Recherches sur les malformations determinees par le refroidissement temporaire de l'oeuf de poule et compatibles avec la vie des Poussins par P. ANCEL1 Laboratoire d'Embryologie experimentale, College de France N o u s avons signale dans un travail anterieur (Ancel, 1958) portant sur 699 ceufs que le refroidissement de l'oeuf de poule a differentes periodes de l'incubation pendant deux ou trois jours donnait naissance a des malformations des paupieres, du bee et des membres. Un petit nombre d'embryons avaient ete preleves seulement apres le 176me jour de l'incubation. Dans le present travail, nous avons cherche a savoir si certaines des malformations ainsi obtenues etaient compatibles avec la vie des poussins. TECHNIQUE Les oeufs de Leghorn sont retires de la couveuse reglee a 38° et places pendant 2 jours dans un local dont la temperature a varie de 17 a 22°. Les expositions a ce froid relatif ont ete faites, suivant les experiences, du 46me au 66me jour, du 56me au 76rae, du 6hme au 86me, du 7feme au 96me et du 86me au 106me jour de l'incubation. Apres 72 heures d'incubation, une fenetre ronde de 1,5 cm. de diametre environ a ete ouverte dans la coquille apres prelevement de 2 c.c. d'albumine par un petit trou fait dans le bout pointu de l'oeuf. La fenetre est obturee par une lamelle de ruban adhesif au travers de laquelle les embryons sont examines au moment de la mise au froid. Les morts et les anormaux sont elimines de l'experience. Les autres sont examines tous les matins a partir du lendemain de la remise en couveuse et les morts sont etudies au point de vue teratogene. Au 226me jour de l'incubation, on retire la lamelle de ruban adhesif pour faciliter l'eclosion des embryons porteurs de malformations du bee rendant difficile le bechage de la coquille. Les resultats obtenus ont ete resumes dans le tableau. CONSIDERATION SUR LES RESULTATS Frequence des malformations Dans l'ensemble, que les embryons soient morts avant ou apres l'eclosion, nous avons retrouve les malformations que nous avions obtenues dans notre 1 Author's address: Laboratoire d'Embryologie experimentale, College de France, 11 Place Marcelin Berthelot, Paris Ve, France. [J. Embryol. exp. Morph. Vol. 7, Part 3, pp. 330-4, September 1959] P. ANCEL— MALFORMATIONS COMPATIBLES AVEC LA VIE 331 precedent travail mais dans des proportions differentes. Comme dans cette premiere recherche, l'ablepharie ne s'y est montree qu'apres le refroidissement du 4hmt au 66me jour, du 5hme au 76me et du 6feme au 86me, ainsi que le buphtalmos que nous avions en outre observe apres refroidissement du 76me au 96me jour. Le bee de lievre (arret de developpement du bourgeon maxillaire superieur) n'a 6t6 observe dans les deux travaux qu'apres refroidissement du 4hme au 66me jour et du 56me au 76me. Les plus fortes proportions de malformations des membres ont comme prece*demment ete trouve'es dans les experiences de refroidissement du 7hme au 96me et du 86me au 106me jour. Ainsi se confirme que le stade auquel debute le refroidissement a une forte influence sur la variete de malformation obtenue. Comme difference entre les resultats obtenus dans nos deux travaux, nous signalerons l'atrophie du bee observee apres refroidissement du 66me au 8feme et du 7hme au 96me jour comme precedemment, mais en outre du 5hme au 76me et du g6me a u iQbme e n t r e s faibles proportions il est vrai (2,1 et 1,7) mais sur un ensemble de 393 embryons, tandis que ce resultat n'avait pas ete obtenu apres les memes experiences portant sur 699 embryons. Resultats relatifs aux eclosions La frequence des eclosions a progressivement diminue au fur et a mesure que les ceufs etaient exposes au froid a un stade plus avance (de 13,5 % a 3,5 %). Le tableau montre aussi que certains oeufs eclosent avec des embryons porteurs de malformations, mais dans de faibles proportions par rapport au nombre des oeufs mis en experience (5,2 au maximum). Le tableau montre que l'ablepharie localisee est la malformation qui se rencontre chez presque tous les porteurs de malformations apres l'eclosion a la suite du refroidissement du 46me au 6feme, du 56me au 7Jbme et du 66me au 8&me jour de l'incubation, tandis qu'apres le refroidissement du 76me au 9hme jour, l'ablepharie n'a plus ete constatee, les malformations des membres l'ont remplacee ainsi que l'atrophie du bee. Notre but principal etant de savoir avec quelles varietes de malformations les embryons soumis au froid pouvaient eclore, nous n'avons essaye d'elever que 4 de ces poussins eclos avec des malformations, 3 d'entre eux etaient porteurs d'ablepharie et 1 de malformations des membres. Nous avons ete amenes a en tuer 3 pour cause de deficience ne leur permettant plus de se tenir droits sur leurs