J. Embryol. exp. Morph. Vol. 22, 1, pp. 15-25, August 1969
\ 5
Printed in Great Britain
Nouvelles observations sur les facteurs qui
controlent Ferythropoiese in vitro
ParGERMANO SALVATORELLI 1
Institut d'Embryologie experimentale du College de France et du C.N.R.S.
(Directeur: Professeur Etienne Wolff) et Istituto d'Anatomia Comparata
deV Universita di Ferrara {Directeur: Professeur Leo Raunich)
Nous avons demontre precedemment que l'association de fragments de foie
embryonnaire a des explants de moelle osseuse de poulet s'est montree tres
favorable au maintien du processus de 1'erythropoiese medullaire. Dans ces
conditions experimentales en effet, meme apres 15 jours de culture la structure et
la composition cellulaire des explants sont comparables a celles existant in vivo.
En particulier, en ce qui concerne la serie rouge tous Jes stades de la differenciation cellulaire depuis la cellule souche jusqu'a la cellule sanguine mure sont
presents dans nos explants et dans des proportions comparables a celles qu'on
retrouve dans la moelle osseuse normale.
Nous en avons conclu que le tissu hepatique joue un role indispensable dans la
differenciation et la maturation des elements de la serie rouge en culture in vitro
et qu'il doit agir d'une facon speciflque car la culture de la moelle osseuse, seule
ou bien en association avec le mesonephros, ne permet qu'une survie tres
limitee des differentes lignees sanguines.
Dans ces dernieres conditions de culture, les erythroblastes continuent leur
maturation seulement pendant les deux premiers jours de culture, tandis que la
production des cellules souches et leur differenciation en erythroblastes est
arretee; les elements de la serie blanche continuent plus Jongtemps leur processus
de differenciation et de maturation mais, en tout cas, la survie des explants ne
depasse pas 5 a 6 jours de culture (Salvatorelli, 1966, 1967a, b).
Une analyse spectrophotometrique des erythrocytes differencies in vitro a
demontre que la quantite de globine et d'heme presente dans ces derniers est
inferieure a celle des temoins d'age correspondant in vivo tandis que la presence
de faibles quantites d'ARN dans le cytoplasme des erythrocytes des explants est
probablement en relation avec un ralentissement du processus de la maturation
erythrocytaire; l'hemoglobine synthetisee in vitro montre toutefois le meme
comportement electrophoretique que les temoins (Salvatorelli, Callegarini,
Gulinati & Gardenghi, 1968).
1
Adresse de I'auteur: Institut d'Embryologie experimentale, College de France, 49 bis,
avenue de la Belle Gabrielle, Nogent-sur-Marne, France.
16
G. SALVATORELLI
Les resultats de ces premieres experiences nous avaient permis d'emettre
l'hypothese suivante: le foie embryonnaire de poulet serait le lieu de production
d'une ou de plusieurs substances favorisant la differenciation et la maturation
des elements de la serie rouge; Faction biologique de cette ou de ces substances
presenterait un veritable parallelisme avec celle de l'erythropoietine.
C'est a partir de ces resultats que nous nous sommes propose, dans des series
successives d'experiences, de voir en premier lieu si la production par le foie
embryonnaire de ce ou de ces facteurs erythropoietiques presents dans le foie
embryonnaire est limitee a un certain stade du developpement ou si elle continue apres l'eclosion et chez l'adulte; puis nous nous sommes demande si
l'apport du foie foetal est capable non seulement de maintenir l'erythropoiese
myeloide mais aussi de la reactiver en agissant sur la differenciation des cellules
souches en erythroblastes; ensuite nous avons cherche si ce facteur serait, de
plus, actif sur d'autres organes erythropoietiques de l'embryon et du poulet
adulte; nous avons essaye aussi son activite sur les organes hematopoietiques
d'autres especes d'oiseaux, comme le canard, pour voir si cette action exercee
par le foie de poulet est strictement specifique ou bien si elle peut aussi se
manifester en association xenoplastique.
Nous avons enfin tente de voir quelle serait Faction du foie embryonnaire de
poulet sur le foie foetal de cobaye, ce qui presente aussi un interet remarquable
dans la mesure ou on ne sait pas encore suffisamment bien si les mecanismes
d'action des facteurs qui controlent 1'erythropoiese chez les oiseaux et chez les
mammiferes sont les memes.
