INTRODUCCIÓN Y FUNDAMENTO
La determinación de AT se realiza en los casos en que se sospecha posibles deficiencias de AT. La Antitrombina es
una glicoproteína presente en plasma que actúa como regulador del proceso de la coagulación gracias a su acción
inhibidora sobre varios enzimas de la coagulación entre los que se encuentran la trombina y el Factor X activo (FXa),
evitando que se desarrollen procesos trombóticos anómalos. La AT mantiene el equilibrio hemostático, ya que en
pacientes con deficiencia congénita se ha observado un aumento del riesgo de padecer trombosis venosa1, 2.
El principio de la determinación de AT se basa en incubar la muestra de plasma diluida con un exceso de FXa en
presencia de heparina (la heparina acelera la reacción entre la AT y el FXa). El FXa residual hidrolizará el sustrato
cromogénico provocando la liberación de para-nitroanilina (pNA)2,3. La cantidad de pNA se mide por absorbancia a
405 nm y el resultado es inversamente proporcional al nivel de AT presente en plasma.
AT + Heparina
[AT•Heparina] + FXa (en exceso) Sustrato cromogénico + FXa (residual) (unido a para-nitroanilina: pNA)
[AT•Heparina]
[AT•Heparina•FXa ]+ FXa (residual)
Péptido + pNA
REACTIVOS
Material suministrado
Cada kit de DG-Chrom AT L contiene:
- DG-FXa L:
1 vial con 20 ml de solución líquida de Factor Xa bovino (aproximadamente 2 nkat/ml).
- DG-FXa Sust L:
1 vial con 8 ml de solución líquida de sustrato cromogénico CH3OCO-D-CHA-Gly-Arg-pNA • AcOH, 1,8 mg/ml.
Los reactivos de distintos lotes no son intercambiables.
Preparación de los reactivos
- DG-FXa L:
Listo para usar. Atemperar antes de su uso.
- DG-FXa Sust L:
Listo para usar. Atemperar antes de su uso.
Estabilidad
Todos los reactivos sin abrir son estables conservados a 2-8 ºC hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta.
Reactivos
En el Q Hemostasis Analyzer
(destapado)
DG-FXa L
3 días*
DG-FXa Sust L
2-8 ºC
(tapado)
6 meses
10 días**
* Dicha estabilidad on board puede llegar a ser de 10 días, siempre que se realice una nueva curva de calibración con
cada nuevo ensayo con el fin de reajustar posibles cambios de concentración debidos a la evaporación.
** Se recomienda realizar una nueva curva de calibración con cada nuevo ensayo con el fin de reajustar cambios de
concentración debidos a la evaporación. Desechar en caso de que la solución vire a amarillo.
Las estabilidades on board se han determinado en un estudio realizado en un laboratorio con humedades relativas
y temperaturas que han variado entre 35-72% y 21-26 ºC respectivamente. Las condiciones ambientales específicas
de cada laboratorio (temperatura, humedad relativa, renovación de aire, etc.) pueden modificar las estabilidades on
board establecidas.
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ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES
1. La recogida, transporte, almacenamiento, manipulación y el análisis de la muestra mediante el uso de
procedimientos estandarizados, son muy importantes para asegurar la fiabilidad y calidad de los resultados en
las pruebas de coagulación.
2. Para evitar la obtención de resultados erróneos, debe tenerse especial precaución con las siguientes pautas de
trabajo:
• El producto debe ser utilizado exclusivamente por personal cualificado.
• Evitar la contaminación de los reactivos.
• No utilizar DG-Chrom AT L si los envases están deteriorados y/o presentan pérdidas de contenido.
• No usar el producto más allá de su caducidad, sin abrir o una vez abierto.
• Desechar restos de reactivos.
• No mezclar lotes.
• Respetar los tiempos de incubación, temperaturas y volúmenes de la técnica.
• Para evitar contaminaciones cruzadas con muestras u otros reactivos, se deben utilizar puntas de pipeta y
tubos de plástico desechables.
3. Los reactivos que forman parte de DG-Chrom AT L si permanecen sin tapar (vial sin obturador de goma ni tapón
de rosca) a la temperatura que suele haber en el interior de los coagulómetros automáticos o a la temperatura
ambiente habitual de trabajo, entre 14-25 ºC, pueden verse afectados por fenómenos de evaporación
dependiendo de las condiciones ambientales del laboratorio. Se recomienda guardar los viales cerrados con
obturador de goma y tapón de rosca cuando éstos no se utilicen.
4. DG-Chrom AT L contiene reactivos desarrollados a partir de productos de origen biológico animal y, por lo tanto,
presenta un riesgo potencial de transmisión de enfermedades infecciosas.
5. Una vez utilizado el producto, la mezcla del producto con muestras y reactivos de origen biológico debe
desecharse en contenedores especiales para residuos biológicos.
6. DG-FXa Sust L contiene un péptido asociado a para-nitroanilina por lo que debe ser desechado según la
legislación vigente.
7. Si tiene dudas o necesita más información sobre el uso de este producto, consulte con el distribuidor autorizado
en su país.
MATERIAL NECESARIO NO SUMINISTRADO
− Agua purificada.
− Plasmas control normal (DG-C1) y anormal (DG-C2).
− Calibrador (DG-Ref).
− Cloruro de sodio (NaCl) 0,9 g/100 ml (0,9%) (Salina Fisiológica Grifols) para preparar las distintas diluciones de
la curva de calibración.
− Pipetas calibradas.
− Pipetas Pasteur de plástico desechables.
− Puntas de pipeta de plástico desechables.
− Guantes desechables.
− Centrífuga 2000g.
Para el método en el Q Hemostasis Analyzer:
− Q Hemostasis Analyzer.
MUESTRAS
1. Para realizar pruebas de coagulación, la muestra de sangre venosa debe extraerse, recogerse, transportarse,
almacenarse y manipularse según los procedimientos recomendados para eliminar en lo posible los cambios “in
vitro” provocados durante y/o después de la recogida de la muestra4.
2. Mezclar suavemente por inversión nueve partes de sangre recién extraída con una parte de citrato sódico (citrato
trisódico dihidratado) en tubo de plástico o vidrio siliconado. ¡No agitar! Aunque es práctica habitual en muchos
laboratorios utilizar citrato trisódico 3,8% (0,129 mol/l), las CLSI/NCCLS4 recomiendan utilizar la concentración
3,2% (0,109 mol/l).
3. La concentración final de citrato debería ajustarse en pacientes con hematocrito superior a 55%4,5.
4. Desechar las muestras de sangre con presencia de coágulos así como las muestras con hemólisis, recogidas en
tubos erróneos, o cuyo volumen final (relación anticoagulante/muestra) no sea el adecuado4,5.
5. Evitar exposiciones a altas temperaturas y/o luz solar directa.
6. Durante todo el proceso de obtención de la muestra de plasma y hasta que se procese, los tubos deben
mantenerse debidamente cerrados, para evitar cambios en el pH de la muestra debidos a la evaporación de ácidos
carbónicos volátiles5.
7. Centrifugar los tubos tapados a temperatura ambiente un mínimo de 15 minutos a 1500g, o a una velocidad y
tiempo equivalentes para conseguir plasma pobre en plaquetas (<10000 plaquetas/µl), preferiblemente en rotor
basculante4.
8. Transferir el plasma a un tubo de plástico utilizando una pipeta Pasteur de plástico desechable o una pipeta con
punta de plástico.
9. El intervalo de tiempo recomendado desde la extracción de sangre hasta la realización del análisis en plasma no
debe ser superior a 4 horas para las muestras conservadas a 2-4 ºC ó 18-24 ºC4.
MÉTODO
Curva de Calibración
1. Se puede utilizar como calibrador un pool de plasmas normales recogido del mismo modo que las muestras.
Para preparar este pool se recogerán plasmas de al menos 20 donantes sanos6. También se pueden utilizar
calibradores comerciales (DG-Ref) en los que se haya determinado el porcentaje (%) de AT.
2. Las diluciones para procesar los puntos de la curva son realizadas automáticamente por el instrumento. Se
sugieren las siguientes diluciones:
Tubo
1
2
3
4
5
6
Dilución a programar en el Q
1/1
3/4
1/2
1/4
1/8
0
% actividad AT
100%
75%
50%
25%
12,5%
0%
El % de actividad AT es un 100% si se realiza un pool de plasma de 20 donantes sanos. En el caso de utilizar
calibradores comerciales debe sustituirse el 100% por el valor indicado según la tabla del lote de plasma
calibrador usado. El % de actividad AT del resto de puntos de la curva de calibración también variará en función
de dicho valor.
A todas las diluciones de la curva de calibración, así como a las muestras de plasmas de pacientes y controles,
se les aplicará una dilución posterior según lo descrito en el apartado de métodos.
DG-Chrom AT L
Français
7. If you have any queries or require further information on how to use this product, please consult the authorised
distributor for your country.
INTRODUCTION AND PRINCIPLE
AT determination is performed where a possible deficiency of AT is suspected. Antithrombin is a glycoprotein present
in blood plasma which regulates the coagulation process by inhibiting several coagulation enzymes, among which
are thrombin and active Factor X (FXa), preventing the development of abnormal thrombotic processes. AT maintains
haemostatic balance, since patients with a congenital deficiency have been observed to suffer an increased risk of
vein thrombosis1,2.
The principle for determining AT is based on incubating the sample of diluted plasma with an excess of FXa and
in the presence of heparin (heparin accelerates the reaction between AT and FXa). Residual FXa will hydrolyse
the chromogenic substrate, causing the release of para-nitroaniline (pNA)2,3. The amount of pNA is measured by
absorbance at 405 nm and the result is inversely proportional to the level of AT present in the plasma.
MATERIAL REQUIRED BUT NOT PROVIDED
- Purified water.
- Control plasma normal (DG-C1) and abnormal (DG-C2).
- Calibrator (DG-Ref).
- Sodium chloride (NaCl) 0.9 g/100 ml (0.9%) (Grifols Normal Saline) for preparing the various dilutions on the
calibration curve.
- Calibrated pipettes.
- Disposable plastic Pasteur pipettes.
- Disposable plastic pipette tips.
- Disposable gloves.
- 2000g centrifuge.
For the method in the Q Hemostasis Analyzer:
- Q Hemostasis Analyzer.
INTRODUCTION ET PRINCIPE DU TEST
La détermination de l'AT est réalisée lorsqu'un risque de déficience en AT est suspecté. L'antithrombine est une
glycoprotéine qui est présente dans le plasma sanguin et qui régule le processus de coagulation en inhibant
plusieurs enzymes de coagulation, parmi lesquels se trouvent la thrombine et le facteur actif X (FXa), empêchant
le développement de processus thrombotiques anormaux. L'AT maintient l'équilibre hémostatique. En effet, on
a remarqué que les patients souffrant d'une déficience congénitale présentent un risque accru de thrombose
veineuse1,2.
Le principe de détermination de l'AT se base sur l'incubation de l'échantillon de plasma dilué avec un excès de FXa et
en présence d'héparine (l'héparine accélère la réaction entre l'AT et le FXa). Le FXa résiduel va hydrolyser le substrat
chromogène, entraînant la libération de para-nitroaniline (pNA)2,3. Le volume de pNA est mesuré par absorbance à
405 nm et le résultat est inversement proportionnel au niveau d'AT présent dans le plasma.
AT + Héparine [AT•Héparine] + FXa (en volumes excessifs) Substrat chromogène + FXa (résiduel)
(unido a para-nitroanilina: pNA)
[AT•Héparine]
[AT•Héparine•FXa] + FXa (résiduel)
Peptide + pNA
RÉACTIFS
Matériel fourni
Chaque kit de DG-Chrom AT L contient les éléments suivants :
- DG-FXa L:
1 flacon de 20 ml de solution liquide de facteur Xa bovin (environ 2 nkat/ml).
- DG-FXa Sust L:
1 flacon contenant 8 ml de solution de substrat chromogène liquide CH3OCO-D-CHA-Gly-Arg-pNA • AcOH, 1,8 mg/ml.
Les réactifs issus de lots différents ne peuvent pas être échangés.
Préparation des réactifs
- DG-FXa L:
Prêt à l'emploi. Amener à la température ambiante avant utilisation.
- DG-FXa Sust L:
Prêt à l'emploi. Amener à la température ambiante avant utilisation.
Stabilité
Les réactifs non ouverts sont stables lorsqu'ils sont stockés à une température comprise entre 2 et 8 °C jusqu'à la
date d'expiration indiquée sur l'étiquette.
