/ . Embryol. exp. Morph. Vol. 18, 3, pp. 343-58, December 1967
With 1 plate
Printed in Great Britain
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Marquage nucleaire
par la thymidine tritiee des derives de la crete
neurale chez FAmphibien Urodele
Pleurodeles waltlii Michah.
Par P. CHIBON 1
Laboratoire d'Embryologie, Faculte des Sciences de Paris
INTRODUCTION
Depuis la decouverte de His (1868), qui a montre que les ganglions spinaux
sont issus des cretes neurales, on sait qu'une partie au moins des cellules de la
crete neurale ont la propriete de migrer au milieu des tissus embryonnaires:
ce remarquable pouvoir de migration des cellules de la crete neurale rend
particulierement souhaitable une methode de marquage permettant d'abord de
suivre cette migration dans des conditions normales et experimentales, et
ensuite de reconnaitre les cellules issues de la crete neurale parmi les autres
cellules des embryons et des larves.
On a d'abord utilise, a la suite de Vogt (1925,1929), la technique des marques
colorees: celle-ci s'est revelee tres utile, mais encore insuffisante en raison de la
diffusion progressive du colorant. On a aussi mis a profit les differences de
taille ou de pigmentation entre cellules de differentes especes: un tel marquage
ne s'efface pas, mais les etudes recentes (Volpe, 1964; Chibon, 1966&) montrent
que des phenomenes d'incompatibilite d'ordre immunologique interviennent et
peuvent fausser completement les resultats.
Nous avons done recherche un moyen de marquage a la fois selectif, durable
et realisable a l'interieur d'une meme espece: ces qualites sont reunies d'une
maniere tres satisfaisante par la methode de marquage nucleaire des cellules par
la thymidine tritiee, que nous avons mise au point (Chibon, 1962).
Apres les etudes de Landacre (1921), Stone (1922a, b, 1924, 1926,1927,1929,
1932), Harrison (1921, 1924, 1925), et Detwiler (1927, 1937), les travaux de
Van Campenhout (1930a, b, 1931), Raven (1932, 1933a, b, 1935, 1936,1937),
et Dushane (1934, 1935, 1938, 1939) permettaient d'avoir une vue d'ensemble
sur les capacites morphogenetiques de la crete neurale, et de reconnaitre le
grand nombre et la diversite de ses derives.
1
Adresse de Vauteur: Laboratoire de Zoologie, Faculte des Sciences de Grenoble,
Domaine Universitaire, 38 Saint-Martin-d'Heres, France.
344
P. CHIBON
Plus recemment Yntema (1937, 1943), Yntema & Hammond (1945, 1947),
Hammond & Yntema (1947), Horstadius & Sellman (1946), Piatt (1951),
Triplet* (1958) ont repris par la methode experimentale l'etude de plusieurs des
problemes sur lesquels subsistaient des divergences de vues. De nombreux
points importants restaient a preciser.
Ces derniers temps, les problemes de migration et de devenir des cellules de
la crete neurale ont ete repris par une methode de marquage nucleaire identique
a la notre par Weston (1963), Johnston (1964,1966) et Weston & Buttler (1966)
chez le Poulet.
MATERIEL ET METHODES
Nos recherches ont ete realisees sur le triton Pleurodeles waltlii Michah. Ses
conditions d'elevage ont ete exposees par Gallien (1952).
Toutes les interventions experimentales sur la crete neurale ont ete realisees
sur la neurula jeune, aux stades 14 ou 15 de la table de Gallien & Durocher
(1957): on a soit pose des marques colorees sur la crete neurale, soit realise des
greffes orthotopiques ou heterotopiques de fragments de crete neurale marquee.
Fig. 1. Schema de la methode de marquage nucleaire par la thymidine tritiee. I,
Injection de la solution de thymidine tritiee dans la blastula. II, Transplantation d'un
fragment de crete neurale marquee de la neurula marquee A sur la neurula non
marquee B.