MATERIEL ET METHODES
Des fragments d'organes hematopoietiques d'embryons de poulet, de canard,
de cobaye et de poulet adulte ont ete explantes sur le milieu solide de Wolff &
Haffen (1952) enrichi en serum de cheval et recouvert de fragments de membrane
vitelline d'oeuf de poule non incube (Wolff, 1961).
Au total nous avons cultive avec cette methode 3.000 explants environ. Les
temps de culture variaient de 2 a 12 jours et les explants ont ete utilises
pour faire des frottis, colores ensuite par la methode de May-Grunwald-Giemsa
selon Pappenheim.
Comme test d'activite erythropoietique nous avons pris le pourcentage de
proerythroblastes et d'erythroblastes presents dans les frottis des organes
hematopoietiques cultives.
RESULTATS
1. Action dufoie embryonnaire de diffe'rents ages sur des cultures
de moelle osseuse d'embryons de Poulet
Dans cette serie d'experiences nous avons associe a la moelle osseuse d'embryons de poulet de 17-19 jours des fragments de foie embryonnaire de poulet
Uerythropoiese in vitro
17
de 5—6—9—11—16— 18 jours, de poussins de 9 jours, de jeunes poulets de 30 jours et
enfin de poulets adultes ages d'un an.
Nos resultats semblent montrer que deja au 5e jour le foie embryonnaire a,
vis-a-vis de l'erythropoiese medullaire, une action tres favorable. Cette activite
erythropoietique exercee par le tissu hepatique continue pendant le developpement embryonnaire, presente son maximum entre le 9e et le 16e jour d'incubation et diminue ensuite brusquement pour s'eteindre completement au cours de la
premiere annee de vie (fig. 1).
10,4
MM
5j
m
9j
11 j
16j
18 j
9j
1 mois
1 an
Fig. 1. Action du foie embryonnaire de differents ages sur l'erythropoiese dans la
moelle osseuse d'embryons de Poulet de 18 jours d'incubation cultivee 4 jours.
E3, hemocytoblastes; • , proerythroblastes; D, erythroblastes basophiles; ^ ,
erythroblastes polychromatophiles.
2. Reactivation de Verythropo'iese myelo'ide par Vapport de foie
embryonnaire chez Vembryon de Poulet
La culture de moelle osseuse embryonnaire de poulet sur le milieu de Wolff et
Haffen ne permet qu'une survie tres limitee de la lignee erythrocytaire (Salvatorelli, 1966,19676). Dans ces conditions experimentales en effet, des les premiers
jours de la mise en culture, 1'erythropoiese s'arrete: les cellules souches continuent a se diviser par mitose mais semblent incapables de se differencier en
erythroblastes.
Nous avons alors associe des fragments de foie foetal de poulet de 8-9 jgurs
aux explants de moelle osseuse d'embryons de poulet de 17-19 jours d'incubation,
cultives prealablement seuls sur le milieu de culture pendant quelques jours afin
d'arreter leur activite erythropoietique, et nous avons examine si l'apport du
foie embryonnaire etait capable de reactiver le processus de differenciation des
cellules souches en erythroblastes.
Au moment de l'apport du foie embryonnaire, dans les explants qui avaient
ete cultives seuls sur le milieu pendant 3 jours, les erythroblastes ont disparu
tandis que les cellules souches sont encore dans un pourcentage presque normal
(fig. 2); 12 h apres l'apport du foie embryonnaire a nos explants (3 jours et
demi depuis la mise en culture), le pourcentage des cellules souches a presque
double.
JEEM 22
18
G. SALVATORELLI
Vingt-quatre heures apres (4e jour depuis la mise en culture), on peut noter,
dans la composition cellulaire des explants, l'apparition d'un certain nombre
de proerythroblastes. Deux jours apres (5e jour depuis la mise en culture), on
voit a nouveau dans nos cultures des erythroblastes basophiles et polychromatophiles. Trois jours apres (6e jour depuis la mise en culture), le pourcentage
d'erythroblastes est a un niveau comparable a celui de la moelle osseuse au
moment de sa mise en culture. Quatre jours apres (7e jour depuis la mise en
culture), le pourcentage d'erythroblastes present dans les explants a largement
depasse celui des temoins in vivo (fig. 2).