Réactifs
Dans le Q Hemostasis Analyzer
(débouché)
DG-FXa L
3 jours*
DG-FXa Sust L
10 jours**
2-8 ºC
(bouché)
6 mois
* La stabilité une fois le produit installé dans le système peut atteindre 10 jours, à la condition qu'une nouvelle
courbe de calibration soit réalisée avec chaque nouveau dosage afin d'ajuster les éventuelles modifications de la
concentration dues à l'évaporation.
** Il est recommandé de réaliser une nouvelle courbe de calibration avec chaque nouveau dosage afin d'ajuster
les éventuelles modifications de la concentration dues à l'évaporation. Mettre au rebut si la solution prend une
coloration jaune.
Les stabilités des produits installés dans le système ont été déterminées au cours d'une étude réalisée dans un
laboratoire avec une humidité relative et des températures comprises entre 35 et 72% et 21 et 26 °C, respectivement.
Les conditions environnementales spécifiques de chaque laboratoire (température, humidité relative, circulation de
l'air, etc.) peuvent modifier les stabilités établies dans le système.
MISES EN GARDE ET PRÉCAUTIONS D’EMPLOI
1. Le prélèvement, le transport, le stockage et la manipulation, ainsi que le développement de la méthode analytique
à l'aide de procédures normalisées, sont très importants afin d'assurer la fiabilité et la qualité des résultats du test
de coagulation.
2. Afin d'éviter toute erreur dans les résultats lors de l'utilisation du kit, les instructions suivantes doivent être prises
en considération :
• Le produit ne doit être utilisé que par du personnel qualifié.
• La contamination du réactif doit être évitée.
• Ne pas utiliser DG-Chrom AT L si l'emballage est endommagé et/ou si son contenu a fui.
• Ne pas utiliser le produit au-delà de sa date d'expiration, qu'il soit fermé ou déjà ouvert.
• Mettre les réactifs non utilisés au rebut.
• Ne pas mélanger des flacons issus de lots différents.
• Suivre soigneusement la procédure de la technique : délais d'incubation, températures, volumes.
• Afin d'éviter les contaminations croisées avec des échantillons ou d'autres réactifs, utiliser des tubes et
embouts de pipettes en plastique jetables.
3. Les réactifs inclus dans DG-Chrom AT L, s'ils sont laissés ouverts (flacon sans bouchon en caoutchouc ou
couvercle à vis) à la température dans les coagulomètres automatiques ou à la température ambiante habituelle de
travail, entre 14 et 25 °C, peuvent subir une évaporation, selon les conditions de travail du laboratoire. Lorsqu'ils
ne sont pas utilisés, les flacons stockés doivent être dotés de joints en caoutchouc et de capsules à vis.
4. DG-Chrom AT L contient des réactifs développés à partir de produits d'origine biologique (animale). Par
conséquent, il présente un risque potentiel de transmission de maladies infectieuses.
5. Une fois que le produit a été utilisé, le mélange contenant les échantillons et les réactifs d'origine biologique
doivent être mis au rebut de manière adéquate.
6. DG-FXa Sust L contient un peptide associé à la para-nitroaniline et doit être mis au rebut conformément à la
législation en vigueur.
7. Si vous avez des questions ou besoin d'informations complémentaires quant à la manière d'utiliser ce produit,
veuillez consulter le distributeur autorisé pour votre pays.
MATÉRIEL NÉCESSAIRE NON FOURNI
- Eau purifiée.
- Plasma de contrôle normal (DG-C1) et anormal (DG-C2).
- Calibrateur (DG-Ref).
- Chlorure de sodium (NaCl) 0,9 g/100 ml (0,9%) (soluté isotonique de chlorure de sodium Grifols) permettant de
préparer les diverses dilutions sur la courbe de calibration.
- Pipettes calibrées.
- Pipettes Pasteur en plastique jetables.
- Embouts de pipettes en plastique jetables.
- Gants jetables.
- Centrifugeuse 2000g.
Pour la méthode dans le Q Hemostasis Analyzer :
- Q Hemostasis Analyzer.
ÉCHANTILLONS
1. Afin de procéder à des tests de coagulation, il faut prélever, collecter, transporter, stocker et manipuler les
échantillons de sang veineux conformément aux procédures recommandées afin d'éviter autant que possible les
modifications « in vitro » entraînées pendant et/ou après le prélèvement de l'échantillon4.
2. Mélanger doucement par inversion neuf unités de sang récemment prélevé avec une unité de citrate de sodium
(citrate de sodium déshydraté) dans un tube en en plastique ou siliconé. Ne pas agiter ! Bien que de nombreux
laboratoires utilisent couramment 3,8% de citrate trisodique (0,129 mol/l), les CLSI/NCCLS4 recommandent
l'utilisation d'une concentration de 3,2% (0,109 mol/l).
3. La concentration finale en citrate doit être ajustée chez les patients dont les valeurs d'hématocrite sont
supérieures à 55%4,5.
4. Mettre au rebut tous les échantillons coagulés ou hémolysés, ceux prélevés dans des tubes qui ne sont pas
adaptés ou encore ceux dont le volume final (rapport anticoagulant:échantillon) n'est pas correct 4,5.
5. Éviter toute exposition à des températures élevées et/ou la lumière directe du soleil.
6. Au cours du processus d'obtention de l'échantillon de plasma, et jusqu'à ce qu'il ait été traité, les tubes doivent
être maintenus bien fermés afin d'éviter tous changements du pH de l'échantillon en raison de l'évaporation
d'acides carbonés volatils5.
7. Centrifuger les tubes bouchés à température ambiante pendant au moins 15 minutes à 1500g, ou à une vitesse et
sur une durée équivalentes pour obtenir un plasma pauvre en plaquettes (< 10000 plaquettes/µl), de préférence
dans un rotor horizontal 4.
8. Transférer le plasma dans un tube en plastique à l'aide d'une pipette Pasteur en plastique jetable ou d'une pipette
dotée d'un embout en plastique.
9. L'intervalle de temps recommandé entre le prélèvement du sang et l'analyse du plasma ne doit pas dépasser 4
heures pour les échantillons stockés entre 2 et 4 °C ou 18 et 24 °C4.
MÉTHODE DU TEST
Courbe de Calibration
1. Un pool de plasma normal collecté de la même manière que les échantillons peut être utilisé comme étalonneur.
Pour préparer le pool, il est nécessaire de prélever du plasma sur au moins 20 donneurs sains6. Des étalonneurs
commerciaux (DG-Ref) dont le pourcentage (%) d'AT a été déterminé peuvent également être utilisés.
2. Les dilutions pour le traitement des points de la courbe sont réalisées automatiquement par l'instrument. Les
dilutions suivantes sont suggérées :
Tube
AT + Heparin [AT•Heparin] + FXa (in excess amounts) Chromogenic substrate + FXa (residual)
(attached to para-nitroaniline: pNA)
1
2
3
4
5
6
Dilution à programmer dans
le Q
1/1
3/4
1/2
1/4
1/8
0
% activité AT
100%
75%
50%
25%
12,5%
0%
Le % d'activité AT est de 100% si un pool de plasma issu de 20 donneurs sains est établi. Lors de l'utilisation
d'étalonneurs commerciaux, la valeur de 100% doit être remplacée par celle indiquée en fonction du tableau du lot
de plasma pour l'étalonneur utilisé. Le % d'activité AT des points restants de la courbe de calibration va également
varier en fonction de cette valeur.
Une dilution ultérieure sera appliquée à toutes les dilutions sur la courbe de calibration et aux contrôles et
échantillons de plasma des patients, comme décrit dans la section concernant les méthodes.
[AT•Heparin]
[AT•Heparin•FXa] + FXa (residual)
Peptide + pNA
REAGENTS
Material provided
Each kit of DG-Chrom AT L contains:
- DG-FXa L:
1 vial of 20 ml liquid bovine Factor Xa solution (approximately 2 nkat/ml).
- DG-FXa Sust L:
1 vial with 8 ml liquid chromogenic substrate solution CH3OCO-D-CHA-Gly-Arg-pNA • AcOH, 1.8 mg/ml. Reagents from different batches cannot be interchanged.
Preparation of the reagents
- DG-FXa L:
Ready to use. Bring to room temperature before use.
- DG-FXa Sust L:
Ready to use. Bring to room temperature before use.
Stability
Unopened reagents are stable when stored at 2-8 ºC until the expiry date indicated on the label.
Reagents
DG-FXa L
DG-FXa Sust L
On Q Hemostasis Analyzer
(uncapped)
3 days*
10 days**
2-8 ºC
(capped)
6 months
* The on-board stability may be 10 days, provided that a new calibration curve is performed with each new assay in
order to adjust possible changes in concentration due to evaporation.
** It is recommended that a new calibration curve be performed with each new assay in order to adjust possible
changes in concentration due to evaporation. Discard if the solution turns yellow.
The on-board stabilities have been determined in a study performed in a laboratory with relative humidity and
temperatures varying between 35-72% and 21-26 ºC respectively. The specific environmental conditions of each
laboratory (temperature, relative humidity, air circulation, etc.) may change the established on-board stabilities.
WARNINGS AND PRECAUTIONS
1. Collection, transport, storage and handling, as well as development of the analytical method using standardised
procedures, are very important to ensure the reliability and quality of the coagulation test results.
2. To avoid erroneous results when using the kit, the following directions should be taken into account:
• The product should only be used by qualified personnel.
• Reagent contamination should be avoided.
• Do not use DG-Chrom AT L if the package is damaged and/or contents have leaked.
• Do not use the product beyond its expiry date, unopened or once opened.
• Dispose of leftover reagents.
• Do not mix vials from different lots.
• Carefully follow the technique procedure: incubation times, temperatures, volumes.
• In order to avoid cross-over contaminations with samples or other reagents, disposable plastic pipette tips
and tubes must be used.
3. Reagents that are part of DG-Chrom AT L, if left uncapped (vial without rubber stopper or screw cap) at the
temperature inside automatic coagulometers or at usual working room temperature, between 14-25 ºC, may be
affected by evaporation depending on laboratory working conditions. Vials should be stored with rubber stopper
and screw cap in place when not being used.
4. DG-Chrom AT L contains reagents developed from products of biological (animal) origin and hence, shows a
potential risk of transmission of infectious diseases.
5. Once the product has been used, the mixture with samples and reagents of biological origin should be disposed
of by appropriate means.
6. DG-FXa Sust L contains a para-nitroaniline associated peptide, and must be disposed of according to current
legislation.
SAMPLES
1. In order to perform coagulation tests, venous blood sample must be extracted, collected, transported, stored and
handled according to the recommended procedures, in order to avoid as far as possible “in vitro” changes caused
during and/or after the sample has been collected4.
2. Gently mix by inversion nine parts of recently extracted blood with one part of sodium citrate (dehydrated
trisodium citrate) in a plastic or siliconed glass tube. Do not stir! Although it is normal practice in many
laboratories to use 3.8% trisodium citrate (0.129 mol/l), the CLSI/NCCLS4 recommend using the concentration of
3.2% (0.109 mol/l).
3. The final citrate concentration should be adjusted in patients with haematocrit values above 55%4,5.
4. Discard any clotted or haemolysed samples, those collected in incorrect tubes, or those whose final volume
(anticoagulant:sample ratio) is not correct4,5.
5. Avoid exposure to high temperatures and/or direct sunlight.
6. Throughout the process of obtaining the plasma sample, and until it is processed, tubes must be kept duly sealed,
in order to avoid changes in the pH of the sample due to the evaporation of volatile carbon acids5.
7. Centrifuge the capped tubes at room temperature for at least 15 minutes at 1500g, or at an equivalent speed and
time so as to obtain platelet-poor plasma (<10000 platelets/µl), preferably in a swing-out rotor4.
8. Transfer the plasma to a plastic tube using a disposable plastic Pasteur pipette or a pipette with a plastic tip.
9. The recommended interval of time between the extraction of the blood and the analysis in plasma should not
exceed 4 hours for samples stored at 2-4 ºC or 18-24 ºC4.
METHOD
Calibration Curve
1. A pool of normal plasma collected in the same way as the samples may be used as calibrator. To prepare the
pool, plasma from at least 20 healthy donors must be collected6. Commercial calibrators (DG-Ref) in which the
percentage (%) of AT has been determined may also be used.
2. Dilutions for processing the curve points are automatically performed by the instrument. The following dilutions
are suggested:
Tube
1
2
3
4
5
6
Dilution to program in the Q
1/1
3/4
1/2
1/4
1/8
0
% AT activity
100%
75%
50%
25%
12.5%
0%
The % AT activity is 100% if a pool of plasma from 20 healthy donors is performed. Where commercial calibrators
are used, 100% should be replaced for the value indicated according to the table of the plasma batch for the
calibrator used. The % AT activity of the remaining calibration curve points will also vary according to this value.
