MINICAP PROTEIN(E) 6

MINICAP PROTEIN(E) 6
Ref. 2203
Ref. 2223*
2014/12
MINICAP PROTEIN(E) 6 - 2014/12
ΠΡΟΒΛΕΠΟΜΕΝΗ ΧΡΗΣΗ
Το κιτ MINICAP PROTEIN(E) 6 προορίζεται για χρήση με το σύστημα τριχοειδoύς ηλεκτροφόρησης MINICAP για τον διαχωρισμό των
πρωτεϊνών ανθρώπινου ορού σε αλκαλικό ρυθμιστικό διάλυμα (pH 9.9).
Οι φυσιολογικές πρωτεΐνες ορού διαχωρίζονται σε έξι κύρια κλάσματα.
Το MINICAP εκτελεί όλες τις ακολουθίες αυτόματα, προκειμένου να προκύψει ένα προφίλ πρωτεϊνών για ποιοτική και ποσοτική ανάλυση. Οι
πρωτεΐνες που έχουν διαχωριστεί σε πυριτικά τριχοειδή ανιχνεύονται άμεσα με απορρόφηση στα 200 nm. Τα ηλεκτροφορήματα μπορούν να
ερμηνευτούν οπτικά, στην οθόνη, για τυχόν ανωμαλίες προτύπων. Η άμεση ανίχνευση εξασφαλίζει ακριβή ποσοτικοποίηση των επιμέρους
κλασμάτων πρωτεϊνών.
Για In Vitro Διαγνωστική Χρήση.
ΣΗΜΕΙΩΣΗ : Σε αυτό το φύλλο οδηγιών, η ονομασία "MINICAP" χρησιμοποιείται για τα αυτόματα όργανα MINICAP και MINICAP
FLEX-PIERCING.
ΑΡΧΗ ΤΗΣ ΔΟΚΙΜΑΣΙΑΣ (1-11)
Η ηλεκτροφόρηση πρωτεϊνών είναι μια ευρέως καθιερωμένη και συνήθης τεχνική που χρησιμοποιείται σε κλινικά εργαστήρια για την εξέταση
δειγμάτων για τυχόν πρωτεϊνικές ανωμαλίες(1, 2, 3, 10). Το σύστημα MINICAP έχει σχεδιαστεί ώστε να παρέχει πλήρη αυτοματοποίηση της
συγκεκριμένης εξέτασης με ταχύ διαχωρισμό και ικανοποιητική ανάλυση. Η μεθοδολογία αυτή μπορεί να θεωρηθεί από πολλές απόψεις μια
ενδιάμεση τεχνική μεταξύ της κλασικής ηλεκτροφόρησης ζώνης και της υγρής χρωματογραφίας (1, 3, 8, 11).
Το σύστημα MINICAP βασίζεται στην αρχή της τριχοειδούς ηλεκτροφόρησης. Με την τεχνική αυτή, τα φορτισμένα μόρια διαχωρίζονται με βάση
την ηλεκτροφορητική τους κινητικότητα σε αλκαλικό ρυθμιστικό διάλυμα με συγκεκριμένο pH σε σωλήνες εσωτερικής διαμέτρου 100 µm. Ο
διαχωρισμός πραγματοποιείται επίσης σύμφωνα με το pH του ηλεκτρολύτη και την ηλεκτροοσμωτική ροή.
Το σύστημα MINICAP διαθέτει 2 τριχοειδή που λειτουργούν παράλληλα, με αποτέλεσμα να είναι δυνατή η ταυτόχρονη διεξαγωγή 2 αναλύσεων.
Το δείγμα αραιώνεται με ρυθμιστικό διάλυμα και ενοφθαλμίζεται στο άκρο ανόδου του τριχοειδούς. Στη συνέχεια, οι πρωτεΐνες διαχωρίζονται
με την εφαρμογή υψηλής τάσης και ανιχνεύονται άμεσα στα 200 nm στο άκρο καθόδου του τριχοειδούς. Ακολουθεί άμεση πλύση των τριχοειδών
με ειδικό διάλυμα και προετοιμασία για την επόμενη ανάλυση με ρυθμιστικό διάλυμα.
Οι πρωτεΐνες ανιχνεύονται με την ακόλουθη σειρά: γ-σφαιρίνες, β2-σφαιρίνες, β1-σφαιρίνες, α2-σφαιρίνες, α1-σφαιρίνες και αλβουμίνη, ενώ
κάθε ζώνη περιέχει μία ή περισσότερες πρωτεΐνες.
ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΑ ΚΑΙ ΥΛΙΚΑ ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ ΜΕ ΤΑ ΚΙΤ MINICAP PROTEIN(E) 6
ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ : Δείτε τα φύλλα δεδομένων ασφάλειας.
ΣΤΟΙΧΕΙΟ
Ρυθμιστικό διάλυμα (έτοιμο προς χρήση)
Διάλυμα για πλύση (πυκνό)
PN 2203
PN 2223*
2 φιαλίδια, 250 mL έκαστο
6 φιαλίδια, 250 mL έκαστο
1 συσκευασία των 125
3 συσκευασίες των 125 έκαστη
4 κάδοι
12 κάδοι
1 φιαλίδιο, 25 mL
Κύπελλα αντιδραστηρίων
Φίλτρα
3 φίλτρα
Κάδοι για τα χρησιμοποιημένα κύπελλα
3 φιαλίδια, 25 mL έκαστο
3 φίλτρα
* MINICAP PROTEIN(E) 6 MAXI-KIT
ΓΙΑ ΑΡΙΣΤΑ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ :
Όλα τα αντιδραστήρια από ίδιο κιτ πρέπει να χρησιμοποιούνται πάντα μαζί και σύμφωνα με τις οδηγίες χρήσης.
ΠΑΡΑΚΑΛΟΥΜΕ ΔΙΑΒΑΣΤΕ ΠΡΟΣΕΚΤΙΚΑ ΤΟ ΦΥΛΛΟ ΟΔΗΓΙΩΝ.
ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ: Μην χρησιμοποιείτε απιονισμένο νερό που κυκλοφορεί στο εμπόριο, π.χ. νερό για σιδέρωμα (κίνδυνος σημαντικής βλάβης
των τριχοειδών σωλήνων). Χρησιμοποιείτε μόνο εξαιρετικά κεκαθαρμένο νερό, π.χ. ύδωρ για ενέσιμα.
1. ΡΥΘΜΙΣΤΙΚΟ ΔΙΑΛΥΜΑ
Προετοιμασία
Το ρυθμιστικό διάλυμα είναι έτοιμο προς χρήση. Περιέχει : ρυθμιστικό διάλυμα pH 9.9 ± 0.5 ; πρόσθετα, μη επιβλαβή στις χρησιμοποιούμενες
συγκεντρώσεις, αναγκαία για άριστη απόδοση.
Χρήση
Ρυθμιστικό διάλυμα για ανάλυση πρωτεϊνών με τριχοειδική ηλεκτροφόρηση.
Φύλαξη, σταθερότητα και σημεία αλλοίωσης
Φυλάσσετε το ρυθμιστικό διάλυμα σε θερμοκρασία δωματίου (15 έως 30 °C) ή σε ψύξη (2 έως 8 °C). Παραμένει σταθερό μέχρι την ημερομηνία
λήξης που αναγράφεται στις ετικέτες της συσκευασίας του κιτ ή των φιαλιδίων ρυθμιστικού διαλύματος. Αποφεύγετε τη φύλαξη κοντά σε
παράθυρο ή σε πηγή θερμότητας.
ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Όταν το ρυθμιστικό διάλυμα ανάλυσης φυλάσσεται σε θερμοκρασία 2 έως 8 °C, το αντιδραστήριο θα πρέπει να αποκτήσει
θερμοκρασία δωματίου πριν από τη χρήση.
ΜΗΝ ΚΑΤΑΨΥΧΕΤΕ.
