close

Enter

Log in using OpenID

MultiReporter Assay System –Tripluc

embedDownload
16-04
MultiReporter Assay System
®
–Tripluc – Vector Series
Code No.
MRV-101, MRV-102, MRV-103
MRV-201, MRV-202, MRV-203
MRV-301
MRV-501, MRV-502, MRV-503
取扱説明書
TOYOBO CO., LTD. Life Science Department
OSAKA JAPAN
A3556K
33
−目次−
[1] はじめに……………………………………………………………………………
[2] 製品内容 …………………………………………………………………………
[3] MultiReporter Assay System –Tripluc®– ベクターの概要……………………
1. ルシフェラーゼ遺伝子…………………………………………………………
2. short life タイプのルシフェラーゼ遺伝子………………………………………
3. ベクターバックボーン …………………………………………………………
[4] 哺乳類細胞におけるアッセイ方法の概略 ………………………………………
1. 実験フロー ……………………………………………………………………
2. 被験配列(プロモーター)のクローニング ……………………………………
3. 発光の色分離測定……………………………………………………………
[5] ベクターマップ及び配列情報 ……………………………………………………
[6] ベクター制限酵素認識部位及び塩基配列………………………………………
[7] トラブルシューティング……………………………………………………………
[8] 参考文献 …………………………………………………………………………
[9] 関連商品 …………………………………………………………………………
2
3
4
4
4
5
6
6
6
8
10
13
30
30
31
ご注意
本製品は研究用試薬です。診断・臨床用試薬として決して使用しないでください。本製
品の使用にあたっては、実験室での一般の注意事項を厳守し、安全に留意してください。
本製品中のルシフェラーゼ遺伝子の使用にあたっては、独立行政法人産業技術総合
研究所の許諾を受けています。ルシフェラーゼ遺伝子並びにこれらを用いたマルチ遺伝
子転写活性測定技術について、独立行政法人産業技術総合研究所より特許出願中で
す。産業用利用については別途ライセンスが必要となりますので、弊社までお問い合わ
せください。
1
[1] はじめに
レポーター遺伝子を用いた遺伝子発現解析は、レポーター遺伝子に連結されたシス作用性塩基配列(プロモ
ーター、エンハンサー、サイレンサーなど)を含むプラスミドを細胞に導入し、このレポーター酵素の活性を指標
に遺伝子発現を評価する手法です。これまで多くのレポーター酵素が用いられてきましたが、感度が高く、活性
測定が簡便なことから、ルシフェラーゼの発光を利用したシステムが広く用いられています。
産業技術総合研究所・近江谷先生らは、多くの発光酵素(ルシフェラーゼ)をクローニングし、その中から緑色
発光ルシフェラーゼ(Green、最大発光波長 550 nm)、橙色発光ルシフェラーゼ(Orange、580 nm)、赤色発光
ルシフェラーゼ(Red、630 nm)について、哺乳類細胞における発現の実用化に成功しました(1-5)。これらのル
シフェラーゼの発光スペクトルは比較的シャープで、かつ pH の影響を受けることなく安定していることから
(Stable Luciferase)、色分離測定に適しています。弊社では、近江谷先生らとの共同開発により、これらのルシ
フェラーゼを用いて、2 つあるいは 3 つの遺伝子発現を同時に測定することが可能なマルチ遺伝子転写活性測
定システム MultiReporter Assay System –Tripluc®–及び専用のベクターシリーズを開発しました。
本製品には以下の特長があります。
特長 1 3 つの発光スペクトル
緑色発光ルシフェラーゼ
橙色発光ルシフェラーゼ
赤色発光ルシフェラーゼ
SLG
SLO
SLR
最大発光波長(nm)
550
580
630
由来
イリオモテボタル
イリオモテボタル
鉄道虫
アミノ酸配列
野生型
変異体 (T226N)
野生型
3 つの酵素活性は、色分離機能を備えたルミノメーターを用いて分離測定(同時測定)することが可能です。
特に、赤色発光ルシフェラーゼの発光は、実用化ルシフェラーゼの中でも最も長波長側にあります。
特長 2 共通の基質によるアッセイ
いずれのルシフェラーゼも、ホタルルシフェラーゼと同じ D-luciferin を基質としており、1 つの基質で 3 つのル
シフェラーゼ活性を同時に測定することが可能です。従って、従来、複数反応あるいは複数工程で行っていたア
ッセイを、1 ステップで効率よく行うことが可能です。
さらに 3 つのルシフェラーゼを用いることができますので、1 つのルシフェラーゼをコントロール(内部標準)とし
て、2 つの調べたいプロモーターを同時に解析することも可能です。
特長 3 Short life タイプベクター(MRV-501,502,503,511)
細胞内タンパク質半減期を短縮させ、バックグラウンドとなるシグナルが低減されています。サーカディアンリ
ズム解析や刺激応答など、動的な遺伝子発現の解析に最適です。
2
[2] 製品内容
MultiReporter Assay System –Tripluc®– ベクターシリーズ
品名
SLG プロモーター挿入用ベクター
pSLG-test
SLO プロモーター挿入用ベクター
pSLO-test
SLR プロモーター挿入用ベクター
pSLR-test
SLG SV40 コントロールベクター
pSLG-SV40 control
SLO SV40 コントロールベクター
pSLO-SV40 control
SLR SV40 コントロールベクター
pSLR- SV40 control
SLG HSVtk コントロールベクター
pSLG-HSVtk control
SLG Short life タイププロモーター挿入用ベクター
pSLG(PEST)-test
SLO Short life タイププロモーター挿入用ベクター
pSLO(PEST)-test
SLR Short life タイププロモーター挿入用ベクター
pSLR(PEST)-test
3
Size
Code No.
20 g
MRV-101
20 g
MRV-102
20 g
MRV-103
20 g
MRV-201
20 g
MRV-202
20 g
MRV-203
20 g
MRV-301
20 g
MRV-501
20 g
MRV-502
20 g
MRV-503
[3] MultiReporter Assay System –Tripluc®– ベクターの概要
1. ルシフェラーゼ遺伝子
MultiReporter Assay System –Tripluc®– ベクターシリーズは、緑色発光ルシフェラーゼ(SLG、最大発光波
長 550 nm)、橙色発光ルシフェラーゼ(SLO、580 nm)、及び赤色発光ルシフェラーゼ(SLR、630 nm)の 3 色のル
シフェラーゼで構成されます。各ルシフェラーゼの発光スペクトルを図 1 に示します。
SLG
Green Light (λmax = 550 nm)
Orange Light (λmax = 580 nm)
Red Light
(λmax = 630 nm)
SLO
HO
S
N
N
S
SLR
COOH
+ ATP + O2
D-luciferin
Light
Oxyluciferin + AMP + PPi + CO2 +
SLO SLR
図 1. SLG、SLO、SLR の
発光反応と発光スペクトル
相対強度
SLG
Mg2+
c
450
500
550
600
650
波長 (nm)
700
750
2. Short life タイプのルシフェラーゼ遺伝子
一般に、一度発現したルシフェラーゼなどのレポータータンパク質が細胞内に比較的長時間とどまることによっ
てバックグラウンドとなるシグナルが生じ、遺伝子発現の変化を過小評価してしまうケースがあります。Li らは、
マウス ornithine dehydrogenase 由来 PEST 配列をレポーターに付加することによって不安定化させることに成
功しました(6)。Short life タイプベクターはこの技術を応用した高レスポンス型ルシフェラーゼベクターです。
SLG
PEST
(1.6)
SLG(PEST)
120
(5.4)
SLO
SLO
(5.4)
SLO(PEST)
(1.6)
SLR
100
残存活性 (%)
SLG
80
60
40
20
SLR
(2.3)
SLR(PEST)
(1.2)
図 2. スタンドードルシフェラーゼと Short life
タイプルシフェラーゼ
( )内はシクロヘキシミド処理によって見積もられた
細胞内半減期(単位:hr)を示す。
0
0
1
2
3
4
5
6
シク ロヘ キシミド添加後経過時間 (hr)
図3. SLO及びSLO(PEST) の細胞内安定性
SLO 、 SLO(PEST) を発現する CHO 細胞をシクロヘキシミド処理し
®
た 。 残 存 発 光 活 性 を MultiReporter Assay System –Tripluc Detection Reagents を用いて測定し、相 対活性をプロット した。
▲:SLO、●SLO(PEST).
4
AP1/SLO
NFkB/SLR
PM
A
M
1n
PM
A
n
10
M
PM
A
M
0n
10
EG
F
FC
ratio
ratio
10
9
8
7
6
5
4
3
2
1
0
10
9
8
7
6
5
4
3
2
1
0
AP1/SLO(P)
NFkB/SLR(P)
-
S
PM
A
M
1n
PM
A
nM
10
PM
A
M
0n
10
EG
F
FC
S
図 4. Short life タイプルシフェラーゼの初期応答性の向上
AP1 及び NFκB レスポンスエレメントを各レポータールシフェラーゼに連結し、インターナルコントロール
pSLG-HSVtk control とともに、HeLa S3 細胞にコトランスフェクションした。無血清培地に各薬剤を添加し、3 時間
インキュベートした。その後、ルシフェラーゼ活性を測定し、未処理条件を 1 としてプロットした。
3. ベクターバックボーン
MultiReporter Assay System –Tripluc®– ベクターシリーズとして、マルチクローニングサイトを含むプロモー
ター挿入用ベクターである test ベクター、及び control ベクターを取り揃えています。SV40 プロモーターまたは
HSVtk プロモーターを挿入した control ベクターを用途によって使い分けることができます。
MultiReporter Assay System –Tripluc®– ベクターは以下のエレメントを有しております。
SV40 Early Promoter 及び Enhancer (pSLG/SLO/SLR-SV40 control)
Simian virus 40 に由来する転写制御配列であり、様々な細胞種で強力で比較的安定した発現を示します。
発現活性が高いため、トランスフェクション効率の低い細胞株を用いる場合など、シグナルのレベルに問題が
ある場合に特に有効なコントロール用プロモーター配列です。これらのエレメントを含む control ベクターは
SV40 プロモーター内に SV40 の複製起点を有するため、COS-1 及び COS-7 細胞のような SV40 large T
antigen を発現する細胞では、一過性の複製が認められます。
HSVtk Promoter (pSLG-HSVtk control)
Herpes simplex virus thymidine kinase (HSVtk) 由来の転写制御配列プロモーターであり、低レベルの
安定発現プロモーターです。発現活性が低い一方、SV40 プロモーターに比べ薬剤などの実験処理により変
動する可能性が低く、より安定した内部標準として有用なコントロール用プロモーター配列です。
SV40 late poly(A) signal
ポリアデニル化シグナルは RNA Polymerase II の転写終結に寄与し、転写産物の 3’末端に 200∼250 bp
程度のアデノシンを付加します。これにより、RNA の安定性や翻訳効率が増大します。
Background reduction signal
ポリアデニル化シグナルである AATAAA を 2 つ含む SV40 early poly(A) signal をタンデムにルシフェラー
ゼ遺伝子の上流に配置し、より強力な転写終結のためのシグナルとしてベクターバックボーンに起因するノイ
ズシグナルを低減します(7)。マルチクローニングサイトの上流にタンデムに配置されているため、インサート
確認用のプライマーを設計される場合には注意が必要です(p.7 をご参照下さい)。
5
[4] 哺乳類細胞におけるアッセイ方法の概略
1. 実験フロー
SLG/SLO/SLR
(PEST)
SLG/SLO/SLR
(PEST)
被験配列のクローニング
プロモーター挿入用ベクター
pSLG/SLO/SLR-test
pSLG/SLO/SLR(PEST)-test
被験配列
(プロモーターなど)
インターナル
コントロール
コントロールベクター
pSLG/SLO/SLR-SV40 control
pSLG-HSVtk control
トランスフェクション
(一過的発現または安定発現)
細胞
<in vivo 計測>
<in vitro 計測>
®
Tripluc Luciferase
Assay Reagent
薬剤処理など
(必要に応じて)
培養液への
D-luciferinの添加
細胞溶解
薬剤処理など
(必要に応じて)
発光基質の添加
ルミノメーターなど
による分離測定
D-luciferin
(カリウム塩)
ルミノメーターなど
による分離測定
解析
*1 ; より精度の高い測定をしていただくために、SLG、SLO、SLR の発光量ができるだけ同レベルになるように
プラスミドの混合量を調整いただくことをお薦めいたします。この際、SLO、SLR に比べ SLG の発光の相対
レベルが高いため、内部標準としてご利用いただくことをお薦めいたします(内部標準としての SLG をご利
用いただくことで、多くの場合、内部標準として添加いただくプラスミド量を抑えることができます)。
*2 ; 2 色のアッセイでは SLG と SLR の組み合わせをお薦めいたします。
2. 被験配列(プロモーターなど)のクローニング
pSLG-test、pSLO-test、pSLR-test、pSLG(PEST)-test、pSLO(PEST)-test、pSLR(PEST)-test のマルチク
ローニングサイトへプロモーターなどのシスエレメントをクローニングします。
6
被験配列(プロモーターなど)のクローニングには、弊社 high fidelity ホットスタート PCR 酵素 KOD –Plus–
(Code No. KOD-201)や KOD –Plus– Ver.2(Code No. KOD-211)のご使用をお薦めいたします。
インサートをご確認いただくためのコロニーダイレクト PCR あるいはシーケンス反応には、下記の挿入配列確
認用プライマーのご使用をお薦めいたします。
フォワードプライマー
① (pSLG/pSLO/pSLR 共通) 「SLGOR-F primer」
SLGOR-F
CAA TGTATCTTAT
5’ aactcatcaa tgtatcttat
ctcccacacc tccccctgaa
ttacaaataa agcaatagca
tcacaaattt cacaaataaa
gtctgctcga ggtcgacggt
Xho I Sal I
CATGTCTGGA TC
catgtctgga tcataatcag ccataccaca tttgtagagg ttttacttgc tttaaaaaac
cctgaaacat aaaatgaatg caattgttgt tgttaacttg tttattgcag cttataatgg
tcacaaattt cacaaataaa gcattttttt cactgcattc tagttgtggt ttgtccaaac
gcattttttt cactgcattc tagttgtggt ttgtccaaac tcatcaatgt atcttatcat
atcgataagc ttacgcgtgc tagcgcatgc agatctacta gtcggccgga tatcgaattc
Cla I Hind III*1 Mlu I Nhe I Sph I Bgl II Spe I
EcoR V EcoR I
マルチクローニングサイト
ctgcagccca ccaccatgg
Pst I*2
SLG/SLO/SLR
*1 Hind III認識配列はpSLG/SLO/SLR(PEST)-testベクターのプロモーター挿入に用いることはお薦めできません。
*2 Pst I認識配列はSLR遺伝子内にも存在しますので、pSLR-test、pSLR(PEST)-testベクターへのインサートの挿入に用い
ることはお薦めできません。
(注) バックグラウンド低減シグナルとして SV40 poly(A) signal が複数配置されているため、プライマーをマルチ
クローニングサイトの上流近傍に設計されますと、PCR 反応やシーケンス反応を上手く行うことができません。
リバースプライマー
① (pSLG/pSLO 共通)「SLGO-R primer」
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
110
120
130
140
150
160
170
180
5’ ctcgaggtcg acggtatcga taagcttacg cgtgctagcg catgcagatc tactagtcgg ccggatatcg aattcctgca
Xho I Sal I
Cla I Hind III*1 Mlu I Nhe I Sph I Bgl II Spe I
EcoR V EcoR I Pst I
gcccaccacc atggctaacg agatcatcct gcacggcgcc aagcccaggg accccctgga cctgggcacc gccggcattc
GTAGGA CGTGCCGCGG TTCGGGTC
SLG/SLO
SLGO-R primer
agctctacag ggccctgacc
* 数字はpSLG-test、pSLO-test, pSLG(PEST)-test, pSLO(PEST)-testの配列番号を示します。
*1 Hind III認識配列はpSLG(PEST)/SLO(PEST)-testベクターのプロモーター挿入に用いることはお薦めできません。
② (pSLR 用)「SLR-R primer」
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
110
120
130
140
150
160
SLR
170
180
5’ ctcgaggtcg acggtatcga taagcttacg cgtgctagcg catgcagatc tactagtcgg ccggatatcg aattcctgca
Xho I Sal I
Cla I Hind III*1 Mlu I Nhe I Sph I Bgl II Spe I
EcoR V EcoR I Pst I*2
gcccaccacc atggaagaag agaacatcgt gaatggcgat cgccctcggg atctggtgtt ccctggcaca gccggcctgc
GCA CTTACCGCTA GCGGGAGCCC
agctgtatca gtccctgtat
SLR-R primer
* 数字はpSLR-testの配列番号を示します。
*1 Hind III認識配列はpSLR(PEST)-testベクターのプロモーター挿入に用いることはお薦めできません。
*2 Pst I認識配列はSLR遺伝子内にも存在しますので、pSLR-testベクターへのインサートの挿入に用いることはお薦め
できません。
7
3. 発光の色分離測定
MultiReporter Assay System –Tripluc®–の色分離測定には、アトー株式会社「ルミネッセンサーMCA」
(Code No. AB-2250)、あるいは微弱発光対応型マルチラベルプレートリーダー(パーキンエルマー社「ARVO
シリーズ」など)など、色分離機能を備えたルミノメーターを用いることにより分離測定が可能です。
さらに、リアルタイム計測にはアトー株式会社「クロノス」(Code No. AB-2500)による色分離測定が可能です。
(1) チューブタイプルミノメーターを用いた 3 色ルシフェラーゼの分離測定
アトー株式会社「ルミネッセンサーMCA」を用いた測定方法をご紹介します。これらのルミノメーターには、色分
離のため、560 nm ロングパスフィルター(560 nm LP、Filter 1)と 600 nm ロングパスフィルター(600 nm LP、
Filter 2)が内蔵されています。
まず、SLG、SLO、SLR をそれぞれ別々に発現させた細胞を用いて、①フィルターを用いない測定(全光)、②
560 nm LP (Filter 1)透過光の測定、③600 nm LP (Filter 2)透過光の測定を実施し、下記の係数を算出しま
す。
SLG
SLO
SLR
係数名
Filter 1 透過率
Filter 2 透過率
Filter 1 透過率
Filter 2 透過率
Filter 1 透過率
Filter 2 透過率
表記
T1g
T2g
T1o
T2o
T1r
T2r
測定法
SLG 全光に対する Filter 1 透過光の割合
SLG 全光に対する Filter 2 透過光の割合
SLO 全光に対する Filter 1 透過光の割合
SLO 全光に対する Filter 2 透過光の割合
SLR 全光に対する Filter 1 透過光の割合
SLR 全光に対する Filter 2 透過光の割合
3 色のルシフェラーゼを含むサンプル中の SLG、SLO、SLR の発光量を G、O、R とした場合、①フィルターを
用いない測定(全光)光量;F0、②560 nm LP (Filter 1)透過光の測定光量;F1、③600 nm LP (Filter 2)透過光
の測定光量;F2 は下記のように記述されます。
F0 = G + O + R
F1 = T1g * G + T1o * O + T1r * R
F2 = T2g * G + T2o * O + T2r * R
つまり、各係数を決定し、F0、F1、F2 を測定することによって、G、O、R は下記のように算出されます。
G=
(T1o * T2r - T1r * T2o) * F0 + (T2o - T2r) * F1 + (T1r - T1o) * F2
T1g * T2o + T1r * T2g + T1o * T2r - T1g * T2r - T1r * T2o - T1o * T2g
O=
(T1r * T2g - T1g * T2r) * F0 + (T2r - T2g) * F1 + (T1g -T1r) * F2
T1g * T2o + T1r * T2g + T1o * T2r - T1g * T2r - T1r * T2o - T1o * T2g