La methode de marquage nucleaire par la thymidine tritiee consiste a realiser
dans les blastulas (stades 6 et 7 de la table de Gallien & Durocher) des microinjections d'une solution contenant 100 a 200 /iCijmX de Thymidine tritiee
(activite specifique: 3 Ci/mM). On laisse ces blastulas evoluer jusqu'au stade
neurula: a ce moment, on remplace sur une neurula non marquee des portions
donnees de la crete neurale par des portions identiques ou differentes de la crete
neurale des neurulas marquees (Fig. 1). On a verifie qu'a ce moment toutes les
cellules des neurulas ayant recu une injection de thymidine sont radioactives.
Les embryons operes sont fixes en general au stade 38: a ce moment les tissus
de la larve sont bien differencies, et le marquage nucleaire est encore suffisamment intense.
Marquage nucleaire de la crete neurale
345
On est assure, d'une part que la dose de radioactivite utilisee ne perturbe pas le
developpement (par des experiences preliminaires), et d'autre part que le
marquage des cellules ne se transmet pas aux cellules environnantes (Trinkhaus
& Gross, 1961). Cependant il faut tenir compte de ce que la cytolyse d'une
cellule marquee libere des elements radioactifs qui peuvent etre reutilises par des
cellules avoisinantes qui synthetisent de P ADN (Diderholm, Fichtelius & Linder,
1962).
L'autoradiographie est realisee selon la methode decrite par Ficq (1955),
avec Temulsion Ilford L 4. Coloration a l'Unna, a Phematoxyline ou au
Feulgen.
Les ganglions sympathiques et les cellules chromaffines ont ete recherches sur
coupes, apres coloration des cellules chromaffines par le bichromate de potassium.
Fig. 2. Subdivision de la crete neurale. A, Region cephalique.
B, Region troncale.
Subdivision de la crete neurale:
La crete neurale cephalique entoure la region anterieure elargie de la plaque
neurale: nous avons assimile la plaque neurale a un cercle, et la crete neurale a
la circonference qui le limite: chaque point de la crete neurale cephalique est
defini par l'angle au centre forme par le rayon passant par ce point et le plan
de symetrie bilaterale: la crete neurale cephalique est ainsi divisee en secteurs,
definie par des valeurs d'angles.
La crete neurale troncale est rectiligne et il suffit de situer chaque point ou
chaque region de celle-ci par sa position entre les deux extremites qui sont le
debut de la crete neurale cephalique et le blastopore (Fig. 2).
RESULTATS
(1) Migration des cellules de la crete neurale
On peut poser des marques colorees sur la crete neurale et observer directement sur l'embryon la disposition et la forme des plages colorees: on a pu poser
346
P. CHIBON
jusqu'a sept marques colorees simultanees, alternativement rouges et bleues,
sur une meme neurula: des trainees colorees apparaissent selon un horaire et un
trace qui sont caracteristiques de la portion de crete neurale coloree (Fig. 3). II
ne s'agit done pas d'une diffusion du colorant mais de la migration en direction
latero-ventrale de cellules colorees initialement situees dans la crete neurale.
Un tel marquage ne dure guere au dela du stade 29 ou 30.
St. 21
St. 30
2 mm
Fig. 3. Evolution des marques colorees posees sur la crete neurale cephalique,
entre le stade neurula et le stade 30. La migration des cellules colorees suit un plan
rigoureux, et colore d'une maniere determinee les differentes regions de la tete.
Le marquage nucleaire de la crete neurale permet de suivre, stade par stade,
la progression des cellules migratrices: elles quittent la partie dorsale du tube
nerveux des la soudure des cretes neurales et migrent selon deux itineraires: ou
bien sous l'ectoderme, ou bien entre les somites et le tube nerveux; on en trouve
Marquage nucleaire de la crete neurale
347
exceptionnellement a l'interieur des massifs somitiques. Aux stades 24 et 25,
elles ne depassent pas en direction ventrale le niveau de la chorde dorsale; au
stade 28, elles atteignent la base des somites, et au stade 30 les parois laterales
du corps (Planche 1, fig. A).