pattes ou pour cetite. Notre desir etait de savoir si le refroidissement de l'oeuf etait capable de permettre a des poussins ne differant des normaux que par une malformation, d'atteindre l'age adulte. Une reponse affirmative a ete donnee par un poussin qui est actuellement un coq age de 12 mois et qui ne differe des normaux que par ablepharie symetriquement localisee a la paupiere superieure. Ce resultat semble ne pouvoir etre obtenu que sur un petit nombre d'embryons soumis au froid. Les meilleures conditions paraissent etre le refroidisse- Jours de froid 393 133 95 56 53 56 — 42,8 69,8 50 0/ /o 71,6 0/ Morts 24 heures ap remise en couveuse 12/o 35,7 39,2 30,1 46,4 3 49,3 29,4 16 20,2 17,8 % | to 3 1 •~^ /o Embryons porteurs malformations /o 27,8 15,8 8,9 0 0 Ablepharie 30,8 21 16 18,8 14,2 0/ Buphtalmos /o 9,8 4,2 7,1 0 0 Bee de lievre % 12 2,1 0 0 0 % 3,7 3,1 3,5 9,4 10,7 Malformations des membres % 0 2,1 1,7 7,5 1,7 4,5 3,1 1,7 0 0 o/ /o /o 5,2 4,2 1,7 3,7 0 0/ /o 13,5 10,5 8,8 3,7 3,5 0/ « Les chiffres des deux premieres colonnes indiquent les 5 difterentes periodes ou les oeufs ont 6t6 refroidis et leur nombre pour chaque p6riode. Dans les autres colonnes, ils donnent des pourcentages. 8 a 10 4a6 5a7 6a8 7a9 Nombre des embry en experience a Embryons eclos tot 3 Embryons eclos malformes CO Atrophie du bee Tableau resumant les effets letaux et teratogenes du sejour des ceufs au froid pendant 48 heures entre le quatrieme et le dixieme jour de Vincubation Embryons eclos ablephariques < o r en on o o H O > 90 Tl r o > Z o w r P. ANCEL—MALFORMATIONS COMPATIBLES AVEC LA VIE 6me 333 6me ment du 4 au 6 jour puisque ce sont celles dans lesquelles la proportion des eclosions est la plus grande et aussi celle des embryons porteurs de malformations et celle des embryons ablephariques. Outre les cas oil la vitalite du poussin ne lui permet pas de se tenir droit sur ses pattes le lendemain de l'eclosion, les causes d'echec dans l'elevage sont l'existence d'un bee croise, du ordinairement a la presence d'un bee de lievre unilateral, ou les cas d'ablepharie dans lesquels la commissure posterieure des deux paupieres fait entierement ddfaut. Dans ces cas, en effet, une secretion s'accumule sur l'oeil auquel adhere plus ou moins du duvet qui aveugle le poussin; il en est de meme du buphtalmos nettement saillant qui est cause de cecite et qui finit par se rompre ouvrant la chambre anterieure de l'oeil. DISCUSSION L'existence du poussin devenu adulte ablepharique nous permet d'affirmer qu'un agent physique intervenant au cours du developpement embryonnaire avant l'dclosion peut realiser une malformation dont un adulte est porteur, parce que la malformation observee dans ces conditions ne se rencontre pas a l'e'tat spontane. Au cours de recherches de teratogenese experimentale faites par de nombreux auteurs, a l'aide d'agents physiques ou chimiques, les embryons ont ete habituellement preleves avant le 18Sme jour de l'incubation, le but des recherches etant de savoir quelles varietes de malformations pouvaient etre obtenues par differents agents. Au cours de ces experiences, l'existence d'une malformation chez un poussin apres l'eclosion n'aurait pu etre considered comme determinee par l'agent teratogene utilise, parce qu'il aurait pu s'agir d'un cas de malformation d'origine genetique. Au cours de recherches de chimioteratogenese, nous avons observe" par exemple que le methylarsinate de soude produisait l'anourie, et nous avons eleve un anoure jusqu'au 86me jour apres l'eclosion, bien que se manifestent des signes de deficience generate qui nous ont amene a mettre fin a cet elevage. L'anourie spontanee se rencontrant dans une proportion superieure a 1 pour cent, aucune preuve ne peut etre donn£e que, dans ce cas, la malformation etait due a la substance chimique utilisee. RESUME Le refroidissement temporaire de l'oeuf de poule Leghorn a divers stades pendant deux jours, au cours de l'incubation, permet d'obtenir des malformations observables apres l'eclosion. Un coq adulte qui, a l'etat embryonnaire, avait subi un refroidissement du 46me au 66me jour, a ete obtenu porteur d'ablepharie localisee bilaterale. 334 P. ANCEL—MALFORMATIONS COMPATIBLES AVEC LA VIE SUMMARY Cooling of the eggs of Leghorn hens for 2 days during incubation has produced malformations detectable after hatching. An adult cock with a bilateral localized ablephary was obtained after cooling during the 4th to the 6th days of embryonic life. TRAVAIL CITE ANCEL, P. (1958). Recherches sur l'action t^ratogfene du refroidissement temporaire de l'ceuf de Poule au cours de l'incubation. / . Embryol. exp. Morph. 6, 335-45. (Manuscript received 20: i: 59)
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