Μετά το άνοιγμα και την τοποθέτηση του ρυθμιστικού διαλύματος στο σύστημα MINICAP, το προϊόν παραμένει σταθερό για 2 μήνες το μέγιστο
(αθροιστικά). Εάν σκοπεύετε να χρησιμοποιήσετε το ρυθμιστικό διάλυμα για περισσότερο από 2 μήνες, πρέπει να το απομακρύνετε από το
όργανο μετά από κάθε χρήση και να το φυλάσσετε σε θερμοκρασία δωματίου (15 έως 30 °C) ή σε ψύξη (μεταξύ 2 και 8 °C). Με αυτόν τον
τρόπο, το προϊόν παραμένει σταθερό μέχρι την ημερομηνία λήξης που αναγράφεται στην ετικέτα του φιαλιδίου.
Απορρίψτε το ρυθμιστικό διάλυμα αν μεταβληθεί η όψη του, π.χ. θόλωση λόγω μικροβιακής επιμόλυνσης.
- 59 -
Ο∆ΗΓΙΕΣ SEBIA - Ελληνικά
MINICAP PROTEIN(E) 6 - 2014/12
2. ΔΙΑΛΥΜΑ ΠΛΥΣΗΣ
Προετοιμασία
Το φιαλίδιο πυκνού διαλύματος πλύσης θα πρέπει να αραιώνεται στα 250 mL με απεσταγμένο ή απιονισμένο ύδωρ.
Μετά την αραίωση, το διάλυμα πλύσης περιέχει ένα αλκαλικό διάλυμα pH ≈ 12.
Χρήση
Για πλύση των τριχοειδών μετά τον ηλεκτροφορητικό διαχωρισμό πρωτεϊνών.
ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ : Πριν από την πλήρωση του δοχείου με το διάλυμα πλύσης, συνιστάται να πλένετε το στόμιο του δοχείου, το σύνδεσμο και το
σωλήνα με άφθονο απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό, προς αποφυγή επικάθισης αλάτων.
Φύλαξη, σταθερότητα και σημεία αλλοίωσης
Φυλάσσετε το πυκνό διάλυμα και το διάλυμα εργασίας σε κλειστά δοχεία σε θερμοκρασία δωματίου ή στο ψυγείο. Το πυκνό διάλυμα πλύσης
παραμένει σταθερό μέχρι την ημερομηνία λήξης που αναγράφεται στην ετικέτα του κιτ ή του φιαλιδίου διαλύματος πλύσης.
Το διάλυμα πλύσης εργασίας παραμένει σταθερό για 3 μήνες.
Πετάξτε το διάλυμα εργασίας αν μεταβληθεί η όψη του, π.χ. αν θολώσει λόγω μικροβιακής επιμόλυνσης.
3. ΚΥΠΕΛΛΑ ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΩΝ
Χρήση
Κύπελλα μιας χρήσεως για την αραίωση των δειγμάτων ορού και τη μεταφορά στο αυτοματοποιημένο σύστημα. Τοποθετούνται στο αυτόματο
σύστημα φόρτωσης κυπέλλων του MINICAP. Κάθε κύπελλο χρησιμοποιείται για την ανάλυση 2 δειγμάτων ορού.
ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ: Τα κύπελλα αντιδραστηρίων που περιέχουν βιολογικά δείγματα απαιτούν προσεκτικό χειρισμό.
4. ΦΙΛΤΡΑ
Χρήση
Φίλτρα µιας χρήσης για διήθηση του ρυθµιστικού διαλύµατος, του διαλύµατος πλύσης εργασίας και του απεσταγµένου νερού (που
χρησιµοποιείται για έκπλυση των τριχοειδών).
ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Αλλάζετε συστηματικά τα φίλτρα με κάθε αντικατάσταση του κιτ.
Βιδώστε ένα φίλτρο στο συνδετικA τµήµα που βρίσκεται στο άκρο κάθε σωλήνα που καταλήγει στο ρυθµιστικA διάλυµα, στο διάλυµα
πλύσης και στο απεσταγµένο ή απιονισµένο νερA. =ταν τοποθετείτε τα φίλτρα στο σύστηµα MINICAP, ξεπλένετε τα συνδετικά τµήµατα
και τις σωληνώσεις µε απεσταγµένο ή απιονισµένο νερA.
Αποθήκευση
Πριν από τη χρήση, φυλάσσετε τα φίλτρα στην κλειστή συσκευασία σε στεγνό μέρος και σε θερμοκρασία δωματίου ή σε ψυγείο.
5. ΚΑΔΟΙ ΓΙΑ ΧΡΗΣΙΜΟΠΟΙΗΜΕΝΑ ΚΥΠΕΛΛΑ
Χρήση
Οι κάδοι προορίζονται για την αυτόματη συλλογή των χρησιμοποιημένων κυπέλλων αντιδραστηρίων στο σύστημα MINICAP. Τοποθετούνται στο
MINICAP στην θέση που προβλέπεται για τον σκοπό αυτό.
ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ: Οι κάδοι που περιέχουν κύπελλα αντιδραστηρίων με βιολογικά δείγματα απαιτούν προσεκτικό χειρισμό.
ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΑ ΑΠΑΡΑΙΤΗΤΑ ΑΛΛΑ ΜΗ ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ
ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ : Δείτε τα φύλλα δεδομένων ασφάλειας.
1. ΑΠΕΣΤΑΓΜΕΝΟ Η ΑΠΙΟΝΙΣΜΕΝΟ ΝΕΡΟ
Χρήση
Για την έκπλυση των τριχοειδών του αυτοματοποιημένου συστήματος τριχοειδούς ηλεκτροφόρησης MINICAP, SEBIA.
Συνιστάται η χρήση φιλτραρισμένου απεσταγμένου ή απιονισμένου νερού (σε φίλτρο με πορώδες ≤ 0,45 μm) και με αντιστασικότητα
υψηλότερη από 10 Megohm x cm.
Προς αποφυγή ανάπτυξης µικροβίων, αλλάζετε το νερA καθηµερινά.
Για βέλτιστη λειτουργία, προσθέστε 35 µL/dL CLEAN PROTECT (SEBIA, PN 2059, 1 φιαλίδιο των 5 mL).
ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Πριν από την πλήρωση του δοχείου έκπλυσης, συνιστάται η πλύση του δοχείου με άφθονο απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό.
2. CAPICLEAN
Σύνθεση
Το φιαλίδιο του συμπυκνωμένου διαλύματος CAPICLEAN (SEBIA, PN 2058, 1 φιαλίδιο, 25 mL) περιέχει: πρωτεολυτικά ένζυμα,
επιφανειοδραστικούς παράγοντες και πρόσθετα, μη επιβλαβή στις χρησιμοποιούμενες συγκεντρώσεις, αναγκαία για άριστη απόδοση.
Χρήση
Για τον καθαρισμό του ακροφυσίου δειγματοληψίας στο αυτοματοποιημένο σύστημα τριχοειδούς ηλεκτροφόρησης MINICAP της SEBIA, κατά
τη διάρκεια της ακολουθίας καθαρισμού CAPICLEAN.
ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Εκτελείτε ακολουθία καθαρισμού CAPICLEAN μία φορά την εβδομάδα τουλάχιστον και το μέγιστο μία φορά την ημέρα ή ανά
500 αναλύσεις όταν πραγματοποιούνται σε διάστημα μικρότερο της μίας εβδομάδας.
Βλ. φύλλα οδηγιών που παρέχονται με το σύστημα CAPICLEAN, SEBIA.
ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Για βέλτιστη χρήση του διαλύματος CAPICLEAN με το σύστημα MINICAP, είναι απαραίτητο να χρησιμοποιείτε την ετικέτα
γραμμωτού κωδικού που προορίζεται για την ταυτοποίηση του σωλήνα αιμόλυσης στον οποίο τοποθετείται το μικροσωληνάριο που περιέχει
το αραιωμένο διάλυμα CAPICLEAN (κόβετε το πώμα του μικροσωληναρίου πριν από τη χρήση).
- 60 -
MINICAP PROTEIN(E) 6 - 2014/12
Φύλαξη, σταθερότητα και σημεία αλλοίωσης
Φυλάσσετε το CAPICLEAN στο ψυγείο (2 - 8 °C). Παραμένει σταθερό μέχρι την ημερομηνία λήξης που αναγράφεται στην ετικέτα του φιαλιδίου.
ΜΗΝ ΚΑΤΑΨΥΧΕΤΕ.