16,5
Moelle
oss. in
vivo
Moelle,
3j
culture
3.5 j
5j
6j
Moelle osseuse en culture en presence de foie
Fig. 2. Reactivation de l'erythropoiese dans des cultures de moelle osseuse d'embryons de Poulet de 19 jours d'incubation par l'apport du foie embryonnaire de la
meme espece. 0 , hemocytoblastes; • , proerythroblastes; D, erythroblastes
basophiles; H, erythroblastes polychromatophiles.
Des resultats analogues a ceux que nous avons exposes peuvent etre obtenus
si on cultive des explants seuls sur le milieu de culture pendant 4 jours, et si on
leur associe ensuite des fragments de foie embryonnaire. Apres 5 jours de culture
sur le milieu, au contraire, les explants semblent reagir moins bien a l'action du
foie. Dans ce cas, en effet, le pourcentage d'erythroblastes presents dans ces
explants, apres 3 jours d'association avec le foie embryonnaire, est tres faible,
tandis que celui des cellules souches semble etre presque normal.
3. Action dufoie embryonnaire de 8-10 jours sur d'autres organes
hematopo'ietiques de Poulet en culture
(a) Rate embryonnaire
Dans la rate embryonnaire de Poulet, l'erythropoiese commence au 8e-9e
jour (Sandreuter, 1951), atteint son maximum au 12e jour de l'incubation pour
diminuer progressivement d'intensite et s'eteindre a l'eclosion.
L'age de la rate explantee etait compris entre 10 et 21 jours d'incubation et
Uerythropoiese in vitro
19
elle a ete cultivee seule sur le milieu de culture, ou bien associee au foie embryonnaire de Poulet de 9 jours pendant une periode comprise entre 2 et 12 jours.
Si on cultive la rate embryonnaire seule sur le milieu, a partir du 2e jour de
culture l'activite erythropoietique est deja en voie d'extinction et au 3e-4e jour
elle est pratiquement eteinte, quel que soit l'age de la rate au moment de la mise
en culture. Au contraire, l'association des fragments de foie embryonnaire aux
explants de rate est capable de maintenir 1'erythropoiese splenique meme apres
12 jours de culture.
22,0
12,9
Fig. 3
Fig. 4
Fig. 3. Pourcentage d'hemocytoblastes (jgj), de proerythroblastes ( • ) , d'erythroblastes basophiles (D) et polychromatophiles (^) presents dans la rate d'embryons de Poulet de 9 et 21 jours d'incubation in vivo (A et C) et dans la rate
cultivee pendant 4 jours associee au foie embryonnaire de Poulet (B et D).
Fig. 4. Pourcentage d'hemocytoblastes (^), de proerythroblastes ( • ) , d'erythroblastes basophiles (D) et polychromatophiles (§§) presents dans la moelle osseuse de
Poulet adulte, in vivo (A), cultivee seule (B), associee au foie embryonnaire (C) et
associee au foie adulte de la meme espece (D).
II faut aussi remarquer que des rates qui, au moment de la mise en culture,
etaient a un stade ou 1'erythropoTese est particulierement active (10-15 jours
d'incubation), montrent in vitro une intense erythropoiese, tandis que les rates
d'embryons aux derniers stades avant l'eclosion (18e-21e jours d'incubation),
stades dans lesquels meme in vivo rerythropoiese est presque eteinte, ne semblent
plus capables de reagir au facteur erythropoietique hepatique (fig. 3).
(b) Moelle osseuse adulte
Nous avons explante, dans cette serie d'experiences, des fragments de moelle
osseuse preleves sur le tibia tarse de Poulets adultes et nous les avons cultives
seuls ou bien en association avec des fragments de tissu hepatique d'embryons de
Poulets de 9 jours ou de Poulets adultes (fig. 4).
20
G. SALVATORELLI
Meme chez l'adulte, la moelle osseuse explantee seule sur le milieu de culture
perd, des les premiers jours, son activite erythropoietique tandis que la leucopoiese peut continuer dans ces explants pendant quelques jours de plus.
L'apport du foie embryonnaire permet, au contraire, le maintien d'une activite
erythropoietique comparable a celle qui se deroule in vivo.
L'association avec des fragments de foie adulte n'est pas capable de maintenir
l'erythropoiese myeloide. Ceci montre que le foie adulte est non seulement
incapable d'agir sur la differentiation des cellules souches des organes erythropoietiques embryonnaires, mais aussi qu'il est inactif sur les organes erythro-
poietiques de Poulet adulte.