On observe ces cellules migratrices marquees non seulement ventralement par
rapport au greffon marque, mais aussi en avant et en arriere de celui-ci, ce qui
permet de comprendre les phenomenes de regulation sur lesquels nous reviendrons.
Lorsque la greffe est unilaterale, on trouve des cellules marquees des deux
cotes du tube nerveux; elles sont plus nombreuses du cote du greffon, mais la
presence d'un certain nombre d'entre elles du cote oppose, permet egalement de
comprendre les phenomenes de regulation qui interviennent apres les ablations
unilaterales de crete neurale.
(2) Derives de la crete neurale cephalique
(a) Squelette crdnien
Quarante operations de greffe orthotopique de crete neurale marquee ont ete
realisees, qui interessent toutes les parties de la crete neurale cephalique; dans
tous les cas on obtient des cranes normaux, dont certaines pieces sont marquees,
attestant par la qu'elles tirent leur origine du fragment de crete neurale marquee
(Planche 1, fig. B); les resultats sont resumes par le Tableau 1.
Tableau 1.
Regions de la
crete neurale
0-30°
30-50°
50-70°
70-100°
100-120°
120-150°
Pieces squelettiques craniennes
Aucune piece squelettique
Partie anterieure des trabecules
Partie posterieure des trabecules
Plaque basale
Palato-carre
Cartilage de Meckel
Arc hyo'ide
Basibranchial 1
Hypobranchiaux
Arcs branchiaux anterieurs
Arcs branchiaux posterieurs
A chaque partie de la crete neurale, correspond rigoureusement une partie
determined du crane, sauf pour la region la plus anterieure (0-30°) qui ne donne
naissance a aucun derive squelettique (Fig. 4). Cette methode est extremement
precise, car elle nous renseigne exactement sur les potentialites d'un court
segment de la crete neurale, alors que l'ablation de ce meme segment reste sans
effet par suite de l'intervention des phenomenes de regulation: par cette methode,
22
JEEM l8
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P. CHIBON
aucune partie de la crete neurale ne subit de changement de ses potentialites.
Cependant un certain chevauchement des segments successifs est manifeste: les
limites de chaque region ne sont pas rigoureusement tranchees. Dans la moitie
environ des cas d'operations unilaterales, des cellules marquees sont presentes
du cote oppose a 1' operation.
-Brl-IV
1 mm
Fig. 4. Schema des subdivisions de la crete neurale cephalique, et des derives
squelettiques correspondants. Bb 1, basibranchial \\Bb2, basibranchial2; Br I-IV,
arcs branchiaux I a IV; Ch, chorde dorsale; CM, cartilage de Meckel; Hy, arc
hyoiide; Pc, palatocarre; Tr, trabecule.
Une notable difference existe entre ces resultats et ceux que Horstadius &
Sellman (1946) et Chibon (1966a) ont obtenu en realisant des ablations de la
crete neurale: en effet les cartilages parachordaux et la plaque basale sont
toujours presents, quelles que soient les ablations de crete neurale realisees: or
nous voyons ici qu'ils sont marques lorsque la crete neurale 50-70° est marquee:
done la crete neurale ne fait que participer a la formation de ces pieces, concurremment avec un autre tissu qui d'apres Horstadius & Sellman est l'endomeso-
PLANCHE 1
L'echelle des figures B a F est indiquee a la fig. C.
Fig. A. Migration des cellules issues de la crete neurale: des cellules marquees s'observent
dans l'ectoderme dorsal, dans la partie dorsale du tube nerveux, et sous l'ectoderme de chaque
cote (stade 25).
Fig. B. Trabecule marque apres greffe orthotopique de la crete neurale 0-90° marquee.
Fig. C. Ganglions rachidiens marques apres greffe orthotopique bilaterale de cretes neurales
troncales marquees. Quelques cellules marquees sont aussi presentes a la partie dorsale de la
moelle epiniere.