Ενδέχεται να παρατηρηθεί ίζημα ή αιωρούμενα συζευγμένα σωματίδια (θρόμβοι) στο φιαλίδιο CAPICLEAN, τα οποία ωστόσο δεν επηρεάζουν
δυσμενώς τη χρήση.
Μην διαλύετε αυτό το ίζημα ή αυτά τα σωματίδια. Συνιστάται η συλλογή μόνο του υπερκειμένου.
Για μεταγενέστερη χρήση, φυλάσσετε το σωλήνα που περιέχει το αραιωμένο διάλυμα σε θερμοκρασία 2 – 8 °C. Πρέπει να χρησιμοποιείται
εντός της ημέρας.
3. ΔΙΑΛΥΜΑ ΥΠΟΧΛΩΡΙΩΔΟΥΣ ΝΑΤΡΙΟΥ (για καθαρισμό ακροφυσίων δειγματοληψίας)
Προετοιμασία
Προετοιμάστε το διάλυμα υποχλωριώδους νατρίου (χλώριο 2 % έως 3 %) αραιώνοντας 250 mL χλωριούχου συμπυκνωμένου διαλύματος
(χλώριο 9,6 %) σε 1 λίτρο κρύου απεσταγμένου ή απιονισμένου νερού.
Χρήση
Για τον καθαρισμό των ακροφυσίων δειγματοληψίας στο σύστημα MINICAP (εβδομαδιαία συντήρηση για την απομάκρυνση προσροφημένων
πρωτεϊνών από το ακροφύσιο).
Βλ. εγχειρίδιο χρήσης του συστήματος SEBIA MINICAP.
• Τοποθετήστε το αραιωμένο χλωριούχο διάλυμα που προπαρασκευάσατε σε μικροσωληνάριο 500 µL.
• Κόψτε το πώμα αυτού του μικροσωληναρίου.
• Τοποθετήστε το μικροσωληνάριο μέσα σε ένα σωλήνα αιμόλυσης που χρησιμεύει ως υποστήριγμα (ταυτοποιείται με την ετικέτα γραμμωτού
κωδικού για το διάλυμα υποχλωριώδους νατρίου) και μετά στη θέση αριθμός 1 στην περιστρεφόμενη βάση δειγμάτων του συστήματος
MINICAP.
• Τοποθετήστε ένα νέο κύπελλο αντιδραστηρίου στο αυτοματοποιημένο σύστημα φόρτωσης κυπέλλων του MINICAP (θα εμφανιστεί ένα
μήνυμα εάν λείπει το κύπελλο αντιδραστηρίου).
• Σπρώξτε την περιστρεφόμενη βάση δειγμάτων στο σύστημα MINICAP.
• Κλείστε τις θύρες του συστήματος MINICAP, η ακολουθία καθαρισμού ξεκινά αυτόματα.
ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Για βέλτιστη χρήση του διαλύματος υποχλωριώδους νατρίου με το σύστημα MINICAP, είναι απαραίτητο να χρησιμοποιείτε την
ετικέτα γραμμωτού κωδικού που προορίζεται για την ταυτοποίηση του σωλήνα αιμόλυσης μέσα στον οποίο τοποθετείται το μικροσωληνάριο
που περιέχει το διάλυμα (κόβετε το πώμα του μικροσωληναρίου πριν από τη χρήση).
Φύλαξη, σταθερότητα και σημεία αλλοίωσης
Φυλάσσετε το χλωριούχο διάλυμα εργασίας σε κλειστό δοχείο σε θερμοκρασία δωματίου. Το διάλυμα παραμένει σταθερό για 3 μήνες.
Αποφεύγετε την έκθεση στο ηλιακό φως και την αποθήκευση κοντά σε πηγές θερμότητας και ανάφλεξης, οξέα και αμμωνία.
4. ΔΙΑΛΥΜΑ ΠΛΥΣΗΣ CAPILLARYS / MINICAP
Προετοιμασία
Κάθε φιαλίδιο του πυκνού διαλύματος πλύσης CAPILLARYS / MINICAP (SEBIA, PN 2052, 2 φιαλίδια, 75 mL) θα πρέπει να αραιώνεται σε έως
και 750 mL με απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό.
Για το MINICAP, συνιστάται να αραιώνετε μόνο 25 mL του πυκνού διαλύματος σε 250 mL απεσταγμένου ή απιονισμένου νερού.
Μετά την αραίωση, το διάλυμα πλύσης περιέχει ένα αλκαλικό διάλυμα pH ≈ 12.
Χρήση
Για την πλύση των τριχοειδών του συστήματος MINICAP.
ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ : Πριν από την πλήρωση του δοχείου με το διάλυμα πλύσης, συνιστάται να πλένετε το στόμιο του δοχείου, το σύνδεσμο και το
σωλήνα με άφθονο απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό, προς αποφυγή επικάθισης αλάτων.
Φύλαξη, σταθερότητα και σημεία αλλοίωσης
Φυλάσσετε το πυκνό διάλυμα και το διάλυμα εργασίας σε κλειστά δοχεία σε θερμοκρασία δωματίου ή στο ψυγείο. Το πυκνό διάλυμα πλύσης
παραμένει σταθερό μέχρι την ημερομηνία λήξης που αναγράφεται στην ετικέτα του κιτ ή του φιαλιδίου διαλύματος πλύσης.
Το διάλυμα πλύσης εργασίας παραμένει σταθερό για 3 μήνες.
Πετάξτε το διάλυμα εργασίας αν μεταβληθεί η όψη του, π.χ. αν θολώσει λόγω μικροβιακής επιμόλυνσης.
ΣΗΜΕΙΩΣΕΙΣ :
Οι δοκιμές που πραγματοποιήθηκαν προς επικύρωση των αντιδραστηρίων κατέδειξαν ότι, για τα διαφορετικά διαλύματα και με χρήση κατάλληλου
εξοπλισμού για τον όγκο ανασύστασης, μια απόκλιση ± 5 % στον τελικό όγκο δεν επηρεάζει δυσμενώς την ανάλυση.
Το απεσταγμένο ή απιονισμένο ύδωρ που χρησιμοποιείται για την ανασύσταση διαλυμάτων πρέπει να είναι ελεύθερο βακτηρίων και μυκήτων (χρήση
φίλτρου ≤ 0.45 µm) και να έχει αντιστασικότητα υψηλότερη από 10 Megohms x cm.
ΑΠΑΙΤΟΥΜΕΝΟΣ ΕΞΟΠΛΙΣΜΟΣ ΚΑΙ ΣΥΜΠΛΗΡΩΜΑΤΙΚΑ ΕΞΑΡΤΗΜΑΤΑ
1.
2.
3.
4.
5.
Σύστημα MINICAP, SEBIA, PN 1230, MINICAP FLEX-PIERCING, SEBIA, PN 1232.
Περιστρεφόμενες βάσεις δειγμάτων που παρέχονται με το MINICAP.
Κιτ δοχείων που παρέχεται με το MINICAP: Δοχείο έκπλυσης (για πλήρωση με απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό) και αποβλήτων.
Κύπελλα αντιδραστηρίων MINICAP, SEBIA (250 τεμάχια), PN 2280.
Καπάκια για κάδους για χρησιμοποιημένα δοχεία αντιδραστηρίων, SEBIA (12 τεμάχια), PN 2286 : για τη σφράγιση των δοχείων που
περιέχουν χρησιμοποιημένα κύπελλα.
ΔΕΙΓΜΑΤΑ ΓΙΑ ΑΝΑΛΥΣΗ
Λήψη και διατήρηση δειγμάτων
Η ανάλυση συνιστάται να γίνεται σε φρέσκα δείγµατα ορού. Οι οροί πρέπει να λαµβάνονται σύµφωνα µε τις καθιερωµένες διαδικασίες
στην κλινική εργαστηριακή πράξη. Τα δείγµατα µπορούν να φυλάσσονται επί έως 10 ηµέρες στους 2 - 8 °C. Για πιο µακρAχρονη φύλαξη,
τα δείγµατα πρέπει να καταψύχονται εντAς 8 ωρών απA τη συλλογή τους. Τα κατεψυγµένα δείγµατα ορού είναι σταθερά για τουλάχιστον
ένα µήνα.