A later dilution will be applied to all the dilutions on the calibration curve and to the patients’ plasma samples
and controls, as described in the section on methods.
3. An example of a typical standard curve is given below:
350
300
250
200
150
100
50
0%
20%
40%
60%
80%
100%
120%
% AT
DG-Chrom AT L
Italiano
Leggere attentamente prima di usare il prodotto. Solo per uso diagnostico “in vitro”.
DESTINAZIONE D’USO
DG-Chrom AT L è un kit cromogenico liquido utilizzato per determinare l’attività di antitrombina funzionale (AT)
nel plasma.
INTRODUZIONE E PRINCIPIO
La determinazione di AT viene eseguita quando si sospetta un possibile deficit di AT. L’antitrombina è una
glicoproteina presente nel plasma sanguigno che regola il processo di coagulazione tramite inibizione di numerosi
enzimi di coagulazione, tra cui trombina e fattore X attivo (FXa), prevenendo lo sviluppo di processi trombotici
anormali. L’attività AT mantiene l'equilibrio emostatico, poiché è stato rilevato che i pazienti con un deficit congenito
sono maggiormente soggetti al rischio di trombosi venosa1,2.
Per determinare il livello di AT, viene incubato un campione di plasma diluito con eccesso di FXa e presenza di eparina
(l’eparina accelera la reazione tra i fattori AT e FXa). L’FXa residuo idrolizza il substrato cromogenico, provocando il
rilascio di paranitroanilina (pNA)2,3. La quantità di pNA viene misurata tramite assorbanza a 405 nm e il risultato è
inversamente proporzionale al livello di AT presente nel plasma.
AT + Eparina [AT•Eparina] + FXa (in quantità in eccesso) Substrato cromogenico + FXa (residuo)
(unido a para-nitroanilina: pNA)
[AT•Eparina]
[AT•Eparina•FXa] + FXa (residuo)
Peptide + pNA
REAGENTI
Materiale fornito
Ciascun kit di DG-Chrom AT L contiene:
- DG-FXa L:
1 fiala con 20 ml di soluzione liquida di fattore Xa bovino (circa 2 nkat/ml).
- DG-FXa Sust L:
1 fiala con 8 ml di soluzione liquida di substrato cromogenico CH3OCO-D-CHA-Gly-Arg-pNA • AcOH, 1,8 mg/ml.
Non è possibile interscambiare i reagenti di diversi lotti.
Preparazione dei reagenti
- DG-FXa L:
Pronto all’uso. Portare a temperature ambiente prima dell’uso.
- DG-FXa Sust L:
Pronto all’uso. Portare a temperature ambiente prima dell’uso.
Stabilità
I reagenti in confezioni non aperte, conservati a una temperatura compresa tra 2 e 8 °C, si mantengono stabili sino
alla data di scadenza indicata sull'etichetta.
Reagenti
Nel Q Hemostasis Analyzer
(aperta)
DG-FXa L
3 giorni*
DG-FXa Sust L
10 giorni**
2-8 ºC
(chiusa)
6 mesi
* La stabilità on-board può raggiungere 10 giorni, purché venga eseguita una nuova curva di calibrazione ad ogni
nuova analisi per regolare eventuali cambiamenti di concentrazione dovuti a evaporazione.
** È consigliabile eseguire una nuova curva di calibrazione ad ogni nuova analisi, al fine di regolare eventuali
cambiamenti di concentrazione dovuti a evaporazione. Non utilizzare la confezione se la soluzione diventa gialla.
Le stabilità on-board sono state determinate attraverso uno studio condotto in un laboratorio dove i valori di umidità
relativa e temperatura erano compresi tra 35-72% e 21-26 ºC rispettivamente. Le condizioni ambientali specifiche
di ogni laboratorio (temperatura, umidità relativa, circolazione dell’aria, ecc…) possono variare le stabilità on-board
stabilite.
AVVERTENZE E PRECAUZIONI
1. La raccolta, il trasporto, la conservazione, la manipolazione e lo sviluppo del metodo analitico tramite procedure
standard sono molto importanti per garantire l’affidabilità e la qualità dei risultati del test di coagulazione.
2. Per evitare errori nei risultati durante l’utilizzo del kit, osservare le seguenti indicazioni:
• Il prodotto deve essere utilizzato esclusivamente da personale qualificato.
• Evitare la contaminazione dei reagenti.
• Non utilizzare DG-Chrom AT L se la confezione è danneggiata e/o è fuoriuscito il contenuto.
• Non utilizzare il prodotto dopo la data di scadenza, anche se la confezione è ancora chiusa o è stata appena
aperta.
• Smaltire i reagenti avanzati.
• Non mescolare fiale di diversi lotti.
• Seguire attentamente la procedura tecnica: tempi d’incubazione, temperature e volumi.
• Per evitare contaminazioni tra campioni o altri reagenti, è necessario utilizzare puntali per pipette e provette
di plastica monouso.
3. I reagenti che appartengono alla categoria DG-Chrom AT L, se lasciati scoperti (fiala priva di tappo di gomma
o a vite) alla temperatura interna dei coagulometri automatici o alla normale temperatura ambiente di utilizzo,
ovvero compresa tra 14 e 25 ºC, possono venire influenzati dall’evaporazione in base alle condizioni di lavoro del
laboratorio. Le fiale, quando non utilizzate, devono essere conservate con sigilli di gomma e tappi a vite.
4. DG-Chrom AT L contiene reagenti ottenuti da prodotti di origine biologica (animale) e, pertanto, presenta un
potenziale rischio di trasmissione di malattie infettive.
5. Una volta utilizzato il prodotto, smaltire la miscela di campioni e reagenti di origine biologica mediante i metodi
appropriati.
6. DG-FXa Sust L contiene un peptide associato a paranitroanilina che deve essere smaltito in base alle norme
vigenti.
7. Per domande o per ricevere ulteriori informazioni sull’utilizzo di questo prodotto, consultare il distributore
autorizzato del proprio paese.
MATERIALE NECESSARIO NON FORNITO
- Acqua purificata.
- Plasma di controllo normale (DG-C1) e anormale (DG-C2).
- Calibratore (DG-Ref).
- Cloruro di sodio (NaCl) 0,9 g/100 ml (0,9%) (Grifols Normal Saline) per la preparazione di varie diluizioni sulla
curva di calibrazione.
- Pipette calibrate.
- Pipette Pasteur di plastica monouso.
- Puntali per pipette di plastica monouso.
- Guanti monouso.
- Centrifuga da 2000g.
Per il metodo nel Q Hemostasis Analyzer:
- Q Hemostasis Analyzer.
CAMPIONI
1. Per eseguire i test di coagulazione è necessario estrarre, raccogliere, trasportare, conservare e manipolare il
campione di sangue venoso in base alle procedure consigliate, in modo da evitare il più possibile il verificarsi di
cambiamenti “in vitro” durante e/o dopo la raccolta4.
2. Miscelare con delicatezza, capovolgendo, nove parti di sangue appena estratto con una parte di citrato di sodio
(citrato trisodico disidratato) in una provetta di vetro in silicone o plastica. Non agitare! Benché nei laboratori si
utilizzi solitamente citrato trisodico al 3,8% (0,129 mol/l), CLSI/NCCLS4 consiglia di utilizzare una concentrazione
pari al 3,2% (0,109 mol/l).
3. La concentrazione finale di citrato deve essere regolata nei pazienti con valori di ematocrito superiori a 55%4,5.
4. Eliminare tutti i campioni coagulati o emolitici, quelli raccolti in provette difettose oppure con volume finale
(rapporto anticoagulante/campione) non corretto4,5.
5. Evitare l’esposizione a temperature elevate e/o alla luce diretta del sole.
6. Le provette che dovranno contenere il campione di plasma devono restare correttamente sigillate fino al momento
dell’analisi, per evitare che il pH dei campioni cambi a causa dell’evaporazione degli acidi di carbonio volatile5.
7. Centrifugare le provette tappate a temperature ambiente per almeno 15 minuti a 1500g o a una velocità e un
tempo equivalenti, in modo da ottenere plasma povero di piastrine (<10000 piastrine/µl), preferibilmente in un
rotore oscillante4.
8. Trasferire il plasma in una provetta di plastica, utilizzando una pipetta Pasteur di plastica monouso oppure una
pipetta con puntale di plastica.
9. L’intervallo temporale consigliato tra l’estrazione di sangue e l’analisi di plasma non deve superare le 4 ore per i
campioni conservati a temperature comprese tra 2 e 4 ºC o 18 e 24 ºC4.
METODO
Curva di Calibrazione
1. Come calibratore è possibile utilizzare un pool di plasma normale raccolto allo stesso modo dei campioni. Per
preparare il pool, è necessario raccogliere il plasma di almeno 20 donatori in buona salute6. È inoltre necessario
utilizzare calibratori commerciali (DG-Ref) in cui è stata determinata la percentuale (%) di AT.
2. Le diluizioni per l’elaborazione dei punti della curva vengono eseguite automaticamente dallo strumento. È
consigliabile utilizzare le seguenti diluizioni:
Provetta
UTILIZAÇÃO PREVISTA
DG-Chrom AT L é um kit cromogénico líquido utilizado para determinar a antitrombina (AT) funcional no plasma.
INTRODUÇÃO E FUNDAMENTO
A determinação de AT é efectuada em casos de suspeita de deficiência de AT. A antitrombina é uma glicoproteína
presente no plasma que regula o processo da coagulação graças à sua acção inibidora sobre várias enzimas da
coagulação entre as quais se encontram a trombina e o Factor X activo (FXa), evitando que se desenvolvam fenómenos
trombóticos anormais. A AT mantém o equilíbrio hemostático uma vez que em pacientes com deficiência congénita
verificou-se o risco acrescido destes sofrerem trombose venosa1,2.
O princípio para a determinação da AT baseia-se na incubação da amostra de plasma diluída com um excesso de
FXa e na presença de heparina (a heparina acelera a reacção entre a AT e o FXa). O FXa residual hidrolisa o substrato
cromogénico, provocando a libertação da para-nitroanilina (pNA)2,3. A quantidade de pNA é medida através da
absorção a 405 nm e o resultado é inversamente proporcional ao nível de AT presente no plasma.
AT + Heparina [AT•Heparina] + FXa (em excesso) Substrato cromogénico + FXa (residual)
(unido à para-nitroanilina: pNA)
[AT•Heparina]
[AT•Heparina•FXa] + FXa (residual)
Péptido + pNA
REAGENTES
Material fornecido
Cada kit de DG-Chrom AT L contém:
- DG-FXa L:
1 frasco de 20 ml de solução líquida de Factor Xa bovino (aproximadamente 2 nkat/ml).
- DG-FXa Sust L:
1 frasco com 8 ml de solução líquida de substrato cromogénico CH3OCO-D-CHA-Gly-Arg-pNA • AcOH, 1,8 mg/ml. Reagentes de lotes diferentes não podem ser trocados.
Preparação dos reagentes
-
-
DG-FXa L:
Pronto a usar. Deve estar à temperatura ambiente antes de usar.
DG-FXa Sust L:
Pronto a usar. Deve estar à temperatura ambiente antes de usar.
Estabilidade
Os reagentes fechados permanecem estáveis conservados entre 2 a 8 ºC até à data de validade indicada na
etiqueta.
Reagentes
No Q Hemostasis Analyzer
(destapado)
DG-FXa L
3 dias*
DG-FXa Sust L
2-8 ºC
(tapado)
6 meses
10 dias**
* A estabilidade on-board pode ser de 10 dias, sempre que se realize uma nova curva de calibração com cada novo
teste para reajustar possíveis alterações de concentração devido a evaporação.
** É recomendável efectuar uma nova curva de calibração com cada novo ensaio para reajustar possíveis alterações
na concentração devido a evaporação. Eliminar caso a solução fique amarela.
A estabilidade on-board foi determinada num estudo efectuado num laboratório com humidade relativa e
temperaturas variáveis entre os 35-72% e 21-26 ºC respectivamente. As condições ambientais específicas para
cada laboratório (temperatura, humidade relativa, circulação de ar, etc.) podem alterar as estabilidades on-board
estabelecidas.
ADVERTÊNCIAS E PRECAUÇÕES
1. A utilização de procedimentos padronizados para recolha, transporte, armazenamento, manuseamento e
análise da amostra é muito importante para assegurar a fiabilidade e qualidade dos resultados dos testes de
coagulação.
