの直線定量が、強 い蛍光強度で得られます。 481 新着情報・製品説明書は(研究用試薬・機器専用)ホームページ http://www.roche-biochem.jpを ご覧ください。 5 PCR/RT-PCR 2ステップRT-PCR用製品 1. oligo(dT)プライマーとトランスクリプターによる mRNAの逆転写 2. ファストスタートTaq DNAポリメラーゼを使用した 3'-末端に近接のプライマーによるcDNAのPCR PCR成分としてエキスパンドハイフィデリティ酵素ブレンドを使用した2-kbジストロ フィンRNAフラグメントの1ステップRT-PCRでの感度(トランスクリプターと他のリ バーストランスクリプターゼの比較)。 トランスクリプター リバーストランスクリプターゼが最高の感度を達成した。 図3. 65℃までのトランスクリプター リバーストランスクリプターゼの使用による難しい RNAテンプレートの克服。 ヒト28SリボゾーマルRNAの4.9-kbフラグメント(GC含量：70%)を逆転写するため に、55℃、60℃、65℃でトランスクリプター リバーストランスクリプターゼと他 のリバーストランスクリプターゼを特異的プライマーと共に使用した。2ステップRTPCRの間、ファストスタートDNAポリメラーゼとGC-RICHレゾリューション溶液を、 従来のサーマルサイクラーでの389-bpフラグメントを増幅するために使用した。そ の高い熱安定性のため、トランスクリプター リバーストランスクリプターゼは65℃ま で使用できた。GC-リッチテンプレートを逆転写し増幅するために、ファストスタート DNAポリメラーゼとの組み合わせが選択される。 レーン1：トランスクリプター リバーストランスクリプターゼ レーン2：サプライヤー AのRNase H− MuLV レーン3：サプライヤー AのRNase H− AMV PCR PCR/RT-PCR 図2. 図4. トランスクリプター リバーストランスクリプターゼによる高感度で高収量なRT-PCR での14kbまでの完全長転写産物の作成。 詳細は(図5)を参照。 図5. トランスクリプター リバーストランスクリプターゼによる高感度で高収量なRT-PCR での14kbまでの完全長転写産物の作成。 もっとも長い真核細胞のmRNAの一つである、ヒトジストロフィン遺伝子の14-kb のmRNAを生成するために、様々な量のヒト骨格筋トータルRNAをトランスクリプ ター リバーストランスクリプターゼと他のリバーストランスクリプターゼを使用し、 oligo(dT)プライマーを介して20μlの反応液中で逆転写した。次のPCR(図4)で、ファ ストスタートDNAポリメラーゼを使用して1.9-kbフラグメントを増幅するために、 2μlのRT反応液を使用した。PCRプライマーはmRNAの5'-末端付近に位置するため、 完全長の14kb mRNAが完全に転写されたときにのみ、PCR産物(図5)は作成できる。 リアルタイムPCRとRT-PCR用製品と機器に関する 情報は、388ページをご覧ください。 482 新着情報・製品説明書は(研究用試薬・機器専用)ホームページ http://www.roche-biochem.jpを ご覧ください。 PCR/RT-PCR 2ステップRT-PCR用製品 トランスクリプターハイフィディリティ cDNA合成 キット 製品番号 05 081 955 001 包装単位 1キット(50回反応) 希望販売価格 ¥46,000 05 091 284 001 1キット(100回反応) ¥75,000 05 081 963 001 1キット(200回反応) ¥130,000 5 Transcriptor High Fidelity cDNA Synthesis Kit アプリケーション 品 質 Transcriptor High Fidelity cDNA Synthesis Kitは、一般的な このキットの各ロットはプルーフリーディング活性と、K-562由来 逆転写酵素に比べ非常に高い正確性でRNAを逆転写するようデザイン RNA中のPBGD mRNAの2ステップ定量RT-PCRでの検出により検 されています。このキットは、組み換え型逆転写酵素とプルーフリー 証されています。 酵素は次の実験に使用できます。 製品構成 ・クローニング 1. トランスクリプターハイフィデリティリバーストランスクリプターゼ 2. トランスクリプターハイフィデリティ RT反応バッファー 3. プロテクター RNaseインヒビター 4. dNTPミックス、PCRグレード 5. アンカーオリゴ(dT)18プライマー 6. ランダムヘキサマープライマー 7. DTT 8. 水、PCRグレード 9. コントロールRNA* 10. コントロールプライマー * ・cDNAライブラリー 利点 ■ 逆転写反応の正確性を高めます。 ■ 一般的な逆転写酵素に比べ約7倍の正確性を示します。 ■ 高 い 正 確 性 と 高 い 感 度、 高 い 収 量、 さ ら に 完 全 長 cDNAの合成を可能にしました。 ■ アンカーオリゴ(dT)18プライマーを用いることで14 kbまでの完全長cDNAが得られます。 ■ 低コピー数テンプレートの検出：約1 ngのテンプレー トRNAから逆転写可能です。 ■ GCリッチなRNAなどの反応の難しいテンプレートで も、55℃の反応温度で逆転写できます。 ■ 約10分間で逆転写反応できます。 * 50回反応用キットにのみ含まれます。 製品概要 キットの主な構成品は、組み換え型逆転写酵素とプルーフリーディ PCR ・トランスクリプトームのシークエンス PCR/RT-PCR ディング酵素をブレンドした2ステップRT-PCR用の酵素です。この ン グ 酵 素 の ブ レ ン ド で あ るTranscriptor High Fidelity Reverse Transcriptaseです。このブレンド酵素により、一般的な逆転写酵素 の7倍の正確性で逆転写できます。 Transcriptor High Fidelity Reverse Transcriptaseは14 kbま での cDNAを合成できます。また、高い熱安定性と専用バッファーシ ステムにより、55℃での逆転写反応が可能です。そのため、正確性を 低下させる添加剤などを加えずにGCリッチなRNAテンプレートを逆 転写できます。 組み換え型逆転写酵素は で発現させています。この酵素は RNAをテンプレートにDNAを合成する活性と、DNAをテンプレート にDNAを合成する活性も持ちます。また、RNA-DNAハイブリッドの RNAを分解するRNase H活性も持ちます。そのため、RNase H反応 ステップを除くことができ、時間とコストが抑えられます。 このキットは第一鎖cDNA合成に必要なすべての試薬を含んでいま す。3種類のプライマーシステムが使用でき、キットにはランダムヘキ サマープライマーとアンカーオリゴ[dT]18プライマーの2種類のプライ マーが含まれています。 アンカーオリゴ[dT]18プライマーは、ポリAテー ルの最初の部分に結合し、完全長cDNAを合成します。ランダムヘキ サマープライマーはRNAのあらゆる箇所にプライミングし、ポリAテー ルを持たないRNAも逆転写できます。高い熱安定性を持つProtector RNase Inhibitorは、高い温度の反応中でもRNAを保護できます。 新着情報・製品説明書は(研究用試薬・機器専用)ホームページ http://www.roche-biochem.jpを ご覧ください。 483 5 PCR/RT-PCR 2ステップRT-PCR用製品 トランスクリプター ファーストストランドcDNA 合成キット 製品番号 04 379 012 001 包装単位 1キット(50回反応) 希望販売価格 ¥43,000 04 896 866 001 1キット(100回反応) ¥64,500 04 897 030 001 1キット(200回反応) ¥110,000 Transcriptor First Strand cDNA Synthesis Kit PCR/RT-PCR アプリケーション トランスクリプター ファーストストランドcDNA合成キットは、 以下のアプリケーション用に、様々な由来のRNA(mRNA、トータル RNA、ウイルスRNA、 転写RNA)を逆転写するためにデザイ ンされています： ・定量あるいは定性PCRを用いて、2ステップRT-PCRを介しての、 遺伝子発現レベルの研究 ・長大あるいは完全長インサートでのcDNAライブラリーの作成 ・対象遺伝子のクローニング キットは従来のサーマルサイクラーやリアルタイムPCRインスツル メントの両方で使用するcDNAの合成反応に必要なすべての試薬を含 んでいます。 です：長鎖のcDNA転写産物(14 kbまで)を合成し、最高65℃の温度で 使用できます。その高い熱安定性により、添加剤を加えずに高い二次構 造を持つGC-richテンプレートに使用できます。このキットには第一鎖 cDNA合成反応に必要なすべての試薬が含まれています。プライミング には3種類のプライマーが使用できます。キットには2種類のcDNA合成 プライマー（ランダムヘキサマープライマーとアンカーオリゴ(dT)18プ ライマー）が含まれます。後者は完全長cDNAを合成するためにpoly(A) テールの開始部分にアニーリングし、poly(A)テールの中間部からのプラ イミングを防止するようにデザインされています。ランダムヘキサマー プライマーは、すべてのRNAシークエンスを均一に表すために、RNA全 体にわたりプライミングが可能で、poly(A)テールを持たないRNAの逆 転写を可能とします。 品 質 利点 PCR 多くのアプリケーションに至適化されています。 ■ リアルタイムPCRに最適−キットは、ライトサイクラー ファストスタートDNAマスター PLUSとファストスタート DNAマスターキットとの組み合わせで、ライトサイク ラーインスツルメントにより試験されています。 ■ 加えるRNA( 転写産物)は少なくとも108のレン ジで正確な定量直線が得られ、非常に少ない、あるい は過剰な発現レベルの遺伝子解析を可能にします。 ■ 効 率 的 な 定 量PCRカ ー ブ の 作 成。 高 い 蛍 光 強 度 と RNA希釈系列間の明瞭な差により、結果を明確に解析 できます（図1）。 ■ 信頼性のある高感度な結果の獲得−PCRを干渉、阻害す るような添加物はバッファーシステムには含まれません。 タフさ ■ 様々な、もっとも困難なテンプレート(高い二次構造を 持つGC-RICH RNA)でも転写可能。 ■ 14 kbまでのcDNA転写産物を合成可能（図3）。 ■ キット内に含まれるアンカーオリゴ(dT)18プライマー により完全長の転写産物を合成可能。 柔軟性 ■ 実験の目的に応じて、3種類のプライマー（ランダム ヘキサマー、アンカーオリゴ(dT)18プライマー、配列 特異的プライマー）から選択できます。 機能試験 キットの各ロットは従来のサーマルサイクラーやライトサイクラー によるRT-PCRで機能試験済みです。それに加え、リバーストランス クリプターゼやプロテクター RNaseインヒビター、その他のキット 構成分はいかなる汚染も無いことがそれぞれ独自に検査されています。 従来のサーマルサイクラーを使用しての2ステップRT-PCRでの機能試験： トランスクリプター リバーストランスクリプターゼは、20μlの反 応液中で、2μgのヒト骨格筋のトータルRNA、10 Uのトランスク リプター リバーストランスクリプターゼ、50 pmolのアンカーオ リゴ(dT)18プライマーを使用して機能試験済みです。反応は50℃で 1時間インキュベートされます。後のPCRでは、Expandロングテ ンプレートPCRシステムにより10 kbジストロフィンフラグメント を増幅するために、50μlのトータル液量中で5μlのcDNAテンプ レートが使用されました。30回のPCRサイクルの後、アガロース ゲル電気泳動とエチジゥムブロマイド染色し、10 kbのフラグメン トが明瞭に可視化されました。 ライトサイクラーを使用しての2ステップRT-PCRでの機能試験： キットは内部のコントロールを使用して機能試験されました。コン トロールRNA(不死化細胞株K-562から精製したトータルRNA分画) の様々な量(100 ng、10 ng、1 ng)を、10 Uトランスクリプター リバーストランスクリプターゼにより、反応液量20μl中で逆転写し ました；反応は55℃で30分間インキュベートしました。ヘキサマー プライマーとアンカーオリゴ(dT)18プライマーの両方を試験しまし た。ライトサイクラーインスツルメントを使用した後の定量PCR において、5μlのcDNA反応産物をPBGDコントロールプライマー ミックスおよびライトサイクラー ファストスタートDNAマスター SYBR GreenⅠとインキュベーションしました。得られたカーブは クロッシングポイントと蛍光強度で定義されました。 製品構成 製品概要 484 キットの主要構成分であるトランスクリプター リバーストランスク リプターゼは、 で発現させたリコンビナントの逆転写酵素です。 酵素はRNA依存的DNAポリメラーゼ、DNA依存的DNAポリメラーゼ、 巻き戻し活性、RNA：DNAハイブリッド中のRNAを分解するRNase H活性を示します。RNase H活性は、逆転写反応後のRNase Hイン キュベーションステップの省略を可能にします。これにより、反応時 間を短縮しコスト抑える事ができます。 この酵素は、高い熱安定性をもち、高感度であるためRT-PCRに最適 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. トランスクリプター リバーストランスクリプターゼ トランスクリプター RT反応バッファー プロテクター RNaseインヒビター dNTPミックス、PCRグレード アンカーオリゴ(dT)18プライマー ランダムヘキサマープライマー コントロールRNA* コントロールPBGDプライマーミックス* 水、PCRグレード * 50回反応用キットにのみ含まれます。 新着情報・製品説明書は(研究用試薬・機器専用)ホームページ http://www.roche-biochem.jpを ご覧ください。 PCR/RT-PCR Transcriptor First Strand cDNA Synthesis KitとLightCycler® 2.0 によるG6PDH 遺伝子の定量。 K-562細胞株からの様々な量のTotal RNAを説明書の反応条件に従ってランダム ヘ キ サ マ ー で 逆 転 写 し ま し た。 つ づ い てPCR反 応 はG6PDH特 異 的 プ ラ イ マ ー と LightCycler® Fast Start DNA Master SYBR Green I Kitで行いました。より小さ いサイクルで立ち上がっている曲線：Transcriptor First Strand cDNA Synthesis Kit。もう一方の曲線：サプライヤー A のM-MuLV リバーストランスクリプターゼ、 RNase H- ミュータント。サプライヤー Aの製品に比べ、Transcriptor Kitはより 高い蛍光強度と、低いクロッシングポイントの増幅曲線が得られました。さらに、 G6PDH遺伝子の発現パターン分析において、より広い直線領域とダイナミックレンジ での分析が可能でした。 図3. 2ステップRT-PCRでのトランスクリプター ファーストストランドcDNA合成キット の性能。 トータルRNAはアンカーオリゴ(dT)18プライマーを用いて逆転写され、その反応条件 は使用説明書に従いました。以下のPCRにおいて、5μlのcDNA反応産物を使用しま した。30サイクル後、PCR産物をアガロースゲルで分離しました。レーン1、2：開 始材料；ヒト骨格筋のトータルRNA、増幅されたフラグメント；ジストロフィン遺伝 子；PCRはExpand High Fidelity PCRシステム；レーン3：開始材料；ヒト肝臓のトー タルRNA、増幅されたフラグメント；Apo B；PCRはExpand High Fidelity PCRシ ステム；レーン4：ヒト骨格筋のトータルRNA、増幅されたフラグメント；ジストロフィ ン遺伝子；PCRはExpand High Fidelity PCRシステム；レーン5−9：ヒト骨格筋の トータルRNA、増幅されたフラグメント；ジストロフィン遺伝子；PCRはExpandロ ングテンプレートPCRシステム。 PCR 図1. 5 PCR/RT-PCR 2ステップRT-PCR用製品 図2. Transcriptor First Strand cDNA Synthesis KitとLightCycler® 480インスツ ルメントによるh-HPRT遺伝子の定量。 Transcriptor First Strand cDNA Synthesis Kitを用いて ランダムヘキサマープラ イマーでTotal RNAを逆転写しました。：100 ng/反応から10 pg/反応の逆転写さ れたRNAがPCRに使用されました。LightCycler® 480インスツルメントを用いて、 h-HPRTの18重測定が高い再現性で得られました。 485 新着情報・製品説明書は(研究用試薬・機器専用)ホームページ http://www.roche-biochem.jpを ご覧ください。 5 PCR/RT-PCR 2ステップRT-PCR用製品 RT-PCR(AMV)用ファーストストランドcDNA 合成キット 製品番号 11 483 188 001 包装単位 1 キット(30回反応) 希望販売価格 ¥29,900 1st Strand cDNA Synthesis Kit for RT-PCR (AMV) RT-PCRの第一段階としてのファーストストランド cDNA 合成 キット アプリケーション 機能試験 本 キ ッ ト はRT-PCRの 第 一 段 階 と し て の フ ァ ー ス ト ス ト ラ ン ド 標準的なcDNA合成分析で、1.0 μgのNeo pa RNAテンプレート cDNA 合成に使用できます。配列特異プライマーだけでなくランダム を20 μCi [α-32P]-dCTP(比活性 3000 Ci/mmol)と42℃で60分 プライマーやpoly(dT)15プライマーも使用可能です。 間インキュベートしたとき、少なくとも300 ngのcDNAが合成され それゆえ、RNAウイルスの存在/不在やその他のRNAを含む微生物 ます(30%の収率)。 PCR/RT-PCR の検出にPCRと組み合わせて使用できます。他の応用としては特異 的mRNAのいろいろな発現をモニターするためのmRNAの定量です。 製品構成 RT-PCRによるPCR産物は標準的な方法でクローニングできます。そ 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. れ以上の応用としては、“differential display of mRNA”の第一段 階として用います。 