STUDIO PRELIMINARE DI 15 LOCI STR SU DI UN CAMPIONE DI SOGGETTI
SOMALI INSERITO IN UN PROGRAMMA INTERNAZIONALE DI
RICONGIUNGIMENTO FAMILIARE.
Daniele Podini*^, Andrea Nuccitelli*, Nello Vitale*, Luana Barbetta*, Simona Moscarelli°, Francesco Fiorentino*
* Laboratorio GENOMA – Servizio Analisi del DNA, via Po 102, 00198 Roma – www.laboratoriogenoma.it
° Organizzazione Internazionale per le Migrazioni – Missione di Roma – www.iom.int
ABSTRACT
Il ricongiungimento familiare viene considerato prima di tutto una questione umanitaria, ma promuovere il
ricongiungimento ha anche dei risvolti positivi da un punto di vista politico-sociale: una famiglia unita ha
maggiori possibilità di integrarsi nel tessuto sociale di un nuovo paese rispetto ad un singolo immigrante.
Quando la documentazione anagrafica non esiste o è andata distrutta nel paese d’origine dei richiedenti il
ricongiungimento, l’unico modo per determinare l’effettivo rapporto di parentela fra due soggetti è tramite
l’analisi del DNA.
In questo studio presentiamo i risultati preliminari di un progetto pilota volto ad accertare la parentela fra
soggetti Somali residenti in Italia ed i loro familiari in Somalia, con fini di ricongiungimento familiare. La
tipizzazione del DNA è stata effettuata mediante l’analisi di 15 loci STR (D3S1358, VWA, HUMFGA,
D8S1179, D21S11, D18S51, D5S818, D13S317 D7S820, D16S539, TH01, CSF1PO, TPOX, D2S1338 e
D19SS433), utilizzando il Kit AmpFlSTR IdentifilerTM (Applied Biosystems). I dati popolazionistici
preliminari sono stati estrapolati da un campione di 97 soggetti non imparentati tra loro, appartenenti a
differenti nuclei familiari. Vengono qui riportate le frequenze geniche relative ai citati loci STR per il
campione di popolazione analizzato.
^ Per la corrispondenza: Dott. Daniele PODINI, Responsabile Sezione Forense, Laboratorio GENOMA Servizio Analisi del DNA,
via Po102, 00198 Roma. Tel. 06 85358425 Fax 06 85344693 Email [email protected]
INTRODUZIONE
Più di 150 milioni di immigrati nel mondo hanno celebrato l’arrivo del nuovo millennio fuori dalla nazione
in cui sono nati1. I motivi che li portano a emigrare sono per studiare, lavorare, riunirsi con i propri familiari,
sfuggire a persecuzioni, alla fame etc. Questi flussi migratori sono una realtà importante in un mondo che
tende sempre più alla globalizzazione e molte delle Nazioni destinatarie, in funzioni delle loro necessità e
disponibilità, hanno optato per delle restrizioni che limitano il numero di immigrati.
Il ricongiungimento familiare viene considerato prima di tutto una questione umanitaria, ma promuovere il
ricongiungimento ha anche dei risvolti positivi da un punto di vista politico-sociale: una famiglia unita ha
maggiori possibilità di integrarsi di integrarsi nel tessuto sociale di un nuovo paese rispetto ad un singolo
immigrante. Il ricongiungimento familiare diventa quindi un interesse della nazione ospite stessa2.
In generale viene definito SPONSOR il soggetto straniero che risponde a determinati requisiti, stabiliti dalla
nazione ospitante, ed APPLICANT il o i familiari con cui lo Sponsor si vuole ricongiungere. Una volta
stabilito che lo Sponsor è in possesso dei requisiti necessari per avvalersi del diritto a ricongiungersi con i
propri familiari, l’ambasciata del paese ospitante nel paese di provenienza dovrà accertare l’identità degli
Applicant e verificare la validità della documentazione richiesta per concedere loro il nulla osta al
ricongiungimento. In alcuni paesi (molto poveri e con situazioni politiche instabili) gli archivi anagrafici
possono non esistere o essere andati distrutti, non è quindi possibile determinare la parentela tra soggetti
diversi tramite documentazione anagrafica. In questi casi gli interessati non potrebbero avvalersi del diritto
al ricongiungimento riconosciutogli dalla nazione ospite e l’unico modo per determinare l’esistenza di un
rapporto di parentela fra Sponsor e Applicant diventa l’analisi del DNA. Una delle prime applicazioni è stata
descritta da Alec Jeffreys3 nel 1985.
