Test Rapido su Card Leishmania IgG/ IgM Combo (Siero/Plasma

Test Rapido su Card Leishmania IgG/ IgM Combo (Siero/Plasma/Sangue intero)
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PRECAUZIONI
ADRT0121
Diagnostico in vitro
USO PREVISTO
Il Test Rapido Leishmania IgG/IgM Combo è un test immunocromatografico a flusso laterale
per la determinazione e differenziazione degli anticorpi IgG e IgM anti-Leishmania donovani
(L. donovani), il protozoo che causa la leishmaniosi viscerale, nel siero,nel plasma e nel
sangue intero umani. Il test è utile come screening e come aiuto nella diagnosi dell’infezione
da leishmaniosi viscerale. Come per ogni test diagnostico, tutti i campioni che risultino positivi
con questo test devono essere confermati con altri metodi alternativi.
SOMMARIO E SPIEGAZIONE DEL TEST
La leishmaniosi viscerale o Kala-azar, è un'infezione diffusa causata da numerose sottospecie
di L. donovani. L’Organizzazione Mondiale della Sanità (OMS) ha stimato che la malattia
1
infetta circa 12 milioni di persone in 88 paesi . E trasmessa all'uomo dalle punture dei
flebotomi Phlebotomus, che acquisiscono l'infezione da alimenti o da animali infetti. Anche se
è una malattia dei paesi poveri, nel Sud Europa, è diventata l'infezione opportunistica leader in
2-3
pazienti affetti da AIDS .
L’identificazione dell'organismo L. donovani dal sangue, midollo osseo, fegato, linfonodi o della
milza fornisce un mezzo definito di diagnosi. Il rilevamento sierologico di IgM anti-L. donovani
è un eccellente marcatore per la leishmaniosi viscerale acuta. I test utilizzati in clinica sono
4-5
quelli ELISA, immunofluorescenza o il test di agglutinazione diretta. Recentemente, l'utilizzo
nel test di proteine specifiche L. donovani ha migliorato la sensibilità e la specificità 6-7.
Il Test Rapido Leishmania IgG/IgM Combo è un test serologico basato sul ricombinante rK39,
che rileva contemporaneamente gli anticorpi IgG e IgM di L. donovani.
Il test
fornisce un risultato affidabile in 15 minuti senza strumenti.
PRINCIPIO
Il Test Rapido Leishmania IgG/IgM Combo è un test immunocromatografico a flusso laterale.
La card è composto da: 1) un coniugato color Borgogna contenente l’antigene ricombinante
rK39 coniugato con oro colloidale (coniugato Leishmania) e IgG di coniglio coniugate con oro
colloidale; 2) una striscia di membrana di nitrocellulosa contenente due bande del test (bande G
e M ) e una banda di controllo (banda C). La banda M è pre-rivestita con anticorpo monoclonale
anti-IgM umane per la rilevazione di IgM anti-L. donovani, la banda G è pre-rivestita con reagenti
per la determinazione di anticorpi IgG anti- L. donovani, e la banda C è pre-rivestita con anticorpi
di capra anti IgG di coniglio.
Quando un adeguato volume di campione è erogato nel pozzetto del dispositivo, il campione
migra per azione capillare attraverso la card. Gli anticorpi IgM se presenti nel campione del
paziente si legano al coniugato Leishmania. L’immunocomplesso allora è catturato sulla
membrana pre-coattata con anticorpi anti-IgM umane, formando una banda M di colore
bordeaux , indicando risultato del test positivo per L. donovani.
Gli anticorpi IgG se presenti nel campione del paziente si legano ai coniugato Leishmania.
L’immunocomplesso allora è catturato sulla membrana pre-coattata con anticorpi anti-IgG
umane, formando una banda G di colore bordeaux , indicando risultato del test positivo L.
donovani.
L’assenza delle bande T (M e G) suggerisce un risultato negativo. Il test contiene un controllo
interno (banda C) che dovrebbe esibire una banda colorata Borgogna dell’ immunocomplesso di
IgG di capra anti-coniglio/ coniugato IgG-oro di coniglio, senza sviluppo di colore sulla banda T.
Altrimenti, il risultato della prova non è valido e il campione deve essere riprovato con un altro
dispositivo.
REAGENTI E MATERIALE FORNITO
1. Ogni kit contiene: 25 o 30 cards, ciascuna delle quali sigillata in un sacchetto con
all’interno tre articoli:
a)una card,
b)un contagocce di plastica e
c)un essiccante
2.Diluente campione (1 flacone,5 ml).
3.Una metodica (istruzione per l’uso).
MATERIALE CHE POTREBBE ESSERE RICHIESTO MA NON FORNITO
1.
2.
Controllo positivo
Controllo negativo
1.
2.
3.
Orologio o Timer
Pungidito per il test su sangue intero.
Pipetta in grado di erogare 20 microlitri con una precisione migliore del 1,5%.