2. Para evitar a obtenção de resultados errados ao usar o kit, deve-se ter em atenção as seguintes indicações:
• O produto deve ser usado apenas por pessoal qualificado.
• Evitar a contaminação dos reagentes.
• Não usar DG-Chrom AT L se a embalagem estiver danificada e/ou se verificar a ocorrência de perda de líquido.
• Não usar o produto após o prazo de validade, fechado ou aberto.
• Eliminar restos de reagentes.
• Não misturar frascos de lotes diferentes.
• Seguir cuidadosamente o procedimento técnico: tempos de incubação, temperaturas e volumes.
• Para evitar contaminações cruzadas com amostras ou outros reagentes, utilize pontas de pipeta e tubos de
plástico descartáveis.
3. Os reagentes constituintes do DG-Chrom AT L, se permanecerem destapados (frasco sem vedante de borracha
nem tampa de rosca) à temperatura existente no interior de coagulómetros automáticos ou à temperatura
ambiente normal de trabalho, entre os 14 e os 25 ºC, podem ser afectados pela evaporação, dependendo das
condições de trabalho do laboratório. Os frascos devem ser guardados fechados com vedante de borracha e
tampa de rosca quando não estiverem a ser usados.
400
0
Português
DG-Chrom AT L
Leia atentamente antes de utilizar o produto. Apenas para uso em diagnóstico “in vitro”
INTENDED USE
DG-Chrom AT L is a liquid chromogenic kit used to determine functional Antithrombin (AT) in plasma.
Lire attentivement avant d’utiliser le produit. Produit réservé au diagnostic “in vitro”
DOMAINE D’APPLICATION
DG-Chrom AT L est un kit chromogène liquide utilisé pour déterminer l'antithrombine (AT) fonctionnelle dans le
plasma.
3029761
3029761
Read carefully before using the product. For “In Vitro” Diagnostic Use only
3029761
USO PREVISTO
DG-Chrom AT L es un kit cromogénico líquido para la determinación de Antitrombina (AT) funcional en plasma.
English
DG-Chrom AT L
Absorbance (mE/min)
Leer atentamente antes de usar el producto. Sólo para uso diagnóstico “in vitro”
Español
3029761
3029761
DG-Chrom AT L
1
2
3
4
5
6
Diluizione da programmare
nel Q
1/1
3/4
1/2
1/4
1/8
0
% attività AT
100%
75%
50%
25%
12,5%
0%
In un pool di plasma proveniente da 20 donatori in buona salute la percentuale di attività AT è pari al 100%.
Quando si utilizzano calibratori commerciali, sostituire 100% con il valore indicato nella tabella del lotto di plasma
relativa al calibratore utilizzato. Anche la percentuale di attività AT dei punti della curva di calibrazione rimanenti
varia in base al valore della tabella.
Una successiva diluizione sarà applicata a tutte le diluizioni sulla curva di calibrazione e ai campioni di plasma
dei pazienti e ai controlli, come descritto nella sezione dei metodi.
4. O DG-Chrom AT L contém reagentes desenvolvidos a partir de produtos de origem biológica (animal) e,
consequentemente, representam um risco potencial de transmissão de doenças infecciosas.
5. O produto, uma vez utilizado, e a mistura do produto com amostras e reagentes de origem biológica, devem ser
eliminados utilizando meios apropriados para esse fim.
6. O DG-FXa Sust L contém um péptido associado à para-nitroanilina e deve ser eliminado em conformidade com a
legislação aplicável.
7. Em caso de dúvidas e necessidade de mais informação sobre como utilizar este produto, consulte o distribuidor
autorizado para o seu país.
MATERIAL NECESSÁRIO MAS NÃO FORNECIDO
- Água purificada.
- Plasma Controlo normal (DG-C1) e anormal (DG-C2).
- Calibrador (DG-Ref).
- Cloreto de Sódio (NaCl) 0,9 g/100 ml (0,9%) (Salina Fisiológica Grifols) para preparar as várias diluições da curva
de calibração.
- Pipetas calibradas.
- Pipetas Pasteur descartáveis de plástico.
- Pontas de pipetas descartáveis de plástico.
- Luvas descartáveis.
- Centrifuga para 2000g.
Para o método no Q Hemostasis Analyzer:
- Q Hemostasis Analyzer.
AMOSTRAS
1. Para realizar testes de coagulação, a amostra de sangue venoso deve ser extraída, recolhida, transportada,
armazenada e manuseada em conformidade com os procedimentos recomendados para evitar, tanto quanto
possível, alterações “in vitro” provocadas durante e/ou após a recolha da amostra4.
2. Misturar suavemente por inversão, nove partes do sangue recentemente extraído com uma parte de citrato de
sódio (citrato trisódico desidratado) num tubo de plástico ou vidro de silicone. Não agitar! Apesar de ser prática
habitual, em muitos laboratórios, utilizar citrato trisódico a 3,8% (0,129 mol/l), as CLSI/NCCLS4 recomendam
utilizar uma concentração de 3,2% (0,109 mol/l).
3. A concentração final de citrato deve ser ajustada nos pacientes com valores de hematócrito acima dos 55%4,5.
4. Deve eliminar as amostras com presença de coágulos ou com hemólise, recolhidas em tubos errados ou aquelas
cujo volume final (relação anticoagulante/amostra) não seja o adequado4,5.
5. Evitar exposições a temperaturas elevadas e/ou a luz solar directa.
6. Durante todo o processo de obtenção da amostra de plasma e até ao seu processamento, os tubos devem
ser mantidos devidamente selados para evitar alterações no pH das amostras devido à evaporação de ácidos
carbónicos voláteis5.
7. Centrifugar os tubos tapados à temperatura ambiente durante, no mínimo, 15 minutos a 1500g, ou a
uma velocidade e tempo equivalentes para obter plasma pobre em plaquetas (<10000 plaquetas/µl),
preferencialmente, em rotor basculante4.
8. Transferir o plasma para um tubo de plástico utilizando uma pipeta Pasteur de plástico descartável ou uma pipeta
com ponta de plástico.
9. O intervalo de tempo recomendado entre a extracção do sangue e a análise ao plasma não deve exceder as 4
horas para amostras armazenadas entre os 2 e os 4 ºC ou 18 e 24 ºC4.
MÉTODO
Curva de Calibração
1. Pode utilizar como calibrador uma pool de plasma normal recolhido da mesma forma que as amostras. Para
preparar a pool, deve recolher, no mínimo, plasma de 20 dadores saudáveis6. Também pode utilizar calibradores
comerciais (DG-Ref) nos quais a percentagem (%) de AT foi determinada.
2. As diluições para processar os pontos da curva são realizadas automaticamente pelo instrumento. Sugerimos as
seguintes diluições:
Tubo
1
2
3
4
5
6
Diluição a programar no Q
1/1
3/4
1/2
1/4
1/8
0
% actividade AT
100%
75%
50%
25%
12,5%
0%
A % de actividade de AT é de 100% se realizar uma pool de plasma de dadores saudáveis. No caso de utilização
de calibradores comerciais, substituir o valor 100% pelo valor indicado, de acordo com a tabela do lote de plasma
para o calibrador usado. A % de actividade de AT dos restantes pontos da curva de calibração varia em função
desse valor.
Será aplicada uma diluição posterior a todas as diluições da curva de calibração e às amostras de plasma dos
pacientes e controlos tal como descrito na secção de métodos.
DG-Chrom AT L
Deutsch
Vor dem Gebrauch des Produkts sorgfältig lesen. Nur zur "In-vitro"-Diagnostik
VORGESEHENE ANWENDUNG
DG-Chrom AT L ist ein Flüssig-Chromogen-Kit, das zur Bestimmung von funktionellem Antithrombin (AT) in Plasma
dient.
EINFÜHRUNG UND TESTPRINZIP
Die AT-Bestimmung wird durchgeführt, wenn ein AT-Mangel angenommen wird. Antithrombin ist ein im Blutplasma
vorkommendes Glykoprotein, das den Gerinnungsprozess reguliert, indem es mehrere Gerinnungsenzyme, darunter
Thrombin und der aktive Faktor X (FXa), hemmt. Dadurch werden anormale thrombotische Prozesse verhindert. AT
hält das hämostatische Gleichgewicht, denn bei Patienten mit angeborenem Mangel konnte ein erhöhtes Risiko für
venöse Thrombose festgestellt werden1,2.
Das Prinzip der AT-Bestimmung beruht darauf, die Probe verdünnten Plasmas mit einem Überschuss an FXa und
in Gegenwart von Heparin zu inkubieren – Heparin beschleunigt die Reaktion zwischen dem AT und dem FXa. Das
Rest-FXa verursacht die Hydrolyse des chromogenen Substrats und sorgt für die Freisetzung von Para-Nitroanilin
(pNA)2,3. Die pNA-Menge wird durch Absorption bei 405 nm gemessen. Das Ergebnis ist umgekehrt proportional
zum im Plasma vorliegenden AT-Niveau.
AT + Heparin
[AT•Heparin] + FXa (Überschuss)
Chromogenes Substrat + FXa (Rest)
(verbunden mit Para-Nitroanilin: pNA)
[AT•Heparin]
[AT•Heparin•FXa] + FXa (Rest)
Peptid + pNA
REAGENZIEN
Lieferumfang
Jedes Kit DG-Chrom AT L enthält:
- DG-FXa L:
1 Reagenzglas mit 20 ml flüssiger Rinder-Faktor Xa-Lösung (ca. 2 nkat/ml).
- DG-FXa Sust L:
1 Reagenzglas mit 8 ml flüssiger chromogener Substratlösung CH3OCO-D-CHA-Gly-Arg-pNA • AcOH, 1,8 mg/ml.
Die Reagenzien verschiedener Chargen dürfen nicht ausgetauscht werden.
Vorbereitung des Reagenz
- DG-FXa L:
Gebrauchsfertig. Vor der Verwendung auf Raumtemperatur erwärmen.
- DG-FXa Sust L:
Gebrauchsfertig. Vor der Verwendung auf Raumtemperatur erwärmen.
Stabilität
Alle ungeöffneten Reagenzien sind bis zum auf dem Etikett angegebenen Verfallsdatum haltbar, wenn sie bei 2-8°C
gelagert werden.
Reagenzien
DG-FXa L
DG-FXa Sust L
Im Q Hemostasis Analyzer
(ohne Deckel)
3 Tage*
10 Tage**
2-8 ºC
(Deckel)
6 Monate
* Die Stabilität im Gerät kann bis zu 10 Tage betragen, vorausgesetzt, es wird bei jedem neuen Test eine neue
Kalibrationskurve erstellt, um sie an mögliche Konzentrationsänderungen durch Verdunstung anzupassen.
** Es wird empfohlen, für jeden neuen Test eine neue Kalibrationskurve anzulegen, um mögliche
Konzentrationsänderungen durch Verdunstung zu berücksichtigen. Wenn die Lösung in gelb umschlägt, muss sie
verworfen werden.
Die Stabilität im Gerät wurde in einer Studie in einem Labor bestimmt, in dem die relative Luftfeuchtigkeit und
Temperatur zwischen 35-72% bzw. 21-26 °C schwankten. Die spezifischen Umgebungsbedingungen der einzelnen
Labors (Temperatur, relative Luftfeuchtigkeit, Luftzirkulation usw.) können sich auf die festgelegte Stabilität im
Gerät auswirken.
WARNUNGEN UND VORSICHTSMASSNAHMEN
1. Zur Gewährleistung der Zuverlässigkeit und Qualität von Gerinnungstestergebnissen ist es wichtig, dass
Sammlung, Transport, Lagerung und Handhabung sowie die Entwicklung der analytischen Methode anhand
standardisierter Abläufe stattfinden.
2. Um falsche Ergebnisse bei der Verwendung des Kits zu vermeiden, müssen die folgenden Anweisungen befolgt
werden:
• Das Produkt darf nur von qualifizierten Personen verwendet werden.
• Eine Kontamination der Reagenzien ist zu vermeiden.
• Verwenden Sie DG-Chrom AT L nicht, wenn die Verpackung beschädigt ist und/oder der Inhalt ausläuft.
• Verwenden Sie das Produkt nach dem Verfallsdatum nicht mehr (weder geöffnet noch ungeöffnet).
• Verwerfen Sie Reagenzreste.
• Mischen Sie nicht den Inhalt von Reagenzgläsern verschiedener Chargen.
• Achten Sie auf die ordnungsgemäße Testdurchführung: Inkubationszeiten, Temperaturen, Mengen.
• Um Kreuzkontaminationen mit Proben oder anderen Reagenzien zu vermeiden, müssen EinwegPipettenspitzen und Röhrchen aus Kunststoff verwendet werden.