Dal 1991 in Somalia non esiste alcun governo, riconosciuto dallo Stato Italiano, in grado di produrre
documentazione utile a certificare l’identità, e conseguentemente i rapporti di parentela, di cittadini di questo
paese. Al fine di poter garantire ai cittadini Somali residenti in Italia gli stessi diritti di tutti gli altri cittadini
extracomunitari, e quindi anche il diritto al ricongiungimento familiare, è stato organizzato e sviluppato un
progetto pilota, su mandato del Ministero degli Affari Esteri, coordinato dall’Organizzazione Internazionale
per le Migrazioni (O.I.M.) e condotto dal Laboratorio GENOMA, per accertare la parentela fra Sponsor e
Applicant Somali. Il progetto, tuttora in fase di svolgimento, ha sinora coinvolto 97 nuclei famigliari, per un
totale di 352 individui investigati.
In questo lavoro presentiamo i risultati preliminari del progetto in argomento, unitamente ai dati di
popolazione relativi a 15 regioni STR maggiormente utilizzate dalla comunità scientifica forense
internazionale (D3S1358, VWA, HUMFGA, D8S1179, D21S11, D18S51, D5S818, D13S317 D7S820,
D16S539, TH01, CSF1PO, TPOX, D2S1338 e D19SS433).
MATERIALE E METODI
Nella realizzazione di questo progetto abbiamo dovuto considerare numerosi fattori al fine di ridurre al
minimo i costi ed il rischio per il personale coinvolto massimizzando l’efficienza e la significatività del dato
finale.
L’O.I.M. ha selezionato gli Sponsors residenti in Italia che presentavano i requisiti minimi necessari,
convocandoli in diverse sedute presso la missione O.I.M. di Roma. In questa sede si effettuava a ciascuno
Sponsor un prelievo di cellule della mucosa buccale, in doppio, mediante “Citobrush”. Parallelamente, il
medesimo tipo di prelievo veniva effettuato ai corrispondenti Applicant presso le missioni O.I.M. di Nairobi
(Kenya) e Addis Abeba (Etiopia). La scelta delle cellule della mucosa buccale come campione biologico per
effettuare l’esame del DNA è stata determinata dalla semplicità e non invasività del prelievo, dalla necessità
di minimizzare i rischi per gli operatori e dalla facilità di trasporto e conservazione dei campioni.
L’estrazione del DNA da cytobrush è stata effettuata mediante una prima fase di eluizione del tampone e
centrifugazione seguita da una seconda fase di lisi cellulare ed asportazione del materiale proteico e lipidico
mediante resina CHELEX 100® 4. L’amplificazione del DNA è stata effettuata utilizzando il kit
AmpFlSTR IdentifilerTM 5 (Applied Biosystems) e condotta su Thermal Cycler GeneAmp PCR System
9700 (Applied Biosystems), seguendo il protocollo fornito dalla ditta produttrice. Il kit consente di
genotipizzare 15 loci STR (D3S1358, VWA, HUMFGA, D8S1179, D21S11, D18S51, D5S818, D13S317
D7S820, D16S539, TH01, CSF1PO, TPOX, D2S1338 e D19SS433) più un locus per la determinazione del
sesso detto Amelogenina. L’analisi dei prodotti di PCR è stata effettuata su ABI PRISMTM 310 Genetic
Analyzer seguita da genotipizzazione mediante i softwares GeneScan 3.1.2 e Genotyper 2.5.2 (Applied
Biosystems).
Eventuali fonti di errore sono state valutate non solo all’interno del laboratorio ma anche nella fase di
raccolta e spedizione dei campioni. Gli accorgimenti adottati sono stati diversi: i campioni relativi a questo
progetto sono stati trattati separatamente da tutti gli altri campioni analizzati nel laboratorio; per ogni
sessione di estrazione, amplificazione e corsa elettroforetica tutti i profili genetici il cui risultato riconduceva
ad una esclusione della parentela sono stati confrontati tra loro. Successivamente è stato ripetuto l’esame
utilizzando il secondo prelievo disponibile. Il risultato di esclusione, comunque, è stato sempre riconfermato
ripetendo l’intera procedura dal prelievo dei campioni.