- 61 -
MINICAP PROTEIN(E) 6 - 2014/12
Η διάσπαση των πρωτεϊνών, και ιδιαιτέρως του συµπληρώµατος, είναι απρAβλεπτη σε κάθε δείγµα ορού που φυλάσσεται στους 2 - 8 °C.
Με τη διάσπαση, το βήτα-2 κλάσµα προοδευτικά µειώνεται και µπορεί να εµφανίζεται παραµορφωµένο µε µικρά κλάσµατα να
παρουσιάζονται στη ζώνη γάµµα και/ή στη ζώνη βήτα-1. Η άλφα-2 ζώνη µπορεί επίσης να εµφανίζεται ελαφρώς παραµορφωµένη.
Μετά απA 10ήµερη φύλαξη στο ψυγείο (2 - 8 °C), το βήτα-1 κλάσµα µπορεί να εµφανίζεται αυξηµένο µε απουσία του βήτα-2 κλάσµατος.
Ανάλογα με τα δείγματα, η αυτόματη ενσωμάτωση των κλασμάτων από το λογισμικό για σκοπούς επεξεργασίας μπορεί ενδεχομένως να
διαταραχθεί.
ΣΗΜΕΙΩΣΗ : Κατά τη μεταφορά τους, τα δείγματα μπορούν να διατηρηθούν σε θερμοκρασία δωματίου (15 – 30 °C) για έως και 1 ημέρα.
Συνιστάται ιδιαίτερα η μεταφορά τους σε θερμοκρασία 2 – 8 °C.
Προετοιμασία των δειγμάτων
Χρησιμοποιείτε μη αραιωμένα δείγματα ορού.
Μετά από φύλαξη σε θερμοκρασία 2 έως 8 °C ή βαθιά ψύξη, ορισμένοι οροί (ιδιαίτερα όσοι περιέχουν κρυοσφαιρίνες ή κρυοπηκτή) μπορεί να
γίνουν ιξώδεις ή να εμφανίσουν θολερότητα. Σε θερμοκρασία δωματίου, τα δείγματα αυτά μπορούν να υποβληθούν άμεσα σε ανάλυση. Τα
δείγματα που περιέχουν πολυμερισμένη ανοσοσφαιρίνη μπορούν να χρησιμοποιηθούν χωρίς καμία επεξεργασία.
Συνιστάται η παρακολούθηση των χαρακτηριστικών του ορού πριν από την ανάλυση (π.χ. ενδείξεις αιμόλυσης, κρυοσφαιρίνες ή θολερότητα).
Δείγματα προς αποφυγή
• Μην χρησιμοποιείτε δείγματα ορού που έχουν υποστεί αιμόλυση. Η αιμόλυση προκαλεί την εμφάνιση διπλής ζώνης άλφα-2.
• Μην χρησιμοποιείτε παλαιά ή ακατάλληλα αποθηκευμένα δείγματα ορού, καθώς τα κλάσματα βήτα-2 θα είναι μειωμένα.
• Αποφύγετε δείγματα πλάσματος. Το ινωδογόνο μετακινείται στη θέση βήτα-2 (επικάθεται στο κλάσμα βήτα-2 ή υπερτίθεται στη ζώνη βήτα-2
προκαλώντας πιθανή αύξηση αυτού του κλάσματος). Όταν είναι παρόν σε ορισμένα δείγματα (πλάσματος ή ορού που δεν έχουν απινιδωθεί
πλήρως ή δείγματα ασθενών υπό αντιπηκτική θεραπεία), η ανάλυση μπορεί να επηρεαστεί και τα αποτελέσματα να είναι ανακριβή (υποψία
μονοκλωνικής ζώνης ή αύξηση του κλάσματος βήτα-2). Κατά την ανάλυση ενός παλαιού δείγματος πλάσματος (δεν συνιστάται), το
συμπλήρωμα C3, το οποίο είναι ασταθές στο χρόνο, αλλοιώνεται μερικώς, οπότε η ζώνη βήτα-2 αντιστοιχεί σε αυτή την περίπτωση κυρίως
στο ινωδογόνο.
ΣΗΜΕΙΩΣΗ : Τα σωληνάρια συλλογής για βιολογικά δείγματα περιγράφονται στη διαθέσιμη τεκμηρίωση σχετικά με την προαναλυτική
φάση για βιοϊατρική ανάλυση (δεδομένα που παρέχονται από τους κατασκευαστές σωληναρίων, από οδηγούς και συστάσεις σχετικά με
τη συλλογή βιολογικών δειγμάτων). Εάν δεν υπάρχει ένδειξη στις οδηγίες χρήσης σχετικά με το είδος του σωληναρίου που πρέπει να
χρησιμοποιείται, ανατρέξτε στην παρούσα τεκμηρίωση. Για τις διαστάσεις του σωληναρίου που πρέπει να χρησιμοποιείται, ανατρέξτε στο
έγγραφο της SEBIA "Χαρακτηριστικά των σωληναρίων που πρέπει να χρησιμοποιούνται ανάλογα με το όργανο". Η προαναλυτική φάση
πρέπει να διενεργείται σύμφωνα με την τελευταία λέξη της τεχνικής, τις διάφορες συστάσεις, συμπεριλαμβανομένων αυτών που
παρέχονται από τους κατασκευαστές σωληναρίων, και τους ισχύοντες κανονισμούς.
ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ
Το σύστημα MINICAP είναι ένα όργανο πολλαπλών παραμέτρων για την ανάλυση πρωτεϊνών ορού σε 2 παράλληλα τριχοειδή σύμφωνα με την
παρακάτω διαδικασία:
• Ανάγνωση γραμμωτών κωδικών των σωλήνων δειγμάτων (έως και 28 σωλήνες) και της περιστρεφόμενης βάσης δειγμάτων.
• Αραίωση δειγμάτων από κύριους σωλήνες σε κύπελλα αντιδραστηρίων.
• Πλύση τριχοειδών.
• Έγχυση αραιωμένων δειγμάτων.
• Ανάλυση πρωτεϊνών και άμεση ανίχνευση σε τριχοειδή.
Τα χειροκίνητα βήματα της διαδικασίας είναι τα εξής:
• Τοποθέτηση των σωλήνων δειγμάτων στην περιστρεφόμενη βάση δειγμάτων.
• Τοποθέτηση της περιστρεφόμενης βάσης δειγμάτων στο όργανο MINICAP.
• Αφαίρεση των σωλήνων δειγμάτων μετά την ανάλυση.
• Αφαίρεση και σφράγιση των κάδων με τα χρησιμοποιημένα κύπελλα.
ΠΑΡΑΚΑΛΟΥΜΕ ΔΙΑΒΑΣΤΕ ΠΡΟΣΕΚΤΙΚΑ ΤΟ ΕΓΧΕΙΡΙΔΙΟ ΧΡΗΣΗΣ ΤΟΥ ΣΥΣΤΗΜΑΤΟΣ MINICAP.
I. ΠΡΟΕΤΟΙΜΑΣΙΑ ΗΛΕΚΤΡΟΦΟΡΗΤΙΚΗΣ ΑΝΑΛΥΣΗΣ
1. Ενεργοποιήστε το όργανο MINICAP και τον υπολογιστή.
2. Τοποθετήστε ένα νέο κύπελλο αντιδραστηρίου στο αυτοματοποιημένο σύστημα φόρτωσης κυπέλλων του MINICAP (θα εμφανιστεί ένα
μήνυμα εάν λείπει το κύπελλο αντιδραστηρίου).
3. Ενεργοποιήστε το λογισμικό. Η λειτουργία του οργάνου ξεκινά αυτόματα.
4. Το κιτ MINICAP PROTEIN(E) 6 προορίζεται για χρήση με το πρόγραμμα ανάλυσης "PROTEIN(E) 6" του οργάνου MINICAP. Για την
επιλογή του προγράμματος ανάλυσης "PROTEIN(E) 6" και την τοποθέτηση του φιαλιδίου ρυθμιστικού διαλύματος MINICAP
PROTEIN(E) 6 στο όργανο, διαβάστε προσεκτικά το εγχειρίδιο χρήσης του συστήματος MINICAP.