MATERIALE RICHIESTO MA NON FORNITO
Per uso diagnostico in vitro
1.
Questa metodica deve essere letta completamente prima dell'esecuzione del test.
L'omissione di parte della metodica può dare risultati del test inesatti.
2.
Aprire il sacchetto sigillato solo prima di eseguire il test.
3.
Non utilizzare card scadute.
4.
Portare tutti i reagenti a temperatura ambiente (15-30°C) prima dell'uso.
5.
Non usare componenti appartenenti ad altri kit per eseguire il test con questo kit.
6.
Non usare campioni di sangue emolizzati.
7.
Indossare abbigliamento protettivo e guanti monouso mentre si maneggiano i reagenti
del kit e i campioni. Lavare accuratamente le mani dopo aver eseguito il test.
8.
Gli utilizzatori di questo test dovrebbero seguire le precauzioni universali di CDC degli
Stati Uniti per la prevenzione della trasmissione del HIV, di HBV e di altri agenti
patogeni.
9.
Non fumare, non bere, o non mangiare nelle zone dove si maneggiano i campioni o i
reagenti.
10.
Disporre tutti i campioni e i materiali utilizzati in un contenitore di rifiuti bio-pericolosi.
11.
Maneggiare il controllo negativo e positivo come i campioni.
12.
I risultati del test dovrebbero essere letti entro 15 minuti dopo che il campione è
stato deposto nel pozzetto. Il risultato della lettura eseguito dopo 15 minuti, può
fornire risultati errati.
13.
Non effettuare il test in una stanza con corrente d'aria forte, in presenza di ventilatori
elettrici o di aria condizionata forte.
CONSERVAZIONE E PREPARAZIONE DEI REAGENTI
Tutti i reagenti sono pronti all’uso. Conservare le card inutilizzate, non aperte a 2-30°C.
I controlli positivi e negativi dovrebbero essere mantenuti a 2°C-8°C. Se conservate a 2-8°C,
accertarsi che le card siano portate alla temperatura ambiente prima dell'apertura. Il kit è stabile
fino alla data di scadenza stampata sul sacchetto sigillato. Non congelare il kit o non esporlo a
temperature superiori ai 30°C.
PRELIEVO E PREPARAZIONE DEI REAGENTI
Tutti i campioni devono essere considerati potenzialmente pericolosi e, pertanto, vanno
manipolati con le precauzioni d’uso relative ai prodotti potenzialmente infettivi.
Plasma
1.
Raccogliere il campione di sangue nelle provette di raccolta blu o verde,
(Vacutainer® che contiene rispettivamente EDTA, citrato o eparina) tramite prelievo.
2.
Separare il plasma tramite centrifugazione.
3.
Rimuovere con attenzione il plasma e metterlo in un nuovo tubo .
Siero
1.
Raccogliere il campione di sangue nelle provette di raccolta con il
tappo blu(Vacutainer® che non contiene anticoagulanti) tramite prelievo.
2.
Permettere la coagulazione del sangue.
3.
Separare il plasma tramite centrifugazione.
4.
Rimuovere con attenzione il siero e metterlo in un nuovo tubo .
Testare appena possibile i campioni dopo la raccolta. Conservare i campioni a 2-8°C se non
esaminati immediatamente. Conservare i campioni a 2-8°C fino a 5 giorni. Per una
conservazione di lunga durata,i campioni dovrebbero essere congelati a -20°C. Evitare ripetuti
cicli di congelamento e scongelamento. Prima del test, portare lentamente i campioni congelati
a temperatura ambiente e mescolare delicatamente. I campioni, che contengono particolati
visibili, dovrebbero essere centrifugati prima del test. Per evitare interferenze,non usare
campioni che mostrano una forte lipemia, torbidità o che sono emolizzati.
Sangue intero
Gocce di sangue possono essere ottenute tramite puntura del dito o provetta capillare. Non
utilizzare sangue emolizzato. I campioni di sangue intero, se non testati immediatamente,
devono essere conservati a una temperatura di 2-8°C. I campioni devono essere testati entro
le 24 ore dal prelievo.
PROCEDURA
Step 1 : Portare i componenti del kit e i campioni a temperatura ambiente, se refrigerati
o congelati. Mescolare bene il campione,dopo averlo scongelato,prima
dell'analisi.
Step 2: Estrarre la card dall’involucro e utilizzarla il prima possibile. Appoggiare la card su una
superficie piana e pulita.
Step 3
Assicurarsi che alla card corrisponda il numero di identificazione del campione.
Step 4:
Test su sangue intero:
Erogare una goccia di sangue intero (circa 40-50 µl) . Poi addizionare una goccia di
diluente campione (circa 35-50 µl).
or
1 goccia di sangue intero
1 goccia di diluente campione
Test Rapido su Card Leishmania IgG/ IgM Combo (Siero/Plasma/Sangue intero)
Test su siero o plasma:
Dispensare 20 µl di campione nel pozzetto campione . Poi addizionare 2 gocce di
diluente campione ( circa 70- 100 µl).