11
10
9
8
10,4
7
6
5
4
3
2
1
B
C
I
I
1
1
I
- rj
I
1
1
-j I
B
Fig. 6
Fig. 5. Pourcentage d'hemocytoblastes (^), de proerythroblastes ( • ) , d'erythroblastes basophiles (D) et polychromatophiles (ig) presents dans les explants de
moelle osseuse d'embryons de Canard associee au foie d'embryons de Canard (A) et
d'embryons de Poulet (B), de moelle osseuse d'embryons de Poulet associee au foie
embryonnaire de Canard (C) et de Poulet (D).
Fig. 6. Pourcentage d'hemocytoblastes (^), de proerythroblastes ( • ) , d'erythroblastes basophiles ( • ) et polychromatophiles (§§) presents dans le foie embryonnaire de cobaye in vivo (A), cultive seul (B), associe au foie embryonnaire de Poulet
(C), et cultive sur milieu enrichi en serum anemie (D).
Fig. 5
4. Action dufoie embryonnaire de poulet sur les organes
hematopo'ietiques d'autres especes animales
(a) Moelle osseuse de Canard
L'apport du foie embryonnaire de Poulet a des cultures organotypiques de
moelle osseuse d'embryons de Canard de 24 jours permet le maintien de
Ferythropoiese myeloide in vitro et le pourcentage d'erythroblastes presents dans
les explants ainsi cultives est comparable a celui qu'on obtient en associant la
moelle osseuse de Canard au foie d'embryons de la meme espece (fig. 5 A, B).
L'erythropoiese in vitro
21
D'autre part, le foie embryonnaire de Canard est capable de maintenir,
cependant beaucoup moins bien, l'erythropoiese myeloide dans des cultures de
moelle osseuse d'embryons de Poulet (fig. 5C, D).
(b) Foie foetal de cobaye
Nous avons explante des fragments de foie d'embryons de cobaye, de
30 jours de gestation, seuls sur le milieu de culture, ou bien associes a des
fragments de foie embryonnaire de Poulet.
Dans le foie foetal de cobaye explante seul l'erythropoiese s'arrete des les
premiers jours de culture (fig. 6B) tandis que, en association avec le foie
embryonnaire de Poulet, les explants restent, apres plusieurs jours de culture,
encore riches en erythroblastes (fig. 6C). L'action du foie de Poulet est d'ailleurs comparable a celle que nous avons obtenue en explantant le foie foetal de
cobaye sur un milieu ou le serum de cheval a ete remplace par du serum de
cobaye anemie par la phenylhydrazine (fig. 6D). Dans ce dernier cas cependant
l'erythropoiese dans le foie de cobaye ainsi cultive garde des valeurs plus
proches de celles obtenues in vivo (fig. 6 A).
DISCUSSION
Le processus de l'erythropoiese est, chez les mammiferes, sous le controle
d'une hormone, l'erythropoietine, que Ton considere comme le facteur primaire
responsable de l'orientation des cellules souches vers la lignee erythrocytaire.
L'erythropoietine, dont la production, dependant d'un mecanisme du type
'feedback', est localisee dans le rein, est presente dans le plasma normal et, a
des concentrations beaucoup plus elevees, dans le plasma anemique. Sa constitution chimique est celle d'une glycoproteine et son poids moleculaire est
d'environ 60.000-70.000 (Goldwasser, 1966).
Sous Faction de cette hormone les cellules myeloides augmentent leur activite
de synthese d'hemoglobine (Krantz, Gallien-Lartigue & Goldwasser, 1963;
Gallien-Lartigue & Goldwasser, 1965), des proteines du stroma (Dukes, Takaku
& Goldwasser, 1963; Dukes & Goldwasser, 1965) et d'ARN (Krantz & Goldwasser, 1965).
D'autre part, l'interference exercee par certains inhibiteurs specifiques de la
synthese d'ARN dependant de l'ADN (actinomycine) semble montrer que
cette hormone agit, au niveau de la transcription, sur la synthese des proteines
specifiques des elements de la serie rouge (voir a ce propos 1'analyse de Goldwasser, 1966).
Mais les facteurs qui controlent l'erythropoiese chez les Oiseaux sont moins
bien connus. Des recherches recentes semblent montrer que, meme dans cette
classe, ce phenomene est probablement sous le controle d'un facteur present
dans le plasma qui differerait de l'erythropoietine des mammiferes soit en ce qui
22
G. SALVATORELLl
concerne certains details de sa constitution chimique, soit en ce qui concerne
son action biologique.
