Th
eF
i
s
hBi
o
l
o
g
yJ
o
u
r
n
a
l
MEDAKA,
l
l
:
4
3
6
5(
2
0
0
7
)
Appl
i
c
a
t
i
o
no
fi
nvi
v
ome
t
hodo
l
o
ie
g
st
oi
nv
e
s
t
i
g
a
t
i
o
no
fbi
o
l
o
ic
g
a
ls
t
r
uc
t
ur
e
,
f
unc
t
i
o
nandx
e
no
bi
o
t
i
cr
e
s
po
ns
ei
ns
e
e
t
hr
o
ug
h me
daka(
Or
yz
i
as
l
at
i
pe
s
)
RonC.
Har
dman*
,Se
t
h.
WJKul
l
manandDa
vi
dE.
Hi
nt
on
Duk
eUni
v
e
r
s
i
t
y
,Ni
c
hol
asSc
hoolo
ft
heEnv
i
r
onme
ntandEar
t
hSc
i
e
nc
e
s
,Di
v
i
s
i
ono
fEnv
i
r
onme
nt
al
Sc
i
e
nc
eandPol
i
c
y
,Dur
hamNC,US
A
Ke
ywo
r
ds
:
me
da
ka
,
l
i
v
e
r
,
t
o
x
i
c
i
t
y
,
h
e
p
a
t
o
b
i
l
i
a
r
y
,
l
nV
i
v
oi
ma
g
l
n
g
ti
spos
s
i
bl
et
ovi
e
wc
e
l
l
sa
ndt
i
s
s
ue
si
nt
e
r
na
l
l
y
Abst
r
actWede
s
c
r
i
behe
r
et
hede
v
e
l
o
pme
nta
nd i
r
e
s
o
l
vi
ngf
e
a
t
ur
e
s<1ト
I
mi
ns
i
z
e
)
,a
ndt
oge
ne
r
a
ppl
i
c
a
t
i
ono
fnoni
nva
s
i
v
ei
nvi
v
ome
t
hodol
ogl
e
S (
t
e3
Dr
e
c
ons
t
r
uc
t
i
onsofo
r
ga
nsa
ndt
i
s
s
uesunde
r
t
ot
hei
nv
e
s
t
l
ga
t
i
ono
fbi
o
l
ogi
c
a
ls
t
r
uc
t
ur
e
,f
unc
- a
s
t
udy.
t
i
ona
ndx
e
no
bi
ot
i
cr
e
s
pons
ei
ns
e
e
t
hr
o
ughme
da
Be
c
a
us
eo
urf
oc
uswa
st
hehe
pa
t
obi
l
i
a
r
ys
ys
ka(
STI
I
;Or
y
z
i
asl
at
i
pe
s
)
.I
nvi
v
os
t
udi
e
si
nSTI
I
e
m,weus
ea
sa
ne
xa
mpl
e,a
ndpr
o
vi
d
eas
umme
da
kapr
o
vi
de
dno
v
e
li
ns
i
ght
si
nt
ohe
pa
t
o
bi
l
i
a
r
y t
r
yof
,Ours
t
udi
e
si
nt
hi
so
r
ga
ns
ys
t
e
mi
nvi
v
o,
a
r
c
hi
t
e
c
t
ur
e,de
ve
l
opme
nta
nd t
oxi
cr
e
s
pons
e, ma
i
nbot
h 2a
nd 3di
me
ns
i
ons
.Ast
hepr
e
s
e
nt
e
d f
r
om or
ga
no
ge
ne
s
i
st
hr
oug
he
mbr
yoni
ca
ndl
a
r
va
l
.
t
a
ge
so
fde
v
e
l
o
pme
nt
丘ndi
ngss
ugge
s
t
,STI
Ime
da
kapr
o
vi
deaunl
que s
me
a
nsf
o
rhi
ghr
e
s
ol
ut
i
o
ni
nvi
vos
t
udy,a
ndt
he
er
i
al
sandMet
hods
f
ut
ur
e oppo
r
t
unl
t
yt
Oi
n
t
e
gr
a
t
e me
c
ha
ni
s
mso
f Mat
Me
d
a
k
a
t
o
xi
c
i
t
y(
e
.
g.ge
nomi
c,Pr
ot
e
omi
ci
nf
or
ma
t
i
on)
Se
e
t
hr
oughme
da
ka(
STI
I
)we
r
epr
o
vi
de
dby
Wi
t
hphe
no
t
ypi
cc
ha
nge
sa
tt
hes
ys
t
e
ml
e
v
e
l(
t
he
o
f
.Y.Wa
ka
ma
t
s
u,La
bor
a
t
or
yofFr
e
s
hWa
t
e
r
o
ve
r
a
r
c
hi
nggoa
lo
fo
url
a
bor
a
t
o
r
y
)
･Whi
l
eour Pr
s
hSt
oc
ks
,Na
go
yaUni
v
e
r
s
l
t
y.OurSTI
Ime
da
ka
f
oc
usha
sbe
e
nt
hehe
pa
t
obi
l
i
a
r
ys
ys
t
e
m,ot
he
r Fi
o
l
ony
,
ma
i
n
t
a
i
ne
da
tDukeUni
ve
r
s
l
t
yS
i
nc
e2002,
o
r
ga
ns
ys
t
e
msa
r
ee
qua
l
l
ya
me
na
bl
et
oi
nvi
vo c
r
ehous
e
di
n ac
ha
r
c
oa
l丘l
t
r
a
t
e
d,UV t
r
e
a
t
e
d
s
t
ud
y,a
ndwec
ons
i
de
rt
hepot
e
nt
i
a
lf
o
rdi
s
c
o
ve
r
y, a
wi
t
hi
nt
hec
ont
e
xto
fi
nvi
v
oi
n
ve
s
t
l
ga
t
i
oni
nSTI
I r
e
c
i
r
c
ul
a
t
i
ngs
ys
t
e
m(
Ci
t
yofDur
ha
m,NCwa
t
e
r
)
-0.
5
o
C.Wa
t
e
rc
he
mi
s
t
r
i
e
s
ma
i
nt
a
i
ne
da
t25 +/
me
da
ka,
a
ss
l
gni
ic
f
a
nt
.
.
4)
,di
s
s
o
l
v
e
do
xywe
r
ema
i
nt
a
i
ne
da
t
:pH (
7.
0⊥7
l
nt
r
oduc
t
i
on
ge
n(
6-7ppm)
,a
mmoni
a(
0-0･
5ppm)
,ni
t
r
i
t
e(
0
5ppm)a
ndni
t
r
a
t
e(
0-1
0ppm)
.Wa
t
e
rha
r
dExhi
bi
t
i
ngnoe
xpr
e
s
s
i
on ofl
e
uc
ophor
e
sa
nd -0.
s
swa
sma
i
nt
a
i
ne
da
t8
0-1
00mgL1ca
co3,
me
l
a
no
phor
e
s
,a
nd mi
ni
ma
le
xpr
e
s
s
i
on o
fxa
n- ne
o
l
l
owi
nggui
de
l
i
ne
so
ft
heUSEPA (
Ho
r
ni
nga
nd
t
ho
pho
r
e
sa
ndi
r
i
do
pho
r
e
s
,s
e
e
t
hr
o
ugh me
da
ka f
be
r1
98
5)
.A di
e
lc
yc
l
eo
f1
6:
8hr(
l
i
ght
:
da
r
k)
(
STI
I
)a
r
ee
s
s
e
nt
i
a
l
l
yt
r
a
ns
pa
r
e
ntt
hr
ou
ghoutt
he
i
r We
se
mpl
o
y
e
d･Me
da
kal
a
r
va
ewe
r
ef
e
dgr
o
und
l
i
f
ec
y
c
l
e(
Wa
ka
ma
t
s
ue
tal
.2001
)
,a
nda
l
l
o
whi
gh wa
pr
e
s
s
e
dt
hr
ougha60Hm S
i
e
v
e
)Ot
o
hi
meL
3di
e
t
r
e
s
ol
ut
i
on(
<1
pm)noni
n
va
s
i
v
ei
nvi
v
oi
ma
gi
ngo
f (
As
hbyAq
ua
t
i
c
s
,Wes
tChe
s
t
e
r
,PA)vi
aa
na
ut
oi
nt
e
r
na
lor
ga
nsa
ndt
i
s
s
ue
sa
tt
hes
ubc
e
l
l
ul
a
rl
e
v
e
l
･ (
t
i
cf
e
e
de
r7t
i
me
spe
rda
y･Be
c
a
us
eOt
o
hi
me
Byc
ompa
r
i
s
on,O
t
he
rme
da
kas
t
oc
ksde
ve
l
opde
r ma
3ha
sbe
e
ns
ho
wnt
obef
r
e
eo
fe
s
t
r
og
e
ni
cc
omma
la
ndvi
s
c
e
r
a
lpi
gme
nt
a
t
i
ont
ha
tpr
e
c
l
ude
shi
gh J
i
c
a
t
i
ons(
I
nudo e
r
e
s
o
l
ut
i
o
nwi
de
丘e
l
da
ndc
onf
bc
a
li
ma
gl
ngde
e
p pl
tal
.2004)
,Wec
ons
i
de
r
e
di
t
wi
t
hi
no
r
ga
ni
s
ms
.
Empl
o
yl
ngWi
de
丘e
l
da
ndc
onf
b- a
no
pt
l
ma
l伝s
hf
ood.I
na
ddi
t
i
on,a
l
lbr
oods
t
oc
k
c
a
lmi
c
r
os
c
o
pyt
e
c
hnol
o
gl
eS,i
is
hdi
e
t
swe
r
es
uppl
e
me
n
t
e
dda
i
l
ywi
t
hAr
t
e
mi
a
nc
on
j
unc
t
i
onwi
t
h f
upl
i
a(
ha
t
c
he
d br
i
ne s
hr
i
mp)
.Egg c
l
us
t
e
r
s
f
luor
e
s
c
e
ntpr
o
be
s
,Wede
v
e
l
ope
dme
t
hodol
ogl
e
S na
,
f
o
rhi
ghr
e
s
ol
ut
i
oni
nvi
v
oi
ma
gl
nga
tt
hes
ubc
e
l
1 c
ol
l
e
c
t
e
dda
i
l
y
,We
r
ec
l
e
a
ne
di
ne
mbr
y
or
e
a
r
l
ng
1
ul
a
rl
e
v
e
l
.I
ne
mbr
y
o,l
a
r
va
la
ndj
uv
e
ni
l
eSTI
I me
di
um (
ERM)
,a
nd i
ndi
vi
dua
lf
e
r
t
i
l
i
z
e
de
ggs
me
da
ka(
f
r
o
m 3t
o60da
yspos
tf
e
r
t
i
l
i
z
a
t
i
on,dp
f
) we
r
es
e
pa
r
a
t
e
da
ndma
i
n
t
a
i
ne
di
nERM a
t25
o
C.
-
,
*Co
r
r
e
s
p
o
n
d
e
n
c
et
o
:
Dr
.
Ro
nC.
Ha
r
d
ma
n
,
Du
k
eUn
i
v
e
r
s
i
t
y
,
Ni
c
h
o
l
a
sS
c
h
o
o
l
o
f
t
h
eEn
v
i
r
o
n
me
n
t
a
n
dEa
r
t
hS
c
i
e
n
c
e
s
,
Bo
x9
0
3
2
8
LS
RCA3
3
3
B,
Du
k
eUn
i
v
e
r
s
i
t
y
,
Du
r
h
a
m,
NC2
7
7
0
8
1
0
3
2
8
,
US
A,
T
e
l
.
:1
1
9
1
9
6
1
3
8
0
3
8
,
F
a
x
:1
1
9
1
9
1
6
8
4
8
7
4
1
,
Ema
i
l
:
r
o
n
.
h
a
r
d
ma
n
@d
u
k
e
.
e
d
u
44
R.
C.
Ha
r
d
ma
netal.
Unc
ons
ume
ddi
e
t
,de
t
r
i
t
usa
nda
s
s
oc
i
a
t
e
da
l
ga
l
ma
t
e
r
i
a
lwe
r
er
e
mo
v
e
df
r
om r
e
a
r
l
nga
ndbr
ood
s
t
oc
kt
a
nksda
i
l
y
.Ca
r
ea
ndma
i
nt
e
na
nc
eofme
da
kawe
r
ei
na
c
c
o
r
da
nc
ewi
t
hpr
ot
oc
o
l
sa
ppr
o
v
e
dby
t
heI
ns
t
i
t
u
t
i
ona
lAni
ma
lCa
r
ea
ndUs
eCommi
t
t
e
e
(
I
ACUC;
Al
1
7
07
04;
A1
41
061
04;
A1
731
031
05)
.
Mi
c
r
o
s
c
o
py
A Ze
i
s
sAxi
os
kopp equl
pped wi
t
h DAPI
/
TRI
TC/
FI
TC f
luor
e
s
c
e
nc
ef
il
t
e
rc
ubes
e
t(
DAPI/
UV:Ex3
60-38
0mm/EmAl
lVi
s>400nm,FI
TC:
Ex45
0-4
90nm/Em 51
5-565
nm,TRI
TC:Ex5
28
-5
5
2nm /Em 5
78
-63
2nm)
,Ze
i
s
sPl
a
nNe
of
l
ua
r
s
5x/
0･
1
5,l
ox/
0.
3,20Ⅹ/
0･
5,40x/
0.
85 pol
,a
nd
l
OOx/
1
･
3O
i
lob
j
e
c
t
i
v
e
s
,Phot
ome
t
r
i
c
sCoo
I
Sna
p
di
gi
t
a
li
ma
gi
ng s
ys
t
e
m (
2048 x 2048e
l
e
me
nt
V 3.
0)i
ma
gea
c
q
ui
s
i
t
i
ons
of
t
a
r
r
a
y
)a
ndI
PLa
b(
wa
r
e(
Sc
a
na
l
yt
i
c
s
)wa
sus
e
df
o
rwi
de
ie
f
l
dnuor
e
s
c
e
nc
emi
c
r
os
c
o
py
.A xe
nonl
a
mpwa
sus
e
df
わr
,
e
x
c
i
t
a
t
i
on･(
DAPI
4'
61
Di
a
mi
di
n02phe
n
y
l
i
ndo
l
e
TRI
TCt
e
t
r
amet
hyl
r
hoda
mi
ne i
s
ot
hi
oc
yana
t
e,
FI
TC一
且uo
r
e
s
c
e
i
nl
s
ot
hi
oc
ya
na
t
e
)
.
Forc
o
nf
oc
a
lf
luor
e
s
c
e
nc
emi
c
r
os
c
opyaZe
i
s
s
51
0Me
t
as
ys
t
e
m wi
t
hZe
i
s
sLSM 5Axi
o
vi
s
i
on
i
ma
ge a
c
qul
S
i
t
i
on s
of
t
wa
r
e,Ar
gon a
nd He
Ne
l
a
s
e
ra
nd Ca
r
lZe
i
s
sCa
poc
hr
oma
t
i
c 40Ⅹ/
1
.
2,
Ca
poc
hr
o
ma
t
i
cl
ox/
0.
4
5Ob
j
e
c
t
i
ve
swa
sus
e
d.
A Ni
ko
n Ec
l
i
ps
eE600 wi
t
h aNi
kon DXM
1
200di
gi
t
a
lc
a
pt
ur
es
ys
t
e
m,ha
l
oge
nl
i
ghts
our
c
e
,
Ni
konpl
a
nnc
oluo
f
rl
ox/
0･
3wd1
6,pl
a
nne
oluor
f
20x/
0.
5 wd2.
1
,pl
a
nnc
oluor40x/
f
0.
75 wdO.
72,
a
ndpl
a
na
po60x/
1
.
4wdO.
21(
o
i
l
)ob
j
e
c
t
i
v
e
swa
s
us
e
df
orbr
i
ght
ie
f
l
dmi
c
r
os
c
o
py.A Ni
konSZM
1
500(
di
s
s
e
c
t
i
ngmi
c
r
os
c
ope
)wi
t
haNi
ko
nDXM
1
200di
gi
t
a
lc
a
pt
ur
es
ys
t
e
m,Ni
konHRpl
a
na
po
l
xWD54a
ndNi
konHR0.
5
xWD1
3
6O
b
j
e
c
t
i
v
es
wa
sus
e
df
orbr
i
ght
ie
f
l
dmi
c
r
os
c
o
py.
Sof
t
wa
r
e:I
ma
ge a
na
l
ys
t
sa
nd compi
l
a
t
i
on
we
r
epe
r
f
or
me
dwi
t
hEc
l
i
ps
e
Ne
t(
Ni
ko
n,USA)
,
AdobePhot
os
hop(
Ado
be
,I
nc
.
)
,I
ma
g
eJ(
Vl
.
3
2
j
)
,
I
PLa
bs
o
f
t
wa
r
e(
Sc
a
na
l
yt
i
c
s
,I
nc.
,v
e
r
s
i
on3.
5
5)
,
a
nd Ze
i
s
sI
ma
g
e Br
ows
e
r(
Ca
r
lZe
i
s
s
)
.Al
l3
di
me
ns
i
ona
lr
e
c
ons
t
r
uc
t
i
onsa
nd a
na
l
ys
e
swe
r
e
pe
r
f
or
me
dwi
t
hAmi
r
a3
D(
Me
r
c
ur
y Comput
e
r
Sys
t
e
ms
,
Be
r
l
i
n)
.
Al
lt
r
a
ns
mi
s
s
i
one
l
e
c
t
r
onmi
c
r
os
c
o
py(
TEM)
wa
spe
r
f
o
r
me
da
tt
heLa
bo
r
a
t
o
r
yf
o
rAdva
nc
e
d
El
e
c
t
r
ona
ndLi
ghtOpt
i
c
a
lMe
t
hods(
LAELOM)
,
Col
l
e
geo
fVe
t
e
r
i
na
r
yMe
di
c
i
ne
,No
r
t
hCa
r
ol
i
na
St
a
t
e Uni
ve
r
s
l
t
y,On a
n FEI
/
Phi
l
i
psEM 208S
Tr
a
ns
mi
s
s
i
onEl
e
c
t
r
onMi
c
r
os
c
o
pe
.
Che
mi
c
al
sandj
7
uor
e
s
c
e
nt
pr
obe
s
A f
ul
ll
i
s
toff
l
uor
es
ce
ntpr
obesus
ed i
s
s
hown i
n Ta
bl
el
･The pr
l
mar
yf
l
uor
es
ce
nt
pr
obese
mpl
oye
d we
r
e;7be
nz
yl
oxyr
es
or
uf
i
n,
βBodi
pyC5HPC l
BODI
PY㊥ 581
/
5
91C5HPC
4di
f
l
uor
o1
51
(
41
Phe
ny1
1
,
3but
adi
enyl
)
I
(
2(
4,
4bor
a3a,
4adi
aza
S
i
ndace
ne3pe
nt
anoyl
)
1
he
xadecanoyl
s
ngl
yce
r
o3phos
phoc
hol
i
ne)
]
,
Bodi
py FL C5c
e
r
a
mi
de [
N(
4,
4di
f
l
uor
05,
7di
met
hyl
4bor
a3a,
4adi
azaS
i
ndacene1
3pe
nt
a
no
yl
)s
phi
ngos
i
ne
]
,DAPI[
4'
,
6di
a
mi
di
n021
Phe
ny
l
i
ndol
e
,di
hy
dr
oc
hl
or
i
de
]
,a
ndf
luor
es
c
e
i
n
i
s
ot
hi
ocyana
t
e･Al
lf
l
uor
es
centpr
obeswe
r
e
a
dmi
ni
s
t
e
r
e
dt
oSTI
Ime
da
kavi
aa
q
ue
ousba
t
hi
n
.
Dur
a
t
i
ono
f
c
onc
e
nt
r
a
t
i
onr
a
nge
sl
i
s
t
e
di
nTa
bl
e1
e
x
pos
ur
et
i
me
s(
a
q
ue
ousba
t
he
x
pos
ur
e
s
)va
r
i
e
d
f
o
re
a
c
hnuo
r
e
s
c
e
ntpr
o
be
,a
ndc
a
nbede
r
i
v
e
d
f
r
om t
heva
l
ue
sgl
V
e
ni
ni
ni
t
i
a
la
ndpe
a
ke
xpos
ur
e
c
ol
umn.
Embr
y
or
e
a
r
i
ngme
di
um (
ERM)wa
spr
e
pa
r
e
d
a
sf
o
l
l
o
ws
:1
.
0mlHa
nk'
sSt
oc
k#1
,0.
1mlHa
nk'
s
.
0mlHa
nk'
sSt
oc
k#4,1
.
0mlHa
nk'
s
St
oc
k#2,1
.
0mlf
r
e
s
hHa
nk'
sSt
oc
k#6,i
n95.
9ml
St
oc
k#5,1
di
s
t
i
l
l
e
dH2
0,pH 7
.
2[
St
oc
k#1
:8.
0gNa
Cl
,0.
4
蛋KCl
,i
n1
00mldi
s
t
i
l
l
e
dH20,St
oc
k#2:0.
3
58
mgNa
2HPO4Anh
y
dr
o
us
,0.
60mgKH2PO4,i
n
1
00mlddH20,St
oc
k#4:0･
72蛋Ca
C1
2i
n50ml
ddH20,St
oc
k#5:1
･
23gMgSO4
x
7H20 i
n5
0
mldi
s
t
i
l
l
e
dH20,St
oc
k#6:0.
3
5gNa
HCO31
0.
0
ml
sdi
s
t
i
l
l
e
d H20】
･Ot
he
rc
he
mi
c
a
l
se
mpl
o
y
e
d:
Di
e
t
hy
l
ni
t
r
os
a
mi
ne(
Nni
t
r
os
odi
e
t
h
y
l
a
mi
ne
,
Si
gma
,
NO7
56)
,e
t
hi
n
y
le
s
t
r
a
di
o
l[
(
1
,
3,
5(
1
0)
e
s
t
r
a
t
r
i
e
ne
3,
1
7βdi
o
l
)
,Si
gma
,
E88
7
5]
,αna
pt
hy
l
i
s
o
h
ti
oc
ya
na
t
e
l
a
,N45
25
)
,βna
pt
hof
la
v
one(
Si
gma
,N1
3
63
3
)
,
(
si
gn
t
r
i
cal
neme
t
hane s
ul
f
ona
t
e(
Si
gma,E1
0521
)
,
di
me
t
hyl
s
ul
f
oxi
de (
DMSO)(
Si
gma,276855)
,
Pr
ona
s
e(
s
t
r
e
pt
oc
oc
c
a
lp
r
ot
e
a
s
e
,Si
gma
)
,Ha
nk'
s
ba
l
a
nc
e
ds
a
l
ts
o
l
ut
i
o
n(
Si
gma
,H58
99)
,phos
pha
t
e
buf
f
e
r
e
ds
a
l
i
ne(
PBS,s
i
gma
)
.
St
at
i
s
t
i
c
s
Di
f
f
e
r
e
nc
e
si
nf
luo
r
e
s
c
e
nc
ei
nt
e
ns
l
t
yi
ndi
gi
t
a
l
i
ma
g
ec
a
pt
ur
e
swe
r
ea
na
l
yz
e
ds
t
a
t
i
s
t
i
c
a
l
l
yus
l
ng
St
a
t
vi
e
ws
o
f
t
wa
r
e(
SASi
ns
t
i
t
ut
e
,Ca
r
y
,NC)
.Two
wa
yANOVAwi
t
hFi
s
he
r
'
sTt
e
s
twa
se
mpl
o
y
e
dt
o
a
s
s
e
s
ss
t
a
t
i
s
t
i
c
a
l
l
ys
l
gni
ic
f
a
ntdi
f
f
e
r
e
nc
e
si
nf
luor
e
s
c
e
nc
ei
n
t
e
ns
l
t
y.Ba
c
kgr
o
undf
luo
r
e
s
c
e
nc
ea
nd
a
ut
of
luo
r
e
s
c
e
nc
ewa
sa
c
c
o
unt
e
df
o
ri
ns
t
a
t
i
s
t
i
c
a
l
a
na
l
ys
e
s
.Pe
a
r
s
on'
sCor
r
e
l
a
t
i
o
n Coe
f
丘C
i
e
ntwa
s
us
e
df
o
rc
ompa
r
i
s
o
no
fc
a
l
c
ul
a
t
e
dv
e
r
s
usme
a
s
ur
e
d
mo
r
pho
me
t
r
i
cva
l
ue
si
nvi
v
o.Eq
ua
l
i
t
yo
fVa
r
i
a
nc
e
Ft
e
s
twa
sus
e
df
わra
s
s
e
s
s
me
nto
fbl
o
odt
obi
l
e
t
r
a
ns
po
r
t
,whi
c
hwa
sa
s
s
e
s
s
e
dvi
ac
o
mpa
r
i
s
onof
45
I
nvi
voi
magi
ngi
nSTI
Imedaka(
Or
yz
i
asl
at
i
pe
s
)
Tabl
e1
.Fl
uor
es
ce
ntPr
obes
Fl
uor
ophor
e
7benzyl
oxyr
esor
uf
i
n
Sol
ub】
e
Ex
Em
l
ni
t
i
al
/
Peak
Assi
mi
l
at
i
onTi
me
(
mi
n)
DMSO
560
590
30/
45
Exposur
e
Concent
r
at
i
on
50ト
I
M
vo CYP3A act
i
vi
t
y.Upt
ak
evi
a gl
l
l
,i
nvi
vo met
abol
i
sm i
ngl
Handgut
,goodf
ori
nvest
i
gat
i
ngbl
oodt
obi
l
et
r
anspor
t
,l
HBPs,
l
nvi
EHBPsandi
nt
es
t
i
naHumen.
7･
Et
hoxyr
esor
uf
i
n
DMSO
30/
45
1
0-50ト
I
M
",i
nvi
vomet
abol
i
sm i
ng[
"andL
i
ver
.CYPI
A2,2ESubs
t
r
at
e.
l
nvi
voi
magl
ngOfCYPI
Aact
i
vi
t
y.Upt
ak
evi
agL
Acr
i
di
neOr
ange
H20
500
5
26
1
-5pM
l
nvi
vol
abel
i
ngofDNA,RNA.Goodf
orapopt
osi
s,i
nt
er
act
swi
t
hDNAandRNAbyi
nt
er
cal
at
i
onorel
ec
t
r
ost
at
i
cat
t
r
act
i
ons･
BODI
PY505/
515:4,41
di
f
l
uor
ol
1,
3,
5,7t
et
r
amet
hyl
･
41
bora3a,4adi
azaらi
ndacene
DMS0
502
51
0
1
5/
20
5pM-1
00nM
Upt
ak
evi
agl
l
L
,act
i
vet
r
anspor
tt
hr
oughhepat
obi
l
i
ar
ysyst
em,concent
r
at
i
vebl
oodt
obi
l
et
r
anspor
t
,andsecr
et
i
onf
r
om ga"bl
adder
i
nt
ogutl
umen.Goodf
orel
uci
dat
i
onofgI
",l
HBP,EHBP,i
nt
est
i
naHumen.NonPol
ar
,Li
pophi
l
i
c.
BODl
PYFLC5cer
ami
de:N(
4,4di
f
l
uor
05,7di
met
hyト4bor
a3a,
4a･
di
azaS･
i
ndacene･3pent
anoyl
)
sphi
ngosi
ne
DMSO
358
461
20/
45
5ト
l
M-1
00nM
Put
at
i
vepassi
vet
r
anspor
ti
nvi
vo.Upt
ak
evi
agl
H,t
r
anspor
tt
hr
oughcar
di
ovascul
arandhepat
obi
l
i
ar
ysyst
emsandsecr
et
i
onf
r
om
gaHb一
adderi
n
t
ogutl
umen.
Bodi
pyVer
apamH
DMSO
504
51
1
20/
60
l
nvi
voBodi
pyver
apami
ll
ocal
i
zedt
ohepat
ocyt
i
ccyt
osoli
ndi
scr
et
evesi
cl
es.Tr
anspor
tt
obi
l
ewasnotobser
vedi
nt
het
i
mef
r
ame
assayed,
whi
chwas90mi
nut
es.
BODI
PY
◎4931
503:4,4di
f
l
uor
01,
3,
5,
7,8pent
amet
hyl
-4
bor
a3a,
4adj
azaSi
ndacene(
BODI
PY@493/
503)
DMS0
493
504
1
5/
20
1
0ト
I
M
H
,ac
t
i
vet
r
anspor
tt
hr
oughhepat
obi
l
i
ar
ysyst
em,concent
r
at
i
vebl
oodt
obi
d
et
r
anspor
t
,andsecr
et
i
onf
r
om ga"bl
adder
Upt
ak
evi
agl
i
nt
ogutl
umen.Goodf
orel
uci
dat
i
onofgl
",l
HBPs,EHBPs,i
nt
est
i
nall
umen.Li
poph‖i
c,amphi
phi
l
i
c.
BODI
PY
◎581/
591C5･
HPC(
Phosphochol
i
ne)PC:2･
(
4,4di
t
l
uor
05,
71
di
met
hyl
14
1
bor
a1
3a,
4adi
azaSi
ndacene-3I
Pent
anOyL)
l
ll
hexa･
DMSO
58
2
593
1
5/
20
30nM
decanoyl
sn･
gl
ycer
o13phosphochol
i
ne
l
nvi
voL
abel
i
ngofi
nt
r
ahepat
i
candext
r
ahepat
i
cbi
l
i
ar
ysyst
em.Upt
akevi
agi
H.Hepat
obi
l
i
ar
yt
r
anspor
tt
ogutl
umen.Di
f
f
usef
l
uor
esI
cencei
nhepat
oc
yt
ecyt
osol
.
cel
l
Tr
aceT
MOr
egonGr
een@488car
boxyL
i
caci
ddi
acet
at
e,succi
ni
mi
DMSO
dylest
er(
car
boxyDFFDA,SE)'
cel
lper
meant
H mi
xedi
somer
s
<300
none
1
5/
20
1
0-1
00ト
I
M
3
58
461
1
5′
60
0･
3-31
0uM
1
5/
60
0･
3-3･
OpM
L
nvi
vol
abel
i
ngofhepat
i
cnucl
el
,Pot
ent
i
al
f
ordet
ect
i
onofapopt
osi
s.
DAP･
=4,
,
6di
ami
di
n0-2pheny･
i
ndo.
e,di
hydr
och･
or
i
de
E
Z
i
o
i
l
nvi
vonucl
earl
abel
i
ngofvi
r
t
ual
l
yal
l
ceHt
ypesassoci
at
edwi
t
hgi
l
l
,gut
,l
i
ver
,andcar
di
ovascul
ars
yst
em.