背景情報 RNAの増幅にはRNA基質のDNAへの変換が必要とされます。こ れ はAMV RT(avian myeloblastis virus)やM-MuLV RT(moloney AMV リバーストランスクリプターゼ デオキシヌクレオチドミックス 反応バッファー MgCl2 ストック溶液 ゼラチン Oligo-p(dT)15 プライマー ランダムプライマー p(dN)6 RNase インヒビター コントロールNeo pa RNA 滅菌水 24μl 210μl 1.05 ml 2バイアル×1.3 ml 210μl 1バイアル×60μl 60μl 1バイアル×30μl 1バイアル×25μl 1.3 ml murine leukemia virus)等のリバーストランスクリプターゼによって 行なわれます。調製されたcDNAは標準的なPCRのテンプレートとし て使用できます。 AMV RTは使用されるプライマーのタイプにより決定される部位 リアルタイムPCRとRT-PCR用製品と機器に関する 情報は、388ページをご覧ください。 で、新しいDNAを合成します。 ■Oligo-p(dT)15がプライマーとして使われたとき、poly(A) mRNA の3'-末端で。 ■ランダムプライマー p(dN)6がプライマーとして使われたとき、 mRNAの間の非特異的な位置で。 ■特異的プライマーによる決定された部位で。 ファーストストランドcDNA合成のためのAMV RTの使用にはいく つかの利点があります。M-MuLV RTに比べより高い熱安定性を持つ ため、42℃での反応が可能で、37℃での反応に比べより高い特異 PCR 性と解像度を示します。 cDNA Synthesis Kit 製品番号 11 117 831 001 アプリケーション 製品構成 cDNA合成キット トータルRNAやmRNAからのds cDNAの合成のための、1チュー ブ法に至適化。 ds cDNAは様々な発現遺伝子を増強するサブストラクティブ ハイ ブリダイゼーション実験の開始点として、無指向性のcDNAライブラ リーの構築に使用できる。また主要なアプリケーションとして、DNA マイクロアレイでのハイブリダイゼーションのための標識cRNAを得 るために、すべてのcDNAポピュレーションの ションにも使用できます。 トランスレー 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. 包装単位 1キット(10回反応) AMV リバーストランスクリプターゼ バッファー AMV リバーストランスクリプターゼ 1,4-ジチオスレイトール RNaseインヒビター オリゴ (dT)15 プライマー オリゴ [(dT24)T7promotor]65 プライマー dNTP ミクスチャー コントロール neo mRNA 第二鎖合成バッファー DNA ポリメラーゼ I、 リガーゼ、RNase Hのミクスチャー DNA ポリメラーゼ 再蒸留水 RNaseⅠ プロティナーゼ K 希望販売価格 ¥71,000 500μl 20μl 1 ml 10 ml 20μl 20μl 110μl 25μl 500μl 65μl 200μl 1 ml 15μl 50μl リアルタイムPCRとRT-PCR用製品と機器に関する 情報は、388ページをご覧ください。 486 免責条項 528ページのno. 20を参照ください。 新着情報・製品説明書は(研究用試薬・機器専用)ホームページ http://www.roche-biochem.jpを ご覧ください。 PCR/RT-PCR 2ステップRT-PCR用製品 エキスパンド リバーストランスクリプターゼ Expand Reverse Transcriptase 抽出源：リコンビナント、 製品番号 11 785 826 001 包装単位 1000 U 11 785 834 001 5000 U 5 希望販売価格 ¥13,700 AP401 (k) ¥59,100 アプリケーション 本酵素は特にRT-PCRに適しており、ヒトジストロフィンRNAか らの13.5 kbまでのcDNA断片の増幅を可能とします(エキスパンド リバーストランスクリプターゼとエキスパンド ロングテンプレート PCRシステムを用いて)。cDNAのシークエンスの分析と、ゲノムシー 13482 11962 9511 クエンスの配列との比較により、interventingシークエンス(イントロ 7678 ン)とゲノムの組換えにおいて、重要な情報が得られます。エキスパン 5893 ド リバーストランスクリプターゼは、RT-PCR、cDNAライブラリー 反応のプライマーとしては次の3種が典型的です。 1. Oligo-dTプライマー −全長cDNAの作成に。 2. ランダムヘキサヌクレオチドプライマー −すべてのRNAポピュ 1857 レーションの逆転写で最大の結果を得るために。 PCR/RT-PCR 4041 の構築、5'/3' RACEテクノロジーへの応用に適しています。逆転写 3. 特異的オリゴヌクレオチドプライマー −対象mRNAの選択的プラ イミングに。 背景情報 リバーストランスクリプターゼ( )はRNAをテンプ レートとするDNAポリメラーゼで、プライミングヌクレオチド断片 の3'-末端を伸長します。この酵素活性はRNA/DNAのハイブリッド を作成し、その作成されたDNAはファーストストランドとして、相 補的DNA(cDNA)に参照されます。このcDNAはライブラリーの作 成、PCR、その他の応用に使用できます。また酵素はプライムド一本 鎖を最初のテンプレートとして使用することもできます。エキスパン ド リバーストランスクリプターゼは、Moloney Murine Leucaemia 図 エキスパンド リバーストランスクリプターゼとエキスパンド ロングテンプレート PCRシステムを用いての、ヒトジストロフィンRNAからの13.5 kbまでのcDNA断片 の増幅。逆転写はPCR反応から5μlを使用し、1μgのヒト筋トータルRNAで行った。 17μlの増幅液をゲル電気泳動で分離した。 レーン1：DNA MWMⅡ レーン2：DNA MWMⅩ レーン3：1857 bp レーン4：4041 bp レーン5：5893 bp レーン6：7678 bp レーン7：9511 bp レーン8：11962 bp レーン9：13482 bp Virusリバーストランスクリプターゼ(M-MuLV-RT)を遺伝子工学的に 夾雑物の不含 多種の核酸とのインキュベーションにおいて、非特異的なDNase、 RNaseは検出されない(ゲル電気泳動による分析)。 PCR 改変したものです。RNase Hのポイントミューテーションにより、そ の酵素活性は検出感度以下となっています。 機能試験 エキスパンド リバーストランスクリプターゼはヒト筋トータル RNAと、ジストロフィン特異的プライマーでのRT-PCRで機能試験済 み。30サイクル後、9530フラグメントがゲル上、エチジウムブロミ ドで検出可能。 内 容 1. 保存バッファー 2. ファーストストランドcDNA合成バッファー 3. DTTストック溶液、100mM 487 新着情報・製品説明書は(研究用試薬・機器専用)ホームページ http://www.roche-biochem.jpを ご覧ください。 5 PCR/RT-PCR 2ステップRT-PCR用製品 Reverse Transcriptase M-MuLV 製品番号 11 062 603 001 アプリケーション 特 徴 リバーストランスクリプターゼ M-MuLV M-MuLVリ バ ー ス ト ラ ン ス ク リ プ タ ー ゼ は 特 異 的RNA配 列 の cDNA転写産物の 合成や、cDNAライブラリーの調製、RT- 希望販売価格 ¥32,700 trp E geneとMoloney Murine Leukaemia Virus pol geneが発現した融合タンパクより製造 PCRでのファーストストランドcDNA合成に用いられます。またクレ 形 状 : Tris-HCl、50mM pH8.4(4 ℃ ) ; NaCl、100mM ; DTT、 ノーエンザイムの代わりに、ダイデオキシシークエンス反応で用いら 10mM ; ポリドカノール、0.05％ (v/v) ; EDTA 1mM ; glycerol、 れます。リバーストランスクリプターゼは、クレノーエンザイムでは 50％ (v/v) の溶液に溶解 困難なGC-リッチ部分も合成します。 比活性 : 約20×103units/ml、40×103units/mg。1Uはpoly(A)・ M-MuLVリバーストランスクリプターゼはM-MuLV pol遺伝子の中 央部位と PCR/RT-PCR 抽出源 : 包装単位 500 U trpE 遺伝子との融合の結果であるクローン酵素とし (dT)15を基質として37℃、10分間に1.0nmolの〔3H〕-dTMPを酸 不溶性分画に取り込む酵素活性 て製造されました。本酵素はプライマーの存在下、一本鎖RNAある 共存酵素活性 : エンドヌクレアーゼ、リボヌクレアーゼの活性は含ま いはDNAをテンプレートとして相補的DNA鎖を合成するRNA依存性 れない DNAポリメラーゼです。AMVトランスクリプターゼと比較して、エン ロット毎の分析値は能書に記載 ドヌクレアーゼ活性を欠き、RNase H活性も大変低いです。大きな SDS-PAGEでの純度 : クーマシーブルー染色で71kDの単一バンドが mRNAの完全長コピーが得られます。(RT-PCR用のmRNAの1チュー 見られる ブ分離にはmRNAキャプチャーキット、144ページをご覧ください。) 機能試験 : cDNA合成キットで試験済み RNAの保護にはプロテクター RNase インヒビター、 490ページをご覧ください。 リアルタイムPCRとRT-PCR用製品と機器に関する 情報は、388ページをご覧ください。 Reverse Transcriptase AMV 製品番号 10 109 118 001 アプリケーション 特 徴 ファーストおよびセカンドストランドｃDNA合成（ 486ページ のcDNA Synthesis Kitにも含まれていますのでご覧ください）また ユニット定義 : １ユニットは、鋳型・プライマーとしてポリ(Ａ)･ｄ(p はジデオキシDNAシークエンシング用。この酵素はプライマー伸長反 nmolを取り込む酵素活性とします。 応、RNAシークエンシング、DNA断片の3'-末端標識、ハイブリダイ 保 存 バ ッ フ ァ ー : 200ｍ Ｍ リ ン 酸 カ リ ウ ム、2ｍ Ｍ DTT、0.2 ％ ゼーションおよびゲノムフットプリンティング実験に用いる１重鎖プ Triton®X-100(v/v)、50％グリセロール（v/v）、pH7.2 ローブの作製に使用することができます。 比活性 : ＞50000ユニット／ mg( >20-25x103units/ml) PCR リバーストランスクリプターゼ AMV AMV(Avian Myeloblastosis Virus)リバースクリプターゼはRNA 依存DNAポリメラーゼそしてDNA依存DNAポリメラーゼです。 DNA依存DNAポリメラーゼ活性はアクチノマイシンＤの添加で阻 害することができます。この酵素は付加的な固有のRNaseＨ活性と 包装単位 1000 U 希望販売価格 ¥82,400 Ｔ)15を用いるときに、37℃ 10分間に酸沈殿生産物に[3Ｈ]-dTMP１ 爽雑活性 : 多くの核酸とのインキュベーションで非特異的なDNase、 RNaseの不含をチェック(ゲル電気泳動で分析) 機能試験 : cDNA合成キットとRT-PCRで機能試験済み 起源 : Avian Myeloblastosis Virus（AMV） シングルストランド結合タンパク質に起因する正常な巻き戻し活性か らなる異種２量体です。この酵素はポリメラーゼ活性と、エクソヌク レアーゼの様式でDNA：RNAハイブリッドのRNAを分解することだ けができるRNaseＨ活性の両方をもちます。RNaseＨのエクソヌクレ アーゼ活性は5'-または3'-末端のいずれからも作用することができます が、共有結合的に結合した２重鎖閉環状RNAには作用することができ RNAの保護にはプロテクター RNase インヒビター、 490ページをご覧ください。 リアルタイムPCRとRT-PCR用製品と機器に関する 情報は、388ページをご覧ください。 ません。 AMVリバースクリプターゼは活性を示すためにはMg2+またはMn2+ と同様にプライマーが必要です。プライマーが８ヌクレオチド以上の 長さのときに効果的にプライマーが働きます。 RT-PCRの た め のmRNAの シ ン グ ル チ ュ ー ブ 分 離 に は144ペ ー ジのmRNAキャプチャーキット、或いは493ページのタイタンワン チューブRT-PCRシステムをご覧ください。 488 新着情報・製品説明書は(研究用試薬・機器専用)ホームページ http://www.roche-biochem.jpを ご覧ください。 PCR/RT-PCR 2ステップRT-PCR用製品 5'/3' RACE キット、2nd ジェネレーション 5'/3' RACE Kit, 2nd generation 製品番号 03 353 621 001 包装単位 1 キット(10 回反応) 5 希望販売価格 ¥69,600 トランスクリプターとリコンビナントTdTを含む アプリケーション ■RNA分子の構造と発現研究 ■全長cDNAの作成 ■少量のmRNAからの3'および5'末端の特性研究 ■希少なmRNAの増幅とクローニング ■エクソントラッピング法との組み合わせでの使用 ■RACE反応産物は、クローニング操作の必要なく直接シークエンス が可能 ■ 簡単に高性能が トランスクリプター リバーストラン スクリプターゼは困難な二次構造部位も成功させる。 ■ 簡便 1キットでRNAの5'、3'末端の機能と構造研究 が可能。 ■ 信頼性 リコンビナント ターミナルトランスフェラー ゼによるcDNAのdAテイリングは不適切なトランケー ションの可能性を減少させます。 ■ 再現性 3'dTでないオリゴ dT-アンカープライマーに より、poly(A)テイルの内側末端に正確に結合するこ とを保証。 PCR/RT-PCR 5'/3' RACE キットの利点 図１. 1 2 3 4 5 6 全長のcDNAを得ることは構造や発現研究に大変重要です。決定された 内部部位とmRNAの3'末端あるいは5'末端の間の、メッセンジャー RNA テ ン プ レ ー ト か ら のDNA配 列 の 増 幅 はRACE(rapid amplification of cDNA ends)、"アンカード" PCR、"one-sided" PCRと呼ばれます。 トランスクリプター リバーストランスクリプターゼがキット内に含ま れますが、他のリバーストランスクリプターゼに比べて熱安定性と、14 kbまでの長いmRNAの逆転写の可能性が高まっています。それゆえ、イ ンキュベーション温度を55℃まで上昇でき、困難なRNA二次構造の部位 を通過して逆転写が進みます。この結果は、厳しい条件下での効率的な cDNA合成となります。ファーストストランドcDNAの精製はハイピュ ア PCR Product Purification Kitを用いて行ないます。ターミナルトラ ンスフェラーゼはcDNAの3'末端にポリA-テイルを付加するために使用さ れます。ポリ(A)テイルの使用はオリゴ dT-アンカープライマーによる不 適切な裁断の可能性を減らし、G/C結合に比べA/T結合がより弱いため、 オリゴ dT-アンカープライマーが内部部位に結合し増幅産物を裁断する前 に、A-残基のより長い連なりが必要とされます。 テイルされたcDNAは遺伝子特異的プライマーとオリゴ dT-アンカープ ライマーを用いてPCRにより増幅されます。得られたcDNAはネステッ ド特異的プライマーとPCRアンカープライマーを用いてのセカンドPCR で更に増幅されます。結果として、RACE産物はその後の特性研究のため に適切なベクターにクローンできます。 機能試験 コントロール反応は次のものを含む：コントロールプライマー neo 1/revを用いてのコントロールRNAのファーストストランドcDNAへの転 写。コントロールプライマー neo 2/revとneo 3/forを用いての、157 bp PCR産物が得られるcDNAの増幅。精製cDNAのdATPでのテイリン グ。234 bp PCR 産物が得られる、テイルドcDNAのオリゴ dT-アンカー プライマーとコントロールプライマー neo 2/revでの増幅。 図２. 異なるRNAを用いての 5'RACE産物のアガロースゲル分析 レーン1+6：分子量マーカー、レーン2：コントロール RNAの増幅、レーン3：コラー ゲンの増幅、レーン4：TFR(トランスフェリンレセプター遺伝子)の増幅、レーン5： β-アクチンの増幅 レーン2：1 ngのコントロール RNAを2μgのトータル RNAに加えファーストストラ ンド cDNA合成のテンプレートとして用いた。テイルドcDNAはオリゴ dT-アンカー プライマーとneo2/revプライマーで35サイクル増幅した。 レーン3-5：2.5μgのヒト肝臓トータル RNAを特異的プライマー 1によりファースト ストランド cDNA合成のテンプレートとして用いた。テイルドcDNAはオリゴ dT-ア ンカープライマーと特異的ネステッドプライマー SP2で30サイクル増幅した。1μl のPCR産物を特異的ネステッドプライマー SP3とPCRアンカープライマーを用いて の30サイクルのセカンドPCRで更に増幅した。 PCR 背景情報 内 容 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. cDNA合成バッファー トランスクリプター リバーストランスクリプターゼ デオキシヌクレオチドミックス dATP 反応バッファー リコンビナント ターミナルトランスフェラーゼ コントロール RNA オリゴ dT-アンカープライマー PCR アンカープライマー コントロールプライマー neo 1/rev コントロールプライマー neo 2/rev コントロールプライマー neo 3/for 100μl 10μl 50μl 30μl 1000μl 10μl 20μl 40μl 40μl 40μl 40μl 40μl *ハイピュア PCR Product Purification Kit (Cat.No. 11 732 668 001)が別途必要とな ります。 新着情報・製品説明書は(研究用試薬・機器専用)ホームページ http://www.roche-biochem.jpを ご覧ください。 