Fig. D. Ganglion cranien V marque apres greffe d'ectoderme para-neural marque. L'ectoderme de la tete est egalement marque, mais pas le cerveau.
Fig. E. Cellule marquee (sympathogonie) au stade 38. Elle est situee sous la chorde dorsale
(Ch), au voisinage de l'aorte (Ao) et des ureteres primaires (Up).
Fig. F. Cellules de Schwann marquees apres greffe orthotopique bilaterale de cretes neurales
troncales marquees (stade 32 b). Ch, chorde dorsale; S, somite.
/. Embryol. exp. Morph., Vol. 18, Part 3
P. CHIBON
PLANCHE 1
facing p. 348
Marquage nucleaire de la crete neurale
349
derme: le marquage nucleaire des cellules met en evidence cette participation
qui, avec les autres methodes d'investigation, etait restee inapercue.
Par contre, dans aucun cas, le basibranchial deux ne comporte de cellules
marquees: il est bien totalement independant de la crete neurale.
Trente-trois operations heterotopiques ont ete realisees: implantation de
greffons troncaux a la place de la crete cephalique; dans tous les cas, le crane
est modifle et aucune piece squelettique n'est jamais marquee: la crete neurale
troncale, implantee dans la tete, est incapable de produire des cartilages; les
parties du crane qui sont normalement issues du fragment de crete cephalique
qui a ete excise et remplace par la crete troncale sont absentes.
(b) Dents
Tous les cas de greffes orthotopiques de crete cephalique marquee portant
sur la region comprise entre les points 45° et 110° montrent des cellules marquees
dans les dents: dans les dents palatines apres les operations portant sur la region
30-70° et dans les dents mandibulaires apres les operations portant sur la region
70-110°.
Ce sont toujours exclusivement les cellules de la papille dentaire, et les odontoblastes qui sont marques. Jamais l'organe adamantin n'est marque.
Les greffes heterotopiques (implantation de crete troncale a la place de la
crete cephalique) ne montrent jamais (sauf un exception sur 30 cas) de marquage
dans les dents, et de plus le nombre des dents est reduit du cote opere. La crete
neurale troncale est done incapable de produire des odontoblastes.
A la lumiere de ces resultats il est done possible de preciser les resultats de
Adams (1924, 1931), Raven (1932, 1935), De Beer (1947) et Horstadius &
Sellman (1946): la crete neurale cephalique des regions 30-70° et 70-110°
produit seule de futures cellules de la papille dentaire qui migrent vers le
stomodeum, et exercent une action inductrice sur l'epithelium buccal, qui
devient alors apte a former l'organe adamantin. Les dents sont bien des organes
composites, formes de deux ebauches distinctes.
(c) Ganglions crdniens
Contrairement a His (1868) et Landacre (1921), Stone (19226, 1924) et
Yntema (1937, 1943) pensent que les ganglions craniens derivent de placodes
ectodermiques et pas de la crete neurale, tandis que Knouff (1927) leur attribue
une origine mixte. Recemment, chez le Poulet, Hamburger (1961) et Johnston
(1964, 1966) considerent qu'ils derivent au moins en partie de la crete neurale.
Greffes orthotopiques de crete cephalique marquee. Sur 40 cas, quatre seulement ont entraine la presence de cellules marquees dans les ganglions craniens,
tandis que 36 cas ne montraient aucun marquage des ganglions craniens.