5. Η περιστρεφόμενη βάση δειγμάτων έχει 28 θέσεις για σωλήνες δειγμάτων. Τοποθετήστε μέχρι και 28 σωλήνες δειγμάτων στην
περιστρεφόμενη βάση δειγμάτων ξεκινώντας από τη θέση αριθμός 1. Ο γραμμωτός κωδικός κάθε σωλήνα πρέπει να είναι ορατός από
τα ανοίγματα της περιστρεφόμενης βάσης δειγμάτων.
ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Εάν ο πρώτος σωλήνας προς ανάλυση δεν βρίσκεται στη θέση αριθμός 1, η ανάλυση δεν θα ξεκινήσει (θα εμφανιστεί
μήνυμα εάν ο σωλήνας δείγματος δεν είναι στη θέση αριθμός 1).
ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Όταν χρησιμοποιείτε δείγμα ορού ελέγχου, είναι απαραίτητο να τοποθετείτε την ειδική ετικέτα γραμμωτού κωδικού.
6. Τοποθετήστε ένα νέο κύπελλο αντιδραστηρίου στο αυτοματοποιημένο σύστημα φόρτωσης κυπέλλων του MINICAP (θα εμφανιστεί ένα
μήνυμα εάν λείπει το κύπελλο αντιδραστηρίου).
- 62 -
7.
8.
9.
10.
11.
MINICAP PROTEIN(E) 6 - 2014/12
Τοποθετήστε ένα νέο κάδο για χρησιμοποιημένα κύπελλα στο MINICAP στη θέση που προβλέπεται για αυτόν τον σκοπό.
Σπρώξτε την περιστρεφόμενη βάση δειγμάτων στο σύστημα MINICAP.
Κλείστε τις θύρες του συστήματος MINICAP, η ακολουθία ανάλυσης ξεκινά αυτόματα.
Μετά την ανάλυση, αφαιρέστε την περιστρεφόμενη βάση δειγμάτων με τους σωλήνες δειγμάτων που έχουν αναλυθεί.
Βγάλτε προσεκτικά τον κάδο που περιέχει τα χρησιμοποιημένα κύπελλα αντιδραστηρίων, κλείστε τον ερμητικά με το καπάκι του και
απορρίψτε τον.
ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ: Οι κάδοι που περιέχουν κύπελλα αντιδραστηρίων με βιολογικά δείγματα απαιτούν προσεκτικό χειρισμό.
ΑΡΑΙΩΣΗ - ΜΕΤΑΚΙΝΗΣΗ - ΠΕΡΙΓΡΑΦΗ ΤΩΝ ΑΥΤΟΜΑΤΟΠΟΙΗΜΕΝΩΝ ΒΗΜΑΤΩΝ
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Εκτελείται ανάγνωση των γραμμωτών κωδικών των σωλήνων δειγμάτων και της περιστρεφόμενης βάσης δειγμάτων.
Τα δείγματα αραιώνονται σε ρυθμιστικό διάλυμα και το ακροφύσιο δειγματοληψίας υποβάλλεται σε έκπλυση μετά από κάθε δείγμα.
Τα τριχοειδή υποβάλλονται σε πλύση.
Τα αραιωμένα δείγματα εγχέονται στα τριχοειδή.
Η μετακίνηση των πρωτεϊνών εκτελείται υπό σταθερή τάση για περίπου 4 λεπτά σύμφωνα με το φαινόμενο Peltier.
Οι πρωτεΐνες ανιχνεύονται άμεσα με σάρωση στα 200 nm και το ηλεκτροφορητικό προφίλ εμφανίζεται στην οθόνη του συστήματος.
ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Τα βήματα αυτά αφορούν τους δύο πρώτους σωλήνες δειγμάτων που αναλύονται στο σύστημα. Τα ηλεκτροφορητικά προφίλ
εμφανίζονται μετά από 10 λεπτά. Για τους επόμενους σωλήνες δειγμάτων, τα δύο πρώτα βήματα (ανάγνωση γραμμωτών κωδικών και αραίωση
δείγματος) εκτελείται κατά την ανάλυση των 2 προηγούμενων δειγμάτων.
II. ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ ΑΝΑΛΥΣΗΣ
Στο τέλος της ανάλυσης, ο ποσοτικός προσδιορισμός κάθε ζώνης πραγματοποιείται αυτόματα και τα προφίλ μπορούν να αναλυθούν. Το
σύστημα υπολογίζει τη συγκέντρωση κάθε κλάσματος βάσει της συνολικής συγκέντρωσης πρωτεϊνών.
Τα ηλεκτροφορήματα που προκύπτουν αξιολογούνται οπτικά για ανωμαλίες στο προφίλ τους.
Τα προφίλ ηλεκτροφόρησης προβάλλονται ανασχεδιασμένα κατά προεπιλογή: σε αυτή την περίπτωση, το κλάσμα άλφα-1 είναι πιο κοντά στην
αλβουμίνη.
Εναλλακτικά, η βασική προβολή επιτρέπει την εμφάνιση του αρχικού προφίλ που προκύπτει από μη επεξεργασμένα δεδομένα.
ΠΑΡΑΚΑΛΟΥΜΕ ΔΙΑΒΑΣΤΕ ΠΡΟΣΕΚΤΙΚΑ ΤΟ ΕΓΧΕΙΡΙΔΙΟ ΧΡΗΣΗΣ ΤΟΥ ΣΥΣΤΗΜΑΤΟΣ MINICAP.
III. ΤΕΛΟΣ ΑΚΟΛΟΥΘΙΑΣ ΑΝΑΛΥΣΗΣ
Μετά το τέλος κάθε ακολουθίας ανάλυσης, ο χειριστής πρέπει να θέσει το σύστημα MINICAP σε αναμονή ή να τερματίσει τη λειτουργία του
συστήματος, ώστε τα τριχοειδή να αποθηκευτούν σε βέλτιστες συνθήκες.
ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Τοποθετήστε ένα νέο κύπελλο αντιδραστηρίου στο αυτοματοποιημένο σύστημα φόρτωσης κυπέλλων του MINICAP (θα
εμφανιστεί ένα μήνυμα εάν λείπει το κύπελλο αντιδραστηρίου).
IV. ΠΛΗΡΩΣΗ ΤΩΝ ΔΟΧΕΙΩΝ ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΩΝ
Το σύστημα MINICAP διαθέτει αυτόματο σύστημα ελέγχου αντιδραστηρίων.
ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Ανατρέξτε στις οδηγίες για την αντικατάσταση των δοχείων αντιδραστηρίων σύμφωνα με τη χρωματική κωδικοποίηση για τα
φιαλίδια και τους συνδετήρες.
Όταν πρέπει να εκτελεστεί ένα από τα παρακάτω βήματα εμφανίζεται ένα μήνυμα:
• Τοποθέτηση νέου φιαλιδίου ρυθμιστικού διαλύματος και/ή,
• Πλήρωση του δοχείου με διάλυμα πλύσης εργασίας και/ή,
• Πλήρωση του δοχείου με διηθημένο απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό για έκπλυση των τριχοειδών και/ή,
• Αδειάστε το δοχείο αποβλήτων
ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ: Μην χρησιμοποιείτε απιονισμένο νερό που κυκλοφορεί στο εμπόριο, π.χ. νερό για σιδέρωμα (κίνδυνος σημαντικής
βλάβης των τριχοειδών σωλήνων). Χρησιμοποιείτε μόνο εξαιρετικά κεκαθαρμένο νερό, π.χ. ύδωρ για ενέσιμα.
ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Πριν από την πλήρωση του δοχείου έκπλυσης, συνιστάται η πλύση του δοχείου με άφθονο απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό.
ΠΑΡΑΚΑΛΟΥΜΕ ΔΙΑΒΑΣΤΕ ΠΡΟΣΕΚΤΙΚΑ ΤΟ ΕΓΧΕΙΡΙΔΙΟ ΧΡΗΣΗΣ ΤΟΥ ΣΥΣΤΗΜΑΤΟΣ MINICAP.
ΈΛΕΓΧΟΣ ΠΟΙΟΤΗΤΑΣ
Συνιστάται η προσθήκη ενός δείγματος ορού ελέγχου σε κάθε ακολουθία ανάλυσης.
ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ
Τιμές
Η άμεση ανίχνευση στα 200 nm στα τριχοειδή παρέχει τις σχετικές συγκεντρώσεις (ποσοστά επί τοις εκατό) των επιμέρους ζωνών πρωτεϊνών.
Οι φυσιολογικές τιμές (μέση τιμή ± 2 SD) για κάθε κύρια ηλεκτροφορητική ζώνη πρωτεϊνών ορού στο σύστημα MINICAP διαμορφώνονται βάσει
υγιούς πληθυσμού 246 ενηλίκων με φυσιολογικά επίπεδα τριγλυκεριδίων (άνδρες και γυναίκες):
- 63 -
MINICAP PROTEIN(E) 6 - 2014/12
Αλβουµίνη
α1-σφαιρίνες
α2-σφαιρίνες
Βήτα σφαιρίνες
Βήτα-1 σφαιρίνες
Βήτα-2 σφαιρίνες
γ σφαιρίνες
Συνιστάται κάθε εργαστήριο να διαμορφώνει τις δικές του φυσιολογικές τιμές.
MINICAP PROTEIN(E) 6
55.8 - 66.1 %
2.9 - 4.9 %
7.1 - 11.8 %
8.4 - 13.1 %
4.7 - 7.2 %
3.2 - 6.5 %
11.1 - 18.8 %
ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Οι φυσιολογικές τιμές διαμορφώνονται χρησιμοποιώντας τις πρότυπες παραμέτρους του λογισμικού MINICAP (εξομάλυνση 2 και
αυτόματη μετατόπιση).
Ερμηνεία
Το συμπλήρωμα C4 μετακινείται μεταξύ των ζωνών βήτα-1 και βήτα-2, η CRP μετακινείται στη θέση βήτα-2, βλ. ΠΡΟΦΙΛ ΗΛΕΚΤΡΟΦΟΡΗΣΗΣ.
Μια σχετική αύξηση της ζώνης βήτα-2 σε σχέση με τη ζώνη βήτα-1, χωρίς κλινικό πλαίσιο φλεγμονώδους νόσου, είναι μια προειδοποιητική
ένδειξη για την αναγκαιότητα συμπληρωματικών αναλύσεων.
Σε περίπτωση αμφιβολίας σχετικά με την ερμηνεία του προτύπου και / ή τη θέση των ελάχιστων τιμών (ιδίως, κατά την ανάλυση εξωτερικού
δείγματος ελέγχου), είναι απαραίτητη η υπέρθεση του ληφθέντος προτύπου σε αυτό του Φυσιολογικού Ορού Ελέγχου (SEBIA, PN 4785).
Μπορεί να υπάρχει υποψία για παρουσία μονοκλωνικού στοιχείου στο δείγμα ορού, όταν ένα μοναδικό ηλεκτροφορητικό πρότυπο
πρωτεϊνών καθυστερεί ή είναι διαστρεβλωμένο ή στην περίπτωση που το λογισμικό (PHORESIS έκδοση ≥ 8.63) δεν είναι δυνατό να
ξανασχεδιάσει τη ζώνη αλβουμίνης / άλφα-1. Σε αυτή την περίπτωση εμφανίζεται το ακόλουθο προειδοποιητικό μήνυμα στο
ηλεκτροφορητικό πρότυπο : "Warning: Migration time out of range" (Προειδοποίηση: Χρόνος μετακίνησης εκτός εύρους) με ένα κόκκινο
προειδοποιητικό σήμα. Αυτό το κόκκινο προειδοποιητικό σήμα εμφανίζεται επίσης στο μωσαϊκό των καμπυλών και στον πίνακα
αποτελεσμάτων για το εν λόγω δείγμα. Για να επιβεβαιωθεί η παρουσία ενός μονοκλωνικού στοιχείου στο δείγμα ορού, πρέπει να
επεξεργαστείτε το δείγμα με βήτα-μερκαπτοαιθανόλη και να επαναλάβετε την ανάλυση του δείγματος μετά από την αναγωγή. Στην περίπτωση
αυτή (i) προετοιμάστε 1 % βήτα-μερκαπτοαιθανόλης (BME ή 2-μερκαπτοαιθανόλη, 2 ME) σε Fluidil (SEBIA, PN 4587, 1 φιαλίδιο 5 mL) (ii)
προσθέστε 100 µL αυτού του αναγωγικού διαλύματος σε 300 µL καθαρού ορού, (iii) περιδινήστε το διάλυμα, περιμένετε 15 λεπτά και στη
συνέχεια ακολουθήστε την τυπική διαδικασία.
ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Μετά την αναγωγή με βήτα-μερκαπτοαιθανόλη, το δείγμα πρέπει να αναλύεται χωρίς χρονοτριβή. Κανένας σωλήνας δείγματος
δεν πρέπει να παραμένει σε αναμονή για ανάλυση στο σύστημα MINICAP.
Όταν πολλά ηλεκτροφορητικά πρότυπα εμφανίζουν το ίδιο προειδοποιητικό σήμα, καλέστε την Τεχνική Υπηρεσία της SEBIA.
Συνιστάται ταυτοποίηση για το χαρακτηρισμό των μονοκλωνικών ή ολιγοκλωνικών στοιχείων:
- μέσω ανοσοπροσδιορισμού με το κιτ SEBIA MINICAP IMMUNOTYPING ή,
- μέσω ανοσοκαθήλωσης με τα κιτ SEBIA HYDRAGEL IF.
Για βοήθεια κατά την ερμηνεία των ηλεκτροφορημάτων πρωτεϊνών ορού, ανατρέξτε στη ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΑ.
Ζώνη άλφα-2 :
• Σε ορισμένα δείγματα και ανάλογα με τον φαινότυπο απτοσφαιρίνης, η ζώνη άλφα-2 μπορεί να είναι διαχωρισμένη, βλ. ΠΡΟΦΙΛ
ΗΛΕΚΤΡΟΦΟΡΗΣΗΣ.
Παρεμβολές και περιορισμοί
Βλέπε ΔΕΙΓΜΑΤΑ ΠΡΟΣ ΑΝΑΛΥΣΗ.
Η υψηλή συγκέντρωση στο δείγμα λιποπρωτεϊνών / τριγλυκεριδίων ή χολικών πιγμέντων (με χαρακτηριστικό κιτρινοπράσινο χρώμα στον ορό)
μπορεί να δώσει την εικόνα διπλής λευκωματιναιμίας στο προφίλ ηλεκτροφόρησης.
Λbγω των rρίων διακριτικής ικανbτητας και ευαισθησίας της ηλεκτρribρησης }ώνης, είναι πιθανb κάπrια μrνrκλωνικά στrι{εία να μην ανι{νεύrνται
με αυτήν τη μέθrδr.
Ενδέχεται να μην μπορεί να ανιχνευθεί ένα μονοκλωνικό στοιχείο (δηλ. πολυμερισμένη ανοσοσφαιρίνη διασπαρμένη ή συγκαλυμμένη στο
πολυκλωνικό υπόστρωμα). Αντίστροφα, μια ελαφριά παραμόρφωση στο ηλεκτροφορητικό πρότυπο πιθανόν να δηλώνει την παρουσία
μονοκλωνικής ανοσοσφαιρίνης. Σε κάθε περίπτωση, πρέπει να αναλύεται το κλινικό πλαίσιο και, αν πιθανολογείται γαμμοπάθεια, συνιστάται
η εκτέλεση ανάλυσης ανοσοπροσδιορισμού στο δείγμα. Αν παραμένει αβεβαιότητα, επιβεβαιώστε το αποτέλεσμα με τεχνική ανοσοκαθήλωσης
σε γέλη αγαρόζης.
Αντιμετώπιση Προβλημάτων
Επικοινωνήστε με την Τεχνική Υπηρεσία SEBIA του προμηθευτή εάν δεν είναι δυνατή η διεξαγωγή της ανάλυσης, ακόμη και εάν έχετε
ακολουθήσει προσεκτικά τις οδηγίες για την προετοιμασία και τη φύλαξη των υλικών καθώς και για την εκτέλεση της διαδικασίας.
Τα Φύλλα Δεδομένων Ασφαλείας των αντιδραστηρίων των κιτ και πληροφορίες για την ασφαλή απόρριψή τους διατίθενται από την Τεχνική
Υπηρεσία του προμηθευτή.