489 5 PCR/RT-PCR 2ステップRT-PCR用製品 その他の試薬 プロテクター RNaseインヒビター Protector RNase Inhibitor 製品番号 03 335 399 001 包装単位 2,000 U 03 335 402 001 5×2000 U 希望販売価格 ¥25,900 リコンビナント、ラット肺由来 ¥104,400 アプリケーション プロテクター RNaseインヒビターの分子量は約50 kDです。こ のインヒビターは厳しい変性条件下で失活します(65℃以上の温度)。 これは、RT-PCR(AMVリバーストランスクリプターゼ、タイタン1 チューブRT-PCRシステム、cDNA合成システム、Taq DNAポリメ ラーゼ、ファストスタートTaq DNAポリメラーゼ、エキスパンド ハ イファイPCRシステムによる)、 トランスクリプション／トラ PCR/RT-PCR ンスレーションシステム、ライトサイクラーによるRT-PCRには、干 渉や阻害をしません。 次のRNaseがプロテクターにより阻害されます(20μlの反応液に 20 Uのプロテクターを添加)： RNaseのタイプ RNase A RNase B RNase T2 阻害される量 1 ngまで 160 ngまで 0.03 U/μlまで 図1. プロテクター RNaseインヒビターを使用したRNase Aによる分解からのRNAの保 護。MS2 RNA（2.5μg)を、様々な量のRNaseを含む20μlの反応液中でインキュベー ションした。次のゲル電気泳動は、プロテクター RNaseインヒビターが1 ng/20μl の高レベルでRNase Aを阻害したことを明らかにした。 背景情報 特 徴 プロテクター RNaseインヒビターは、cDNA合成、RT-PCR、定量 保存バッファー : 20 mM Hepes-KOH、50 mM KCl、8 mM RT-PCR(ライトサイクラーによる)、 DTT、50% グリセロール(v/v)、pH約7.6(4℃ )。 トランスレーションシステム、RNaseプロテクションアッセイ、 容量活性 : 40 U/μl トランスクリプション／ ウイルス複製、RNaseフリーの抗体調製でのmRNAの保護に使 ユニット定義 : 1Uは5 ngのRNase A活性(環状シチジン-2':3'-一リン 用されます。RNaseが潜在的に問題となるすべてのアプリケーション 酸の分解の阻害による、Blackburnに従って測定された活性)の50% に有用です。 を阻害するために必要とされます。 夾雑物の不含 : 様々な核酸とインキュベートし、エンドヌクレアーゼ、 RNase、DNAニッキング活性の不含が試験済み(ゲル電気泳動で分 析)。 SDS-ポリアクリルアミドゲル電気泳動での純度 : クマシーブルー染色 PCR で単一バンド。 リアルタイムPCRとRT-PCR用製品と機器に関する 情報は、388ページをご覧ください。 マイクロアレイアプリケーションに関する情報は、 363ページをご覧ください。 490 新着情報・製品説明書は(研究用試薬・機器専用)ホームページ http://www.roche-biochem.jpを ご覧ください。 PCR/RT-PCR 1ステップRT-PCR用製品 トランスクリプターワンステップ RT-PCR キット Transcriptor One-Step RT-PCR Kit ホットスタートワンステップ RT-PCR では、トランスクリプター逆 転写酵素、プロテクター RNase インヒビター、エクスパンドシステ ム酵素ミックス、ホットスタートバッファーを使用します。 製品番号 04 655 877 001 包装単位 1 キット（50 回反応用） 希望販売価格 ¥43,500 04 655 885 001 1 キット（150 回反応用） ¥111,000 5 製品概要 トランスクリプターワンステップ RT-PCR キットは、ワンステップ RT-PCR に必要なすべてのコンポーネント（プライマーおよびテンプ レートを除く）を提供します。50 回反応分のパックには、コントロー アプリケーション ル反応 10 回分が含まれています（コントロール RNA およびコント ロールプライマーミックス）。 転写 キットの RT-PCR 酵素ミックスには、4 つの異なる酵素が含まれ RNA、ウイルス RNA）の高速、高感度、かつ特異的なエンドポイン ています：トランスクリプター逆転写酵素は、高収量・高感度な逆転 ト RT-PCR 解析のために設計されています。革新的な反応バッファー 写反応を保証します。高温においても活性が維持されるプロテクター を含むキットは、高感度かつ高収量な逆転写を実現します。 RNase インヒビターは、逆転写においてテンプレートの保護を約束 プライマーを使用した RNA（トータル RNA、mRNA、 このキットは、以下のアプリケーションで最大 6.5 kb までの PCR 産 します。そして、Taq DNA ポリメラーゼおよびプルーフリーディン 物を産生する極めて感度の高いワンステップ RT-PCR を可能にします。 グポリメラーゼの混合であるエキスパンドシステムは、PCR における • RNA 転写レベルの定性的、半定量的、定量的解析 エラーを最小化し、高収量かつ高品質の PCR を実現します。 • RNA テンプレートの有無の判定 PCR/RT-PCR トランスクリプターワンステップ RT-PCR キットは、遺伝子特異的 RT-PCR 反応バッファーには、高品質の dNTP が含まれ、ホット • RNA 解析による遺伝子発現の定量化（例：ウイルスレベルの定量化） スタートシステムの性能を向上します。バッファーのユニークなホッ • 6.5 kb までの RNA のクローニング トスタートコンポーネントは、プライマーの非特異的な結合を防止す ワンステップ RT-PCR フォーマットは、反応ごとの差異を低減させ るため、低温でプライマーに結合して隔離します。他のコンポーネン ます。また、マニュアル操作ステップを最少化することでコンタミネー トは温度依存的に Mg に結合し、DNA の合成を阻害します。このバッ ションリスクを低減します。 ファーは、PCR と同様に逆転写反応時にも効果的です。 品 質 ■ 幅広い増幅範囲で高感度・高収量が得られます：トー タル RNA のわずか 1 fg、またはウイルス RNA のわ ずか 1 コピー（生体外転写産物）を検出することがで きます。 ■ 高い特異性が得られ、プライマーダイマーのリスクを 低減することができます：キットに含まれる独自の ホットスタートバッファーの優れた性能を利用するこ とができます。 ■ 長い PCR 断片を合成できます：最大 6.5 kb までの 転写産物を合成できます。 ■ GC-rich RNA などの最も反応が困難なテンプレート を含め、様々なテンプレートを転写することができま す：熱安定トランスクリプター逆転写酵素と最適化さ れたバッファーとの組み合わせで、高次構造を克服で きます。 ■ キットを使用することで、時間を短縮し、結果の品質 を向上することができます：予め混合された酵素およ び PCR グレード dNTP およびホットスタートコン ポーネントを含有する最適化されたバッファーを使用 することで、ピペッティングステップを最小化し、コ ンタミネーションを防止します。 ■ RNA サ ン プ ル を 分 解 か ら 保 護 し ま す： 熱 安 定 プ ロ テ ク タ ー RNase イ ン ヒ ビ タ ー を 使 用 す る こ と で RNase による分解から RNA を保護できます。この プロテクター RNase インヒビターは、他の RNase インヒビターが機能しないようなワンステップ RTPCR においても活性を示します。 ■ 結果の信頼性を高めます：付属のコントロール反応を使 用することで性能をモニタリングすることができます。 各ロットは RT-PCR で機能試験しています。RT-PCR は 1,000 コピーの HAV RNA を用いて行われます。コントロール反応のセット アップおよび 246 bp 断片の増幅は、スタンダードな RT-PCR プロ トコール（逆転写反応は 50℃、30 分間）に従いました。1,000 コピー から RT-PCR された RNA は、アガロースゲル電気泳動でエチジウム ブロマイド染色され明確なバンドを示しました。 さらに、ヒト肝臓トータル RNA の希釈系列（10 ng、1 ng、0.1 ng）を用いて RT-PCR を行いました。ApoB の 2.5 kb 断片の増幅は、 スタンダードな RT-PCR プロトコール（逆転写反応は 50℃、30 分間） に従いました。1 ng から RT-PCR された RNA は、アガロースゲル PCR 利点 電気泳動でエチジウムブロマイド染色され明確なバンドを示しました。 反応が困難なテンプレートでも高感度で転写できます。様々な量の HeLa トー タル RNA（最低 1 fg）をトランスクリプターワンステップ RT-PCR キット で逆転写しました。389 bp 断片（GC 含量 64%）は、キットの標準 RTPCR プロトコール（50℃で 30 分間の逆転写）にしたがって、ヒト 28S リ ボソーム RNA 用プライマーで増幅されました。アガロースゲル電気泳動およ びエチジウムブロマイド染色後の明瞭なバンドにみられる通り、ごくわずかな 量（1 fg）のテンプレートを高感度で転写できます。 491 アプリケーション、プロトコール、製品、マニュアルについてのより詳しい情報は、 www.roche-biochem.jp を参照ください。 PCR/RT-PCR 5 PCR/RT-PCR 1ステップRT-PCR用製品 トランスクリプターワンステップ RT-PCR キットを使用することで、高感度・ 特異性が得られます。ヒト ApoB の 2.5 kb 断片をトランスクリプターワン ステップ RT-PCR キットを使用して、または他社のワンステップ RT-PCR キット（キット Q、S、および T）を推奨される反応条件で使用して増幅しま した。その結果、他社のキットと比較して、トランスクリプターワンステッ プ RT-PCR キットが様々な量のサンプルをより高感度・特異性で効率的に増 幅することがわかります。 6.5 kb 断片の増幅。様々な量のトータル RNA やウイルス RNA を添付書 に 従 い RT-PCR し ま し た。106 コ ピ ー の HAV RNA（264 pb） ；組織や K-562 細 胞 由 来 の 10 ng の RNA（139 bp、387 bp、597 bp、1.8 kb）; 組 織 や HeLa 細 胞 由 来 の 100 ng の RNA（2.5 kb、3.6 kb、6.3 kb）。全ての RT-PCR で明確なバンドを示しました。 製品構成 1. RT-PCR Enzyme Mix containing Transcriptor Reverse Transcriptase, Protector RNase Inhibitor, and the Expand System 2. RT-PCR Reaction Buffer containing hot start mediating components and dNTPs ‒ 5x concentrated 3. Water, PCR-grade 4. Control RNA ‒ HAV RNA, transcript ＊ ＊ 5. Control primer mix HAV RNA（forward and reverse primer） PCR ＊ 50 回反応分のみに含まれます。 492 アプリケーション、プロトコール、製品、マニュアルについてのより詳しい情報は、 www.roche-biochem.jp を参照ください。 PCR/RT-PCR 1ステップRT-PCR用製品 タイタン ワンチューブRT-PCRシステム Titan One Tube RT-PCR System 製品番号 11 855 476 001 包装単位 100回反応 5 希望販売価格 ¥75,200 エキスパンド ハイフィディリティ酵素ブレンドを利用したワン チューブRT-PCR技術 アプリケーション タイタン ワンチューブRT-PCRシステムは高い信頼性で、RNAの 高感度、迅速、高い正確性での分析のためにデザインされています。 ワンチューブ反応システムはRNAからcDNAへ逆転写(AMVリバース トランスクリプターゼ)し、cDNAを熱サイクリング反応で増幅(エキ スパンド ハイフィディリティ PCRシステムよりの至適酵素ブレンド を用いる)します。RT-PCRに使用するプライマーに依存して、特異的 メッセンジャーあるいは転写産物のすべてのポピュレーションが増幅 PCR/RT-PCR されます。RT-PCR法は、またcDNAライブラリーを構築することなく 希なメッセンジャーをクローニングする事ができます。 背景情報 逆転写とポリメラーゼチェインリアクションを組み合わせた方法 (RT-PCR)は、RNAテンプレートの存在／不在の測定や、RNA分析 を通じての遺伝子発現のレベルを定量化する際のもっとも高感度な 技術です。コンタミネーションを防ぎ、全長の転写産物を得る事が この技術の最終目標です。タイタン ワンチューブRT-PCRシステム 図. は、一つのバッファーと耐熱性DNAポリメラーゼのブレンド(エキス パンドPCRシステムより)で作動するよう至適化されており、この困 難な課題を解決しました。タイタン ワンチューブRT-PCRシステムは mRNAから増幅DNA断片への至適な変換を可能にした最先端のキッ トで、実験的な限界を克服するもっとも先進的な技術を採用していま す。現在まで、ツーステップRT-PCRを含むRT-PCRの為のオプショ ンは、順次的反応と至適な酵素バッファーを分けた形で行われていま した。これら追加のステップはコンタミネーションの危険を増加させ タイタン ワンチューブRT-PCRシステムでの多種のRT-PCR産物の増幅。RT-PCRは 50℃でのcDNA合成と35PCRサイクルで行われた。15μlを取り、1% アガロース ゲルで分析した。cDNA合成は、もし必要ならRNAの二次構造を除去するため60℃で も行える。 レーン1、14： DNA MWM VII レーン2、13： DNA MWM VI レーン3： 980 bp G3PDH(10 ngヒト肝トータルRNA) レーン4： 324 bpβ-アクチン(1 ngヒト肝トータルRNA) レーン5： 530 bp MCAD(10 ngヒト肝トータルRNA) レーン6、7： 1.9及び4 kbジストロフィン(10 ngヒト筋トータルRNA) レーン8、9： 1 kb及び419 bp PSMA(100 ng LNCaP細胞株由来トータルRNA) レーン10： 145 bp HCV(約5000コピー ) レーン11： 391 bp インターロイキン-1β(500 ngヒト全血トータルRNA) レーン12： 192 bp M-CSF(100 ngヒト肝トータルRNA) る、望ましくないものでした。ワンステップ(ワンチューブ)RT-PCR ターゼとTaq DNAポリメラーゼの組み合わせで達成される他の別法 となっています。 しかしこれらのオプションも同様の限界があります。Tthポリメラー 内 容 1. 2. 3. 4. 酵素ミックス RT-PCR反応バッファー MgCl2溶液 DTT溶液 ゼはその高いエラー率と小さな増幅産物(1 kb)のために結果産物に 影響を与えます。一般的に使用されるAMV/Taqの組み合わせは、 cDNA反応(42℃ )において温度的な限界を持ちます。この温度では RNAに関連するヘアピンループが残り、完全長の逆転写を阻害します。 タイタン ワンチューブRT-PCRシステムは、一種類の至適反応バッ ファーと至適な性能を示す酵素のブレンドにより、これらの障害を克 服しました。ワンチューブは、最小限の操作ステップ(最も低い、コン タミネーションの危険性)を意味し、エキスパンドPCRシステムの耐熱 性酵素ブレンドはより高い信頼性(低エラー率)とより長い断片(6 kbま リアルタイムPCRとRT-PCR用製品と機器に関する 情報は、388ページをご覧ください。 タイタン ワンチューブRT-PCRシステム酵素ブレン ドはRT-PCR用キット中でも入手可能、494ページ をご覧ください。 RNAの保護にはプロテクター RNase インヒビター、 490ページをご覧ください。 PCR はTth DNAポリメラーゼで、あるいはAMVリバーストランスクリプ で)を可能とします。エキスパンドPCRシステムは増幅を行うためにプ ルーフリーディング活性をもつ酵素とTaq DNAポリメラーゼを応用し ています。この強力な酵素ブレンドは、Taq DNAポリメラーゼ単独と 免責条項 526ページのno. 1を参照ください。 比較して、3倍の正確性を得られるように至適化されています。 機能試験 タイタン ワンチューブRT-PCRシステムは、それぞれ異なる量のマ ウス肝トータルRNA(50、10、5、1、0.5、0.1 ng)とβ-アクチン に特異的なプライマーを用いて機能試験済みです。プロトコールに従 い30分のcDNA合成(50℃)と35サイクルのPCRの後、0.05 ngの RNAよりアガロースゲル電気泳動とエチジゥムブロマイド染色で明瞭 に観察される324 bpの断片が得られます。 493 新着情報・製品説明書は(研究用試薬・機器専用)ホームページ http://www.roche-biochem.jpを ご覧ください。 5 PCR/RT-PCR 1ステップRT-PCR用製品 タイタン ワンチューブRT-PCRキット Titan One Tube RT-PCR Kit 製品番号 11 939 823 001 包装単位 50回反応 希望販売価格 ¥48,300 エキスパンド ハイフィディリティ酵素ブレンドとAMVリバース トランスクリプターゼの酵素ミックスをを利用したワンチューブ RT-PCR技術用 アプリケーション タイタン ワンチューブRT-PCRキットは高い信頼性で、RNAの高 感度、迅速、高い正確性での分析のためにデザインされています。ワ ンチューブ反応システムはRNAからcDNAへ逆転写(AMVリバース トランスクリプターゼ)し、cDNAを熱サイクリング反応で増幅(エキ スパンド ハイフィディリティ PCRシステムよりの至適酵素ブレンド を用いる)します。RT-PCRに使用するプライマーに依存して、特異的 PCR/RT-PCR メッセンジャーあるいは転写産物のすべてのポピュレーションが増幅 されます。RT-PCR法は、またcDNAライブラリーを構築することなく 希なメッセンジャーをクローニングする事ができます。 背景情報 逆転写とポリメラーゼチェインリアクションを組み合わせた方法(RTPCR)は、RNAテンプレートの存在／不在の測定や、RNA分析を通じて の遺伝子発現のレベルの定量化におけるもっとも高感度な技術です。コ ンタミネーションを防ぎ、全長の転写産物を得る事がこの技術の最終目 図. 標です。