Greffes orthotopiques d'ectoderme para-neural marque. Vingt-et-un operations
ont ete realisees, dans lesquelles un lambeau d'ectoderme para-neural est
remplace par un lambeau identique marque. On constate alors que tous les
350
P. CHIBON
ganglions craniens sont susceptibles d'etre marques (Planche 1, fig. D). On
peut deduire des divers cas la localisation des territoires presomptifs de chacun
des ganglions craniens:
Ganglion V
Ganglion VII-VIII
Ganglion IX-X
Partie anterieure
Partie posterieure
—
—
Ectoderme
—
—
—
40-60°
80-100°
90-120°
110-130°
Greffes d'ectoderme banal marque a la place de Vectoderme para-neural. On a
remplace l'ectoderme para-neural par de l'ectoderme banal, double ou non de
mesoderme, preleve dans la region ventrale deneurulas marquees, et on a constate
que dans ces conditions il se forme toujours des ganglions craniens marques;
ceux-ci se sont done formes a partir de l'ectoderme banal apporte, et pas a
partir de la crete neurale; cet ectoderme banal est devenu capable a la suite de
sa transplantation de produire des ganglions craniens: il a done subi une action
inductrice qui lui a confere une determination nouvelle.
Cette action inductrice s'exerce encore au stade neurula: e'est elle qui est
responsable de la formation des ganglions craniens a partir de l'ectoderme:
ectoderme para-neural dans les conditions normales, ou ectoderme banal dans
les conditions experimentales realisees. On remarque que cette action inductrice
peut s'exercer efficacement a travers une couche de mesoderme.
Si cette operation n'est pas faite au contact meme de la crete neurale, on
obtient des ganglions craniens marques dans un nombre de cas plus faible.
Enfin, si on fait l'ablation des territoires presomptifs de ces ganglions au stade
22 (bourgeon caudal), les ganglions correspondants font defaut, ce qui montre
qu'a ce stade l'action inductrice responsable de la formation des ganglions
craniens a partir de 1'ectoderme ne s'exerce plus.
Ce n'est done pas la crete neurale, mais l'ectoderme immediatement adjacent,
qui est a l'origine des ganglions craniens. On a pu preciser la localisation dans
l'ectoderme du territoire presomptif de chaque ganglion et montrer que tout
fragment d'ectoderme est competent, au stade neurula, pour produire des
ganglions craniens s'il est implante au voisinage immediat de la crete neurale
cephalique.
(d) Autres derives
Uencephale anterieur derive de la region 0-30°, celle-la meme qui ne produit,
nous l'avons vu, aucune piece squelettique: le marquage nucleaire de cette
region entraine le marquage du telencephale entier, et du diencephale jusqu'a
l'epiphyse: plus en arriere, seule la partie ventrale est marquee, jusque vers le
milieu de l'infundibulum.
En outre, l'epithelium olfactif est marque presque totalement.
Les cellules pigmentaires de la tete derivent de la crete neurale cephalique,
comme cela a ete demontre deja par Dushane (1934, 1935, 1938, 1939).
Marquage nucleaire de la crete new ale
351
Le mesenchyme cephalique est produit en grande abondance par la crete
neurale: apres toutes les greffes, orthotopiques ou heterotopiques, de crete
neurale marquee, on trouve en grande quantite du mesenchyme marque dans
toutes les parties de la tete.
(3) Derives de la crete neurale troncale
(a) Squelette axial
Contrairement au squelette de la tete, le squelette du tronc ne derive aucunement de la crete neurale. Plus de cents operations de greffes orthotopiques de
crete troncale, unilaterales et bilaterales, de longueurs diverses, ont ete realisees:
jamais on ne trouve de cellules marquees dans les cartilages prevertebraux,
meme lorsque celles-ci sont abondantes dans les organes voisins (ganglions
rachidiens et mesenchyme). La crete neurale troncale ne participe done en
aucune facon a la formation des cartilages du tronc (Strudel, 1953).
Nous avons vu qu'elle ne produit pas non plus de cartilages lorsqu'elle est
implantee dans la tete: Pexperience inverse montre que la crete cephalique
implantee dans la region troncale au stade neurula ne produit pas non plus de
cartilages, alors qu'elle en produit (Stone, 1926; Ichikawa, 1937) si elle est
implantee dans le tronc plus tardivement.
(b) Ganglions rachidiens
Apres marquage des cretes neurales troncales (42 cas) on observe toujours
que les ganglions rachidiens sont entierement marques (Planche 1, fig. C).