3. Wenn Reagenzien, die zu DG-Chrom AT L gehören, bei der Temperatur im Inneren automatischer
Gerinnungsmesser oder bei der üblichen Raumtemperatur für die Arbeit (14-25 °C) unverschlossen bleiben
(Reagenzglas ohne Gummistopfen oder Schraubdeckel), kann es je nach den Arbeitsbedingungen im Labor zu
Verdunstung kommen. Während die Reagenzgläser nicht verwendet werden, müssen sie mit Gummistopfen und
Schraubdeckeln verschlossen aufbewahrt werden.
4. DG-Chrom AT L enthält Reagenzien, die aus Produkten biologischen Ursprungs (Tieren) hergestellt wurden. Es
besteht ein potenzielles Risiko der Übertragung von Infektionskrankheiten.
5. Nachdem das Produkt verwendet wurde, muss die Mischung mit Proben und Reagenzien biologischen Ursprungs
auf angemessene Weise entsorgt werden.
6. DG-FXa Sust L enthält ein mit Para-Nitroanilin assoziiertes Peptid und muss gemäß den aktuell gültigen
Bestimmungen entsorgt werden.
7. Sollten Sie weitere Fragen haben oder nähere Informationen hinsichtlich der Verwendung dieses Produkts
benötigen, wenden Sie sich bitte an die autorisierte Vertriebsfirma Ihres Landes.
ERFORDERLICHE, ABER NICHT MITGELIEFERTE MATERIALIEN
− Gereinigtes Wasser.
− Kontrollplasma normal (DG-C1) und anormal (DG-C2).
− Kalibriersubstanz (DG-Ref).
− Natriumchlorid (NaCl) 0,9 g/100 ml (0,9%) (Isotonische Natriumchlorid-Lösung Grifols), um die verschiedenen
Verdünnungen der Kalibrationskurve vorzubereiten.
− Kalibrierte Pipetten.
− Einweg-Pasteurpipetten aus Kunststoff.
− Einweg-Pipettenspitzen aus Kunststoff.
− Einweghandschuhe.
− Zentrifuge 2000g.
Für die Methode im Q Hemostasis Analyzer:
- Q Hemostasis Analyzer
PROBEN
1. Zur Durchführung der Gerinnungstests muss die Abnahme einer venösen Blutprobe, das Auffangen, der
Transport, die Lagerung und die Handhabung gemäß den empfohlenen Verfahren durchgeführt werden, um
"In-vitro"-Veränderungen während und/oder nach der Blutabnahme weitgehend zu vermeiden4.
2. Neun Teile von frisch abgenommenem Blut sind mit einem Teil Natriumcitrat (Trinatriumcitrat-Dihydrat) in einem
Reagenzglas aus Kunststoff oder Silikatglas durch Schwenken vorsichtig zu vermischen. Nicht schütteln! Obwohl
in der Praxis von vielen Laboratorien üblicherweise Trinatriumcitrat 3,8% (0,129 mol/l) verwendet wird, empfiehlt
das CLSI/NCCLS4 den Einsatz einer Konzentration von 3,2% (0,109 mol/l).
3. Die endgültige Citratkonzentration muss bei Patienten mit Hämatokritwerten über 55% angepasst werden4.
4. Blutproben, die Gerinnsel oder Hämolyse aufweisen, in falsche Röhrchen abgenommen wurden oder bei denen
das Endvolumen (Verhältnis Antikoagulans:Probe) nicht stimmt, sind zu verwerfen4,5.
5. Die Proben sind weder hohen Temperaturen noch direkter Sonneneinstrahlung auszusetzen.
6. Während des gesamten Prozesses zur Herstellung der Plasmaprobe sind die Röhrchen bis zur Verarbeitung
ordnungsgemäß verschlossen zu halten, um Veränderungen des pH-Wertes der Probe infolge Verdunstung der
flüchtigen Kohlensäuren zu vermeiden5.
7. Die verschlossenen Röhrchen bei Raumtemperatur mindestens 15 Minuten lang bei 1500g oder bei einer
äquivalenten Geschwindigkeit eine angemessene Zeit zentrifugieren, um plättchenarmes Plasma (<10000
Blutplättchen/µl) zu gewinnen. Hierzu ist vorzugsweise ein Ausschwingrotor zu verwenden4.
8. Das Plasma ist unter Verwendung einer Einweg-Pasteurpipette aus Kunststoff oder einer Pipette mit
Kunststoffspitze in ein Kunststoffröhrchen zu geben.
9. Der empfohlene Zeitraum zwischen der Blutabnahme und der Analyse der Plasmaprobe beträgt 4 Stunden für die
bei 2-4 °C bzw. 18-24 °C gelagerten Proben4.
TESTDURCHFÜHRUNG
Kalibrationskurve
1. Als Kalibriersubstanz kann ein Bestand aus normalem Plasma verwendet werden, der auf die gleiche Weise wie die
Proben gesammelt wurde. Um diesen Bestand aufzubauen, wird Plasma von mindestens 20 gesunden Spendern
gesammelt6. Es können auch kommerzielle Kalibriersubstanzen verwendet werden (DG-Ref), deren AT-Gehalt (%)
bestimmt wurde.
2. Die Verdünnungen für die Erstellung der Kurvenpunkte werden vom Gerät automatisch vorgenommen. Es werden
die folgenden Verdünnungen empfohlen:
Röhrchen
1
2
3
4
5
6
In Q zu programmierende
verdünnung
1/1
3/4
1/2
1/4
1/8
0
% AT-Aktivität
100%
75%
50%
25%
12,5%
0%
Der Prozentwert der AT-Aktivität beträgt 100%, wenn ein Plasmabestand von 20 gesunden Spendern aufgebaut
wird. Wenn kommerzielle Kalibriersubstanzen verwendet werden, ist der Wert von 100% durch den Wert zu
ersetzen, der in der Tabelle der Plasmacharge für die verwendete Kalibriersubstanz angegeben ist. Auch der
Prozentwert der AT-Aktivität der restlichen Kalibrationskurvenpunkte ändert sich entsprechend diesem Wert.
Alle Verdünnungen der Kalibrationskurve sowie die Plasmaproben von Patienten und die Kontrollen werden
anschließend wie im Absatz der Methoden beschrieben verdünnt.
300
250
200
150
100
50
0
0%
20%
40%
60%
80%
100%
120%
% AT
Procedimento automático sugerido
Programe o instrumento tendo em atenção os seguintes parâmetros:
Parâmetros do sistema
Programação sugerida
Diluição Amostra/Controlos/Padrões Diluídos
Amostra
DG-FXa L
Incubação
DG-FXa Sust L
1/40
11 μl
100 μl
120 segundos
40 μl
Tempo de espera
5 segundos
Tempo total de leitura
90 segundos
Algoritmo de leitura
dois declives 30-90
Procedimento no Q Hemostasis Analyzer
Seguir o método programado no Q Hemostasis Analyzer.
As amostras devem ser analisadas em duplicado. Se os resultados de uma amostra exceder o CV máximo de
duplicado atribuído para técnica na unidade primária (mE/min), deve repetir-se o ensaio.
CONTROLO DE QUALIDADE
Processar plasma de controlo valorados para Antitrombina (DG-C1 e DG-C2) com cada série de análises, da
mesma forma que a amostra a ser analisada para verificar se o sistema (equipamento-reagente) está a funcionar
devidamente.
Seguir as instruções para reconstituir os controlos liofilizados.
É recomendável a realização de uma determinação no início do trabalho diário e durante o dia e a verificação dos
valores de AT obtidos com os controlos para verificar se estes se encontram dentro do intervalo definido.
É recomendável realizar determinações em duplicado. O coeficiente da variação entre duplicados deve ser inferior
ou igual a 10%.
Os controlos devem ser processados sempre que se muda de lote ou quando são feitos ajustes importantes do
equipamento em utilização.
O erro analítico é afectado pelos reagentes, equipamentos e dispensadores de amostras, entre outros, dando origem
a uma imprecisão na medida.
Caso se obtenha um valor fora do intervalo estabelecido, deve ser feita uma revisão aos reagentes, controlos e
equipamentos usados. Investigar a causa antes de emitir o resultado.
BIBLIOGRAFIA
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126 (11):1326-36, 2002.
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congenital antithrombin III deficiency than an assay based on thrombin inhibition. Thromb Haemost 69 (3):231-5,
1993.
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chromogenic substrate S-2238.Thromb Haemost 52(3):350-3, 1984.
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10.Sambrano JE et al. Abnormal antithrombin III with defective serine protease binding (Antithrombin III “Denver”). J
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APRESENTAÇÃO
218038
DG-Chrom AT L
Data de revisão: Maio 2009
Este documento está disponível em diversos idiomas. As traduções foram feitas a partir do documento original em
espanhol. Em caso de dúvidas ou discrepâncias, prevalecerá o expresso no documento original em espanhol.
RESULTADOS
Os resultados para a Antitrombina são indicados em % de actividade.
LIMITAÇÕES
Não é possível detectar defeitos funcionais de antitrombina como a mutação Cambridge II9, geralmente associada
a um risco trombótico baixo e, possivelmente, a antitrombina Denver10, utilizando kits de determinação de
antitrombina baseados na medição da actividade do FXa.
VALORES ESPERADOS
Cada laboratório deve estabelecer o seu próprio intervalo de referência, dado que se verificou existirem diferenças
entre equipamentos, laboratórios e populações locais. O intervalo deve ser verificado em cada alteração de
equipamento ou sistema de recolha de amostras.
Numa população normal avaliada com DG-Chrom AT L num coagulómetro automático, obteve-se um valor médio
de 108 ± 22% (X ± 2 DS, n=31).
IVD
LOT
Dispositivo médico para diagnóstico "in vitro"
Código do lote
Suggested automatic procedure
Program the instrument taking into account the following parameters:
System parameters
Suggested programming
Sample Dilution/Controls/Diluted Standards
Sample
DG-FXa L
Incubation
DG-FXa Sust L
1/40
11 μl
100 μl
120 seconds
40 μl
Waiting time
5 seconds
Total reading time
90 seconds
Reading algorithm
two slopes 30-90
Method Comparison
DG-Chrom AT L was compared in an automatic coagulometer with another chromogenic assay to determine AT
(Anti FXa) with 60 samples in the normal and abnormal range of AT activity (between 17.1 and 101.9%). The
results obtained on an automatic coagulometer gave a correlation coefficient (r) of 0.998 (a = 0.04 and b = 0.990).
Analysis using method comparison techniques (Passing-Bablok) did not find significant differences between the two
chromogenic assays.
Q Hemostasis Analyzer Procedure
Follow the method programmed in the Q Hemostasis Analyzer.
Samples should be analysed in duplicate. If the results of a sample exceed the maximum CV of the duplicate assigned
for technique on primary unit (mE/min), the assay should be repeated.
QUALITY CONTROL
Process control plasma assayed for Antithrombin (DG-C1 and DG-C2) with each series of analyses, in the same way
as the sample to be analysed, to check that the system (instrument-reagent) is working correctly.
Follow the instructions for use to reconstitute lyophilized controls.
It is recommended that a determination be made at the start of the working day and throughout the day, and a check
be made to ensure that the AT values obtained for the controls are within the established range.
Duplicate determinations are recommended. The coefficient of variation among duplicates must be less or equal
to 10%.
The controls should also be processed with each batch change or large-scale adjustment of the instrument being
used.
The analytical error is affected by the reagents, instruments and sample dispensers, among others, giving rise to an
imprecise measurement.
If a value outside the established interval is obtained, the reagents, controls and instruments used should be checked.
Investigate the cause before issuing the result.
REFERENCES
1. Kottke-Marchant K and Duncan A. Antithrombin deficiency: issues in laboratory diagnosis. Arch Pathol Lab Med
126 (11):1326-36, 2002.
2. Demers C et al. An antithrombin III assay based on factor Xa inhibition provides a more reliable test to identify
congenital antithrombin III deficiency than an assay based on thrombin inhibition. Thromb Haemost 69 (3):231-5,
1993.
3. van Voorthuizen H and Kluft C. Improved assay conditions for automated antithrombin III determinations with the
chromogenic substrate S-2238.Thromb Haemost 52(3):350-3, 1984.
4. CLSI H21-A5: Collection, Transport and Processing of Blood Specimens for Testing Plasma-Based Coagulation
Assays and Molecular Hemostasis Assays; Approved Guideline-5th Edition, 2008.