R=
(T1g * T2o - T1o * T2g) * F0 + (T2g - T2o) * F1 + (T1o - T1g) * F2
T1g * T2o + T1r * T2g + T1o * T2r - T1g * T2r - T1r * T2o - T1o * T2g
係数を予め入力しておくことで、G、O、R を自動で算出することが可能です。
* 上記測定原理は、アトー株式会社より特許出願中です(特開 2004-333457)。
** 2 色の場合の分離測定には、560 nm LP (Filter 1)または 600 nm LP (Filter 2)のいずれかのフィルター、及び全光の測定で色
分離測定が行えます。SLG 及び SLR、SLO 及び SLR をご使用の場合は 600 nm LP (Filter 2)を、SLG 及び SLO をご使用の
場合は 560 nm LP (Filter 1)を選択いただくことをお薦めいたします。
8
(2) プレートリーダーを用いた 3 色ルシフェラーゼの分離測定(*)
パーキンエルマー社「ARVO シリーズ」を用いた測定方法をご紹介します。測定用フィルターとして、①波長
510nm:半値幅 60nm (Filter1)、②595nm:60nm (Filter2)、③660nm:100nm (Filter3)を使用します。
まず、SLG、SLO、SLR をそれぞれ別々に発現させた細胞を用いて、①フィルターを用いない測定(全光)、②
Filter 1 透過光の測定、③Filter 2 透過光の測定、④Filter 3 透過光の測定を実施し、下記の係数を算出します。
SLG
SLO
SLR
係数名
Filter 1 透過率
Filter 2 透過率
Filter 3 透過率
Filter 1 透過率
Filter 2 透過率
Filter 3 透過率
Filter 1 透過率
Filter 2 透過率
Filter 3 透過率
表記
T1g
T2g
T3g
T1o
T2o
T3o
T1r
T2r
T3r
測定法
SLG 全光に対する Filter 1 透過光の割合
SLG 全光に対する Filter 2 透過光の割合
SLG 全光に対する Filter 3 透過光の割合
SLO 全光に対する Filter 1 透過光の割合
SLO 全光に対する Filter 2 透過光の割合
SLO 全光に対する Filter 3 透過光の割合
SLR 全光に対する Filter 1 透過光の割合
SLR 全光に対する Filter 2 透過光の割合
SLR 全光に対する Filter 3 透過光の割合
3 色のルシフェラーゼを含むサンプル中の SLG、SLO、SLR の発光量を G、O、R とした場合、①Filter 1 の測定
光量;F1、②Filter 2 の測定光量;F2、③Filter 3 の測定光量;F3 は下記のように記述されます。
F1
T1g T1o T1r
G
F2
T2g T2o T2r
O
F3
T3g T3o T3r
R
つまり、各係数を決定し、F0、F1、F2 を測定することによって、G、O、R は下記のように算出されます。
-1
G
T1g T1o T1r
O
T2g T2o T2r
F2
R
T3g T3o T3r
F3
F1
この計算は、Microsoft Excel を用いて行うことができます。下記の Microsoft® Excel の関数をご利用ください。
逆行列の算出
算出結果(逆行列)を表示するセル(「3 行×3 列」の範囲)を指定後、「MININVERSE」関数を選択し、元にな
る配列(「3 行×3 列」の範囲)を指定し、「Ctrl キー+ Shift キー」を押しながら「OK」をクリックします。
行列計算
算出結果を表示するセル(「3 行×1 列」の範囲)を指定後、「MMULT」関数を選択し、透過率の逆行列(「3
行×3 列」の範囲)及び測定値の行列(「3 行×1 列」の範囲)の配列 2 つを指定後、「Ctrl キー + Shift キー」
を押しながら「OK」をクリックします。
*特許出願中
9
[5] ベクターマップ及び配列情報
Xho I
Sal I
Cla I
Hind III
Mlu I
Nhe I
Sph I
Bgl II
Spe I
EcoR V
EcoR I
Pst I
Nco I
Apa I 170
(1) pSLG-test、pSLO-test
pSLG-test、pSLO-test
Multiple cloning region
SLG/SLO gene
SV40 late poly(A) signal
-lactamase (Amp (r)) gene
background reduction signal
SLGOR-F primer
SLGO-R primer(complementary)
Poly(A)
Poly(A)
Kpn I 3746
pSLG-test
pSLO-test
1-77
91-1722
1736-1961
2055-2915
3752-4225
3968-3992
105-128
4225 bp
Amp(r)
Sca I 2359
SspI 2035
SLG
/SLO
Poly(A)
Xba I 1723
Not I 1729
Sac I 1962
Sac II 1968
BamH I 1980
Sma I 1974
(2) pSLR-test
pSLR-test
Multiple cloning region
SLR gene
SV40 late poly(A) signal
-lactamase (Amp (r)) gene
background reduction signal
SLGOR-F primer
SLR-R primer(complementary)
Xho I
Sal I
Cla I
Hind III
Mlu I
Nhe I
Sph I
Bgl II
Spe I
EcoR V
EcoR I
Nco I
Poly(A)
Poly(A)
Kpn I 3755
1-77
91-1731
1745-1970
2064-2924
3761-4234
3977-4001
108-130
1
7
16
22
28
34
40
46
52
64
70
76
89
pSLR-test
1
7
16
22
28
34
40
46
52
64
70
89
SLR
4234 bp
Amp(r)
Sca I 2368
SspI 2044
Poly(A)
Xba I 1732
Not I 1738
Sac I 1971
Sac II 1977
BamH I 1989
Sma I 1983
(3) pSLG-SV40 control、pSLO-SV40 control
Xho I 1
Aat I 188
Apa I 355
pSLG-SV40 control、pSLO-SV40 control
SV40 early promoter
7-207
SLG/SLO gene
276-1907
SV40 late poly(A) signal
1921-2144
SV40 enhancer
2145-2389
-lactamase (Amp (r)) gene
2483-3343
background reduction signal
4180-4653
Poly(A)
Poly(A)
Kpn I 4174
pSLG-SV40 control
pSLO-SV40 control
Hind III
Mlu I
Nhe I
Spe I
EcoR V
EcoR I
Pst I
Nco I
SLG
/SLO
4653 bp
Amp(r)
Sca I 2787
Ssp I 2463
10
Poly(A)
SV40
Enhancer
Xba I 1908
Not I 1914
Sac I 2390
Sac II 2396
BamH I 2408
Sma I 2402
207
213
219
237
249
255
261
274
(4) pSLR-SV40 control
Xho I 1
Poly(A)
Poly(A)
Kpn I 4183
pSLR-SV40 control
SV40 early promoter
SLR gene
SV40 late poly(A) signal
SV40 enhancer
-lactamase (Amp (r)) gene
background reduction signal
Hind III
Mlu I
Nhe I
Spe I
EcoR V
EcoR I
Nco I
Aat I 188
7-207
276-1916
1930-2153
2154-2398
2492-3352
4189-4662
pSLR-SV40 control
207
213
219
237
249
255
274
SLR
4662 bp
Amp(r)
Poly(A)
SV40
Enhancer
Sca I 2796
Ssp I 2472
(5) pSLG-HSVtk control
pSLG-HSVtk control
HSVtk promoter
SLG gene
SV40 late poly(A) signal
-lactamase (Amp (r)) gene
background reduction signal
Sac I 2399
Sac II 2405
BamH I 2417
Sma I 2411
Hind III
Nhe I
Sph I
Apa I 383 Bgl II
Spe I
EcoR V
Nco I
Xho I 1
Poly(A)
Poly(A)
Kpn I 3959
7-234
304-1935
1949-2174
2268-3128
3965-4438
Xba I 1917
Not I 1923
235
247
253
259
265
277
302
pSLG-HSVtk control
SLG
4438 bp
Amp(r)
Sca I 2572
Poly(A)
Ssp I 2248
Xba I 1936
Not I 1942
Sac I 2175
Sac II 2181
BamH I 2193
Sma I 2187
(6) pSLG(PEST)-test, pSLO(PEST)-test
Poly(A)
Apa I 170
Poly(A)
Kpn I 3876
pSLG(PEST)-test, pSLO(PEST)-test
Multiple cloning region
SLG/SLO gene
PEST
SV40 late poly(A) signal
-lactamase (Amp (r)) gene
background reduction signal
SLGOR-F primer
SLGO-R primer(complementary)
1-77
91-1719
1720-1842
1860-2090
2185-3045
3876-4355
4098-4122
105-128
pSLG(PEST)-test
pSLO(PEST)-test
SLG
/SLO
4355 bp
PEST
Poly(A)
Amp(r)
Sca I 2489
SspI 2165
Xba I 1853
Not I 1859
Sac I 2092
Sac II 2098
BamH I 2110
Sma I 2104
11
Xho I
Sal I
Cla I
Mlu I
Nhe I
Sph I
Bgl II
Spe I
EcoR V
EcoR I
1
7
16
28
34
40
46
52
64
70
(7) pSLR(PEST)-test
Xho I
Sal I
Cla I
Mlu I
Nhe I
Sph I
Bgl II
Spe I
EcoR V
EcoR I
Poly(A)
Poly(A)
pSLR(PEST)-test
Multiple cloning region
SLR gene
PEST
SV40 late poly(A) signal
-lactamase (Amp (r)) gene
background reduction signal
SLGOR-F primer
SLR-R primer(complementary)
Kpn I 3885
1-77
91-1728
1729-1851
1869-2099
2194-3054
3885-4364
4107-4131
108-130
pSLR(PEST)-test
SLR
4364 bp
PEST
Poly(A)
Amp(r)
Sca I 2498
SspI 2174
Xba I 1862
Not I 1868
Sac I 2101
Sac II 2107
BamH I 2119
Sma I 2113
12
1
7
16
28
34
40
46
52
64
70
[6] ベクター制限酵素認識部位及び塩基配列
(1) pSLG-test、pSLO-test
表 1. pSLG-test、pSLO-test ベクターを 1 または 2 箇所切断する制限酵素
酵素
Acc 65I
Acc I
Acl I
Afl III
Ahd I
Alw 44I
Alw NI
Apa I
Apa LI
Ase I
Ava I
Avi II
Axy I
Bal I
Bam HI
Ban III
Bbs I
Bbu I
Bcg I
Bgl I
Bgl II
Bmr I
Bsa AI
Bsa BI
Bso BI
Bsp 106I
Bsp 1407I
箇所
1
2
2
2
1
2
2
1
2
1
2
1
1
2
1
1
2
1
1
1
1
2
1
2
2
1
1
切断部位
3746
7
263
2239 2612
28 3730
2837
2170 3416
565 3316
170
2170 3416
2666
1 1974
2617
192
1016 1061
1980
16
1152 1630
40
2315
2718
46
2792
563
1183
3752 3989
1 1974
16
368
酵素
Bsp CI
Bsp DI
Bsp MI
Bsr BRI
Bsr DI
Bsr GI
Bss SI
Bst XI
Bst ZI
Bsu 36I
Cfr 9I
Cla I
Drd I
Eag I
Eam 1105I
Ecl HKI
Eco 52I
Eco 81I
Eco ICRI
Eco RI
Eco RV
Fsp I
Hind III
Psp OMI
Kpn I
Mlu I
Msc I
箇所
1
1
2
2
2
1
2
1
2
1
1
1
1
2
1
1
2
1
1
1
1
1
1
1
1
1
2
切断部位
2470
16
1114
651
3752 3989
2601 2783
368
2173 3557
83
58 1730
192
1974
16
3622
58 1730
2837
2837
58 1730
192
1962
70
64
2617
22
170
3746
28
1016 1061
表2. pSLG-test、pSLO-testベクター内に認識部位のない制限酵素
Aat I
Aat II
Acc B7I Acc III
Afe I
Afl II
Age I
Bae I
Bbr PI
Bbv CI
Bfr I
Bln I
Blp I
Bpu 1102I
Bss HII
Bst 1107I
Bst 98I
Bst API
Bst BI
Bst EII
Bst PI
Csp 45I
Csp I
Dra III
Eco 105I Eco 47III
Eco 72I
Eco O65I
Lsp I
Mro I
Nde I
Nru I
Nsi I
Nsp V
Pac I
Pme I
Pml I
Psh AI
Rsr II
Sap I
Sbf I
Sfi I
Sse 8387I Stu I
Swa I
Tth 111I Van 91I
酵素
Nco I
Nhe I
Not I
Nsp I
Pae R7I
Pci I
Psh BI
Psp AI
Pst I
Pvu I
Pvu II
Sac I
Sac II
Sal I
San DI
Sca I
Sex AI
Sgr AI
Sma I
Spe I
Sph I
Ssp I
Tfi I
Vsp I
Xba I
Xho I
Xma I
Aor 51HI
Bsi WI
Bst Z17I
Eco T22I
Pfl FI
Sgf I
箇所
1
1
1
2
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
2
1
1
1
1
2
1
1
1
1
切断部位
89
34
1729
40 3730
1
3730
2666
1974
76
2470
258
1962
1968
7
128
2359
1421
1020 1509
1974
52
40
2035
881
923
2666
1723
1
1974
Asc I
Bsm BI
Cbi I
Fse I
Pfl MI
Sna BI
Avr II
Bsp EI
Cpo I
IPpo I
Pma CI
Srf I
pSLG-test ベクター配列
1
81
161
241
321
ctcgaggtcg
gcccaccacc
agctctacag
gccgacatcc
gtgcagcgag
acggtatcga
atggctaacg
ggccctgacc
tggagaacag
aatagcacca
taagcttacg
agatcatcct
aacttctcct
ctgtagactg
tcttcttcta
cgtgctagcg
gcacggcgcc
tcctgaggga
gctaagtgct
ccccgtgatc
13
catgcagatc
aagcccaggg
ggccctgatc
acgagaacta
gccgccctgt
tactagtcgg
accccctgga
gacgcccaca
cggcctgcgc
acatgggcgt
ccggatatcg
cctgggcacc
ccgaggaggt
cagaacagcg
gatcaccgcc
aattcctgca
gccggcattc
ggtgtcttac
tgatctccgt
accgtgaacg
401
481
561
641
721
801
881
961
1041
1121
1201
1281
1361
1441
1521
1601
1681
1761
1841
1921
2001
2081
2161
2241
2321
2401
2481
2561
2641
2721
2801
2881
2961
3041
3121
3201
3281
3361
3441
3521
3601
3681
3761
3841
3921
4001
4081
4161
acagctacac
aagaacatga
ggcccagtgc
acgccaagga
aacctgagcg
cgtgcccttc
gattcgagga
ttcctggcta
caccgaggtt
gcgccgtgct
gtggacctga
ctacttcaac
acgacgatgg
ctggagtggc
gcccggcgcc
ctcccaccaa
gagctgcgga
gagtttggac
aaccattata
aggtttttta
ctcatgagac
ccttattccc
atcagttggg
cgttttccaa
cggtcgccgc
cagtaagaga
ccgaaggagc
agccatacca
tacttactct
cttccggctg
agatggtaag
ctgagatagg
cttcattttt
gttccactga
tgcaaacaaa
ggcttcagca
accgcctaca
actcaagacg
acgacctaca
gtatccggta
ctgtcgggtt
agcaacgcgg
cagccatacc
atgcaattgt
aaagcatttt
ccataccaca
caattgttgt
gcattttttt
cgagcgggag
tggccctgaa
ctgagcaact
gcaggtggcc
tgcgcttcgt
caccacgcct
gaagttcttc
agagccccct
gccgtggccg
gatcaccccc
ccaccggcaa
aacaagcagg
acatttcttc
tgctgctcca
tgcatcgtgc
gcgcatccgg
agctgctggc
aaaccacaac
agctgcaata
aagcaagtaa
aataaccctg
ttttttgcgg
tgcacgagtg
tgatgagcac
atacactatt
attatgcagt
taaccgcttt
aacgacgagc
agcttcccgg
gctggtttat
ccctcccgta
tgcctcactg
aatttaaaag
gcgtcagacc
aaaaccaccg
gagcgcagat
tacctcgctc
atagttaccg
ccgaactgag
agcggcaggg
tcgccacctc
cctttttacg
acatttgtag
tgttgttaac
tttcactgca
tttgtagagg
tgttaacttg
cactgcattc
ctgctggaga
gaggaacgtg
tcatggcccg
cttattatgt
ccactgcaag
tcggaatgtt
ctgagcacca
ggtggaccag
tggccaagcg
cacgacgacg
gtccctggga
ccaccgagga
gtggtggacc
gcacccatcc
tccaggaggg
ggcggagtcg
ccagaagaag
tagaatgcag
aacaagttaa
aacctctaca
ataaatgctt
cattttgcct
ggttacatcg
ttttaaagtt
ctcagaatga
gctgccataa
tttgcacaac
gtgacaccac
caacaattaa
tgctgataaa
tcgtagttat
attaagcatt
gatctaggtg
ccgtagaaaa
ctaccagcgg
accaaatact
tgctaatcct
gataaggcgc
atacctacag
tcggaacagg
tgacttgagc
gttcctggcc
aggttttact
ttgtttattg
ttctagttgt
ttttacttgc
tttattgcag
tagttgtggt
ccctgaacat
aacttcatca
gtactccgag
cctcctctgg
gaccccctgt
cacaaccctg
tcgagaagta
tacgacctgt
gctgaagatc
tgaagaccgg
cctaacaaga
ggccatcgac
ggctgaaaga
atcaaggatg
caagagcctg
tcttcgtgga
tccaagctgt
tgaaaaaaat
caacaacaat
aatgtggtat
caataatatt
tcctgttttt
aactggatct
ctgctatgtg
cttggttgag
ccatgagtga
atgggggatc
gatgcctgta
tagactggat
tctggagccg
ctacacgacg
ggtaactgtc
aagatccttt
gatcaaagga
tggtttgttt
gttcttctag
gttaccagtg
agcggtcggg
cgtgagctat
agagcgcacg
gtcgattttt
ttttgctggc
tgctttaaaa
cagcttataa
ggtttgtcca
tttaaaaaac
cttataatgg
ttgtccaaac
ctccaagccc
agaaggtggt
cccaacctgg
caccaccggc
tcggcaccag
tcctacttca
cagaatccca
ccagcatcag
ggcggcatcc
ctccaccggc
gaggcgagct
aaggagggct
gctgatcaag
ccggcgtgac
accgagcagg
cgacatcccc
aatctagagc
gctttatttg
tgcattcatt
ggagctcccg
gaaaaaggaa