タイタン ワンチューブRT-PCRシステムは、一つのバッファー と耐熱性DNAポリメラーゼのブレンド(エキスパンドPCRシステムより) で作動するよう至適化されており、この困難な課題を解決しました。タ イタン ワンチューブRT-PCRシステムとタイタン ワンチューブRT-PCR キットはmRNAから増幅DNA断片への至適な変換を可能にした、実験的 な限界を克服するもっとも先進的な技術を採用しています。現在まで、 ツーステップRT-PCRを含むRT-PCRの為のオプションは、順次的反応 と至適な酵素バッファーを分けた形で行われていました。これら追加の ステップはコンタミネーションの危険を増加させる、望ましくないもの でした。ワンステップ(ワンチューブ)RT-PCRはTth DNAポリメラー ゼで、あるいはAMVリバーストランスクリプターゼとTaq DNAポリメ ラーゼの組み合わせで達成される他の別法となっています。 PCR しかしこれらのオプションも同様の限界があります。 Tthポリメラーゼ はその高いエラー率と小さな増幅産物(1 kb)のために結果に影響を与え ます。一般的に使用されるAMV/Taqの組み合わせは、cDNA反応(42℃) において温度的な限界を持ちます。この温度ではRNAに関連するヘアピ ンループが残り、完全長の逆転写を阻害します。タイタン ワンチュー タイタン ワンチューブRT-PCRシステムでの多種のRT-PCR産物の増幅。RT-PCRは 50℃でのcDNA合成と35PCRサイクルで行われた。15μlを取り、1% アガロース ゲルで分析した。cDNA合成は、もし必要ならRNAの二次構造を除去するため60℃で も行える。 レーン1、14： DNA MWM VII レーン2、13： DNA MWM VI レーン3： 980 bp G3PDH(10 ngヒト肝トータルRNA) レーン4： 324 bpβ-アクチン(1 ngヒト肝トータルRNA) レーン5： 530 bp MCAD(10 ngヒト肝トータルRNA) レーン6、7： 1.9及び4 kbジストロフィン(10 ngヒト筋トータルRNA) レーン8、9： 1 kb及び419 bp PSMA(100 ng LNCaP細胞株由来トータルRNA) レーン10： 145 bp HCV(約5000コピー ) レーン11： 391 bp インターロイキン-1β(500 ngヒト全血トータルRNA) レーン12： 192 bp M-CSF(100 ngヒト肝トータルRNA) 製品構成： 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. タイタン 酵素ミックス dNTPミックス RNaseインヒビター ヒトコントロールRNA コントロールプライマーミックス 再蒸留水、PCRグレード RT-PCR反応バッファー DTT溶液 MgCl2ストック溶液 50μl 200μl 50μl 50μl 20μl 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml ブRT-PCRシステムは、一種類の至適反応バッファーと至適な性能を示 す酵素のブレンドにより、これらの障害を克服しました。ワンチューブ 免責条項 は、最小限の操作ステップ(最も低い、コンタミネーションの危険性)を意 526ページのno. 1を参照ください。 味し、エキスパンド PCRシステムの耐熱性酵素ブレンドはより高い信頼 性(低エラー率)とより長い断片(6 kbまで)を可能とします。エキスパンド PCRシステムは増幅を行うためにブルーフリーディング活性をもつ酵素 とTaq DNAポリメラーゼを応用しています。この強力な酵素ブレンドは、 Taq DNAポリメラーゼ単独と比較して、3倍の正確性を得られるように 至適化されています。 (エキスパンドハイフィディリティ PCRシステムの より多くの情報は、506ページをご覧ください。 ) 機能試験 タ イ タ ン ワ ン チ ュ ー ブRT-PCRキ ッ ト は、 そ れ ぞ れ 異 な る 量 の K562細胞株由来トータルRNA(1、0.1、0.01 ng、2 pg)とβ-アク チンに特異的なプライマーを用いて機能試験済みです。プロトコール に従い30分のcDNA合成(50℃)と35サイクルのPCRの後、10 pg のRNAよりアガロースゲル電気泳動とエチジゥムブロミド染色で明瞭 494 に観察される324 bpの断片が得られます。 新着情報・製品説明書は(研究用試薬・機器専用)ホームページ http://www.roche-biochem.jpを ご覧ください。 PCR/RT-PCR 1ステップRT-PCR用製品 Tth DNAポリメラーゼ Tth DNA Polymerase 製品番号 11 480 022 001 包装単位 2×250 U 5 希望販売価格 ¥25,700 Thermus thermophilus HB8由来 耐熱性DNAポリメラーゼで逆転写酵素活性を有します。 背景情報 Tth DNAポリメラーゼはpolymerase chain reaction(PCR)によ るDNAフラグメントの増幅に使用されます。また修飾デオキシリボヌ Tth DNAポリメラーゼは好熱性真正細菌 HB8から単離され、非特異DNaseおよびRNaseフリーに精製され クレオチドを使用した、DNAフラグメントのラジオアクティブあるい ています。この酵素は高度に調製された5'-3'DNAポリメラーゼで、 はノンラジオアクティブ(ジゴキシゲニンやビオチン)標識にも応用さ 3'-5'エクソヌクレアーゼ活性を欠如しています。この酵素はpH約 れます。 9(25℃にて調整)および約75℃条件下で最大の活性を示します。Tth Mn-依存性RT活性は、ターゲットRNAを効率良くcDNAに転写す るために有効です。Tth DNAポリメラーゼは、RT活性が存在する温 DNAポリメラーゼは高温(95℃)条件下、長時間のインキュベーショ ンにおいても安定です。 度の範囲において、RNAの高度な二次構造に関連して生じる問題が Tth DNAポリメラーゼは、マグネシウムイオン存在下で非常に高い 克 服 さ れ ま す。 得 ら れ たcDNAはMg2+存 在 下、 同 じ 酵 素 のPCRに 逆転写酵素(RT)活性を示す酵素として発見されました。この酵素活性 よって増幅されます。Tth DNAポリメラーゼの高温下での逆転写活 は 性 お よ びDNA増 幅 活 性 に よ り、RT-PCR(reverse transcription/ もはるかに高いとされ、RNase Hの活性には関連しません。 DNAポリメラーゼ やTaq DNAポリメラーゼのもつ活性より polymerase chain reaction)、種々の検出、定量、クローニングお よびRNAレベルにおける遺伝子発現の解析に応用されます。Tth DNA ポリメラーゼは最小1000bpのRNAのRT-PCRに応用されます。 内 容 1. 2. 3. 4. Tth DNAポリメラーゼ PCRバッファー RT-PCRバッファー Mn(OAc)2 溶液 機能試験 PCR/RT-PCR アプリケーション Tth DNAポリメラーゼはロットごとに活性化DNAに対する活性を 試験されます。またλDNAやヒトジェノミックDNAについても機能 試験を行なっています。マウストータルRNAおよびβ-アクチン特異 プライマーを使用したRT-PCRにおける活性も試験されます。 Tth DNAポリメラーゼはロットごとにエンド-およびエクソヌクレ アーゼアッセイのコンタミネーションやニッキング活性についても試 験されます。特別なセルフプライミングアッセイにより混入(コンタミ ネーション)DNAがないことが確認されます。 リアルタイムPCRとRT-PCR用製品と機器に関する 情報は、388ページをご覧ください。 免責条項 PCR 526ページのno. 1を参照ください。 495 新着情報・製品説明書は(研究用試薬・機器専用)ホームページ http://www.roche-biochem.jpを ご覧ください。 5 PCR/RT-PCR PCR用酵素 製品番号 04 738 314 001 包装単位 100 U 希望販売価格 ¥8,700 04 738 357 001 2×250 U ¥42,500 04 738 381 001 4×250 U ¥80,000 04 738 403 001 10×250 U ¥179,400 04 738 420 001 20×250 U ¥333,100 FastStart Taq DNA Polymerase 製品番号 12 032 902 001 包装単位 100 U 希望販売価格 ¥12,000 ホットスタートPCRと3 kbまでのゲノムあるいはcDNAターゲッ トの増幅用熱活性化型ポリメラーゼ 12 032 929 001 2×250 U ¥52,800 12 032 937 001 4×250 U ¥103,400 12 032 945 001 10×250 U ¥219,000 12 032 953 001 20×250 U ¥395,900 ファストスタートTaq DNAポリメラーゼ(5 U/μl)、 dNTPack FastStart Taq DNA Polymerase, dNTPack ホットスタートPCRと3 kbまでのゲノムあるいはcDNAターゲッ トの増幅用熱活性化型ポリメラーゼ PCR/RT-PCR ファストスタート Taq DNAポリメラーゼ、5 U/μl PCR アプリケーション ファストスタートTaq DNAポリメラーゼはPCRのセットアップ間 や最初の変性ステップ前には不活性のため、ホットスタートPCRに対 する有用なツールです。低温では不活性のため、この温度で起こる非 特異的なプライマー -テンプレートハイブリッドを伸長できません。 ■3 kbまでのゲノムDNAとcDNAターゲットの高い特異性および感 度、収量での増幅 ■酵素は75℃まで活性を示さず、95℃での4分のインキュベーショ ンステップで活性化します。シングルコピーのターゲットDNAでも 増幅を可能とします。 ■酵素はまた修飾デオキシヌクレオチドも基質として受容しますので、 RIと同様にジゴキシゲニン、ビオチン、フルオレセインでのDNAフ ラグメントの標識に使用できます。 ■PCR間のキャリーオーバーの防止に、熱不安定性ウラシルDNAグ リコシラーゼと共に用いる事が出来ます。 ■添付のGC-リッチ溶液がファストスタートTaq DNAポリメラーゼによ る、二次構造や高いGC含量の困難なターゲットの増幅を可能にします。 ■マルチプレックスPCR ■室温での全自動PCRセットアップ 背景情報 ホットスタートPCRにおいて、ポリメラーゼ活性に必須の成分の少な くとも一つが、反応チューブ中の温度が至適なプライマーアニーリング 温度(通常55-65℃)に達するまで、反応ミックスから分離されます。ポ リメラーゼは不完全な反応ミックス中では機能できないため、プライマー が非特異的に結合できる時期の間は、プライマーの伸長がありません。 ホットスタートPCRはPCRの特異性、感度、収量を顕著に改善します。 ファストスタートTaq DNAポリメラーゼの特定のアミノ基への、 熱不安定性の阻害基の附加により、修飾酵素は室温では不活性になり ます。酵素はより高い温度、例えばPCR前の95℃で4分間のヒーティ ングステップ(インキュベーション)で活性化します。 内 容 496 1. 2. 3. 4. 5. 6. ファストスタートTaq DNAポリメラーゼ(5 U/μl) MgCl2含有PCRバッファー MgCl2不含PCRバッファー MgCl2ストック溶液 GC-RICH溶液 PCRグレードヌクレオチドミックス(dNTPackのみに含まれます。) 図1. 市販のホットスタートシステムを使用しての特異性と感度の比較。tPA遺伝子の130 bpフラグメントを増幅するために様々な量のヒトゲノムDNAを使用した。使用には各 メーカーの推奨する製品の活性化温度を使用した。A: ファストスタートTaq DNAポリ メラーゼ B: Taq DNAポリメラーゼ C: サプライヤー Aの修飾ホットスタートポリメ ラーゼ、バッファーⅡ D: サプライヤー Bの抗体-修飾ホットスタートポリメラーゼ。 結果：ファストスタートTaq DNAポリメラーゼにより、ごく少量のテンプレートから でも高い特異性と感度が得られた。 機能試験 各ロットは、ゲノムDNAを開始サンプルとしての希釈系列を使用して機 能試験されています。ヒトtPA遺伝子(シングルコピージーン)からの365 bpフラグメントを特異的tPAプライマーで増幅します。エチジゥムブロミ ド染色の後、50 pgのヒトゲノムDNAからの40サイクル増幅の365 bp PCRフラグメントが、1％アガロースゲルで再現性良く検出されます。 その上、スタンダード条件でのPCRアッセイが、ApoE遺伝子(74％ GC含量)に特異的なプライマーと200 ngのヒトゲノムDNAで、GCリッチ溶液を使用して行われます。30サイクル後、PCR産物は単一 の特異的なバンドとして検出されます。 ファストスタートTaq DNAポリメラーゼの各ロットは、エキソ-お よびエンドヌクレアーゼやニッキング活性などの夾雑活性の不含が試 験されています。 免責条項 529ページのno. 49を参照ください。 新着情報・製品説明書は(研究用試薬・機器専用)ホームページ http://www.roche-biochem.jpを ご覧ください。 PCR/RT-PCR PCR用酵素 製品番号 04 738 284 001 包装単位 125 U 希望販売価格 ¥11,300 5 kbまでのDNAフラグメントの高正確性のホットスタートPCRを 行うためのファストスタートTaq DNAポリメラーゼとプルーフ リーディング活性を持つ蛋白質のブレンド 04 738 292 001 2×250 U ¥41,000 ファストスタート ハイフィディリティ PCRシステム 製品番号 03 553 400 001 包装単位 2×250 U 希望販売価格 ¥45,400 5 kbまでのDNAフラグメントの高正確性のホットスタートPCRを 行うためのファストスタートTaq DNAポリメラーゼとプルーフ リーディング活性を持つ蛋白質のブレンド 03 553 361 001 10×250 U ¥198,900 アプリケーション 機能試験 ファストスタート ハイフィディリティ PCRシステム、 dNTPack 5 FastStart High Fidelity PCR System ファストスタート ハイフィディリティ PCRシステムは、特に以下 品質管理は、ヒトゲノムDNAとEPO遺伝子の1.8 kbフラグメント での使用に有用です。 とtPA遺伝子の4.8 kbフラグメントに特異的なプライマーを使用し ■特異性、感度、収量を必要とされるPCR。 て、ルーチン的に行われています。 PCR/RT-PCR FastStart High Fidelity PCR System, dNTPack ■低発現遺伝子の検出やわずかなサンプルからのPCR。 ■マルチプレックスPCR。 ■室温でPCRセットアップのピペッティングを実行するロボットシス テムとの組み合わせでの使用。 ■RI及びNon-RI標識ヌクレオチドでのDNAフラグメントの効率的な 標識。 成分は至適化を必要とするすべてのアプリケーションに最大の柔軟 性を提供します。 図1. 背景情報 ファストスタート ハイフィディリティ PCRシステムは、化学的に tPA遺伝子の4.8 kbフラグメントを増幅するために様々な量のヒトゲノムDNAを使用 した。 結果：他のサプライヤーの酵素に比べ、ファストスタートハイフィディリティ PCRシ ステムは優れた感度と特異性を示した。 メラーゼ)と、プルーフリーディング活性を持つがDNAポリメラーゼ 内 容 活性は持たない熱安定性のプルーフリーディングタンパク質を含んで 1. 2. 3. 4. 5. 6. います。 この酵素ブレンドは、75℃以下では不活性で、PCRのセットアッ ファストスタートハイフィディリティ酵素(5 U/μl) MgCl2含有ファストスタートハイフィディリティ反応バッファー MgCl2不含ファストスタートハイフィディリティ反応バッファー MgCl2ストック溶液 DMSO PCRグレードヌクレオチドミックス(dNTPackのみに含まれます。) PCR 修飾されたTaq DNAポリメラーゼ(ファストスタートTaq DNAポリ プ過程で形成される非特異的なテンプレート-プライマーハイブリッド を伸長させません。95℃での2分間のインキュベーションを通じての 活性化後、ファストスタートTaq DNAポリメラーゼの伸長性と、プ 免責条項 529ページのno. 49を参照ください。 ルーフリーディングタンパク質の能力が組み合わされ、5 kbまでの DNAやcDNAの、ホットスタート増幅を保証します： ■高い特異性、感度と収量(図1) ■Taq DNAポリメラーゼやファストスタートTaq DNAポリメラーゼ の約5倍の正確性 497 新着情報・製品説明書は(研究用試薬・機器専用)ホームページ http://www.roche-biochem.jpを ご覧ください。 5 PCR/RT-PCR PCR用酵素 GC-リッチPCRシステム、dNTPack GC-RICH PCR System, dNTPack 製品番号 04 743 784 001 包装単位 100 U 希望販売価格 ¥24,400 製品番号 12 140 306 001 包装単位 100 U 希望販売価格 ¥24,900 GC-リッチ核酸の増幅用 GC-リッチ PCRシステム GC-RICH PCR System GC-リッチ核酸の増幅用 アプリケーション GC-リッチPCRシステムには、困難なPCR分析を行うための酵素 ミックス、反応バッファー、PCRグレード蒸留水などの試薬が含まれ ます。5 kb長までの困難なGC-リッチターゲットの増幅を効率的に行 PCR/RT-PCR うだけでなく、色々なGC含量の核酸の混合物を均一に増幅(マルチプ レックスPCRやランダムライブラリーの構築)するようデザインされ ています。また通常のPCRでの使用も可能で、Taq DNAポリメラー ゼ単独よりも収量や信頼性が高くなります。 背景情報 酵素ミックス(Taq DNAポリメラーゼとプルーフリーディング活性 を持つポリメラーゼの組合せ)は、より長い核酸フラグメントの増幅に 図1. 新たな扉を開きました。 GC-リッチ PCRシステムは、2種類の耐熱性ポリメラーゼである GC-リッチPCRシステムとエキスパンド ハイフィディリティ PCRシステムによるヒ トApoE遺伝子の264 bpフラグメント(GC含量74%)の増幅。 結果：GC-リッチPCRシステムとGC-リッチ高分離能溶液の組合せは高い特異性と収 量でフラグメントを増幅した。 Taq DNAポリメラーゼとTgo DNAポリメラーゼのユニークな混合物 です。GC-リッチ核酸の増幅と同様に色々なGC含量の核酸の混合物を 品質管理 均一に増幅することは、しばしば時間がかかり多くの問題があります。 