,
6di
ami
di
no1
2pheny.
i
ndo.
e･di
acet
at
e
DAP.Di
acet
at
e:4,
M
He
2
.
Oh
3
58
461
DAPl
di
acet
at
ei
swat
er
sol
ubl
ef
or
m.l
nvi
vonucl
earl
abel
i
ng.
Fl
uor
escei
n5i
sot
hi
ocyanat
e(
Fl
TCl̀
somerl
'
)
DMSO
494
51
9
1
0/
30
1pM -5
0nM
Excel
l
enti
nvi
vopr
obef
orel
uci
dat
i
ngbi
l
i
ar
ysys
t
em.L
nvi
vol
abel
i
ngofi
nt
r
ahepat
i
candext
r
ahepat
i
cbi
l
i
ar
ysyst
em.Hepat
obi
=
ar
y
t
r
anspor
tt
oi
n
t
es
t
i
nal山men.Upt
akevi
ag日.
Mi
t
oTr
acker
◎Gr
eenFM
DMSO
490
51
6
20/
30
25-200nM
DMSO
488
51
8
1
5/
30
1
0nM11PM
l
nvi
vol
abel
i
ngofhepat
ocyt
es.
sYTO◎1
6gr
eenf
l
uor
escentnucl
ei
caci
dst
ai
n
l
nvi
vonucl
earl
abel
i
ngofepi
t
hel
i
aandendot
hel
i
a,put
at
i
vei
nvi
vopr
obef
orapopt
osi
s.
sYTO◎27gr
eenf
l
uor
escentnucl
ei
caci
dst
ai
n
DMSO
495
53
7
1
5/
50
1
0nM-1ドM
DMSO
547
570
1
5/
50
0･
1
-5pM
509
1
5/
60
1L
I
M
509
1
5/
50
215nM
Apopt
osi
s.
sYTOX◎or
angenucl
ei
caci
dst
ai
n
Apopt
osi
s
Yo pRO◎1i
odi
de(
491/
509)
DMSO
Apopt
osi
s
YOYO･
lI
odi
de(
491/
509)
DMSO
491
l
nvi
voaccumuJ
at
edi
ni
nt
er
st
i
t
i
ar
spaces,somel
abel
i
ngofvascul
at
ur
e.
Typi
ca"
yusedf
orassaysf
orcel
l
enumer
at
i
on,ce"pr
ol
i
f
er
at
i
onandcel
l
c
vcl
e.
28f
l
uor
es
centpr
obeswer
es
el
ect
edf
ori
nvi
voappl
i
cat
i
onbas
edont
hei
rmol
ecul
arwei
ght
,ut
i
l
i
t
yl
nel
uci
dat
i
ngdes
i
r
eds
t
r
uct
ur
e/
f
unc
t
i
on,ont
hei
rbi
ocompat
i
bi
l
i
t
y,andi
nvi
vot
r
ans
por
tpr
oper
t
i
es(
1
8pr
obesar
es
hown)
.Thef
l
uor
es
centpr
obe,ades
cr
i
pt
i
onoff
i
ndi
ngs
,S
ol
ventus
edf
わrs
t
oc
kpr
epar
at
i
on(
S
ol
ubi
l
i
t
y)
,f
l
uor
es
c?nceexci
t
a
t
i
onandemi
s
s
i
onwa
vel
engt
hs(
Ex/
Em)
,i
ni
t
i
al
andpeakf
l
uor
es
ce
ncet
i
mes
,andef
f
ect
i
veaqueousexpos
ur
econcent
r
at
1
0nSar
egl
Ven.
4
6
R.
C.
Ha
r
dma
ne
tal
.
且uo
r
e
s
c
e
n
c
ei
nt
e
ns
i
t
i
e
sa
c
r
os
ss
i
nus
o
i
d,he
pa
t
oc
yt
l
CC
yt
OS
Ola
ndc
a
na
l
i
c
ul
a
rs
pa
c
e
s
･De
s
c
r
l
pt
l
V
e
s
t
a
t
i
s
t
i
c
swe
r
eus
e
df
o
rmo
r
pho
me
t
r
i
ca
na
l
ys
e
s
.
Hi
s
t
ol
o
g
yandi
mmuno
hi
s
t
oc
he
mi
s
t
r
y
Al
lhi
s
t
o
l
o
gi
c
a
ls
e
c
t
i
onswe
r
epr
e
pa
r
e
dbyt
he
Hi
s
t
o
pa
t
ho
l
ogyLa
bo
r
a
t
o
r
y
,Col
l
e
geo
fVe
t
e
r
i
na
r
y
Me
di
c
i
ne
,Nor
t
h Ca
r
o
l
i
naSt
a
t
eUni
ve
r
s
l
t
y.Fo
r
hi
s
t
ol
ogi
c
a
ls
t
udi
e
sme
da
kawe
r
ef
ixe
di
nl
O%
f
or
ma
l
i
nf
or24hr
s
.Me
da
kay
ounge
rt
ha
n20dpf
we
r
ef
ixe
dwho
l
e.
Fo
rme
da
kao
l
de
rt
ha
n20dp
f
,a
mi
dl
i
nei
nc
i
s
i
onwa
sma
def
r
om t
hea
na
la
pe
r
t
ur
e
t
ot
hel
e
v
e
loft
hehe
a
dki
dne
y
,t
oa
l
l
o
ws
a
t
ur
a
t
i
on
ofa
bdomi
na
lc
a
vl
t
yWi
t
h 丘Xa
t
i
v
e
.Cyt
o
ke
r
a
t
i
ns
7
,8,1
8a
nd1
9(
I
n
vi
t
r
og
e
n)a
nda
l
phaf
e
t
o
pr
ot
e
i
n
(
AFP)pr
i
ma
r
ya
nt
i
bodi
e
swe
r
eus
e
df
ori
nv
e
s
t
l
ga
t
i
ono
fhe
pa
t
oc
yt
e
,bi
l
i
a
r
ye
pi
t
he
l
i
aa
ndbi
l
e
pr
e
d
uc
t
ul
a
re
pi
t
he
l
i
a(
c
yt
o
ke
r
a
t
i
npr
o別e
,c
e
l
ldi
f
f
e
r
e
nt
i
a
t
i
o
n)
.Se
c
onda
r
ya
nt
i
bodi
e
swe
r
e;Al
e
xa
Fl
uo
r488goa
ta
nt
i
mo
us
eI
gG a
ndAl
e
xa
Fl
uo
r
488I
gG(
Fa
bf
r
a
gme
nt
)
.Cr
yos
e
c
t
i
onsa
ndpa
r
a
f
一
点ni
mbe
dde
ds
e
c
t
i
o
nswe
r
ei
nc
u
ba
t
e
dwi
t
hpr
l
ma
r
ya
nt
i
bodi
e
sa
tdi
l
ut
i
onso
f1
:
1
00t
o1
:
200(
PBS)
f
o
r90 mi
n
ut
esa
tr
oo
m t
e
mpe
r
a
t
ur
e
･Se
c
t
i
ons
we
r
ewa
s
he
dt
hr
e
et
i
me
swi
t
hPBSa
f
t
e
ri
nc
uba
t
i
onwi
t
hpr
l
ma
r
ya
nt
i
bodi
e
s
,i
nc
uba
t
e
dwi
t
hs
e
c
onda
r
ya
nt
i
bodi
e
sf
or90mi
n
ut
e
sa
tr
oom t
e
mp,
a
nds
ubs
e
que
nt
l
ywa
s
he
dt
hr
e
et
i
me
swi
t
hP石S.
Se
c
t
i
onswe
r
emo
unt
e
di
n Ul
t
r
a
c
r
uzmo
unt
l
ng
me
di
um a
nde
xa
mi
ne
dus
l
ngaZe
i
s
sAxi
os
ko
pp
luor
f
e
s
c
e
nc
emi
c
r
os
c
ope
.
Xe
no
bi
ot
i
ce
x
po
s
ur
e
s
ANI
Ta
ndDEN e
xpos
ur
e
swe
r
ei
na
q
ue
ous
ba
t
ha
tva
r
i
ouss
t
a
gesofde
ve
l
opme
nt
,unde
r
a
c
ut
e,c
hr
oni
ca
nd s
e
r
i
a
le
xpos
ur
ec
ondi
t
i
ons
.
Ac
ut
ee
xpos
ur
e
s
:me
da
kawe
r
ee
xpos
ed onc
e
t
oa
q
ue
o
usc
onc
e
nt
r
a
t
i
o
nso
fO･
25ドM t
o1
0pM
ANI
T,a
nda
s
s
e
s
s
e
da
t6,1
2,24,48,72a
nd96
hr
s
,a
nd a
tda
y1
0,30 a
nd 60pos
te
x
pos
ur
e
.
Se
r
i
a
l
/
c
hr
o
ni
ce
xpos
ur
e
s
:t
i
mepo
l
nt
Sf
わre
x
pos
ur
e
sa
r
et
hes
a
mea
sde
s
c
r
i
be
df
o
ra
c
u
t
ee
x
pos
ur
e
c
ondi
t
i
ons
,ho
we
v
e
r
,f
o
rs
e
r
i
a
le
xpos
ur
e
s
,me
da
ka
we
r
er
e
dos
e
de
v
e
r
y3da
ys
,oronc
ewe
e
kl
y,a
nd
e
xa
mi
ne
da
tt
hes
a
mepo
l
nt
Sgl
V
e
nf
わra
c
ut
ee
x
pos
ur
e
.Fo
rs
e
r
i
a
le
xpos
ur
e
ss
t
a
t
i
cr
e
ne
wa
lwa
sus
e
d
wi
t
hr
e
pl
a
c
e
me
nto
fs
o
l
ut
i
on e
v
e
r
yt
hr
e
eda
ys
･
Co
nt
r
o
l
sr
e
c
e
i
v
e
dDMSO (
ANI
T,DEN s
ol
v
e
nt
)
a
ts
a
mee
x
pos
ur
ec
o
nc
e
nt
r
a
t
i
onsgl
Ve
nf
o
rANI
T
DEN.DEN e
x
pos
ur
ewa
sf
o
r48hr
sa
t200ppm
i
na
que
o
usba
t
h.Al
le
x
pos
ur
e
swe
r
edonei
n7
50
mlwi
de
bot
t
om gl
a
s
sr
e
a
r
l
ngbe
a
ke
r
s
.Aque
o
us
ba
t
h/
e
x
pos
ur
eme
di
um wa
sERM:
de
i
o
ni
z
e
dwa
t
e
r
,
(
1
:
3)
･Gl
a
s
sr
e
a
r
i
ngbe
a
ke
r
swe
r
eke
ptona28
0C
he
a
t
i
ngPa
d.
Co
ho
r
t
so
fme
da
kar
a
nge
df
r
om 1
0t
0
3
0丘s
h,de
pe
ndi
ngont
hes
t
udy
.Fr
o
me
a
c
hc
o
ho
r
t
o
fme
da
kas
ubpopul
a
t
i
onswe
r
eus
e
df
or
;i
nvi
v
o
a
s
s
e
s
s
me
nt
s
,hi
s
t
o
l
ogi
c
a
la
ndi
mmuno
hi
s
t
oc
he
mi
C
a
ls
t
udi
e
s
,a
ndt
r
a
ns
mi
s
s
i
one
l
e
c
t
r
onmi
c
r
os
c
o
py
(
TEM)s
t
udi
e
s
.
Resul
t
sandDi
s
cus
si
on
Asa
no
v
e
r
vi
e
w:i
nvi
v
os
t
udy(
me
t
hodol
ogy
)i
n
STI
Ime
da
kac
a
nbec
ons
i
de
r
e
dt
obec
o
mpr
i
s
e
d
1
)s
e
da
t
i
o
n,(
2)
o
ft
hr
e
epr
i
ma
r
yc
o
mpo
ne
nt
s
;(
mi
c
r
os
c
o
py
/
i
ma
gi
ngt
e
c
hnol
ogi
e
s
,a
nd(
3)且uo
r
e
s
c
e
ntpr
o
be
s
.Fi
r
s
t
,Wede
s
c
r
i
bee
a
c
hi
nt
hec
ont
e
xt
o
fme
t
hodo
l
ogyde
ve
l
opme
nt
,a
ndt
he
nwegl
V
e
e
xa
mpl
eso
ft
hea
ppl
i
c
a
t
i
ono
ft
he
s
et
oo
l
st
oi
nv
e
s
t
l
ga
t
l
ng bi
o
l
ogi
c
a
ls
t
r
uc
t
ur
e
/
f
unc
t
i
on a
nd a
da
pt
i
ve
/
t
o
xi
cr
e
s
pons
e
so
ft
hehe
pa
t
o
bi
l
i
a
r
ys
ys
t
e
m,
i
n
VI
VO.
Se
dat
i
on
Foro
pt
l
ma
li
n vi
vo i
ma
gl
ng O
fl
a
r
va
la
nd
ol
de
rSTI
Ime
da
ka(
>8
d
pf
)wef
o
undnonl
e
t
ha
l
s
eda
t
i
on neces
s
ar
y,pa
r
t
i
c
ul
ar
l
y whe
n wor
kl
.Whi
l
ea
ni
c
e
i
ng/
i
ma
gl
nga
tt
hec
e
l
l
ul
a
rl
e
v
e
ba
t
hpr
o
v
e
de
f
f
e
c
t
i
vef
o
rs
e
da
t
i
o
no
fme
da
kaa
t
a
l
ls
t
a
ge
so
fde
ve
l
opme
n
t
,O
pt
l
ma
ls
e
da
t
i
onwa
s
a
c
hi
e
v
e
dwi
t
h1
0pM t
r
i
c
a
i
neme
t
ha
ne
s
ul
f
ona
t
e
Ime
da
kawe
r
epl
a
c
e
di
na
(
MS1
222)
.Br
i
e
ly;STI
f
s
o
l
ut
i
onofl
O卜M MS222(
ERM a
ss
o
l
v
e
nt
)
.As
s
oona
sme
da
kawe
r
ea
na
e
s
t
he
t
i
z
e
d(
i
mmo
bi
l
e
)
t
he
ywe
r
er
e
mo
ve
df
r
om t
hes
e
da
t
i
veba
t
ht
oa
ba
t
ho
ff
r
e
s
hERM:
de
i
oni
z
e
dwa
t
e
r(
1
:
3)f
o
r1-2
mi
nut
e
s
.Se
da
t
e
dme
da
kawe
r
et
he
np
l
a
c
e
do
na
gl
a
s
sde
pr
e
s
s
i
onwe
l
ls
l
i
dewi
t
h∼400PlofERM:
de
i
oni
z
e
d wa
t
e
r
,o
re
no
ugh s
ol
ut
i
ont
o 丘u t
he
l
l
,o
r
i
e
nt
e
di
nade
s
i
r
e
da
na
t
omi
c
a
l
de
pr
e
s
s
i
o
nwe
pos
i
t
i
on,a
ndc
o
v
e
rS
l
i
ppe
dwi
t
h#2g
l
a
s
sc
o
ve
r
s
l
i
ps
.Se
da
t
e
dme
da
kawe
r
ec
ompl
e
t
e
l
yi
mme
r
s
e
d
i
na
na
que
o
usme
di
um whi
l
ec
o
v
e
I
L
S
l
i
ppe
d on
t
hede
pr
e
s
s
i
onwe
l
lgl
a
s
ss
l
i
de
.Ca
r
e
f
u
la
t
t
e
nt
i
on
wa
spa
i
dt
oe
ns
ur
l
ngme
da
kawe
r
ea
sc
l
os
et
ot
he
c
o
v
e
rS
l
i
pa
spos
s
i
bl
e.Thi
se
nt
a
i
l
e
dpos
i
t
i
onl
ng
s
e
da
t
e
dme
da
kaa
sc
l
os
et
ot
hee
dgeo
ft
hec
onc
a
v
ede
pr
e
s
s
i
onwe
l
la
spos
s
i
bl
e
,t
he
r
e
b
ye
ns
ur
l
ng
c
ont
a
c
to
ft
hede
r
mi
swi
t
ht
hec
o
v
e
rS
l
i
p.Suc
h
pos
i
t
i
onl
ngmi
ni
mi
z
e
dt
hef
lui
dme
di
um be
t
we
e
n
me
da
kaa
ndc
o
ve
r
s
l
i
p.Ev
e
ns
ma
l
ldi
s
t
a
nc
e
so
fa
f
e
w mi
c
r
onsbe
t
we
e
nme
da
kaa
ndt
hec
o
ve
r
S
l
i
p
gr
e
a
t
l
ydi
mi
ni
s
he
do
pt
i
c
a
lr
es
o
l
ut
i
on(
c
l
a
r
i
t
yo
f
c
e
l
l
sa
ndt
i
s
s
ue
s
)
,duet
odi
f
f
r
a
c
t
i
ono
ft
hei
ma
ge
t
hr
o
ught
hei
nt
e
r
v
e
nl
ngS
pa
c
e
.
I
nvi
voi
ma
gi
ngi
nSTI
Ime
da
ka(
Or
yz
i
asl
at
i
pe
s
)
4
7
Fi
gur
e1
.I
nvi
v
oi
ma
gl
ngO
ft
umo
rf
or
ma
t
i
oni
nSTI
Ime
da
ka:br
i
ght
f
i
e
l
dmi
c
r
os
c
opy.Ne
opl
a
s
t
i
cr
e
s
pons
ef
o
l
l
o
wl
nge
a
r
l
yl
i
f
e
s
t
a
gee
xpos
ur
eo
fSTI
Ime
da
kat
ot
her
e
f
e
r
e
nc
ehe
pa
t
oc
a
r
c
i
noge
ndi
e
t
hy
l
ni
t
r
os
a
mi
ne(
DEN)
.(
A & C)I
nvi
v
oi
ma
gi
ng(
br
i
ght
f
i
e
l
d)o
fhe
pa
t
i
ct
umorf
o
r
ma
t
i
o
n(
gr
e
e
na
r
r
o
whe
a
ds
)i
nme
da
kae
xpos
e
dt
oDENa
ta
ne
a
r
l
yl
i
f
es
t
a
ge
,S
howi
nge
nl
a
r
ge
me
ntof
t
ot
a
ll
i
v
e
rma
s
sa
nda
l
t
e
r
e
dva
s
c
ul
a
t
ur
e.Hi
s
t
opa
t
hol
ogi
c
a
la
s
s
e
s
s
me
nto
ft
het
umors
ho
we
dmi
xe
dhe
pa
t
oc
e
l
l
ul
a
r(
B)a
ndc
hol
a
n一
gi
oc
e
l
l
ul
a
rc
a
r
c
i
noma
s(
D)
･Bi
l
i
a
r
yhype
r
pl
a
s
i
a(
D)wa
sc
ha
r
a
c
t
e
r
i
z
e
dbyas
i
ngl
el
a
ye
rofbi
l
i
a
r
ye
pi
t
he
l
i
um l
i
ni
ngl
a
r
gec
ys
t
i
c
s
pa
c
e
si
nt
hel
i
ve
r
.Opa
quewhi
t
et
i
s
s
uei
nbr
i
ght
f
i
e
l
di
ma
ge
s(
A&B)i
so
va
r
y
,t
heg
utoc
c
upi
e
sc
a
uda
lmos
tr
e
gi
onoft
hea
bdomi
na
lc
a
vl
t
y.
Mi
c
r
os
c
o
py/
i
ma
gi
ngt
e
c
hni
que
s
Onc
emo
unt
e
do
nade
pr
e
s
s
i
onwe
l
lgl
a
s
ss
l
i
de
me
da
kawe
r
ei
ma
ge
dl
i
v
ewi
t
hbr
i
ght
丘e
l
d,wi
de
i
fe
l
da
nd l
a
s
e
rs
c
a
nnl
ng C
Onf
oc
a
lf
luo
r
e
s
c
e
nc
e
mi
c
r
os
c
opy (
LSCM)
･Ea
c
h pr
es
e
nt
e
ds
pec
i
f
i
c
a
dva
nt
a
ge
sa
nddi
s
a
dva
nt
a
ge
s
,whi
c
hwi
l
lbei
l
l
us
t
r
a
t
e
dt
hr
ought
hei
nvi
v
oi
ma
ge
spr
e
s
e
nt
e
dhe
r
e.
Fol
l
o
wl
ng,Wepr
e
s
e
nta
nO
Ve
r
Vi
e
wo
fc
ons
i
de
r
a
t
i
onsf
o
re
a
c
hi
ma
gl
ngmOda
l
i
t
y
.
Br
i
ght
丘e
l
dmi
c
r
os
c
opy(
e
.
g.Ni
ko
nLSM di
s
s
e
c
t
i
ngmi
c
r
os
c
o
pe
)
,d
uet
oopt
i
c
sa
ndi
l
l
umi
na
t
i
ons
o
ur
c
e
,
wa
swe
l
ls
ui
t
e
df
ori
n
ve
s
t
l
ga
t
i
ona
tt
he
t
i
s
s
uea
ndo
r
ga
nl
e
v
e
lofo
r
ga
ni
z
a
t
i
on.
Ane
xa
mpl
e
i
ss
ho
wni
nFi
gur
e1
;whe
r
ehe
pa
t
i
ct
umo
rf
o
r
ma
t
i
on,t
her
e
s
ul
tofe
a
r
l
yl
i
f
es
t
a
gee
xpos
ur
et
o
t
hec
a
r
c
i
no
ge
nDEN,wa
si
ma
ge
da
t1
0mont
hs
pos
te
x
pos
ur
et
hr
o
ught
hea
bdomi
na
lwa
l
l
.The
a
bi
l
i
t
yt
o obs
e
r
v
e/
i
ma
gegr
os
sa
na
t
o
my/
whol
e
a
ni
ma
lvi
abr
i
ght
丘e
l
dmi
c
r
os
c
o
pya
l
s
opr
o
vi
de
d
ava
l
ua
bl
ec
ompa
r
a
t
i
v
er
e
f
e
r
e
nc
ef
orf
luor
es
c
e
nc
e
ba
s
e
di
ma
gi
ng s
t
udi
es(
e.
蛋.LSCM,e
xa
mpl
es
-
C
a
nbes
e
e
nt
hr
ougho
utt
hei
ma
ge
spr
e
s
e
nt
e
d)
･
Expec
t
edl
y,br
i
ght
f
i
e
l
d mi
cr
os
copy (
di
s
s
ec
L
i
ngmi
c
r
os
c
o
pe
)wa
snots
ui
t
a
bl
ef
orde
e
pt
i
s
s
ue
o
bs
e
r
va
t
i
o
nsi
nSTI
Ime
da
ka,o
rf
o
rc
e
l
l
ul
a
rl
e
ve
l
i
n
v
e
s
t
l
ga
t
i
on/
i
ma
gl
ng.
Bot
h wi
de
f
i
e
l
d and c
onf
ocalf
l
uor
es
ce
nc
e
mi
c
r
os
c
opypr
o
v
e
de
xc
e
l
l
e
ntf
o
rhi
ghr
e
s
ol
ut
i
on(
<
1pm)i
nvi
v
oo
bs
e
r
va
t
i
o
n/
i
ma
gi
ngo
fi
ndi
vi
d
ua
l
c
e
l
l
s
,t
i
s
s
ue
sa
nd or
ga
nsi
nl
i
vi
ng i
ndi
vi
d
ua
l
s
.
Whi
l
ec
o
n丘)
c
a
lmi
c
r
os
c
o
pywa
ss
upe
r
i
ort
owi
de
ie
f
l
di
nvi
r
t
ua
l
l
ya
l
la
s
pe
c
t
s
,a
swi
l
lbes
ho
wni
n
t
hef
indi
ngspr
e
s
e
nt
e
dhe
r
e
,wi
de
ie
f
l
dmi
c
r
os
c
opy
wa
snotwi
t
houtme
r
i
ta
nds
houl
dbec
ons
i
de
r
e
d
apr
a
c
t
i
c
a
lme
a
nsbywhi
c
ht
ounde
r
t
a
kei
nvi
vo
i
nves
t
l
ga
t
i
onsi
n STI
Imeda
ka.Fori
ns
t
a
nc
e,
wi
de
丘e
l
dmi
c
r
os
c
o
pywa
sa
tt
i
me
se
mpl
o
y
e
da
s
as
c
r
e
e
ni
ngme
t
hod,a
ndf
o
rme
t
hodol
ogyr
e
ine
f
me
nt
,whe
na
c
c
e
s
st
oac
o
nf
oc
a
lmi
c
r
os
c
o
pewa
s
notpos
s
i
bl
e(
apr
obl
e
m notunc
ommoni
nma
n
y
r
e
s
e
a
r
c
hf
a
c
i
l
i
t
i
e
s
)
.Thef
unda
me
nt
a
ldr
a
wba
c
k
t
owi
de
丘e
l
dwa
sopt
l
C
a
lr
e
s
o
l
ut
i
on;a
nunde
s
i
r
e
d
48
aC.
Ha
r
d
ma
netal
.
gr
e
a
t
e
rde
pt
hoff
ie
l
d,a
ndr
e
s
ol
ut
i
o
ni
nf
e
r
i
ort
o
t
ha
to
bt
a
i
ne
dwi
t
hc
onf
oc
a
lmi
c
r
os
c
o
pe
s
.
Bye
xa
mpl
e:i
nvi
v
oi
nv
e
s
t
l
ga
t
i
o
nsi
nt
ohe
pa
t
obi
l
i
a
r
yt
r
a
ns
po
r
t(
di
s
c
us
s
e
dl
a
t
e
I
)ne
c
e
s
s
i
t
a
t
et
he
s
pa
t
i
a
lr
e
s
ol
ut
i
onpr
o
vi
de
dbyc
onf
oc
a
li
ma
gl
ng.
Be
c
a
us
eo
ft
hel
a
c
kofr
e
s
ol
ut
i
on(
de
pt
ho
f丘e
l
d
pe
r
mi
t
t
e
dwi
t
hXe
nonl
a
s
e
ra
nd s
t
a
nda
r
dNe
o,
Fl
ua
rob
j
e
c
t
i
ves
,s
e
e ma
t
e
r
i
a
l
sa
nd me
t
hods
)
wi
de
ie
f
l
df
luo
r
e
s
c
e
nc
emi
c
r
os
c
o
py wa
sl
i
mi
t
e
d
t
o qua
l
i
t
a
t
i
ve s
t
udi
es(
vs
.qua
nt
i
t
a
t
i
ve i
n vi
vo
s
t
udy/
i
ma
gi
ng)
.Thede
pt
ho
f丘e
l
dwi
t
ht
he60
Ⅹ
Pl
a
nNe
oI
Fl
ua
ro
b
j
e
c
t
i
v
eono
urZe
i
s
sAxi
os
ko
pp
(
wi
de
f
i
e
l
d)wa
s0.
65 ト
I
m;t
e
c
hni
c
a
l
l
y,c
ompa
r
a
bl
et
oc
onf
oc
a
l
.Ho
we
v
e
r
,t
hi
s0.
65ト
I
m de
pt
hof
ie
f
l
dr
e
pr
e
s
e
nt
sonl
yt
hef
ie
l
do
f丘nef
oc
us
.Al
s
o
r
e
s
ol
v
e
d,d
uet
oi
l
l
umi
na
t
i
onbyXe
no
nl
a
s
e
rl
i
ght
1
ngs
our
c
e
,We
r
eOutO
ff
oc
uspl
a
ne
sa
bo
v
ea
nd
be
l
o
wt
hepl
a
neo
ff
oc
us
.I
tf
o
l
l
o
wst
ha
td
uet
o
r
e
le
f
c
t
i
ona
ndr
e
f
r
a
c
t
i
o
nf
r
om t
i
s
s
ue
sa
bo
v
ea
nd
be
l
o
wt
hepl
a
neo
fi
ma
gl
ng,O
pt
i
c
a
lr
e
s
ol
ut
i
onwa
s
di
mi
ni
s
he
d,a
ndf
luor
e
s
c
e
nc
eba
s
e
ds
t
udi
e
swe
r
e
l
i
mi
t
e
dt
os
e
m1
qua
nt
i
t
a
t
i
v
ea
ndqua
l
i
t
a
t
i
v
ea
s
s
e
s
s
me
nt
s
.
I
nc
o
nt
r
a
s
t
,c
onf
oc
a
lmi
c
r
os
c
opy(
LSCM)
,due
t
ol
i
mi
t
e
dde
pt
hoff
ie
l
da
ndo
pt
i
c
a
lr
e
s
ol
ut
i
o
n,
pr
o
v
e
dopt
l
ma
lf
o
rqua
nt
i
t
a
t
i
v
ei
nvi
v
oi
nv
e
s
t
l
ga
t
i
onsi
nt
o he
pa
t
o
bi
l
i
a
r
yt
r
a
ns
por
t(
t
r
a
ns
po
r
to
f
luor
f
o
pho
r
e
sf
r
o
mbl
oodt
obi
l
e
)
.
Conf
oc
a
lmi
c
r
os
c
o
pya
l
s
oof
f
e
r
e
dt
hea
dva
nt
a
geofa
c
qul
S
l
t
1
0
nO
f
c
onf
oc
a
ls
t
a
c
kso
fu
pl
OOいm i
nde
pt
h,a
tpl
a
ne
s
o
fs
e
c
t
i
onf
r
om 0.
5ト
I
mt
O2Pm.Fur
t
he
r
,i
ndi
vi
dua
lc
onf
oc
a
ls
t
a
c
ksc
oul
dbec
o
upl
e
d,a
l
l
o
wl
ngf
or
ina
f
li
nvi
voc
onf
oc
a
li
ma
ges
t
a
c
kso
fup200ドm
i
nde
pt
h(
t
hema
xi
ma
lde
pt
h,wef
ound,a
twhi
c
h
hi
ghqua
l
i
t
yi
nvi
voi
ma
gi
ngc
oul
dbepe
r
f
わr
me
d)
wi
t
ht
hes
ys
t
e
mus
e
d.