gctcacccag
caacagcggt
gcgcggtatt
tactcaccag
taacactgcg
atgtaactcg
gcaatggcaa
ggaggcggat
gtgagcgtgg
gggagtcagg
agaccaagtt
ttgataatct
tcttcttgag
gccggatcaa
tgtagccgta
gctgctgcca
ctgaacgggg
gagaaagcgc
agggagcttc
gtgatgctcg
cttttgctca
aacctcccac
tggttacaaa
aactcatcaa
ctcccacacc
ttacaaataa
tcatcaatgt
gaactggtgt
gctgctggac
acgtgagaaa
ctgccaaagg
aaccatcccc
tcgtgggcct
acaatcgtgc
agaggtggcc
tccagggcta
agggtagccc
gtgcttcaag
ggctgcactc
tacaagggct
cggcgtgccc
agatcatcga
aagggcgcca
ggccgcccag
tgaaatttgt
ttatgtttca
cggcccgggg
gagtatgagt
aaacgctggt
aagatccttg
atcccgtatt
tcacagaaaa
gccaacttac
ccttgatcgt
caacgttgcg
aaagttgcag
gtctcgcggt
caactatgga
tactcatata
catgaccaaa
atcctttttt
gagctaccaa
gttaggccac
gtggcgataa
ggttcgtgca
cacgcttccc
cagggggaaa
tcaggggggc
catgttcttt
acctccccct
taaagcaata
tgtatcttat
tccccctgaa
agcaatagca
atcttatcat
tctgctccaa
agcaaggagg
cttcaagcca
gcgtggtgct
tccacctcca
gagagtggtg
tggcccctcc
accggcggcg
cggcctgacc
cctacgtgca
agcgagatca
cggcgacgtg
accaggtggc
gacgaggccg
ctacatcgcc
ccggcaagct
acatgataag
gatgctattg
ggttcagggg
gatcctcaaa
attcaacatt
gaaagtaaaa
agagttttcg
gacgccgggc
gcatcttacg
ttctgacaac
tgggaaccgg
caaactatta
gaccacttct
atcattgcag
tgaacgaaat
tactttagat
atcccttaac
tctgcgcgta
ctctttttcc
cacttcaaga
gtcgtgtctt
cacagcccag
gaagggagaa
cgcctggtat
ggagcctatg
cctgcggtac
gaacctgaaa
gcatcacaaa
catgtctgga
cctgaaacat
tcacaaattt
gtctg
gaaggccatc
atatgggcga
agggacttcg
gacccacagg
tcctgtccat
ctgctgaaga
tgtgatggtg
cccctgtggg
gagacctgct
ggctaagatc
tcatgaaggg
ggatactacg
ccccgccgag
ccggcgagct
gagcgagtgt
ggtgagaagc
atacattgat
ctttatttgt
gaggtgtggg
tatgtatccg
tccgtgtcgc
gatgctgaag
ccccgaagaa
aagagcaact
gatggcatga
gatcggagga
agctgaatga
actggcgaac
gcgctcggcc
cactggggcc
agacagatcg
tgatttaaaa
gtgagttttc
atctgctgct
gaaggtaact
actctgtagc
accgggttgg
cttggagcga
aggcggacag
ctttatagtc
gaaaaacgcc
cgatcataat
cataaaatga
tttcacaaat
tcataatcag
aaaatgaatg
cacaaataaa
pSLO-test ベクター配列
1 ctcgaggtcg acggtatcga taagcttacg cgtgctagcg catgcagatc tactagtcgg ccggatatcg aattcctgca
81 gcccaccacc atggctaacg agatcatcct gcacggcgcc aagcccaggg accccctgga cctgggcacc gccggcattc
161 agctctacag ggccctgacc aacttctcct tcctgaggga ggccctgatc gacgcccaca ccgaggaggt ggtgtcttac
241 gccgacatcc tggagaacag ctgtagactg gctaagtgct acgagaacta cggcctgcgc cagaacagcg tgatctccgt
14
321
401
481
561
641
721
801
881
961
1041
1121
1201
1281
1361
1441
1521
1601
1681
1761
1841
1921
2001
2081
2161
2241
2321
2401
2481
2561
2641
2721
2801
2881
2961
3041
3121
3201
3281
3361
3441
3521
3601
3681
3761
3841
3921
4001
4081
4161
gtgcagcgag
acagctacac
aagaacatga
ggcccagtgc
acgccaagga
aacctgagcg
cgtgcccttc
gattcgagga
ttcctggcta
caccgaggtt
gcgccgtgct
gtggacctga
ctacttcaac
acgacgatgg
ctggagtggc
gcccggcgcc
ctcccaccaa
gagctgcgga
gagtttggac
aaccattata
aggtttttta
ctcatgagac
ccttattccc
atcagttggg
cgttttccaa
cggtcgccgc
cagtaagaga
ccgaaggagc
agccatacca
tacttactct
cttccggctg
agatggtaag
ctgagatagg
cttcattttt
gttccactga
tgcaaacaaa
ggcttcagca
accgcctaca
actcaagacg
acgacctaca
gtatccggta
ctgtcgggtt
agcaacgcgg
cagccatacc
atgcaattgt
aaagcatttt
ccataccaca
caattgttgt
gcattttttt
aatagcacca
cgagcgggag
tggccctgaa
ctgagcaact
gcaggtggcc
tgcgcttcgt
caccacgcct
gaagttcttc
agagccccct
gccgtggccg
gatcaccccc
ccaccggcaa
aacaagcagg
acatttcttc
tgctgctcca
tgcatcgtgc
gcgcatccgg
agctgctggc
aaaccacaac
agctgcaata
aagcaagtaa
aataaccctg
ttttttgcgg
tgcacgagtg
tgatgagcac
atacactatt
attatgcagt
taaccgcttt
aacgacgagc
agcttcccgg
gctggtttat
ccctcccgta
tgcctcactg
aatttaaaag
gcgtcagacc
aaaaccaccg
gagcgcagat
tacctcgctc
atagttaccg
ccgaactgag
agcggcaggg
tcgccacctc
cctttttacg
acatttgtag
tgttgttaac
tttcactgca
tttgtagagg
tgttaacttg
cactgcattc
tcttcttcta
ctgctggaga
gaggaacgtg
tcatggcccg
cttattatgt
ccactgcaag
tcggaatgtt
ctgagcacca
ggtggaccag
tggccaagcg
cacgacgacg
gtccctggga
ccaccgagga
gtggtggacc
gcacccatcc
tccaggaggg
ggcggagtcg
ccagaagaag
tagaatgcag
aacaagttaa
aacctctaca
ataaatgctt
cattttgcct
ggttacatcg
ttttaaagtt
ctcagaatga
gctgccataa
tttgcacaac
gtgacaccac
caacaattaa
tgctgataaa
tcgtagttat
attaagcatt
gatctaggtg
ccgtagaaaa
ctaccagcgg
accaaatact
tgctaatcct
gataaggcgc
atacctacag
tcggaacagg
tgacttgagc
gttcctggcc
aggttttact
ttgtttattg
ttctagttgt
ttttacttgc
tttattgcag
tagttgtggt
ccccgtgatc
ccctgaacat
aacttcatca
gtactccgag
cctcctctgg
gaccccctgt
cacaaccctg
tcgagaagta
tacgacctgt
gctgaagatc
tgaagaccgg
cctaacaaga
ggccatcgac
ggctgaaaga
atcaaggatg
caagagcctg
tcttcgtgga
tccaagctgt
tgaaaaaaat
caacaacaat
aatgtggtat
caataatatt
tcctgttttt
aactggatct
ctgctatgtg
cttggttgag
ccatgagtga
atgggggatc
gatgcctgta
tagactggat
tctggagccg
ctacacgacg
ggtaactgtc
aagatccttt
gatcaaagga
tggtttgttt
gttcttctag
gttaccagtg
agcggtcggg
cgtgagctat
agagcgcacg
gtcgattttt
ttttgctggc
tgctttaaaa
cagcttataa
ggtttgtcca
tttaaaaaac
cttataatgg
ttgtccaaac
15
gccgccctgt
ctccaagccc
agaaggtggt
cccaacctgg
caccaccggc
tcggcaacag
tcctacttca
cagaatccca
ccagcatcag
ggcggcatcc
ctccaccggc
gaggcgagct
aaggagggct
gctgatcaag
ccggcgtgac
accgagcagg
cgacatcccc
aatctagagc
gctttatttg
tgcattcatt
ggagctcccg
gaaaaaggaa
gctcacccag
caacagcggt
gcgcggtatt
tactcaccag
taacactgcg
atgtaactcg
gcaatggcaa
ggaggcggat
gtgagcgtgg
gggagtcagg
agaccaagtt
ttgataatct
tcttcttgag
gccggatcaa
tgtagccgta
gctgctgcca
ctgaacgggg
gagaaagcgc
agggagcttc
gtgatgctcg
cttttgctca
aacctcccac
tggttacaaa
aactcatcaa
ctcccacacc
ttacaaataa
tcatcaatgt
acatgggcgt
gaactggtgt
gctgctggac
acgtgagaaa
ctgccaaagg
aaccatcccc
tcgtgggcct
acaatcgtgc
agaggtggcc
tccagggcta
agggtagccc
gtgcttcaag
ggctgcactc
tacaagggct
cggcgtgccc
agatcatcga
aagggcgcca
ggccgcccag
tgaaatttgt
ttatgtttca
cggcccgggg
gagtatgagt
aaacgctggt
aagatccttg
atcccgtatt
tcacagaaaa
gccaacttac
ccttgatcgt
caacgttgcg
aaagttgcag
gtctcgcggt
caactatgga
tactcatata
catgaccaaa
atcctttttt
gagctaccaa
gttaggccac
gtggcgataa
ggttcgtgca
cacgcttccc
cagggggaaa
tcaggggggc
catgttcttt
acctccccct
taaagcaata
tgtatcttat
tccccctgaa
agcaatagca
atcttatcat
gatcaccgcc
tctgctccaa
agcaaggagg
cttcaagcca
gcgtggtgct
tccacctcca
gagagtggtg
tggcccctcc
accggcggcg
cggcctgacc
cctacgtgca
agcgagatca
cggcgacgtg
accaggtggc
gacgaggccg
ctacatcgcc
ccggcaagct
acatgataag
gatgctattg
ggttcagggg
gatcctcaaa
attcaacatt
gaaagtaaaa
agagttttcg
gacgccgggc
gcatcttacg
ttctgacaac
tgggaaccgg
caaactatta
gaccacttct
atcattgcag
tgaacgaaat
tactttagat
atcccttaac
tctgcgcgta
ctctttttcc
cacttcaaga
gtcgtgtctt
cacagcccag
gaagggagaa
cgcctggtat
ggagcctatg
cctgcggtac
gaacctgaaa
gcatcacaaa
catgtctgga
cctgaaacat
tcacaaattt
gtctg
accgtgaacg
gaaggccatc
atatgggcga
agggacttcg
gacccacagg
tcctgtccat
ctgctgaaga
tgtgatggtg
cccctgtggg
gagacctgct
ggctaagatc
tcatgaaggg
ggatactacg
ccccgccgag
ccggcgagct
gagcgagtgt
ggtgagaagc
atacattgat
ctttatttgt
gaggtgtggg
tatgtatccg
tccgtgtcgc
gatgctgaag
ccccgaagaa
aagagcaact
gatggcatga
gatcggagga
agctgaatga
actggcgaac
gcgctcggcc
cactggggcc
agacagatcg
tgatttaaaa
gtgagttttc
atctgctgct
gaaggtaact
actctgtagc
accgggttgg
cttggagcga
aggcggacag
ctttatagtc
gaaaaacgcc
cgatcataat
cataaaatga
tttcacaaat
tcataatcag
aaaatgaatg
cacaaataaa
(2) pSLR-test
表1.pSLR-test ベクターを 1 または 2 箇所切断する制限酵素
酵素
Acc 65I
Acc I
Acl I
Afl III
Ahd I
Alw 44I
Apa LI
Ase I
Avi II
Axy I
Bam HI
Ban III
Bbe I
Bbs I
Bbu I
Bbv CI
Bci VI
Bcl I
Bgl I
Bgl II
Bmr I
Bsa I
Bse RI
Bsp 106I
Bsp 1407I
Bsp CI
Bsp DI
Bsp MI
Bsr BI
Bsr DI
Bsr GI
Bss SI
Bst BI
箇所
1
1
2
2
2
2
2
1
1
1
1
1
1
1
1
1
2
2
2
1
1
2
1
1
1
2
1
1
2
2
1
2
1
切断部位
3755
7
2248 2621
28 3739
1070 2846
2179 3425
2179 3425
2675
2626
694
1989
16
1162
903
40
1686
2003 3530
662
707
1658 2727
46
2801
2779 1111
944
16
404
117 2479
16
1616
1736 2007
2610 2792
404
2182 3566
250
酵素
Bst EII
Bst PI
Bst XI
Bst ZI
Bsu 36I
Cbi I
Cfr 9I
Cla I
Csp 45I
Drd I
Eag I
Eam 1104I
Eam 1105I
Ear I
Ecl HKI
Eco 52I
Eco 81I
Eco ICRI
Eco O65I
Eco RI
Eco RV
Eco T14I
Ehe I
Fba I
Fsp I
Hind III
Kas I
Kpn I
Lsp I
Mlu I
Mly I
Nar I
Nco I
箇所
1
1
1
2
1
1
1
1
1
1
2
2
2
2
2
2
1
1
1
1
1
1
1
2
1
1
1
1
1
1
2
1
1
表 2. pSLR-test ベクター内に認識部位のない制限酵素
Aat I
Aat II
Acc B7I Acc III
Afe I
Avr II
Bae I
Bbr PI
Bfr I
Bln I
Bsp EI
Bss HII
Bst 1107I
Bst 98I
Bst API
Eco 105I Eco 47III Eco 72I
Eco O109I Eco T22I
Nsi I
Pac I
Pfl FI
Pfl MI
Pma CI
Rsr II
San DI
Sap I
Sfi I
Sna BI
切断部位
1599
1599
83
58 1739
694
250
1983
16
250
3631
58 1739
97 2057
1070 2846
97 2057
1070 2846
58 1739
694
1971
1599
70
64
89
1162
662
707
2626
22
1162
3755
250
28
3369 2852
1162
89
Afl II
Blp I
Bst Z17I
Fse I
Pme I
Srf I
Age I
Bpu 1102I
Btr I
IPpo I
Pml I
Stu I
酵素
Nhe I
Not I
Nsp V
Pae R7I
Pci I
Ple I
Psh BI
Psp 1406I
Psp AI
Pvu I
Pvu II
Sac I
Sac II
Sal I
Sbf I
Sca I
Sex AI
Sfo I
Sgf I
Sgr AI
Sma I
Spe I
Sph I
Sse 8387I
Ssp I
Sty I
Vsp I
Xba I
Xcm I
Xho I
Xma I
Xmn I
Aor 51HI
Bsa AI
Cpo I
Mro I
Ppu MI
Swa I
箇所
1
1
1
1
1
2
1
2
1
2
2
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
2
1
1
1
切断部位
34
1738
250
1
3739
2852 3369
2675
2248 2621
1983
117 2479
160 1519
1971
1977
7
1089
2368
1424
1162
116
1341
1983
52
40
1089
2044
89
2675
1732
968 1307
1
1983
2247
Apa I
Bsi WI
Csp I
Nde I
Psh AI
Tth 111I
Asc I
Bsm BI
Dra III
Nru I
Psp OMI
Van 91I
pSLR-test ベクター配列
1
91
161
241
ctcgaggtcg
gcccaccacc
agctgtatca
gcccagattt
acggtatcga
atggaagaag
gtccctgtat
tcgaaacaag
taagcttacg
agaacatcgt
aaatactctt
ttgccgcctg
cgtgctagcg
gaatggcgat
acatcaccga
gccgtgagcc
16
catgcagatc
cgccctcggg
cggaatcatc
tggagaagta
tactagtcgg
atctggtgtt
gacgcccaca
tggcctggat
ccggatatcg
ccctggcaca
ccaacgaggt
cacaacaacg
aattcctgca
gccggcctgc
gatctcctat
tggtggccat
321
401
481
561
641
721
801
881
961
1041
1121
1201
1281
1361
1441
1521
1601
1681
1761
1841
1921
2002
2081
2161
2241
2321
2401
2481
2561
2641
2721
2801
2881
2961
3041
3121
3201
3281
3361
3441
3521
3601
3681
3761
3841
3921
4001
4081
4161
ttgcagcgag
atatgtacac
ccattcatcc
cgtggagtgc
atcccctgga
agcatcacca
cgcccctttc
agtttgaggg
tatctggcca
cagagacatc
gcgccctgat
gtgattgaca
gggctaccac
acgacgagga
gagctggaga
gctgccttcc
tgaccaccac
aacgagctga
tacattgatg
tttatttgta
aggtgtggga
atgtatccgc
ccgtgtcgcc
atgctgaaga
cccgaagaac
agagcaactc
atggcatgac
atcggaggac
gctgaatgaa
ctggcgaact
cgctcggccc
actggggcca
gacagatcgc
gatttaaaac
tgagttttcg
tctgctgctt
aaggtaactg
ctctgtagca
ccgggttgga
ttggagcgaa
ggcggacagg
tttatagtcc
aaaaacgcca
gatcataatc
ataaaatgaa
ttcacaaata
cataatcagc
aaatgaatgc
acaaataaag
aacaacatcc
cgagagggag
tgaaggtgca
gtgttcagtt
gagaaccgcg
tcagattcgt
caccacgcct
cgagttcttc
agagccctct
gccgacaagg
cctgagcccc
tcaacaccgg
aacaacccac
cagattcatc
acttgcttct
gcctgtgtcg
caagcacctg
gggccatctt
agtttggaca
accattataa
ggttttttaa
tcatgagaca
cttattccct
tcagttgggt
gttttccaat
ggtcgccgca
agtaagagaa
cgaaggagct
gccataccaa
acttactcta
ttccggctgg
gatggtaagc
tgagataggt
ttcattttta
ttccactgag
gcaaacaaaa
gcttcagcag
ccgcctacat
ctcaagacga
cgacctacac