GC-リッチPCRシステムは、そのプロトコールに従いヒトゲノム DMSO、ホルムアミド、グリセロール、TMAC、7-deaza-dGTPな DNAからのTGF-β遺伝子の1.5 kbフラグメントの増幅で機能試験さ どの試薬が、塩基のペアリングの分裂やDNAの平衡安定化に用いられ れています。 ます。GC-リッチPCRシステムは特殊な反応バッファーと高分離能溶 液を含み、困難なテンプレートのより効率的な増幅を可能とします。 内 容 GC-リッチPCRシステム、Taq DNAポリメラーゼおよ びエキスパンド ハイフィディリティ PCRシステムの比 較 1. 2. 3. 4. 5. 6. GC-リッチ酵素ミックス GC-リッチ反応バッファー GC-リッチ レゾリューションバッファー MgCl2ストック溶液 PCRグレード再蒸留水 PCRグレードヌクレオチドミックス(dNTPackのみに含まれます。) PCR GC-リッチPCRシステム、Taq DNAポリメラーゼおよびエキス パンド ハイフィディリティ PCRシステムのGC-リッチターゲットの 増幅能を比較するために、ヒトTGF-β遺伝子の1.5kbフラグメント 免責条項 529ページのno. 48を参照ください。 (GC含量63%)とヒトApoE遺伝子の264 bpフラグメント(GC含量 74%)、ヒトIGFⅡレセプター mRNAに由来する500 bpフラグメン ト(GC含量62%)の増幅実験を平行して行いました。実験は高いGC含 量のテンプレートの増幅における、GC-リッチPCRシステムの優秀性 を示しています(図1)。この結果はまた、GC-リッチ高分離能溶液(シ ステムに添付)がシステムの効果を増強する事を示しています。 498 新着情報・製品説明書は(研究用試薬・機器専用)ホームページ http://www.roche-biochem.jpを ご覧ください。 PCR/RT-PCR PCR用酵素 Pwoスーパーイールド DNAポリメラーゼ、dNTPack Pwo SuperYield DNA Polymerase, dNTPack 希望販売価格 ¥6,700 製品番号 04 340 868 001 包装単位 100 U 希望販売価格 ¥6,500 04 340 850 001 2×250 U ¥29,700 由来 Pwoスーパーイールド DNAポリメラーゼ Pwo SuperYield DNA Polymerase 、リコンビナント、 耐熱性DNAポリメラーゼ 包装単位 100 U 由来 アプリケーション 製品概要 本酵素は、増幅産物のシークエンシングやクローニング(遺伝子産物 Pwoスーパーイールド DNAポリメラーゼは、リコンビナント酵素 の発現)を意図するDNA増幅に使用されます。酵素の高い正確性は、 であるPwo DNAポリメラーゼと新規の至適化されたバッファーシス 特に以下のアプリケーションに適しています： テムを組み合わせたものです。この新しいバッファーシステムは、ポ ・サイトダイレクトミュータジェネシス リメラーゼの酵素特性を増強し、DNA合成の正確性を変化させること ・それぞれのRNA転写産物中の対座多型の研究 無く、増幅反応の収量を増加します。ユニークな酵素デザインと至適 ・単一細胞や単一DNA分子内のアレルステージの特徴付け 化されたバッファーシステムにより、この酵素はすばらしい結果をも PCR/RT-PCR 、リコンビナント、 耐熱性DNAポリメラーゼ 製品番号 04 743 750 001 5 たらします。3 kbまでのフラグメント、あるいはより長いアンプリコ ンの増幅が、シンプルなテンプレートから可能です。 利点 789 403 001)の一部です。 背景情報 Pwo DNAポ リ メ ラ ー ゼ は 元 来、 好 熱 性 真 性 細 菌 から単離された酵素です。これは高効率の5'-3' DNAポリメ ラーゼで、プルーフリーディング活性として知られる3'-5' エクソヌク レアーゼ活性を有します。酵素は5'-3' エクソヌクレアーゼ活性は示し ません。Pwoが本来持つ3'-5' エクソヌクレアーゼのプルーフリーディ ング活性は、Taq DNAポリメラーゼに比べ18倍の正確性のDNA合成 結果をもたらします。 品 質 Pwo DNAポリメラーゼの各ロットは、活性化DNAにおける活性 が試験されます。その上、テンプレートとしてヒトゲノムDNAと PCR Pwoスーパーイールド DNAポリメラーゼは、一定の高 い正確性において、高収量のPCR産物を得るために特に 開発されています。 ■ すばらしい正確性：Taq DNAポリメラーゼの18倍の 正確性。 ■ 高収量を獲得：同じ時間でより多くの産物を作成。 ■ リソースの浪費を回避：新規のアッセイを確立する際 により少ない至適化実験ですみます。 ■ 困難なテンプレートの増幅：問題の多いテンプレート においても、GC-RICH溶液が最良の結果を生み出し ます。 ■ 非常にタフな酵素を採用：特別にデザインされたバッ ファーシステムが、至適化無しで圧倒的な収量を達成 するために提供されています。 本酵素はまた、バッファーとPCRグレードのデオキシヌクレオチド を含む2倍濃度のマスターミックスであるPwoマスター (Cat. No. 03 λDNAを使用したPCRで機能試験を実施しています。 内 容 1. 2. 3. 4. Pwoスーパーイールド DNAポリメラーゼ(5 U/μl) PCRバッファー GC-RICH溶液 PCRグレードヌクレオチドミックス(dNTPackのみに含まれます。) 免責条項 528ページのno. 17を参照ください。 529ページのno. 48を参照ください。 499 新着情報・製品説明書は(研究用試薬・機器専用)ホームページ http://www.roche-biochem.jpを ご覧ください。 5 PCR/RT-PCR PCR用酵素 エキスパンド ハイフィディリティ PLUS PCRシステム、 dNTPack 製品番号 04 743 725 001 包装単位 125 U 希望販売価格 ¥7,700 熱安定性DNAポリメラーゼのミクスチャー 04 743 733 001 2×250 U ¥28,200 エキスパンド ハイフィディリティ PLUS PCRシステム 製品番号 03 300 226 001 包装単位 2×250 U 希望販売価格 ¥44,300 03 300 234 001 10×250 U ¥194,000 Expand High FidelityPLUS PCR System, dNTPack Expand High FidelityPLUS PCR System 熱安定性DNAポリメラーゼのミクスチャー アプリケーション PCR/RT-PCR 様々なタイプのDNAから5 kbまでのフラグメントのPCRのために デザインされています。 背景情報 エキスパンド ハイフィディリティ PLUS PCRシステムは、Taq DNA ポリメラーゼと、ポリメラーゼ活性の無い耐熱性プルーフリーディン グタンパク質のブレンドです。このタンパク質はプルーフリーディン グ活性を有しますが、ポリメラーゼ活性はありません。 このプルーフリーディングタンパク質とTaq DNAポリメラーゼの 伸長性の相乗効果は、高い感度と高い収量、正確性を提供します。 図1. このシステムでのDNA合成の信頼性は、エキスパンドハイフィディ PCRでのより高い感度と収量を達成。 結果：エキスパンド ハイフィディリティは1 ngのゲノムDNAからでさえ、1.1 kbの コラーゲンフラグメントの増幅に成功した。 リティ PCRシステムの2倍、Taq DNAポリメラーゼの6倍を示しま す。 内 容 1. 2. 3. 4. 5. エキスパンド ハイフィディリティ PLUS酵素ブレンド(5 U/μl) MgCl2含有エキスパンド ハイフィディリティ PLUS反応バッファー MgCl2不含エキスパンド ハイフィディリティ PLUS反応バッファー MgCl2 ストック溶液 PCRグレードヌクレオチドミックス(dNTPackのみに含まれます。) 機能試験 エキスパンド ハイフィディリティ PLUS PCRシステムの各ロット はPCRで機能試験されています。通常、ヒトゲノムDNAを用いて、 PCR EPOに対する特異的プライマーで1.8 kb、tPA遺伝子に対する特異的 プライマーで4.8 kbのPCR産物が得られます。 免責条項 529ページのno. 48を参照ください。 500 新着情報・製品説明書は(研究用試薬・機器専用)ホームページ http://www.roche-biochem.jpを ご覧ください。 PCR/RT-PCR PCR用酵素 Expand Long Range, dNTPack アプリケーション 製品番号 04 829 034 001 包装単位 175 U 04 829 042 001 700 U ¥46,700 04 829 069 001 5×700 U ¥204,000 背景情報 Expand Long Templateの次世代バージョンの酵素です。Expand Long RangeはロングPCRに最適な酵素です。ゲノムDNAから5∼ 希望販売価格 ¥13,100 PCRで最も一般的に用いられるTaq DNA polymeraseは、λDNA からは15 kb、ゲノムDNAからは3 kbのPCR産物を増幅できます。 25 kbのアンプリコンを増幅します。Expand Long Rangeは次のア によると、Taq DNA polymeraseとプルーフリーディ プリケーションに使用できます。 ング(3'-5'エキソヌクレアーゼ)活性を持つ好熱性DNAポリメラーゼの ■ゲノムマッピング ミックスは、プルーフリーディング酵素が合成鎖の3'末端から過って ■コンティグ構築 取り込んだヌクレオチドを除去することで、より長い鎖長を増幅でき ■ラムダファージやコスミド内のクローン配列のキャラクタリゼー ることが報告されています。この発見に基づき、ロシュ・アプライド・ ション ■長鎖RNAをテンプレートにした2ステップRT-PCR サイエンスはTaq DNA Polymeraseとプルーフリーディング酵素を 組み合わせたExpandシリーズを開発しています。 PCR/RT-PCR エキスパンドロングレンジ、dNTPack 5 利点 ■ 25 kbまでのアンプリコンが増幅できます。 ■ 特異的PCR産物が高収量で得られます。 ■ 最小限のバッファーの最適化で様々なサイズの断片を 増幅できます。 ■ バッファーの最適化が簡単です(DMSOやMgCl2溶液 を添付)。 このExpand Long RangeはExpand Long Template System 図1. の次世代バージョンです。ゲノムDNAからは25 kb、λDNAテンプ レートからは40 kbの増幅が可能になりました。1種類のバッファー が添付されますが、この1種類のバッファーで全てのアンプリコンサ イズに対応します。更に反応条件を最適化する場合は、DMSO溶液と MgCl2ストック溶液、反応バッファー (MgCl2不含)が添付されていま すので、それらを用いて反応条件を容易に改変できます。 また、この酵素はTaq DNAポリメラーゼとプルーフリーディン グ活性を持つTgo DNAポリメラーゼをブレンドしておりますので、 Taq DNAポリメラーゼよりも高い正確性を示します。 Expand Long RangeとT社ロングPCR用酵素を用いた様々な鎖長の増幅 Expand Long RangeとA社ロングPCR用酵素で5∼ 25 kbの断片を増幅しました。 M1： 2.5μL 分子量マーカーⅣ 1： 5 kb human p53 2： 7.6 kb human HPRT 3： 9.8 kb human Factor Ⅷ 4： 14.8 kb mouse β-Globin 5： 22 kb human tPA 6： 25.6 kb human β-Globin M2： 5μL分子量マーカーⅣ PCR 製品概要 品質管理 Expand Long Rangeの各ロットは、ヒトゲノムDNAとλDNAを テンプレートとして、PCRで機能試験されています。 内 容 1. 2. 3. 4. 5. 6. Expand Long Range Enzyme Mix(5 U/μl) MgCl2含有バッファー MgCl2不含バッファー MgCl2ストック溶液 DMSO PCRグレードヌクレオチドミックス 免責条項 529ページのno. 48を参照ください。 501 新着情報・製品説明書は(研究用試薬・機器専用)ホームページ http://www.roche-biochem.jpを ご覧ください。 5 PCR/RT-PCR PCR用酵素 エキスパンド ロングテンプレートPCRシステム Expand Long Template PCR System 製品番号 11 681 834 001 包装単位 150 U 希望販売価格 ¥9,700 11 681 842 001 2×360 U ¥44,300 11 759 060 001 10×360 U ¥194,000 耐熱性DNAポリメラーゼのミクスチャー アプリケーション 1 2 3 4 5 6 7 ターゲットはジェノミックDNAなど非常に長いシークエンスの増幅 です。したがってエキスパンドはゲノムのマッピングやシークエンス、 contigsの構築、ラムダファージやコスミドによってクローニングさ れたシークエンスの同定、真核細胞生物遺伝子のクローニングおよび PCR/RT-PCR 解析などに選択的に応用されます。 この新しい方法により、cDNAシークエンシングをスタート地点と したゲノムDNA由来遺伝子のクローニングが迅速に行なわれます。ま た、10kbを超えるヒト疾患遺伝子の分離および診断にも応用されま す。 背景情報 非常に長いDNAテンプレートを増幅するために特別に調合された、 Taq DNAポリメラーゼおよびTgo DNAポリメラーゼの酵素混合試薬 です。 Taq DNAポリメラーゼを使用した標準的なPCRを、ゲノムDNA 由来の長いフラグメントの増幅に応用するには問題点があります。 10kbまでの長さのターゲットDNAの増幅に関しては、文献などに 種々の方法が記載されています。プルーフリーディング活性をもつ酵 素と、活性をもたない酵素とを混合する方法は、20kb以上の非常に 長いシーケンスの増幅が可能であるとW. Barnesによって初めて報 告されました。エキスパンドシステムはこの方法の原理に基づいてデ ザインされました。エキスパンド ロングテンプレートPCRシステム により、ヒトゲノムDNAにおいて最大27kb(図1)、λDNAにおいて 40kbのフラグメントの増幅が可能です。 このようなロングPCRにおいては、特定の組成をもつ緩衝液や反 図1. エキスパンド ロングテンプレートPCRシステムによるヒトゲノムDNA 12-27kbフ ラグメントの増幅 12-27kbのゲノムDNAフラグメントを種々のtPA遺伝子特異プライマーを使用して PCRにより増幅、0.8%多目的アガロースゲル電気泳動により解析した。 レーン1 : 分子量マーカーⅡとλDNA/ Ⅰ切断の混合 レーン2 : 12kb (8分間の伸長反応) レーン3 : 15kb(12分間の伸長反応) レーン4 : 18kb(15分間の伸長反応) レーン5 : 24kb(20分間の伸長反応) レーン6 : 27kb(23分間の伸長反応) レーン7 : 分子量マーカーⅡとλDNA/ Ⅰ切断の混合 PCR 応プロトコールを必要とします。本製品には0.5-12kb、12-15kb、 15kb以上のフラグメントの増幅に適する3種類の緩衝液が添付されま す。 機能試験 ヒトゲノムtPA遺伝子由来15kbフラグメントおよびλDNA由来に おける30kbフラグメントを用いて、ロットごとの増幅を機能試験し 内 容 1. 2. 3. 4. エキスパンドロングテンプレート酵素(5 U/μl) バッファー 1 バッファー 2 バッファー 3 ています。またエンド-あるいはエクソヌクレアーゼ活性やニッキング 活性のコンタミネーションがないことも、試験により確認しています。 免責条項 529ページのno. 48を参照ください。 502 新着情報・製品説明書は(研究用試薬・機器専用)ホームページ http://www.roche-biochem.jpを ご覧ください。 PCR/RT-PCR PCR用酵素 エキスパンド20 kbPLUS PCRシステム、dNTPack Expand 20 kbPLUS PCR System, dNTPack 製品番号 04 743 814 001 包装単位 200 U 希望販売価格 ¥21,300 製品番号 11 811 002 001 包装単位 200 U 希望販売価格 ¥21,100 5 耐熱性DNAポリメラーゼの混合物 エキスパンド 20 kbPLUS PCRシステム Expand 20 kbPLUS PCR System 耐熱性DNAポリメラーゼの混合物 アプリケーション エキスパンド PCRシステムはTaq DNAポリメラーゼやPwo DNA ポリメラーゼの代わりに使用出来ますが、主な応用はゲノムDNAの特 に長い目的配列の増幅です。エキスパンド 20 kbPLUS PCRシステム は、特に長いDNA(20 kb以上)を増幅するようにバッファーと酵素ブ PCR/RT-PCR レンドが至適化されています。コントロールプライマーとDNAにより 23 kbから47 kbの断片が産生されます。 注：長いPCR産物を得るために重要な要因は、最初のテンプレートの 品質(長さと純度)です。供給されているコントロールゲノムDNAも同 様、ゲノムDNAテンプレートの取り扱いと調製には十分注意して下さ い。ゲノムDNAの長さは、ゲル電気泳動での測定で50 kb以上でなけ ればなりません。 背景情報 エキスパンドは耐熱性ポリメラーゼのユニークなブレンドを利用し ています。システムは標準の熱サイクリング技術を大きく改善してい ます。実験的な挑戦が品質、正確性、断片のサイズのどれを試そうと、 エキスパンド システムはその要求に答えます。ゲノムDNAからの長 い断片の増幅は常に、入手できるポリメラーゼとその生来の活性によ 図1. り制限を受けます。ロシュ・ダイアグノスティックスの、ユニークな 株のリコンビナントTaqとTgo DNAポリメラーゼの組み合わせによ り、従来のPCRにおける制限は乗り越えられつつあります。エキスパ ンド 20 kbPLUS PCRシステムはこの証明されたテクノロジーを使用 する際の、拡張された可能性の一例です。 λDNAの様々な長さ(20、25、30、35、40 kb)のフラグメントをエキスパンド ロングテンプレートPCRシステム(LT)とエキスパンド20 kbPLUS PCRシステム(20 kbPLUS)の並行反応で増幅した。テンプレート量(各レーンの上に記載)は2種類のシステ ムの推奨より少なかった。PCRは25サイクルで行った。産物はアガロースゲル上で分 析した。