I
ns
umma
r
y
,whi
l
ewi
de
丘e
l
dwa
ss
uf
f
ic
i
e
ntf
or
qua
l
i
t
a
t
i
v
es
t
udy/
i
ma
gl
ngO
fhe
pa
t
obi
l
i
a
r
ys
t
r
uc
t
ur
e
,f
unc
t
i
ona
ndt
r
a
ns
po
r
t
,a
c
c
ur
a
t
equa
nt
i
t
a
t
i
v
e
s
t
udy/
i
ma
gl
ngr
e
qui
r
e
dt
he丘ne
rs
pa
t
i
a
lr
e
s
ol
ut
i
on
pr
o
vi
de
dbyLSCM.Co
nf
bc
a
lmi
c
r
os
c
opype
r
mi
t
t
e
dhi
ghr
es
ol
ut
i
oni
nvi
voi
ma
gl
ngO
fi
ndi
vi
dua
l
c
e
l
l
s
,a
nds
u
bc
e
l
l
ul
a
ror
ga
ne
l
l
e
s
,a
nde
na
bl
e
d3
di
me
ns
i
ona
lr
e
c
ons
t
r
uc
t
i
ons(
3
D)o
ft
hehe
pa
t
obi
l
i
a
r
ys
ys
t
e
m vi
aa
c
q
ul
S
l
t
1
0nOfi
nvi
v
oc
onf
oI
c
a
li
ma
gi
ngs
t
a
c
ks(
de
s
c
r
i
be
di
nd
e
t
a
i
lbe
l
o
w)
.
Exa
mpl
esi
l
l
us
t
r
a
t
l
ng t
he di
f
f
e
r
e
nc
esbe
t
we
e
n
wi
de
ie
f
l
da
ndc
onf
oc
a
lmi
c
r
os
c
o
pyc
a
nbes
e
e
n
t
hr
oughou
tt
hef
indi
ngspr
e
s
e
nt
e
dhe
r
e
.
一
Fl
uo
r
e
s
c
e
ntpr
obe
sand e
ndo
ge
nousfl
uo
r
o･
pho
r
e
s
I
mpor
t
a
nt
l
y,f
l
uor
e
s
c
e
nc
eba
s
e
d mi
c
r
os
c
opy
/
pr
o
v
e
dhi
ghl
yva
l
ua
bl
et
oi
nvi
voi
n
v
e
s
t
l
ga
t
i
ons
.
Theus
eo
ff
luor
e
s
c
e
ntpr
obe
si
nl
i
vl
ngme
da
ka
gr
eat
l
y enhanced oura
bi
l
i
t
yt
oi
nves
t
l
ga
t
e
he
pa
t
obi
l
i
a
r
ys
t
r
uc
t
ur
e/
f
unc
t
i
on a
nd x
e
nobi
ot
i
c
r
e
s
pons
ei
nvi
vo.Whi
l
enuo
r
e
s
c
e
ntpr
o
be
sha
v
e
be
e
nwi
de
l
ye
mpl
o
ye
di
nvi
t
r
o(
e.
g.c
e
l
lc
ul
t
ur
e
ba
s
e
di
nv
e
s
t
i
ga
t
i
ons
)
,f
e
wc
omme
r
c
i
a
l
l
ya
va
i
l
a
bl
e
luor
f
ophor
e
swe
r
e(
a
tt
het
i
met
hes
t
udi
e
swe
r
e
unde
r
t
a
ke
n
)c
ha
r
a
c
t
e
r
i
z
e
df
o
ri
nvi
v
ous
ei
nf
is
h.
He
nc
e
,al
a
r
gepa
r
to
fo
urwor
kwa
st
hee
xpl
o
r
a
t
i
ono
f且uo
r
o
pho
r
e
st
ha
tc
o
ul
dbee
mpl
o
ye
df
わri
n
vi
v
oi
n
v
e
s
t
i
ga
t
i
on i
n me
da
ka (
bi
oc
o
mpa
t
i
bi
l
i
t
y,
e
f
ic
f
a
c
y
)
.43 f
luor
es
c
e
n
tpr
o
be
swe
r
es
c
r
e
e
ne
d,
oft
hes
e
,28we
r
ef
oundt
obeus
e
f
ulpr
obe
sf
o
r
e
l
uc
i
da
t
i
onofbi
ol
ogi
c
a
ls
t
r
uc
t
ur
ea
ndf
unc
t
i
on.
Fl
uor
opho
r
e
ss
e
l
e
c
t
e
df
orbi
oc
ompa
t
i
bi
l
i
t
ya
nd
ut
i
l
i
t
yl
na
na
l
ys
i
so
fhe
pa
t
o
bi
l
i
a
r
y mor
phol
ogy
a
ndt
r
a
ns
po
r
ta
r
egl
V
e
ni
nTa
bl
e1
.Pr
o
be
swe
r
e
a
l
s
os
e
l
e
c
t
e
dont
he
i
ra
bi
l
i
t
yt
obea
dmi
ni
s
t
e
r
e
d
vi
aa
que
ousba
t
h,a
ndt
opr
o
vi
def
ore
va
l
ua
t
i
ono
f
i
nvi
v
ot
r
a
ns
por
tdyna
mi
c
s
/
ki
ne
t
i
c
s
.Tha
tapr
o
be
woul
de
xhi
bi
tu
pt
a
ke
,t
r
a
ns
po
r
ta
nddi
s
t
r
i
but
i
on
vi
aa
que
ousba
t
h wa
sapr
1
0r
l
t
yf
o
rs
e
l
e
c
t
i
on.
Ot
he
ropt
l
O
nSf
o
rf
luo
r
ophor
ea
dmi
ni
s
t
r
a
t
i
onwe
r
e
vi
ai
nt
r
a
pe
r
i
t
one
a
lo
ri
nt
r
a
ve
no
usi
n
j
e
c
t
i
on(
I
P,
Ⅰ
Ⅴ)
.Be
c
a
us
ema
n
ys
t
udi
e
swe
r
ec
a
r
r
i
e
do
utd
ur
l
ngde
v
e
l
o
pme
nt
a
lpha
s
e
s
,t
hi
swoul
de
nt
a
i
lI
P,
I
V,Oryol
ks
a
cI
n
j
e
c
t
i
o
ni
ne
mbr
y
osa
ndl
a
r
va
e
,
r
e
qul
r
l
ngmi
c
r
ol
n
J
e
C
t
i
o
nt
e
c
hni
que
s
;ar
o
ut
eof
a
dmi
ni
s
t
r
a
t
i
o
nt
ha
twoul
dpr
o
v
et
i
mec
ons
uml
ng,
Woul
ds
i
gni
丘C
a
nt
l
ye
xt
e
ndt
het
i
mer
e
qui
r
e
df
わr
i
nvi
voi
nv
e
s
t
l
ga
t
i
ons
,a
ndt
ha
ti
ns
omei
ns
t
a
nc
e
s
ma
ypr
o
veha
r
mf
ult
ome
da
kaunde
rs
t
udy(
e
.
蛋.
e
mbr
yos
,l
a
r
va
e
)
.I
Pi
n
j
e
c
t
i
onsc
a
na
l
s
obei
nc
ons
i
s
t
e
nti
nde
l
i
ve
r
yo
ft
hea
ge
nti
nt
r
od
uc
e
d(
e
.
g.
1
n
J
e
C
t
i
onsma
y oc
c
urwi
t
hi
nt
hegutl
ume
n,o
r
pe
r
i
t
one
a
lc
a
vl
t
y,t
husa
l
t
e
r
l
ngupt
a
kea
ndt
r
a
ns
po
r
tki
ne
t
i
c
soff
luo
r
opho
r
e
,t
o
xi
c
a
nti
nt
r
oduc
e
d)
.
Fort
he
s
er
e
a
s
onsa
que
o
usba
t
he
xpos
ur
e
swe
r
e
e
mpl
o
ye
da
st
her
out
eofa
dmi
ni
s
t
r
a
t
i
onf
o
ra
l
l
luo
f
r
opho
r
e
sa
ndt
o
xi
c
a
n
t
sde
s
c
r
i
be
dhe
r
e
i
n.
A de
s
c
r
l
pt
l
VeO
Ve
r
Vi
e
wo
fa
l
lpr
o
be
si
snot
pos
s
i
bl
ei
n oner
e
por
t
.He
nc
e
,f
orc
l
a
r
i
t
y
,t
he
pr
ope
r
t
i
e
so
fe
a
c
hpr
obea
r
es
umma
r
i
z
e
di
nTa
bl
e
1a
ndt
he
i
re
f
丘c
a
c
yc
a
nbede
r
i
v
e
df
r
o
mt
heBnd1
ngSpr
es
e
nt
e
di
nf
bl
l
o
wl
ng S
e
c
t
i
ons
.Ho
we
ve
r
,
adi
s
c
us
s
i
o
nofs
e
l
e
c
t
e
d月
.
uor
e
s
c
e
ntpr
o
be
smos
t
f
r
e
q
ue
nt
l
ye
mpl
o
ye
df
o
re
l
uc
i
da
t
i
on o
fc
e
l
l
/
t
i
s
I
s
ue/
Or
ga
ns
t
r
uc
t
ur
e and f
unc
t
i
on i
sme
r
i
t
ed.
Me
t
a
bol
i
cs
ubs
t
r
a
t
e
s7
be
nz
yl
o
xyr
e
s
o
r
uf
in(
7
1
BR,
CYP3
As
u
bs
t
r
a
t
e
)a
nd7
e
t
ho
xyr
e
s
or
u丘n (
7
l
ER,
CYPI
As
u
bs
t
r
a
t
e
)we
r
ef
o
undt
obeva
l
ua
bl
ei
n
vi
v
opr
obe
sf
わri
nv
e
s
t
l
ga
t
l
ngCYP3
Aa
ndCYPI
A
4
9
I
nvi
voi
ma
gi
ngi
r
aSTHme
da
ka(
Or
yz
i
asl
at
i
pes)
F呈
gur
e2.I
nvi
v
oi
ma
gl
ngO
fhe
pa
t
obi
l
i
a
r
yme
t
a
bol
i
s
m,bi
i
et
r
a
ns
po
r
t
,a
ndpa
r
e
nc
hyma
la
r
c
hi
t
e
c
t
ur
e:wi
de
f
i
e
l
df
l
uo
r
es
c
e
nc
e
mi
c
r
os
c
opy.∫
l
l
us
t
r
a
t
e
di
sut
i
l
i
z
a
t
i
ono
ft
i
s
s
uea
ut
of
l
uor
e
s
c
e
nc
ea
ndt
hei
nvi
voa
ppl
i
c
a
t
i
onof7
0
be
nz
yl
o
xyr
es
or
uf
i
n(
7BR)f
or
de
t
e
c
t
i
onofCYP3
A me
t
a
bol
i
ca
c
t
i
vi
t
y.De
c
hor
i
or
l
a
t
e
de
mbr
yose
xpos
e
d(
a
que
ousba
t
h)t
ot
heCYP3
As
t
l
bs
t
r
a
t
e7BRe
xhi
bi
t
e
d
7be
r
l
Z
yl
o
xyr
es
(
)
r
uf
i
n0de
al
kyl
a
t
i
on(
BROD)a
c
t
i
vi
t
y,whi
c
hr
e
s
t
l
l
t
e
di
nt
heg
e
ne
r
a
t
i
onoft
hef
l
uor
e
s
c
e
ntme
t
a
boi
i
t
er
es
or
l
ユ
f
i
n
(
r
e
d)
･
Tr
a
ns
por
tOft
heme
t
a
bol
i
t
et
hr
ought
hei
nt
r
a
he
pa
t
i
cbi
l
i
a
r
ypa
s
s
a
ge
wa
ys(
TL)oft
hee
mbr
yoni
cl
i
v
e
r(
L)
,a
ndc
onc
e
nt
r
a
t
i
on
i
nt
hega
i
tbl
a
dde
r(
GB)
,wa
si
ma
ge
di
nvi
voi
nl
i
vi
ngde
c
hor
i
ona
t
e
de
mbr
yos
.
He
nc
e,ut
i
l
i
z
i
nga
ut
o
f
i
uor
es
c
e
nc
epr
ope
r
t
i
e
soft
i
s
s
ue
si
nt
a
nde
m wi
t
hf
l
uor
e
s
c
e
ntpr
obesa
i
de
di
nvi
voe
l
uc
i
da
t
i
onofbi
ol
ogi
c
a
ls
t
r
uc
t
ur
ea
ndf
unc
t
i
on.Ai
li
nvi
v
oi
ma
g
esf
r
om a
n
i
ndi
vi
dua
lST田me
da
ka,6dpf
,(
A)怒r
i
ght
f
i
e
l
dmi
c
r
os
c
opy,i
l
l
us
t
r
a
t
i
ngl
i
v
e
r(
L)a
ndga
l
lbl
a
dde
r(
GB)
.(
Bl
)Sa
mea
ni
ma
la
si
n
f
r
a
meA,i
ma
ge
dwi
t
hw
i de
f
i
e
l
df
l
uor
es
c
e
nc
emi
c
r
os
c
opy(
DAPⅠ
/
UV)i
l
l
us
t
r
a
t
i
n
gt
i
s
s
uea
ut
of
l
uor
e
s
c
e
nc
e.(
B2)Sa
mea
ni
ma
la
s
f
r
a
meA:Wi
de
f
i
e
l
df
l
uor
es
c
e
nc
e(
TRrr
C)i
ma
gec
a
pt
ur
eofr
e
s
o
r
t
l
f
i
n(
i
ndi
c
a
t
i
veofCYP3
A me
t
a
bo一
i
ca
c
t
i
vi
t
y
)f
l
uo
r
es
c
e
nc
ei
n
l
Q
a
he
pa
t
i
t
hei
nt
r
a
he
pa
t
i
cbi
l
i
a
r
ypa
s
s
a
ge
wa
ysoft
hee
mbr
yoni
cl
i
v
e
r(
L)
.Re
s
or
uf
i
nf
l
uor
e
s
c
e
nc
ei
sdi
s
t
i
nc
ta
ndl
i
it
m
e
dt
ot
hei
nt
bi
l
i
a
r
ypa
s
s
a
ge
wa
ysa
ndga
ュ
lbl
a
dder
.(
B3)Col
orc
ompos
i
t
eofBl
&B2,DAPⅠ/
TRI
TCi
ma
gec
a
pt
ur
e
s
,
i
l
l
us
t
r
a
t
i
ngr
e
s
or
uf
i
nf
l
uo
r
e
s
c
e
nc
e(
r
e
d)i
nt
hel
i
v
e
ra
ndga
l
lbl
a
dde
r
.(
Ci& C2)言
nv
ivoi
ma
gi
ngofhe
pa
t
i
cpa
r
e
nc
hymaヮ
6dpf
,
r
e
ve
a
l
i
nghe
pa
t
i
ct
ubul
ephenot
ype･
6t
o8he
pa
t
oc
yt
eswe
r
eo
bs
e
r
v
e
d(
i
nt
r
a
ns
ve
r
s
es
e
c
t
i
on)t
of
or
mat
t
l
bul
el
ume
n(
TL)a
tt
he
i
ra
Pi
c
a
ime
mbr
a
ne
s
.
C2s
ho
ws
c
onc
e
nt
r
a
t
i
v
et
r
a
ns
por
tofr
es
or
uf
i
nf
r
om he
pa
t
oc
e
i
l
ul
a
rc
yt
os
oit
ot
ubul
el
ume
n(
TL)
,i
ndi
c
a
t
e
dbyi
nc
r
e
a
s
e
df
l
uor
es
c
e
nc
ei
nt
he
SI
T
)
.He
pa
t
oc
yt
enuc
l
e
i(
HN)
.
t
u
bul
el
ume
n.
Re
dbl
oodc
e
i
i
swe
r
eobs
e
r
v
e
da
c
t
i
v
e
l
yc
i
r
c
ul
a
t
i
ngt
hr
oughhe
pa
t
i
cs
i
nus
oi
ds(
c
-
e
x
pr
e
s
s
i
o
ni
no
r
ga
nsa
n
dt
i
s
s
ue
s
,a
ndf
o
re
i
uc
i
ぬt
1
ngt
hei
n
t
r
aa
nde
xt
r
a
he
pa
t
i
cbi
呈
i
a
r
ys
ys
t
e
m,a
s
we
Ha
sgu
Hume
n.
Bo
t
hpr
o
be
s
,no
n鮎o
r
e
s
c
e
nti
n
t
he
i
rna
t
i
v
es
t
a
t
e
,a
r
eme
t
a
bo
i
i
c
a
l
l
ya
c
t
i
va
t
e
d(
de
a
l
ky
i
a
t
i
o
no
f7
BR,
de
e
t
h
y
i
a
t
i
ono
f7
7
ER)b
yt
he
i
r
r
e
s
pe
c
t
i
v
eGYPe
nz
yme
st
ot
hea
ni
oni
c鮎o
r
e
s
c
e
n
tme
t
a
b0
号
i
t
er
e
s
o
r
u畠n.Ea
c
hha
v
ebe
e
nwi
d
e
l
y
e
mpl
o
y
e
di
nvi
t
r
oi
nmi
c
T
OS
O
mea
n
dc
e
Hc
t
鵡ur
e
tal
,2
000;Sc
hl
e
nke
tal
,
ba
s
e
da
s
s
a
ys(
Mi
l
l
e
re
1
997;a
ndo
t
he
r
s
)
.7ERha
sa
l
s
obe
e
ne
mpl
o
y
e
d
f
o
ri
nvi
v
oCYPi
Aa
c
t
i
vi
t
yi
nFundul
ushe
t
e
r
oc
l
i
t
usa
ndme
da
ka(
Wi
ne
t
te
tal
.1
995;Me
y
e
re
tal
.
2
002;Na
c
c
ie
tal
.2002;Ka
s
hi
wa
dae
tai
.2007)
.
監Xa
mpl
e
so
fi
nvi
v
oa
ppl
i
c
a
t
i
o
nso
f7
BR,e
呈
uc
i
肋
-
da
t
i
ngl
nVi
v
ome
t
a
bol
i
s
m,t
r
a
ns
po
r
t
,a
ndhe
pa
t
i
c
t
u
bui
ephe
n
ot
ypea
r
egi
v
e
ni
nFi
gur
e2.
Sphi
ngoi
i
pi
ds
,a s
t
r
uc
t
ur
a
l
l
y di
v
e
r
s
ec
l
as
s
o
fc
o
mpo
undsc
o
mpos
e
do
fapo
l
a
rhe
a
dg
r
ou
p
,
a
ndt
wono
n
po
i
a
rも
a
i
l
s(
a
ki
nt
ophos
pho
i
i
pi
ds
)
a
圭
一
ena
t
ur
a
lyoc
c
umn
gc
o
mpo
un
dsf
o
undi
na
l
l
pl
a
nt
sa
nda
ni
ma
l
s
.Ass
uc
h,洩e
r
ei
spot
e
nt
i
a
lf
o
r
貝uo
T
e
S
C
e
nty
壷be
l
e
ds
phi
ng
o
i
i
pi
dst
obei
n
c
o
r
po
r
a
t
e
di
n
t
ol
i
v
ec
e
l
l
s
.
Two鮎o
r
e
s
c
e
nts
phi
n
gos
i
ne
s
,
Bodi
p
yC5HPCa
ndBodi
p
yFLC5Ce
r
a
mi
de
,
we
r
ee
x
pl
o
r
e
d.
4
3
Bodi
p
yC5HPC,a鮎o
r
e
s
c
e
nty
1
a
be
l
e
d phos
phoc
hoi
i
ne
,pr
o
v
e
d bi
oc
ompa
t
i
bl
e
a
nde
xhi
bi
t
e
di
nvi
v
opr
o
pe
r
t
i
e
st
ha
twe
r
eo
pt
l
ma
i
f
o
re
i
uc
皇
da
t
i
nge
pi
t
he
l
i
a
,e
ndo
t
he
l
i
a
,a
n
dhe
pa
t
ol
l
-
a
i
-
A.
C.
Ha
r
dma
ne
tai
5
0
Fi
gur
e3.Di
f
f
e
r
e
nt
i
a
lupt
a
kea
ndt
r
a
ns
por
toff
l
uor
e
s
c
e
ntpr
obes良Bodi
pyC5HPC,Bodi
pyFL C5a
ndBodi
py505/
51
5:
wi
de
f
i
e
l
da
ndc
onf
oc
a
lf
l
uor
e
s
e
,
e
nc
en
?
i
c
r
os
c
opy･(
AC甘 Bodi
pyC5Ce
r
a
mi
deupt
a
kea
nddi
s
t
r
i
but
i
on:(
A & B)Thec
e
r
a
mi
de
f
l
uor
ophor
e(
gr
e
e
n)e
xhi
bi
t
e
dpr
ope
r
t
i
e
sC
OnS
I
S
t
e
ntWi
t
hpa
s
s
i
v
edi
f
f
us
i
ona
c
r
os
sc
e
l
lme
mbr
a
ne
s
,Wi
t
hdi
s
t
i
nc
tupt
a
keo
ve
rt
he
gi
l
i(
GL)a
ndt
r
a
ns
por
tt
hr
ought
hec
a
r
di
o
va
s
c
ui
a
rs
ys
t
e
m.Thef
l
uor
ophor
ewa
snoto
bs
e
r
ve
dt
oc
r
os
st
hebl
oodbr
a
i
nba
r
r
i
e
r
,
(
C)
,t
hot
i
ghi
tpe
r
s
i
s
t
e
di
nva
s
c
ul
a
t
ur
e,w
it
har
es
i
de
nc
et
i
meofhour
st
oda
ys(
de
pe
ndi
ngone
xpos
ur
er
e
gi
me
)
｡(
D)I
nc
ont
r
a
s
t
βBodi
pyC5phos
phoc
hol
i
ne(
HPC)wa
sobs
e
r
ve
dt
ol
a
be
lne
ur
onsi
nt
hehi
ndbr
a
i
nofST王me
da
ka.(
D)STHme
da
ka,1
8dpf
,
c
onf
oc
a
if
i
uor
es
c
e
nc
e聖 r
os
c
opy(
f
r
om 3
D pr
o
j
e
c
t
i
on)o移 Bodi
pyC5phos
phoc
h｡i
nel
a
be
l
i
ngne
ur
a
lbundl
e
si
nt
hec
or
pus
c
e
r
e
be
l
l
i
,c
r
i
s
t
ac
e
r
e
be
l
i
a
r
l
Sa
ndme
duua,90mi
nut
espos
tf
l
uor
ophor
ee
xpos
ur
e(
a
que
ousba
t
h)
,Cor
pusc
e
r
e
be
i
l
i
,c
r
i
s
t
ac
e
r
e
be
I
a
r
i
sa
ndme
dui
l
aa
r
er
e
gi
ono
fi
nt
e
r
es
ti
ndi
c
a
t
e
dbygr
a
yT
e
C
t
a
ngi
ei
nf
r
a
meC,(
El皮E2)Wi
de
f
i
e
l
df
l
uor
es
c
e
nc
emi
c
r
os
c
o
pyof
l
lbl
a
dde
r(
GB)t
hr
ought
hec
ys
t
i
cduc
t(
CD)a
ndc
ommonbi
l
educ
t(
CAD)
Bodi
py505/
51
5s
e
c
r
e
t
i
on(
r
e
df
l
uor
e
s
c
e
nc
e
)f
r
om ga
i
nt
ot
hegt
]
tl
ul
T
l
e
n.Muc
os
oまf
oi
dsoft
hegut(
MF)e
l
uc
i
da
t
e
dwi
t
hβBodi
pyC5Ce
r
a
mi
de(
gr
e
e
nf
l
uor
e
s
c
e
nc
e;c
oa
dmi
ni
s
t
e
r
e
d
,Li
v
e
r(
i)
,Pi
ne
a
lGl
a
nd(
P)
,Opt
i
cre
c
t
um
wi
t
hBodi
py505/
51
5)
.Ve
nt
r
a
la
o
r
t
a(
Va
)
,He
a
r
tVe
nt
r
i
c
l
e(
Hv
)
,He
a
r
tAt
r
i
um (
Ha
)
(
Ot
)
,
Ot
i
cVes
i
c
l
e(
Ov)
,
Va
s
c
ul
a
t
t
i
r
e(
V)
.
ト
bi
l
i
a
r
yt
r
a
ns
por
t
.L
3
Bodi
py C5-HPC l
a
be
l
e
dt
he
1
1
1
L
l
j
ol
.
i
t
yot
∴l
t
lc
l
l
i
t
h
ビI
i
こ
It
1
1
1
0ughoutt
l
l
ehodyor
STI
Ime
da
ka.
Whi
l
ei
nvi
vodyna
mi
c
s
j
ki
ne
t
i
c
sf
or
Bodi
py
鮎or
e
s
c
e
n班y壷be
i
e
ds
phi
ngos
i
ne
sl
i
ke (
1
5HP(
1L
l
n
L
1BoL
I
i
l
l
)
IFL C5cc
1
■
こ
1
1
1
1
i
L
I
L
ll
l
l
で1
1
0t
c
ur
r
e
n班yknown,a
ndl
i
t
t
l
ei
nf
o
r
ma
t
i
one
xi
s
t
son
L
<
.i
t
l､
.
i
､
'
いい1
1
柑r
､
'
ニ
ト
t
hビ
i
t
'
i
1
1､
.
i
､
'
01
1
1
亡
t
L
I
hot
i
叩l
叩L
l
r
t
i
e
L
i
onss
ugges
tt
he鮎or
e
s
c
e
nも
且
yl
a
be
l
e
d 崩Bodi
py
C5HPCbe
ha
v
esa
sa
ne
ndoge
nouss
phi
ngol
i
pi
d
l
l
ゝI
.
i
BoL
l
i
l
)
.C5HPC Wこ
l
トr
e
L
l
di
l
)
'i
l
l
nr
POr
i
l
t
L
l
L
l
.
･
i
l
.
. ＼l
･
h.
.
:
L
卜
.,
.
:
;二､
:J
t
･
:
imlJ
こ
…
L
:
L
､
･
､い∴､ :
;
､
:
I
I
ouse
xpos
ur
ec
ondi
t
i
ons
.Fori
ns
t
a
nc
e
,良Bodi
py
C5t
lP(
'＼
＼
.
こ
1
11
1
01Onl
yl
l
l
k
m L
I
Ph
y＼
■
i
l
1
t
l
こ
l
l
l
yl
l
l
l
叩i
t
hL
t
l
i
こ
1
.hutohト
ビ
1
●
､
'
L
I
L
ll
o…1
ゝ
ゝl
hL
ll
ヽ
l
ooJt
l
l
'
l
l
i
n
hこ
I
n主
e
l
.l
l
l
hel
i
l
l
gl
l
ビ
L
1
1
i
l
lhL
l
l
l
JI
L
l
ゝi
l
一t
l
l
L
l1
1
1
L
l
dul
l
L
10r
･
.
い､
ト
ー
;
､日日 .
J h い.トー
一
･
工一
己
･
､∼ .
r
:
!
り･
･
､.･
.･
…
･
l
l
l
L
lt
t
'
l
川S
t
ohel
こ
I
k
e
nu1
-i
l
L
l
r
O＼
Hei
t
l叩i
l
h
L
l
l
i
u .i
a
,
lll
por
t
e
dも
hr
ought
hec
a
r
di
o
va
s
c
も
最a
rs
ys
t
e
mt
oも
he
l
i
ve
ra
ndg此 Asas
ma
l
且o
r
ga
ni
c￡
a
t
i
ont
hei
n
vi
v
oki
ne
t
i
c
soft
hi
spr
o
bes
ugge
s
t
e
dc
onc
e
nt
r
a
t
i
v
et
r
a
ns
por
tof洩e負uor
o
pho
r
ef
r
om bl
oodt
o
bi
呈
e(
he
pa
t
i
c
)
,wi
t
hf
a
i
r
l
yr
a
pi
d(
1
5mi
nut
espos
t
ハ1
1
0nl
l
'
L
l
)i
l
L
I
L
l
umul
i
l
t
i
川10rl
h
亡日日
Ot
'
Ot
l
h
ot
L
li
nt
l
i
l
e.
Whi
l
ee
mpl
r
i
C
aia
nd pT
e
且
i
mi
na
r
yq
ua
nt
i
t
a
t
i
ve
s
t
udi
e
ss
ugge
s
tc
onc
e
醸a
t
i
v
ev
e
c
臨i
a
はa
ns
por
to
f
t
hi
Hl
m1
1
●
01
7
h川で.1
1
ur
1
1
1
ビ
I
'
仙l
L
l
y＼
､
'
i
t
lhH1
亡
L
I
L
l
ト
ト
L
l
r
)
'
t
O
L
l
l
u
L
T
i
dこ
I
t
et
t
l
Hl
l
L
,
L
l
hi
1
1
1
i
川1
日rL
1
1
1
1
1
叩川I
.
l
l
lL
l
川1
1
T
.
1
1
←
Lt
hL
li
l
='
i
､
.
いki
1
1
L
l
l
i
L
I
Hl
rBoL
I
i
p
)
.
C5c
e
r
a
m皇
dea
ppe
a
r
e
dmor
ec
ons
i
s
t
e
ntwi
t
hpa
s
L
<
i
､
.
L
lL
l
i
t
'
f
心i
川11
1
L
l
r
Oト
".
L
l
l
l1
1
1
L
l
l
l
l
h1
1
1
1
1
e
l
.し
1
pl
l
l
L
eL
1
1
1
d
di
s
t
r
i
but
i
ono
f蝕e鮎oT
OPho
r
ewa
sobs
e
r
v
e
dt
o
hL
lnt
h批I
nt
i
L
l
l
l
)
･
.t
<
1
…'
e
l
-(
1
5-30 1
1
1
i
nul
L
l
ドS
I
owe
r
)
･
い l
∴ト･
'
.了､･･､
i
!
'
' 一
･
･
∴lhこ ､
i
･'
i
･
l
､
･
･
･､
.
･
･
･
‥
･
t
l
h
o申 1
いL
l
hl
l
i
l
l
L
l(
HPClゝ
m､
.
L
t
t
l
t
l
l
k
どこ
川dL
I
OI
L
l
州t
r
F
L
-
こ1 -
5i
Ⅰ
nv
i
v
oi
ma
g
i
n
gi
nSTHme
da
ka(
Or
yz
i
asl
at
i
pe
s
)
Fi
g抜T
e4.i
nv
i
v
oi
ma
g
l
n
gO
fn
u
c
i
e
a
Tl
a
be
l
i
n
g.Ev
i
d
e
n
c
ef
o
ri
nv
i
v
ome
t
a
bo
l
i
s
ma
n
dn
u
c
l
e
a
ri
a
be
旦
i
n
go
fa
ne
x
pe
r
j
me
n
t
a
ia
n
t
i
ma
l
a
r
i
a
ip
r
od
r
u
g
,DB28
9
,d
e
mo
n
s
t
r
a
t
e
sn
o
ni
n
v
a
s
i
v
ei
nv
i
v
oi
ma
g
l
n
gO
fn
u
c
一
e
a
rb
i
r
l
d
i
n
go
fe
x
o
g
e
n
o
usc
o
mpo
u
n
ds
.Th
ea
n
t
i
t
r
y
pa
n
os
o
ma
id
i
a
mi
d
i
n
ewa
sus
e
df
o
rp
r
e
l
i
mi
n
a
r
yl
n
V
e
S
t
i
g
a
t
i
o
ni
n
t
ot
h
es
t
u
d
yo
fa
bs
o
r
p
t
i
o
n,d
i
s
t
r
i
b
u
t
i
o
n,me
t
a
bo
l
i
s
ma
n
d
e
x
c
r
e
t
i
o
n(
A王
)
ME)
,
a
swe
l
la
st
o
x
i
c
i
t
y
,
i
nST田me
da
ka
.