En effet, le serum anemie de Poulet semble incapable de stimuler l'erythropoiese chez les mammiferes et, d'autre part, l'erythropoietine des mammiferes ne
semble pas etre active sur les organes hematopoietiques des Oiseaux (Ross &
Waldmann, 1966).
Tout recemment, Malpoix (1967) aurait montre au contraire que l'erythropoietine des mammiferes serait capable d'augmenter la synthese de l'hemoglobine et d'ARN dans des cultures d'aire vasculaire de Poulet.
Nos resultats montrent que 1'apport des fragments de foie (Salvatorelli,
1967a) ou bien d'extraits acellulaires de foie embryonnaire de Poulet (Salvatorelli,
1961b) exerce une action tres favorable sur le maintien de l'erythropoiese
dans des cultures organotypiques d'organes hematopoietiques (moelle osseuse et
rate) d'embryons de la meme espece, ce qui nous a permis d'affirmer que le foie
embryonnaire est, chez le Poulet, le lieu de production d'une ou plusieurs
substances qui ont une action favorisant le processus de l'erythropoiese.
Ce ou ces facteurs erythropoietiques hepatiques semblent agir specifiquement
sur la differenciation des cellules souches vers la lignee erythrocytaire.
L'apport des fragments de foie embryonnaire a des cultures de moelle osseuse
embryonnaire est en effet capable non seulement de maintenir, mais aussi de
reactiver le processus de l'erythropoiese favorisant la differenciation des cellules
souches en erythroblastes. Toutefois, la reactivite des cellules souches au
facteur erythropoietique present dans le foie semble s'affaiblir si on depasse une
certaine periode de culture.
Des resultats analogues ont ete obtenus par nous-memes dans des cultures de
rate embryonnaire de Poulet. L'association avec du foie embryonnaire s'est
montree en effet capable de maintenir l'erythropoiese dans des explants de rate qui
au moment de la mise en culture etaient erythropoietiquement actifs (5-15 jours
d'incubation). Au contraire, des rates d'embryons proches de la naissance ne
semblent reagir que tres faiblement a l'apport du foie embryonnaire ce qui
pourrait s'expliquer en supposant qu'a la fin du developpement embryonnaire,
les cellules souches presentes dans la rate, perdent la capacite de se differencier
en erythroblastes. Le foie embryonnaire du Poulet du 5e au 15e jour d'incubation
manifeste une activite favorisant l'erythropoiese, tandis qu'apres le 15e jour cette
activite devient tres faible et meme nulle puisque l'apport de foie adulte n'est pas
capable de maintenir l'erythropoiese dans des cultures de moelle osseuse
embryonnaire ou adulte. Au contraire le foie embryonnaire de Poulet favorise
l'erythropoiese meme dans des organes hematopoietiques chez le Poulet adulte,
ce qui montre que, au moins en ce qui concerne Faction biologique, il y a une
identite entre les facteurs qui controlent l'erythropoiese chez l'embryon et
l'adulte. II est probable que le facteur erythropoietique est elabore pendant le
developpement embryonnaire dans le foie; ensuite sa production se localise dans
quelqu'autre organe, peut-etre le rein.
Verythropo'iese in vitro
23
Le foie embryonnaire de Poulet est aussi capable de maintenir l'erythropoiese
dans des cultures organotypiques de moelle osseuse de Canard et d'autre part le
foie embryonnaire de Canard montre la meme action sur des cultures de moelle
osseuse de Poulet. La production dans le foie embryonnaire de facteurs erythropoletiques semble done etre un phenomene commun chez les Oiseaux.
Ces experiences sur Faction xenoplastique du foie embryonnaire ont ete
confirmees par d'autres experiences montrant que l'apport du foie embryonnaire de Poulet a des explants de foie embryonnaire de cobaye permet in vitro
le maintien de l'erythropoiese hepatique chez ce mammifere.
Nous ne connaissons pas encore la nature de ce facteur erythropoietique
present dans le foie embryonnaire de Poulet; toutefois, en ce qui concerne
Faction biologique, il presenterait une certaine analogie avec celle exercee par
l'erythropoietine.
En effet, dans certaines de nos cultures sur milieu enrichi en serum anemie,
les resultats sont comparables a ceux que nous avons obtenus en associant a ces
explants des fragments de foie embryonnaire de Poulet.