レーン1、2、13、14：分子量マーカー；レーン3-12：図のトップに記載 の長さのλDNAテンプレートよりのPCR産物。 結果：限られたテンプレート量でも、エキスパンド20 kbPLUS PCRシステムは大変長 いDNAフラグメント(30-40 kb)を、エキスパンドロングテンプレートPCRシ ステムよりも効率的に増幅した。特に、30 kb(レーン7、8)、35 kb(レーン9、 10)、40 kb(レーン11、12)の産物での、2つのシステムの収量における差に 注意。 エキスパンド 20 kbPLUS PCRシステムの各ロットはPCR反応で機 能試験がされています。増幅はヒトゲノムDNAとβ-グロビンに特異 的なプライマーを使用して、23 kb断片を増幅する事で行っています。 内 容 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. エキスパンド 20 kbPLUS酵素 MgCl2含有エキスパンド 20 kbPLUS反応バッファー MgCl2ストック溶液 ヒトゲノムDNA ヒトβ-グロビン コントロールプライマー フォワード(HβGフォワード) ヒトβ-グロビン コントロールプライマー リバース(HβGリバース) PCRグレードヌクレオチドミックス(dNTPackのみに含まれます。) PCR 機能試験 免責条項 529ページのno. 48を参照ください。 503 新着情報・製品説明書は(研究用試薬・機器専用)ホームページ http://www.roche-biochem.jpを ご覧ください。 5 PCR/RT-PCR PCR用酵素 Taq DNAポリメラーゼ(5 U/μl)、dNTPack Taq DNA Polymerase, dNTPack 製品番号 04 728 866 001 包装単位 100 U 希望販売価格 ¥7,400 04 728 874 001 2×250 U ¥33,300 04 728 882 001 4×250 U ¥61,500 04 728 904 001 10×250 U ¥140,900 04 728 858 001 20×250 U ¥256,300 製品番号 11 146 165 001 包装単位 100 U 11 146 173 001 500 U ¥35,700 11 418 432 001 4×250 U ¥66,400 11 596 594 001 10×250 U ¥154,400 11 435 094 001 20×250 U ¥294,500 BM由来、 リコンビナント Taq DNAポリメラーゼ、5 U/μl Taq DNA Polymerase 希望販売価格 ¥8,100 PCR/RT-PCR BM由来、 リコンビナント アプリケーション 機能試験 Taq DNAポリメラーゼはPCRにおいてDNAフラグメントを増幅さ Taq DNAポリメラーゼはロットごとにPCR、シークエンシング、 せるために使用されます。この酵素は最大10kbのDNAフラグメント DNA標識における活性を試験されています。λDNAをテンプレート の増幅や、更にはヒトゲノムDNAにおけるシングルコピー遺伝子の特 とした標準的な条件下で、最少105の増幅が保証されています。また 異的な増幅も可能です。また、修飾デオキシリボヌクレオチドを基質 7kb λDNAフラグメントの特異的な増幅や、ヒトゲノムDNAにおけ として使用することも可能で、DNAフラグメントのラジオアクティブ るシングルコピー遺伝子の増幅も機能試験されています。 あるいはジゴキシゲニンやビオチンなどノンラジオアクティブ(NonRI)な標識にも応用されます。 Taq DNAポリメラーゼはロットごとにエンド-およびエクソヌクレ アーゼアッセイのコンタミネーションやニッキング活性についても試 験されています。特別なセルフプライミングアッセイによりコンタミ 背景情報 ネーションDNAがないことが確認されています。 PCR Taq DNAポ リ メ ラ ー ゼ は 好 熱 性 真 正 細 菌 で あ る BM由来、 発現リコンビナント酵素です。この酵素 はエンド-およびエクソヌクレアーゼによる非特異活性に対してフリー の状態に調製されています。Taq DNAポリメラーゼは分子量約95kD 内 容 1. Taq DNAポリメラーゼ(5 U/μl) 2. MgCl2含有PCRバッファー 3. PCRグレードヌクレオチドミックス(dNTPackのみに含まれます。) の一本鎖ポリペプチドにより構成され、5'-3'DNAポリメラーゼで、 3'-5'エクソヌクレアーゼ活性を欠如しています。この酵素はpH約 免責条項 9(20℃)および75℃で最大の活性を示します。Taq DNAポリメラー 529ページのno. 48を参照ください。 ゼはより高温(95℃)でのインキュベーションにおいても安定です(図1 参照)。 図1. ロット間の一貫性。4種類のロット(1-4)をλDNAの0.5 kbフラグメントを増幅するた めにPCRで試験した。 結果：4種類のロットで、一貫性のある結果が得られた。 504 新着情報・製品説明書は(研究用試薬・機器専用)ホームページ http://www.roche-biochem.jpを ご覧ください。 PCR/RT-PCR PCR用酵素 Taq DNAポリメラーゼ(1 U/μl)、dNTPack Taq DNA Polymerase (1 U/μl), dNTPack 製品番号 04 738 225 001 包装単位 250 U 希望販売価格 ¥17,900 04 738 241 001 4×250 U ¥61,500 製品番号 11 647 679 001 包装単位 250 U 希望販売価格 ¥18,000 11 647 687 001 4×250 U ¥66,400 5 BM由来、 リコンビナント、 Taq DNAポリメラーゼ、1 U/μl Taq DNA Polymerase BM由来、 リコンビナント、 機能試験 Taq DNAポリメラーゼ 1unit/μlは高濃度のTaq DNAポリメラー ゼと同様に、様々なアプリケーションに使用されます。本製品の濃度 Taq DNAポリメラーゼ 1unit/μlは標準的な濃度のTaq DNAポリ メラーゼと同等の活性を有することを試験しています。 は少量のポリメラーゼを使用する際のピペット操作を簡便かつ正確に 行なうために有効です。 内 容 背景情報 1. 2. 3. 4. 5. Taq DNAポ リ メ ラ ー ゼ は 好 熱 性 真 正 細 菌 で あ る BM由来、 発現リコンビナント酵素です。この酵素 はエンド-およびエクソヌクレアーゼによる非特異活性に対してフリー の状態に調製されています。Taq DNAポリメラーゼは分子量約95kD Taq DNAポリメラーゼ(1 U/μl) MgCl2含有PCRバッファー MgCl2ストック溶液 MgCl2不含PCRバッファー PCRグレードヌクレオチドミックス(dNTPackのみに含まれます。) PCR/RT-PCR アプリケーション 免責条項 529ページのno. 48を参照ください。 の一本鎖ポリペプチドにより構成され、5'-3'DNAポリメラーゼで、 3'-5'エクソヌクレアーゼ活性を欠如しています。この酵素はpH約 9(20℃)および75℃で最大の活性を示します。Taq DNAポリメラー PCR ゼはより高温(95℃)でのインキュベーションにおいても安定です。 505 新着情報・製品説明書は(研究用試薬・機器専用)ホームページ http://www.roche-biochem.jpを ご覧ください。 5 PCR/RT-PCR PCR用酵素 エキスパンド ハイフィディリティ PCRシステム、 dNTPack 製品番号 04 738 250 001 包装単位 100 U 希望販売価格 ¥6,200 04 738 268 001 2×250 U ¥28,200 04 738 276 001 10×250 U ¥128,100 製品番号 11 732 641 001 包装単位 100 U 希望販売価格 ¥9,900 11 732 650 001 2×250 U ¥44,300 11 759 078 001 10×250 U ¥194,000 Expand High Fidelity PCR System, dNTPack 耐熱性DNAポリメラーゼのミクスチャー エキスパンド ハイフィディリティ PCRシステム Expand High-Fidelity PCR System PCR/RT-PCR 耐熱性DNAポリメラーゼのミクスチャー アプリケーション 背景情報 エキスパンド ハイフィディリティ PCRシステムは標準的なPCR反 エキスパンド PCRシステムは耐熱性酵素である、Taq DNAポリメ 応においてTaq DNAポリメラーゼに置き換えることができます。本 ラーゼとTgo DNAポリメラーゼのユニークなミクスチャーから成り 品の一義的な応用としては熱サイクリングと増幅におけるDNAへの取 ます。Taqの5'-3'ポリメラーゼ活性とTgoの3'-5'プルーフリーディン り込みのエラー率を下げることです。収量、正確性、柔軟性を比較し グ能が熱サイクリング反応において、両方の強みが組み合わされ、改 たとき、本システムはTaq以上の改良された結果をもたらします。 良された性能と結果を供給します。エキスパンド PCRシステムはエキ スパンド ロングテンプレートPCRシステムとエキスパンド ハイフィ エキスパンド ハイフィディリティ PCRシステムの利点 ディリティ PCRシステムの二つより成り、これらのシステムは酵素の エキスパンド PCRシステムは5 kb以下のジェノミックDNAを増幅 ブレンドにより、増幅断片の正確性あるいは長さに注目した特異的な する際に、正確性と収量を得られるようPCR反応が至適化されていま 利点のため至適化されています。PCRにおいてその上に考慮すべき点 す。本品はTaqに比較して3倍の正確性と2倍の収量です。本酵素ブ は反応から得られる産物の収量です。この点においても酵素のブレン -6 レンドはエラー率8.5×10 と、Taq単独より高い正確性を示します。 ドは単一酵素よりも有利なことを明瞭に示しています。断片サイズ、 Taqと比較したとき改善された収量を達成します。この比較はまた至 正確性、収量などの変数間の複雑な関係はエキスパンド 産物への応用 適増幅域を超えても断片を増幅するという、エキスパンド ロングテン において重複を造り出します。エキスパンド PCRシステムはPCR熱 プレートPCRシステムとエキスパンド ハイフィディリティ PCRシス サイクリング用の個別の酵素の使用より多くの利点を供給し、研究者 テム両方の柔軟性を示しています。エキスパンド ハイフィディリティ にそれぞれの利点を考慮させます。 PCRシステムはまたTaqよりも改良された感度を示します。最初の PCR ジェノミックDNAを限られた量用いるとき、この劇的な差が見られま 機能試験 す(図1)。収量の増加と正確性の改良に加え、エキスパンド ハイフィ 各ロットはPCRで機能試験されています。増幅はヒトジェノミック ディリティ PCRシステムはより一定の結果を保証します。単一の熱安 DNAとコラーゲン(1 kb増幅産物)とtPA(4.8 kb増幅産物)特異プライ 定性酵素と異なり、組み合わせの酵素のポリメラーゼ活性はMg++濃度 マーを用いて行なわれます。 の変動に感受性ではありません。 内 容 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 Expand Taq pol M M W 250 100 50 10 1 250 100 50 10 1 W M ng ng ng ng ng ng ng ng ng ng M 1. 2. 3. 4. 5. エキスパンド ハイフィディリティ酵素ミックス MgCl2含有エキスパンド ハイフィディリティ反応バッファー MgCl2不含エキスパンド ハイフィディリティ反応バッファー MgCl2ストック溶液 PCRグレードヌクレオチドミックス(dNTPackのみに含まれます。) 免責条項 529ページのno. 48を参照ください。 図1. 506 PCRでのより高い感度と収量を達成。 結果：エキスパンド ハイフィディリティは1 ngのゲノムDNAからでさえ、1.1 kbの コラーゲンフラグメントの増幅に成功した。 新着情報・製品説明書は(研究用試薬・機器専用)ホームページ http://www.roche-biochem.jpを ご覧ください。 PCR/RT-PCR PCR用酵素 Pwo DNAポリメラーゼ Pwo DNA Polymerase 由来 リコンビナント耐熱性DNAポリメラーゼ 製品番号 11 644 947 001 包装単位 100 U 希望販売価格 ¥9,400 11 644 955 001 2×250 U ¥41,600 5 アプリケーション Pwo DNAポリメラーゼは、Taq DNAポリメラーゼの代りに標準 的な増幅反応に応用することが可能です。この酵素がもつ高い正確性 (High Fidelity)により、以下のアプリケーションに適用されます。 ■PCR産物のクローニング ■個々のRNA転写における対立遺伝的多型性(alleic polymorphism) の検討 PCR/RT-PCR ■組織における稀少変異の特徴づけ ■細胞レベルあるいはDNA分子レベルでの対立遺伝ステージの特徴づ け ■培養中の細胞群の特徴づけ 本酵素はTaq DNAポリメラーゼとほぼ類似した反応経路をもち、 ヒトジェノミックDNA由来シングルコピー遺伝子の特異的な増幅にも 応用されます。 背景情報 Pwo DNAポリメラーゼは好熱性真正細菌 ら単離された酵素で、 か にクローンしたリコンビナント酵素とし て供給されます。この酵素は非特異的なエンド-あるいはエクソヌクレ アーゼフリーに高度に精製されています。Pwo DNAポリメラーゼは分 子量約90 kDで、3'-5'エクソヌクレアーゼ活性すなわちプルーフリー 図1. ディング活性を有する、高度に調製された5'-3'DNAポリメラーゼで す。本酵素からは5'-3'エクソヌクレアーゼ活性は検出されません。 Pwo DNAポリメラーゼによる特異的な増幅反応。Pwo DNAポリメラーゼを用いて、 4種類の異なるヒトゲノムDNA由来シングルコピー遺伝子を特異的に増幅した。レー ン 1: 分子量マーカー Ⅶ、レーン 2: P53 (2.9 kb)、レーン3: コラーゲン (1.1 kb)、 レーン 4: FKBP 12 (324 bp)、レーン5: 嚢胞性繊維症 (950 bp)、レーン6: 分子 量マーカー Ⅵ。 Pwo DNAポリメラーゼは100℃における半減期が2時間以上とい う、熱安定性を示します。これは同じ温度条件においてTaq DNAポ Pwo DNAポ リ メ ラ ー ゼ は ジ ゴ キ シ ゲ ニ ン-dUTPや ビ オ チ ン- リメラーゼの半減期が5分未満であることに比べると、非常に耐熱性 dUTP、フルオレセイン-dUTPなど、修飾ヌクレオチドを基質とした が高いということができます。 PCRによる核酸の標識反応にも応用され、高い効率を示します。 は、Taq DNAポリメラーゼに比べ、10倍以上の正確性の高いDNA合 内 容 成が行なえることを示します。Pwo DNAポリメラーゼによるPCR産 ライゲーションを行なうことが可能です。 1. 2. 3. 4. 機能試験 免責条項 物は平滑末端(blunt-ended)であるため、末端の処理なしに平滑末端 Pwo DNAポリメラーゼはロットごとに活性化DNAの活性測定によ Pwo DNAポリメラーゼ(5 U/μl) MgSO4 含有PCRバッファー PCRバッファー MgSO4 ストック溶液 PCR Pwoに特有の3'-5'エクソヌクレアーゼプルーフリーディング活性 528ページのno. 17を参照ください。 529ページのno. 48を参照ください。 り試験されます。λDNAやヒトジェノミックDNAをテンプレートと したPCRによる機能試験や図1の方法によるプルーフリーディング活 性も検討されます。 エンド-あるいはエクソヌクレアーゼ活性やニッキング活性のコンタ ミネーションも試験されます。 507 新着情報・製品説明書は(研究用試薬・機器専用)ホームページ http://www.roche-biochem.jpを ご覧ください。 5 PCR/RT-PCR PCR用酵素とマスターミックス AptaTaq Fast DNA Polymerase 製品番号 06 879 110 001 包装単位 100U 06 879 128 001 1,000U 希望販売価格 ¥4,800 冷蔵 ¥30,000 冷蔵 AptaTaq Fast PCR Master 製品番号 06 879 080 001 包装単位 400µl/100回(20µl反応系) 06 879 101 001 4000µl/1,000回(20µl反応系) 希望販売価格 ¥6,800 冷蔵 ¥50,000 冷蔵 PCR/RT-PCR アプリケーション 図1. アプタマーによる高感度スイッチ: 環境が55℃以下では酵素活性は不活化されていま すが、60℃を境にAptaTaqポリメラーゼは瞬時に活性化され、高速かつ高特異性のプ ライミングを開始します。AptaTaqは活性のon/offを高感度かつ可逆的に切り替える、 優れたスイッチを備えたホットスタートPCR試薬です 図2. 各マスターミックス製品の推奨プロトコールにおけるPCR効率比較: AptaTaq Fast PCR Masterは他社ホットスタートPCR試薬と比較して高い増幅効率を示した。 AptaTaq Fastは増幅の早さと特異性を両立させた、ready to use のPCR試薬です。 利 点 酵 素 の 伸 長 反 応 を 最 適 化 す る バ ッ フ ァ と 新 技術アプタマーが実現した酵素活性on/offの機敏な切替え(図1)によっ て伸長時間の短縮と特異性の向上に成功しました。 ■別次元の早さ: 他の一般的なホットスタート試薬に比べて、伸長時 間を1/3∼ 1/5に短縮できます ■簡単セットアップ: すべての作業を室温で行えます。面倒な試薬の 冷解凍やon-ice調製は、一切不要です ■至適化済みプロトコール: GCリッチなど多様なテンプレートに対応 (図2)した、One for Allプロトコールです 製品概要 ホットスタートはPCRの感度・特異性・収量を顕著に増加させま す。アプタマーは60℃の環境下では酵素を活性化させるだけでなく、 55℃の温度化では可逆的に酵素を不活化させます。それゆえ非特異結 合を加熱時・冷却時ともに回避します。アプタマーは極めて熱感受性 が高いため、アニーリングおよびプライミングの時間は極小化されま PCR す。 AptaTaq Fast PCR MasterはdUTPを含む基質を採用しており、 UNGによるキャリーオーバー コンタミネーションの防止が可能です。 508 新着情報・製品説明書は(研究用試薬・機器専用)ホームページ http://www.roche-biochem.jpを ご覧ください。 