Pr
e
l
i
mi
na
r
yr
e
s
u
l
t
swi
t
ht
woDBc
o
mpo
u
n
ds(
DB2
8
9a
n
dDB7
5)s
u
g
g
e
s
t
me
t
a
bo
l
i
s
mo
ft
h
epa
r
e
n
tc
o
mpo
u
n
dDB28
9a
n
dn
u
c
l
e
a
rb
i
n
d
i
n
go
ft
h
ea
c
t
i
v
ef
l
u
o
r
e
s
c
e
n
tme
t
a
bo
l
i
t
e(
DB7
5
)t
oo
l
f
a
c
t
o
r
yt
i
s
s
u
e
s
a
n
dh
e
pa
t
o
c
yt
e
swi
t
hi
n1
5mi
n
t
i
t
e
SO
fa
q
u
e
o
use
x
po
s
ur
e
.
ADMEa
s
s
e
s
s
me
n
t
ss
h
o
we
dt
e
mp
o
r
a
lv
a
r
i
a
t
i
o
ni
nn
u
c
l
e
a
rb
i
n
di
n
g
,Wi
t
h
i)
,
t
og
u
t(
Gt
)a
n
dp
a
n
c
r
e
a
s(
P)
,
a
n
de
v
e
n
t
ua
l
l
ys
y
s
t
e
mi
ct
i
s
s
u
e
s
,
o
v
e
ra2
4hrp
e
r
i
o
d｡
i
nr
o
d
e
n
t
d
i
s
t
r
i
b
u
t
i
o
np
r
o
c
e
e
d
i
n
gf
r
o
ml
i
v
e
r(
a
n
dp
r
i
ma
t
emod
e
l
sDB28
9i
sme
t
a
bo
l
i
z
e
d(
a
c
t
i
v
a
t
e
d
)t
oDB7
5v
i
aac
o
mp
l
e
xp
a
t
h
wa
yi
n
v
o
l
v
i
n
gCYPI
Al
,l
A2,S
A斗,
4
F2,
4
FB,
2
1
2a
n
db
5
,
p
r
i
o
rt
on
u
c
l
e
a
rb
i
n
d
i
n
g.
He
n
c
e
,
i
ti
ss
u
g
g
e
s
t
e
dt
ha
tas
i
mi
l
a
ro
rh
o
mo
i
o
g
o
usme
t
a
bo
l
i
cpa
t
h
wa
y
se
裏S
ti
nme
da
ka
.
(
A)
L)a
t4
5mi
n
u
t
e
s
.(
A)STHme
da
ka
,2
4d
p
f
:4
5mi
n
u
t
e
s
S
TI
Ⅰme
d
a
ka
,2
0d
p
f
:
Wi
d
e
f
i
e
i
df
l
u
o
r
e
s
c
e
n
c
emi
c
r
o
s
c
o
p
y
,c
o
n
t
r
o
日量
v
e
r(
p
os
te
x
po
s
ur
et
oDB2
8
9f
i
u
o
r
e
s
c
e
r
l
C
eO
ft
h
ea
c
t
i
v
eme
t
a
bo
l
i
t
eDB7
5(
c
o
nf
i
r
me
dwi
t
ha
n
a
l
y
t
i
c
a
ic
h
e
mi
s
t
r
y
)wa
sd
e
t
e
c
t
e
di
nt
he
l
i
v
e
ra
n
dg
u
t(
Gt
)
,(
C)STI
Ime
da
ka
,
2
6d
p
f
:
2
4h
o
u
r
sp
os
te
x
pos
u
r
ef
l
u
o
r
e
s
c
e
n
c
ei
nt
heg
u
tl
ume
nwa
sma
r
k
e
d
l
yi
n
c
r
e
a
s
e
d.
(
D&
E)S
T田me
d
a
ka
,
2
6d
p
f
:
Hi
g
he
rma
g
ni
f
i
c
a
t
i
o
ni
ma
g
es
h
o
in
w
gDNAb
i
n
di
n
gi
nh
e
p
a
t
o
c
y
t
e
s7
2h
r
sp
os
te
x
po
s
l
l
r
e
.
Re
dc
e
i
i
sc
a
nb
e
F)S
TI
三me
da
ka
,
3
4d
p
f
:
S
h
o
wni
si
nv
i
v
oi
ma
g
eo
fme
d
a
kab
r
a
i
r
35h
r
spo
s
tDB2
8
9
s
e
e
ni
nt
h
el
ume
no
ft
h
eh
e
p
a
t
i
cv
e
i
r
l(
Hv
/
r
)
.(
)
,
Co
r
p
usc
e
r
e
b
e
i
l
i(
Ce
)
.
e
x
p
os
u
r
e
Nor
i
u
C
i
e
a
Tb
i
n
d
i
n
gwa
so
bs
e
r
v
e
di
nt
h
eb
r
a
i
nu
pt
o3
0da
yso
fe
x
po
s
u
r
e
,
Op
t
i
ct
e
c
t
um(
Ot
-
一
i
on i
ni
nt
r
ahepat
i
cbi
i
i
ar
y pas
s
agewa
ysaseady
as1
5mi
nut
espos
tadmi
ni
s
t
r
at
i
on(
aqueousbat
h)
,
1
1
1
et
l
u川･
eS
L
l
el
l
tCビl
･
こ
1
1
1
1
i
L
l
e wl
l
ド1
1
0tOhs
Cl
l
Ved I
0
accumui
at
e(
peak鮎 or
es
cence)i
nt
hehe
pat
obi
i
i
ar
ys
ys
t
em un鰯 60mi
nut
esaf
t
erdos
i
ng.Li
ke
かBodi
pyHPC,Bodi
pyFL C5cer
ami
dea
ppear
ed
t
obet
akenupacr
os
sgi
l
iep血 el
i
a,andt
r
ans
por
t
edぬT
Oughぬecar
di
ovas
cui
ars
ys
t
em t
ot
hel
i
ver
.CL
l
l
di
o＼
'
l
l
t
<
L
l
ul
L
l
rt
l
'
1
1
n叩Or
tOr
l
川d gutt
Fi
gur
e j)
Bodi
pyFL C5cer
ami
dewasmuchmor
edi
s
t
i
nct
偽an ぬatofBodi
py HPC,wi
t
h mar
ked i
abe呈
i
ng
ol
'L
l
ndot
l
l
el
i
ut
l
lL
l
1
1
し
11̀
L
I
L
lbl
ood L
l
el
l
s
.BoJi
p)
,FL
C5 cer
ami
de,becaus
e ofi
t
sa
ppar
ent
l
ys
l
ower
,
pas
s
i
veupt
ake,and accumu呈
at
i
on i
nt
he cyt
os
oi
ofvi
r
t
t
i
aHyaま
まcei
H ypes
,wasf
oundopt
l
maif
or
i
nves
t
i
gat
i
ng ePi
t
hei
i
aice呈
呈mor
phoi
ogy i
n Vi
vo.
-
Thi
s 鮎 or
ophoT
eS
howed neareven di
s
t
r
i
but
i
on
wi
血 nbl
oodpi
as
ma昌hecyt
os
o呈
ラandi
nt
r
ahepat
i
c
pyFL C5cer
ami
de
bi
呈
epas
s
agewa
ys
.H e ,Bodi
wast
he鮎 or
ophor
eofchoi
cef
orei
uci
daぬ gee且
i
mor
phol
ogy i
n Vi
vo.
,anowi
ng i
magl
ng Ofhepa
t
oceHui
ars
pace,bi
呈
i
ar
ys
pace,and vas
cui
at
ur
e,
s
i
mも
鵡aneous
呈
y.
互
ns
ummar
y,bot
hBodi
pyFLC5Cer
ami
deand
howed di
f
f
er
enも
i
aH T
anS
POr
t
;
A盛odi
py C5-H PC s
HP(
∴L
l
l
l0r
gl
l
1
1
i
L
IL
l
l
l
t
i
on.elhi
h＼
､
'
hel
で Bodi
p,
v i
t
edki
l
l
et
i
L
I
Sanddi
F
l
tl
･
e1
1
t
i
atL
l
i
s
t
r
i
hul
i
ol
lhel
Ween
n c e
-
C
5
I
.C5
bl
oodL
l
t
l
dhi
l
Ct
hこ
I
tml
ggピト
ー
edi
l
L
l
t
i
､
'
亡1
1
.
1
川叩01
°ビr
1
1
nl
i
d亡 eヽhi
t
l
i
t
L
l
dゝ
1
…'
L
l
r叩 t
l
l
ke Wi
t
hL
l
l
le＼
.
et
l
di
s
t
r
i
but
i
on t
hr
ough も
he vas
c血 t
ur
e,hepat
ocel
旭 ar
,andbi
l
es
paces
,cons
i
s
t
entwi
t
hpas
s
i
vedi
f
f
us
i
on oft
he鮎 or
ophor
eacr
os
sceH membr
anes
.
5
2
.
R.
C.
Ha
r
d
ma
netal
Ta
b
l
e2
.En
d
o
g
e
n
o
u
sFl
u
o
r
o
p
h
o
r
e
s
Ex(
nm)
45
0
Em(
nm)
55
0
Py
r
i
di
n
eNu
c
l
e
o
t
i
de
s:n
i
c
o
t
i
n
ami
d
edi
n
u
c
l
e
o
t
i
de(
NAD)
,n
i
c
o
t
i
n
ami
dedi
n
u
c
l
e
t
i
deph
o
s
ph
a
t
e(
NADP)
.
★
Th
er
e
du
c
e
ds
t
a
t
e
sf
l
u
or
e
s
c
e-NADPH,
NADH
336
450
Tr
y
p
t
oph
an
Hy
dr
o
x
y
k
y
n
u
r
eni
n
eg山c
o
s
i
d
e(
3HGK)
Ser
o
t
on
i
n(
5HT)
5HI
AA
29
5
5
20
300
340
435
3
2
9
55
0
3
4
0440/
51
0
3
50
460
500
424/
408
594/
630
340/
500
41
0/
520
330
300
3
45
29
5
36
6
440
31
9
405
4
20
49
0
33
5
430
5
1
4
408
Fl
a
v
op
r
o
t
ei
n
s:
f
l
a
v
j
n
ea
de
n
i
n
edi
nu
c
l
e
o
t
i
d
e(
F
AD)
,
f
l
a
v
i
nmon
onu
c
l
e
o
t
i
de(
FMN)
O -
αn
ap
t
h
oI
Bi
l
i
r
u
bi
n
Pr
o
t
op
or
p
h
y
r
i
n
Col
l
a
genl
El
a
s
t
i
n
L
i
p
o
f
u
s
c
i
n
Vi
t
amj
nA
Vi
t
ami
nE
Th
i
ami
n(
Bl
)
Ri
b
o
H
a
v
i
n(
B2)
Sal
i
c
y
l
i
cAc
i
d
290/
366
Ex
a
mp
l
e
so
fs
o
met
h
ek
n
o
wne
n
d
o
g
e
n
o
u
sml
O
r
O
p
h
o
r
e
sa
n
dt
h
e
i
re
x
c
i
t
a
t
i
o
n
/
e
mi
s
s
i
o
nwa
v
e
l
e
n
g
t
h
sa
r
el
i
s
t
e
d
.
Ove
r
a
l
l
,bot
hpr
obeswe
r
ef
oundt
obee
f
ica
f
c
i
ous
f
ore
l
uc
i
da
t
i
ng bi
ol
ogl
Ca
ls
t
r
uc
t
ur
e/
f
unc
t
i
on i
n
phol
ogi
c
a
lc
ha
nges(
e.
g.
vi
vo,a
nd t
he
r
e
by,mor
c
yt
ot
oxi
c
i
t
y)i
nr
es
pons
et
oxe
nobi
ot
i
ce
xpos
ur
e
(
S
eeFi
gur
es3,6,8a
nd9f
orc
ompa
r
i
s
on)
･
Thehi
ghl
yl
i
pophi
l
i
cBodi
py505/
51
5a
nd493,
l
i
keL
3
l
Bodi
py C5HPC,we
r
ea
l
s
of
ound t
obe
e
xc
e
l
l
e
ntnuor
ophor
esf
ori
nves
t
l
ga
t
l
nghe
pa
t
obi
l
i
a
r
yt
r
a
ns
por
ta
ndbi
l
es
e
c
r
e
t
i
on(
Fi
gur
e3)
IBot
h
pr
obesa
l
l
owe
de
l
uc
i
da
t
i
on oft
he i
nt
r
a
he
pa
t
i
c
bi
l
i
a
r
ypa
s
s
a
ge
wa
ys
,e
xt
r
a
he
pa
t
i
cbi
l
i
a
r
ypas
s
a
gewa
ys
,gutl
ume
n,a
ndi
nt
es
t
i
na
ll
ume
n(
e･
g･muc
os
a
lf
ol
dso
ft
hegut
)
.
Pe
r
ha
pst
hemos
tut
i
l
i
z
e
dpr
obef
ore
l
uc
i
da
t
i
ng
t
hebi
l
i
a
r
ya
r
c
hi
t
e
c
t
ur
ewast
hewi
de
l
ye
mpl
o
ye
d
f
l
uor
ophor
ef
l
uor
es
c
e
i
ni
s
ot
hi
oc
ya
na
t
e(
FI
TC)
･
Thi
ss
ma
l
lor
ga
ni
cc
a
t
i
ons
howe
dr
a
pi
dbr
a
nc
hi
a
l
upt
ake,Wi
t
h mar
ked di
f
f
er
ent
i
aldi
s
t
r
i
but
i
on
be
t
we
e
nbl
ooda
ndbi
l
e.Be
c
a
us
eoft
hedi
f
f
e
r
e
nc
e
i
nc
onc
e
nt
r
a
t
i
onofFI
TC i
nbl
ooda
ndbi
l
eona
t
e
mpor
a
ls
c
a
l
e,t
hi
sa
l
l
owedf
わrhi
ghr
es
ol
ut
i
oni
n
vi
vo i
nve
s
t
l
ga
t
i
on i
nt
obi
l
i
a
r
y mor
phol
ogy,bi
l
e
t
r
a
ns
por
t
,a
ndxe
nobi
ot
i
cr
es
pons
e･Exa
mpl
esof
t
hea
ppl
i
c
a
t
i
onofFI
TC t
oi
nvi
voi
nves
t
l
ga
t
i
ons
c
a
nbes
e
e
ni
nFi
gur
es7& 8.
Se
ve
r
a
lpr
obeswe
r
ef
ound t
o beus
e
f
ulf
or
,
i
n vi
vo nuc
l
ea
rl
a
be
l
i
ng,t
hes
ewe
r
e:DAPI4'
6di
ami
di
n02phenyl
i
ndol
e,di
hydr
oc
hl
or
i
de;
DAPIDi
Ac
e
t
a
t
e 4'
,
6di
a
mi
di
n02phe
nyl
i
ndol
e,
di
l
a
c
t
a
t
e;Ce
l
l
Tr
a
c
eOr
e
gonGr
e
e
n488ca
r
boxyl
i
c
a
c
i
ddi
a
c
e
t
a
t
e,s
uc
c
i
ni
mi
dyles
t
e
r
;a
ndt
heSYTO㊥
s
e
r
i
esoff
luor
es
c
e
ntpr
obesf
r
om I
nvi
t
r
oge
n(
e.
g.
sYTO@ 1
6gr
ee
nf
luor
es
c
e
ntnuc
l
e
i
ca
c
i
ds
t
a
i
n)
.
An a
ddi
t
i
ona
le
xa
mpl
e ofi
n vi
vo i
nves
t
l
ga
t
i
onofnuc
l
e
ophi
l
i
cf
luor
ophor
esc
a
nbes
e
e
ni
n
pr
e
l
i
mi
na
r
ys
t
udi
ese
xa
mi
nl
ng t
he a
bs
or
pt
l
On,
di
s
t
r
i
but
i
on,me
t
a
bo
l
i
s
m a
nd e
xc
r
e
t
i
on,aswe
l
l
ast
oxi
c
i
t
y(
ADME/
Tbx
)
,ofa
ne
xpe
r
i
me
nt
a
lpr
odr
ugf
ort
r
ea
t
me
ntoft
r
ypa
nos
omi
as
i
s(
Fi
gur
e4)
.
Pr
e
l
i
mi
na
r
yr
es
ul
t
swi
t
ht
wo a
nt
i
t
r
ypa
nos
oma
l
c
ompounds
,t
e
r
me
dDB c
ompounds(
DB28
9a
nd
DB75)
,r
e
ve
a
l
edme
t
a
bol
i
s
m oft
hepa
r
e
ntc
ompound,DB28
9,a
ndnuc
l
e
a
rbi
ndi
ngoft
hebi
ol
ogl
ca
l
l
ya
c
t
i
vef
luor
es
c
e
ntme
t
a
bol
i
t
e,DB75,t
ogi
l
l
e
pi
t
he
l
i
aa
ndhe
pa
t
oc
yt
e
swi
t
hi
n1
5mi
nut
esof
e
xpos
ur
e.Te
mpor
a
la
s
s
es
s
me
ntofdi
s
t
r
i
but
i
ona
nd
me
t
a
bol
i
s
ms
howe
dnuc
l
e
a
rbi
ndi
ngoft
heme
t
a
b,
ol
i
t
ei
nc
r
ea
s
edwi
t
ht
i
me
,pe
a
ki
nga
t90mi
nut
es
Wi
t
hdi
s
t
r
i
but
i
one
xpa
ndi
ngt
ot
hegut
,pa
nc
r
eas
a
nds
ys
t
e
mi
ct
i
s
s
uesove
ra24hrpe
r
i
od.I
nr
ode
nt
a
nd pr
l
ma
t
emode
l
sDB28
9i
sme
t
a
bol
i
z
e
d vi
a
a compl
e
x pa
t
hwa
yi
nvol
vi
ng CYPI
Al
,1
A2,
3
A4,4F2,4FB,2J
2a
ndb5(
Dr
.∫
.
Ed.Ha
l
l
,UNC
Cha
pe
lHi
l
l
,pe
r
s
ona
lc
ommuni
ca
t
i
on)
.He
nce,
s
i
mi
l
a
rorhomol
ogousme
t
a
bol
i
cpa
t
hwa
y(
S
)l
i
kel
ye
xi
s
ti
nme
da
ka,t
houghs
uc
hpa
t
hwa
ysr
e
ma
i
n
I
nvi
voi
ma
gi
ngi
nSTI
Imeda
ka(
Or
yz
i
asl
at
i
pe
s
)
t
obee
l
uc
i
da
t
e
d.
Thea
bi
l
i
t
yt
ol
a
be
la
nd vi
s
ua
l
i
z
enuc
l
e
io
f
i
ndi
vi
dua
lc
e
l
l
si
n or
ga
nsa
nd t
i
s
s
uespr
ove
d
va
l
ua
bl
eno
tonl
yf
o
rs
t
r
uc
t
ur
a
le
l
uc
i
da
t
i
on,but
f
ordi
f
f
e
r
e
n
t
i
a
t
i
on be
t
we
e
n nuc
l
e
ia
nd c
e
l
l
ul
a
r
l
e
s
i
ons(
de
s
c
r
i
be
dl
a
t
e
ri
nt
hexe
no
bi
ot
i
cr
e
s
pons
e
s
e
c
t
i
on)
,whe
r
en
uc
l
e
iwe
r
edi
f
f
e
r
e
nt
i
a
t
e
df
r
o
m
hy
dr
opl
CVa
C
uOl
e
s
･Thee
f
丘c
a
c
yo
ft
hen
uc
l
e
a
r
l
a
be
l
i
ngf
luo
r
o
phor
e
si
si
l
l
us
t
r
a
t
e
di
nFi
gur
e4a
nd
9.
1
na
ddi
t
i
on t
ot
he ut
i
l
i
z
a
t
i
on ofe
xoge
nous
nuor
o
phor
e
s
,a
ut
of
luor
e
s
c
e
nc
eo
fl
i
v
ec
e
l
l
sa
l
s
o
pr
o
ve
dus
e
f
uli
nde
l
i
ne
a
t
i
ono
fc
e
l
l
ul
a
ra
ndt
i
s
s
ue
mor
phol
ogyl
nVi
vo.Aut
o
luo
f
r
e
s
c
e
nc
ei
sa
ni
nna
t
e
apr
ope
r
t
yofl
i
vi
ngc
e
l
l
s(
*
not
e
,weo
bs
e
r
v
e
dt
he
a
ut
oauo
r
e
s
c
e
nc
eo
fnonvi
a
bl
ec
e
l
l
sa
ndt
i
s
s
ues
wa
sdi
mi
ni
s
he
dr
e
l
a
t
i
vet
ot
he
i
rvi
a
bl
ec
ount
e
r
pa
r
t
s
)
.A va
r
i
e
t
yofe
nd
oge
no
usc
o
mpoundsa
r
e
kno
wnt
oe
xhi
bi
ta
ut
of
luo
r
e
s
c
e
nc
eunde
rava
r
i
e
t
y
o
fe
xc
i
t
a
t
i
o
n/
e
mi
s
s
i
ons
pe
c
t
r
a(
Ta
bl
e2)
.Among
t
he
s
e
,e
ndo
ge
nous且uor
e
s
c
e
nc
eo
fni
c
ot
i
na
mi
de
a
de
ni
nedi
n
uc
l
e
ot
i
dephos
pha
t
e(
NADPH)
,r
i
bol
fa
vi
n,f
la
vi
nc
oe
nz
yme
sa
nd f
la
vo
pr
ot
e
i
ns
,a
s
we
l
la
spor
phyr
i
ns
,a
r
ee
a
c
hus
e
da
si
ndi
c
a
t
o
r
so
f
e
nz
ymea
c
t
i
vl
t
ya
ndph
ys
i
ol
ogi
c
a
ls
t
a
t
ei
nl
i
vi
ng
)
.Fo
r
c
e
l
l
s(
Boona
c
ke
ra
nd Va
n Noo
r
de
n 2001
,
i
ns
t
a
nc
e
,NADPH 且uo
r
e
s
c
e
si
ni
t
sr
e
d
uc
e
ds
t
a
t
e
butnoti
ni
t
so
xi
di
z
e
ds
t
a
t
e(
e.
蛋.NADP)
.I
nc
o
nt
r
a
s
tf
la
vi
na
de
ni
nedi
nuc
l
e
ot
i
def
luo
r
e
s
c
e
si
ni
t
s
o
xi
di
z
e
ds
t
a
t
e(
FAD)
,whi
l
ef
luor
e
s
c
e
nc
ei
sunde
Be
c
a
us
ee
a
c
ho
f
t
e
c
t
a
bl
ewhe
nr
e
d
uc
e
dt
oFADH2.
t
he
s
ee
ndog
e
no
us且uo
r
ophor
e
si
swi
de
l
ye
mpl
o
ye
d
i
nava
r
i
e
t
yo
fc
e
l
l
ul
a
rpr
oc
e
s
s
e
s
,t
he
y
,byt
he
i
r
l
fuo
r
e
s
c
e
nc
e
,C
a
nbegoodi
ndi
c
a
t
or
sofc
e
l
lvi
a
bi
1
tal
l
t
ya
ndf
unc
t
i
on･Fori
ns
t
a
nc
e
,Ra
ma
n
u
J
a
me
(
1
994)r
e
po
r
t
e
dt
ha
tdys
pl
a
s
t
i
cc
e
l
l
se
xhi
bi
t
e
d
gr
e
a
t
e
rauo
r
e
s
c
e
nc
e
,l
i
ke
l
yduet
oi
nc
r
e
a
s
e
dme
t
a
bol
i
cr
a
t
eo
fa
l
t
e
r
e
dc
e
l
lt
ype
s
.Fr
o
mt
he
s
e丘nd1
ngSUV l
i
g
hte
xc
i
t
a
t
i
onha
sbe
e
nus
e
dt
odi
f
f
e
r
e
nt
i
a
t
ene
op
l
a
s
t
i
cc
e
r
vi
c
a
lt
i
s
s
uef
r
om nor
ma
lt
i
s
s
ue
s
,i
nvi
v
o(
Ra
ma
nu
j
a
me
tal
.1
994)
.Si
mi
l
a
r
l
y
,
di
f
f
e
r
e
nt
i
a
lf
luor
e
s
c
e
nc
eha
sbe
e
ne
mpl
o
ye
dt
odi
s
t
l
ngui
s
hno
r
ma
l
,hype
r
pl
a
s
t
l
C
,a
nda
de
noma
t
ous
huma
nc
ol
o
ni
cmuc
os
ae
pi
t
he
l
i
ac
e
l
l
s(
pr
i
ma
r
y
c
e
l
lc
ul
t
ur
es
)(
Da
Cos
t
ae
tal
.2005)
.
Oft
hee
ndoge
nous且uo
r
o
phor
e
s
,NADPH i
sa
l
i
ke
l
yc
a
ndi
da
t
ef
o
rmuc
ho
ft
het
i
s
s
uea
ut
of
luor
e
s
c
e
nc
eobs
e
r
v
e
di
nvi
voi
nt
he丘ndi
ngspr
e
s
e
nt
e
d
50400
he
r
e(
whe
r
ewee
mpl
o
y
e
de
xc
i
t
a
t
i
ono
f∼3
nm,DAPI
/
UV)
･Exc
i
t
a
t
i
on a
tt
hi
swa
ve
l
e
ngt
h
r
e
s
ul
t
e
di
na
ut
o且uor
e
s
c
e
nc
ei
nvi
r
t
ua
l
l
ya
l
lc
e
l
l
t
ype
si
nme
da
ka.
Thes
a
meha
sa
l
s
obe
e
nr
e
po
r
t
e
d
f
orma
mma
l
i
a
na
nd ot
he
rpi
s
c
i
ne s
pe
c
i
e
s(
s
e
e
5
3
r
e
vi
e
wbyBoona
c
ke
ra
ndVa
nNoo
r
de
n,2001
)
.
Whi
l
eUV/
DAPIc
a
nbephot
ot
o
xi
ct
oc
e
l
l
s
,
i
twa
sa
tt
i
me
so
fva
l
uet
out
i
l
i
z
et
hi
se
x
c
i
t
a
t
i
on
wa
v
e
l
e
ngt
h(
a
ut
of
luo
r
e
s
c
e
nc
eo
ft
i
s
s
ue
s
)t
oe
l
uc
i
da
t
emor
pho
l
ogi
c
a
lf
e
a
t
ur
e
sot
he
r
wi
s
edi
f
ic
f
ul
tt
o
vi
s
ua
l
i
z
e.Fo
ri
ns
t
a
nc
e
,UV/
DAPIe
xc
i
t
a
t
i
o
nwa
s
hi
ghl
yus
e
f
ulf
orvi
s
ua
l
i
z
i
ngt
heva
s
c
ul
a
t
ur
eo
f
me
da
kal
i
v
e
r
,a
ndva
s
c
ul
a
t
ur
et
hr
o
ugho
utt
hebod
y
(
bl
oodpl
a
s
mawa
sr
e
l
a
t
i
ve
l
ynonf
luo
r
e
s
c
e
ntc
ompa
r
e
dt
oi
ndi
vi
dua
le
pi
t
he
l
i
a
l
,e
ndot
he
l
i
a
la
ndr
e
d
bl
oodc
e
l
l
s
)
.UV/
DAPIwa
sa
l
s
ous
e
f
ulf
orvi
s
ua
l
i
z
i
ngi
ndi
vi
dua
lc
e
l
l
si
nvi
v
o(
e.
g.he
pa
t
oc
yt
e
mo
r
phol
ogy
)
.He
nc
e
,byu
t
i
l
i
z
i
ngt
hea
u
t
ol
fuor
e
s
c
e
nc
epr
ope
r
t
i
e
so
fc
e
l
l
s
/
t
i
s
s
ue
ss
a
vl
ngSi
nt
i
me
a
ndma
t
e
r
i
a
l
sma
yber
e
a
l
i
z
e
d,ne
ga
t
l
ngt
hene
e
d
t
oa
dmi
ni
s
t
e
re
x
oge
no
us且uo
r
opho
r
e
st
oe
l
uc
i
da
t
e
c
e
l
l
ul
a
r
/
t
i
s
s
uemo
r
phol
ogyl
nVi
v
o･
Atot
he
re
xci
t
at
i
on/
e
mi
s
s
i
on wa
ve
l
engt
hs
(
TRI
TC/
FI
TC)t
i
s
s
uea
ut
of
luo
r
e
s
c
e
nc
ewa
sl
e
s
s
di
s
t
i
nc
t
,a
ndl
e
s
swi
de
l
ydi
s
t
r
i
but
e
di
nc
e
l
l
/
t
i
s
s
ue
s
,t
ha
nt
ha
tobs
e
r
v
e
dwi
t
hDAPI
/
UV Ho
we
v
e
r
,
a
ut
of
luor
e
s
c
e
nc
eo
fbi
l
enui
dwa
sv
e
r
y di
s
t
i
nc
t
TCi
l
l
umi
na
t
i
on.Be
c
a
us
e
unde
rbot
hTRI
TC & FI
oft
hi
sTRI
TC/
FI
TC e
xc
i
t
a
t
i
on/
e
mi
s
s
i
on c
o
ul
d
bee
mpl
o
ye
dt
ode
t
e
c
tt
heons
e
to
fbi
l
es
ynt
he
s
i
s
(
e
ndoge
nousbi
l
e且uo
r
e
s
c
e
nc
e
)
,a
nd t
oo
bs
e
r
ve
bi
l
et
r
a
ns
por
ti
nvi
vo.Ofi
nt
e
r
e
s
t
,weo
bs
e
r
v
e
d
bi
l
ea
ut
of
luo
r
e
s
c
e
nc
et
ova
r
yonat
e
mpo
r
a
ls
c
a
l
e
,
af
a
c
twhi
c
hme
r
i
t
sf
ur
t
he
rde
t
a
i
l
e
ds
t
udy.Whi
l
e
TRI
TC/
FI
TC e
xci
t
a
t
i
on r
es
ul
t
ed i
n di
s
t
i
nct
a
ut
of
luo
r
e
s
c
e
nc
eo
fi
nt
r
a
-a
nd e
xt
r
a
he
pa
t
i
cbi
l
e
pa
s
s
a
ge
wa
ys
,a
swe
l
la
sga
l
lbl
a
dde
r
,i
twa
snot
c
ons
i
s
t
e
nt
l
yo
bs
e
r
v
e
d,s
ugge
s
t
l
ng Va
r
i
a
t
i
onsi
n
bi
l
ec
ompos
i
t
i
on,pe
r
ha
psduet
ova
r
yl
ngC
OnC
e
nt
r
a
t
i
onsofe
ndoge
nousf
luor
o
pho
r
e
s(
i
nbi
l
e
)pr
e
vi
ous
l
ydi
s
c
us
s
e
d(
e
.
g.NADP,FADH,por
phyr
i
n
c
ompounds
)
.
