ChemiDoc Touch イメージングシステムユーザーボイス User Voice ChemiDoc Touchイメージングシステムを導入してご活用いただいているお客様より、本装置の活用方法についてご紹介いただきます。九州大学　大学院医学研究院　医化学分野　三浦史仁先生研究の概要およびChiemiDoc Touch 活用方法わたしたちはエピジェネティクス研究のための技術開発を主なテーマとしております。最近は次世代シークエンサーを利用して、ゲノム全体のDNAメチル化状態やヒストンの翻訳後修飾状態を高感度に定量化する技術の開発を行っております。このような開発を行う上で、回収されたDNAおよびタンパク質の収量やサイズ分布を定量的に評価することは必要不可欠です。私たちの研究ではChemiDopc Touchを DNAの場合は電気泳動後のゲルの蛍光画像の取得、また、タンパク質の場合は、SDS-PAGE後のゲルの蛍光画像の取得やウェスタンブロッティングの科学発行画像の取得に利用しています。使用の感想私たちがChemiDoc Touch に注目したのは10年以上使用した他社製品の化学発光・蛍光イメージ撮影装置が時々不具合を起こすよ 1) 次世代シークエンサーの鋳型サイズの確認（蛍光ゲル撮影）次世代シークエンサーで配列決定するための鋳型の濃度は一般的にリアルタイムPCR法により定量する。このPCRにより増幅された断片を 6%のTBE-Ureaゲルによる編成ゲル電気泳動で分離し、鋳型のサイズ分布を確認した例。一番左のレーンが100bpラダーで他の4レーンはサンプル。この結果から、分布された鋳型は200塩基から600塩基の断片で、塩基配列決定の際に実質的なリード数を引き下げる原因となるアダプターダイマーがほとんど含まれていない高品質なものであることが確認できた。うになっており、リプレースを考えていた頃でした。丁度ChemiDoc Touchの発売がアナウンスされた頃で、今考えると非常にラッキーでした。もちろん他社製品もいくつかデモで試していたのですが、どの機種も使ってみた感覚はそれまで使用していた機種とあまり変わりませんでした。一方でChemiDoc Touchに初めて触れたときは驚きました。タッチパネルによる自然な操作が一番衝撃的でしたが、それに加えて起動時の待ち時間の短さなど機械に対するストレスがほとんど無いことはとても斬新でした。それまで利用していた装置ではカメラが安定に動作するまで起動後10分程度待機する必要があったのですが、ChemiDoc Touchの場合、撮影直前に起動しても待ち時間をほとんど感じることなくスムーズに撮影に進むことができます。ChemiDoc TouchはDNAの電気泳動からタンパクのウェスタンブロッティングの検出まで、私たちが必要な多くの画像取得を1台で全て行ってくれるので、日々の実験で大変重宝しています。 2) 大腸菌の発現誘導の確認（可視染色ゲル撮影）大腸菌に組み替えタンパク質の発現を誘導し、その誘導状態を確認するためにAny kDミニプロティアン TGX Stain-Freeゲルを用いた SDS-PAGEを行った例。プレシジョンPlusプロテイン未着色スタンダード（レーン1）、ネガティブコントロールの細胞内全タンパク質（レーン2）、同細胞抽出液の上清（レーン3）、タンパク質の発現誘導を行った大腸菌の細胞内全タンパク質（レーン4）、同細胞抽出液の上清（レーン5 ）をロードした。発現の誘導には成功したが（レーン2と4の比較）、タンパク質の可溶化は残念ながらうまく出来ていなかった。ChemiDoc TouchとStain-Freeゲルを用いるとSDS-PAGE から可視化までが1時間で完了するため、トライアンドエラーのサイクルを迅速に回すことが可能になる。 3) 免疫沈降したクロマチン回収量の確認（化学発光メンブレン撮影）免疫沈降したクロマチンの回収量を確認するため、Any kDミニプロティアン TGXによるSDSPAGE.とトランスブロットTurboを用いたブロッティングを行い、化学発光検出を行った例。インプット（1レーン）、免疫沈降した上清（2、3レーン）、ビーズへの結合画分（4、5レーン）。抗原タンパク質はヒストンH3でメンブレンの免疫染色にはLife Technologies社のiBindを利用した。電気泳動の開始から免疫染色を開始するまでのハンズオンタイムは１時間程度。 C10764 1605A