tatccggtaa
tgtcgggttt
gcaacgcggc
agccatacca
tgcaattgtt
aagcattttt
cataccacat
aattgttgtt
catttttttc
acttcttcgg
atgatcggcc
gaagcacctg
tcgtgtcccg
ctgatcatga
ccacagcagc
tcggactgtt
ctgaagacca
ggtggatgag
tggccaagag
aacgatagag
caaagccctg
aggccaccag
tatgtggtgg
gcagcaccct
tgctggagcc
cggggcggcg
tgcccgcgag
aaccacaact
gctgcaataa
agcaagtaaa
ataaccctga
tttttgcggc
gcacgagtgg
gatgagcact
tacactattc
ttatgcagtg
aaccgctttt
acgacgagcg
gcttcccggc
ctggtttatt
cctcccgtat
gcctcactga
atttaaaagg
cgtcagaccc
aaaccaccgc
agcgcagata
acctcgctct
tagttaccgg
cgaactgaga
gcggcagggt
cgccacctct
ctttttacgg
catttgtaga
gttgttaact
ttcactgcat
ttgtagaggt
gttaacttgt
actgcattct
ccctctgatc
acctgaacat
gactttctca
gtacaccgat
catcctctgg
gatcccatct
taccgccctg
tccagaacta
tacaatctgt
actgaaggtc
agctgaagaa
ggaccaagag
ggatgccctg
atcggctgaa
aacatctctg
tggcaagacc
tggtgttcat
caggccaagt
agaatgcagt
acaagttaac
acctctacaa
taaatgcttc
attttgcctt
gttacatcga
tttaaagttc
tcagaatgac
ctgccataac
ttgcacaaca
tgacaccacg
aacaattaat
gctgataaat
cgtagttatc
ttaagcattg
atctaggtga
cgtagaaaag
taccagcggt
ccaaatactg
gctaatcctg
ataaggcgca
tacctacagc
cggaacagga
gacttgagcg
ttcctggcct
ggttttactt
tgtttattgc
tctagttgtg
tttacttgct
ttattgcagc
agttgtggtt
17
gctgccctat
ctccaagcca
agaaggtgat
catgcgttcg
aacaaccggc
acggcacccg
gcttactttc
caagatcgct
ccagcctgac
cacggcatcc
gggcgccatc
agaagggcga
gacaaggacg
agaactcatc
atgccggcgt
atgaccgaga
cgacagcatt
ccaagctgta
gaaaaaaatg
aacaacaatt
atgtggtatg
aataatattg
cctgtttttg
actggatctc
tgctatgtgg
ttggttgagt
catgagtgat
tgggggatca
atgcctgtag
agactggatg
ctggagccgg
tacacgacgg
gtaactgtca
agatcctttt
atcaaaggat
ggtttgtttg
ttcttctagt
ttaccagtgg
gcggtcgggc
gtgagctatg
gagcgcacga
tcgatttttg
tttgctggcc
gctttaaaaa
agcttataat
gtttgtccaa
ttaaaaaacc
ttataatggt
tgtccaaact
accaggggat
tgtctgatgt
cgtgatcgac
atccagtgaa
ctgcctaagg
catcgcccca
cagtgggcct
tctatcgtgg
agagatcgcc
tgcagggcta
ggcaccccta
gatttgcttc
ggtggctgca
aagtacaagg
catcggcatc
aggaggtgca
ccgaaaggcc
atctagagcg
ctttatttgt
gcattcattt
gagctcccgc
aaaaaggaag
ctcacccaga
aacagcggta
cgcggtatta
actcaccagt
aacactgcgg
tgtaactcgc
caatggcaac
gaggcggata
tgagcgtggg
ggagtcaggc
gaccaagttt
tgataatctc
cttcttgaga
ccggatcaag
gtagccgtag
ctgctgccag
tgaacggggg
agaaagcgcc
gggagcttcc
tgatgctcgt
ttttgctcac
acctcccaca
ggttacaaat
actcatcaat
tcccacacct
tacaaataaa
catcaatgta
tccaatggcc
tctgttccaa
agcatgtacg
gttcaaccct
gcgtggtgat
gatacatcca
gaagatcgtg
tgcctcctcc
tgtggcggct
tggcctgacc
tgccctatgt
aagagccaga
caccggcgat
gctaccaggt
ccagacgagt
ggattatatc
caacaggcaa
gccgcccaga
gaaatttgtg
tatgtttcag
ggcccggggg
agtatgagta
aacgctggtg
agatccttga
tcccgtattg
cacagaaaag
ccaacttact
cttgatcgtt
aacgttgcgc
aagttgcagg
tctcgcggta
aactatggat
actcatatat
atgaccaaaa
tccttttttt
agctaccaac
ttaggccacc
tggcgataag
gttcgtgcac
acgcttcccg
agggggaaac
caggggggcg
atgttctttc
cctccccctg
aaagcaatag
gtatcttatc
ccccctgaac
gcaatagcat
tcttatcatg
acatccaacg
gaagtccctg
acatcaacgg
aaagagtttg
cagccacagg
tcctggccat
atggtgaaaa
aatcatggtg
cccctctggg
gagacctgta
ccaggtgaag
tgctgatgaa
ctgggctact
ggcccctgcc
ttgccggcca
gccgagctgg
gctgatgaga
catgataaga
atgctattgc
gttcaggggg
atcctcaaat
ttcaacattt
aaagtaaaag
gagttttcgc
acgccgggca
catcttacgg
tctgacaacg
gggaaccgga
aaactattaa
accacttctg
tcattgcagc
gaacgaaata
actttagatt
tcccttaacg
ctgcgcgtaa
tctttttccg
acttcaagaa
tcgtgtctta
acagcccagc
aagggagaaa
gcctggtatc
gagcctatgg
ctgcggtacc
aacctgaaac
catcacaaat
atgtctggat
ctgaaacata
cacaaatttc
tctg
(3) pSLG-SV40 control、pSLO-SV40 control
表 1. pSLG-SV40 control、pSLO-SV40 control ベクターを 1∼5 箇所切断する制限酵素
酵素
Aat I
Acc 65I
Acc I
Acl I
Afl III
Ahd I
Alw 44I
Alw NI
Apa I
Apa LI
Ase I
Ava I
Avi II
Avr II
Axy I
Bal I
Bam HI
Bbs I
Bcg I
Bgl I
Bln I
Bsa AI
Bso BI
Bsp 1407I
Bsp CI
Bsp MI
箇所
1
1
1
2
2
1
2
2
1
2
1
2
1
1
1
2
1
2
1
2
1
1
2
1
1
2
切断部位
188
4174
448
2667 3040
213 4158
3265
2598 3844
750 3744
355
2598 3844
3094
1 2402
3045
191
377
1201 1246
2408
1337 1815
2743
138 3146
191
1368
1 2402
553
2898
1299
836
酵素
Bsr DI
Bsr GI
Bss SI
Bst API
Bst XI
Bst ZI
Bsu 36I
Cfr 9I
Drd I
Eag I
Eam 1105I
Ecl HKI
Eco 52I
Eco 81I
Eco ICRI
Eco RI
Eco RV
Eco T22I
Fsp I
Hind III
Kpn I
Mlu I
Msc I
Nco I
Nhe I
Not I
箇所
2
1
2
2
1
2
1
1
1
2
1
1
2
1
1
1
1
2
1
1
1
1
2
1
1
1
切断部位
3029 3211
553
2601 3985
2244 2316
268
243 1915
377
2402
4050
243 1915
3265
3265
243 1915
377
2390
255
249
2242 2314
3045
207
4174
213
1201 1246
274
219
1914
酵素
Nsi I
Pae R7I
Pci I
Psh BI
Psp 1406I
Psp AI
Psp OMI
Pst I
Pvu I
Pvu II
Sac I
Sac II
San DI
Sca I
Sex AI
Sfi I
Sgr AI
Sma I
Spe I
Ssp I
Stu I
Tfi I
Vsp I
Xba I
Xho I
Xma I
箇所
2
1
1
1
2
1
1
1
1
1
1
1
1
1
2
1
2
1
1
1
1
2
1
1
1
1
切断部位
2242 2314
1
4158
3094
2667 3040
2402
355
261
2898
443
2390
2396
313
2787
1606 2292
137
1205 1694
2402
237
2463
188
1066 1108
3094
1908
1
2402
表 2. pSLG-SV40 control、pSLO-SV40 control ベクター内に認識部位のない制限酵素
Aat II
Acc B7I Acc III
Afe I
Afl II
Age I
Aor 51HI
Asc I
Bae I
Ban III
Bbr PI
Bbv CI
BfrI
Blp I
Bpu 1102I Bsi WI
Bsm BI
Bsp 106I
Bsp EI
Bss HII
Bst 1107I
Bst 98I
Bst BI
Bst EII
Bst PI
Bst Z17I Cbi I
Cpo I
Csp 45I
Csp I
Dra III
Eco 105I Eco 47III Eco 72I
Eco O65I Fse I
Pma CI
Lsp I
Mro I
Nde I
Nru I
Nsp V
Pac I
Pfl FI
Pfl MI
Pml I
Psh AI
Rsr II
Sal I
Sap I
Sbf I
Sgf I
Sna BI
Srf I
Swa I
Tth 111I Van 91I
Bae I
Bsp DI
Cla I
IPpo I
Pme I
Sse 8387I
pSLG-SV40 control ベクター配列
1
81
161
241
321
401
481
561
641
721
801
ctcgagatct
tccgcccatt
ccagaagtag
gtcggccgga
ctggacctgg
ccacaccgag
tgcgccagaa
ggcgtgatca
ggtgttctgc
tggacagcaa
agaaacttca
gcatctcaat
ctccgcccca
tgaggaggct
tatcgaattc
gcaccgccgg
gaggtggtgt
cagcgtgatc
ccgccaccgt
tccaagaagg
ggaggatatg
agccaaggga
tagtcagcaa
tcgctgacta
tttttggagg
ctgcagccca
cattcagctc
cttacgccga
tccgtgtgca
gaacgacagc
ccatcaagaa
ggcgaggccc
cttcgacgcc
ccatagtccc
atttttttta
cctaggcttt
ccaccatggc
tacagggccc
catcctggag
gcgagaatag
tacaccgagc
catgatggcc
agtgcctgag
aaggagcagg
18
gcccctaact
tttatgcaga
tgcaaaaagc
taacgagatc
tgaccaactt
aacagctgta
caccatcttc
gggagctgct
ctgaagagga
caacttcatg
tggcccttat
ccgcccatcc
ggccgaggcc
ttacgcgtgc
atcctgcacg
ctccttcctg
gactggctaa
ttctaccccg
ggagaccctg
acgtgaactt
gcccggtact
tatgtcctcc
cgcccctaac
gcctcggcct
tagcgcatgc
gcgccaagcc
agggaggccc
gtgctacgag
tgatcgccgc
aacatctcca
catcaagaag
ccgagcccaa
tctggcacca
tccgcccagt
ctgagctatt
agatctacta
cagggacccc
tgatcgacgc
aactacggcc
cctgtacatg
agcccgaact
gtggtgctgc
cctggacgtg
ccggcctgcc
881
961
1041
1121
1201
1281
1361
1441
1521
1601
1681
1761
1841
1921
2001
2081
2161
2241
2321
2401
2481
2561
2641
2721
2801
2881
2961
3041
3121
3201
3281
3361
3441
3521
3601
3681
3761
3841
3921
4001
4081
4161
4241
4321
4401
4481
4561
4641
aaagggcgtg
tcccctccac
ggcctgagag
cgtgctggcc
tggccaccgg
ggctacggcc
agccccctac
tcaagagcga
cactccggcg
gggctaccag
tgcccgacga
atcgactaca
cgccaccggc
cccagacatg
tttgtgatgc
tttcaggttc
cggagaatgg
gatgcatgct
ctttgcatac
gcccggggga
gtatgagtat
acgctggtga
gatccttgag
cccgtattga
acagaaaagc
caacttactt
ttgatcgttg
acgttgcgca
agttgcagga
ctcgcggtat
actatggatg
ctcatatata
tgaccaaaat
cctttttttc
gctaccaact
taggccacca
ggcgataagt
ttcgtgcaca
cgcttcccga
gggggaaacg
aggggggcgg
tgttctttcc
ctccccctga
aagcaatagc
tatcttatca
cccctgaacc
caatagcatc
cttatcatgt
gtgctgaccc
ctccatcctg
tggtgctgct
cctcctgtga
cggcgcccct
tgaccgagac
gtgcaggcta
gatcatcatg
acgtgggata
gtggcccccg
ggccgccggc
tcgccgagcg
aagctggtga
ataagataca
tattgcttta
agggggaggt
gcggaactgg
ttgcatactt
ttctgcctgc
tcctcaaata
tcaacatttc
aagtaaaaga
agttttcgcc
cgccgggcaa
atcttacgga
ctgacaacga
ggaaccggag
aactattaac
ccacttctgc
cattgcagca
aacgaaatag
ctttagattg
cccttaacgt
tgcgcgtaat
ctttttccga
cttcaagaac
cgtgtcttac
cagcccagct
agggagaaag
cctggtatct
agcctatgga
tgcggtaccg
acctgaaaca
atcacaaatt
tgtctggatc
tgaaacataa
acaaatttca
ctg
acaggaacct
tccatcgtgc
gaagagattc
tggtgttcct
gtgggcaccg
ctgctgcgcc
agatcgtgga
aagggctact
ctacgacgac
ccgagctgga
gagctgcccg
agtgtctccc
gaagcgagct
ttgatgagtt
tttgtaacca
gtgggaggtt
gcggagttag
ctgcctgctg
tggggagcct
tgtatccgct
cgtgtcgccc
tgctgaagat
ccgaagaacg
gagcaactcg
tggcatgaca
tcggaggacc
ctgaatgaag
tggcgaacta
gctcggccct
ctggggccag
acagatcgct
atttaaaact
gagttttcgt
ctgctgcttg
aggtaactgg
tctgtagcac
cgggttggac
tggagcgaac
gcggacaggt
ttatagtcct
aaaacgccag
atcataatca
taaaatgaat
tcacaaataa
ataatcagcc
aatgaatgca
caaataaagc
gagcgtgcgc
ccttccacca
gaggagaagt
ggctaagagc
aggttgccgt
gtgctgatca
cctgaccacc
tcaacaacaa
gatggacatt
gtggctgctg
gcgcctgcat
accaagcgca
gcggaagctg
tggacaaacc
ttataagctg
ttttaaagca
gggcgggatg
gggagcctgg
ggggactttc
catgagacaa
ttattccctt
cagttgggtg
ttttccaatg
gtcgccgcat
gtaagagaat
gaaggagcta
ccataccaaa
cttactctag
tccggctggc
atggtaagcc
gagataggtg
tcatttttaa
tccactgagc
caaacaaaaa
cttcagcaga
cgcctacata
tcaagacgat
gacctacacc
atccggtaag
gtcgggtttc
caacgcggcc
gccataccac
gcaattgttg
agcatttttt
ataccacatt
attgttgttg
atttttttca
ttcgtccact
cgccttcgga
tcttcctgag
cccctggtgg
ggccgtggcc
ccccccacga
ggcaagtccc
gcaggccacc
tcttcgtggt
ctccagcacc
cgtgctccag
tccggggcgg
ctggcccaga
acaactagaa
caataaacaa
agtaaaacct
ggcggagtta
ggactttcca
cacaccctaa
taaccctgat
ttttgcggca
cacgagtggg
atgagcactt
acactattct
tatgcagtgc
accgcttttt
cgacgagcgt
cttcccggca
tggtttattg
ctcccgtatc
cctcactgat
tttaaaagga
gtcagacccc
aaccaccgct
gcgcagatac
cctcgctctg
agttaccgga
gaactgagat
cggcagggtc
gccacctctg
tttttacggt
atttgtagag
ttgttaactt
tcactgcatt
tgtagaggtt
ttaacttgtt
ctgcattcta
gcaaggaccc
atgttcacaa
caccatcgag
accagtacga
aagcggctga
cgacgtgaag
tgggacctaa
gaggaggcca
ggaccggctg
catccatcaa
gagggcaaga
agtcgtcttc
agaagtccaa
tgcagtgaaa
gttaacaaca
ctacaaatgt
ggggcgggac
cacctggttg
ctgacacaca
aaatgcttca
ttttgccttc
ttacatcgaa
ttaaagttct
cagaatgact
tgccataacc
tgcacaacat
gacaccacga
acaattaata
ctgataaatc
gtagttatct
taagcattgg
tctaggtgaa
gtagaaaaga
accagcggtg
caaatactgt
ctaatcctgt
taaggcgcag
acctacagcg
ggaacaggag
acttgagcgt
tcctggcctt
gttttacttg
gtttattgca
ctagttgtgg
ttacttgctt
tattgcagct
gttgtggttt
cctgttcggc
ccctgtccta
aagtacagaa
cctgtccagc
agatcggcgg
accggctcca
caagagaggc
tcgacaagga
aaagagctga
ggatgccggc
gcctgaccga
gtggacgaca
gctgtaatct
aaaatgcttt
acaattgcat
ggtagatctg
tatggttgct
ctgactaatt
ttccacagcg
ataatattga
ctgtttttgc
ctggatctca
gctatgtggc
tggttgagta
atgagtgata
gggggatcat
tgcctgtagc
gactggatgg
tggagccggt
acacgacggg
taactgtcag
gatccttttt
tcaaaggatc
gtttgtttgc
tcttctagtg
taccagtggc
cggtcgggct
tgagctatga
agcgcacgag
cgatttttgt
ttgctggcct
ctttaaaaaa
gcttataatg
tttgtccaaa
taaaaaacct
tataatggtt
gtccaaactc
accagaacca
cttcatcgtg
tcccaacaat
atcagagagg
catcctccag
ccggcagggt
gagctgtgct
gggctggctg
tcaagtacaa
gtgaccggcg
gcaggagatc
tccccaaggg
agagcggccg
atttgtgaaa
tcattttatg
aacgatggag
gactaattga
gagatgcatg
agctcccgcg
aaaaggaaga
tcacccagaa
acagcggtaa
gcggtattat
ctcaccagtc
acactgcggc
gtaactcgcc
aatggcaaca
aggcggataa
gagcgtgggt
gagtcaggca