La crete cephalique implantee a la place de la crete troncale produit dans la
moitie des cas des ganglions rachidiens peu nombreux et petits: elle possede
done une certaine aptitude a produire des ganglions rachidiens alors qu'elle
ne produit pas les ganglions craniens: une suppleance limitee de la crete troncale
par la crete cephalique est ici possible.
(c) Cellules de la gaine de Schwann
La presente etude a porte sur 38 cas de greffes orthotopiques de crete troncale
marquee: les larves ont ete fixees a tous les stades entre le stade 25 et le stade 38.
Au stade 38, les larves operees montrent des cellules de Schwann marquees,
mais en nombre assez faible par rapport au nombre total des cellules de Schwann.
De plus leur marquage est faible.
Avant le stade 30, on voit de nombreuses cellules marquees autour du tube
nerveux, mais on ne peut pas identifier avec certitude les futures cellules de
Schwann.
Entre le stade 31 et le stade 37, on remarque que les cellules de Schwann
marquees sont de plus en plus nombreuses (Planche 1, fig. F) jusqu'au stade 35:
a ce moment toutes les cellules de Schwann presentes sont marquees, done
issues de la crete neurale. Mais ensuite apparaissent de plus en plus nombreuses
352
P. CHIBON
des cellules de Schwann non marquees, tandis que les cellules marquees, toujours presentes, voient leur marquage s'affaiblir progressivement.
II y a done deux categories de cellules de Schwann: les premieres derivent de
la crete neurale, et les secondes derivent d'un territoire non marque, qui est le
tube nerveux lui-meme.
L'operation inverse consiste a marquer non pas la crete neurale, mais le tube
nerveux (26 cas): cette operation est delicate, et dans six cas on a trouve des
cellules de Schwann marquees chez des larves parvenues aux stades 37 et 38:
elles sont relativement peu nombreuses, mais leur marquage intense atteste
qu'elles sont issues du tube nerveux.
Done l'origine des cellules de Schwann est double: une premiere generation
provient entre le stade 31 et le stade 35 de la crete neurale; apres le stade 35,
une deuxieme generation, qui devient rapidement preponderante, est issue du
tube nerveux. Un tel resultat ne pouvait etre obtenu clairement au moyen
d'experiences d'ablations, puisque dans tous les cas des cellules de Schwann
etaient toujours presentes, en raison de larges possibilites de suppleance entre
la crete neurale et le tube nerveux.
(d) Ganglions sympathiques et cellules chromaffines
Les cellules chromaffines sont connues depuis longtemps grace a la reaction
chromaffine qui permet de les colorer des qu'elles sont physiologiquement actives;
des 1878 Balfour avait emis l'hypothese qu'elles ont la meme origine que le
systeme nerveux sympathique. Cette origine restait cependant a decouvrir.
Chez le Pleurodele, ces deux types d'organes ne peuvent etre reconnus histologiqement avec certitude qu'a partir du stade 55b (metamorphose en cours):
les ganglions sympathiques sont alors de petits groupes de cellules ganglionnaires disposees de place en place le long de l'aorte dorsale, et les cellules
chromaffines sont dispersees par petits groupes a la surface de la veine cave
inferieure et des mesonephros, et meme un peu en avant de ceux-ci.
Une apparition aussi tardive (3 mois environ) rend inoperante la methode de
marquage nucleaire, la radioactivite initiale ayant totalement disparu a ce
moment.
Nous avons cependant pu verifier qu'a un stade larvaire relativement avance
(stade 42) on trouve des cellules marquees au voisinage de l'aorte et des ureteres
primaires, la ou apparaitront plus tard les ganglions sympathiques et les
cellules chromaffines (Planche 1, fig. E).
Des experiences d'ablations bilaterales des cretes troncales entieres ont
montre en outre que les ganglions sympathiques et les cellules chromaffines font
defaut simultanement dans les regions ou les derives connus de la crete neurale
font eux-memes defaut; cependant ils peuvent etre presents sur une certaine
longueur en l'absence des autres derives de la crete neurale, si ceux-ci sont presents dans leur voisinage immediat, ce qui se comprend parfaitement si on garde
presente a l'esprit la capacite de migration des cellules issues de la crete neurale.