5. Guder WG. Samples: From the patient to the laboratory. 2nd edition, Git-Verlag, Germany 2001.
6. Jespersen J et al. Laboratory techniques in thrombosis. A manual, 2nd revised edition of ECAT assay procedures.
Kluwer Academic Publishers 2000.
7. Tran TH et al. Influence of Heparin Cofactor II (HCII) in the determination of Antithrombin III (ATIII). Thromb Res
40,571-6, 1985.
8. Tollefsen DM. Laboratory Diagnosis of Antithrombin and Heparin Cofactor II Deficiency. Seminars in Thromb
Haemost 16,162-8, 1990.
9. Mushunje A et al. Heparin-induced substrate behaviour of antithrombin Cambridge II. Blood 102(12), 4028-34,
2003.
10.Sambrano JE et al. Abnormal antithrombin III with defective serine protease binding (Antithrombin III “Denver”). J
Clin Invest 77,887-93, 1986.
PRESENTATION
218038
DG-Chrom AT L
Revision date: May 2009
This document is available in several languages. The translations have been made from the master document
in Spanish. In the event of doubts or discrepancies, the wording in the master document in Spanish shall take
precedence.
RESULTS
The results for Antithrombin are given as % of activity.
LIMITATIONS
Some antithrombin functional deficiencies like the Cambridge II9 mutation, generally associated with a low thrombotic
risk, and possibly the antithrombin Denver10, cannot be detected employing antithrombin assays that measure FXa
activity.
EXPECTED VALUES
Each laboratory must establish its own reference range, depending on the instrument used, as differences have been
found between instruments, laboratories and local populations. This range should be checked with every change of
instrument or system for collecting samples.
In a normal population assessed with DG-Chrom AT L in an automatic coagulometer, a mean value of 108 ± 22%
(X ± 2 SD, n=31) was obtained.
PERFORMANCE CHARACTERISTICS
Precision
Within-run and within-device precision was determined in the Q Hemostasis Analyzer coagulometer, using
normal freeze-dried control plasma samples, AT-deficient (74% activity) samples and normal plasma samples. The
samples were analysed by performing 2 series in duplicate, during 20 days. One single reagent batch was used. For
within-run precision, the coefficient of variation obtained was 1.9% for freeze-dried control plasma, 2.5% for normal
plasma and 3.4% for freeze-dried deficient control plasma. For within-device precision, the coefficient of variation
obtained was 3.5% for freeze-dried control plasma and normal plasma, and 3.9% for freeze-dried deficient control
plasma.
Trueness
Accuracy was determined in the Q Hemostasis Analyzer coagulometer using different dilutions of SSC/ISTH
secondary standard Lot#3. Deviations between 2.4 and 8.3% with regard to the assigned value were obtained.
Linearity
Linearity was assessed in the Q Hemostasis Analyzer coagulometer. The technique showed it to be linear within a
range of 0-120% AT (non-linearity range less than 10%).
Interfering Substances
Since the method is based on inhibiting FXa, there is no interference with heparin cofactor II, macroglobulin α2 or
antitrypsin α17, 8.
No interference was detected with concentrations of 0.58 mg/ml bilirubin, 10 mg/ml triglycerides and 5 mg/ml
haemoglobin in the samples.
In einer normalen Bevölkerung, die mit DG-Chrom AT L in einem automatischen Gerinnungsmesser getestet wurde,
wurde ein Durchschnittswert von 108 ± 22% (X ± 2 DS, n=31) ermittelt.
Absorbanz (mE/min)
400
350
300
250
200
150
100
50
0
0%
20%
40%
60%
80%
100%
120%
% AT
Vorgeschlagenes automatisches Verfahren
Programmieren Sie das Gerät unter Berücksichtigung der folgenden Parameter:
Systemparameter
Vorgeschlagene Programmierung
Probenverdünnung/Kontrollen/Verdünnte Standards
Probe
DG-FXa L
Inkubation
DG-FXa Sust L
1/40
11 μl
100 μl
120 Sekunden
40 μl
Wartezeit
5 Sekunden
Ablesezeit gesamt
90 Sekunden
Lesealgorithmus
zwei 30-90-Steigungen
Methode im Q Hemostasis Analyzer
Befolgen Sie die im Q Hemostasis Analyzer programmierte Methode.
Die Proben sollten doppelt analysiert werden. Wenn das Ergebnis für eine Probe den maximalen Variationskoeffizienten
des Duplikats übersteigt, der für die Technik bei der Primäreinheit zugewiesen wurde (mE/min), muss der Test
wiederholt werden.
QUALITÄTSKONTROLLE
Führen Sie den Test mit geprüftem Kontrollplasma für Antithrombin (DG-C1 und DG-C2) bei jeder Analyseserie
wie bei der zu analysierenden Probe durch, um die einwandfreie Funktionsweise des Systems (Gerät-Reagenz)
sicherzustellen.
Befolgen Sie die Gebrauchsanweisung für die Rekonstitution lyophilisierter Kontrollen.
Es wird empfohlen, eine Bestimmung sowohl zu Beginn der täglichen Arbeit als auch im Laufe des Tages
vorzunehmen und zu überprüfen, ob sich die bei den Kontrollen erhaltenen AT-Werte innerhalb des festgelegten
Bereichs befinden.
Es wird empfohlen, Doppelbestimmungen durchzuführen. Der Variationskoeffizient für die Doppelbestimmungen
muss kleiner oder gleich 10% betragen.
Die Kontrollen sind ebenfalls bei jedem Chargenwechsel oder jeder wichtigen Veränderung der Einstellung des
benutzten Geräts durchzuführen.
Analytische Fehler sind unter anderem durch die Reagenzien, die Geräte sowie Probenbehälter bedingt, was zu einer
Messungenauigkeit führt.
Sollte ein Wert außerhalb des festgesetzten Intervalls ermittelt werden, so müssen die eingesetzten Reagenzien,
Kontrollen und Geräte überprüft werden. Vor Ausgabe eines Ergebnisses ist die entsprechende Ursache
festzustellen.
LEISTUNGSMERKMALE
Präzision
Die Intra-Assay-Präzision und die Inter-Assay-Präzision wurden im automatischen Gerinnungsmesser Q Hemostasis Analyzer
ermittelt. Dafür wurden normale gefriergetrocknete Kontrollplasmaproben, AT-Mangelproben (74% Aktivität)
und Normalplasmaproben verwendet. Die Proben wurden während 20 Tagen in 2 Serien doppelt analysiert. Es
wurde eine einzige Reagenzcharge verwendet. Bei der Intra-Assay-Präzision innerhalb der Reihe betrug der
erhaltene Variationskoeffizient 1,9% für gefriergetrocknetes Kontrollplasma, 2,5% für Normalplasma und 3,5% für
gefriergetrocknetes Mangelkontrollplasma. Bei der Inter-Assay-Präzision betrug der erhaltene Variationskoeffizient
3,5% für gefriergetrocknetes Kontrollplasma und für Normalplasma und 3,9% für gefriergetrocknetes
Mangelkontrollplasma.
Richtigkeit
Die Genauigkeit wurde im Gerinnungsmesser Q Hemostasis Analyzer anhand von verschiedenen Verdünnungen
des sekundären SSC/ISTH-Standards Charge Nr. 3 bestimmt. Es wurden Abweichungen zwischen 2,4 und 8,3% im
Vergleich zu den zugewiesenen Werten erhalten.
Linearität
Die Linearität wurde im Gerinnungsmesser Q Hemostasis Analyzer bestimmt. Die Technik erwies sich in einem
Intervall von 0-120% AT als linear (Nicht-Linearitätsbereich unter 10%).
Interferenzen mit Substanzen
Da diese Methode auf der hemmenden Wirkung des FXa basiert, kommt es zu keinen Interferenzen mit dem Kofaktor
II des Heparins, dem Makroglobulin α2 oder Antitrypsin α17, 8.
Bei Konzentrationen von 0,58 mg/ml Bilirubin, 10 mg/ml Triglyceriden und 5 mg/ml Hämoglobin in den Proben
wurden keine Interferenzen festgestellt.
Vergleich der Methoden
DG-Chrom AT L wurde in einem automatischen Gerinnungsmesser mit einem anderen chromogenen Assay zur
Bestimmung von AT (Anti FXa) mit 60 Proben im normalen und anormalen Bereich der AT-Aktivität verglichen
(zwischen 17,1 und 101,9%). Die im automatischen Gerinnungsmesser erhaltenen Daten ergaben eine Korrelation (r)
von 0,998 (a = 0,04 und b = 0,990). Bei einer Analyse mit Methodenvergleichstechniken (Passing-Bablok) wurden
keine signifikanten Unterschiede zwischen den beiden chromogenen Assays gefunden.
LITERATUR
1. Kottke-Marchant K and Duncan A. Antithrombin deficiency: issues in laboratory diagnosis. Arch Pathol Lab Med
126 (11):1326-36, 2002.
2. Demers C et al. An antithrombin III assay based on factor Xa inhibition provides a more reliable test to identify
congenital antithrombin III deficiency than an assay based on thrombin inhibition. Thromb Haemost 69 (3):231-5,
1993.
3. van Voorthuizen H and Kluft C. Improved assay conditions for automated antithrombin III determinations with the
chromogenic substrate S-2238.Thromb Haemost 52(3):350-3, 1984.
4. CLSI H21-A5: Collection, Transport and Processing of Blood Specimens for Testing Plasma-Based Coagulation
Assays and Molecular Hemostasis Assays; Approved Guideline-5th Edition, 2008.
5. Guder WG. Samples: From the patient to the laboratory. 2nd edition, Git-Verlag, Germany 2001.
6. Jespersen J et al. Laboratory techniques in thrombosis. A manual, 2nd revised edition of ECAT assay procedures.
Kluwer Academic Publishers 2000.
7. Tran TH et al. Influence of Heparin Cofactor II (HCII) in the determination of Antithrombin III (ATIII). Thromb Res
40,571-6, 1985.
8. Tollefsen DM. Laboratory Diagnosis of Antithrombin and Heparin Cofactor II Deficiency. Seminars in Thromb
Haemost 16,162-8, 1990.
9. Mushunje A et al. Heparin-induced substrate behaviour of antithrombin Cambridge II. Blood 102(12), 4028-34,
2003.
10.Sambrano JE et al. Abnormal antithrombin III with defective serine protease binding (Antithrombin III “Denver”). J
Clin Invest 77,887-93, 1986.
PRÄSENTATION
218038
DG-Chrom AT L
Datum der Überarbeitung: Mai 2009
Dieses Dokument ist in mehreren Sprachen verfügbar. Die Übersetzungen wurden vom Masterdokument in spanischer
Sprache angefertigt. Bei Zweifeln oder Diskrepanzen hat die Formulierung im spanischen Masterdokument Vorrang.
IVD
LOT
ERWARTETE WERTE
Jedes Labor muss seine eigenen Referenzbereiche bezüglich der verwendeten Ausrüstung erstellen, da Unterschiede
zwischen den Geräten, Laboratorien und der örtlichen Bevölkerung festgestellt wurden. Sie müssen bei jedem
Wechsel eines Geräts oder des Probeentnahmesystems erneut überprüft werden.
Diagnostic Grifols, S.A. Passeig Fluvial, 24 - 08150 Parets del Vallès, ESPAÑA (SPAIN)
400
350
300
250
200
150
100
50
0
0%
20%
40%
60%
80%
100%
120%
% AT
Procedimento automatico consigliato
Programmare lo strumento tenendo in considerazione i seguenti parametri:
Parametri del sistema
Programmazione consigliata
Diluizione del campione/Controlli/Standard diluiti
Campione
DG-FXa L
Incubazione
DG-FXa Sust L
1/40
11 μl
100 μl
120 secondi
40 μl
Tempo di attesa
5 secondi
Tempo di lettura totale
90 secondi
Algoritmo di lettura
Due inclinazioni 30-90
Procedimento nel Q Hemostasis Analyzer
Seguire il metodo programmato nello strumento Q Hemostasis Analyzer.
Analizzare i campioni due volte. Se i risultati di un campione superano il CV massimo del duplicato assegnato per la
tecnica sull’unità primaria (mE/min), ripetere l’analisi.
CONTROLLO DI QUALITÀ
Elaborare il plasma di controllo testato per l’antitrombina (DG-C1 e DG-C2) a ogni serie di analisi, nello stesso modo
in cui è stato analizzato il campione, per controllare che il sistema (strumento - reagente) funzioni correttamente.
Seguire le indicazioni d’uso per la ricostituzione dei controlli liofilizzati.
È consigliabile effettuare una determinazione all’inizio della giornata lavorativa e quindi per tutto il giorno, ed
eseguire un ulteriore controllo per assicurarsi che i valori di AT ottenuti rientrino nell’intervallo determinato.