Fort
hi
sr
e
a
s
o
n,i
twa
snotpos
s
i
bl
et
o
f
ul
l
yut
i
l
i
z
ebi
l
ea
ut
of
luo
r
e
s
c
e
nc
ea
l
onea
sa
ni
ndi
c
a
t
oro
ft
r
a
ns
po
r
to
fs
pe
c
i
icbi
f
l
ec
ons
t
i
t
ue
nt
s
.
I
nv
i
v
ode
s
m'
pt
i
ono
fhe
pat
obi
l
i
ar
yde
v
e
l
o
pme
nt
l
nvi
voobs
e
r
va
t
i
on/
i
ma
gl
ngpe
r
mi
t
t
e
dde
t
a
i
l
e
d
s
t
udy a
nd des
c
r
l
pt
l
On Ofde
ve
l
opme
ntoft
he
meda
kahe
pa
t
obi
l
i
a
r
ys
ys
t
e
m.Thi
si
nc
l
uded
o
bs
e
r
va
t
i
o
m/
de
s
c
r
l
pt
l
O
nOfha
l
l
ma
r
ke
v
e
nt
ss
uc
h
a
so
r
ga
noge
ne
s
i
s
,t
heons
e
tofbi
l
es
ynt
he
s
i
sa
nd
t
r
a
ns
por
t
,a
ndme
t
a
mo
r
phos
i
soft
hel
i
ve
rf
r
o
m
a
ne
mbr
yo
ni
ct
oa
d
ul
tphe
not
ype(
Fi
gur
e5)
.The
a
bi
l
i
t
yt
oma
kei
nvi
voi
n
v
e
s
t
l
ga
t
i
onsa
tva
r
i
o
us
s
t
a
ge
so
fhe
pa
t
obi
l
i
a
r
yde
v
e
l
o
pme
ntl
e
dt
oi
mpo
r
t
a
nti
ns
i
ght
s(
e.
蛋.
pa
r
e
nc
hyma
la
r
c
hi
t
e
c
t
ur
ed
ur
i
ng
e
mbr
y
oni
c,l
a
r
va
la
ndj
uv
e
ni
l
es
t
a
ge
so
fde
ve
l
o
pme
nt
)(
Ha
r
dma
ne
tal
.2
007)
.
Whi
l
eal
e
ngt
hydi
s
-
R.
C,
Ha
r
d
ma
neta
l
.
5
4
ii亘,
≡
至l守 i
S
.
l
･
早
I
nvi
voi
ma
gi
ngi
nSTI
Ime
da
ka(
Or
yz
i
asl
at
i
pe
s
)
c
us
s
i
ono
ft
he
s
ee
v
e
nt
si
sbe
yondt
hes
c
o
peo
ft
he
a
r
t
i
c
l
e
,Fi
gur
e5pr
o
vi
de
sa
no
v
e
r
vi
e
w ofr
e
s
ul
t
s
f
r
omt
he
s
es
t
udi
e
s
.
Quant
i
t
at
i
o
no
fhe
pat
o
bi
l
i
ar
yt
r
ans
po
r
ti
nv
i
v
o
Pe
r
ha
pst
hemo
r
es
a
l
i
e
nte
xa
mpl
e
st
ha
tbe
s
t
i
l
l
us
t
r
a
t
et
heut
i
l
i
t
yofi
nvi
voi
n
ve
s
t
l
ga
t
i
oni
nSTI
I
me
da
kaa
r
et
hos
et
ha
tc
ha
r
a
c
t
e
r
i
z
e
dt
he3
Da
r
c
hi
t
e
c
t
ur
eo
ft
heme
da
kal
i
ve
r
,a
nde
l
uc
i
da
t
e
dhe
pa
t
obi
l
i
a
r
yt
r
a
ns
po
r
ta
ndxe
no
bi
ot
i
cr
e
s
pons
e.
Tr
a
ns
po
r
to
fs
o
l
ut
e
sf
r
om bl
oodt
obi
l
ei
sa
vi
t
a
ll
i
v
e
rf
unc
t
i
on･
I
ti
st
hr
oughbi
l
es
yn
t
he
s
i
sa
nd
t
r
a
ns
por
tt
ha
tx
e
nobi
ot
i
c
so
fe
nvi
r
onme
nt
a
lor
l
gl
n
(
e
･
g･e
n
vi
r
o
nme
nt
a
lt
o
xi
c
a
nt
s
/
t
o
xi
ns
,pha
r
ma
c
e
ut
i
c
a
l
s
)
,a
nd e
ndoge
nousme
t
a
bol
i
cby
pr
od
uc
t
s
,
a
r
ee
i
t
he
rs
a
f
e
l
yr
e
mo
ve
df
r
om t
hes
ys
t
e
m,o
r
,
wi
t
hs
ys
t
e
mi
ca
c
c
umul
a
t
i
on,r
e
s
ul
ti
nmo
r
bi
di
t
y/
mo
r
t
a
l
i
t
y
･I
nhi
bi
t
i
on/
i
mpa
l
r
me
ntOfbi
l
et
r
a
ns
por
t
(
c
hol
e
s
t
a
s
i
s
)c
o
mmonl
yr
e
s
ul
t
si
nmo
r
bi
di
t
y/
mo
r
t
a
l
i
t
yl
nma
mma
l
s
,a
ndl
i
t
t
l
ei
skno
wna
bo
utbi
l
e
t
r
a
ns
por
ti
npl
S
C
i
nes
pe
c
i
e
sa
ndt
her
e
l
a
t
i
o
ns
hi
po
f
i
mpa
i
r
e
dt
r
a
ns
por
tf
unc
t
i
oni
nt
he
s
eo
r
ga
ni
s
mst
o
di
s
e
a
s
ea
ndt
o
xI
C
l
t
y.
Whi
l
ei
ti
sbe
c
o
ml
ngl
nC
r
e
a
S
1
ngl
ya
ppa
r
e
ntt
ha
tma
n
ypl
S
C
i
nes
pe
c
i
e
ss
ha
r
e
bi
l
es
ynt
he
t
i
ca
ndt
r
a
ns
po
r
tme
c
ha
ni
s
mswi
t
ht
he
i
r
ma
mma
l
i
a
nc
ount
e
r
pa
r
t
s(
Ha
ge
y1
992;Mos
c
he
t
t
a
e
tal
.2005;
Hi
nt
one
tal
.2007)
,nos
t
udi
esonf
is
h
c
hol
e
s
t
a
s
i
si
nr
e
s
pons
et
o di
s
e
a
s
ea
nd t
o
xI
C
l
t
y
e
xi
s
t
.
Ourpr
e
l
i
mi
na
r
yl
n
V
e
S
t
l
ga
t
i
onss
ho
wi
n vi
vo
qua
nt
i
t
a
t
i
on o
fhe
pa
t
o
bi
l
i
a
r
yt
r
a
ns
por
ti
n STI
I
me
da
kai
spos
s
i
bl
e.Us
i
ng f
l
uor
e
s
c
e
ntpr
obe
s
s
uc
c
e
s
swa
sa
c
hi
e
ve
di
ne
s
t
a
bl
i
s
hi
ng me
t
hods
f
o
rqua
nt
i
f
yi
ngbl
oodt
obi
l
et
r
a
ns
po
r
ti
n vi
vo
(
Fi
gur
e6)
･Fora
c
c
ur
a
t
eq
ua
nt
i
t
a
t
i
o
no
ft
r
a
ns
po
r
t
s
e
v
e
r
a
lke
ye
l
e
me
nt
swe
r
e ne
c
e
s
s
a
r
y
.Mos
tof
t
hehur
dl
e
st
oqua
nt
i
t
a
t
i
o
nwe
r
ef
oundt
obedi
gi
-
5
5
t
a
l
l
yba
s
e
d,orr
a
t
he
r
,l
a
yl
nmi
c
r
os
c
opy/
i
ma
gl
ng
t
e
c
hnol
ogl
e
S
,r
a
t
he
rt
ha
nl
i
mi
t
si
mpos
e
dbyt
he
STI
Ia
ni
ma
lmode
li
t
s
e
l
f
.Fo
ri
ns
t
a
nc
e
,o
neoft
he
pr
l
ma
r
yi
s
s
ue
swa
ss
t
a
nda
r
di
z
a
t
i
on o
fmi
c
r
os
t
c
opyt
e
c
hni
q
ue
s(
Ta
yl
ora
ndWa
ng1
98
9;We
bbe
a
l
.1990;St
.Cr
o
i
xe
ta
l
.2005).Expos
ur
et
i
me
s
whi
l
ei
ma
gi
ng(
e.
g.f
luor
ophor
eque
nc
hi
ng
)
,l
a
s
e
r
i
nt
e
ns
i
t
y(
e
x
c
i
t
a
t
i
on)
,f
luo
r
opho
r
ec
onc
e
nt
r
a
t
i
on
i
nt
hee
xpos
ur
eba
t
h,a
ndi
ma
gl
ngde
pt
hi
nvi
vo
(
e
･
g.ho
w de
e
pi
nt
ot
het
i
s
s
ue
sy
oua
r
ei
ma
gi
ng)
,
we
r
ea
l
lf
oundt
oi
nf
lue
nc
ea
ndde
inet
f
hedi
gi
t
a
l
i
ma
gei
nf
or
ma
t
i
onc
a
pt
ur
e
di
nvi
vo,a
ndt
hi
s
,l
S
t
ur
n,a
f
f
e
c
t
e
dqua
nt
i
t
a
t
i
ono
fdi
gi
t
a
li
nf
or
ma
t
i
o
n.
He
nc
e
,a
ni
mpo
r
t
a
ntc
ons
i
de
r
a
t
i
onwa
st
het
ype
ofs
of
t
wa
r
eus
e
df
o
rdi
gi
t
a
li
ma
ge a
c
qui
s
i
t
i
on
a
ndqua
nt
i
t
a
t
i
on.Thi
swa
s
/
i
sapot
e
nt
i
a
ls
our
c
e
o
fe
r
r
o
ri
fnotwe
l
lunde
r
s
t
ood.Fori
ns
t
a
nc
e
,f
or
s
o
mes
o
f
t
wa
r
epr
ogr
a
ms
,s
uc
ha
sl
ma
ge
J
,di
gi
t
a
li
ma
g
ef
o
r
ma
t(
whe
t
he
rt
hedi
gi
t
a
li
ma
gewa
s
8,1
6or3
2bi
t
,c
o
l
o
ro
rgr
a
ys
c
a
l
e
)pot
e
nt
i
a
l
l
y
a
f
f
e
c
t
e
dqua
nt
i
t
a
t
i
vea
na
l
ys
i
s
.The
s
epa
r
a
me
t
e
r
s
,
pl
Xe
lde
pt
ha
ndc
o
l
orpr
o
丘l
e
,a
r
ede
t
e
r
mi
ne
dby
t
he i
ma
ge a
c
qui
s
i
t
i
on s
o
f
t
wa
r
e(
S
of
t
wa
r
et
ha
t
i
nt
e
r
f
a
c
e
swi
t
hdi
gi
t
a
lCCD c
a
me
r
a
so
nc
onf
Oc
a
lo
rwi
de
ie
f
l
dmi
c
r
os
c
ope
s
;i
nt
hi
sc
a
s
eI
PLa
b
wa
st
he s
of
t
wa
r
ea
c
qul
S
l
t
l
On Pr
ogr
a
m f
ort
he
wi
de
丘e
l
dmi
c
r
os
c
ope
,Ze
i
s
sLSM 5Axi
o
vi
s
i
on
i
ma
gea
c
q
ul
S
l
t
1
0ns
o
f
t
wa
r
ef
ort
hec
onf
oc
a
lmi
c
r
oI
s
c
ope
)
.He
nc
e
,whi
l
edi
gi
t
a
li
ma
gea
c
q
ui
s
i
t
i
on,
i
nourc
a
s
e
,oc
c
ur
r
e
di
nI
PLa
ba
ndZe
i
s
sLSM 5
Axi
o
vi
s
i
o
npr
ogr
a
ms
,q
ua
n
t
i
t
a
t
i
onwa
spe
r
f
わr
me
d
us
i
ngt
hi
r
dpa
r
t
ys
o
f
t
wa
r
e(
I
ma
ge
J
,Ze
i
s
sI
ma
g
e
Br
o
ws
e
r5a
ndAmi
r
a3
D,s
e
ema
t
e
r
i
a
l
sa
ndme
t
hods
)
.He
nc
e
,i
twa
sof
t
e
nne
c
e
s
s
a
r
yt
oc
o
nv
e
r
tt
he
or
i
gi
na
li
ma
ge(
a
c
qui
r
e
d)t
oapi
xe
lde
pt
ha
nd
c
ol
o
rpr
o丘l
et
ha
twa
so
pt
i
ma
la
nd/
Orc
ompa
t
i
bl
e
wi
t
ht
hequa
nt
i
t
a
t
i
ons
of
t
wa
r
ee
mpl
o
ye
d.Pe
r
ha
ps
Fi
gur
e5･ I
nvi
voi
n
ve
s
t
i
ga
t
i
onso
fhe
pa
t
obi
l
i
a
r
yde
v
e
l
opme
n
t
.(
Al
:
Fi
r
s
tRow)Br
i
ght
f
i
e
l
dmi
c
r
os
c
o
py
.(
A2:
Se
c
ondRo
w)
Wi
de
f
i
e
l
df
l
uo
r
e
s
c
e
nc
emi
c
r
os
c
o
py
,DAPIa
ndTRI
TC c
ompos
i
t
e
sr
e
v
e
a
l
i
ngga
l
lbl
a
dde
r(
GB,r
e
d)pos
i
t
i
on.(
A3:
Thi
r
dRo
w)
Wi
de
f
i
e
l
df
l
uo
r
es
c
e
nc
emi
c
r
os
c
opy,
DAPIa
ut
of
l
uor
e
s
c
e
nc
ee
l
uc
i
da
t
i
ngva
s
c
ul
a
t
ur
e
.
Atda
yofha
t
c
hi
ng,8dpf
,
t
hel
i
v
e
rwa
sf
わund
ol
ldp
ft
heL5l
i
ve
ra
ndga
l
lbl
a
da
st
heL5phe
not
ype
,l
e
f
tl
a
t
e
r
a
la
ndv
e
nt
r
a
lt
ot
he3
r
ds
omi
t
e(
A1
A31
s
tc
ol
umn)
.Fr
om 8t
de
rdes
c
e
nde
dt
ot
heve
nt
r
a
la
bdome
n,wi
t
hma
r
ke
dr
es
t
r
uc
t
ur
i
ngoft
hea
s
s
oc
i
a
t
e
dva
s
c
ul
a
t
ur
e
.(
A4,A5)Tr
a
ns
l
oc
a
t
i
onoft
he
L5l
i
v
e
ra
ndga
l
lbl
a
dde
rt
ot
heγ
e
nt
r
a
la
bdome
nwa
sc
ha
r
a
c
t
e
r
i
z
e
dby:des
c
e
nto
ft
hel
i
v
e
ra
ndGB,
whi
c
hr
e
ma
i
ni
nl
ongi
t
udi
na
l
,
pos
i
t
i
on,y
ol
kr
e
s
or
pt
i
o
n,t
hedi
s
a
ppe
a
r
a
nc
eo
ft
hes
t
o
ma
t
ode
a
la
ndpr
oc
t
ode
a
lme
mbr
a
nes(
nots
ho
wn)
,t
heons
e
to
fpe
r
i
s
t
a
l
s
i
s
a
ndt
hebe
gi
nni
ngo
fr
e
s
pi
r
a
t
i
on･(
A4)Br
i
ght
f
i
e
l
dmi
c
r
os
c
o
py
,l
ld
pf
,v
e
nt
r
a
lvi
e
w,s
ho
wi
ngl
i
v
e
r(
L)
,ga
l
lbl
a
dde
r(
GB)a
ndl
i
pi
d
dr
opl
e
t(
LD)
･(
A5)Wi
de
f
i
e
l
df
l
uor
e
s
c
e
nc
emi
c
r
os
c
opy,DAPI
/
TRI
TCc
ompos
i
t
e,γ
e
nt
r
a
lvi
e
w,e
l
uc
i
da
t
i
ngl
i
ve
r
,ga
l
lbl
a
dde
ra
nd
va
s
c
ul
a
t
ur
e
･
Theons
e
to
fme
t
a
mo
r
phos
i
so
ft
hehe
pa
t
obi
l
i
a
r
ys
ys
t
e
mt
oat
r
a
ns
v
e
r
s
epos
i
t
i
oni
nt
her
os
t
r
a
la
bdomi
na
lc
a
vi
t
y(
a
dul
t
･(
B)Wi
de
f
i
e
l
df
l
uor
e
s
c
e
nc
emi
c
r
os
c
o
py
,DAPIi
ma
gec
a
pt
ur
e,v
e
nt
r
a
lvi
e
w.By20dpft
hel
i
v
e
ra
nd
phe
not
ype
)be
ga
na
tlldpf
ga
l
lbl
a
dde
rwe
r
et
r
a
ns
v
e
r
s
ei
nt
heve
nt
r
or
os
t
r
a
la
bdomi
na
lc
a
vl
t
y,ma
r
ki
ngt
hea
t
t
a
i
nme
nto
ft
hea
dul
tphe
not
ype
･Asc
a
nbe
di
s
c
e
r
ne
df
r
omt
hei
ma
g
ess
ho
wn,
ma
r
ke
dr
es
t
r
uc
t
ur
l
ngO
ft
heva
s
c
ul
a
t
ur
ea
c
c
ompa
ni
e
dme
t
a
mor
phos
i
soft
hel
i
ve
ra
n
dga
l
lbl
a
dde
rf
r
oma
ne
mbr
y
oni
ct
oa
dul
tphe
not
ype
･
Whi
l
es
uc
ho
bs
e
r
va
t
i
onsa
r
epur
e
l
yde
s
c
r
l
pt
l
V
e,
t
he
ype
r
mi
t
t
e
de
l
uc
i
da
t
i
ono
fha
l
l
ma
r
k
l
lBl
a
dde
r(
GB)
,He
a
r
tAt
r
i
um (
Ha
)
,
e
v
e
nt
si
nhe
pa
t
obi
l
i
a
r
yde
ve
l
opme
nta
ndhe
l
pe
dc
ha
r
a
c
t
e
r
i
z
enor
ma
l
c
yi
nvi
vo.
Li
v
e
r(
L)
,Ga
He
a
r
tVe
nt
r
i
c
l
e(
Hv
)
,Si
nusVe
nos
us(
Sv
)
,He
pa
t
i
cVe
i
n(
Hv
)
,
Le
f
tDuc
to
fCuvi
e
r(
Ldc
)
,Me
di
a
nYo
l
kVe
i
n(
Myv
)
,Li
pi
dDr
opl
e
t
(
LD)
56
R.
(
l
.t
･
1
こ
I
l
･
L
h1
1
1
H
h･
It
I
/
.
F量
gt
m 6. Ⅰ
nvi
voqua
nt
i
t
a
t
i
ono
fhe
pa
t
obi
l
i
a
r
yt
r
a
ns
por
t
｡Fl
uo
r
ophor
e
ss
u
c
ha
s Bodi
pyC5phos
phocho
l
i
ne,s
ho
wnhe
r
e
,
JL
I
I
i
川 1い
1
､i
hL
lh‖i
こ
I
r
)
'＼
).
←
t
州-こ
1
1
L
lL
1
ui
l
nl
i
l
こ
t
l
i
UT
h､
f
-h
l
いいL
Il
いhi
l
L
lr
mn叩州t
.(
AI
〕1
3
1
1
申1
t
I
､
i
L
l
l
Jl
l
l
i
L
I
I
I
L
ト
nl
f
.
.
VOrS′
l
ll
州こ
I
hl
L
}
L
li
l
l､
r
i
､
,
いL
t
l
uL
l
i
me
da
kaa
t3
0d
pf
.Gr
e
e
na
i
ga
ec
a
nbes
e
e
ni
l
lt
r
a
ns
por
tt
hr
oughl
ume
noft
heguf
中(
A2)Wi
de
f
i
e
i
df
l
uo
r
es
c
e
nc
emi
c
r
os
c
opyof
ngβ
Bodi
pyC5phos
phoc
boHnef
l
uor
e
s
c
e
nc
ei
r
li
nt
r
a
he
pa
t
i
cbi
呈
i
a
r
ypa
s
r
e
gi
onofi
nt
e
r
e
s
ti
ndi
c
a
t
e
db
ygr
a
ys
qua
r
e主
nAl
,s
howi
s
a
ge
wa
ys(
弼 BPs
)oft
hei
主
ve
T(
L)a
ndga
i
ib一
a
dde
r(
GB)
.(
BりS
T壬
Ⅰme
da
ka,9dpf
,c
onf
oc
a
iD言
cmi
c
T
OS
C
OPy,
壬
n号
ongi
t
t
l
d主
na
】s
e
c
don2r
owsofhe
pa
t
oc
yt
e
sa
ndt
he
i
rnuc
l
e
i(
HN)c
ha
r
a
c
t
e
r
i
z
epa
r
e
nc
hyma
ia
r
c
hi
t
e
c
t
ur
e｡St
a
c
ke
do
va
t
es
t
r
uc
t
ur
e
sa
r
er
e
dbl
ood
←(
S/
1
1
･R亡
(
iL
l
el
1
-1
1
1
1
1
L
l
l
l
rl
l
こ
I
t
l
州L
t
L
1山l
L
tl
いl
I
L
.
l
i
､
.
L
IL
t
i
r
L
l
ul
i
t
t
i
い‖いI
I
L
t
L
l
t
l
＼l
hr
いu
dldl
u←
いi
L
I
L
<
.
L
I
L
l
l
l
←i
I
-L
l
i
r
L
l
ut
;
l
t
i
州 t
hr
ou
貞一l
h
L
lゝ
i
l
u←
いi
L
l
a
ndr
e
s
ul
t
i
ngdi
s
t
or
t
i
ondur
i
ngi
ma
gi
ng｡(
B2)Sa
mea
sBi
,s
i
ngl
ef
r
a
mef
r
om i
nvi
v
oc
or
l
f
c
,
c
a
ti
ma
g
es
t
a
c
kc
a
pt
ur
i
ngβBodi
py
C5phos
phoc
hol
i
ne(
gr
e
e
nf
l
uo
r
e
s
c
e
nc
e
)i
nt
r
a
ns
po
r
tf
r
om b呈
oodt
obi
i
e
,t
hr
oughi
nt
T
a
he
pa
も
i
cbi
l
i
a
r
ypa
s
s
a
ge
wa
ys(
I
HBP)oft
he
.
ビ
r
･1
'
1
L
Tr
l
l
l
川.
L
i
t
h
L
,
I
.
L
T".
こ
l
←i
l
l
l
こ
I
g
ビ
L
Ii
n､
.
i
､
い:
1
0Ⅰ
一
一
i
t
l
ul
L
I
リー
いト
lこ
l
山一
i
ni
州'
こ
I
l
i
川1仙1
1
1
山一
L
l
→I
,
こ
I
l
い･(
f
3
31(
､
川1
I
い←
i
t
L
I｡=1
.
1
mL
l
トI
ilL
l
n
L
lr
i
二
l
i
､
,s
ugg
es
t
i
nga
c
t
i
vet
r
a
ns
por
toft
he
一
oc
a
l
i
z
i
ngf
i
uor
opho
r
et
r
a
ns
por
tt
oa
r
eabe
t
we
e
na
pI
C
a
ime
mbr
a
nesofa
d
j
a
c
e
nthe
pa
t
oc
yt
e
s
nL
ol
r
l
Bt
'
←
≡
t
L
'& i
)=ご
r
l
l
mL
tL
1i
-ur
r
i
l
L
l
emL
l
l
lいrI
.
L
l
画一
not
､
i
I
t
亡
r
L
l
→
t川1
i
l
L
l叩 1
こ
1
1
.
L
l
)i
nh'
こ
=rt
i,i
l
t
t
l
←
l
r
l
l
l
i
H
ざL
I
｡1
1
L
l
t
.
T
l
t
l
'
t
t
1
0t
.
Ot
,
I
川ビ̀i
t
i
vet
r
a
ns
por
tOft
hef
i
uor
opbo
r
ef
r
om s
i
nus
oi
da
ls
pa
c
e(
S)t
obi
l
es
pa
c
e(
BP)
.Thewhi
t
er
e
c
t
a
ngt
t
i
a
Tr
e
gi
(
)
nofi
nt
e
r
e
s
ti
nで
T
a
me
r
e
af
r
ombl
oodt
obi
l
e(
s
i
nus
oi
dt
oc
a
r
l
a
i
i
c
ui
us
)
,wasqua
nt
i
t
a
t
i
v
e
l
yas
s
e
s
s
e
d(
f
r
a
meD)
,a
nds
ugge
s
t
e
d
B2,S
pa
nni
nga
n1
8･
3Pma
.
､･ ･
い一 一
":
･‥ -いミ -･
l
･
･
･ ト 一 ･･- :
-い' ､
Bい .
･
･
J･＼'
･･
!
･
11
.
､
･
い･!
･
- ､ ､､ ･
-･
l
:
､I
-･
- ､･･･
1
･
こ
＼:
i
ns
i
nus
oi
da
is
pa
c
e(
S)
.
Al
s
oe
vi
de
nti
sa
ni
nc
r
e
a
s
eま
nC
yt
OS
Ol
ま
C(
Cyt
)c
onc
e
nt
r
a
t
i
or
10
ft
hef
i
uoT
OPhoT
e,
Whi
l
enof
l
uor
e
s
c
e
nc
ewa
s
も
ra
t
e
dc
onc
e
nt
r
a
かet
r
a
ns
por
tO
ff
l
uor
e
s
c
e
ntpr
obe
sf
r
om b呈
oodt
o
de
t
e
c
t
e
di
nt
hent
i
C
i
e
us(
HN)
.The
s
et
ype
sofs
t
udi
e
sde
mons
bi
l
ec
a
nbei
ma
ge
da
ndqua
nt
i
t
a
t
i
v
e
l
ye
va
l
ua
t
e
di
nvi
vo.Al
s
oi
l
l
us
t
r
a
t
e
di
st
he
l
t
l
t
i
i
i
t
yoff
王
uoT
OPhor
e
ss
uc
ha
s針呂odi
pyC5phos
i
,duc
t
ul
e
sa
ndduc
t
s
hConf
oc
a
li
ma
農e
SCa
pt
ur
e
dwi
t
haa
poc
hr
oma
も
i
cob
j
e
c
t
i
v
e
ラ1
.
2NA
phoc
hoi
i
nei
ne
l
uc
i
da
t
i
ngbi
l
ec
a
na
l
i
c
ui
sLSM 5
壬
0.
wi
G
O
r
r
e
C
ぬr
i
,
488nme
x
c
i
t
a
t
i
on,
Ze
i
s
β
-
二
r lI-
5
7
I
nvi
v
oi
ma
gi
ngi
nSTI
Ime
da
ka(
Or
y
z
i
asl
at
i
pe
s
)
Bl
oodt
o甲1
eTr
anspor
tl
nVi
vo:pBodi
pyC5Phosphochol
i
ne(
HPC)
,Bodi
pyC5Cer
ami
de,
FI
uor
escer
nl
sot
Mocyanat
e(
Fl
TC)
,
Ar
eaAver
ages,ST…Medaka12dpf
0
9
pBodi
pyC5Phosphocho暮
i
ne(
HPC)
0
8
o
7
0
6
0
7. 0
6
0
5
0
5
0
4
J
0
4
O
3
0
3
0
2
0
2
0
1
0
1
0
^
)
!
su
I
aul
O
Oua
DS
巴OnJ
LO>!
t
ePt
J
o
8
着 su
a
t
uJ
0
9u0
9S
aOnl
jO^!
t
e]
atI
0
9
Al
l
HPC RTC CerHPCF汀C Ce
r HPCFr
T
C Cer
BI
o
o
d
Bi
l
e
Cy
t
o
s
oI
Bodi
pyC5Cer
ami
de
80
70
70
｣倉sual
u[3u
8S
e
J
OnEa
^!
t
ePt
J
80
50 40
50 40
a
J
30
30
20
20
10
10
0
0
一t
J
〇
Bi
暮
e
Cy
t
os
o
I
60
8
60
l
倉 suau(
aOuaD
S 0⊃一山a^ 葛
Bl
o
o
d
BE
o
o
d
Cy
t
os
o暮
Bi
L
e
Ft
est
:Hypot
hesi
z
edRat
i
o≡1
CanaHcul
ar
Cy
t
os
oI
Si
nu
s
oi
d
トv
al
ue
pv
al
ue
Fv
al
u
e
pv
a一
ue
Fv
al
u
e
pv
a山e
C5Cer
ami
de:FI
TC
1
.
0
26
0.
9665
38.
508
<.
0001
1
8.
672
0.
0001
C5Cer
ami
de:
HPC
0.
1
1
7
0.
001
9
1
7
.
1
09
0.
0002
28.
41
3
<.
0001
FI
TC:
HPC
0.
1
1
4
く
∴
0001
0.
444
0.
0686
1
.
5
22
0.