accaagttta
gataatctca
ttcttgagat
cggatcaaga
tagccgtagt
tgctgccagt
gaacgggggg
gaaagcgcca
ggagcttcca
gatgctcgtc
tttgctcaca
cctcccacac
gttacaaata
ctcatcaatg
cccacacctc
acaaataaag
atcaatgtat
ccatagtccc
atttttttta
cctaggcttt
ccaccatggc
tacagggccc
gcccctaact
tttatgcaga
tgcaaaaagc
taacgagatc
tgaccaactt
ccgcccatcc
ggccgaggcc
ttacgcgtgc
atcctgcacg
ctccttcctg
cgcccctaac
gcctcggcct
tagcgcatgc
gcgccaagcc
agggaggccc
tccgcccagt
ctgagctatt
agatctacta
cagggacccc
tgatcgacgc
pSLO-SV40 control ベクター配列
1
81
161
241
321
ctcgagatct
tccgcccatt
ccagaagtag
gtcggccgga
ctggacctgg
gcatctcaat
ctccgcccca
tgaggaggct
tatcgaattc
gcaccgccgg
tagtcagcaa
tcgctgacta
tttttggagg
ctgcagccca
cattcagctc
19
401
481
561
641
721
801
881
961
1041
1121
1201
1281
1361
1441
1521
1601
1681
1761
1841
1921
2001
2081
2161
2241
2321
2401
2481
2561
2641
2721
2801
2881
2961
3041
3121
3201
3281
3361
3441
3521
3601
3681
3761
3841
3921
4001
4081
4161
4241
4321
4401
4481
4561
4641
ccacaccgag
tgcgccagaa
ggcgtgatca
ggtgttctgc
tggacagcaa
agaaacttca
aaagggcgtg
tcccctccac
ggcctgagag
cgtgctggcc
tggccaccgg
ggctacggcc
agccccctac
tcaagagcga
cactccggcg
gggctaccag
tgcccgacga
atcgactaca
cgccaccggc
cccagacatg
tttgtgatgc
tttcaggttc
cggagaatgg
gatgcatgct
ctttgcatac
gcccggggga
gtatgagtat
acgctggtga
gatccttgag
cccgtattga
acagaaaagc
caacttactt
ttgatcgttg
acgttgcgca
agttgcagga
ctcgcggtat
actatggatg
ctcatatata
tgaccaaaat
cctttttttc
gctaccaact
taggccacca
ggcgataagt
ttcgtgcaca
cgcttcccga
gggggaaacg
aggggggcgg
tgttctttcc
ctccccctga
aagcaatagc
tatcttatca
cccctgaacc
caatagcatc
cttatcatgt
gaggtggtgt
cagcgtgatc
ccgccaccgt
tccaagaagg
ggaggatatg
agccaaggga
gtgctgaccc
ctccatcctg
tggtgctgct
cctcctgtga
cggcgcccct
tgaccgagac
gtgcaggcta
gatcatcatg
acgtgggata
gtggcccccg
ggccgccggc
tcgccgagcg
aagctggtga
ataagataca
tattgcttta
agggggaggt
gcggaactgg
ttgcatactt
ttctgcctgc
tcctcaaata
tcaacatttc
aagtaaaaga
agttttcgcc
cgccgggcaa
atcttacgga
ctgacaacga
ggaaccggag
aactattaac
ccacttctgc
cattgcagca
aacgaaatag
ctttagattg
cccttaacgt
tgcgcgtaat
ctttttccga
cttcaagaac
cgtgtcttac
cagcccagct
agggagaaag
cctggtatct
agcctatgga
tgcggtaccg
acctgaaaca
atcacaaatt
tgtctggatc
tgaaacataa
acaaatttca
ctg
cttacgccga
tccgtgtgca
gaacgacagc
ccatcaagaa
ggcgaggccc
cttcgacgcc
acaggaacct
tccatcgtgc
gaagagattc
tggtgttcct
gtgggcaccg
ctgctgcgcc
agatcgtgga
aagggctact
ctacgacgac
ccgagctgga
gagctgcccg
agtgtctccc
gaagcgagct
ttgatgagtt
tttgtaacca
gtgggaggtt
gcggagttag
ctgcctgctg
tggggagcct
tgtatccgct
cgtgtcgccc
tgctgaagat
ccgaagaacg
gagcaactcg
tggcatgaca
tcggaggacc
ctgaatgaag
tggcgaacta
gctcggccct
ctggggccag
acagatcgct
atttaaaact
gagttttcgt
ctgctgcttg
aggtaactgg
tctgtagcac
cgggttggac
tggagcgaac
gcggacaggt
ttatagtcct
aaaacgccag
atcataatca
taaaatgaat
tcacaaataa
ataatcagcc
aatgaatgca
caaataaagc
catcctggag
gcgagaatag
tacaccgagc
catgatggcc
agtgcctgag
aaggagcagg
gagcgtgcgc
ccttccacca
gaggagaagt
ggctaagagc
aggttgccgt
gtgctgatca
cctgaccacc
tcaacaacaa
gatggacatt
gtggctgctg
gcgcctgcat
accaagcgca
gcggaagctg
tggacaaacc
ttataagctg
ttttaaagca
gggcgggatg
gggagcctgg
ggggactttc
catgagacaa
ttattccctt
cagttgggtg
ttttccaatg
gtcgccgcat
gtaagagaat
gaaggagcta
ccataccaaa
cttactctag
tccggctggc
atggtaagcc
gagataggtg
tcatttttaa
tccactgagc
caaacaaaaa
cttcagcaga
cgcctacata
tcaagacgat
gacctacacc
atccggtaag
gtcgggtttc
caacgcggcc
gccataccac
gcaattgttg
agcatttttt
ataccacatt
attgttgttg
atttttttca
20
aacagctgta
caccatcttc
gggagctgct
ctgaagagga
caacttcatg
tggcccttat
ttcgtccact
cgccttcgga
tcttcctgag
cccctggtgg
ggccgtggcc
ccccccacga
ggcaagtccc
gcaggccacc
tcttcgtggt
ctccagcacc
cgtgctccag
tccggggcgg
ctggcccaga
acaactagaa
caataaacaa
agtaaaacct
ggcggagtta
ggactttcca
cacaccctaa
taaccctgat
ttttgcggca
cacgagtggg
atgagcactt
acactattct
tatgcagtgc
accgcttttt
cgacgagcgt
cttcccggca
tggtttattg
ctcccgtatc
cctcactgat
tttaaaagga
gtcagacccc
aaccaccgct
gcgcagatac
cctcgctctg
agttaccgga
gaactgagat
cggcagggtc
gccacctctg
tttttacggt
atttgtagag
ttgttaactt
tcactgcatt
tgtagaggtt
ttaacttgtt
ctgcattcta
gactggctaa
ttctaccccg
ggagaccctg
acgtgaactt
gcccggtact
tatgtcctcc
gcaaggaccc
atgttcacaa
caccatcgag
accagtacga
aagcggctga
cgacgtgaag
tgggacctaa
gaggaggcca
ggaccggctg
catccatcaa
gagggcaaga
agtcgtcttc
agaagtccaa
tgcagtgaaa
gttaacaaca
ctacaaatgt
ggggcgggac
cacctggttg
ctgacacaca
aaatgcttca
ttttgccttc
ttacatcgaa
ttaaagttct
cagaatgact
tgccataacc
tgcacaacat
gacaccacga
acaattaata
ctgataaatc
gtagttatct
taagcattgg
tctaggtgaa
gtagaaaaga
accagcggtg
caaatactgt
ctaatcctgt
taaggcgcag
acctacagcg
ggaacaggag
acttgagcgt
tcctggcctt
gttttacttg
gtttattgca
ctagttgtgg
ttacttgctt
tattgcagct
gttgtggttt
gtgctacgag
tgatcgccgc
aacatctcca
catcaagaag
ccgagcccaa
tctggcacca
cctgttcggc
ccctgtccta
aagtacagaa
cctgtccagc
agatcggcgg
accggctcca
caagagaggc
tcgacaagga
aaagagctga
ggatgccggc
gcctgaccga
gtggacgaca
gctgtaatct
aaaatgcttt
acaattgcat
ggtagatctg
tatggttgct
ctgactaatt
ttccacagcg
ataatattga
ctgtttttgc
ctggatctca
gctatgtggc
tggttgagta
atgagtgata
gggggatcat
tgcctgtagc
gactggatgg
tggagccggt
acacgacggg
taactgtcag
gatccttttt
tcaaaggatc
gtttgtttgc
tcttctagtg
taccagtggc
cggtcgggct
tgagctatga
agcgcacgag
cgatttttgt
ttgctggcct
ctttaaaaaa
gcttataatg
tttgtccaaa
taaaaaacct
tataatggtt
gtccaaactc
aactacggcc
cctgtacatg
agcccgaact
gtggtgctgc
cctggacgtg
ccggcctgcc
aacagaacca
cttcatcgtg
tcccaacaat
atcagagagg
catcctccag
ccggcagggt
gagctgtgct
gggctggctg
tcaagtacaa
gtgaccggcg
gcaggagatc
tccccaaggg
agagcggccg
atttgtgaaa
tcattttatg
aacgatggag
gactaattga
gagatgcatg
agctcccgcg
aaaaggaaga
tcacccagaa
acagcggtaa
gcggtattat
ctcaccagtc
acactgcggc
gtaactcgcc
aatggcaaca
aggcggataa
gagcgtgggt
gagtcaggca
accaagttta
gataatctca
ttcttgagat
cggatcaaga
tagccgtagt
tgctgccagt
gaacgggggg
gaaagcgcca
ggagcttcca
gatgctcgtc
tttgctcaca
cctcccacac
gttacaaata
ctcatcaatg
cccacacctc
acaaataaag
atcaatgtat
(4) pSLR-SV40 control
表 1. pSLR-SV40 control ベクターを 1 または 2 箇所切断する制限酵素
酵素
Aat I
Acc 65I
Acl I
Ahd I
Alw 44I
Apa LI
Ase I
Avi II
Avr II
Axy I
Bam HI
Bbe I
Bbs I
Bbv CI
Bci VI
Bcl I
Bln I
Bsa I
Bse RI
Bsp 1407I
Bsp CI
Bsp MI
Bsr DI
Bsr GI
Bss SI
Bst API
Bst BI
Bst EII
Bst PI
Bst XI
Bst ZI
箇所
1
1
2
2
2
2
1
1
1
1
1
1
1
1
2
2
1
2
2
1
2
1
2
1
2
2
1
1
1
1
2
切断部位
188
4183
2676 3049
1255 3274
2607 3853
2607 3853
3103
3054
191
879
2417
1347
1088
1871
2431 3958
847
892
191
3207 1296
172 1129
589
302 2907
1801
3038 3220
589
2610 3994
2253 2325
435
1784
1784
268
243 1924
酵素
Bsu 36I
Csp 45I
Cbi I
Cfr 9I
Drd I
Eag I
Eam 1104I
Eam 1105I
Ear I
Ecl HKI
Eco 52I
Eco 81I
Eco ICRI
Eco O65I
Eco RI
Eco RV
Eco T14I
Eco T22I
Ehe I
Fba I
Fsp I
Hind III
Kas I
Kpn I
Lsp I
Mlu I
Mly I
Nar I
Nco I
Nhe I
Not I
箇所
1
1
1
1
1
2
2
2
2
2
2
1
1
1
1
1
2
2
1
2
1
1
1
1
1
2
2
1
1
1
1
切断部位
879
435
435
2411
4059
243 1924
282 2485
1255 3274
282 2485
1255 3274
243 1924
879
2399
1784
255
249
191
274
2251 2323
1347
847
892
3054
207
1347
4183
435
213
787
3797 3280
1347
274
219
1923
表 2. pSLR-SV40 control ベクター内に認識部位のない制限酵素
Aat II
Acc B7I Acc I
Acc III
Afe I
Afl II
Age I
Bae I
Ban III
Bbr PI
Bfr I
Blp I
Bpu 1102I Bsa AI
Bsp DI
Bsp EI
Bss HII
Bst 1107I
Bst 98I
Bst Z17I Btr I
Dra III
Eco 105I Eco 47III Eco 72I
Eco O109I Fse I
IPpo I
Pac I
Pfl FI
Pfl MI
Pma CI
Pme I
Pml I
Ppu MI
Sal I
San DI
Sap I
Sna BI
Srf I
Swa I
Tth 111I
酵素
Nsi I
Nsp V
Pae R7I
Pci I
Ple I
Psh BI
Psp 1406I
Psp AI
Pvu I
Pvu II
Sac I
Sac II
Sbf I
Sca I
Sex AI
Sfi I
Sfo I
Sgf I
Sgr AI
Sma I
Spe I
Sse 8387I
Ssp I
Stu I
Sty I
Vsp I
Xba I
Xcm I
Xho I
Xma I
Xmn I
箇所
2
1
1
1
2
1
2
1
2
2
1
1
1
1
2
1
1
1
1
1
1
1
1
1
2
1
1
2
1
1
1
切断部位
2251 2323
435
1
4167
3280 3797
3103
2676 3049
2411
302 2907
345 1704
2399
2405
1274
2796
1609 2301
137
1347
301
1526
2411
237
1274
2472
188
191
274
3103
1917
1153 1492
1
2411
2675
Aor51HI
Bsi WI
Cla I
Mro I
Psh AI
Van 91I
ApaI
Bsm BI
Cpo I
Nde I
Psp OMI
Asc I
Bsp 106I
Csp I
Nru I
Rsr II
pSLR-SV40 control ベクター配列
1
81
161
241
321
401
481
561
ctcgagatct
tccgcccatt
ccagaagtag
gtcggccgga
gtgttccctg
ccacaccaac
tggatcacaa
gggattccaa
gcatctcaat
ctccgcccca
tgaggaggct
tatcgaattc
gcacagccgg
gaggtgatct
caacgtggtg
tggccacatc
tagtcagcaa
tcgctgacta
tttttggagg
ctgcagccca
cctgcagctg
cctatgccca
gccatttgca
caacgatatg
ccatagtccc
atttttttta
cctaggcttt
ccaccatgga
tatcagtccc
gattttcgaa
gcgagaacaa
tacaccgaga
21
gcccctaact
tttatgcaga
tgcaaaaagc
agaagagaac
tgtataaata
acaagttgcc
catccacttc
gggagatgat
ccgcccatcc
ggccgaggcc
ttacgcgtgc
atcgtgaatg
ctcttacatc
gcctggccgt
ttcggccctc
cggccacctg
cgcccctaac
gcctcggcct
tagcgcatgc
gcgatcgccc
accgacggaa
gagcctggag
tgatcgctgc
aacatctcca
tccgcccagt
ctgagctatt
agatctacta
tcgggatctg
tcatcgacgc
aagtatggcc
cctataccag
agccatgtct
641
721
801
881
961
1041
1121
1201
1281
1361
1441
1521
1601
1681
1761
1841
1921
2001
2081
2161
2241
2321
2401
2481
2561
2641
2721
2801
2881
2961
3041
3121
3201
3281
3361
3441
3521
3601
3681
3761
3841
3921
4001
4081
4161
4241
4321
4401
4481
4561
4641
gatgttctgt
tcgacagcat
gtgaagttca
taagggcgtg
ccccagatac
ggcctgaaga
cgtggtgcct
tcgcctgtgg
ggctatggcc
ccctatgccc
gcttcaagag
ctgcacaccg
caagggctac
gcatcccaga
gtgcaggatt
aggcccaaca
gagcggccgc
tttgtgaaat
cattttatgt
acgatggagc
actaattgag
agatgcatgc
gctcccgcgg
aaaggaagag
cacccagaaa
cagcggtaag
cggtattatc
tcaccagtca
cactgcggcc
taactcgcct
atggcaacaa
ggcggataaa
agcgtgggtc
agtcaggcaa
ccaagtttac
ataatctcat
tcttgagatc
ggatcaagag
agccgtagtt
gctgccagtg
aacggggggt
aaagcgccac
gagcttccag
atgctcgtca
ttgctcacat
ctcccacacc
ttacaaataa
tcatcaatgt
ccacacctcc
caaataaagc
tcaatgtatc
tccaagaagt
gtacgacatc
accctaaaga
gtgatcagcc
atccatcctg
tcgtgatggt
cctccaatca
cggctcccct
tgaccgagac
tatgtccagg
ccagatgctg
gcgatctggg
caggtggccc
cgagtttgcc
atatcgccga
ggcaagctga
ccagacatga
ttgtgatgct
ttcaggttca
ggagaatggg
atgcatgctt
tttgcatact
cccgggggat
tatgagtatt
cgctggtgaa
atccttgaga
ccgtattgac
cagaaaagca
aacttacttc
tgatcgttgg
cgttgcgcaa
gttgcaggac
tcgcggtatc
ctatggatga
tcatatatac
gaccaaaatc
ctttttttct
ctaccaactc
aggccaccac
gcgataagtc
tcgtgcacac
gcttcccgaa
ggggaaacgc
ggggggcgga
gttctttcct
tccccctgaa
agcaatagca
atcttatcat
ccctgaacct
aatagcatca
ttatcatgtc
ccctgccatt
aacggcgtgg
gtttgatccc
acaggagcat
gccatcgccc
gaaaaagttt
tggtgtatct
ctgggcagag
ctgtagcgcc
tgaaggtgat
atgaagggct
ctactacgac
ctgccgagct
ggccagctgc
gctggtgacc
tgagaaacga
taagatacat
attgctttat
gggggaggtg
cggaactggg
tgcatacttc
tctgcctgct
cctcaaatat
caacatttcc
agtaaaagat
gttttcgccc
gccgggcaag
tcttacggat
tgacaacgat
gaaccggagc
actattaact
cacttctgcg
attgcagcac
acgaaataga
tttagattga
ccttaacgtg
gcgcgtaatc
tttttccgaa
ttcaagaact
gtgtcttacc
agcccagctt
gggagaaagg
ctggtatctt
gcctatggaa
gcggtaccga
cctgaaacat
tcacaaattt
gtctggatca
gaaacataaa
caaatttcac
tg
catcctgaag
agtgcgtgtt
ctggagagaa
caccatcaga
ctttccacca
gagggcgagt
ggccaagagc
acatcgccga
ctgatcctga