PCR/RT-PCR PCR用のマスターミックスとキット 製品番号 04 710 436 001 04 710 444 001 04 710 452 001 アプリケーション 包装単位 2×1.25 ml (50μlの反応液で100回) 8×1.25 ml (50μlの反応液で400回) 10×5 ml (50μlの反応液で2,000回) 希望販売価格 ¥18,500 ¥61,500 ¥246,000 背景情報 ファストスタートPCRマスターは2倍濃度のready-to-useのマス ホットスタートプロトコールは顕著にPCRの感度、特異性、収量を ターミックスで、サーマルブロックサイクラー機器上での標準的な 増加させます。ファストスタートTaq DNAポリメラーゼのアミノ残 PCRや2ステップRT-PCRの実行に必要なすべての試薬を含みます(テ 基における熱感受性ブロッキング基は室温で修飾酵素を不活化させま ンプレート、プライマー以外)。 す。それゆえ、プライマーが非特異的に結合した場合に伸長が起こり ・ホットスタートPCR ません。ファストスタートTaq DNAポリメラーゼは高温(95℃でのプ ・ハイスループットPCR レインキュベーションステップ)でブロッキング基を外すことにより活 性化します。 利点 ホットスタートPCRに便利を加えます。 ■ 簡便なready-to-useの１チューブマスターミックスで 時間を短縮します。 ■ 1 kbまでのゲノムDNAやcDNAを増幅します。プラ スミドなどの簡単なテンプレートを使用する場合はよ り長いテンプレートを増幅できます。 ■ 反応のセットアップへのロボット化されたピペッティ ングステーションの採用。マスターミックスは長い セットアップ時間の間も室温で安定です。 ■ マスターミックス中のホットスタート酵素であるファ ストスタートDNAポリメラーゼと高度に精製されたヌ クレオチドによりPCRの感度、特異性および収量を増 加します。 品 質 ファストスタートPCRマスターはPCRで機能試験されています。 PCR/RT-PCR FastStart PCR Master 組織性プラスミノーゲンアクチベーター (tPA)遺伝子の365 bpフラ グメントとコラーゲン遺伝子の1.1 kbフラグメントが、ヒトゲノム DNAと特異的なプライマーを使用して増幅されました。また、各ロッ トは、RNase、DNase、ニッキング活性の不含が試験されています。 ファストスタートTaq DNAポリメラーゼの詳細は、 496ページをご覧ください。 免責条項 529ページのno. 49を参照ください。 製品概要 ファストスタートPCRマスターはほとんどすべてのホットスタート PCR ファストスタートPCRマスター 5 アプリケーションにおいて、単品試薬の代わりに使用できます。この マスターミックスは時間のかかる融解やピペッティングステップをす ることなく、直ちにPCRのセットアップを可能にします。 本ミックスは3'に一つのオーバーハングのAを持つPCR産物を作成 しますので、T/Aクローニングが応用できます。ブルントエンドのベ クターはポリッシングステップが必要です。ファストスタートPCRマ スターはDIG-dUTPなどの修飾核酸を取り込みますので、DIG-dUTP の取り込みは反応液に終濃度10μMの修飾核酸を加えることで行えま す。 このマスターミックスとトランスクリプター ファストスタート cDNA合成キットを組み合わせることで、2ステップRT-PCRで素晴 らしい結果を得ることができます。 509 新着情報・製品説明書は(研究用試薬・機器専用)ホームページ http://www.roche-biochem.jpを ご覧ください。 5 PCR/RT-PCR PCR用のマスターミックスとキット ハイフィディリティ PCRマスター High Fidelity PCR Master 製品番号 包装単位 希望販売価格 12 140 314 001 1 キット (50μlの反応液で200回) ¥54,300 PCRによる特異的DNAフラグメントを簡便、効率的に増幅するた めのready-to-use反応ミックス アプリケーション 背景情報 ハイフィディリティ PCRマスターは、エキスパンド ハイフィディ ハイフィディリティ PCRマスターにはテンプレートとプライマー以 リティ PCRシステムやその他ほとんどのPCRシステムの単品試薬に 外のすべての試薬が2倍濃度でミックスされています。またPCRグレー 置換えて使用する事ができます。唯一の制限はサンプル量がトータル ドの滅菌水も添付されています。 反応液量の半分を超えない事だけです。本マスターは4℃で保存でき マスターミックスは50μlの反応液量の増幅200回に十分であり、 るため、時間のかかる融解の手間が省け、直ちにPCRをスタートでき 2種類の耐熱性酵素であるTaq DNAポリメラーゼとTgo DNAポリメ ます。 ラーゼのユニークな酵素ブレンドより構成されています。この酵素ブ レンドはエピソーマルやゲノムDNAの5kbまでのフラグメントを高収 PCR/RT-PCR 量、高信頼性、高特異的に増幅するためにデザインされています。こ の簡便なマスターミックスは、反応組成の調整を必要としません。プ ルーフリーディング活性を持つTgo DNAポリメラーゼの配合により、 Taq DNAポリメラーゼ単体に比べ3倍の高信頼性と2倍の収量を示し ます。このマスターにより増幅された産物は平滑末端と、3'-末端に1 個のAが付加された産物の混合物です。 機能試験 本マスターの各はヒトゲノムDNAと特異的なプライマーを用いて、 PCRで機能試験されています。tPA遺伝子の4.8 kbフラグメントが増 幅されます。 内 容 1. ハイフィディリティ PCRマスター 図1. 典型的結果 レーン1：MWM Ⅲ レーン2：1.1kb コラーゲンフラグメント レーン3：1.7kb tPAフラグメント レーン4：2.9kb P53フラグメント レーン5：4.8kb tPAフラグメント レーン6：MWM Ⅲ PCR ハイフィディリティ PCRマスターの特徴 2. 再蒸留水、PCRグレード 10バイアル(各20回反応)、2倍濃縮ミックス：3 mM、MgCl2、 各0.4 mM dNTP PCRグ レ ー ド ミックス(dATP、dCTP、dGTP、dTTP) 5バイアル、各1 ml エキスパンド ハイフィディリティ PCRシステムの情 報は、506ページをご覧ください。 免責条項 529ページのno. 48を参照ください。 ■ 2∼ 8℃で保存 融解の手間が省け、直ちに使用でき る。 ■ 簡便 2倍濃縮のready-to-use反応ミックス。 ■ 高性能 最大の熱安定性、発展性、特異性を保証。 ■ コンタミのリスクが最小限 2回のピペッティングス テップのみ。反応ミックスは20回反応毎に小分けさ れている。 510 新着情報・製品説明書は(研究用試薬・機器専用)ホームページ http://www.roche-biochem.jpを ご覧ください。 PCR/RT-PCR PCR用のマスターミックスとキット PCR マスター PCR Master 製品番号 包装単位 希望販売価格 11 636 103 001 1 キット(50μlの反応液で200回) ¥39,100 冷蔵 ポリメラーゼチェインリアクション(PCR)による特異的DNAフラグ メントの簡便、高信頼性増幅のためのready-to-use 反応ミックス アプリケーション 5 機能試験 PCRマスターは、ほとんどすべてのPCRアプリケーションにおい それぞれのPCRマスターのロットはPCR活性についてテストされ て、PCRコアキットや単品試薬の代わりに使用できます。唯一の制限 ています。λDNAを鋳型として用いる場合、少なくとも105の増幅を は、サンプルの容量を反応液量の半分以上にできないことだけです。 保証します。また、このキットはヒトゲノムDNAの単一遺伝子の増幅 PCRマスターは4℃で安定であり、時間のかかる試薬を融解すること 能についてもテストされています。キットの成分中にエクソヌクレアー なく、直ちにPCRを開始できます。 ゼおよびエンドヌクレアーゼの活性は検出されません。 PCRマスターは1.5 mMの固定のMgCl2を含んでいます。しかし、 内 容 1. PCRマスターミックス PCR マスターの利点 ■ 2∼ 8℃での保存 融解の必要なく直ちに使用可能。 ■ 簡便 2倍濃縮タイプのready-to-use 反応ミックス。 ■ 高性能 最大の熱安定性、性能、特異性を保証。 ■ 最少の汚染リスク 2回のピペットステップしか必要 としない。反応ミックスは10回分の10バイアルに小 分けされている。 2. 滅菌再蒸留水 2倍濃度のPCRマスターミックスの入ったバイア ル10個を含む。このミックスの内容は0.5ml中、 25U Taq DNA polymerase[20mM Tris HCl、 100mM KCl、3mM MgCl2、Brij® 35、0.01% (v/v)、dNTP mix(dATP、dCTP、dGTP、 dTTP 各0.4mM)を含み、pH 8.3(20℃ )である。 1 ml×5バイアル PCR/RT-PCR 高い濃度は他のMgCl2の添加により達成できます。 免責条項 528ページのno. 18を参照ください。 529ページのno. 48を参照ください。 背景情報 PCRのセットアップには、試薬の融解、マスターミックスの調製、 ミックスの各反応チューブへの分注という作業が含まれます。 テンプレートDNA、プライマー、それに必要な量の水を加えるだけ です。PCRマスターは、時間のかかる融解やピペッティング操作の必 要なく、直ちにPCRがセットアップできます。これは、汚染の危険性 を最小限にし、時間を節約させます。 PCR マスターはPCR (polymerase chain reation) に必要な試薬 を2倍の濃度で予め混合したマスターミックスで4℃で保存できます。 100回分の増幅に充分です。このキットはそれぞれの試薬成分の調製 を必要としません。 PCR マスターミックスは2.5U Taqポリメラーゼを含む100μl の反応液、 511 新着情報・製品説明書は(研究用試薬・機器専用)ホームページ http://www.roche-biochem.jpを ご覧ください。 5 PCR/RT-PCR PCR用のマスターミックスとキット Pwoマスター Pwo Master アプリケーション Pwoマスターは2倍濃度のready-to-useのマスターミックスで、高 製品番号 03 789 403 001 包装単位 2.5 ml(10×250μl) (50μlの反応液で100回) 希望販売価格 ¥42,200 冷蔵 背景情報 Pwo DNAポ リ メ ラ ー ゼ は 元 来、 好 熱 性 真 性 細 菌 い正確性のPCRの実行に必要なすべての試薬を含みます(テンプレー から単離された酵素です。これは高効率の5'-3' DNAポリメ ト、プライマー以外)。PwoマスターはTaq DNAポリメラーゼに比べ ラーゼで、プルーフリーディング活性として知られる3'-5' エクソヌク 18倍の正確性を持ちます。 レアーゼ活性を有します。酵素は5'-3' エクソヌクレアーゼ活性は示し ません。Pwoが本来持つ3'-5' エクソヌクレアーゼのプルーフリーディ ング活性は、Taq DNAポリメラーゼに比べ18倍の正確性のDNA合成 PCR/RT-PCR 利点 ■ プルーフリーディングポリメラーゼによる高い正確性 の獲得(Taq DNAポリメラーゼに比べ18倍の正確性)。 ■ ほとんどのテンプレートを、至適化無しの高い収量で 3 kbまで増幅させる特別なバッファーシステムにより すばらしい収量を達成。 ■ プレミックスタイプでピペッティング操作数の減少に よる時間の短縮。 ■ PCR間の反応ミックスの汚染に対するリスクの減少。 ■ ＋2∼＋8℃でのPCRマスターの保存。 結果をもたらします。 品 質 Pwoマスター各ロットは、ヒトゲノムDNAと1.7 k PCR産物を作 成するtPAの特異的プライマーを使用して、品質管理が行われていま す。 内 容 1. Pwoマスター 2. 水、PCRグレード 10×250μl、2倍濃度マスターミックス 4×1 ml 免責条項 528ページのno. 17を参照ください。 529ページのno. 48を参照ください。 製品概要 Pwoマスターは、PCR合成間に最大の正確性を保証し、3 kbまで のフラグメントのタフな増幅のためのready-to-useのプルーフリー ディングマスターミックスです。この2倍濃縮タイプのプレミックス は、Pwoスーパーイールド DNAポリメラーゼと新規の至適化された バッファーシステム、PCRグレードのヌクレオチドを含みます。Pwo マスターは、簡便で使用しやすい製品で、単純にテンプレートDNAと プライマー、PCRグレード水(キット内に添付)を加え、終量を50μl に調整後、反応を開始します。その他の利点として、Pwoマスターは PCR 冷蔵可能なため、凍結融解の必要がありません。 512 新着情報・製品説明書は(研究用試薬・機器専用)ホームページ http://www.roche-biochem.jpを ご覧ください。 PCR/RT-PCR PCR用のマスターミックスとキット 5 製品番号 包装単位 希望販売価格 11 578 553 001 1 キット(50μlの反応液で100回) ¥33,000 PCR コアキット PCR Core Kit ポリメラーゼチェインリアクション(PCR)による特異的DNAフラ グメントの増幅 アプリケーション 原 理 PCR コアキットにはテンプレートDNAとプライマー以外の、PCR PCRはDNAの決定された配列を酵素的に合成する 法です。 に必要な全ての試薬が含まれています。テンプレートとプライマーの 反応には増幅される目的DNA配列側面に、反対の鎖にハイブリダイズ 選択は増幅される目的配列に依存します。MgCl2不含反応バッファー する、２つのオリゴヌクレオチドプライマーを用います。テンプレー とMgCl2溶液が別々のストック溶液として入っているので、それぞれ トの変性、プライマーのアニーリング、DNAポリメラーゼによるア の実験に合うMgCl2濃度が至適化できます。 ニールしたプライマーの伸長を含むサイクルの繰返しにより、その末 端はプライマーの5'-末端で決定される特異的DNAフラグメントが増 幅します。このサイクルで合成されるプライマー伸長産物は次のサイ PCR コアキットの利点 ■ 柔軟性 至適なMg 濃度に調製できるMgCl2含、不 含の二種類のPCR反応バッファー。 ■ 簡 便 全ての試薬はready-to-useタイプで機能試験 済み。 ■ 高性能 最大の熱安定性、性能、特異性を保証。 のサイクルで約2倍にコピーされます。それ故PCRの20サイクルで目 的DNAの約百万倍のコピー (220)が得られます。 プ ラ イ マ ー の 伸 長 は、 好 熱 性 の 真 正 バ ク テ リ ア BMより分離された熱安定性のDNAポリメラーゼである、 Taq DNAポリメラーゼにより触媒されます。 PCR/RT-PCR クルでテンプレートとして供給されるため、目的DNAの数はそれぞれ 2+ 機能試験 それぞれのキットのロットはPCR活性についてテストされていま 背景情報 す。λDNAをテンプレートとして用いる場合、少なくとも105の増幅 PCRの至適化は最大の収量のみならず、特異性や感度を得るために を保証しています。各ロットは7 kb λDNAフラグメントの特異的な 必要とされます。原理的にアッセイの物理的、化学的構成分は品質の 増幅についてもテストされています。更に、Taq DNAポリメラーゼ 性能的増加のために修飾される因子として考慮しなければなりません。 はヒトゲノムDNAの単一遺伝子の増幅機能についてもテストされてい これらの因子の一つはMg2+濃度です(図1参照)。 PCR コアキットはあらゆるゲノム、クローン、cDNA等からのテ ます。Taq DNAポリメラーゼの各ロットは能書に記載の夾雜活性につ いてテストされています。 ンプレートの増幅が可能です。多くの増幅反応は至適な結果のために マグネシウムの滴定が必要とされ、狭い範囲でのみMgCl2濃度が変化 したとき図1の実験で示す通り、成功します。一般的に高いMg2+濃度 はPCRの収量を増加する方が反応の特異性を減少し、プライマーダイ マーを形成しやすくします。低いMg2+濃度は特異性を高めるが収量を 減少させます。 製品構成 1. 2. 3. 4. 5. Taq DNA ポリメラーゼ dNTPストック溶液 PCR反応バッファー MgCl2 ストック溶液 MgCl2 不含PCR反応バッファー 250 units 200μl 1 ml×2バイアル 1.0 ml 1.0 ml うかを選択させることができます。本キットにはMgCl2を含む10x PCRバッファーとMgCl2不含10x PCRバッファー、それにMgCl2溶 免責条項 529ページのno. 48を参照ください。 PCR PCR コアキットは研究者独自のシステムでMg2+の滴定をするかど FKBP 図1. ß-actin 1.0 mM MgCl2 0.75 mM MgCl2 Marker 1.0 mM MgCl2 0.75 mM MgCl2 0.5 mM MgCl2 Marker 2.5 mM MgCl2 2.0 mM MgCl2 1.0 mM MgCl2 液が含まれています。 EPO PCRでのマグネシウムの重要な役割 513 新着情報・製品説明書は(研究用試薬・機器専用)ホームページ http://www.roche-biochem.jpを ご覧ください。 5 PCR/RT-PCR PCR用のマスターミックスとキット PCR コアキットPLUS 製品番号 11 585 541 001 PCR Core KitPLUS 包装単位 1 キット(50μlの反応液で50回) 希望販売価格 ¥40,600 PCRおよびPCRキャリーオーバー防止キット コンタミネーション除去反応およびPCR反応キット50回用 アプリケーション PCR コアキットPLUSは同一のプライマー対を用いて、大量のPCR 増幅を行っている研究室でのPCRに使用できます。 dUを含むPCR産物は、dTをもつ産物と同じくハイブリダイゼー ションのターゲットとなり、ダイデオキシで終結する配列の鋳型とな ります。そしてもし、ung−のバクテリアにトランスフォームされれば 直接クローン化されます。制限酵素による分解は有効でない( および HI)か、弱いものです( Ⅰ、 Ⅱ、 RI Ⅲ)。他 PCR/RT-PCR の制限酵素については、酵素活性のdU-dTの置換効果について個別に 検討しなければなりません。タンパク結合あるいはDNA-タンパク相 互作用の研究には、dUを含むDNAの使用は奨めらません。 PCR コアキットPLUSの利点 ■ 柔軟性と簡便性 PCR条件の選択において最大の柔軟 性と簡便性。 ■ 高性能 全てのキット成分は夾雜活性フリーでPCRで の至適性能を保証。 ■ 信頼性 キャリーオーバーコンタミネーションの除去 により、疑陽性を防止。 ■ 至適化された反応構成分とプロトコール。 図1. U-DNA部位でのウラシル-グルコシル結合の加水分解とアルカリ条件下での加熱による 切断 PCR コアキットPLUSは : ■PCR増幅の前にUNGによってPCR反応成分を処理します。 ■塩基欠落ポリヌクレオチドを最初の解離の際の加熱(95℃)によって 切断します。 ■PCR増幅の間にdTTPをdUTPに置換します。 原 理 ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)によって1分子を10億倍にも増幅でき 機能試験 PCR コアキットPLUSそれぞれのロットの活性はヒトDNAを用いて ますが、そのためにはキャリーオーバーによるコンタミネーションを 防ぐ方法が必要になります。擬似陽性の増幅をもたらすようなコンタ テストされています。 PCR ミネーションは主として前のPCR増幅の産物に由来することが分って います。ウラシルDNAグリコシラーゼによる簡単で効率的な方法は、 製品構成 前のPCR増幅による特異的なPCR産物を酵素的、化学的に変性させ、 1. 2. 3. 4. 5. 6. 本来の鋳型DNAやプライマーは変性させません。 ウラシルDNAグリコシラーゼ(UNG)は、DNAの複製の過程での dUTPのとりこみ、あるいはシトシンの脱アミノ化によって生じた1 ウラシルDNAグリコシラーゼ Taq DNAポリメラーゼ dNTPミックス PCR反応バッファー MgCl2不含PCR反応バッファー MgCl2溶液 100μl 25μl 100μl 1000μl 1000μl 1000μl 本鎖あるいは2本鎖DNAからウラシルを除去する反応を触媒します。 その結果により塩基欠落サイトはアルカリ条件で加熱することにより 切断されます(図1)。RNAおよびdUTPのリボウラシルはUNGの基質 になりません。 免責条項 528ページのno. 19を参照ください。 529ページのno. 48を参照ください。 514 新着情報・製品説明書は(研究用試薬・機器専用)ホームページ http://www.roche-biochem.jpを ご覧ください。 PCR/RT-PCR スタンダードPCRの至適化 PCR オプティマイゼーションキット PCR Optimization Kit 製品番号 11 636 138 001 包装単位 1 キット 5 希望販売価格 ¥70,900 PCR至適化のためのキット 背景情報 本キットはテンプレート/プライマーの組み合わせに、PCR条件を PCR実験の至適な反応条件はテンプレートDNAとそれに対するプ 至適化するために用いられます。キット内には100 μlの反応容量で ライマー対に依存します。多くの応用例で変化する主要なパラメーター 100回ワンステップあるいは50回ツーステップ至適化アッセイ分の はマグネシウム濃度と反応バッファーのpH、それぞれのサイクルス 試薬が含まれます。中の試薬によりバッファーのMgCl2濃度とpHの テップでの温度と時間です(図2参照)。それに加え、いろいろな添加物 至適化が可能となります。DMSOやグリセロール等の試薬は更なる至 がいくつかの応用例で特異性と収量を増加させています。 適化のために含まれています。例えばDMSOは非特異的なプライミン それゆえ一般的には、それぞれ新しいテンプレート/プライマー対に グを減少させること(図1参照)が報告されています。ゼラチンとグリセ はPCR反応条件を至適化することが薦められます。しかし、多くの溶 ロールはPCRの間、Taq DNAポリメラーゼを安定化させるので、収 液の調製は時間がかかり、コンタミネーションの危険を増加させます。 量を増加させます。硫酸アンモニウムもPCRの収量を改善するために PCR オプティマイゼーションキットはPCR実験を至適化するため 用いられます。ready-to-use溶液は時間を短縮し、コンタミネーショ の、簡便で信頼性の高い溶液です。キットは最も汎用される反応条件 ンの危険を最小限にします。 で使用される、いろいろなpHとマグネシウム濃度のバッファーのセッ トを含みます。収量と特異性を増加させるために使用される4種類の 添加物も含みます。 3 4 図2. PCR増幅での効率と特異性におけるMgCl2濃度の効果。ゲノムDNAよりヒトエリスロ ポエチン遺伝子の630 bpフラグメントが異なるMgCl2濃度で増幅された。 PCR M W 0. M 5 m 1. M 0 1. mM 5 2. mM 0 m 2. M 5 3. mM 0 m 3. M 5 m 4. M 0 m M M W M 1 2 PCR/RT-PCR アプリケーション 機能試験 図1. PCR増幅での効率と特異性における各種添加物の効果。ヒトゲノムDNAよりコラーゲ ン遺伝子の1100 bpフラグメントが増幅された。DMSOやグリセロールが増幅の特異 性を増加させるため加えられた。レーン1 : 分子量マーカー、レーン2 : 標準PCR条件、 レーン3 : 5% DMSO添加、レーン4 : 5% DMSOと5% グリセロール添加 PCR オプティマイゼーションキットの各ロットはヒトゲノムDNA の増幅により機能試験済みです。エクソ、エンドヌクレアーゼは検出 されません。またDNAのコンタミネーションも試験されています。 製品構成： 1. 2. 3. 4. 5. 6. A-P.PCR至適化バッファー DMSO ゼラチンストック溶液 硫酸アンモニウムストック溶液 グリセロールストック溶液 MgCl2 ストック溶液 16バイアル×1 ml 1 ml 1 ml 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml それぞれのバッファーのMgCl2濃度とpHは下の表に記載。 pH 8.3 8.6 8.9 9.2 1.0 A E I M MgCl2 concentration (mM) 1.5 2.0 B C F G J K N O 3.5 D H L P 515 新着情報・製品説明書は(研究用試薬・機器専用)ホームページ http://www.roche-biochem.jpを ご覧ください。 5 PCR/RT-PCR スタンダードPCRの至適化 ウラシル-DNA グリコシラーゼ Uracil-DNA Glycosylase リコンビナント、 製品番号 11 444 646 001 包装単位 100 U 希望販売価格 ¥21,700 K 12 アプリケーション 背景情報 U-DNA切断は点特異的突然変異の効率的な増加に使用できます。こ ウ ラ シ ル-DNA グ リ コ シ ラ ー ゼ(UNG)は 一 本 鎖 あ る い は 二 本 鎖 の目的のために、ウラシル-DNAは目的DNAに取り込まれます。プラ DNAのウラシル-グリコシド結合を分解し、ウラシルの削除とDNA内 イマーのアニーリングと酵素的伸長、ライゲーションの後、変異スト にアルカリ感受性無塩基部位を生成します。これらの無塩基部位はヌ ランドの選択は、UNGを用いての野性型ストランドに含まれる、オリ クレアーゼ、熱、アルカリ処理により加水分解されます。 ジナルの無変異のウラシルの分解により行なわれます。 dUTPを含むDNA(U-DNA)は や 法で調製できる。 別の応用としてはPCRのキャリーオーバーの防止があります。PCR DNAの調製法に依存して、本酵素は一般的な、部位特異的、ストラン の間、dUTPはPCR産物に取り込まれます。次の増幅の前に、夾雜 ド特異的U-DNA切断ができます。RNAのリボウラシル残基はUNGの PCR産物はウラシル-DNA グリコシラーゼにより分解されます。酵素 基質とはほとんどなりません。 PCR/RT-PCR は増幅反応の初めに95℃の加熱で失活されます。 U-DNAのストランド 切断はこの加熱過程で同時に行なわれます。 機能試験 キャリーオーバー防止活性は増幅反応の前に、約105 dUを含むテ 規 格 ンプレートを加えることにより分析されました。UNG処理後増幅産物 本酵素は1 unit/μlの濃度で保存バッファー中で供給されます。 は検出されませんでした。酵素はいかなるエキソ、エンドヌクレアー ゼも含まれません。 免責条項 528ページのno. 19を参照ください。 ウラシル-DNAグリコシラーゼ、熱感受性 Uracil-DNA Glycosylase, heat-labile 製品番号 11 775 367 001 包装単位 100 U 11 775 375 001 500 U 希望販売価格 ¥23,400 抽出源：marine bacterium BMTU 3346 アプリケーション ¥87,900 背景情報 サイトダイレクトミュータジェネシスを含む実験に加え、熱感受性 上記のウラシル-DNAグリコシダーゼをご覧ください。 ウラシル-DNAグリコシラーゼ(UNG)はPCR反応間のキャリーオー PCR バーコンタミネーションの保護に特に適しています。この技術ではす 機能試験 べてのPCR反応でデオキシウリジン三リン酸(dUTP)を取り込ませ、 キャリーオーバー保護活性は、PCR反応の前に105 dUTPを含むテ すべてのPCR反応ミクスチャーを熱感受性UNGで前処理します。熱 ンプレートを加える事により分析されます。1 Uの熱感受性ウラシル- サイクリング操作の前に熱感受性UNGを増幅反応ミクスチャーに加 DNAグリコシラーゼでの20℃、10分間処理により、増幅は不可能と え、20℃で10分インキュベートします。典型的なPCR反応バッファー なります。 中の上昇温度ではその酵素活性は特に短く、失活には95℃で2分間し か必要としません。本酵素は のUNGより完全に失活され、熱 サイクリング後活性がより少ないので、ウラシルを含むPCR産物は保 存中より安定です。この熱感受性の性質により、この酵素はキャリー オーバーコンタミネーションの保護の為の優れた選択となります。 注：ジゴキシゲニン-11-dUTPは、グリコシド結合の加水分解のため の部位とはなりません。 ( ウラシルDNAグリコシラーゼ、熱感受性によるキャ リーオーバーの防止を利用したキットの情報は、514 ページのPCRコアキットPLUSをご覧ください。 免責条項 528ページのno. 19を参照ください。 熱感受性ウラシル-DNAグリコシダーゼによるキャリーオーバーの 保護を利用した、PCRコアキットPLUSは514ページをご覧ください。) 規 格 本酵素は1 unit/μlの濃度で保存バッファー中で供給されます。 516 新着情報・製品説明書は(研究用試薬・機器専用)ホームページ http://www.roche-biochem.jpを ご覧ください。 PCR/RT-PCR スタンダードPCRの至適化 T4 ジーン 32 プロテイン T4 Gene 32 Protein ファージ T4amN134/amBL292/amE219感染 製品番号 10 972 983 001 包装単位 100μg 10 972 991 001 500μg 5 希望販売価格 ¥17,400 B由来 アプリケーション ¥64,000 機能試験 T4 ジーン 32 プロテインは一本鎖特異的DNA結合蛋白質です。 非特異的エキソ、エンドヌクレアーゼ、一本鎖DNase(ニッキング PCR時に0.5-1 nmolの濃度で用いることにより長鎖PCR産物の収量 活性)、一本鎖特異エキソヌクレアーゼ、RNaseは検出されません(各 を改善するとの報告があります。更に、血液の存在により起こるPCR 種核酸を基質として、ゲル電気泳動で分析)。 の阻害を防止すると記述されています。 T4 ジーン 32 プロテインは DNA合成の刺激や、点突然変 異のためのDNAの一本鎖部分の安定に用いられてきました。また制限 た。 規 格 T4 ジーン 32 プロテインは1-10mg/mlの濃度で保存バッファー (20 mM Tris-HCl、100 mM NaCl、1 mM EDTA、0.5 mM PCR/RT-PCR 酵素による消化を完全に行なえるよう補助するためにも用いられまし DTT、50% グリセロール(v/v)、pH 約8.0)中、溶液として供給され PCR ています。ゲル電気泳動で95%以上の純度を示します。 517 新着情報・製品説明書は(研究用試薬・機器専用)ホームページ http://www.roche-biochem.jpを ご覧ください。 5 PCR/RT-PCR スタンダードPCRの至適化 アプリケーション 特 徴 製品番号 包装単位 PCR バッファー 製 品 名 ポリメラーゼチェインリアクショ １．滅菌水中25mM MgCl2 溶液 11 699 121 001 それぞれの溶液 セット ン(PCR)での塩化マグネシウム濃 ２．100 mM Tris-HCl、500 2×1 ml PCR Buffer Set 度の至適化 mM KCl (20 ℃ でpH 8.3)の 2×2 ml 希望販売価格 ¥2,300 10x 溶液 MgCl2 不含PCR ポリメラーゼチェインリアクショ 100 mM Tris-HCl、500 mM バッファー、10x 濃縮 ン(PCR)での特異的DNA断片の増 KCl (20℃でpH 8.3) の溶液 PCR Buffer without 幅。このバッファーは10倍濃度で、 MgCl2, 10x conc. 塩化マグネシウムストック溶液と 11 699 105 001 3×1 ml ¥1,600 11 699 113 001 3×1 ml ¥1,600 PCR/RT-PCR 組合せて用いる 塩化マグネシウム ポリメラーゼチェインリアクショ ストック溶液 ン(PCR)での塩化マグネシウム濃 MgCl2 Stock Solution 度の至適化 滅菌水中25 mM MgCl2 溶液 PCRグレード ウォーター Water, PCR Grade アプリケーション 本製品は、すべてのPCR及びRT-PCRでの使用のために、試験され 品質管理されています。ライトサイクラーや従来のサーマルサイクラー 製品番号 03 315 932 001 包装単位 1 ml×25バイアル 希望販売価格 ¥12,800 03 315 959 001 25 ml×1バイアル ¥10,300 03 315 843 001 25 ml×4バイアル ¥25,600 品質管理 エンドヌクレアーゼ、リボヌクレアーゼ、ニッキング活性の不含が 試験され、PCRでルーチン的に機能試験済み。 との組み合わせで使用できます。 すべてのライトサイクラーキットといくつかの増幅用製品−ロシュ・ ダイアグノスティックスより入手可能−には、PCRグレード ウォー ターが含まれます 規 格 特に精製された、再蒸留、脱イオン、オートクレーブ水。エンドヌ PCR クレアーゼ、リボヌクレアーゼ、ニッキング活性は不含。PCRでルー チン的に機能試験済み。20℃でのpH：8.3 518 新着情報・製品説明書は(研究用試薬・機器専用)ホームページ http://www.roche-biochem.jpを ご覧ください。 PCR/RT-PCR その他の試薬 PCRとRT-PCR反応用のプライマー 製 品 名 アプリケーション 特 徴 製品番号 包装単位 ストリップPCRチューブ 8及 び12-ス ト リ ッ プPCRチ ュ ー DNase、RNaseフ リ ー。 薄 壁 11 667 009 001 125ストリップ とキャップ ブはPCRサーマルサイクラーでの PCRチューブがストリップで供給 (8チューブ／ Strip PCR Tubes and 使用にデザインされ、至適で迅速 (8と12ストリップ)。キャップの ストリップ) Caps な熱移送を保証する。特にエキス ストリップはチューブ本体とは別 パ ン ド ハ イ フ ィ デ ィ リ テ ィ PLUS PCRシ ス テ ム( 500ペ ー ジ 参 に供給。各チューブの最大容量は 5 希望販売価格 ¥23,800 室温 200μl。 照)や タ イ タ ン ワ ン チ ュ ー ブRTPCR( 493ペ ー ジ 参 照)で の 使 用に適している。 アプリケーション cDNA合成用 特 徴 p(dN)6 製品番号 包装単位 11 034 731 001 50A260ユニット Primer "random" プライマー p(dT)15 ¥34,000 (2mg、1μmol) cDNA合成用 p(dT)15 10 814 270 001 1A260ユニット (40μg、8nmol) ¥12,200 PCR Primer for cDNA Synthesis 希望販売価格 PCR/RT-PCR 製 品 名 プライマー、ランダム 519 新着情報・製品説明書は(研究用試薬・機器専用)ホームページ http://www.roche-biochem.jpを ご覧ください。 お問い合わせ先 本 社 東京都港区芝2丁目6番1号 試薬・機器 学術問合せ (時間：9：00∼18：00） TEL. 03-5443-5287 FAX. 03-5443-7098 E-mail: [email protected] 注文／納期／発送／在庫 問合せ TEL. 03-5443-5284 FAX. 03-5443-7097 〒105-0014 札 幌 支 店 札幌市中央区北四条東1-2-3 フコク生命ビル7階 TEL. 011-251-1331 FAX. 011-231-1603 〒060-0034 仙 台 支 店 仙台市青葉区立町27番21 仙台橋本ビル6F TEL. 022-224-6491 FAX. 022-267-3877 〒980-0822 関 東 支 店 埼玉県さいたま市中央区新都心11-2 ランドアクシスタワー34F TEL. 048-610-4000 FAX. 048-601-0888 〒330-0081 店 愛知県名古屋市中区錦1-11-11 名古屋インターシティビル7F TEL. 052-220-5741 FAX. 052-220-5742 〒460-0003 名 古 屋 支 大 阪 支 店 豊中市新千里東町1丁目5番3号 千里朝日阪急ビル12F TEL. 06-4863-7621 FAX. 06-4863-7625 〒560-0082 広 島 支 店 広島市中区銀山町3番1号 ひろしまハイビル21 TEL. 082-545-5120 FAX. 082-545-5123 〒730-0022 福 岡 支 店 福岡市博多区博多駅前1丁目4番4号 JPR博多ビル12F TEL. 092-461-1021 FAX. 092-461-1025 〒812-0011 川崎市川崎区東扇島19-2 東扇島C棟1F ロシュ・ダイアグノスティックス(株) TEL. 044-270-2013 FAX. 044-270-2046 〒210-0869 東 扇 島 ロジスティックセンター 520
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