ΔΕΔΟΜΕΝΑ ΑΠΟΔΟΣΗΣ
Τα αποτελέσματα που λαμβάνονται με τη διαδικασία MINICAP PROTEIN(E) 6 εμφανίζουν μια πολύ καλή αναπαραγωγιμότητα για ποσοτική
ανάλυση με μέσο CV % περίπου 2,1 % για κάθε πρωτεϊνικό κλάσμα.
Οι φυσιολογικές τιμές διαμορφώνονται χρησιμοποιώντας τις πρότυπες παραμέτρους του λογισμικού MINICAP (εξομάλυνση 2 και αυτόματη
μετατόπιση).
Αναπαραγωγιμότητα εντός μιας ακολουθίας και μεταξύ σειρών
Τέσσερα (4) διαφορετικά δείγματα ορούν υποβλήθηκαν σε επεξεργασία σε 2 συστήματα MINICAP με χρήση της διαδικασίας MINICAP
PROTEIN(E) 6 και την ίδια παρτίδα ρυθμιστικού διαλύματος ανάλυσης. Κάθε δείγμα υπέστη επεξεργασία 5 φορές στα 2 τριχοειδή κάθε
συστήματος. Η μέση τιμή, η τυπική απόκλιση και ο % συντελεστής μεταβλητότητας (n = 10) υπολογίστηκαν για κάθε δείγμα και για κάθε
σύστημα.
- 64 -
MINICAP PROTEIN(E) 6 - 2014/12
Στον παρακάτω πίνακα παρατίθενται οι τιμές κάθε πρωτεϊνικού κλάσματος για τα 4 δοκιμαζόμενα δείγματα με τα 2 συστήματα MINICAP.
Κλάσμα
Αλβουμίνη
Ορός A : σύστημα 1 - σύστημα 2
ΜΕΣΗ ΤΙΜΗ (%)
59,2 - 58,6
SD
0,53 - 0,74
CV (%)
0,9 - 1,3
Ορός B : σύστημα 1 - σύστημα 2
ΜΕΣΗ ΤΙΜΗ (%)
60,7 - 59,7
SD
0,55 - 0,45
CV (%)
0,9 - 0,8
Ορός C : σύστημα 1 - σύστημα 2
ΜΕΣΗ ΤΙΜΗ (%)
55,4 - 54,1
SD
0,73 - 0,49
CV (%)
1,3 - 0,9
Ορός F : σύστημα 1 - σύστημα 2
ΜΕΣΗ ΤΙΜΗ (%)
60,9 - 60,9
SD
0,38 - 0,46
CV (%)
0,6 - 0,7
SD MAX
CV (%) MAX
1,2
2,0
Άλφα 1
Άλφα 2
Βήτα 1
Βήτα 2
Γάμμα
5,0 - 5,2
0,14 - 0,16
2,8 - 3,0
8,6 - 8,6
0,28 - 0,16
3,2 - 1,9
4,9 - 5,1
0,21 - 0,15
4,3 - 3,0
4,5 - 4,5
0,11 - 0,13
2,5 - 2,9
17,8 - 18,0
0,29 - 0,30
1,6 - 1,7
3,5 - 3,6
0,09 - 0,10
2,7 - 2,7
8,9 - 9,2
0,23 - 0,15
2,5 - 1,6
6,7 - 7,1
0,18 - 0,11
2,7 - 1,5
5,2 - 5,0
0,17 - 0,15
3,3 - 3,0
15,0 - 15,5
0,20 - 0,24
1,3 - 1,6
3,6 - 3,7
0,14 - 0,14
3,8 - 3,8
10,1 - 10,5
0,27 - 0,16
2,7 - 1,5
5,7 - 5,8
0,13 - 0,05
2,3 - 0,9
3,8 - 3,9
0,11 - 0,13
2,8 - 3,3
21,3 - 22,1
0,45 - 0,25
2,1 - 1,1
4,7 - 4,2
0,10 - 0,10
2,2 - 2,5
9,0 - 9,6
0,21 - 0,18
2,3 - 1,9
6,3 - 6,2
0,18 - 0,13
2,9 - 2,1
4,5 - 4,5
0,14 - 0,12
3,0 - 2,7
14,6 - 14,7
0,20 - 0,20
1,4 - 1,4
0,4
7,0
0,7
7,0
0,7
7,0
0,5
7,0
0,5
4,0
ΣΗΜΕΙΩΣΗ : Οι μέγιστες τιμές για την τυπική απόκλιση και το συντελεστή διακύμανσης (SD MAX και CV (%) MAX) έχουν καθοριστεί με επιπλέον
αναλύσεις επαναληψιμότητας ορών ελέγχου, οι οποίες έχουν πραγματοποιηθεί σε μια σειρά οργάνων. Είναι ανεξάρτητες από τις τιμές που
δηλώνονται στον παραπάνω πίνακα αποτελεσμάτων.
Αναπαραγωγιμότητα μεταξύ σειρών
Πέντε (5) διαφορετικά δείγματα ορούν υποβλήθηκαν σε επεξεργασία 10 φορές σε 3 συστήματα MINICAP με χρήση της διαδικασίας MINICAP
PROTEIN(E) 6 και την ίδια παρτίδα ρυθμιστικού διαλύματος ανάλυσης. Η μέση τιμή, η τυπική απόκλιση και ο % συντελεστής μεταβλητότητας
(n = 10) υπολογίστηκαν για κάθε ζώνη και για κάθε σύστημα.
Στον παρακάτω πίνακα παρατίθενται οι οριακές τιμές για τα 5 δοκιμαζόμενα δείγματα στα 3 συστήματα και ο μέσος CV βάσει του CV κάθε
κλάσματος (n = 15).
ΚΛΑΣΜΑ
Αλβουμίνη
Άλφα 1
Άλφα 2
Βήτα 1
Βήτα 2
Γάμμα
ΜΕΣΗ ΤΙΜΗ (%)
52,4 - 61,1
3,4 - 4,9
9,1 - 12,5
5,4 - 6,7
3,5 - 6,8
14,1 - 18,5
SD
0,21 - 0,60
0,06 - 0,28
0,09 - 0,29
0,05 - 0,17
0,04 - 0,16
0,06 - 0,44
CV (%)
0,4 - 1,0
1,8 - 6,6
0,8 - 3,0
1,0 - 2,7
1,3 - 3,7
0,4 - 2,4
ΜΕΣΟΣ CV (%)
0,7 %
3,1 %
1,4 %
1,9 %
2,4 %
1,4 %
Αναπαραγωγικότητα μεταξύ συστημάτων
Πέντε (5) διαφορετικά δείγματα ορούν υποβλήθηκαν σε επεξεργασία 10 φορές σε 3 συστήματα MINICAP με χρήση της διαδικασίας MINICAP
PROTEIN(E) 6 και την ίδια παρτίδα ρυθμιστικού διαλύματος ανάλυσης. Η μέση τιμή, η τυπική απόκλιση και ο % συντελεστής μεταβλητότητας
(n = 30) υπολογίστηκαν για κάθε ζώνη στα 3 συστήματα.
Στον παρακάτω πίνακα παρατίθενται οι οριακές τιμές για τα 5 δοκιμαζόμενα δείγματα στα 3 συστήματα και ο μέσος CV βάσει του CV κάθε
κλάσματος (n = 5).