Marquage nucleaire de la crete neurale
353
Nous pensons done que ces deux formations sont issues de la crete neurale
puisqu'elles sont totalement absentes des regions depourvues des derives de la
crete neurale. En outre, au stade 42, on trouve a l'emplacement precis oil se
differencieront plus tard ces formations, des cellules marquees qui ne peuvent
appartenir a aucun des derives de la crete neurale connus par ailleurs.
(e) Autres derives
Cellules de Rohon-Beard. Ce sont de grandes cellules situees a la partie
dorsale de la moelle epiniere des Amphibiens: elles n'existent que durant la vie
larvaire. Dans tous les cas, le marquage bilateral des cretes troncales entraine le
marquage de toutes les cellules de Rohon-Beard. Les operations unilaterales
n'entrainent le marquage des cellules de Rohon-Beard que du cote opere. Les
greffes de crete cephalique marquee ne produisent pas de cellules de RohonBeard marquees.
Cellules pigmentaires. Les experiences d'ablations que nous avons rapport6es
ailleurs (Chibon, 1966 a) montrent que les cellules pigmentaires du tronc, comme
celles de la tete, sont issues de la crete neurale; il a ete possible d'obtenir des
animaux totalement ou partiellement depourvus de cellules pigmentaires.
Dans le cas des cellules pigmentaires, Interpretation des autoradiographies
est un peu delicate en raison de la confusion possible, au premier abord, entre
les grains de pigment (melanine) et les grains de marquage. Cette distinction a
ete facilitee par l'emploi des objectifs Leitz 'Ultropak' qui font apparaitre sous
forme de points brillants les grains d'argent contenus dans Femulsion nucleaire.
Mesenchyme et meninges. Dans tous les cas, du mesenchyme marque provient
abondamment des cretes neurales marquees: il est particulierement abondant
entre les masses somitiques, et dans la nageoire dorsale.
On trouve aussi des cellules marquees dans les meninges, particulierement
contre le tissu nerveux (pie-mere).
DISCUSSION
La methode de marquage nucleaire nous a done permis d'apporter une
reponse aux problemes qui restaient poses a propos de plusieurs derives de la
crete neurale. Nous avons confirme les resultats anterieurs en ce qui concerne
le squelette troncal, les ganglions rachidiens, les cellules de Rohon-Beard, les
cellules pigmentaires, et le mesenchyme cephalique et troncal.
Nous avons montre que la crete neurale est regionalisee des le stade neurula,
et precise cette regionalisation, tout en remarquant que de grandes possibility's de
regulation subsistent, et entrent en jeu lorsque l'integrite de la crete neurale est
atteinte.
La methode autoradiographique s'est revelee particulierement favorable pour
les cas restes controverses:
— la crete neurale cephalique est responsable de la formation des trabecules
354
P. CHIBON
et de tout le splanchnocrane, mais elle participe aussi a la foraiation de la partie
posterieure du neurocrane (plaque basale et parachordaux), ce que la methode
des ablations n'avait pu mettre en evidence. Seul le basibranchial deux ne
derive pas du tout de la crete neurale.
La crete neurale troncale greffee dans la tete ne produit jamais de cartilages.
— elle est aussi responsable de la formation des dents, bien qu'elle ne produise
elle-meme que l'un des constituants de celles-ci: les memes regions de la crete
cephalique produisent les dents et les cartilages porteurs de dents. Seules les
cellules de la papille dentaire et les odontoblastes sont issus de la crete neurale,
mais leur presence conditionne la formation de la dent tout entiere: par Faction
inductrice qu'elles exercent sur l'epithelium buccal, elles rendent celui-ci capable
de former l'organe adamantin.