È consigliabile effettuare doppie determinazioni. Il coefficiente di variazione tra le duplici determinazioni deve essere
inferiore o uguale a 10%.
Ad ogni cambiamento di lotto o ad ogni importante regolazione dello strumento in uso, è necessario elaborare
anche i controlli.
L’errore analitico dipende da fattori quali reagenti, strumenti e dispenser di campione che possono provocare una
misurazione non accurata.
Se si ottiene un valore non incluso nell’intervallo stabilito, è consigliabile verificare i reagenti, i controlli e gli
strumenti utilizzati. Individuare la causa prima di pubblicare il risultato.
REF
“In Vitro” Diagnostic Medical Device
Batch code
IVD
In-Vitro-Diagnostikum
LOT
Chargenbezeichnung
Verwendbar bis
REF
50
0
0%
20%
40%
60%
80%
100%
120%
% AT
Procedimiento automático sugerido
Programar el instrumento teniendo en cuenta los siguientes parámetros:
Parámetros del sistema
Programación sugerida
Dilución muestra/Controles/Estándares diluidos
Muestra
DG-FXa L
Incubación
DG-FXa Sust L
1/40
11 μl
100 μl
120 segundos
40 μl
Tiempo de espera
5 segundos
Tiempo total de lectura
90 segundos
Algoritmo de lectura
dos pendientes 30-90
BIBLIOGRAFÍA
1. Kottke-Marchant K y Duncan A. Antithrombin deficiency: issues in laboratory diagnosis. Arch Pathol Lab Med 126
(11):1326-36, 2002.
2. Demers C et al. An antithrombin III assay based on factor Xa inhibition provides a more reliable test to identify
congenital antithrombin III deficiency than an assay based on thrombin inhibition. Thromb Haemost 69 (3):231-5,
1993.
3. van Voorthuizen H y Kluft C. Improved assay conditions for automated antithrombin III determinations with the
chromogenic substrate S-2238.Thromb Haemost 52(3):350-3, 1984.
4. CLSI H21-A5: Collection, Transport and Processing of Blood Specimens for Testing Plasma-Based Coagulation
Assays and Molecular Hemostasis Assays; Approved Guideline-5th Edition, 2008.
5. Guder WG. Samples: From the patient to the laboratory. 2nd edition, Git-Verlag, Germany 2001.
6. Jespersen J et al. Laboratory techniques in thrombosis. A manual, 2nd revised edition of ECAT assay procedures.
Kluwer Academic Publishers 2000.
7. Tran TH et al. Influence of Heparin Cofactor II (HCII) in the determination of Antithrombin III (ATIII). Thromb Res
40,571-6, 1985.
8. Tollefsen DM. Laboratory Diagnosis of Antithrombin and Heparin Cofactor II Deficiency. Seminars in Thromb
Haemost 16,162-8, 1990.
9. Mushunje A et al. Heparin-induced substrate behaviour of antihrombin Cambridge II. Blood 102 (12),4028-34,
2003.
10.Sambrano JE et al. Abnormal antithrombin III with defective serine protease binding (Antithrombin III “Denver”). J
Clin Invest 77,887-93, 1986.
PRESENTACIÓN
218038
DG-Chrom AT L
Fecha de revisión: Mayo 2009
Este documento está disponible en diversos idiomas. Las traducciones se han realizado a partir del documento
maestro en español. En caso de dudas o discordancias prevalecerá lo expresado en el documento maestro en
español.
LOT
Producto sanitario para diagnóstico “in vitro”
Código de lote
Limitación de temperatura
Consult Instructions for Use
Consultar Instrucciones de Uso
Diagnostic Grifols, S.A. Passeig Fluvial, 24 - 08150 Parets del Vallès, ESPAÑA (SPAIN)
Catalogue number
BIBLIOGRAFIA
1. Kottke-Marchant K and Duncan A. Antithrombin deficiency: issues in laboratory diagnosis. Arch Pathol Lab Med
126 (11):1326-36, 2002.
2. Demers C et al. An antithrombin III assay based on factor Xa inhibition provides a more reliable test to identify
congenital antithrombin III deficiency than an assay based on thrombin inhibition. Thromb Haemost 69 (3):231-5,
1993.
3. van Voorthuizen H and Kluft C. Improved assay conditions for automated antithrombin III determinations with the
chromogenic substrate S-2238.Thromb Haemost 52(3):350-3, 1984.
4. CLSI H21-A5: Collection, Transport and Processing of Blood Specimens for Testing Plasma-Based Coagulation
Assays and Molecular Hemostasis Assays; Approved Guideline-5th Edition, 2008.
5. Guder WG. Samples: From the patient to the laboratory. 2nd edition, Git-Verlag, Germany 2001.
6. Jespersen J et al. Laboratory techniques in thrombosis. A manual, 2nd revised edition of ECAT assay procedures.
Kluwer Academic Publishers 2000.
7. Tran TH et al. Influence of Heparin Cofactor II (HCII) in the determination of Antithrombin III (ATIII). Thromb Res
40,571-6, 1985.
8. Tollefsen DM. Laboratory Diagnosis of Antithrombin and Heparin Cofactor II Deficiency. Seminars in Thromb
Haemost 16,162-8, 1990.
9. Mushunje A et al. Heparin-induced substrate behaviour of antithrombin Cambridge II. Blood 102(12), 4028-34,
2003.
10.Sambrano JE et al. Abnormal antithrombin III with defective serine protease binding (Antithrombin III “Denver”). J
Clin Invest 77,887-93, 1986.
PRESENTAZIONE
218038
DG-Chrom AT L
Data di revisione: Maggio 2009
Questo documento è disponibile in diverse lingue. Le traduzioni sono state realizzate a partire dal documento
principale redatto in spagnolo. In caso di dubbi o di discordanze, prevarrà quanto espresso nel citato documento
originale in spagnolo.
RISULTATI
I risultati relativi all'antitrombina vengono specificati come % di attività.
3. Veuillez trouver ci-après un exemple de courbe standard type :
400
350
300
250
200
150
100
50
0
0%
20%
40%
60%
80%
100%
120%
% AT
Procédure automatique proposée
Programmer l'instrument en prenant en considération les paramètres suivants :
Paramètres du système
Suggestion de programmation
Dilution échantillon/Contrôles/Dilutions standards
Échantillon
DG-FXa L
Incubation
DG-FXa Sust L
1/40
11 μl
100 μl
120 secondes
40 μl
Temps d'attente
5 secondes
Temps de lecture total
90 secondes
Algorithme de lecture
Deux pentes 30-90
Procédure dans le Q Hemostasis Analyzer
Respecter la méthode programmée dans l'instrument Q Hemostasis Analyzer.
Les échantillons doivent être analysés en double. Si les résultats d'un échantillon sont supérieurs au CV maximum du
double affecté pour la technique sur l'unité principale (mE/min), le dosage doit être répété.
CONTRÔLE DE QUALITÉ
Afin de s'assurer que le système (instrument-réactif) fonctionne correctement, traiter le plasma de contrôle dosé pour
l'antithrombine (DG-C1 et DG-C2) avec chaque série d'analyses, de la même manière que l'échantillon à analyser.
Suivre les instructions à utiliser pour reconstituer des contrôles congelés-séchés.
Il est recommandé de réaliser une détermination au début de la journée de travail et au cours de la journée puis
de procéder à une vérification afin de s'assurer que les valeurs d'AT obtenues pour les contrôles se situent dans la
plage établie.
Il est recommandé de réaliser les déterminations en double. Le coefficient de variabilité parmi les doubles doit être
inférieur ou égal à 10%.
Les contrôles doivent également être traités avec chaque changement de lot ou ajustement à grande échelle de
l'instrument utilisé.
L'erreur analytique est affectée par les réactifs, les instruments ainsi que les applicateurs d'échantillons, entre autres,
donnant lieu à des mesures imprécises.
Si une valeur est en dehors de l'intervalle établi, les réactifs, les contrôles et les instruments utilisés doivent être
vérifiés. Chercher la cause avant d'émettre le résultat.
REF
Número de catálogo
CARACTÉRISTIQUES DE PERFORMANCE
Précision
La précision intrasérielle et entre les instruments a été déterminée dans le coagulomètre automatique
du Q Hemostasis Analyzer, en utilisant des échantillons normaux de plasma de contrôle congelés-séchés, des
échantillons déficients en AT (activité 74%) et des échantillons de plasma normaux. Les échantillons ont été analysés
en procédant à 2 séries en double, pendant 20 jours. Un seul lot de réactif a été utilisé. Pour la précision intrasérielle,
le coefficient de variabilité obtenu était de 1,9% pour le plasma de contrôle congelé-séché, 2,5% pour le plasma
normal et 3,4% pour le plasma de contrôle congelé-séché déficient. Pour la précision entre les instruments, le
coefficient de variabilité obtenu était de 3,5% pour le plasma de contrôle congelé-séché et le plasma normal et de
3,9% pour le plasma de contrôle congelé-séché déficient.
Véracité
La précision a été déterminée dans le coagulomètre du Q Hemostasis Analyzer en utilisant différentes dilutions de
norme secondaire SSC/ISTH Lot n° 3. Des écarts entre 2,4 et 8,3% concernant la valeur affectée ont été obtenus.
Linéarité
La linéarité a été évaluée dans le coagulomètre du Q Hemostasis Analyzer. La technique la présentait comme étant
linéaire dans une plage comprise entre 0 et 120% AT (plage de non-linéarité inférieure à 10%).
Substances interférentes
Du fait que la méthode se base sur l'inhibition de FXa, il n'existe aucune interférence avec l'héparine-cofacteur II,
alpha-2-macroglobuline ou l'alpha 1-antitrypsine 7, 8.
Aucune interférence n'a été détectée avec des concentrations de 0,58 mg/ml de bilirubine, 10 mg/ml de triglycérides
et 5 mg/ml d'hémoglobine dans les échantillons.
Comparative de méthodes
DG-Chrom AT L a été comparée dans un coagulomètre automatique avec un autre dosage chromogène afin de
déterminer l'AT (Anti FXa) avec 60 échantillons dans les plages normale et anormale d'activité AT (entre 17,1 et
101,9%). Les résultats obtenus sur un coagulomètre automatique ont fourni un coefficient de corrélation (r) de 0,998
(a = 0,04 et b = 0,990). Une analyse utilisant des techniques de comparaison des méthodes (Passing-Bablok) n'a
relevé aucune différence notable entre les deux dosages chromogènes.
BIBLIOGRAPHIE
1. Kottke-Marchant K and Duncan A. Antithrombin deficiency: issues in laboratory diagnosis. Arch Pathol Lab Med
126 (11):1326-36, 2002.
2. Demers C et al. An antithrombin III assay based on factor Xa inhibition provides a more reliable test to identify
congenital antithrombin III deficiency than an assay based on thrombin inhibition. Thromb Haemost 69 (3):231-5,
1993.
3. van Voorthuizen H and Kluft C. Improved assay conditions for automated antithrombin III determinations with the
chromogenic substrate S-2238.Thromb Haemost 52(3):350-3, 1984.
4. CLSI H21-A5: Collection, Transport and Processing of Blood Specimens for Testing Plasma-Based Coagulation
Assays and Molecular Hemostasis Assays; Approved Guideline-5th Edition, 2008.
5. Guder WG. Samples: From the patient to the laboratory. 2nd edition, Git-Verlag, Germany 2001.
6. Jespersen J et al. Laboratory techniques in thrombosis. A manual, 2nd revised edition of ECAT assay procedures.
Kluwer Academic Publishers 2000.
7. Tran TH et al. Influence of Heparin Cofactor II (HCII) in the determination of Antithrombin III (ATIII). Thromb Res
40,571-6, 1985.
8. Tollefsen DM. Laboratory Diagnosis of Antithrombin and Heparin Cofactor II Deficiency. Seminars in Thromb
Haemost 16,162-8, 1990.
9. Mushunje A et al. Heparin-induced substrate behaviour of antithrombin Cambridge II. Blood 102(12), 4028-34,
2003.
10.Sambrano JE et al. Abnormal antithrombin III with defective serine protease binding (Antithrombin III “Denver”). J
Clin Invest 77,887-93, 1986.
PRÉSENTATION
218038
DG-Chrom AT L
Date de révision : Mai 2009
Ce document est disponible en plusieurs langues. Les traductions ont été réalisées à partir du document original en
espagnol. En cas de doutes ou de désaccords, c’est le document original en espagnol qui prévaudra.
RÉSULTATS
Les résultats d'antithrombine sont communiqués en % d'activité.