ΚΛΑΣΜΑ
Αλβουμίνη
Άλφα 1
Άλφα 2
Βήτα 1
Βήτα 2
Γάμμα
ΜΕΣΗ ΤΙΜΗ (%)
52,6 - 60,5
3,5 - 4,8
9,5 - 12,2
5,4 - 6,5
3,7 - 6,8
14,2 - 18,2
SD
0,39 - 1,00
0,13 - 0,31
0,12 - 0,36
0,10 - 0,31
0,13 - 0,21
0,15 - 0,45
Ακρίβεια
CV (%)
0,7 - 1,7
2,9 - 7,0
1,0 - 3,8
1,8 - 4,9
1,9 - 5,6
1,0 - 3,0
ΜΕΣΟΣ CV (%)
1,2 %
4,4 %
2,7 %
3,1 %
3,7 %
2,0 %
Παθολογικά και φυσιολογικά δείγματα ορού (n = 60) υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με χρήση της διαδικασίας MINICAP PROTEIN(E) 6 και
άλλων συστημάτων τριχοειδούς ηλεκτροφόρησης που είναι διαθέσιμα στο εμπόριο. Οι παράμετροι συσχετισμού που υπολογίστηκαν για τις
επιμέρους ζώνες από τα συγκεντρωτικά δεδομένα για την τεχνική MINICAP PROTEIN(E) 6 έναντι του συγκριτικού συστήματος τριχοειδούς
ηλεκτροφόρησης (y = MINICAP PROTEIN(E) 6) είχαν ως εξής:
- 65 -
Κλάσμα
Αλβουμίνη
Άλφα 1
Άλφα 2
Βήτα 1
Βήτα 2
Γάμμα
Σημείο τομής του άξονα
Συντελεστής συσχετισμού
των y
0,996
0,046
0,987
0,032
0,993
0,347
0,944
0,686
0,986
-0,232
0,999
0,222
MINICAP PROTEIN(E) 6 - 2014/12
Κλίση
0,985
1,012
1,024
0,911
1,035
0,986
Εύρος % τιμών MINICAP
PROTEIN(E) 6
37,4 - 74,0
3,1 - 13,0
7,8 - 23,5
3,1 - 10,2
1,9 - 14,4
3,5 - 34,7
Ευαισθησία
Ένα δείγμα ορού με μονοκλωνική πρωτεΐνη 0,103 g/dL το οποίο υπέστη αραίωση κατ' επανάληψη ηλεκτροφορήθηκε με τη διαδικασία MINICAP
PROTEIN(E) 6. Η υψηλότερη αραίωση με ανιχνεύσιμη μονοκλωνική ζώνη αντιστοιχούσε σε 1 : 4, ή συγκέντρωση 26 mg/dL της μονοκλωνικής
πρωτεΐνης.
ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Το όριο ανίχνευσης ενδέχεται να διαφέρει ανάλογα με τη θέση του μονοκλωνικού κλάσματος και του πολυκλωνικού υποβάθρου στη
ζώνη γάμμα.
Γραμμικότητα
Ένα διάλυμα αλβουμίνης 5,2 g/dL και ένα διάλυμα γ-σφαιρίνης 3,1 g/dL (οι συγκεντρώσεις πρωτεΐνης προσδιορίστηκαν με νεφελομετρία στα
280 nm) αναμείχθηκαν σε διαφορετικές αναλογίες από 10 έως 10 (διάλυμα αλβουμίνης 100 % + διάλυμα γ-σφαιρίνης 0 %, 90 % + 10 % κλπ,
διάλυμα αλβουμίνης 0 % + διάλυμα γ-σφαιρίνης 100 %) και τα μείγματα υποβλήθηκαν σε ηλεκτροφόρηση με τη διαδικασία MINICAP
PROTEIN(E) 6.
Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι το ποσοστό κάθε κλάσματος που προκύπτει συσχετίζεται άριστα με το θεωρητικό ποσοστό κάθε κλάσματος εντός
του μείγματος και ότι τυχόν αποκλίσεις μπορούν να ανιχνευθούν με γραμμικότητα χρησιμοποιώντας τη διαδικασία MINICAP PROTEIN(E) 6.
Η διαδικασία MINICAP PROTEIN(E) 6 αποδείχθηκε ότι είναι γραμμική για κλάσματα αλβουμίνης και γ-σφαιρινών σε όλο το εύρος
συγκεντρώσεων που μελετήθηκε (μεταξύ 0,0 και 5,2 g/dL αλβουμίνης και 3,1 g/dL γ-σφαιρινών).
- 66 -
MINICAP PROTEIN(E) 6 - 2014/12
BIBLIOGRAPHIE / BIBLIOGRAPHY
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
Clark R et al. Rapid capillary electrophoretic analysis of human serum proteins : qualitative comparison with high-throughput agarose gel
electrophoresis. J. Chromatogr. A, 744, 205-213 (1996).
Henskens Y et al. Detection and identification of monoclonal gammopathies by capillary electrophoresis. Clin. Chem., 44, 1184-1190 (1998).
Jellum E et al. Diagnostic applications of chromatography and capillary electrophoresis. J. Chromatogr. B, 689, 155-164 (1997).
Jenkins MA and Guerin MD. Quantification of serum proteins using capillary electrophoresis. Ann. Clin. Biochem., 32, 493-497 (1995).
Jenkins MA et al. Evaluation of serum protein separation by capillary electrophoresis : prospective analysis of 1000 specimens. J. Chromatogr.
B, 672, 241-251 (1995).
Jenkins MA and Guerin MD. Capillary electrophoresis procedures for serum protein analysis : comparison with established techniques. J.
Chromatogr. B, 699, 257-268 (1997).
Jenkins MA and Ratnaike S. Five unusual serum protein presentations found by capillary electrophoresis in the clinical laboratory. J. Biochem.
Biophys. Methods, 41, 31-47 (1999).
Katzmann JA et al. Identification of monoclonal proteins in serum : A quantitative comparison of acetate, agarose gel, and capillary
electrophoresis. Electrophoresis, 18, 1775-1780 (1997).
Landers JP. Clinical Capillary Electrophoresis. Clin. Chem., 41, 495-509 (1995).
Oda RP et al. Capillary electrophoresis as a clinical tool for the analysis of protein in serum and other body fluids. Electrophoresis, 18, 1715-1723
(1997).
Wijnen PA and van Dieijen-Visser M. Capillary Electrophoresis of serum proteins : Reproducibility, comparison with agarose gel electrophoresis
and a review of the literature. Eur. J. Clin. Chem. Clin. Biochem., 34, 535-545 (1996).
Wendling A. Procédures de diagnostic ou de dépistage : Justification et validité d’un test de diagnostic ou de dépistage-sensibilité-spécificité.
Impact-Internat, 1986 ; Sept : 93-97.
Le Carrer D, Bach-Ngohou K. L'électrophorèse capillaire automatisée en biologie clinique. Spectra Biologie, 146 : 47 - 52 (2005).
Blancher A., Boulestin A., Abbal M. (2007) Diagnostic biologique des gammapathies monoclonales en 2007 et leur identification immunologique.
Feuillets de biologie, 48, N° 279, 29 – 36.
Blessum C., Jeppsson J.O., Aguzzi F., Bernon H., Bienvenu J. (1999) L’électrophorèse capillaire : principe et applications au laboratoire de
biologie clinique. Annales de Biologie Clinique. Volume 57, Numéro 6, 643 - 57, Novembre - Décembre 1999.
Chartier C. et al (2011) Evaluation of two automated capillary electrophoresis systems for human serum protein analysis. Clin. Biochem.,
DOI:10.1016/j.clinbiochem.2011.05.022.
- 180 -
MINICAP PROTEIN(E) 6 - 2014/12
SCHÉMAS / FIGURES
PROFILS ÉLECTROPHORÉTIQUES - ELECTROPHORETIC PATTERNS
Figure 1
1
a-
Al
ph
ph
Al
Be
G
am
m
ta
Be 2
ta
-1
a-
a
2
Albumin
Prealbumin
Gammaglobulins
Albumin
C3 Complement
C4 Complement
α-lipoproteins
preß-lipoproteins
Transferrin
ß-lipoproteins
Hemopexin
Alpha-1 acid glycoprotein
2-2 Haptoglobin phenotype
Alpha-1 antitrypsin
Alpha-2 macroglobulin
Figure 2
- 181 -
in
um
Al
b
-1
ha
Al
p
Al
p
ha
ta
Be
-2
-1
-2
ta
Be
G
am
m
a
1-1 Haptoglobin phenotype
MINICAP PROTEIN(E) 6 - 2014/12
SCHÉMAS / FIGURES
PROFILS ÉLECTROPHORÉTIQUES - ELECTROPHORETIC PATTERNS
Figure 3
in
Al
b
ph
Al
- 182 -
um
1
-2
ha
Al
p
a-
-2
-1
ta
ta
Be
Be
G
am
m
a
1-2 Haptoglobin phenotype

Download Report