tgacatcaac
accacaacaa
gaggacagat
ggagaacttg
cttccgcctg
accaccaagc
gctgagggcc
tgatgagttt
ttgtaaccat
tgggaggttt
cggagttagg
tgcctgctgg
ggggagcctg
gtatccgctc
gtgtcgccct
gctgaagatc
cgaagaacgt
agcaactcgg
ggcatgacag
cggaggaccg
tgaatgaagc
ggcgaactac
ctcggccctt
tggggccaga
cagatcgctg
tttaaaactt
agttttcgtt
tgctgcttgc
ggtaactggc
ctgtagcacc
gggttggact
ggagcgaacg
cggacaggta
tatagtcctg
aaacgccagc
tcataatcag
aaaatgaatg
cacaaataaa
taatcagcca
atgaatgcaa
aaataaagca
22
gtgcagaagc
cagtttcgtg
ccgcgctgat
ttcgtccaca
cgccttcgga
tcttcctgaa
cctctggtgg
caaggtggcc
gccccaacga
accggcaaag
cccacaggcc
tcatctatgt
cttctgcagc
tgtcgtgctg
acctgcgggg
atctttgccc
ggacaaacca
tataagctgc
tttaaagcaa
ggcgggatgg
ggagcctggg
gggactttcc
atgagacaat
tattcccttt
agttgggtgc
tttccaatga
tcgccgcata
taagagaatt
aaggagctaa
cataccaaac
ttactctagc
ccggctggct
tggtaagccc
agataggtgc
catttttaat
ccactgagcg
aaacaaaaaa
ttcagcagag
gcctacatac
caagacgata
acctacaccg
tccggtaagc
tcgggtttcg
aacgcggcct
ccataccaca
caattgttgt
gcattttttt
taccacattt
ttgttgttgt
tttttttcac
acctggactt
tcccggtaca
catgacatcc
gcagcgatcc
ctgtttaccg
gaccatccag
atgagtacaa
aagagactga
tagagagctg
ccctgggacc
accagggatg
ggtggatcgg
accctaacat
gagcctggca
cggcgtggtg
gcgagcaggc
caactagaat
aataaacaag
gtaaaacctc
gcggagttag
gactttccac
acaccctaac
aaccctgata
tttgcggcat
acgagtgggt
tgagcacttt
cactattctc
atgcagtgct
ccgctttttt
gacgagcgtg
ttcccggcaa
ggtttattgc
tcccgtatcg
ctcactgatt
ttaaaaggat
tcagaccccg
accaccgcta
cgcagatacc
ctcgctctgc
gttaccggat
aactgagata
ggcagggtcg
ccacctctga
ttttacggtt
tttgtagagg
tgttaacttg
cactgcattc
gtagaggttt
taacttgttt
tgcattctag
tctcaagaag
ccgatcatgc
tctggaacaa
catctacggc
ccctggctta
aactacaaga
tctgtccagc
aggtccacgg
aagaagggcg
aagagagaag
ccctggacaa
ctgaaagaac
ctctgatgcc
agaccatgac
ttcatcgaca
caagtccaag
gcagtgaaaa
ttaacaacaa
tacaaatgtg
gggcgggact
acctggttgc
tgacacacat
aatgcttcaa
tttgccttcc
tacatcgaac
taaagttctg
agaatgactt
gccataacca
gcacaacatg
acaccacgat
caattaatag
tgataaatct
tagttatcta
aagcattggt
ctaggtgaag
tagaaaagat
ccagcggtgg
aaatactgtt
taatcctgtt
aaggcgcagc
cctacagcgt
gaacaggaga
cttgagcgtc
cctggccttt
ttttacttgc
tttattgcag
tagttgtggt
tacttgcttt
attgcagctt
ttgtggtttg
gtgatcgtga
gttcgatcca
ccggcctgcc
acccgcatcg
ctttccagtg
tcgcttctat
ctgacagaga
catcctgcag
ccatcggcac
ggcgagattt
ggacgggtgg
tcatcaagta
ggcgtcatcg
cgagaaggag
gcattccgaa
ctgtaatcta
aaatgcttta
caattgcatt
gtagatctga
atggttgctg
tgactaattg
tccacagcga
taatattgaa
tgtttttgct
tggatctcaa
ctatgtggcg
ggttgagtac
tgagtgataa
ggggatcatg
gcctgtagca
actggatgga
ggagccggtg
cacgacgggg
aactgtcaga
atcctttttg
caaaggatct
tttgtttgcc
cttctagtgt
accagtggct
ggtcgggctg
gagctatgag
gcgcacgagg
gatttttgtg
tgctggcctt
tttaaaaaac
cttataatgg
ttgtccaaac
aaaaaacctc
ataatggtta
tccaaactca
(5) pSLG-HSVtk control
表 1. pSLG-HSVtk ベクターを 1 または 2 箇所切断する制限酵素
酵素
Acc 65I
Acc I
Acl I
Ahd I
Alw 44I
Alw NI
Apa I
Apa LI
Ase I
Ava I
Avi II
Axy I
Bal I
Bam HI
Bbs I
Bbu I
Bcg I
Bgl I
Bgl II
Bmr I
Bsa AI
Bsa BI
Bso BI
Bsp 1407I
Bsp CI
Bsp MI
Bsr BRI
箇所
1
1
2
1
2
2
1
2
1
2
1
1
2
1
2
1
1
1
1
2
1
2
2
1
1
2
2
切断部位
3959
476
2452 2825
3050
2383 3629
778 3529
383
2383 3629
2879
1 2187
2830
405
1229 1274
2193
1365 1843
253
2528
2931
259
3005
776
1396
3965 4202
1 2187
581
2683
1327
864
3965 4202
酵素
Bsr DI
Bsr GI
Bss SI
Bst BI
Bst XI
Bst ZI
Bsu 36I
Cbi I
Cfr 9I
Csp 45I
Drd I
Eag I
Eam 1105I
Ecl HKI
Eco 52I
Eco 81I
Eco ICRI
Eco RI
Eco RV
Fsp I
Hind III
Kpn I
Lsp I
Mlu I
Msc I
Nco I
Nhe I
箇所
2
1
2
1
1
2
1
1
1
1
1
2
1
1
2
1
1
2
1
1
1
1
1
2
2
1
1
切断部位
2814 2996
581
2386 3770
127
296
271 1943
405
127
2187
127
3835
271 1943
3050
3050
271 1943
405
2175
124
283
277
2830
235
3959
127
188
241
1229 1274
302
247
表 2. pSLG-HSVtk ベクター内に認識部位のない制限酵素
Aat I
Aat II
Acc B7I Acc III
Afe I
Afl II
Bae I
Bae I
Ban III
Bbr PI
Bbv CI
Bfr I
Bsm BI
Bsp 106I Bsp DI
Bsp EI
Bss HII
Bst 1107I
Bst Z17I Cla I
Cpo I
Csp I
Dra III
Eco 105I
Fse I
IPpo I
Mro I
Nde I
Nru I
Nsi I
Pme I
Pml I
Psh AI
Rsr II
Sal I
Sap I
Srf I
Sse 8387I Stu I
Swa I
Tth 111I Van 91I
Age I
Bln I
Bst 98I
Eco 47III
Pac I
Sbf I
酵素
Not I
Nsp V
Pae R7I
Pci I
Psp AI
Psp OMI
Pst I
Psh BI
Psp 1406I
Pvu I
Pvu II
Sac I
Sac II
San DI
Sca I
Sex AI
Sgr AI
Sma I
Spe I
Sph I
Ssp I
Tfi I
Vsp I
Xba I
Xho I
Xma I
箇所
1
1
1
1
1
1
2
1
2
1
1
1
1
1
1
1
2
1
1
1
1
2
1
1
1
1
切断部位
1942
127
1
3943
2187
383
217
289
2879
2452 2825
2683
471
2175
2181
341
2572
1634
1233 1722
2187
265
253
2248
1094 1136
2879
1936
1
2187
Aor 51HI
Blp I
Bst API
Eco 72I
Pfl FI
Sfi I
Asc I
Bpu 1102I
Bst EII
Eco O65I
Pfl MI
Sgf I
Avr II
Bsi WI
Bst PI
Eco T22I
Pma CI
Sna BI
pSLG-HSVtk ベクター配列
1
81
161
241
321
401
481
561
641
721
801
ctcgagctgc
gttctatgat
cccaggtcca
acgcgtgcta
cctgcacggc
ccttcctgag
ctggctaagt
ctaccccgtg
agaccctgaa
gtgaacttca
ccggtactcc
ttcatccccg
gacacaaacc
cttcgcatat
gcgcatgcag
gccaagccca
ggaggccctg
gctacgagaa
atcgccgccc
catctccaag
tcaagaaggt
gagcccaacc
tggcccgttg
ccgcccagcg
taaggtgacg
atctactagt
gggaccccct
atcgacgccc
ctacggcctg
tgtacatggg
cccgaactgg
ggtgctgctg
tggacgtgag
ctcgcgtttg
tcttgtcatt
cgtgtggcct
cggccggata
ggacctgggc
acaccgagga
cgccagaaca
cgtgatcacc
tgttctgctc
gacagcaagg
aaacttcaag
23
ctggcggtgt
ggcgaattcg
cgaacaccga
tcgaattcct
accgccggca
ggtggtgtct
gcgtgatctc
gccaccgtga
caagaaggcc
aggatatggg
ccaagggact
ccccggaaga
aacacgcaga
gcgaccctgc
gcagcccacc
ttcagctcta
tacgccgaca
cgtgtgcagc
acgacagcta
atcaagaaca
cgaggcccag
tcgacgccaa
aatatatttg
tgcagtcggg
agcgacccgc
accatggcta
cagggccctg
tcctggagaa
gagaatagca
caccgagcgg
tgatggccct
tgcctgagca
ggagcaggtg
catgtcttta
gcggcgcggt
ttaaaagctt
acgagatcat
accaacttct
cagctgtaga
ccatcttctt
gagctgctgg
gaagaggaac
acttcatggc
gcccttatta
881
961
1041
1121
1201
1281
1361
1441
1521
1601
1681
1761
1841
1921
2001
2081
2161
2241
2321
2401
2481
2561
2641
2721
2801
2881
2961
3041
3121
3201
3281
3361
3441
3521
3601
3681
3761
3841
3921
4001
4081
4161
4241
4321
4401
tgtcctcctc
aaggaccccc
gttcacaacc
ccatcgagaa
cagtacgacc
gcggctgaag
acgtgaagac
ggacctaaca
ggaggccatc
accggctgaa
tccatcaagg
gggcaagagc
tcgtcttcgt
aagtccaagc
cagtgaaaaa
taacaacaac
acaaatgtgg
cttcaataat
ccttcctgtt
tcgaactgga
gttctgctat
tgacttggtt
taaccatgag
aacatggggg
cacgatgcct
taatagactg
aaatctggag
tatctacacg
attggtaact
gtgaagatcc
aaagatcaaa
cggtggtttg
actgttcttc
cctgttacca
cgcagcggtc
cagcgtgagc
aggagagcgc
agcgtcgatt
gccttttgct
acttgcttta
ttgcagctta
tgtggtttgt
tgctttaaaa
cagcttataa
ggtttgtcca
tggcaccacc
tgttcggcac
ctgtcctact
gtacagaatc
tgtccagcat
atcggcggca
cggctccacc
agagaggcga
gacaaggagg
agagctgatc
atgccggcgt
ctgaccgagc
ggacgacatc
tgtaatctag
aatgctttat
aattgcattc
tatggagctc
attgaaaaag
tttgctcacc
tctcaacagc
gtggcgcggt
gagtactcac
tgataacact
atcatgtaac
gtagcaatgg
gatggaggcg
ccggtgagcg
acggggagtc
gtcagaccaa
tttttgataa
ggatcttctt
tttgccggat
tagtgtagcc
gtggctgctg
gggctgaacg
tatgagaaag
acgagggagc
tttgtgatgc
ggccttttgc
aaaaacctcc
taatggttac
ccaaactcat
aacctcccac
tggttacaaa
aactcatcaa
ggcctgccaa
cagaaccatc
tcatcgtggg
ccaacaatcg
cagagaggtg
tcctccaggg
ggcagggtag
gctgtgcttc
gctggctgca
aagtacaagg
gaccggcgtg
aggagatcat
cccaagggcg
agcggccgcc
ttgtgaaatt
attttatgtt
ccgcggcccg
gaagagtatg
cagaaacgct
ggtaagatcc
attatcccgt
cagtcacaga
gcggccaact
tcgccttgat
caacaacgtt
gataaagttg
tgggtctcgc
aggcaactat
gtttactcat
tctcatgacc
gagatccttt
caagagctac
gtagttaggc
ccagtggcga
gggggttcgt
cgccacgctt
ttccaggggg
tcgtcagggg
tcacatgttc
cacacctccc
aaataaagca
caatgtatct
acctccccct
taaagcaata
tgtatcttat
agggcgtggt
ccctccacct
cctgagagtg
tgctggcccc
gccaccggcg
ctacggcctg
ccccctacgt
aagagcgaga
ctccggcgac
gctaccaggt
cccgacgagg
cgactacatc
ccaccggcaa
cagacatgat
tgtgatgcta
tcaggttcag
ggggatcctc
agtattcaac
ggtgaaagta
ttgagagttt
attgacgccg
aaagcatctt
tacttctgac
cgttgggaac
gcgcaaacta
caggaccact
ggtatcattg
ggatgaacga
atatacttta
aaaatccctt
ttttctgcgc
caactctttt
caccacttca
taagtcgtgt
gcacacagcc
cccgaaggga
aaacgcctgg
ggcggagcct
tttcctgcgg
cctgaacctg
atagcatcac
tatcatgtct
gaacctgaaa
gcatcacaaa
catgtctg
24
gctgacccac
ccatcctgtc
gtgctgctga
tcctgtgatg
gcgcccctgt
accgagacct
gcaggctaag
tcatcatgaa
gtgggatact
ggcccccgcc
ccgccggcga
gccgagcgag
gctggtgaga
aagatacatt
ttgctttatt
ggggaggtgt
aaatatgtat
atttccgtgt
aaagatgctg
tcgccccgaa
ggcaagagca
acggatggca
aacgatcgga
cggagctgaa
ttaactggcg
tctgcgctcg
cagcactggg
aatagacaga
gattgattta
aacgtgagtt
gtaatctgct
tccgaaggta
agaactctgt
cttaccgggt
cagcttggag
gaaaggcgga
tatctttata
atggaaaaac
taccgatcat
aaacataaaa
aaatttcaca
ggatcataat
cataaaatga
tttcacaaat
aggaacctga
catcgtgccc
agagattcga
gtgttcctgg
gggcaccgag
gctgcgccgt
atcgtggacc
gggctacttc
acgacgacga
gagctggagt
gctgcccggc
tgtctcccac
agcgagctgc
gatgagtttg
tgtaaccatt
gggaggtttt
ccgctcatga
cgcccttatt
aagatcagtt
gaacgttttc
actcggtcgc
tgacagtaag
ggaccgaagg
tgaagccata
aactacttac
gcccttccgg
gccagatggt
tcgctgagat
aaacttcatt
ttcgttccac
gcttgcaaac
actggcttca
agcaccgcct
tggactcaag
cgaacgacct
caggtatccg
gtcctgtcgg
gccagcaacg
aatcagccat
tgaatgcaat
aataaagcat
cagccatacc
atgcaattgt
aaagcatttt
gcgtgcgctt
ttccaccacg
ggagaagttc
ctaagagccc
gttgccgtgg
gctgatcacc
tgaccaccgg
aacaacaagc
tggacatttc
ggctgctgct
gcctgcatcg
caagcgcatc
ggaagctgct
gacaaaccac
ataagctgca
ttaaagcaag
gacaataacc
cccttttttg
gggtgcacga
caatgatgag
cgcatacact
agaattatgc
agctaaccgc
ccaaacgacg
tctagcttcc
ctggctggtt
aagccctccc
aggtgcctca
tttaatttaa
tgagcgtcag
aaaaaaacca
gcagagcgca
acatacctcg
acgatagtta
acaccgaact
gtaagcggca
gtttcgccac
cggccttttt
accacatttg
tgttgttgtt
ttttttcact
acatttgtag
tgttgttaac
tttcactgca
cgtccactgc
ccttcggaat
ttcctgagca
cctggtggac
ccgtggccaa
ccccacgacg
caagtccctg
aggccaccga
ttcgtggtgg
ccagcaccca
tgctccagga
cggggcggag
ggcccagaag
aactagaatg
ataaacaagt
taaaacctct
ctgataaatg
cggcattttg
gtgggttaca
cacttttaaa
attctcagaa
agtgctgcca
ttttttgcac
agcgtgacac
cggcaacaat
tattgctgat
gtatcgtagt
ctgattaagc
aaggatctag
accccgtaga
ccgctaccag
gataccaaat
ctctgctaat
ccggataagg
gagataccta
gggtcggaac
ctctgacttg
acggttcctg
tagaggtttt
aacttgttta
gcattctagt
aggttttact
ttgtttattg
ttctagttgt
(6) pSLG(PEST)-test、pSLO(PEST)-test
表1. pSLG(PEST)-test、pSLO(PEST)-testベクターを1または2箇所切断する制限酵素
酵素
Acc 65I
Acc I
Acl I
Afl III
Ahd I
Alw 44I
Alw NI
Apa I
Apa LI
Ase I
Ava I
Avi II
Axy I
Bal I
Bam HI
Ban III
Bbs I
Bbu I
Bcg I
Bgl I
Bgl II
Blp I
Bmr I
Bpu 1102I
Bsa AI
Bsa BI
Bso BI
Bsp 106I
Bsp 1407I
箇所
1
2
2
2
1
2
2
1
2
1
2
1
1
2
1
1
2
1
1
1
1
1
2
1
1
2
2
1
1
切断部位
3876
7
263
2369 2742
28 3860
2967
2300 3546
565 3446
170
2300 3546
2796
1 2104
2747
192
1016 1061
2110
16
1152 1630
40
2445
2848
46
1716
2922
563
1716
1183
3882 4119
1 2104
16
368
酵素
Bsp CI
Bsp DI
Bsp MI
Bsr BRI
Bsr DI
Bsr GI
Bss SI
Bst API
Bst XI
Bst ZI
Bsu 36I
Cfr 9I
Cla I
Drd I
Eag I
Eam 1105I
Ecl HKI
Eco 52I
Eco 81I
Eco ICRI
Eco RI
Eco RV
Fsp I
Hind III
Kpn I
Mlu I
Msc I
Nco I
Nhe I
箇所
1
1
