I RETICOLOCITI M. BUTTARELLO ULSS 19 ADRIA (RO) RETICOLOCITI: DEFINIZIONE (CLSI H44-A2) - CELLULE ERITROIDI DI TRANSIZIONE FRA IL PRECURSORE NUCLEATO E L’ERITROCITA MATURO - DEFINIZIONE MICROSCOPICA: CELLULE CHE CONTENGONO ALMENO 2 GRANULI COLORABILI CON NMB, VISIBILI SENZA AGGIUSTAMENTO DEL FUOCO E LONTANI DAL MARGINE CELLULARE RETICOLOCITI: COLORAZIONE NMB MATURAZIONE E CARATTERISTICHE MORFOLOGICO-STRUTTURALI L’ILOT ERYTHROBLASTIQUE (M. Bessis 1958) (unitè functionelle de la moelle osseuse) ISOLOTTO ERITROBLASTICO: IMMAGINE TRIDIMENSIONALE MATURAZIONE DEI PRECURSORI ERITROIDI VARIAZIONI STRUTTURALI DURANTE LA MATURAZIONE RETICOLOCITARIA Chasis et al, Blood 1989 “NASCITA” DELL’ERITROCITA Lee et al. 2014 Griffiths et al. Blood 2012 ENDOCITOSI ED ESOCITOSI SUI RETICOLOCITI IN MATURAZIONE Griffiths et al. Blood 2012 FORMAZIONE DI UN VACUOLO INTRARETICOLOCITARIO Koury et al, Blood 2005 DIMOSTRAZIONE IN VITRO DELLA RIELABORAZIONE STRUTTURALE DELLA MEMBRANA CITOPLASMATICA RETICOLOCITARIA Chasis et al, Blood 1989 RETICOLOCITI ED RNA RNA RETICOLOCITARIO E STABILITÀ DI MEMBRANA Lee et al. 2014 VARIAZIONI STRUTTURALI NEL PASSAGGIO DA RETICOLOCITA AD ERITROCITA MATURO (soggetti normali) - RIDUZIONE DEL VOLUME (~ 19%) - PERDITA DEL CONTENUTO EMOGLOBINICO (~ 3%) - AUMENTO DELLA CONCENTRAZIONE EMOGLOBINICA (~ 14%) RETICOLOCITI: CONTEGGIO RETICOLOCITI: TEMPO DI MATURAZIONE Finch, Blood 1982 CORRELAZIONE FRA EMATOCRITO E TEMPI DI MATURAZIONE MIDOLLARI ED EMATICI EMATOCRITO NORMOBLASTI E RETICOLOCITI 45 3.5 35 3.0 25 2.5 15 1.5 RETICOLOCITI CIRCOLANTI MISURA DEL TURNOVER ERITROCITARIO PER MEZZO DEL CONTEGGIO RETICOLOCITARIO - UTILIZZARE IL CONTEGGIO ASSOLUTO (x 10 9 /L) - CORREGGERE PER IL TEMPO DI MATURAZIONE (RETICOLOCITI DA SHIFT) - IN ALTERNATIVA AL PRECEDENTE UTILIZZARE L’IRF TEMPO DI MATURAZIONE DEI RETICOLOCITI IN VARIE CONDIZIONI PATOLOGICHE From Baldini and Pannaciulli 1960 Conteggio reticolocitario con Sysmex XE 2100/5000 ABX VEGA / PENTRA: MODULO PER IL CONTEGGIO RETICOLOCITARIO INSERITO NELL’ANALIZZATORE Conteggio reticolocitario con Coulter UniCel DxH 800 CONTEGGIO RETICOLOCITARIO CON CELL-DYN SAPPHIRE Conteggio reticolocitario con Sysmex XN CONTEGGIO RETICOLOCITARIO CON MINDRAY BC6800 HEALTHY HEMOLITIC ANEMIA/MDS IRON DEFICIENCY Advia 120: mappa RBC/RET Advia 120: mappa RBC/RET dopo terapia RETICOLOCITI: INTERVALLI DI RIFERIMENTO x109/L 0 70 14 0 0 70 70 0 70 CD ASS AD ASS Advia 33 -104 0 14 0 LH ASS LH 750 18 - 114 CD 4000 28 -119 14 0 0 70 14 0 14 0 0 70 PE NASS XE ASS RE FASS Pentra 30 - 105 XE 2100 27 - 99 Riferimento 29 -129 14 0 PARAMETRI MATURATIVI IRF: FRAZIONE IMMATURA DEI RETICOLOCITI - CORRISPONDE AI RETICOLOCITI AD ELEVATO CONTENUTO IN RNA - VARIABILE DA 0.0 A 1.0 - ESPRIME L’ATTIVITA’ ERITROPOIETICA MIDOLLARE “PRECOCE” APPLICAZIONI CLINICHE CONSOLIDATE (Reticolociti: IRF) 1) Controllo precoce della ripresa eritropoietica dopo trapianto di midollo o aplasia comunque indotta 2) Classificazione delle anemie ( ret, IRF: emolitiche o da perdita; ret, IRF: ridotta attività midollare; ret, IRF: infezione o MDS) 3) Controllo dell’efficacia della terapia (forme carenziali, EPO) 4) Diagnosi di anemia aplastica 1 0.8 IRF 0.6 0.4 0.2 0 0 50 100 150 Reticolociti (x109/L) 200 250 300 IRF: INTERVALLI DI RIFERIMENTO 0. 00 0. 12 0. 24 0. 36 0. 0 IR FAD2 0. 12 0. 6 0. 9 0. 0 CD IRF Advia 0.06 – 0.20 0. 00 0. 3 PE NIRF 2 Pentra 0.09 – 0.17 0. 36 0. 00 0. 6 0. 9 LH IRF CD 4000 0.20 – 0.40 0. 24 0. 3 LH 750 0.22 – 0.40 0. 06 0. 12 IRF2 XEXE2100 0.02 – 0.11 0. 18 Simel- emat Bulian, Doretto 2004 INDICI RETICOLOCITARI INDICI RETICOLOCITARI -ABBOTT SAPPHIRE MCVr, MCHr -ABX HORIBA PENTRA 120 Retic MCVr - SIEMENS ADVIA 2120 MCVr, CHr - BECKMAN COULTER LH 750 MSRV - SYSMEX XE 5000 RET-He MCVr: volume reticolocitario medio; CHr: contenuto emoglobinico reticolocitario medio; MRSV: volume cellulare medio dei reticolociti sfericizzati; RET-He: equivalente emoglobinico espresso in pg APPLICAZIONI CLINICHE CONSOLIDATE (reticolociti: CHr/Ret He) 1) Diagnosi di eritropoiesi ferrocarente 2) Diagnosi di deficit funzionale di ferro (dializzati o altre condizioni di trattamento con EPO) 3) Controllo della risposta alla somministrazione di ferro (ev o os) APPLICAZIONI CLINICHE CONSOLIDATE (reticolociti: MCVr) 1) Diagnosi di eritropoiesi ferrocarente 2) Verifica precoce della risposta alla somministrazione di ferro 3) Controllo precoce della risposta alla somministrazione di acido folico e cianocobalamina 4) Controllo dell’abuso di eritropoietina nello sport (Ht-ret) CHret/Ret He/MCHr: INTERVALLI DI RIFERIMENTO NELLA POPOLAZIONE ADULTA Parametro mediana 2.5° 97.5° CHret (pg) 32.2 30.1 34.6 Ret He (pg) 32.9 30.7 35.3 MCHr (pg) 29.9 28.5 34.5 Buttarello 2009/Hoffmann 2012 MCVr: INTERVALLI DI RIFERIMENTO NELLA POPOLAZIONE ADULTA Parametro mediana 2.5° 97.5° MCVr (fL) Pentra 102 91 111 MCVr (fL) ADVIA 120 106 100 114 MSRV (fL) LH 750 108 98 120 - 92 116 SAPPHIRE (fL) VALUTAZIONE DELLA RISPOSTA TERAPEUTICA CON I MODERNI INDICI RETICOLOCITARI 40 150 5 MCVr CHr 140 RET % 4 35 130 120 2 110 25 1 100 20 90 0 -5 0 5 10 GIORNI INIZIO TERAPIA CON B12 INIZIO TERAPIA CON FERRO 15 RETICOLOCITI (%) 30 MCVr (fL) CHr (pg) 3 130 MCVr CHr RET 120 200 MCVr (fl) CHr (pg) 30 25 110 150 100 90 20 250 100 RETICOLOCITI (x 109/L) 35 80 0 5 10 15 50 GIORNI INIZIO TERAPIA CON FERRO M.Buttarello 130 300 MCVr CHr RET 120 30 250 110 25 MCVr (fl) CHr (pg) 200 100 150 90 100 80 RETICOLOCITI (x 10 9 /L) 35 20 70 50 0 INIZIO TERAPIA CON FERRO 5 10 15 GIORNI M.Buttarello
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