341
2
Fi
gur
e7
･Qua
nt
i
t
a
t
i
v
ea
na
l
ys
i
so
fbl
oodt
obi
l
et
r
a
ns
por
ti
nvi
v
o:PI
Bodi
pyC5phos
phoc
hol
i
ne(
HPC)
,f
l
uo
r
e
s
c
e
i
ni
s
ot
hi
oc
ya
C)a
ndBodi
pyC5c
e
r
a
mi
de.Qua
nt
i
t
a
t
i
v
ea
na
l
ys
i
sofdi
f
f
e
r
e
nt
i
a
lbl
oodt
obi
l
et
r
a
ns
por
tbe
t
we
e
npBodi
pyC5phos
I
na
t
e(
FTI
,f
l
uor
es
c
e
i
ni
s
ot
hi
oc
ya
na
t
e(
FTI
C)a
ndBodi
p
yC5c
e
r
a
mi
de
.Al
lf
l
uo
r
ophor
e
swe
r
ei
ma
ge
di
nv
i
voa
tpe
a
k
phoc
hol
i
ne(
HPC)
upt
a
ket
i
me
s(
Ta
bl
e1
)
A
Di
f
f
e
r
e
nc
e
si
nbl
oodt
obi
l
et
r
a
ns
por
tbe
t
we
e
na
l
lt
hr
e
ef
l
uo
r
opho
r
e
sa
r
es
ug
ge
s
t
e
dwhe
nme
a
s
ur
e
dva
l
ue
s
(
me
a
ns
)off
l
uor
e
s
c
e
nc
ei
nt
e
ns
i
t
ya
c
r
os
ss
i
nus
o
i
d,c
yt
os
ola
ndc
a
na
l
i
c
ul
a
rs
pa
c
e
swe
r
ea
s
s
e
s
s
e
d.Themos
tma
r
ke
ddi
f
f
e
r
e
nc
e
s
we
r
ebe
t
we
e
nβBodi
pyC5phos
phoc
hol
i
nea
ndf
l
uor
e
s
c
e
i
ni
s
ot
hi
oc
ya
na
t
e
,a
ndBodi
pyC5c
e
r
a
mi
de･Thi
s竺a
sc
o
ns
i
de
r
e
dt
o
beduet
o(
bas
e
doni
nvi
voo
bs
e
r
va
t
i
ons
)a
c
t
i
v
et
r
a
ms
.
por
tofbot
hβBodi
pyC5phos
phoc
hol
i
nea
ndf
l
uor
e
s
c
e
l
ni
s
o
t
hi
oc
ya
na
t
e
vs
･pa
s
s
i
v
et
r
a
ns
por
tofBodi
pyC5c
e
r
a
mi
de
･I
nt
e
r
es
t
l
ngl
y
,whi
l
et
he
r
ewa
sc
l
e
a
rc
onc
e
nt
r
a
t
i
ono
ft
hec
e
r
a
mi
def
l
uo
r
o
pho
r
ei
n
t
hec
a
na
l
i
c
ul
us
,t
r
a
ns
por
toft
hef
l
uor
e
s
c
e
ntc
e
r
a
mi
des
a
wde
c
r
e
a
s
e
df
l
uor
e
s
c
e
nc
ei
nt
e
ns
l
t
yi
nt
hec
yt
os
ol
,a
sc
ompa
r
e
dt
obot
h
s
i
nus
o
i
da
ndc
a
na
l
i
c
ul
us
･
Equa
l
i
t
yo
fva
r
i
a
nc
eトー
e
s
tc
ompa
r
i
ngme
a
s
ur
e
dva
l
ue
s(
r
e
pe
a
t
e
dme
a
s
ur
e
s
,whi
c
hva
r
i
e
df
r
om 30t
o7
0
de
pe
ndi
ngonnumbe
ro
fs
t
a
c
ksa
nda
va
i
l
a
bl
ef
i
e
l
ds
)i
nc
yt
os
ol
,s
i
n
us
oi
da
ndc
a
na
l
i
c
ul
a
rs
pa
c
e
sa
r
egi
v
e
nwi
t
hpva
l
ue
s
.
58
R,
C.1
1こ
1
1
･
L
l
)
1
1
こ
l
T
lL
･
[(
I
/
.
F圭
gl
及
T
e8.Ⅰ
nvi
voi
ma
gi
ngofhe
pa
t
obi
i
i
a
r
yr
e
s
pons
et
oANI
Te
xpos
ur
e:c
a
ヱ
1
a
i
主
c
ui
a
ra
t
t
e
nua
t
i
on皮di
l
a
t
i
on.(
A)I
nvi
v
oc
onf
oc
a
l
,not
eun拍)
r
mi
t
yofdi
a
me
t
e
rOfI
HBPs
.(
BBl
)I
nvi
v
oc
onf
oc
a
ii
ma
geo
fAN王
Tt
r
e
a
t
e
d
i
ma
geofunt
r
e
a
t
e
dme
da
kal
i
v
e
r(
30dpf)
me
da
kal
i
ve
r(
24dpf
)S
howi
ngdi
l
a
t
e
da
nda
t
t
e
nua
t
e
dbi
l
ec
a
na
l
i
c
ul
i(
r
e
da
r
r
o
whe
a
dpoi
nt
st
oa
t
t
e
nua
t
i
on,whi
t
et
odi
l
a
t
i
on)a
t48
hr
spos
te
x
pos
t
i
r
et
O2.
5PM AN T.
Onl
yt
hei
nt
r
a
he
pa
t
i
cbi
i
i
a
r
ypa
s
s
a
ge
wa
ysa
r
ef
l
uor
es
c
e
nt(
FI
TC,
gr
e
e
n)
.
Pa
r
e
nc
h
ymai
sl
a
r
g
e
l
ynonf
l
uor
e
s
c
e
nt
,a
s
i
def
r
om we
a
ka
nddi
f
f
us
ef
l
uor
es
c
e
nc
eofhe
pa
t
oc
e
i
l
ui
a
rc
yt
os
oi
.(
Bl
)Di
l
a
t
e
dc
a
na
l
i
c
ul
i(
bl
a
c
ka
r
r
o
whe
a
d;
e
一
uc
i
da
t
e
dwi
t
hFI
TC)we
r
ef
oundt
obeupt
oa
ppr
oxi
ma
t
e
一
y3t
i
mesnor
maldi
a
me
t
e
r(
e% 3[
9いm di
a
me
t
e
ri
ndi
l
a
t
e
dvs
.i
.
3ドm
4
a
v
e
r
a
gedi
a
me
t
e
ri
nnor
ma
lc
a
na
l
i
c
ul
i
)
.
At
t
e
nua
t
e
dc
a
na
l
i
c
ul
iwe
r
edi
s
t
i
nc
t
,a
ppe
a
l
ウ
i
nga
sf
i
nes
i
nuouspa
s
s
a
ge
wa
ysme
a
s
ur
i
ng0.
Pm t
O0.
8けm i
ndi
a
me
t
e
r(
*
c
a
na
i
i
c
uia
ra
t
t
e
nua
t
i
onj
di
i
a
t
i
onwa
snotr
e
a
di
l
ya
ppa
r
e
nti
nhi
s
t
oi
ogi
c
a
la
ndul
t
r
a
s
t
r
uc
t
ur
a
ls
t
t
ま
di
e
s
)
.
(
C)No
ni
r
l
Va
S
i
vei
nvi
voc
onf
oc
a
ii
ma
ge1
0da
yspos
te
x
pos
t
l
r
et
O2,
5PM ANⅠ
T(
c
hr
oni
ce
xpos
ur
e
)i
l
l
us
t
r
a
t
i
ngbi
l
epr
e
dt
i
C
t
u.
i
a
rl
es
i
ons(
r
e
da
r
r
owhea
ds
)
,c
ha
r
a
c
t
e
r
i
z
e
dbyl
os
sofpr
e
duc
t
ul
eme
mbr
a
nei
nt
e
gr
i
t
ya
ndl
os
so
ft
l
ni
f
or
mi
t
yi
ni
ume
ndi
a
me
t
e
r
Ⅰ
nt
r
a
he
pa
t
i
cbi
l
i
a
r
ypa
s
s
a
ge
wa
yse
l
uc
i
da
t
e
dhe
r
ewi
t
hBodi
pyC5Ce
r
a
mi
de･Bl
a
c
ka
r
r
owhea
di
i
i
us
t
r
a
t
e
sa
ppe
a
r
a
nc
eofno
r
ma
l
bi
l
epr
e
duc
t
ul
e.(
Ci
)Tr
a
ns
mi
s
s
i
one
l
e
c
t
r
onmi
c
r
ogr
a
phi
l
l
us
t
r
a
t
i
ngc
ha
nge
st
obi
l
epr
e
duc
t
ui
a
re
pi
t
he
ま
i
a(
BPDEC)a
s
s
oc
i
a
t
e
dwi
t
h
pr
e
duc
t
ul
a
r一
e
s
i
ons
,whi
c
hs
howe
di
nc
r
e
a
s
e
dc
yt
os
oi
i
ca
r
e
aa
ndva
c
uo
l
a
t
i
on(
r
e
da
r
r
o
whe
a
d)
.王
nvi
voobs
e
r
va
t
i
onshe
l
pe
dl
e
a
dt
o
t
hehypot
hes
i
st
ha
tANI
Ti
r
)
血c
e
dBPDECt
oxi
c
i
t
yl
Sr
es
pons
i
bl
ef
orbi
一
epr
e
duc
t
ul
a
rl
e
s
i
onsobs
e
r
ve
d,a
ndt
ha
tt
he
s
ec
e
l
l
sa
r
e
e
a
r
l
yt
a
r
ge
t
so
fANI
Tt
o
xi
c
i
t
y,
wi
t
hhe
pa
t
oc
e
l
l
ul
a
rr
es
pons
esobs
e
r
v
e
ds
t
i
bs
e
que
ntt
oBPDECT
e
S
POr
i
S
e.
(
D)Exa
mpi
eof3
Dr
e
c
ons
t
r
l
ユ
C
t
i
onofda
ma
ge
dpr
e
duc
t
ul
er
e
v
e
a
l
st
heda
ma
ge
dbi
l
epas
s
a
ge
wa
y(
gr
e
e
n)wa
sbi
i
r
i
de
ndi
ng,noti
nt
e
r
c
or
l
ne
c
t
e
dwi
t
hot
he
r
e
)
,s
ugge
s
t
i
ngt
heda
ma
ge
d
s
e
gme
nt
so
ft
hei
nt
r
a
he
pa
t
i
cbi
l
i
a
r
yne
t
wor
k.Al
s
os
ho
wna
r
ebi
l
epr
e
duc
t
ul
a
re
pi
t
he
l
i
a
呈c
e
i
l
s(
pur
pl
a
r
e
awa
sac
a
na
i
i
c
ul
opr
e
duc
t
ul
a
rj
unc
t
i
on｡
Ⅰ
n(
A,
B,
Bi
)Ⅰ
HBPse
l
uc
i
da
t
e
dwi
t
hFI
TC,
i
n(
C)wi
t
hBodi
pyC5c
e
r
a
mi
de.
-
o
neo
ft
hemos
ti
mpo
r
t
a
n
tf
a
c
t
o
r
swa
st
het
e
mpo
r
a
ls
c
a
l
eo
fs
t
ud
y
,ort
het
i
meo
fi
ma
g
ea
c
q
u呈
S
i
t
ヱ
O
n.
Mos
t鮎o
r
o
pho
r
e
sus
e
df
o
ri
n
v
e
s
t
i
ga
t
i
o
no
fbl
ood
t
obi
l
et
r
a
ns
po
r
twe
r
eo
bs
e
r
v
e
dt
obea
s
s
i
mi
l
a
t
e
d
h
y1
1
1
e
dl
l
kL
lr
L
l
i
l
l
yl
叩i
dl
y(
1
ト二
01
1
1
i
l
l
ut
e
Sr
ot
-i
ni
t
i
a
lu
pt
a
kef
r
o
ma
qt
i
e
O
uSba
t
h)
.Pe
a
ku
pt
a
ke(
o
r
5も
090mi
n
ut
e
si
a
t
e
T
,
s
a
t
ur
a
t
i
o
n)
,oc
c
ur
r
e
ds
ome1
de
pe
ndi
ngo
nt
he鮎o
r
o
pho
r
eus
e
d(
Ta
bi
eり.
He
n
L
t
L
l
.i
l
一L
l
e
v
e
l
opi
n
L
ei
l
一＼
r
i
＼
･
ol
l
l
e
t
l
l
Odol
o
gyf
or
q
ua
nt
i
f
yi
n
ghe
pa
t
o
bi
王
i
a
r
yt
r
a
ns
po
r
t
,S
e
v
e
r
a
lke
y
e
l
e
me
n
t
swe
r
e
l
a
r
er
e
q
血e
d.Fi
r
s
t
,u
pt
a
ke
,di
s
t
r
i
but
i
on a
ndも
r
a
ns
po
r
to
f呈
ndi
vi
dua
i鮎o
r
o
pho
r
e
s
-
-
-
ゝ
l
l
いul
dl
l
L
I
L
)
Jl
ul
lL
l
l
l
l
l
l
･
l
l
L
lC
l
l
i
/
,
a
t
i
ol
lf
orゝ
t
l
川し
1
1
t
r
L
I
i
/
t
i
ono
fpr
ot
oc
o
l
s
.Thi
se
n
ii
m
sc
ha
r
a
c
t
e
r
i
z
i
ngt
e
mpo
r
a
lc
ha
ng
e
s
,a
swe
Ha
st
hee
f
f
e
c
to
f鮎o
r
o
p
ho
r
e
c
o
nc
e
n
t
r
a
t
i
on(
a
q
ue
o
usba
t
h)o
nu
pt
a
kea
ndt
y
a
ns
po
r
tdyna
mi
c
s
/
ki
ne
t
i
c
s
.互
no
uri
n
v
e
s
t
i
ga
t
i
onsr
l
or
ou"t
u
dy1
1
1
1
dt
h
ot
l
0u
ghJe
t
e
H1
1
i
1
1
i
l
【
i
onoi
lf
l
u
ol
pho
r
edyna
mi
c
s
j
ki
ne
t
i
c
si
nvi
v
owa
sno
tpos
s
i
bl
e
l
L
山l
et
Ot
h
L
ll
こ
I
L
t
kot
､
i
lL
I
e
L
l
i
L
･
L
l
t
ビ
dL
･
川l
t
bL
l
こ
l
li
ns
t
r
u1
1
1
e
l
l
l
l
l
dl
i
l
l
l
e
･l
nl
i
C
L
101
､
t
hi
s1
,
vt
l
亡OrL
l
h
こ
I
t
'
こ
I
L
l
t
.
r
i
/
1
l
l
i
川1
.
pe
a
ku
pt
a
ket
i
me
s
,
a
ndat
i
mef
r
a
mes
u
bs
e
q
ue
n
tt
o
pe
a
kt
i
Pt
a
keも
i
met
ha
ta
Ho
wsf
or
i
nvi
v
oi
ma
gi
n
g
a
ndq
ua
nt
i
t
a
t
i
o
no
fも
r
a
ns
po
r
t
,wa
sde
t
e
r
mi
ne
df
o
r
.こ 1 -
-
g
'O
-
-
l
l
ni
､
.
いi
1
1
1
L
l
i
l
i
1
ぎi
l
バr
rl
tl
l
l
山l
こ
I
k
i
lL
l
)
/
.
.
I
,
こ
J
'
`
L
L
t
'
/
`
l
l
t
l
/
･
(.
り
59
F畳
gur
e労政 互
nvi
v
oi
ma
爵i
ngo
fhe
pa
t
o
bi
l
i
a
r
yr
e
s
pons
et
oAN汀 e
x
pos
u
r
e:h
y
dr
o
pi
cv
a
c
uo
l
a
t
i
o
n,AN汀 c
on
c
e
nt
r
a
t
i
o
ns(
a
q
ue
o
usba
t
he
x
pos
ur
e
s
)of2t
o8pM T
e
S
uま
t
e
d呈
nama
r
ke
d"
p
e
b
b
i
i
n
go
ft
he呈
i
v
e
r
L
Thi
st
e
T
mi
no
i
o
gywa
sus
e
d血e
5
t
OmO
r
P
ho
呈
o
g
i
c
a
旦
a
ppe
a
r
a
nc
eo
ft
hel
i
v
e
r
,f
i
r
s
tO
bs
e
r
v
e
di
nvi
v
owi
t
hwi
de
f
i
e
i
df
i
uo
T
e
S
C
e
n
C
em主
C
T
OS
C
O
P
y
.(
A)ST喜
言me
da
kac
on
t
r
o
l
,i
6d
pf
,s
h
o
wi
n
gt
her
1
0
r
ma
ls
moot
ha
ppe
a
r
a
r
l
C
eO
ft
hepa
r
e
n
c
h
ymai
nvi
v
oa
sv
i
e
we
dwi
t
hwi
d
e
f
i
e
i
df
l
u
o
r
e
s
c
e
nc
emi
c
r
os
c
o
pya
t2
4hr
s
.
Li
v
e
r
L
tn S
l
lll
l
l
L
l
山kl
.二
日L
I
r
,
(
.､
＼
'
i
JL
l
r
i
JJr
l
u
L
,
r
e
ml
n
L
I
L
tI
ご
T
r
r
Ci
ⅢL
l
F
L
Ii
,
i
l
l
t
ur
L
l
＼i
l
t
L
l
州.
こ
l
l
i
t
l
L
t
It
h
Hl
i
ヽ
l
i
1
1
L
l
ll
l
l
I
T
.
州L
l
h
リ1
1
i
l
l
(
L)
.L
I
T
L
1
t(
.
(
1
7
1
)
.l
t
3
ni
n
v
a
s
i
v
ei
nvi
v
oi
ma
gl
n
ge
l
u
c
i
da
t
e
dwha
ta
ppe
a
r
e
dt
obeo
va
t
es
t
r
uc
t
ur
e
swi
t
hi
nt
hec
yt
os
o
l
pe
bbl
i
ngl
nr
e
s
pons
et
OAN肝.No
ofh
e
pa
t
oc
yt
e
s
,gi
v
i
n
gaPe
bb
i
e
da
p
pe
a
r
a
n
c
et
Ot
hepl
a
n
eo
ff
oc
usi
nt
hel
i
v
e
r
t
Thi
sphe
no
t
ypewa
so
bs
e
r
v
e
dwi
t
ht
hea
i
do
fa
u
t
o
f
ま
も
i
O
r
e
S
C
e
nC
ea
i
o
r
l
e(
DPAPj
UV,
TRⅠ
TC)
,
n
of
i
u
o
呈
4
0
Pho
T
e
SWe
r
en
e
c
e
s
s
a
r
yf
o
rVi
s
ua
ま
ま
Z
主
n
gt
hi
sc
e
i
Ma
rr
e
s
pons
e
.
Ga
呈
ibj
a
dd
e
T(
GB,
Si
n
us
o
i
d(
S)
チ(
D)AN汀 e
x
pos
e
dme
da
ka weres
i
mul
t
a
ne
o
us
l
yt
柁a
t
e
d雨t
ht
hen
uc
i
e
a
rs
t
a
i
nDAPⅠ(
a
q
t
l
e
OuSba
ぬ)t
oi
a
be
ihe
pa
t
oりI
t
Tl
l
一
一
し
=i
l
i
こ
I
t
･
)
･
叩i
l
h
L
t
t
i
こ
l
IL
:
L
l
=n
u
L
l
l
L
l
i
･:
＼f
l
L
l
r=けいI
l)
Al
1
Ic
l
叩いnl
T
･
L
lt
h
L
lh
叩i
t
t
いhi
l
i
こ
I
r
)
,ゝ
いI
L
l
n
一
､いrn
l
L
t
Jこ
I
L
こ
=､
､
L
l
r
亡i
l
一
一
こ
I
g
L
I
L
li
l
lヽ
･
i
ヽ
･
Oヽ
.
i
l
l
wi
de
f
i
e
呈
df
l
t
i
O
r
e
S
C
e
nC
emi
c
r
os
c
o
p
y
.The
s
ei
nv
e
s
t
i
ga
t
i
o
nsr
e
v
e
a
l
e
di
n
t
r
a
G
e
Hui
a
ro
v
a
t
es
t
r
uc
t
ur
e
s(
bl
a
c
ka
r
r
o
whe
a
d)di
dno
ti
a
be
i
wi
t
hDAPⅠ
,a
ndwe
r
edi
s
t
i
n
gui
s
ha
b
i
ef
r
o
mhe
pa
t
i
ca
n
db
i
l
呈
a
r
ye
pi
t
he
i
i
a
in
uc
l
e
i(
gr
a
ya
r
r
o
whe
a
d
)
,(
E&F)Ex
pe
r
i
me
n
t
si
n
v
e
s
t
i
ga
t
i
n
l
L
li
l
P
｡t
l
t
いト
i
一､
､
･
t
l
l
tI
1
L
l
汗州一
一
一
山､
＼
･
i
t
hl
'
0 PROll
∴川 u
L
l
l
C
i
L
lこ
I
L
l
i
L
lt
<
t
l
l
i
t
一
･1
Ⅰ
1
i
l
ぎ
亡E→
t
州ヽ
=
トul
1
i
k
L
tい1
'1
'
01
1
RO1
1i
I
1
いL
I
L
l
l
l
.
-ヽ
･
i
l
hL
l
｡1
ト
p
r
omi
s
e
dc
e
l
lme
mb
r
a
n
e
s
.(
F)I
nvi
v
oc
o
nf
oc
a
まま
ma
g
eo
fYO-PROー
呈
,aDI
Ca
r
)
dTRⅠ
TCc
o
mp(
)
s
i
t
e
.Ⅰ
r
lt
heg
r
a
ys
c
a
i
eD王
Ci
ma
g
e
h
y
d
r
o
pi
cv
a
￡
t
i
O
呈
e
s(
b
i
a
洩a
i
r
O
Whe
a
d)a
r
eT
e
a
di
i
ya
p
pa
r
e
nt
･As
s
oc
i
a
t
e
dwi
t
hhy
d
r
o
pi
c
,
v
a
c
u
o
旦
a
t
i
onwa
sas
呈
i
ghHnc
r
e
a
s
ei
na
po
pt
o
s
i
s
,
s
ugg
e
s
t
e
db
ygr
e
e
nf
l
uo
r
e
s
c
e
n
c
eo
fYOPROHc
e
i
it
yp
en
otkno
wn)
.
(
G)Se
mi
t
hi
ns
e
c
t
i
o
n(
t
oi
ui
di
n
eb
l
ue
)s
ho
wi
ngh
y
dr
o
pi
c
v
a
c
uo
i
a
t
i
o
n(
b
l
a
c
ka
T
T
O
Whe
a
d
)a
t24hr
s
,
4日M ANI
Td
os
e
･
Nume
r
o
usv
a
e
uo
l
e
sa
r
epr
e
s
e
n
ti
nas
i
n
gl
ef
i
e
l
d.(
H良Ⅰ
)Tr
a
ns
mi
s
s
i
o
n
ビ
l
L
I
L
lr
川川I
i
L
l
t
L
l
gr
i
l
l
h＼I
l
ur
l
h
ビ
rL
l
l
u
L
l
i
L
l
i
l
t
L
I
L
lh
y
t
l
r
ol
l
i
L
l＼
◆
こ
I
L
l
u
｡t
ハi
1
1h
いI
hh
L
l
,
こ
I
l
いL
t
yl
L
l
←I
l
l
l
こ
I
L
t
ki
l
l
.
I
州h
…1
.I
I
1i
u
l
L
=1
i
l
叩r
L
T
L
l
u
L
l
t
ul
と
I
rL
l,
i
l
h
ビ
1
i
こ
1
T
t
i
a
i
l
yt
oc
ompl
e
t
e
l
yf
i
l
l
e
dwi
t
he
l
e
c
(
bl
a
c
ka
r
r
o
wh
e
a
d,
i
)
･
Va
c
uo
l
e
sr
a
ng
e
df
r
o
m 2t
o1
0拝mi
ndi
a
me
t
e
ra
ndwe
r
ef
o
undt
obepa
l
l
i
l
I
i
t
l
r
i
l
l
l
･
こ
I
t
e
.
t
r
onL
l
L
･
1
1
kl
L
I
L
l
‖l
"
i
-
-
60
A.
C.
Ha
r
dma
netal
F呈
guT
ei
O.Ⅰ
nvi
voi
ma
gi
ngofhe
pa
t
o
bi
l
i
a
r
yr
es
pons
et
oANI
Te
xpos
ur
e:pa
s
s
i
vehe
pa
t
i
cc
onge
s
t
i
on,(
A)Wi
de
f
i
e
i
df
l
uor
e
s
c
e
nc
e
e,S
ho
wi
ngt
henor
ma
li
nvi
v
oa
ppe
a
r
a
nc
eofhe
pa
t
i
cva
s
c
ui
a
t
uT
e
DAPI
/
UV,c
ont
r
oHi
ve
r(
L)
,20dpf
,24hr
spos
tANI
Te
x
pos
ur
(
b一
a
c
ka
r
r
owhe
a
d)
.He
pa
t
i
cv
as
c
ul
a
t
ur
ea
ppe
a
r
sda
r
k(
nonf
l
uor
e
s
c
e
nt
)
･Epi
t
he
l
i
aofpa
y
e
nc
hymaa
ppe
a
r
sl
i
ghtgr
a
y･(
A&C)At4
spos
te
xpos
u
r
e,mode
s
tdi
l
a
t
i
onofhe
pa
t
i
cva
s
c
ul
a
t
ur
e(
bl
a
c
ka
r
r
owhe
a
d)wa
sobs
e
r
ve
dt
hr
oughoutt
hel
i
v
e
r
,a
s
ドM AN肝 ,24hr
T,
e
a
r
l
ya
s6hr
spos
te
xpos
ur
e.
I
ma
geBi
sDAPI
/
UV(
a
ut
of
l
uor
es
c
e
r
i
C
e
)
,i
ma
geCi
sTRI
TC(
a
ut
of
l
uor
es
c
e
nc
e
)
.(
D)At8pM ANI
24hr
s
,ma
r
ke
ddi
l
a
t
i
onoft
hei
nt
r
a
he
pa
t
i
cva
s
cul
a
t
ur
ewa
sobs
e
r
v
e
d(
DAP壬
/
UV)
,(
F
J
)I
nvi
v
oc
onf
oc
a
Hma
gi
ng,a
c
qui
r
e
da
t48
hr
spos
tANI
Te
xpos
t
i
r
e,C
Onf
i
r
me
ddi
l
a
t
i
ono
fi
nt
r
a
he
pa
t
i
cva
s
c
ui
a
t
ur
e(
bl
a
c
ka
r
r
owhe
a
d)wa
sapa
nJl
e
Pa
t
i
cr
e
s
pons
e,Oc
c
ur
r
i
ng
P)Tr
a
i
l
S
mi
s
s
i
one
l
e
c
t
r
on
uni
f
or
ml
yt
hr
oughoutt
hel
i
v
e
r
.Va
s
c
ul
a
t
ur
ei
sda
r
kgr
a
y,he
pa
t
oc
yt
esa
r
l
dt
he
i
rnuc
l
e
if
l
uor
es
c
egr
e
e
n,(
mi
c
r
ogr
a
ph(
8pM,20dpf
,48hT
SPos
te
x
pos
ur
e
)ofa
ni
nt
r
a
he
pa
t
i
cve
s
s
e
li
r
kANi
Tt
r
e
a
t
e
dme
da
ka,r
e
ve
a
l
i
nga
bnor
ma
ls
i
nu
s
oi
d/
e
ndot
he
l
i
a
lc
e
Hmor
phol
ogy(
S)
.
As
i
ngl
er
e
dbl
oodc
e
l
lc
a
nbes
e
e
ni
nt
hes
i
nus
oi
di
ume
n.
Endot
he
i
呈
umi
shi
gh一
ya
t
t
e
nua
t
e
d.
Ⅰ
nt
a
nde
m wi
t
hmor
phol
ogl
C
a
lc
ha
ngeswe
r
ec
ha
ngest
oc
a
r
di
o
va
s
c
ul
a
rf
unc
t
i
on;de
c
r
e
a
s
i
nghe
a
r
tr
a
t
ea
ndmot
i
l
i
t
ya
i
ongwi
t
h
Tゥ
wa
sobs
e
r
v
e
d
i
nc
r
e
a
s
ei
nva
s
odi
i
a
t
i
on,
i
nme
da
kae
xpos
e
dt
o0,
5ドM t
o8PM ANI
-
F
e
a
c
h鮎o
r
o
phor
ee
mpl
o
y
e
d.Wepr
o
vi
dei
nTa
bl
e
it
i
me
sa
twhi
c
h貝uor
e
s
c
e
nc
ewa
s鮎S
をo
bs
e
r
v
e
d
i
nt
hebi
i
i
a
r
ypa
s
s
a
ge
wa
ysoft
hel
i
v
e
r(
upt
a
ke
)
a
ndt
het
i
mewhe
n鮎or
es
c
e
nc
epe
a
ke
d(
s
a
t
ur
at
i
on)
.Af
t
e
rpe
a
kBuor
e
s
c
e
nc
ewa
sa
c
hi
e
v
e
d,鮎
r
e
s
c
e
nc
e(
鮎or
opho
r
ec
onc
e
nt
r
a
t
i
oni
nvi
v
o)wa
s
a
s
s
ume
dt
obea
tas
t
e
a
dys
t
a
t
ea
sl
onga
sme
da
ka
r
e
ma
i
ne
dunde
rc
ons
t
a
nte
xpos
ur
et
ot
he鮎o
恥
phor
ei
na
que
ousme
di
um.Att
hi
spol
nt
9t
r
a
ns
por
t
ki
ne
t
i
c
swe
r
ea
s
s
ume
dt
oha
v
er
e
a
c
he
de
q扇i
i
b
r
i
um(
a
Hhee
x
pos
t
王
r
eC
OnC
e
nt
r
a
t
i
onsgi
v
e
n)
.
Fort
he
s
es
t
udi
es
,i
twa
sde
c
i
de
dt
ha
ti
ma
ge
a
c
qui
s
i
t
i
onWoul
doc
c
urdur
i
ngt
hedmef
r
a
me
t
ha
ts
e
e
si
ni
da
lma
xi
ma
lupt
a
ke(
s
a
t
ur
a
t
i
on)
,or
t
het
i
mewhe
n鮎O
r
e
s
c
e
nc
ei
r
i
t
e
nS
l
t
yPe
a
ksa
ta
gi
ve
ne
xpos
ur
eC
OnC
e
nt
r
a
t
i
on,a
ndf
orapr
e
de
負ne
d
pe
r
i
odo
ft
i
mef
oHo
w呈
ngt
heons
e
tofpe
a
k鮎
,
O
-
-
O
-
T
eS
C
e
nC
e
,de
t
e
r
mi
ne
dpr
i
ort
OS
t
t
l
dy.The
s
ec
ha
r
l
l
L
IL
l
r
i
ド
I
i
L
l
ト､
＼
'
C
t
L
lr
Om1
し
=ohL
'uni
L
1
uL
lr
Ol
'L
T
i
l
L
l
1l
l
u
or
o
phor
e.He
nc
e
,i
nt
he
s
es
t
udi
es
,i
nvi
voi
ma
gi
ng
,
wa
sdonea
tt
heons
e
tpe
a
k鮎o
r
e
s
c
e
nc
ea
ndf
or
ona
v
e
r
a
ge,nOmor
et
ha
n3
0mi
nut
e
spos
tpe
a
k
爵uor
e
s
c
e
nc
e.