2
2
2
1
2
1
1
2
1
1
1
1
2
1
1
2
1
1
1
1
1
2
1
1
2
2
1
切断部位
2600
16
1114
651
3882 4119
2731 2913
368
2303 3687
1810
83
58 1860
192
2104
16
3752
58 1860
2967
2967
58 1860
192
2092
70
64
2747
22 1714
3876
28
1016 1061
89 1722
34
酵素
Not I
Nsp I
Pae R7I
Pci I
Psh BI
Psp 1406I
Psp AI
Psp OMI
Pst I
Pvu I
Pvu II
Sac I
Sac II
Sal I
San DI
Sca I
Sex AI
Sgr AI
Sma I
Spe I
Sph I
Ssp I
Tfi I
Vsp I
Xba I
Xho I
Xma I
箇所
1
2
1
1
1
2
1
1
2
1
1
1
1
1
1
1
1
2
1
1
1
1
2
1
1
1
1
切断部位
1859
40 3860
1
3860
2796
2369 2742
2104
170
76 1808
2600
258
2092
2098
7
128
2489
1421
1020 1509
2104
52
40
2165
881
923
2796
1853
1
2104
表 2. pSLG(PEST)-test、pSLO(PEST)-test ベクター内に認識部位のない制限酵素
Afe I
Afl II
Age I
Aor 51HI Asc I
Aat I
Aat II
Acc B7I Acc III
Bae I
Bbr PI
Bbv CI
Bfr I
Bln I
Bsi WI
Bsm BI
Bsp EI
Bss HII
Bst 98I
Bst BI
Bst EII
Bst PI
Bst Z17I Cbi I
Cpo I
Csp 45I
Csp I
Eco 105I Eco 47III
Eco 72I
Eco O65I
Eco T22I Fse I
IPpo I
Lsp I
Mro I
Nru I
Nsi I
Nsp V
Pac I
Pfl FI
Pfl MI
Pma CI
Pme I
Pml I
Rsr II
Sap I
Sbf I
Sfi I
Sgf I
Sna BI
Srf I
Sse 8387I Stu I
Tth 111I Van 91I
Avr II
Bst 1107I
Dra III
Nde I
Psh AI
Swa I
pSLG(PEST)-test ベクター配列
1
81
161
241
321
401
481
561
ctcgaggtcg
gcccaccacc
agctctacag
gccgacatcc
gtgcagcgag
acagctacac
aagaacatga
ggcccagtgc
acggtatcga
atggctaacg
ggccctgacc
tggagaacag
aatagcacca
cgagcgggag
tggccctgaa
ctgagcaact
taagcttacg
agatcatcct
aacttctcct
ctgtagactg
tcttcttcta
ctgctggaga
gaggaacgtg
tcatggcccg
cgtgctagcg
gcacggcgcc
tcctgaggga
gctaagtgct
ccccgtgatc
ccctgaacat
aacttcatca
gtactccgag
25
catgcagatc
aagcccaggg
ggccctgatc
acgagaacta
gccgccctgt
ctccaagccc
agaaggtggt
cccaacctgg
tactagtcgg
accccctgga
gacgcccaca
cggcctgcgc
acatgggcgt
gaactggtgt
gctgctggac
acgtgagaaa
ccggatatcg
cctgggcacc
ccgaggaggt
cagaacagcg
gatcaccgcc
tctgctccaa
agcaaggagg
cttcaagcca
aattcctgca
gccggcattc
ggtgtcttac
tgatctccgt
accgtgaacg
gaaggccatc
atatgggcga
agggacttcg
641
721
801
881
961
1041
1121
1201
1281
1361
1441
1521
1601
1681
1761
1841
1921
2001
2081
2161
2241
2321
2401
2481
2561
2641
2721
2801
2881
2961
3041
3121
3201
3281
3361
3441
3521
3601
3681
3761
3841
3921
4001
4081
4161
4241
4321
acgccaagga
aacctgagcg
cgtgcccttc
gattcgagga
ttcctggcta
caccgaggtt
gcgccgtgct
gtggacctga
ctacttcaac
acgacgatgg
ctggagtggc
gcccggcgcc
ctcccaccaa
gagctgcgga
cacgctgccc
agatgccatt
tgaaaaaaat
caacaacaat
aatgtggtat
caataatatt
tcctgttttt
aactggatct
ctgctatgtg
cttggttgag
ccatgagtga
atgggggatc
gatgcctgta
tagactggat
tctggagccg
ctacacgacg
ggtaactgtc
aagatccttt
gatcaaagga
tggtttgttt
gttcttctag
gttaccagtg
agcggtcggg
cgtgagctat
agagcgcacg
gtcgattttt
ttttgctggc
tgctttaaaa
cagcttataa
ggtttgtcca
tttaaaaaac
cttataatgg
ttgtccaaac
gcaggtggcc
tgcgcttcgt
caccacgcct
gaagttcttc
agagccccct
gccgtggccg
gatcaccccc
ccaccggcaa
aacaagcagg
acatttcttc
tgctgctcca
tgcatcgtgc
gcgcatccgg
agctgctggc
atgtcttgtg
cttctagagc
gctttatttg
tgcattcatt
ggagctcccg
gaaaaaggaa
gctcacccag
caacagcggt
gcgcggtatt
tactcaccag
taacactgcg
atgtaactcg
gcaatggcaa
ggaggcggat
gtgagcgtgg
gggagtcagg
agaccaagtt
ttgataatct
tcttcttgag
gccggatcaa
tgtagccgta
gctgctgcca
ctgaacgggg
gagaaagcgc
agggagcttc
gtgatgctcg
cttttgctca
aacctcccac
tggttacaaa
aactcatcaa
ctcccacacc
ttacaaataa
tcatcaatgt
cttattatgt
ccactgcaag
tcggaatgtt
ctgagcacca
ggtggaccag
tggccaagcg
cacgacgacg
gtccctggga
ccaccgagga
gtggtggacc
gcacccatcc
tccaggaggg
ggcggagtcg
ccagaagaag
cccaggagag
ggccgcccag
tgaaatttgt
ttatgtttca
cggcccgggg
gagtatgagt
aaacgctggt
aagatccttg
atcccgtatt
tcacagaaaa
gccaacttac
ccttgatcgt
caacgttgcg
aaagttgcag
gtctcgcggt
caactatgga
tactcatata
catgaccaaa
atcctttttt
gagctaccaa
gttaggccac
gtggcgataa
ggttcgtgca
cacgcttccc
cagggggaaa
tcaggggggc
catgttcttt
acctccccct
taaagcaata
tgtatcttat
tccccctgaa
agcaatagca
atcttatcat
cctcctctgg
gaccccctgt
cacaaccctg
tcgagaagta
tacgacctgt
gctgaagatc
tgaagaccgg
cctaacaaga
ggccatcgac
ggctgaaaga
atcaaggatg
caagagcctg
tcttcgtgga
tccaagctta
cgggatggac
acatgataag
gatgctattg
ggttcagggg
gatcctcaaa
attcaacatt
gaaagtaaaa
agagttttcg
gacgccgggc
gcatcttacg
ttctgacaac
tgggaaccgg
caaactatta
gaccacttct
atcattgcag
tgaacgaaat
tactttagat
atcccttaac
tctgcgcgta
ctctttttcc
cacttcaaga
gtcgtgtctt
cacagcccag
gaagggagaa
cgcctggtat
ggagcctatg
cctgcggtac
gaacctgaaa
gcatcacaaa
catgtctgga
cctgaaacat
tcacaaattt
gtctg
caccaccggc
tcggcaccag
tcctacttca
cagaatccca
ccagcatcag
ggcggcatcc
ctccaccggc
gaggcgagct
aaggagggct
gctgatcaag
ccggcgtgac
accgagcagg
cgacatcccc
gccatggctt
cgtcaccctg
atacattgat
ctttatttgt
gaggtgtggg
tatgtatccg
tccgtgtcgc
gatgctgaag
ccccgaagaa
aagagcaact
gatggcatga
gatcggagga
agctgaatga
actggcgaac
gcgctcggcc
cactggggcc
agacagatcg
tgatttaaaa
gtgagttttc
atctgctgct
gaaggtaact
actctgtagc
accgggttgg
cttggagcga
aggcggacag
ctttatagtc
gaaaaacgcc
cgatcataat
cataaaatga
tttcacaaat
tcataatcag
aaaatgaatg
cacaaataaa
ctgccaaagg
aaccatcccc
tcgtgggcct
acaatcgtgc
agaggtggcc
tccagggcta
agggtagccc
gtgcttcaag
ggctgcactc
tacaagggct
cggcgtgccc
agatcatcga
aagggcgcca
cccgccggag
cagcctgtgc
gagtttggac
aaccattata
aggtttttta
ctcatgagac
ccttattccc
atcagttggg
cgttttccaa
cggtcgccgc
cagtaagaga
ccgaaggagc
agccatacca
tacttactct
cttccggctg
agatggtaag
ctgagatagg
cttcattttt
gttccactga
tgcaaacaaa
ggcttcagca
accgcctaca
actcaagacg
acgacctaca
gtatccggta
ctgtcgggtt
agcaacgcgg
cagccatacc
atgcaattgt
aaagcatttt
ccataccaca
caattgttgt
gcattttttt
gcgtggtgct
tccacctcca
gagagtggtg
tggcccctcc
accggcggcg
cggcctgacc
cctacgtgca
agcgagatca
cggcgacgtg
accaggtggc
gacgaggccg
ctacatcgcc
ccggcaagct
gtggaggagc
ttctgctagg
aaaccacaac
agctgcaata
aagcaagtaa
aataaccctg
ttttttgcgg
tgcacgagtg
tgatgagcac
atacactatt
attatgcagt
taaccgcttt
aacgacgagc
agcttcccgg
gctggtttat
ccctcccgta
tgcctcactg
aatttaaaag
gcgtcagacc
aaaaccaccg
gagcgcagat
tacctcgctc
atagttaccg
ccgaactgag
agcggcaggg
tcgccacctc
cctttttacg
acatttgtag
tgttgttaac
tttcactgca
tttgtagagg
tgttaacttg
cactgcattc
gacccacagg
tcctgtccat
ctgctgaaga
tgtgatggtg
cccctgtggg
gagacctgct
ggctaagatc
tcatgaaggg
ggatactacg
ccccgccgag
ccggcgagct
gagcgagtgt
ggtgagaagc
aggctgctgg
atcaatgtgt
tagaatgcag
aacaagttaa
aacctctaca
ataaatgctt
cattttgcct
ggttacatcg
ttttaaagtt
ctcagaatga
gctgccataa
tttgcacaac
gtgacaccac
caacaattaa
tgctgataaa
tcgtagttat
attaagcatt
gatctaggtg
ccgtagaaaa
ctaccagcgg
accaaatact
tgctaatcct
gataaggcgc
atacctacag
tcggaacagg
tgacttgagc
gttcctggcc
aggttttact
ttgtttattg
ttctagttgt
ttttacttgc
tttattgcag
tagttgtggt
cgtgctagcg
gcacggcgcc
tcctgaggga
gctaagtgct
ccccgtgatc
ccctgaacat
catgcagatc
aagcccaggg
ggccctgatc
acgagaacta
gccgccctgt
ctccaagccc
tactagtcgg
accccctgga
gacgcccaca
cggcctgcgc
acatgggcgt
gaactggtgt
ccggatatcg
cctgggcacc
ccgaggaggt
cagaacagcg
gatcaccgcc
tctgctccaa
aattcctgca
gccggcattc
ggtgtcttac
tgatctccgt
accgtgaacg
gaaggccatc
pSLO(PEST)-test ベクター配列
1
81
161
241
321
401
ctcgaggtcg
gcccaccacc
agctctacag
gccgacatcc
gtgcagcgag
acagctacac
acggtatcga
atggctaacg
ggccctgacc
tggagaacag
aatagcacca
cgagcgggag
taagcttacg
agatcatcct
aacttctcct
ctgtagactg
tcttcttcta
ctgctggaga
26
481
561
641
721
801
881
961
1041
1121
1201
1281
1361
1441
1521
1601
1681
1761
1841
1921
2001
2081
2161
2241
2321
2401
2481
2561
2641
2721
2801
2881
2961
3041
3121
3201
3281
3361
3441
3521
3601
3681
3761
3841
3921
4001
4081
4161
4241
4321
aagaacatga
ggcccagtgc
acgccaagga
aacctgagcg
cgtgcccttc
gattcgagga
ttcctggcta
caccgaggtt
gcgccgtgct
gtggacctga
ctacttcaac
acgacgatgg
ctggagtggc
gcccggcgcc
ctcccaccaa
gagctgcgga
cacgctgccc
agatgccatt
tgaaaaaaat
caacaacaat
aatgtggtat
caataatatt
tcctgttttt
aactggatct
ctgctatgtg
cttggttgag
ccatgagtga
atgggggatc
gatgcctgta
tagactggat
tctggagccg
ctacacgacg
ggtaactgtc
aagatccttt
gatcaaagga
tggtttgttt
gttcttctag
gttaccagtg
agcggtcggg
cgtgagctat
agagcgcacg
gtcgattttt
ttttgctggc
tgctttaaaa
cagcttataa
ggtttgtcca
tttaaaaaac
cttataatgg
ttgtccaaac
tggccctgaa
ctgagcaact
gcaggtggcc
tgcgcttcgt
caccacgcct
gaagttcttc
agagccccct
gccgtggccg
gatcaccccc
ccaccggcaa
aacaagcagg
acatttcttc
tgctgctcca
tgcatcgtgc
gcgcatccgg
agctgctggc
atgtcttgtg
cttctagagc
gctttatttg
tgcattcatt
ggagctcccg
gaaaaaggaa
gctcacccag
caacagcggt
gcgcggtatt
tactcaccag
taacactgcg
atgtaactcg
gcaatggcaa
ggaggcggat
gtgagcgtgg
gggagtcagg
agaccaagtt
ttgataatct
tcttcttgag
gccggatcaa
tgtagccgta
gctgctgcca
ctgaacgggg
gagaaagcgc
agggagcttc
gtgatgctcg
cttttgctca
aacctcccac
tggttacaaa
aactcatcaa
ctcccacacc
ttacaaataa
tcatcaatgt
gaggaacgtg
tcatggcccg
cttattatgt
ccactgcaag
tcggaatgtt
ctgagcacca
ggtggaccag
tggccaagcg
cacgacgacg
gtccctggga
ccaccgagga
gtggtggacc
gcacccatcc
tccaggaggg
ggcggagtcg
ccagaagaag
cccaggagag
ggccgcccag
tgaaatttgt
ttatgtttca
cggcccgggg
gagtatgagt
aaacgctggt
aagatccttg
atcccgtatt
tcacagaaaa
gccaacttac
ccttgatcgt
caacgttgcg
aaagttgcag
gtctcgcggt
caactatgga
tactcatata
catgaccaaa
atcctttttt
gagctaccaa
gttaggccac
gtggcgataa
ggttcgtgca
cacgcttccc
cagggggaaa
tcaggggggc
catgttcttt
acctccccct
taaagcaata
tgtatcttat
tccccctgaa
agcaatagca
atcttatcat
aacttcatca
gtactccgag
cctcctctgg
gaccccctgt
cacaaccctg
tcgagaagta
tacgacctgt
gctgaagatc
tgaagaccgg
cctaacaaga
ggccatcgac
ggctgaaaga
atcaaggatg
caagagcctg
tcttcgtgga
tccaagctta
cgggatggac
acatgataag
gatgctattg
ggttcagggg
gatcctcaaa
attcaacatt
gaaagtaaaa
agagttttcg
gacgccgggc
gcatcttacg
ttctgacaac
tgggaaccgg
caaactatta
gaccacttct
atcattgcag
tgaacgaaat
tactttagat
atcccttaac
tctgcgcgta
ctctttttcc
cacttcaaga
gtcgtgtctt
cacagcccag
gaagggagaa
cgcctggtat
ggagcctatg
cctgcggtac
gaacctgaaa
gcatcacaaa
catgtctgga
cctgaaacat
tcacaaattt
gtctg
27
agaaggtggt
cccaacctgg
caccaccggc
tcggcaacag
tcctacttca
cagaatccca
ccagcatcag
ggcggcatcc
ctccaccggc
gaggcgagct
aaggagggct
gctgatcaag
ccggcgtgac
accgagcagg
cgacatcccc
gccatggctt
cgtcaccctg
atacattgat
ctttatttgt
gaggtgtggg
tatgtatccg
tccgtgtcgc
gatgctgaag
ccccgaagaa
aagagcaact
gatggcatga
gatcggagga
agctgaatga
actggcgaac
gcgctcggcc
cactggggcc
agacagatcg
tgatttaaaa
gtgagttttc
atctgctgct
gaaggtaact
actctgtagc
accgggttgg
cttggagcga
aggcggacag
ctttatagtc
gaaaaacgcc
cgatcataat
cataaaatga
tttcacaaat
tcataatcag
aaaatgaatg
cacaaataaa
gctgctggac
acgtgagaaa
ctgccaaagg
aaccatcccc
tcgtgggcct
acaatcgtgc
agaggtggcc
tccagggcta
agggtagccc
gtgcttcaag
ggctgcactc
tacaagggct
cggcgtgccc
agatcatcga
aagggcgcca
cccgccggag
cagcctgtgc
gagtttggac
aaccattata
aggtttttta
ctcatgagac
ccttattccc
atcagttggg
cgttttccaa
cggtcgccgc
cagtaagaga
ccgaaggagc
agccatacca
tacttactct
cttccggctg
agatggtaag
ctgagatagg
cttcattttt
gttccactga
tgcaaacaaa
ggcttcagca
accgcctaca
actcaagacg
acgacctaca
gtatccggta
ctgtcgggtt
agcaacgcgg
cagccatacc
atgcaattgt
aaagcatttt
ccataccaca
caattgttgt
gcattttttt
agcaaggagg
cttcaagcca
gcgtggtgct
tccacctcca
gagagtggtg
tggcccctcc
accggcggcg
cggcctgacc
cctacgtgca
agcgagatca
cggcgacgtg
accaggtggc
gacgaggccg
ctacatcgcc
ccggcaagct