Des resultats analogues aux notres ont ete d'ailleurs obtenus par GallienLartigue (1966, 1967) qui a cultive, en utilisant la meme technique que nous, des
explants de foie foetal de Souris sur un milieu enrichi en erythropoietine. Meme
l'activite heterospecifique exercee par le facteur erythropoietique hepatique
presente une analogie frappante avec celle exercee par l'erythropoietine,
qui, comme on le sait, n'a pas une action species-specifique (Goldwasser,
1966).
L'hypothese que le facteur erythropoietique present dans le foie de Poulet
puisse etre identifie avec l'erythropoietine nous semble done tres probable. Mais,
cette hypothese ne pourra etre verifiee que par la caracterisation chimique des
substances actives presentes dans le foie embryonnaire de Poulet. Ce sera le but
de nos prochaines recherches.
RESUME
Ainsi que nous 1'avons demontre anterieurement, des fragments de foie
embryonnaire de Poulet, places in vitro en presence de fragments d'organes
erythropoietiques d'embryons de Poulet, sont capables d'y maintenir l'erythropoiese.
Ces experiences sont completees par des associations de foie embryonnaire de
Poulet et d'organes hematopoiietiques appartenant a diverses especes d'Oiseaux
et de Mammiferes (Poulet adulte, embryon de Canard et de Cobaye) sur le
milieu de culture de Wolff et Haffen enrichi au serum de Cheval.
1. Des fragments de foie, preleves entre le 5e et le 16e jour d'incubation, et
associes a la moelle osseuse d'embryons de Poulet de 17 a 18 jours, favorisent
l'erythropoiese. Cette fonction diminue ensuite brusquement et disparait au
cours de la premiere annee.
2. L'apport de fragments de foie embryonnaire a des cultures de moelle
24
G. SALVATORELLI
osseuse favorise la reprise de Factivite erythropoietique dans celle-ci, en agissant
specifiquement sur la differentiation des cellules souches en erythroblastes.
3. L'apport de fragments de foie embryonnaire a une culture de rate embryonnaire de Poulet de moins de 18 jours d'incubation maintient la fonction erythropoietique. Un phenomene identique se produit si Ton associe des fragments de
foie embryonnaire a la moelle osseuse de Poulet adulte.
4. Le foie embryonnaire de Poulet est capable de maintenir la fonction
erythropoietique de la moelle osseuse de Canard, et reciproquement. Le maintien
de l'erythropoiese est egalement possible dans le foie foetal de Cobaye auquel on
associe du foie embryonnaire de Poulet.
5. On peut conclure de nos resultats que le foie de l'embryon de Poulet
produit un facteur qui favorise le maintien et la reactivation de 1'erythropoiese;
son action, qui rappelle celle de l'erythropoietine, n'a aucun caractere de
specificite d'espece.
SUMMARY
Factors controlling fowl erythropoiesis in vitro
It was previously shown that it is possible to maintain the erythropoiesis of
chick embryo haemopoietic organs in vitro by culturing them in association
with fragments of embryonic chick liver.
These experiments have been extended by associating chick embryonic liver
and haemopoietic organs from different species. Adult fowl and embryonic duck
and guinea-pig organs were cultured with liver fragments on the medium of
Wolff and Haffen enriched with horse serum.
1. Fragments of liver taken between the 5th and 16th day of incubation and
cultured with bone marrow from 17- to 18-day chick embryos stimulate
erythropoiesis. This stimulation then diminishes suddenly and eventually
disappears during the first year.
2. The embryonic liver when added to bone marrow cultures stimulates the
reactivation of the erythropoietic activity by acting specifically on the differentiation of stem cells to erythroblasts.
3. Fragments of embryonic liver added to spleen cultures from chick embryos
of less than 18 days incubation maintain erythropoietic function. An identical
phenomenon is observed when the liver is associated with adult fowl bone
marrow.
4. An equally favourable effect on erythropoiesis is seen in the association of
chick embryo liver with duck bone marrow and vice versa. It is also possible to
maintain erythropoiesis in foetal guinea-pig liver by culturing in the presence of
embryonic chick liver.
5. From the results it can be concluded that chick-embryo liver produces a
factor which stimulates the maintenance and reactivation of erythropoiesis; its
action, which recalls that of erythropoietin, has no species specificity.
Verythropoiese in vitro
25
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GOLDWASSER,
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