La
s
dy
,q
ua
nt
i
t
a
t
i
on皇
sba
s
e
doname
a
s
ur
eOf
鮎or
e
s
c
e
nc
ei
nt
e
ns
珪y,t
heuni
t
sof
b
whi
c
臨c
a
nva
r
y
l
叩l
hl
t
n
L
1い1
川.Pr
OI
i
l
C(
L
1
.
i.
L
l
叩州L
I
i
1
1
ぎい‖l
l
i
l
L
l
lL
br
i
ght
nes
s
,s
a
t
ur
a
t
i
on,gr
a
ys
c
a
i
e va
l
ue
)
.He
nc
e
,
t
he
r
ea
r
em油 i
pi
eva
r
i
a
bi
e
s(
pot
e
nt
i
a
i
i
yc
onf
o
undi
ngf
a
c
t
or
s
)t
ha
tne
e
dt
obec
ont
r
oi
3
e
df
ori
no
r
de
r
:
-.
i≡
.
ト.
[
しい i
､
Ulい- ■
.I
.
r
､
I
I
L
.
･
l
l･- 1
-.-･t
∴ト
I
I
L
l
mi
ni
ト
ー
L
l
r
L
I
L
lnuor
ol
l
l
l
川L
l
.
ii
l
lI
.
i
＼
'
い.
W呈
t
ht
hea
bov
ef
a
c
t
or
sa
c
c
ount
e
df
o
r
,pr
e
l
i
mi
na
r
yf
i
ndi
ngsonqua
nt
呈
t
a
donofi
nvi
v
ot
r
a
ns
po
r
t
s
ugges
tqua
nt
i
t
a
t
i
onoFhe
pa
t
ob損a
r
yt
r
a
ns
por
ti
n
Ⅰ
nvi
v
oi
ma
gi
n
g主
nSr勘 1
帽da
ka(
Or
yz
i
asl
at
桓e
s
j
(
l
l
Fi
拝ur
C
l1
l
･
1
:
.
＼
こ
l
ml
1
=(
工'
,
l
)I
.
L
I
L
I
L
一
一
一
ド
I
t
.
L
l
L
l
l
i
川-0日l
L
l
l
l
l
l
i
L
･i
)
L
I
I
TI
I
L
l
h
)
1
1
1
1
1r
I
川1
1i
I
='
i
､
.
いL
l
い1
f
l
い｡
1
1
1i
ml
l
ぎ
L
lト
はL
l
k:h‖L
lI
I
.
L
l
t
l
u
L
lul
亡
t
<i
l
l
l
L
11
I
.
ト
血c
t
u互
a
re
pi
t
he
l
i
a
lc
e
l
l
s
｡Sho
wni
sa
ni
s
ol
a
t
e
ds
e
c
t
i
o
no
ft
hepa
r
e
n
c
h
ymas
ho
wi
n
gt
he3
Dc
ha
r
a
c
t
e
r
i
s
t
i
c
so
fbi
l
epr
e
du
c
t
ui
a
re
pi
n
dbi
l
ep
r
e
du
c
t
ul
e
s(
BPD)
,t
hel
a
t
t
e
rauni
q
uemo
r
pho
l
o
gi
c
a
lf
e
a
t
t
m c
r
e
a
t
e
db
yj
un
c
t
i
o
na
lc
o
mpl
e
x
e
sbe
t
we
e
n
t
he
l
i
a(
BPDEC)a
1
3
Pl
)
l
三
rHl
n
Jh
叩I
l
い｡
)
.
(
t
t
←
･I
1
叩i
t
t
いL
l
)1
亡←
､､
､
'
hi
J-いし
･
L
l
ul
l
yl
h
ビn
L
l
gl
I
l
i
､
t
l
/
J
州l
l
t
y叩こ
I
L
I
L
l
∴l
l̀
…t
l
tr
州L
l
L
l
l
TL
II
l
or､
i
川こ
l
l
L
l
l
こ
I
t
.
i
t
)
'
,:
㌔L
l
i
=
1
1
1
1
i
L
l
ul
uゝ
(
a)i
ss
ho
wnj
o
i
ni
ngabi
l
epr
e
du
c
t
ul
e
.
Theba
c
kgr
o
un
dg
r
a
ys
c
a
l
ei
ma
g
ei
sas
i
n巌
i
ef
r
a
mef
r
o
mac
onf
o
c
a
ii
ma
g
es
t
a
c
k｡
Re
db
l
(
)
od
c
e
i
i
sa
r
es
e
e
nc
a
pt
ur
e
di
nc
i
r
c
ul
a
t
i
o
nt
hr
o
u
ghs
i
n
us
oi
dso
ft
he王
i
v
e
r(
S/
T
)
IToou
rkno
wl
e
d
g
et
hi
swa
sぬef
i
r
s
tr
e
nd
e
r
i
n
go
ft
h
i
s
j
t
l
n
C
t
i
o
na
ic
omp
l
e
x(
b
i
l
ep
r
e
d
uc
t
uk)i
n3di
me
ns
i
o
ns
,t
hee
v
a
l
ua
t
i
onwhi
c
hpi
.
O
V
i
de
dn
o
v
e
li
ns
i
gh
t
si
l
砿opa
r
e
nc
hyma
lo
r
g
a
nま
z
a
-
1
i
川
1 .
ST三
重me
da
kai
spos
s
i
bi
e
書Fo
Hns
t
a
nc
e
,e
mp漬C
a
i
o
bs
e
r
va
t
i
onss
ugg
e
s
t
e
d di
f
f
e
r
e
nt
i
a
lupt
a
ke a
nd
t
r
a
ns
po
r
tdyna
mi
c
s
j
ki
ne
t
i
c
sbe
t
we
e
n 8Bodi
py
L
1
5HP(
∴ BoL
I
i
t
l
yC5Ce
l
一
州1
i
deL
l
l
l
dt
l
L
l
川e
L
q
L
l
e
i
l
l
gi
t
a
li
mae
i
s
ot
hi
oc
ya
na
t
e
.Fo
rq
t
l
a
nt
i
t
a
t
i
on,di
c
a
pも
uF
e
Sf
y
om i
nvi
v
oi
n
v
e
s
t
i
ga
t
i
onswe
r
eC
on
v
e
r
t
e
dt
obo
t
hRGB 3
2bi
tc
o
l
o
r
,a
nd8bi
tgr
a
y
…
･
､
･
､
i
! =･
･
､･､
＼
t
､
･
L
t.
L
I
L
H･州.
車･
'
､
･
･
ts
l
.:
一
日ー
:
､
t
､
いい
､
沖､
t
hef
oHowi
ng t
ec
hni
ques
:r
e
gi
onsOfi
nt
e
r
es
t
A
:
t
.
'
り卜呈 ､∴= い i
･
一
､
･
日川 ＼
日日･
小日日･
.
三
･
;
も
･
･
･
･恒 ､L
t
oc
yt
ec
yt
os
o
i
ラa
nd c
a
na
l
i
c
t
i
i
a
r
/
bi
l
ep
r
e
duc
t
r
u
王
a
r
･H
u
oI
･
e
s
L
l
e
n
L
t
e
l
u1
1
1
e
HS
.ROI
sⅥ･
e
r
el
l
l
e
L
I
S
ur
e
dr
ol
g
i
1
1
t
州ゝ
i
l
)
't
l
｢
l
.
i
gh
l
n
C
ト
ト＼
'
こ
1
1
u
C)i
nbot
hRGB j
コhi
t
c
ol
o
r
,a
nd8bi
tg
r
a
ys
c
a
i
ei
ma
g
e
s
中音
na
n
yg
ま
V
e
r
l
i
ma
gem油i
pl
eROⅠ
swe
r
er
a
ndo
ml
ys
e
l
e
c
t
e
d,f
o
r
;
s
i
n
us
o
i
da
is
pa
c
e
,c
yt
os
o
呈s
pa
c
ea
ndbi
ks
pa
c
e
,
Fo
ri
ns
t
a
nc
e
,i
nas
i
n
gl
ec
o
nf
oc
a
ls
t
a
c
kmul
t
i
pl
e
-
pa
r
t
me
nt
s
,r
e
s
t
血 ngl
nr
e
pe
a
t
e
dme
a
s
ur
e
s
.The
s
e
､
.
=
!
=
L.
り1
.
i;
1
㌧.
､
､
!
,
i
/･.
L
､
･
.
＼
･
いt
.
､.
h､
､
､:
;､
＼.
h
､いI
l
.
･
.
i
,
a
r
e
ame
a
s
ur
e
df
o
rs
i
n
us
o
i
d,
c
yt
os
oia
ndbi
l
es
pa
c
e
･
､
L
､
h･=!
.
い:
いJT
い＼い
､い･
_
･王.
･
･
川.
日､
1
/
トJ
＼
､トー
-､
l
;
こ
t
i
s
も
呈
e
a
ia
na
l
ys
e
s
.Me
a
nswe
r
et
a
ke
nf
o
re
a
c
hs
e
to
f
t
･
､
;
八川･
しい'
t
!
･
L
い
､
･
1iー
＼い､
いiい.
r
t
･､
…
､
､
l
･
.
＼
･
:
.･
Hdミ
トー
､
i
J
.
L
6
2
R.
C.
Ha
r
d
ma
netal
.
f
o
rpl
ot
s
/
gr
a
phs
.De
s
c
r
l
Pt
l
V
eS
t
a
t
i
s
t
i
c
sa
swe
l
la
s
bi
va
r
i
a
t
ea
na
l
ys
e
swe
r
eus
e
df
わrq
ua
nt
i
t
a
t
i
ono
f
bl
oodt
obi
l
et
r
a
ns
po
r
t
.
Whi
l
edi
f
f
e
r
e
nc
e
sbe
t
we
e
n
Bodi
PyC5c
e
r
a
mi
de
,a
ndL
3
Bodi
pyC5HPCa
nd
f
l
uor
es
c
e
i
ni
s
ot
hi
oc
ya
na
t
e we
r
ee
xpe
c
t
e
d,t
he
mo
r
es
ubt
l
e,s
t
a
t
i
s
t
i
c
a
l
l
ys
l
gni
ic
f
a
n
tdi
f
f
e
r
e
nc
e
s
be
t
we
e
nL
3
Bodi
pyC5HPC a
ndf
luo
r
e
s
c
e
i
ni
s
ot
hi
oc
ya
na
t
e(
Fi
gur
e7)we
r
ee
s
pe
c
i
a
l
l
yi
nt
e
r
e
s
t
i
ng･
I
nc
ont
r
a
s
tt
oC5c
e
r
a
mi
de
,whi
c
he
xhi
bi
t
ski
ne
ト
i
c
smor
ec
o
ns
i
s
t
e
ntwi
t
hpa
s
s
i
v
edi
f
f
us
i
ona
c
r
os
s
c
e
l
lme
mb
r
a
ne
s
,t
hel
a
t
t
e
rt
wof
luo
r
o
pho
r
e
se
xhi
bi
t
e
dki
ne
t
i
c
smo
r
ec
ons
i
s
t
e
ntwi
t
ha
c
t
i
v
et
r
a
ns
por
t
.
Tha
tt
he
s
e di
f
f
e
r
e
nc
e
sa
r
eput
a
t
i
v
e
l
yi
ndi
c
a
t
e
d
he
r
ei
nq
ua
nt
i
t
a
t
i
v
er
e
s
ul
t
si
spr
oml
S
l
ngf
o
rf
ut
ur
e
i
nv
e
s
t
l
ga
t
i
onsi
nt
oq
ua
n
t
i
f
yi
ngt
r
a
ns
por
to
fs
o
l
ut
e
s
f
r
o
mbl
oodt
obi
l
ei
nvi
v
0.
3Di
me
ns
i
onalhe
pai
obi
l
i
ar
y ar
c
hi
t
e
c
t
ur
e
:i
n
v
i
v
os
t
udi
e
s
Noni
n
va
s
i
v
ei
nvi
v
oi
ma
gl
nga
l
l
o
we
dt
hege
ne
r
a
t
i
ono
f3
Dmode
l
soft
heme
da
kahe
pa
t
o
bi
l
i
a
r
y
s
ys
t
e
m.Us
i
ngc
onf
oc
a
lf
luo
r
e
s
c
e
nc
emi
c
r
os
c
o
py
(
LSCM)
,i
nt
a
nde
m wi
t
he
xoge
no
usf
luo
r
ophor
e
s
,
wewe
r
ea
bl
et
oe
l
uc
i
da
t
ehe
pa
t
oc
e
l
l
ul
a
r
,bi
l
i
a
r
y
a
ndva
s
c
ul
a
rc
ompone
n
t
so
ft
hel
i
v
e
r
.Br
i
e
ly;t
f
he
luor
f
es
c
e
n
tpr
o
be
s71
be
nz
y
l
o
xyr
e
s
or
uf
in (
7l
BR)
,
Bodi
pyC5HPC,Bodi
p
yFLC5c
e
r
a
mi
de
,DAPI
,
and f
l
uor
es
ce
i
ni
s
ot
hi
oc
yana
t
e(
FI
TC)we
r
e
a
dmi
ni
s
t
e
r
e
dt
ol
i
vi
ngSTI
Ime
da
kai
na
que
ous
ba
t
ht
oe
l
uc
i
da
t
es
pe
c
i
丘ce
l
e
me
nt
so
ft
hehe
pa
t
obi
l
i
a
r
ys
ys
t
e
m(
e.
g.he
pa
t
oc
yt
e
s
,e
ndo
t
he
l
i
a
lc
e
l
l
s
,
bi
l
i
a
r
ye
pi
t
he
l
i
a
,bi
l
epa
s
s
a
ge
wa
ys
)
･I
ndi
vi
dua
l
me
da
kawe
r
ee
xpos
e
dt
of
luo
r
o
pho
r
e
s(
a
que
ous
ba
t
h)a
tt
hef
o
l
l
o
wi
ngc
onc
e
nt
r
a
t
i
onsa
nddur
a
t
i
o
ns
:7
l
BR(
1
01
50PM,1
0t
o30mi
n
ut
es
)
,Bodi
py
,
C5HPC (
30 nMl
1
0 pM,1
0t
o3
0 mi
nut
es
)
Bodi
pyFLC5c
e
r
a
mi
de(
500nM-5ト
I
M,1
0t
o44
mi
nut
e
s
)
,FI
TC (
1nM-50pM,1
0t
o3
0mi
nut
e
s
)
.
Af
t
e
r1
5-45mi
n
ut
e
soff
luo
r
opho
r
ee
x
pos
ur
eSTI
I
me
da
kawe
r
es
e
da
t
e
d,
mount
e
donde
pr
e
s
s
i
onwe
l
l
gl
a
s
ss
l
i
de
swi
t
hc
o
v
e
rs
l
i
pa
ndi
ma
g
e
dl
i
v
eus
l
ng
c
onf
oc
a
lf
l
uor
es
c
e
nc
emi
c
r
os
c
opy (
LSCM)
,a
t
va
r
i
ouss
t
a
ge
so
fde
v
e
l
o
pme
nt(
8
-60d
pf
)
･
Conf
oc
a
ls
t
a
c
ksf
r
o
mi
nvi
v
oi
ma
gl
ngO
ft
he
he
pa
t
o
bi
l
i
a
r
ys
ys
t
e
m we
r
et
he
ni
mpo
r
t
e
di
nt
ot
he
3
Dr
e
nde
r
i
nga
nda
na
l
yt
i
c
a
ls
of
t
wa
r
e
,Ami
r
a3
D.
Conf
oc
a
ls
t
a
c
kswe
r
ec
ompr
i
s
e
do
fO･
5um t
o2
いm S
e
c
t
i
o
ns(
s
pa
c
ebe
t
we
e
ni
ndi
vi
d
ua
li
ma
ge
s
/
s
c
a
ns
)
,t
hough0.
5wa
smos
tc
ommonl
ye
mpl
o
y
e
d･
St
a
c
kswe
r
et
ypi
c
a
l
l
y90t
o1
20Pmt
hi
c
k(
de
pt
ho
f
s
c
a
n)
,t
ho
ughi
ns
omei
ns
t
a
nc
e
st
he
s
ewe
r
ec
ombi
ne
dt
oc
r
e
a
t
es
t
a
c
kso
fu
pt
o200いm i
nt
hi
c
k
ne
s
s
.3
Dr
e
c
ons
t
r
uc
t
i
onswe
r
et
he
nus
e
df
わra
r
c
hi
-
t
e
c
t
ur
a
l
,
mor
phome
t
r
i
ca
ndv
ol
ume
t
r
i
ca
na
l
ys
e
s
.
3
Da
na
l
ys
e
syi
e
l
de
di
mpor
t
a
nti
ns
i
ght
s
,whi
c
h
ma
y notha
v
ebe
e
n pos
s
i
bl
eus
l
ng S
t
a
nda
r
d2
di
mens
i
onalhi
s
t
ol
ogl
Caland ul
t
r
as
t
r
uct
ur
al
tal
.2007)
.Fo
r
me
t
hodol
o
gi
e
sa
l
one(
Ha
r
dma
ne
i
ns
t
a
nc
e
,3
Da
na
l
ys
e
sr
e
v
e
a
l
e
dt
ha
t
:(
1
)t
hehe
pa
t
i
c
pa
r
e
nc
hymai
sor
ga
ni
z
e
da
sahe
xa
gona
ls
t
r
uc
t
ur
a
l
mot
i
f(
po
l
y
he
dr
a
lt
e
s
s
e
l
l
a
t
i
on)
,e
vi
de
nti
nt
he丘ne
s
t
r
uc
t
ur
eo
ft
hebi
l
i
a
r
ys
ys
t
e
m;(
2)t
hebi
l
i
a
r
ys
ys
t
e
mi
sa
ni
nt
e
r
c
onne
c
t
e
dne
t
wo
r
ko
fc
a
na
l
i
c
ul
ia
nd
bi
l
epr
e
duc
t
ul
e
st
ha
tpe
r
f
us
e
st
hema
j
or
i
t
yO
ft
he
l
i
ve
rc
or
pus(
∼95%)uni
f
or
ml
y
,wi
t
he
qui
di
a
me
t
e
r
i
nt
r
a
he
pa
t
i
cbi
l
i
a
r
y pa
s
s
a
ge
wa
ys(
I
HBPs
)(
1
2
pm)obs
e
r
v
e
dt
hr
oughoutt
hel
i
ve
r
;(
3
)l
a
r
ge
rbi
l
e
duc
t
ul
e
sa
ndduc
t
swe
r
eo
bs
e
r
v
e
donl
ya
tt
hel
i
v
e
r
hi
l
us
,a
ndc
ons
e
que
nt
l
ya
na
r
bo
r
i
z
i
ngbi
l
i
a
r
yt
r
e
e
wa
sa
bs
e
nt
,s
e
e
nonl
yi
nt
her
udi
me
nt
a
r
ybr
a
nc
h1
ngOfi
nt
r
a
he
pa
t
i
cduc
t
sf
r
om t
hehe
pa
t
i
cduc
t
;
(
4)pa
r
e
nc
hyma
la
r
c
hi
t
e
c
t
ur
ei
sapr
e
domi
na
nt
l
y
2c
e
l
lt
hi
c
kmur
a
l
i
um,t
ho
ught
ubul
e
l
i
kef
わr
ma
t
i
onsma
ya
l
s
oc
ompr
i
s
et
hemur
a
l
i
um;(
5)t
he
l
i
v
e
r
so
ft
he
s
es
ma
l
l丘s
ha
r
er
e
pl
e
t
ewi
t
hBPDECs
,
t
heput
a
t
i
v
ema
mma
l
i
a
nc
o
r
ol
l
a
r
yofbi
pot
e
nt
i
a
l
pr
oge
ni
t
or
/
s
t
e
mc
e
l
l
s
;(
6)BPDECsa
ndhe
pa
t
oc
yt
e
sf
o
r
m unl
queJ
unC
t
i
ona
lc
ompl
e
x
e
st
ha
tc
r
e
a
t
ebi
l
epa
s
s
a
ge
wa
ys(
bi
l
epr
e
d
uc
t
ul
e
s
)
.
Thel
a
t
t
e
r
丘ndi
ngswe
r
eofpa
r
t
i
c
ul
a
ri
nt
e
r
e
s
tgl
Ve
ni
mpor
t
a
nc
eo
ft
he
s
ec
e
l
lt
ype
s
,a
ndwe
r
ema
depos
s
i
bl
eby3
Di
nv
e
s
t
l
ga
t
i
o
no
fBPDEChe
pa
t
oc
yt
e
J
unC
t
i
ona
lc
o
mpl
e
xe
s
.Bye
xa
mpl
e;whe
ne
xpos
e
d
t
ot
he c
ompl
e
t
ec
a
r
c
i
noge
n di
e
t
hyl
ni
t
r
os
a
mi
ne
(
DEN)
,he
pa
t
oc
yt
e
sa
ndbi
l
i
a
r
ye
pi
t
he
l
i
a
lc
e
l
l
s
gi
v
er
i
s
et
ot
umo
r
soft
heme
da
kal
i
v
e
r(
Oki
hi
r
o
a
ndHi
nt
on1
999)
.Bot
hpa
r
t
i
a
lhe
pa
t
e
c
t
omya
nd
bi
l
e duc
tl
i
ga
t
i
on f
わl
l
o
we
d by hi
gh r
e
s
ol
ut
i
on
l
i
ghta
nde
l
e
c
t
r
onmi
c
r
os
c
o
pi
cf
indi
ngsi
nt
r
o
ut
(
Oki
hi
r
oa
nd Hi
nt
on 2000)ha
v
es
ho
wn s
ma
l
l
di
a
me
t
e
rbi
l
i
a
r
ye
pi
t
he
l
i
a
lc
e
l
l
st
ha
tf
o
r
mJ
unC
t
i
ona
lc
o
mpl
e
xe
swi
t
hhe
pa
t
oc
yt
e
s
.Fur
t
he
r
mor
e
,
t
hec
e
l
l
sl
i
ni
ngpo
r
t
i
o
nsoft
hei
nt
r
a
he
pa
t
i
cbi
l
i
a
r
y
s
ys
t
e
m be
t
we
e
nc
a
na
l
i
c
ul
ia
ndbi
l
i
a
r
yduc
t
ul
e
s
/
duc
t
spr
ol
i
f
e
r
a
t
ea
sr
e
s
pons
et
obi
l
ed
uc
tl
i
ga
t
i
on
o
rpa
r
t
i
a
lhe
pa
t
e
c
t
omy
.The
s
ec
e
l
l
s
,t
e
r
me
dbi
l
e
pr
e
d
uc
t
ul
a
re
pi
t
he
l
i
a
lc
e
l
l
s(
BPDECs
)(
Ha
mpt
o
n
e
tal
.1
988;Ha
mpt
o
ne
tal
･1
98
9)
,ma
ybet
het
e
l
e
l
os
te
qui
va
l
e
nto
fma
mma
l
i
a
no
va
lc
e
l
l
s(
Gol
di
ng
e
tal
.1
996;Fa
us
t
oa
ndCa
mpbe
l
12003
)
.Duet
o
t
he
i
rs
ma
l
ls
i
z
e
,t
he
s
ec
e
l
l
sa
r
enote
a
s
i
l
ys
e
e
n
i
ns
ur
v
e
yl
i
ghtmi
c
r
ogr
a
phso
fme
da
kal
i
v
e
r
.By
c
oupl
i
ngt
hi
st
r
a
ns
pa
r
e
nto
r
ga
ni
s
m wi
t
hs
pe
c
i
ic
f
luor
f
opho
r
e
s
,wea
r
ea
bl
et
o"
s
e
ei
ns
i
de
"l
i
vi
ng
o
r
ga
ni
s
mst
or
e
c
o
r
dno
r
ma
ls
t
r
uc
t
ur
ea
ndt
o
xi
c
a
l
t
e
r
a
t
i
ons
.Exa
mi
na
t
i
ono
f3
D mode
l
sr
e
ve
a
l
e
d
I
nvi
v
oi
ma
gi
ngi
nSTI
Ime
da
ka(
Or
yz
i
asl
at
i
pe
s
)
BPDECst
ooc
c
upyt
hec
e
nt
e
ro
funl
quemOr
ph01
0gl
C
a
lf
or
ma
t
i
onsc
r
e
a
t
e
dbybi
l
epr
e
duc
t
ul
a
re
pl
t
he
l
i
a
lc
e
l
l
sa
ndhe
pa
t
oc
yt
e
s(
Fi
gur
el
l
)
.
Fi
ndi
ngsf
r
om 3di
me
ns
i
ona
ls
t
udi
e
sa
l
s
os
ug一
ge
s
tt
hehe
pa
t
o
bi
l
i
a
r
ys
ys
t
e
mi
nme
da
kac
a
nbe
,a
s
ac
onc
e
pt
ua
lmode
l
,c
ons
i
de
r
e
das
l
ngl
ef
unc
t
i
ona
l
uni
to
ft
hev
e
r
t
e
br
a
t
el
i
v
e
r
,a
ki
nt
oi
ndi
vi
dua
luni
t
o
ft
hema
mma
l
i
a
nl
o
bul
e(
Ha
r
dma
ne
tal
.2007)
.
Whi
l
eourf
oc
uswa
st
hehe
pa
t
o
bi
l
i
a
r
ys
ys
t
e
m,i
t
s
ho
ul
dbee
vi
de
ntf
r
omt
he丘ndi
ngspr
e
s
e
nt
e
dhe
r
e
a
ndpr
e
vi
ous
l
y(
Ha
r
dma
ne
tal
.2007)t
ha
tt
he
s
e
t
ype
so
fi
nv
e
s
t
i
ga
t
i
ons(
3
D)i
not
he
ro
r
ga
ns
ys
t
e
ms
,us
l
ngt
hes
a
meors
i
mi
l
a
rme
t
hodo
l
ogl
e
S
,i
s
pos
s
i
bl
e
.
I
nv
i
v
oi
nv
e
s
t
i
gat
i
onxe
no
bi
ot
i
cr
e
s
pons
e
Beca
us
et
he a
bi
l
i
t
yt
oi
nves
t
l
ga
t
e Xe
nObi
ot
i
cr
e
s
po
ns
ei
nvi
v
oi
soneoft
hemos
tva
l
u,
a
bl
ef
e
a
t
ur
e
so
ft
heSTI
Ime
da
kaa
ni
ma
lmode
l
a
ndi
ma
gl
nga
tt
hec
e
l
l
ul
a
rl
e
v
e
lha
dnotbe
e
n
des
c
r
i
bed,c
har
ac
t
e
r
i
za
t
i
on ofnor
mal
c
y(
i
n
l
.Thi
swa
s
vi
v
os
t
r
uc
t
ur
e
/
f
unc
t
i
on)wa
se
s
s
e
nt
i
a
a
c
c
ompl
i
s
he
d by des
c
r
i
bi
ng t
he i
n vi
vo phe一
mot
ypesofi
ndi
vi
dua
lc
e
l
l
s
/
t
i
s
s
ues(
e.
g.he
pa
t
oc
yt
e
s
,bi
l
i
a
r
ye
pi
t
he
l
i
a,e
ndot
he
l
i
um)o
ft
he
he
pa
t
o
bi
l
i
a
r
ya
ndr
e
l
a
t
e
do
r
ga
ns
ys
t
e
ms
,a
nd3
D
s
t
r
uc
t
ur
eoft
hehe
pa
t
i
cpa
r
e
nc
hyma.Wi
t
hnoI
L
ma
l
c
yc
ha
r
a
c
t
e
r
i
z
e
dwewe
r
et
he
na
bl
et
oa
ppl
y
t
hi
se
x
pe
r
i
me
nt
a
ls
ys
t
e
mt
oi
n
ve
s
t
l
ga
t
et
O
XI
C
l
t
y
i
nvi
v
o.Todos
oweus
e
dt
her
e
f
e
r
e
nc
ehe
pa
,
t
ot
oxi
cant
sαna
pt
hyl
i
s
ot
hi
ocyana
t
e(
ANI
T)
a
nddi
e
t
hy
l
ni
t
r
os
a
mi
ne(
DEN)
.ANI
T ha
sbe
e
n
e
mpl
o
ye
di
nr
ode
nts
t
udi
e
st
oi
nv
e
s
t
l
ga
t
ebi
l
i
a
r
y
t
o
xI
C
l
t
yI
nc
l
udi
ngc
ho
l
e
s
t
a
s
i
sa
nda
r
bo
r
i
z
a
t
i
ono
f
ine
f
rdi
a
me
t
e
rpa
s
s
a
ge
wa
ys(
Ma
s
yuke
tal
l2003;
Pa
l
me
i
r
aa
ndRol
o2004;Fe
r
r
e
i
r
ae
tal
.2005)
.