gtggaggagc
ttctgctagg
aaaccacaac
agctgcaata
aagcaagtaa
aataaccctg
ttttttgcgg
tgcacgagtg
tgatgagcac
atacactatt
attatgcagt
taaccgcttt
aacgacgagc
agcttcccgg
gctggtttat
ccctcccgta
tgcctcactg
aatttaaaag
gcgtcagacc
aaaaccaccg
gagcgcagat
tacctcgctc
atagttaccg
ccgaactgag
agcggcaggg
tcgccacctc
cctttttacg
acatttgtag
tgttgttaac
tttcactgca
tttgtagagg
tgttaacttg
cactgcattc
atatgggcga
agggacttcg
gacccacagg
tcctgtccat
ctgctgaaga
tgtgatggtg
cccctgtggg
gagacctgct
ggctaagatc
tcatgaaggg
ggatactacg
ccccgccgag
ccggcgagct
gagcgagtgt
ggtgagaagc
aggctgctgg
atcaatgtgt
tagaatgcag
aacaagttaa
aacctctaca
ataaatgctt
cattttgcct
ggttacatcg
ttttaaagtt
ctcagaatga
gctgccataa
tttgcacaac
gtgacaccac
caacaattaa
tgctgataaa
tcgtagttat
attaagcatt
gatctaggtg
ccgtagaaaa
ctaccagcgg
accaaatact
tgctaatcct
gataaggcgc
atacctacag
tcggaacagg
tgacttgagc
gttcctggcc
aggttttact
ttgtttattg
ttctagttgt
ttttacttgc
tttattgcag
tagttgtggt
(7) pSLR(PEST)-test
表1. pSLR(PEST)-testを1または2箇所切断する制限酵素
酵素
Acc 65I
Acc I
Acl I
Afl III
Ahd I
Alw 44I
Apa LI
Ase I
Avi II
Axy I
Bam HI
Ban III
Bbe I
Bbs I
Bbu I
Bbv CI
Bci VI
Bcl I
Bgl I
Bgl II
Blp I
Bmr I
Bpu 1102I
Bse RI
Bsp 106I
Bsp 1407I
Bsp CI
Bsp DI
Bsp MI
Bsr DI
Bsr GI
Bss SI
Bst API
箇所
1
1
2
2
2
2
2
1
1
1
1
1
1
1
1
1
2
2
2
1
1
1
1
2
1
1
2
1
1
2
1
2
1
切断部位
3885
7
2378 2751
28 3869
1070 2976
2309 3555
2309 3555
2805
2756
694
2119
16
1162
903
40
1686
2133 3660
662
707
1658 2857
46
1725
2931
1725
1753
944
16
404
117 2609
16
1616
2740 2922
404
2312 3696
1819
酵素
Bst BI
Bst EII
Bst PI
Bst XI
Bst ZI
Bsu 36I
Cbi I
Cfr 9I
Cla I
Csp 45I
Drd I
Eag I
Eam 1104I
Eam 1105I
Ear I
Ecl HKI
Eco 52I
Eco 81I
Eco ICRI
Eco O65I
Eco RI
Eco RV
Eco T14I
Ehe I
Fba I
Fsp I
Hind III
Kas I
Kpn I
Lsp I
Mlu I
Mly I
Nar I
箇所
1
1
1
1
2
1
1
1
1
1
1
2
2
2
2
2
2
1
1
1
1
1
2
1
2
1
2
1
1
1
1
2
1
切断部位
250
1599
1599
83
58 1869
694
250
2113
16
250
3761
58 1869
97 2187
1070 2976
97 2187
1070 2976
58 1869
694
2101
1599
70
64
89 1731
1162
662
707
2756
22 1723
1162
3885
250
28
3499 2982
1162
表 2. pSLR(PEST)-test ベクター内に認識部位のない制限酵素
Afe I
Afl II
Age I
Aat I
Aat II
Acc B7I Acc III
Avr II
Bae I
Bbr PI
Bfr I
Bln I
Bsa AI
Bsi WI
Bst 1107I
Bst 98I
Bst Z17I Btr I
Cpo I
Csp I
Dra III
Eco O109I Eco T22I Fse I
IPpo I
Mro I
Nde I
Nru I
Pfl MI
Pma CI
Pme I
Pml I
Ppu MI
Psh AI
Psp OMI
Sfi I
Sna BI
Srf I
Stu I
Swa I
Tth 111I Van 91I
Nco I
Nhe I
Not I
Nsp V
Pae R7I
Pci I
Ple I
Psh BI
Psp 1406I
Psp AI
Pvu I
Pvu II
Sac I
Sac II
Sal I
Sbf I
Sca I
Sex AI
Sfo I
Sgf I
Sgr AI
Sma I
Spe I
Sph I
Sse 8387I
Ssp I
Sty I
Vsp I
Xba I
Xcm I
Xho I
Xma I
Xmn I
酵素
箇所
2
1
1
1
1
1
2
1
2
1
2
2
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
2
1
1
2
1
1
1
切断部位
89 1731
34
1868
250
1
3869
2982 3499
2805
2378 2751
2113
117 2609
160 1519
2101
2107
7
1089
2498
1424
1162
116
1341
2113
52
40
1089
2174
89 1731
2805
1862
968 1307
1
2113
2377
Aor 51HI
Bsm BI
Eco 105I
Nsi I
Rsr II
Apa I
Bsp EI
Eco 47III
Pac I
San DI
Asc I
Bss HII
Eco 72I
Pfl FI
Sap I
pSLR(PEST)-test ベクター配列
1
81
161
241
321
ctcgaggtcg
gcccaccacc
agctgtatca
gcccagattt
ttgcagcgag
acggtatcga
atggaagaag
gtccctgtat
tcgaaacaag
aacaacatcc
taagcttacg
agaacatcgt
aaatactctt
ttgccgcctg
acttcttcgg
cgtgctagcg
gaatggcgat
acatcaccga
gccgtgagcc
ccctctgatc
28
catgcagatc
cgccctcggg
cggaatcatc
tggagaagta
gctgccctat
tactagtcgg
atctggtgtt
gacgcccaca
tggcctggat
accaggggat
ccggatatcg
ccctggcaca
ccaacgaggt
cacaacaacg
tccaatggcc
aattcctgca
gccggcctgc
gatctcctat
tggtggccat
acatccaacg
401
481
561
641
721
801
881
961
1041
1121
1201
1281
1361
1441
1521
1601
1681
1761
1841
1921
2001
2081
2161
2241
2321
2401
2481
2561
2641
2721
2801
2881
2961
3041
3121
3201
3281
3361
3441
3521
3601
3681
3761
3841
3921
4001
4081
4161
4241
4321
atatgtacac
ccattcatcc
cgtggagtgc
atcccctgga
agcatcacca
cgcccctttc
agtttgaggg
tatctggcca
cagagacatc
gcgccctgat
gtgattgaca
gggctaccac
acgacgagga
gagctggaga
gctgccttcc
tgaccaccac
aacgagctga
ggctgctggc
tcaatgtgta
agaatgcagt
acaagttaac
acctctacaa
taaatgcttc
attttgcctt
gttacatcga
tttaaagttc
tcagaatgac
ctgccataac
ttgcacaaca
tgacaccacg
aacaattaat
gctgataaat
cgtagttatc
ttaagcattg
atctaggtga
cgtagaaaag
taccagcggt
ccaaatactg
gctaatcctg
ataaggcgca
tacctacagc
cggaacagga
gacttgagcg
ttcctggcct
ggttttactt
tgtttattgc
tctagttgtg
tttacttgct
ttattgcagc
agttgtggtt
cgagagggag
tgaaggtgca
gtgttcagtt
gagaaccgcg
tcagattcgt
caccacgcct
cgagttcttc
agagccctct
gccgacaagg
cctgagcccc
tcaacaccgg
aacaacccac
cagattcatc
acttgcttct
gcctgtgtcg
caagcacctg
gggccatctt
acgctgccca
gatgccattc
gaaaaaaatg
aacaacaatt
atgtggtatg
aataatattg
cctgtttttg
actggatctc
tgctatgtgg
ttggttgagt
catgagtgat
tgggggatca
atgcctgtag
agactggatg
ctggagccgg
tacacgacgg
gtaactgtca
agatcctttt
atcaaaggat
ggtttgtttg
ttcttctagt
ttaccagtgg
gcggtcgggc
gtgagctatg
gagcgcacga
tcgatttttg
tttgctggcc
gctttaaaaa
agcttataat
gtttgtccaa
ttaaaaaacc
ttataatggt
tgtccaaact
atgatcggcc
gaagcacctg
tcgtgtcccg
ctgatcatga
ccacagcagc
tcggactgtt
ctgaagacca
ggtggatgag
tggccaagag
aacgatagag
caaagccctg
aggccaccag
tatgtggtgg
gcagcaccct
tgctggagcc
cggggcggcg
tgcccgcgag
tgtcttgtgc
ttctagagcg
ctttatttgt
gcattcattt
gagctcccgc
aaaaaggaag
ctcacccaga
aacagcggta
cgcggtatta
actcaccagt
aacactgcgg
tgtaactcgc
caatggcaac
gaggcggata
tgagcgtggg
ggagtcaggc
gaccaagttt
tgataatctc
cttcttgaga
ccggatcaag
gtagccgtag
ctgctgccag
tgaacggggg
agaaagcgcc
gggagcttcc
tgatgctcgt
ttttgctcac
acctcccaca
ggttacaaat
actcatcaat
tcccacacct
tacaaataaa
catcaatgta
acctgaacat
gactttctca
gtacaccgat
catcctctgg
gatcccatct
taccgccctg
tccagaacta
tacaatctgt
actgaaggtc
agctgaagaa
ggaccaagag
ggatgccctg
atcggctgaa
aacatctctg
tggcaagacc
tggtgttcat
caggccaagt
ccaggagagc
gccgcccaga
gaaatttgtg
tatgtttcag
ggcccggggg
agtatgagta
aacgctggtg
agatccttga
tcccgtattg
cacagaaaag
ccaacttact
cttgatcgtt
aacgttgcgc
aagttgcagg
tctcgcggta
aactatggat
actcatatat
atgaccaaaa
tccttttttt
agctaccaac
ttaggccacc
tggcgataag
gttcgtgcac
acgcttcccg
agggggaaac
caggggggcg
atgttctttc
cctccccctg
aaagcaatag
gtatcttatc
ccccctgaac
gcaatagcat
tcttatcatg
29
ctccaagcca
agaaggtgat
catgcgttcg
aacaaccggc
acggcacccg
gcttactttc
caagatcgct
ccagcctgac
cacggcatcc
gggcgccatc
agaagggcga
gacaaggacg
agaactcatc
atgccggcgt
atgaccgaga
cgacagcatt
ccaagcttag
gggatggacc
catgataaga
atgctattgc
gttcaggggg
atcctcaaat
ttcaacattt
aaagtaaaag
gagttttcgc
acgccgggca
catcttacgg
tctgacaacg
gggaaccgga
aaactattaa
accacttctg
tcattgcagc
gaacgaaata
actttagatt
tcccttaacg
ctgcgcgtaa
tctttttccg
acttcaagaa
tcgtgtctta
acagcccagc
aagggagaaa
gcctggtatc
gagcctatgg
ctgcggtacc
aacctgaaac
catcacaaat
atgtctggat
ctgaaacata
cacaaatttc
tctg
tgtctgatgt
cgtgatcgac
atccagtgaa
ctgcctaagg
catcgcccca
cagtgggcct
tctatcgtgg
agagatcgcc
tgcagggcta
ggcaccccta
gatttgcttc
ggtggctgca
aagtacaagg
catcggcatc
aggaggtgca
ccgaaaggcc
ccatggcttc
gtcaccctgc
tacattgatg
tttatttgta
aggtgtggga
atgtatccgc
ccgtgtcgcc
atgctgaaga
cccgaagaac
agagcaactc
atggcatgac
atcggaggac
gctgaatgaa
ctggcgaact
cgctcggccc
actggggcca
gacagatcgc
gatttaaaac
tgagttttcg
tctgctgctt
aaggtaactg
ctctgtagca
ccgggttgga
ttggagcgaa
ggcggacagg
tttatagtcc
aaaaacgcca
gatcataatc
ataaaatgaa
ttcacaaata
cataatcagc
aaatgaatgc
acaaataaag
tctgttccaa
agcatgtacg
gttcaaccct
gcgtggtgat
gatacatcca
gaagatcgtg
tgcctcctcc
tgtggcggct
tggcctgacc
tgccctatgt
aagagccaga
caccggcgat
gctaccaggt
ccagacgagt
ggattatatc
caacaggcaa
ccgccggagg
agcctgtgct
agtttggaca
accattataa
ggttttttaa
tcatgagaca
cttattccct
tcagttgggt
gttttccaat
ggtcgccgca
agtaagagaa
cgaaggagct
gccataccaa
acttactcta
ttccggctgg
gatggtaagc
tgagataggt
ttcattttta
ttccactgag
gcaaacaaaa
gcttcagcag
ccgcctacat
ctcaagacga
cgacctacac
tatccggtaa
tgtcgggttt
gcaacgcggc
agccatacca
tgcaattgtt
aagcattttt
cataccacat
aattgttgtt
catttttttc
gaagtccctg
acatcaacgg
aaagagtttg
cagccacagg
tcctggccat
atggtgaaaa
aatcatggtg
cccctctggg
gagacctgta
ccaggtgaag
tgctgatgaa
ctgggctact
ggcccctgcc
ttgccggcca
gccgagctgg
gctgatgaga
tggaggagca
tctgctagga
aaccacaact
gctgcaataa
agcaagtaaa
ataaccctga
tttttgcggc
gcacgagtgg
gatgagcact
tacactattc
ttatgcagtg
aaccgctttt
acgacgagcg
gcttcccggc
ctggtttatt
cctcccgtat
gcctcactga
atttaaaagg
cgtcagaccc
aaaccaccgc
agcgcagata
acctcgctct
tagttaccgg
cgaactgaga
gcggcagggt
cgccacctct
ctttttacgg
catttgtaga
gttgttaact
ttcactgcat
ttgtagaggt
gttaacttgt
actgcattct
[7] トラブルシューティング
(1) クローニング
現象
対応
ターゲット領域の PCR 増幅が上手くい ターゲット領域に GC リッチな領域が含まれる場合、
かない
PCR 反応効率が低下することがあります。下記のように
PCR を行うことによって改善される場合があります。
・PCR を 2 ステップサイクルにする。
・PCR の Denature ステップを 98℃、10 秒にする。
・5%程度の DMSO を PCR 反応液に添加する。
コロニーダイレクト PCR が上手くいか 適切なプライマーを使用してください(p.7 参照)。
ない
また、上記のように PCR を行うことによって改善される
場合があります。
(2) トランスフェクション
現象
対応
ルシフェラーゼが発現しない、または発 ・ もともと発現の低いプロモーターの可能性がありま
現が低い
す。低レベルの発現の確認には SLO または SLG が適
しています。SLR に連結されている場合、SLO あるい
は SLG に組み換えることをお薦めします。
・ トランスフェクション試薬あるいは条件が不適当な可
能性があります。試薬や条件を変えて実施してくださ
い。
・ プラスミド抽出の際、大腸菌が混入した可能性があり
ます(顕微鏡で観察すると、細胞以外に菌体が認めら
れます)。フェノール/クロロホルム抽出を実施してくだ
さい。
・ プラスミドの純度が低い可能性があります。
Endotoxin の混入が少なくなるように再精製してくださ
い。
[8] 参考文献
1. Nakajima, Y., Kimura, T., Suzuki, C., and Ohmiya, Y. Biosci. Biotechnol. Biochem. 68, 948-951(2004)
2. Nakajima, Y., Ikeda, M., Kimura, T., Honma, S., Ohmiya, Y. and Honma, K. FEBS Letters 565, 122-126
(2004)
3. 近江谷克裕 生化学, 76, 5-15(2004)
4. 中島芳浩、菅田和法、近江谷克裕 バイオテクノロジージャーナル, 7-8, 453-455(2005)
5. Nakajima, Y., Kimura, T., Sugata, K., Enomoto, T., Asakawa, A., Kubota, H., Ikeda, M. and Ohmiya, Y.
Biotechniques, 38,891-894(2005)
6. Li, X., Zhao, X., Fang, Y., Jiang, X., Duong, T., Fan, C., Huang, C.C., Kain, S.R. J. Biol. Chem. 273,
34970-34975(1998)
7. Andrew G.B., Joanna B., Cameron S.O., and Peter N.C. Plasmid, 44, 173-182(2000)
30
[9] 関連商品
品名
®
Tripluc システム用 1 液アッセイ試薬(in vitro アッセイ用)
®
Tripluc Luciferase Assay Reagent
®
MultiReporter Assay System –Tripluc – in vivo アッセイ用試薬
D-luciferin(カリウム塩)
High Fidelity PCR 用酵素
KOD –Plus–
High Fidelity PCR 用酵素
KOD –Plus– Ver.2
Taq ベースのブレンド型 PCR 用酵素
®
Blend Taq
Taq ベースのブレンド型 PCR 用酵素(Hot start 対応)
®
Blend Taq –Plus–
簡単ライゲーション
Ligation high
コンピテントセル
Competent high DH5α
31
内容
Code No.
10mlx1 本
MRA-301
20 mg
MRL-101
200 U
KOD-201
200 U
KOD-211
250 U
BTQ-101
250 U
BTQ-201
50 回用
LGK-101
0.1ml×10 本
DNA-903
32
33
【製造・販売元】
−納期・注文に関するお問い合わせ−
東洋紡株式会社 ライフサイエンス事業部 (大阪)
〒530-8230 大阪市北区堂島浜二丁目 2 番 8 号
TEL 06-6348-3786 FAX 06-6348-3833
E-mail : [email protected]
東洋紡株式会社 ライフサイエンス事業部 (東京)
〒104-8345 東京都中央区京橋一丁目 17 番 10 号 住友商事京橋ビル
TEL 03-6887-8819 FAX 03-6887-8951
E-mail : [email protected]
−製品の内容・技術に関するお問い合わせ−
テクニカルライン
TEL 06-6348-3888 FAX 06-6348-3833
開設時間 9:00∼12:00 , 13:00∼17:00 (土、日、祝を除く)
E-mail : [email protected]
[URL] http://www.toyobo.co.jp/bio
34
Author
Document
Category
Uncategorized
Views
13
File Size
513 KB
Tags
1/--pages
Report inappropriate content