— les ganglions craniens ne sont pas issus de la crete neurale, mais de
l'ectoderme immediatement adjacent a celle-ci, qui, sous Faction d'un stimulus
inducteur,- devient apte a former les ganglions craniens. L'ectoderme paraneural cephalique peut etre remplace au stade neurula par de l'ectoderme banal.
Les ganglions craniens ont une origine placodique.
— l'encephale anterieur et 1'epithelium olfactif derivent de la crete cephalique
anterieure.
— la crete neurale fournit la premiere generation des cellules de Schwann
(jusqu'au stade 35); ensuite les nouvelles cellules de Schwann sont issues de la
moelle epiniere.
— enfin les ganglions sympathiques et les cellules chromamnes sont issues de
la crete neurale.
La crete neurale se revele done comme une structure tres complexe aux
potentialites nombreuses, differentes suivant les regions pour certaines d'entre
elles, communes a toute la crete neurale pour d'autres. Malgre cette remarquable
diversite de ses derives, la crete neurale possede d'etonnantes capacites de
regulation, qui rendent incertains les resultats d'interventions experimentales
utilisant seulement les ablations de fragments de crete neurale. Ces possibilites
de regulation ne sont d'ailleurs pas egales pour tous les derives: e'est pour les
derives formes de cellules isolees ou dispersees (cellules pigmentaires) qu'elles
sont les plus grandes. Le marquage nucleaire de la crete neurale permet d'eviter
l'intervention de ces phenomenes de regulation et d'obtenir une grande precision
dans les resultats.
RESUME
Au moyen du marquage nucleaire de la crete neurale par la thymidine tritiee,
on a suivi la migration des cellules issues de la crete neurale et envisage
l'ensemble des derives produits par celle-ci.
Les points essentiels acquis par cette methode sont les suivants:
1. La partie posterieure du neurocrane est partiellement issue de la crete
neurale cephalique.
Marquage nucleaire de la crete neurale
355
2. Dans les dents, les cellules de la papille dentaire et les odontoblastes sont
seuls issus de la crete neurale, mais leur presence conditionne la formation de
Torgane adamantin par repithelium buccal.
3. Les ganglions craniens ne sont pas issus de la crete cephalique, mais de
Tectoderme para-neural.
4. L'encephale anterieur et l'epithelium olfactif sont issus de la crete neurale
cephalique.
5. La crete troncale est incapable dans tous les cas de produire des cartilages.
6. Les cellules de Schwann sont issues d'abord de la crete neurale, ensuite
du tube neural.
7. Les ganglions sympathiques et les cellules chromaffines sont issus de la
crete neurale.
8. Les ganglions rachidiens, les cellules de Rohon-Beard, les cellules pigmentaires, le mesenchyme, et une partie des meninges sont issus de la crete
neurale.
SUMMARY
Nuclear labelling by tritiated thymidine of neural crest derivatives
in the amphibian Pleurodeles waltlii
Nuclear labelling of the neural crest by 3H-thymidine was used to trace the
migration of neural crest cells, and to study the total range of their derivatives.
The main findings are:
1. The posterior part of the neurocranium is partially derived from the
cephalic neural crest.
2. In the teeth, only the dental papilla cells and the odontoblasts are derived
from the cephalic crest, but they control the formation of the adamantin organ.
3. Cranial ganglia do not arise from the cephalic crest, but from ectoderm al
placodes.
4. The anterior part of the brain and the olfactory epithelium are derived
from the cephalic crest.
5. The trunk crest is absolutely unable to produce cartilage.
6. Schwann cells first arise from the neural crest, and later from the neural
tube.
7. Sympathetic ganglia and chromaffin cells are derived from the crest.
8. Spinal ganglia, Rohon-Beard cells, pigment cells, mesenchyme, and part
of the meninges originate from the neural crest.
Je suis heureux d'exprimer a mon Maitre, Monsieur le Professeur L. Gallien, Membre de
Tlnstitut, ma tres profonde gratitude: il m'a propose ce travail, et m'a constamment aide de
ses conseils et de ses critiques.
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