DEN ha
sbe
e
n wi
de
l
ye
mpl
o
ye
dt
oi
nv
e
s
t
l
ga
t
e
neopl
as
t
i
cr
es
pons
e(
I
s
hi
ka
wa a
nd Ta
ka
ya
ma
1
979;Te
h1
993;Oki
hi
r
oa
ndHi
nt
on 1
999)
.I
n
vi
v
oi
nv
e
s
t
i
ga
t
i
ons(
r
e
s
po
ns
e
st
oxe
no
bi
ot
i
ce
xpos
ur
e
)We
r
ec
or
r
e
l
a
t
e
dwi
t
hhi
s
t
o
pa
t
ho
l
ogy
,ul
t
r
a
S
t
r
uc
t
ur
ea
ndi
mmuno
hi
s
t
oc
he
mi
s
t
r
yf
o
rva
l
i
da
t
i
ono
fx
e
no
bi
ot
i
cr
e
s
po
ns
e
/
t
o
xI
C
l
t
y.Ane
xa
mpl
e
ofnoni
nva
s
i
vei
nvi
v
os
e
r
i
a
la
na
l
ys
i
so
ft
hea
dul
t
c
ons
e
que
nc
eofe
a
r
l
yl
i
f
es
t
a
gee
xpos
ur
et
oDEN
i
sgl
Ve
ni
nFi
gur
e1
.Sho
wni
sa
ni
nvi
voa
s
s
e
s
s
一
me
nto
fne
o
pl
a
s
t
i
cr
e
s
pons
eo
ft
hel
i
v
e
r1
0mo
nt
hs
pos
te
xpos
ur
et
oDEN.Hi
s
t
o
pa
t
hol
ogyr
e
ve
a
l
e
d
t
het
umort
obec
o
mpr
i
s
e
do
fmi
x
e
dne
opl
a
s
msof
he
pa
t
oc
e
l
l
ul
a
ra
ndbi
l
i
a
r
yor
l
gl
n,a
ndwi
t
hf
oc
io
f
bi
l
i
a
r
yhype
r
pl
a
s
i
a‥
I
n vi
vo e
xami
na
t
i
onsofr
es
pons
esoft
he
l
i
v
e
rt
o ANI
Te
xpos
ur
er
e
ve
a
l
e
d di
s
t
i
nc
tdos
e
63
de
pe
nde
ntphe
not
ypl
CC
hanges
.By e
xa
mpl
e:
a
c
ut
ee
x
pos
ur
e
st
ol
l
3PM ANI
T(
a
que
o
usba
t
h)
r
e
s
ul
t
e
di
nc
a
na
l
i
c
ul
a
ra
t
t
e
n
ua
t
i
on a
nd di
l
a
t
i
o
n
whi
l
ec
hr
oni
ce
xpos
ur
e
st
o1
5ドM ANI
Tr
es
ul
t
e
d
i
nbi
l
epr
e
duc
t
ul
a
rl
e
s
i
o
ns
.Le
s
i
onsa
ppe
a
r
e
d,i
n
vi
v
o,a
sma
r
ke
dl
ydi
l
a
t
e
d(
upt
o6pm)a
ndd
ys
mor
phi
cc
a
na
l
i
c
ul
i
/
bi
l
epr
e
duc
t
ul
es
,s
ugges
t
l
ng
l
os
so
fhe
pa
t
oc
e
l
l
ul
a
r
/
bi
l
epr
e
duc
t
ul
eme
mbr
a
ne
i
nt
e
gr
i
t
y(
Fi
gur
e 8)
.ANI
Tc
onc
e
nt
r
a
t
i
onsof
31
6PM r
e
s
ul
t
e
di
naH
pe
bbl
i
ng"Phe
no
t
ype
,t
he
r
es
ul
tofhydr
opl
C Va
C
uO
l
a
t
i
on ofhe
pa
t
oc
yt
es
a
ndbi
l
i
a
r
ye
pi
t
he
l
i
a
lc
e
l
l
s(
Fi
gur
e9)
･Aque
o
us
ANI
Tc
onc
e
nt
r
a
t
i
onso
f6いM t
o8PM r
e
s
ul
t
e
d
i
naphe
no
t
ypl
CC
ha
ng
e
sc
ons
i
s
t
e
ntwi
t
hpa
s
s
i
v
e
he
pa
t
i
cc
onge
s
t
i
on.I
nvi
voi
nv
e
s
t
l
ga
t
i
o
nsr
e
ve
a
l
e
d
ama
r
ke
dc
a
r
di
o
va
s
c
ul
a
rr
e
s
pons
e
,whe
r
ea
l
ll
i
v
e
r
va
s
c
ul
a
t
ur
e
,bot
ha
f
f
e
r
e
nta
nde
f
f
e
r
e
ntv
e
s
s
e
la
nd
s
i
nus
oi
ds
,S
ho
we
di
nc
r
e
a
s
l
ngdi
l
a
t
o
r
yr
e
s
pons
et
o
i
nc
r
e
a
s
i
ngc
onc
e
nt
r
a
t
i
onsofANI
T(
Fi
gur
e1
0)
.
Thi
sr
e
s
po
ns
ewa
so
bs
e
r
v
e
dunde
rbot
ha
c
ut
ea
nd
c
hr
oni
ce
x
pos
ur
er
e
gl
meS
･I
nt
a
nde
m wi
t
hva
s
odi
l
a
t
i
onofhe
pa
t
i
cva
s
c
ul
a
t
ur
e
,wa
sac
onc
omi
t
a
nt
dos
ede
pe
nde
ntde
c
r
e
a
s
ei
nhe
a
r
tr
a
t
ea
ndmot
i
l
1
t
y･He
nc
e
,t
hema
gni
t
udeo
fbot
ht
heva
s
odi
l
a
t
i
on
a
ndhe
a
r
tr
a
t
er
e
s
pons
e
swe
r
edos
ede
pe
nde
nt
,a
nd
a
ppe
a
r
e
dt
obec
o
upl
e
d.
Summar
y
Weha
v
epr
e
s
e
nt
e
dhe
r
et
hede
v
e
l
opme
nta
nd
a
ppl
i
c
a
t
i
o
no
fnoni
nva
s
i
v
ei
nvi
v
ome
t
hodo
l
ogl
e
S
t
ot
hes
t
udyo
fbi
ol
ogi
c
a
ls
t
r
uc
t
ur
e
,f
unc
t
i
o
na
nd
xe
no
bi
ot
i
cr
e
s
po
ns
ei
nSTI
Ime
da
ka･
Thede
v
e
l
op一
me
nto
ft
hi
si
nvi
v
oi
nv
e
s
t
l
ga
t
Or
y"
S
yS
t
e
mHe
nc
o
mpa
s
s
e
dt
hev
a
l
i
da
t
i
ono
f23f
luo
r
e
s
c
e
ntpr
o
be
sf
o
r
i
nvi
vous
ei
nSTI
Ime
da
ka,a
nds
ho
we
df
o
rt
he
hr
s
tt
i
met
hea
ppl
i
c
a
t
i
ono
ff
luo
r
e
s
c
e
ntpr
obe
st
o
i
nvi
v
os
t
udyo
fc
e
l
l
sa
ndt
i
s
s
ue
si
nSTI
Ime
da
ka･
Wi
t
hc
onf
oc
a
lmi
c
r
os
c
opy,hi
gh r
es
o
l
ut
i
on (
<
l
um)i
nvi
v
oi
ma
gi
ngwa
sa
c
hi
e
ve
d,pe
r
mi
t
t
i
ng
f
ul
lobs
e
r
va
t
i
on ofi
nt
r
a
c
e
l
l
ul
a
rves
i
c
ul
a
rt
r
a
f
L
ic
f
ki
ngo
ff
luo
r
ophor
e
ss
uc
ha
sBodi
p
yFL C5
Ce
r
a
mi
de.Wi
t
ha
ne
x
pa
ndi
nga
r
r
a
yofmol
e
c
ul
a
r
,
pr
o
be
sc
oml
nga
va
i
l
a
bl
e
,i
nc
l
udi
ngq
ua
n
t
um dot
s
STI
Ime
da
kahol
ds
i
gni
ic
f
a
ntpot
e
nt
i
a
lf
o
rf
ut
ur
e
i
nvi
v
os
t
ud
y.The丘ndi
ngspr
e
s
e
nt
e
dhe
r
ea
l
s
o
s
ugge
s
tt
ha
ti
nvi
v
oqua
nt
i
t
a
t
i
onofhe
pa
t
obi
l
i
a
r
y
t
r
a
ns
po
r
ti
spos
s
i
bl
e
.Whi
l
et
r
a
ns
por
ts
t
udi
e
sa
r
e
pr
e
l
i
mi
na
r
y,t
he
s
e丘ndi
n
gss
ho
w STI
Ime
da
ka
pr
o
vi
deaunl
quea
ndi
nva
l
ua
bl
emode
lo
r
ga
ni
s
m
t
oi
nv
e
s
t
l
ga
t
ehe
pa
t
o
bi
l
i
a
r
yt
r
a
ns
po
r
ti
npl
S
C
i
ne
s
pe
c
i
e
s
.
La
s
t
l
y
,a
nds
i
gni
ic
f
a
nt
l
y
,i
st
hea
bi
l
i
t
yt
oi
nv
e
s
t
l
ga
t
ebi
o
l
ogi
c
a
ls
t
r
uc
t
ur
e
/
f
unc
t
i
o
nr
e
l
a
t
i
ons
hi
ps
,
6
4
R.
C.
Ha
r
d
ma
netal
.
a
ndx
e
no
bi
ot
i
cr
e
s
pons
e
,i
n3
D.Whi
l
ewor
ko
v
e
r
t
he l
as
tde
ca
dehasma
r
kedl
ya
dva
nc
e
d hi
gh
r
e
s
ol
ut
i
on 3
D e
l
uc
i
da
t
i
on ofs
t
r
uc
t
ur
e
/
f
unc
t
i
on
r
e
l
a
t
i
ons
hi
psa
tt
hemo
l
e
c
ul
a
ra
ndpr
ot
e
i
nl
e
v
e
l
s
ofbi
ol
ogi
c
a
lor
ga
ni
z
a
t
i
on,s
i
mi
l
a
ri
nf
or
ma
t
i
on
on or
ga
ns
ys
t
e
m s
t
r
uc
t
ur
ea
nd f
unc
t
i
on a
tt
he
c
e
l
l
ul
a
rl
e
ve
lha
sl
a
gge
d･Thea
bi
l
i
t
yt
oe
l
uc
i
da
t
e
bi
ol
ogl
C
a
ls
t
r
uc
t
ur
e
/
f
unc
t
i
onr
e
l
a
t
i
ons
hi
psi
na3
D
1
)a
d
va
nc
eo
uri
nt
e
r
pr
e
c
ont
e
xti
si
nva
l
ua
bl
et
o:(
t
i
v
e
/
di
a
gnos
t
i
c unde
r
s
t
a
ndi
ng ofno
r
ma
l
c
ya
nd
di
s
e
a
s
ei
nc
e
l
l
s
,t
i
s
s
uesa
ndo
r
ga
ns
,(
2)f
ur
t
he
rour
c
ompa
r
a
t
i
v
eunde
r
s
t
a
ndi
ngo
fo
r
ga
ns
ys
t
e
mont
o
ge
n
y/
s
t
r
uc
t
ur
e
/
f
unc
t
i
on,a
nd (
3)i
nt
e
g
r
a
t
ege
ne
t
i
c
a
ndmol
e
c
ul
a
ri
nf
o
r
ma
t
i
onwi
t
hs
ys
t
e
ml
e
ve
l
sof
bi
ol
ogl
C
a
lo
r
ga
ni
z
a
t
i
on･Thel
a
t
t
e
ri
spa
r
t
i
c
ul
a
r
l
y
i
mpo
r
t
a
nt
,a
soneoft
hema
i
nc
ha
l
l
e
ng
e
so
v
e
r
t
hene
xts
e
v
e
r
a
lde
c
a
de
swi
l
lbet
hei
nt
e
gr
a
t
i
on
a
ndi
nt
e
r
pr
e
t
a
t
i
ono
fs
u
bc
e
l
l
ul
a
ri
nf
o
r
ma
t
i
on(
e･
g･
ge
nomi
c
,pr
ot
e
omi
c
,me
t
a
bo
l
omi
c
)i
nr
e
l
a
t
i
ont
o
t
hec
ompl
e
xphys
i
o
l
o
gi
c
a
ls
ys
t
e
mi
nwhi
c
hH
omi
c
"
,
me
c
ha
ni
s
mso
pe
r
a
t
e.Ast
he
s
e丘ndi
ngss
ugge
s
t
STI
Ime
da
kapr
o
vi
deaunl
queme
a
nsbywhi
c
h
t
oi
nt
e
gr
a
t
eme
c
ha
ni
s
m oft
o
xi
c
i
t
y(
e
･
g･ge
nomi
c
,
pr
ot
e
omi
ci
nf
or
ma
t
i
on)wi
t
hphys
i
ol
o
gi
c
a
ls
ys
t
e
m
l
e
v
e
lr
e
s
pons
e
sa
ndphe
not
ypl
CC
ha
nge
si
nvi
v
o
(
t
heo
v
e
r
a
r
c
hi
nggoa
lofourl
a
bo
r
a
t
o
r
y
)
.Whi
l
e
ourf
oc
usha
sbe
e
nt
hehe
pa
t
o
bi
l
i
a
r
ys
ys
t
e
m,ot
he
r
o
r
ga
ns
ys
t
e
msa
r
ee
qua
l
l
ya
me
na
bl
et
oi
nvi
v
o
,
s
t
udy
,a
ndwer
e
ga
r
dt
hepot
e
nt
i
a
lf
わrdi
s
c
o
v
e
r
y
wi
t
hi
nt
hec
ont
e
xto
fi
nvi
voi
n
v
es
t
l
ga
t
i
o
ni
nSTI
I
.
me
da
ka
,a
ss
l
gni
丘c
a
nt
Acknowl
edgment
s
Tha
nkst
o Dr
.Da
vi
d Mi
l
l
e
r
,La
bor
a
t
o
r
yo
f
Pha
r
ma
c
o
l
ogya
ndChe
mi
s
t
r
y
,Na
t
i
o
na
lI
ns
t
i
t
ut
e
,Res
ea
r
c
h
ofEnvi
r
onme
nt
a
lHe
al
t
h Sc
i
e
nces
Tr
i
a
ngl
ePa
r
k,f
o
rpr
o
vi
di
nga
c
c
e
s
st
ot
he
i
rl
a
s
e
r
s
c
a
nnl
ngC
Onf
oc
a
lmi
c
r
os
c
o
pyf
a
c
i
l
i
t
y
,a
ndt
ot
he
DukeUni
ve
r
s
l
t
yl
nt
e
gr
a
t
e
dTわxi
c
ol
o
gyPr
ogr
a
m･
Thi
spubl
i
c
a
t
i
on wa
sma
de pos
s
i
bl
eby Gr
a
nt
Numbe
r1RoュRRO1
8
58
302f
r
o
mt
heNa
t
i
ona
l
Ce
nt
e
rf
orRe
s
e
a
r
c
hRe
s
our
c
e
s(
NCRR)
,ac
o
m,
pone
ntoft
heNa
t
i
ona
lI
ns
t
i
t
ut
e
so
fHe
a
l
t
h(
NI
H)
a
ndGr
a
ntNumbe
rR21
CA1
0608
401
Alf
r
om t
he
Na
t
i
ona
lCa
nc
e
rI
ns
t
i
t
ut
e(
NCI
)
,a
l
s
oac
ompone
nt
ofNI
H.I
t
sc
ont
e
nt
sa
r
es
ol
e
l
yt
her
e
s
pons
i
bi
l
i
t
y
o
ft
hea
ut
ho
r
sa
nddono
tne
c
e
s
s
a
r
i
l
yr
e
pr
e
s
e
ntt
he
of
Ac
i
a
lvi
e
wsofNCRRo
rNI
H.
Ref
er
ences
Boonac
ke
r
,E and Va
n Noor
den,CJ
.2001
.
Enz
yme c
yt
oc
he
mi
c
a
lt
e
c
hni
que
sf
o
rme
t
a
bol
i
cma
ppl
ngi
nl
i
vi
ngc
e
l
l
s
,wi
t
hs
pe
c
i
a
lr
e
f
-
e
r
e
nc
et
opr
ot
e
o
l
ys
i
s
･JHi
s
t
oc
he
m Cyt
oc
he
m
49(
1
2)
:1
473-8
6.
Da
Cos
t
a,
RS,Ande
r
s
s
on,H,Ci
r
oc
c
o,
M,
Ma
r
c
on,
NE a
ndWi
l
s
on,BC
.2005.Aut
of
l
uo
r
e
s
c
e
nc
e
c
ha
r
a
c
t
e
r
i
s
a
t
i
ono
fi
s
o
l
a
t
e
dwhol
ec
r
ypt
sa
nd
pr
l
ma
r
yC
ul
t
ur
e
dhuma
ne
pi
t
he
l
i
a
lc
e
l
l
sf
r
o
m
nor
ma
l
,
hype
r
pl
a
s
t
i
c
,
a
nda
de
no
ma
t
o
usc
ol
oni
c
muc
os
a
.
JCl
i
nPat
hol58(
7)
:7
661
7
4.
l
l
,J
S.2003.Ther
ol
eof
Fa
us
t
o,N a
ndCa
mpbe
he
pa
t
oc
yt
e
sa
ndo
va
lc
e
l
l
si
nl
i
v
e
rr
e
g
e
ne
r
a
t
i
on
a
ndr
e
popul
a
t
i
o
n.
Me
c
hDe
v1
20(
1
)
:1
1
7
-30･
Fe
r
r
e
i
r
a,M,Co
xi
t
o,PM,Sa
r
da
o,VA,Pa
l
me
i
r
a,
CM a
ndOl
i
ve
i
r
a
,PJ
.
2005.
Bi
l
ea
c
i
dsa
r
et
o
xi
c
f
ori
s
ol
a
t
e
dc
a
r
di
a
cmi
t
oc
hondr
i
a:apos
s
i
bl
e
c
a
us
ef
o
rhe
pa
t
i
c
de
r
i
v
e
dc
a
r
di
omyo
pa
t
hi
e
s
?
Cay
di
o
v
as
cTo
xi
c
ol5(
1
)
:
63
-73.
r
r
a
f
,C,La
l
a
ni
,EN a
ndAl
i
s
on,
Gol
di
ng,M,Sa
MR.1
996.Re
a
c
t
i
vebi
l
i
a
r
ye
pi
t
he
l
i
um:t
he
pr
oduc
tofapl
ur
i
pot
e
nt
i
a
ls
t
e
mc
e
l
lc
ompa
r
t
me
nt
?HumPat
hol27(
9)
:8
72-8
4.
1
992)
.Bi
l
eAci
d Bi
odi
ve
r
s
i
t
yi
n
Hage
y,L (
Ve
r
t
e
br
a
t
es
:Chemi
s
t
r
y and Evol
ut
i
ona
r
y
,Uni
v
e
r
s
l
t
yOf
l
mpl
i
c
a
t
i
on.PhD Di
s
s
e
r
t
a
t
i
on･
Ca
l
i
f
o
r
ni
a,Sa
nDi
e
go.
Ha
mpt
on,J
,La
nt
z,R,Go
l
dbl
a
t
t
,P,La
ur
e
n,Da
nd
Hi
nt
on,D.1
988.Func
t
i
ona
luni
t
si
nr
a
i
nbo
w
r
i
,Ri
c
ha
r
ds
o
n)l
i
v
e
r
:Ⅰ
Ⅰ
･
t
r
out(
Sa
l
moga
i
r
dne
Thebi
l
i
a
r
ys
ys
t
e
m.AnatRe
c
･221(
2)
:61
9634.
Ha
mpt
o
n,J
A,La
nt
z,RC a
ndHi
nt
o
n,DE･1
98
9･
Func
t
i
o
na
luni
t
si
nr
a
i
n
bo
wt
r
o
ut(
Sa
l
moga
i
r
dne
r
i
,Ri
c
ha
r
ds
on)l
i
ve
r
:Ⅰ
Ⅰ
Ⅰ
.Mor
phome
t
r
i
c
a
na
l
ys
i
so
fpa
r
e
nc
h
yma,s
t
r
o
ma
,a
ndc
o
mpone
ntc
e
l
lt
ype
s
･
AmJAnat1
85(
I
)
:5
8
173･
l
ma
n,Sa
ndHi
nt
on,
Ha
r
dma
n,R,Vo
l
z
,D,Kul
DE.2007
.An l
n Vi
vo Look a
tVe
r
t
e
br
a
t
e
Li
ve
rAr
c
hi
t
e
c
t
ur
e:3Di
me
ns
i
ona
lRe
c
o
ns
t
r
uc
t
i
onsf
r
o
mMe
da
ka(
Or
y
z
i
asl
at
i
pe
s
)
.
Anat
omi
7)
･
.
77018
2.
c
al
Re
c
.
290(
Hi
nt
o
n,D.
E.
,Se
gne
r
,H.
,Au,D.
H.
TW ,Kul
l
ma
n,
S.
K.
,a
ndHa
r
dma
n,R.Cha
pt
e
r7
.TheLi
ve
r
.
I
n:TheTわxi
c
ol
o
gy o
fFi
s
he
s
.Uni
t2･Ke
y
Tar
ge
tSys
t
emsand Or
gani
s
ma
lEf
f
ect
s
･
T.a
ndHi
nt
on,D.
E.(
e
ds
.
)Ta
yl
o
r
Di
Gi
ul
i
o,R.
Pr
e
s
s
.
2007.
Hor
ni
ng,W a
nd We
be
r
,C (
1
98
5)
･Sho
r
t
t
e
r
m
me
t
hodsf
o
re
s
t
i
ma
t
l
ngt
hec
hr
oni
ct
o
xI
C
l
t
yOf
e
f
f
l
ue
nt
sa
ndr
e
c
e
i
vl
ngWa
t
e
r
st
Of
r
e
s
hwa
t
e
r
o
r
ga
ni
s
ms
.
,USEPA (
EP
A/
600/
48
5
/
01
4)
:58
7
5.
I
s
hi
ka
wa
,Ta
ndTa
ka
ya
ma,S.1
979.I
mpo
r
t
a
nc
e
o
fhe
pa
t
i
cne
o
pl
a
s
msi
nl
o
we
rv
e
r
t
e
br
a
t
ea
ni
一
o
xi
c
ol
ma
l
sa
sat
ooli
nc
a
nc
e
rr
e
s
e
a
r
c
h.J T
I
nv
i
v
oi
ma
g
i
n
gi
nSTI
I
me
d
a
k
a(Oryzi
asl
at
i
pe
s
)
Env
i
r
onHe
al
t
h5(
21
3)
:5
3
7
-50.
ka
,K,Shi
r
a
i
s
hi
,H,Ar
i
z
ono,
Ka
s
hi
wa
da
,S,Go
K,Oz
a
t
o,K,Wa
ka
ma
t
s
u,Y,e
tal
.2
007
.Ag
e
de
pe
nde
n
ti
ns
i
t
uhe
pa
t
i
ca
ndgi
l
lCYPI
Aa
c
t
i
v
i
t
yi
nt
hes
e
e
t
hr
o
ug
hme
da
ka(
Or
y
z
i
asl
at
i
pe
s
)
.
Compar
at
i
v
eBi
oc
he
mi
s
t
r
y and Phys
i
ol
ogy
Par
tC:T
o
xi
c
ol
o
g
y & Phar
mac
ol
o
g
y1
45(
1
)
:
96.
Ma
s
yuk,TV Ri
t
ma
n,ELa
ndLa
Rus
s
o,
NF.2003.
He
pa
t
i
ca
r
t
e
r
ya
ndpo
r
t
a
lv
e
i
nr
e
mode
l
i
ngl
n
r
a
tl
i
ve
r
:va
s
c
ul
a
rr
e
s
pons
et
os
e
l
e
c
t
i
v
ec
h0
1
hol1
62(
4)
:
a
ngi
oc
yt
epr
ol
i
f
e
r
a
t
i
on.Am J Pat
1
1
7
5-8
2.
Me
ye
r
,J
N,Na
c
c
i
,DE a
n
dDiGi
ul
i
o,RT.2002.
Cyt
oc
hr
omeP4501
A (
CYPI
A)i
n ki
l
l
i
f
i
s
h
(
Fundul
ushe
t
e
r
oc
l
i
t
us
)
:he
r
i
t
a
bi
l
i
t
yofa
l
t
e
r
e
d
e
x
pr
e
s
s
i
o
na
ndr
e
l
a
t
i
ons
hi
pt
os
ur
vi
va
li
nc
on.
t
a
mi
na
t
e
ds
e
di
me
nt
s
.T
o
xi
c
oISc
i68(
1
)
:69181
Mos
c
he
t
t
a,A,Xu,F,Ha
ge
y
,LR,va
n Be
r
ge
lva
nEr
pe
c
um,KJ
,
Br
ouwe
r
s
,
He
ne
gou
we
n,
GI
J
F,e
tal
.2005.A phy
l
og
e
ne
t
i
cs
ur
v
e
yofbi
l
i
a
r
yl
i
pi
dsi
nv
e
r
t
e
br
a
t
e
s
.J.Li
pi
dRe
s
.46(
1
0)
:
2221
-223
2.
Na
c
c
i
,DE,Koha
n,
M,Pe
l
l
e
t
i
e
r
,M a
ndGe
o
r
ge,
E.
2002.Ef
f
e
c
t
so
fbe
nz
ol
a
]
pyr
e
nee
x
pos
ur
eon
af
i
s
hpo
pul
a
t
i
onr
e
s
i
s
t
a
ntt
ot
het
o
xi
ce
f
f
e
c
t
s
ofdi
o
xi
nl
l
i
kec
o
mpounds
.Aquat
i
cT
o
xi
c
ol
o
gy
57(
4)
:
203.
Oki
hi
r
o,M a
ndHi
nt
on,D.1
999.Pr
og
r
e
s
s
i
onof
he
pa
t
i
cne
o
pl
a
s
i
ai
nme
da
ka(
Or
y
z
i
asl
at
i
pe
s
)
e
x
pos
e
dt
odi
e
t
hyl
ni
t
r
os
a
mi
ne
.Car
c
i
no
ge
ne
s
i
s
206(
6)
:
93
3-40.
Oki
hi
r
o,MSa
ndHi
nt
on,DE.2000.Pa
r
t
i
a
lhe
pa
t
e
c
t
o
mya
ndbi
l
educ
tl
i
ga
t
i
oni
nr
a
i
nbo
wt
r
out
(
Onc
or
h
ync
husmy
ki
s
s
)
:hi
s
t
ol
ogi
c
,i
mmunohi
s
t
oc
he
mi
c
a
la
nde
nz
ymehi
s
t
oc
he
mi
c
a
lc
ha
r
a
c
t
e
r
i
z
a
t
i
onofhe
pa
t
i
cr
e
ge
ne
r
a
t
i
o
na
ndbi
l
i
a
r
y
hype
r
pl
a
s
i
a.
To
xi
c
oIPat
hol28(
2)
:3
42156.
Pa
l
me
i
r
a,CM a
nd Rol
o,AP.2004.Mi
t
oc
hon-
65
dr
i
a
l
l
y
me
di
a
t
e
dt
o
xI
C
l
t
yOfbi
l
ea
c
i
ds
.T
o
xi
c
ol
o
gy203(
1
3)
:1
11
5.
Ra
ma
nu
J
a
m,N,Mi
t
c
he
l
l
,MF,Ma
ha
de
va
n,A,
Thoms
e
n,S,Si
l
va,
Ea
ndRi
c
ha
r
ds
Ko
r
t
um,
良.
1
994.Fl
uor
e
s
c
e
nc
es
pe
c
t
r
os
c
o
py:adi
a
gnos
t
i
ct
oolf
o
rc
e
r
vi
c
a
li
nt
r
a
e
pi
t
he
l
i
a
lne
opl
a
s
i
a
1
)
:3
1
18.
(
CI
N)
.
Gyne
c
ol0nc
ol52(
St
.Cr
o
i
x,C,Sha
n°,S a
ndWa
t
ki
ns
,S.2005.
Conf
oc
a
lmi
c
r
os
c
o
py;c
o
mpa
r
i
s
ons
,a
ppl
i
c
a
t
i
onsa
ndpr
o
bl
e
ms
.
Bi
ot
e
c
hni
que
s3
9･
Ta
yl
or
,D a
ndWa
ng,Y 1
98
9.Me
t
hodsi
nCe
l
l
Bi
o
l
ogy:Fl
uor
e
s
c
e
nc
eMi
c
r
os
c
o
pyo
fLi
vi
ng
Ce
l
l
si
nCul
t
ur
ePa
r
tB.Qua
nt
i
t
a
t
i
v
eFl
uor
e
s
c
e
nc
eMi
c
r
os
c
opy1
ma
gl
nga
ndSpe
c
t
r
os
c
opy･
Sa
nDi
e
go,
CA,
Ac
a
de
mi
cPr
e
s
s
.
Te
h,SJ
,a
nd D.
E.Hi
nt
o
n.1
993.De
t
e
c
t
i
on of
e
nz
ymehi
s
t
oc
he
mi
c
a
lma
r
ke
r
sofhe
pa
t
i
cpr
e
ne
opl
a
s
i
aa
ndne
o
pl
a
s
i
ai
nme
da
ka(
Or
yz
i
a
s
l
a
t
i
pe
s
)
.
AquatT
o
xi
c
ol24(
3
-4)
:1
63-1
81
.
Wa
kama
t
s
u,Y,Pr
i
s
t
yaz
hnyuk,S,Ki
nos
hi
t
a,
M,Ta
na
ka,M a
ndOz
a
t
o,K.2001
.Thes
e
e
t
hr
oughme
da
ka:af
i
s
hmode
lt
ha
ti
st
r
a
ns
pa
r
e
ntt
hr
oughoutl
i
f
e.Pr
ocNai
lAc
adSc
iUSA
98(
1
8
)
:1
0046-5
0.
l
l
s
,S,Sa
ndi
s
o
n,D a
ndSt
r
i
c
kl
e
r
,
We
bb,W,We
J1
990.Cr
i
t
e
r
i
af
orQua
nt
i
t
a
t
i
veDyna
mi
c
a
l
Conf
oc
a
lFl
uor
e
s
c
e
nc
eI
ma
gl
ng.Ne
w Yor
k,
Wi
l
e
yLi
s
s
,
I
nc
.
Wi
l
l
e
t
t
,
K,St
e
i
n
be
r
g,
M,
Thoms
e
n,
∫
,
Na
r
a
s
i
mha
n,
TR,Saf
e,S,Mc
Donal
d,S,etal
.1
995.
Expos
ur
e ofki
l
l
i
f
i
s
ht
o benzo[
a
]
pyr
e
ne:
c
ompa
r
a
t
i
veme
t
a
bol
i
s
m,DNA a
dduc
tf
br
一
ma
t
i
on a
nd a
r
y
lhy
dr
oc
a
r
bon (
Ah)r
e
c
e
pt
o
r
a
go
ni
s
ta
c
t
i
vi
t
i
e
s
.Compar
at
i
v
eBi
oc
he
mi
s
t
r
y
and Ph
y
s
i
ol
o
gy Par
tB/Bi
oc
he
mi
s
t
r
y and
Mol
e
c
ul
arBi
ol
o
g
y1
1
2(
1
)
:93.
Re
c
e
i
v
e
d2
7Ma
r
c
h2
0
0
7
.