LIMITES DE LA MÉTHODE
Certaines déficiences fonctionnelles d'antithrombine comme la mutation Cambridge II9, généralement associées à un
faible risque thrombotique, et éventuellement l'antithrombine Denver10, ne peuvent pas être détectées à l'aide des
dosages d'antithrombine qui mesurent l'activité de FXa.
IVD
Dispositivo medico-diagnostico “in vitro”
LOT
Codice del lotto
Utilizzare entro
Limiti di temperatura
Gebrauchsanweisung beachten
Consultare le istruzioni per l’uso
Diagnostic Grifols, S.A. Passeig Fluvial, 24 - 08150 Parets del Vallès, ESPAÑA (SPAIN)
IVD
Fecha de caducidad
CARATTERISTICHE DI FUNZIONAMENTO
Precisione
La precisione intra-serie e intra-strumentale è stata determinata nel coagulometro automatico Q Hemostasis Analyzer,
utilizzando normali campioni di plasma di controllo liofilizzato, campioni con deficit AT (74% di attività) e campioni di
plasma normale. I campioni sono stati analizzati eseguendo 2 serie in doppio nel corso di 20 giorni. È stato utilizzato
un solo lotto di reagente. Per la precisione intra-serie, il coefficiente di variazione ottenuto è stato pari all’1,9% per
il plasma di controllo liofilizzato, 2,5% per il plasma normale e 3,4% per il plasma di controllo con deficit liofilizzato.
Per la precisione intra-strumentale, il coefficiente di variazione ottenuto è stato pari al 3,5% per il plasma di controllo
liofilizzato e normale e 3,9% per il plasma di controllo con deficit liofilizzato.
Veridicità
Per determinare l’accuratezza del coagulometro Q Hemostasis Analyzer sono state utilizzate diverse diluizioni di
standard secondario SSC/ISTH, lotto n° 3. Sono state ottenute variazioni comprese tra il 2,4 e l’8,3% rispetto al
valore assegnato.
Linearità
È stata stimata la linearità del coagulometro Q Hemostasis Analyzer. La tecnica è risultata lineare entro un intervallo
compreso tra 0 e 120% di AT (intervallo di non linearità inferiore al 10%).
Sostanze interferenti
Poiché il metodo è basato sull’inibizione del fattore Fxa, non ci sono interferenze da parte del cofattore II eparinico,
macroglobulina α2 o antitripsina α17, 8.
Non sono state rilevate interferenze con le concentrazioni di bilirubina 0,58 mg/ml, trigliceridi 10 mg/ml ed
emoglobina 5 mg/ml nei campioni.
Confronto di metodi
In un coagulometro automatico è stato confrontato il DG-Chrom AT L con un altro test cromogenico per determinare
l’attività AT (Anti FXa) con 60 campioni nell’intervallo normale e anormale di attività AT (compreso tra 17,1 e 101,9%).
Dai risultati ottenuti in un coagulometro automatico si evince un coefficiente di correlazione (r) pari a 0,998 (a =
0,04 e b = 0,990). L’analisi condotta con le tecniche di confronto dei metodi (Passing-Bablok) non ha riscontrato
differenze significative tra i due test cromogenici.
VALORI PREVISTI
Ogni laboratorio deve stabilire il proprio intervallo di riferimento, in base allo strumento utilizzato, poiché sono state
riscontrate differenze tra strumenti, laboratori e popolazione locale. Questo intervallo deve essere controllato ogni
volta che si cambia strumento o sistema di raccolta dei campioni.
In una popolazione normale analizzata con DG-Chrom AT L in un coagulometro automatico, è stato ottenuto un
valore medio pari a 108 ± 22% (X ± 2 DS, n=31).
VALORES ESPERADOS
Cada laboratorio debe establecer su propio rango de referencia dado que se ha comprobado que existen diferencias
entre instrumentos, laboratorios y poblaciones locales. Dicho rango debe verificarse con cada cambio de instrumento
o sistema de recolección de muestras.
En una población normal evaluada con DG-Chrom AT L en coagulómetro automático se obtuvo un valor medio de
108 ± 22% (X ± 2 DS, n=31).
Temperature limitation
Temperaturbegrenzung
Bestellnummer
100
Use by
LIMITAZIONI
Non è possibile rilevare alcuni deficit funzionali di antitrombina, quali la mutazione Cambridge II9, generalmente
associata a un basso rischio di trombosi, ed eventualmente l’antitrombina Denver10, utilizzando dei test antitrombina
che misurano l’attività FXa.
ERGEBNISSE
Die Ergebnisse für Antithrombin werden als % der Aktivität angegeben.
GRENZEN DER METHODE
Einige funktionelle Antithrombin-Störungen wie die Cambridge II Mutation9, die im Allgemeinen mit einem geringen
thrombotischen Risiko einhergeht, sowie möglicherweise Antithrombin Denver10, können mit AntithrombinTestsystemen, die die FXa-Aktivität messen, nicht diagnostiziert werden.
3. Di seguito è riportato un esempio di curva standard tipica:
150
LIMITACIONES
Defectos funcionales de antitrombina tales como la mutación Cambridge II9, asociada generalmente a un riesgo
trombótico bajo, y posiblemente la antitrombina Denver10, no pueden ser detectados utilizando kits de determinación
de Antitrombina basados en FXa.
Diagnostic Grifols, S.A. Passeig Fluvial, 24 - 08150 Parets del Vallès, ESPAÑA (SPAIN)
Assorbanza (mE/min)
3. Im Folgenden wird ein Beispiel für eine typische Standardkurve gezeigt:
250
200
CARACTERÍSTICAS DE FUNCIONAMIENTO
Precisión
La precisión intra-serie e intra-instrumento se determinó en el coagulómetro Q Hemostasis Analyzer utilizando
muestras de plasma control liofilizado normal y deficiente en AT (actividad 74%), así como un pool de muestras de
plasma normal. Las muestras se analizaron efectuando 2 series, por duplicado, durante 20 días y se utilizó un único
lote de reactivos. En el caso de la precisión intra-serie, el coeficiente de variación obtenido fue 1,9% para el plasma
control liofilizado, 2,5% para el pool de plasmas normales y 3,4% para el control liofilizado deficiente. En cuanto a la
precisión intra-instrumento, el coeficiente de variación obtenido fue 3,5% para el plasma control liofilizado y para el
pool de plasmas normales y 3,9% para el control liofilizado deficiente.
Veracidad
La veracidad se determinó en el coagulómetro Q Hemostasis Analyzer utilizando diferentes diluciones del estándar
secundario SSC/ISTH lote 3. Se obtuvieron desviaciones comprendidas entre 2,4 y 8,3% respecto al valor asignado.
Linealidad
La linealidad fue evaluada en el coagulómetro Q Hemostasis Analyzer. La técnica demostró comportarse de modo
lineal en un rango de 0-120% AT (grado de alinealidad inferior al 10%).
Sustancias interferentes
Debido al hecho de que el método se basa en la inhibición del FXa, no existen interferencias con el cofactor II de la
heparina, la macroglobulina α2 o la antitripsina α17, 8.
No se detectaron interferencias con concentraciones de 0,58 mg/ml de bilirrubina, 10 mg/ml de triglicéridos y
5 mg/ml de hemoglobina en las muestras.
Comparativa de métodos
DG-Chrom AT L se comparó en un coagulómetro automático con otro ensayo cromogénico para determinación de
AT (Anti FXa) con 60 muestras distribuidas en el rango normal y anormal de actividad de AT (entre 17,1 y 101,9%).
Los resultados obtenidos en un coagulómetro automático dieron una correlación (r) de 0,998 (a = 0,04 y b = 0,990).
El análisis mediante técnicas de comparación de métodos (Passing-Bablok) no detectó diferencias significativas entre
los dos ensayos cromogénicos.
RESULTADOS
Los resultados de Antitrombina se indican en % de actividad.
Consulte as Instruções de Utilização
Referência de catálogo
300
CONTROL DE CALIDAD
Procesar plasmas controles valorados para Antitrombina (DG-C1 y DG-C2) con cada serie de análisis del mismo modo
que la muestra a analizar, para comprobar el buen funcionamiento del sistema (instrumento-reactivo).
Seguir las instrucciones de uso correspondientes para la reconstitución de los controles liofilizados.
Es aconsejable realizar una determinación al inicio del trabajo diario, así como a lo largo del día, y comprobar que
los valores de AT obtenidos con los controles entran dentro del rango establecido.
Se recomienda realizar las determinaciones por duplicado. El coeficiente de variación entre duplicados debe ser
inferior o igual al 10%.
Los controles también deberán procesarse con cada cambio de lote o ajuste importante del instrumento que se
esté utilizando.
El error analítico está influenciado por los reactivos, instrumentos y dispensadores de muestras, entre otros, dando
lugar a una imprecisión en la medida.
Si se obtiene un valor fuera del intervalo establecido, deberán revisarse los reactivos, controles e instrumentación
utilizados. Investigar la causa antes de emitir el resultado.
Limites de temperatura
REF
400
350
Procedimiento en el Q Hemostasis Analyzer
Seguir el método programado en el instrumento Q Hemostasis Analyzer.
Las muestras deben analizarse por duplicado. Si los resultados de una muestra superan el CV máximo de duplicado
asignado para técnica sobre unidad primaria (mE/min), debe repetirse el ensayo.
Prazo de validade
Diagnostic Grifols, S.A. Passeig Fluvial, 24 - 08150 Parets del Vallès, ESPAÑA (SPAIN)
3. A continuación se muestra un ejemplo de una curva estándar típica:
Absorbancia (mE/min)
Absorvância (mE/min)
400
350
CARACTERÍSTICAS DE DESEMPENHO
Precisão
A precisão intra-série e intra-equipamento foi determinada no coagulómetro Q Hemostasis Analyzer, utilizando
amostras de plasma de controlo liofilizado normal e deficiente em AT (actividade 74%) assim como uma pool de
amostras de plasma normal. As amostras foram analisadas efectuando 2 séries em duplicado, durante 20 dias. Foi
utilizado apenas um lote de reagente. Para precisão intra-séries, o coeficiente de variação obtido foi de 1,9% para
plasma de controlo liofilizado, 2,5% para plasma normal e de 3,4% para plasma de controlo liofilizado deficiente.
Para precisão intra-equipamento, o coeficiente de variação obtido foi de 3,5% para plasma de controlo liofilizado e
plasma normal e de 3,9% para plasma de controlo liofilizado deficiente.
Veracidade
A precisão foi determinada no coagulómetro Q Hemostasis Analyzer utilizando diferentes diluições do padrão
secundário SSC/ISTH Lote n.º 3. Obtiveram-se desvios entre os 2,4 e os 8,3% relativamente ao valor atribuído.
Linearidade
A linearidade foi avaliada no coagulómetro Q Hemostasis Analyzer. A técnica demonstrou ser linear dentro do
intervalo de 0 a 120% AT (intervalo de não linearidade inferior a 10%).
Substâncias interferentes
Uma vez que o método se baseia na inibição do FXa, não existem interferências com o cofactor II da heparina, da
macroglobulina α2 ou antitripsina α17, 8.
Não foram detectadas interferências com concentrações de 0,58 mg/ml de bilirrubina, 10 mg/ml de triglicéridos e
5 mg/ml de hemoglobina nas amostras.
Comparação de métodos
O DG-Chrom AT L foi comparado num coagulómetro automático com outro teste cromogénico para determinação de
AT (Anti FXa) com 60 amostras distribuídas no intervalo normal e anormal de actividade de AT (entre 17,1 e 101,9%).
Os resultados obtidos no coagulómetro automático deram um coeficiente de correlação (r) de 0,998 (a = 0,04 e
b = 0,990). As análises utilizando técnicas de comparação de métodos (Passing-Bablok) não detectaram diferenças
significativas entre os dois testes cromogénicos.
Absorbance (mE/min)
3. A seguir é mostrado um exemplo de uma curva padrão típica:
REF
Numero di catalogo
VALEURS ATTENDUES
Chaque laboratoire doit établir sa propre plage de référence, en fonction de l'instrument utilisé. En effet, des
différences ont été notées entre différents instruments, laboratoires et populations locales. Cette plage doit être
vérifiée à chaque changement d'instrument ou de système de prélèvement des échantillons.
Dans une population normale évaluée avec DG-Chrom AT L dans un coagulomètre automatique, une valeur moyenne
de 108 ± 22% (X ± 2 DS, n=31) a été obtenue.
IVD
LOT
Dispositif médical de diagnostic «in vitro»
Code du lot
Utiliser jusque
Limites de température
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