RISULTATI E DISCUSSIONE
Ad oggi sono stati processati 97 nuclei familiari per un totale di 352 soggetti investigati. Tutti i casi di
esclusione sono stati riconfermati. Per la costituzione del campione di popolazione somala da cui estrapolare
i dati statistici è stato utilizzato un individuo per ciascun nucleo familiare, per un totale di 97 soggetti non
imparentati tra loro. Le frequenze alleliche preliminari sono riepilogate in tabella 1.
Le frequenze alleliche dei loci studiati, in base ai dati preliminari raccolti fino a questo punto, appaiono in
equilibrio di Hardy – Weinberg tuttavia studi statistici più approfonditi (es. comparazione con frequenze
alleliche di altre popolazioni) verranno effettuati successivamente al fine di avere un campione
maggiormente significativo.
Le frequenze alleliche relative alla popolazione Somala che si otterranno alla conclusione di questo progetto
potranno essere utili sia in altri casi di ricongiungimento familiare che a scopo forense e cioè quando
soggetti, in qualche modo coinvolti in un fatto reato in cui sia necessaria l’analisi dei polimorfismi del DNA,
siano Somali.
BIBLIOGRAFIA
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DNA and Human Rights Conference - University of California, Berkeley, Aprile 2001).
Commissione Esecutiva del “High Commissioner’s Programme”, Family Protection Issues
(Ginevra: United Nations High Commission for Refugees, 1999).
A.Jeffreys et al. Positive Identification of an Immigration Test-Case Using Human DNA
Fingerprints (1985) 317 Nature 818.
P.S. Walsh, D.A. Metzger, R. Higuchi, Chelex 100 as a Medium for Sample Extraction of DNA
for PCR-based Typing From Forensic Material, Biotechniques 10 (1991) 506-518.
AmpFlSTR
IdentifilerTM
User
Manual,
PE
Applied
Biosystems.
Tabella 1: Distribuzione delle frequenze alleliche di 15 loci STR relativa ad un campione di popolazione somala di 97 individui non imparentati
STR
Allele
6
7
8
9
9.3
10
10.2
11
12
12.2
13
13.2
14
14.2
15
15.2
16
16.2
17
17.2
18
18.2
19
20
21
22
23
23.2
24
24.2
25
26
26.2
27
28
29
30
30.2
31
31.2
32
32.2
33
33.2
34
34.2
35
HumTH01 TPOX
0,287
0,404
0,101
0,122
0,059
0,027
HumCSF1PO D7S820
D13S317
D5S818
D16S539
0,011
0,000
0,335
0,324
0,005
0,027
0,092
0,005
0,161
0,115
0,139
0,015
0,062
0,031
0,064
0,106
0,080
0,223
0,391
0,046
0,031
0,090
0,245
0,005
0,207
0,391
0,141
0,172
0,196
0,454
0,273
0,299
0,324
0,261
0,043
0,010
0,113
0,299
0,106
0,011
0,005
0,036
0,005
0,043
0,005
D19S433
D8S1179
D18S51
D3S1358
HumVWA D2S1338
HumFGA
D21S11
0,005
0,031
0,011
0,011
0,165
0,016
0,245
0,027
0,245
0,037
0,128
0,037
0,064
0,005
0,005
0,041
0,144
0,165
0,253
0,289
0,067
0,010
0,053
0,011
0,053
0,005
0,089
0,137
0,005
0,153
0,026
0,137
0,011
0,126
0,005
0,079
0,068
0,026
0,011
0,005
0,077
0,052
0,011
0,227
0,211
0,005
0,340
0,253
0,032
0,304
0,216
0,097
0,046
0,113
0,065
0,021
0,005
0,098
0,036
0,015
0,005
0,258
0,215
0,054
0,145
0,054
0,054
0,015
0,010
0,124
0,278
0,180
0,015
0,160
0,011
0,041
0,057
0,005
0,010
0,072
0,015
0,031
0,098
0,289
0,289
0,005
0,062
0,052
0,005
0,036
0,000
0,026
0,021
0,015
0,031
36
37
0,021
0,015