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PERFORMANCE
1. Performance cliniche per il test IgM
Un totale di 234 campioni di soggetti suscettibili sono stati esaminati con il test Leishmania
IgG/IgM Combo e confrontati con un kit commerciale EIA. Il confronto di tutti i pazienti è indicato
nella seguente tabella:
Leishmania IgG/IgM Combo
Risultati
20 µL di siero/plasma
5):
2 gocce di diluente campione
Far partire il timer.
Positivo
Negativo
Positivo
31
3
34
Negativo
1
199
200
2. Performance cliniche per il test IgG
Un totale di 214 campioni di soggetti suscettibili sono stati esaminati con il test Leishmania
IgG/IgM Combo e confrontati con un kit commerciale EIA. Il confronto di tutti i pazienti è indicato
nella seguente tabella:
Non leggere il risultato dopo 15 minuti . Per evitare dei malintesi, gettare il dispositivo
dopo l’interpretazione del test.
Leishmania IgG/IgM Combo
CONTROLLO DI QUALITA’
Utilizzando la Card per Test Rapido Leishmania IgG/IgM come descritto nella procedura del
test di cui sopra, eseguire 1 controllo positivo e 1 controllo negativo (fornito su richiesta) nelle
seguenti circostanze per monitorare le prestazioni del test:
1. Un nuovo operatore utilizza il kit, prima di eseguire l'analisi di campioni.
2. Un kit nuovo viene utilizzato.
3. Un nuovo lotto del kit viene utilizzato.
4. La temperatura usata durante la conservazione del kit cade al di fuori di 2-30 ° C.
5. La temperatura della zona del non rientra di 15 -30 ° C.
INTERPRETAZIONE DEI RISULTATI
Se solo la banda C si sviluppa, l’assenza delle bande M e G indica che non sono
rilevabili anticorpi anti-L. donovani. il risultato è negativo.
2.
RISULTATO POSITIVO:
2.1 Oltre alla presenza della banda C, se si sviluppa soltanto la banda M,il test indica la
presenza di anticorpi IgM anti- L. donovani. Il risultato è positivo.
.
Totale
Totale
32
202
234
Sensibilità: 91.2% Specificità: 99.5%. Intervallo di confidenza: 98.3%
15 minuti
6): I risultati devono essere letti in 15 minuti. I risultati positivi possono essere visibili in 1
minuto
IgM EIA
IgG EIA
Positivo
Negativo
Positivo
13
1
Totale
14
Negativo
2
198
200
Totale
15
199
214
Sensibilità: 92.9% Specificità: 99.0%. Intervallo di confidenza: 98.6%
LIMITI DEL TEST
1. La procedura di analisi e l'interpretazione dei risultati di analisi devono essere seguite molto
attentamente quando si verifica la presenza di anticorpi anti- Leishmania typhi e paratyphi nel
siero o plasma o sangue intero di diversi soggetti. L'omissione di parte della procedura può
fornire risultati inesatti.
2. Il test rapido Leishmania IgG/ IgM Combo si limita alla rilevazione qualitativa di anticorpi
anti-Leishmania nel siero, plasma o sangue intero umano. L'intensità della banda del test non
è correlato con il titolo dell'anticorpo nel campione.
3. Un risultato negativo indica l'assenza di rilevazione di anticorpi anti- Leishmania. Tuttavia, un
risultato del test negativo non preclude la possibilità di esposizione e/o di infezione con
Leishmania.
4. Un risultato negativo si può ottenere se la quantità di anticorpi anti- Leishmania presenti
nel campione è sotto i limiti di rilevazione dell'analisi, o gli anticorpi che sono rilevati non sono
presenti durante la fase della malattia in cui il campione è raccolto.
5. Alcuni campioni contenenti un titolo insolitamente alto di anticorpi eterofili o di fattore
reumatoide possono influenzare i risultati attesi.
6. Se il sintomo persiste, mentre il risultato del Il test rapido Leishmania IgG/ IgM Combo è
risultato non reattivo, si consiglia di ri-testare il campione del paziente dopo qualche giorno o di
testare con metodi alternativi, come il test ELISA.
7. I risultati ottenuti con questo test dovrebbero essere interpretati solo in combinazione con
altre procedure diagnostiche e altri risultati clinici.
BIBLIOGRAFIA
1.
2.2 Oltre alla presenza della banda C, se si sviluppa soltanto la banda G, il test indica la
presenza di anticorpi IgG anti- L. donovani.Il risultato è positivo.
2.
3.
4.
5.
6.
2.3 Oltre alla presenza della banda C, si sviluppano le bande G e M, il test indica la presenza
di entrambi gli anticorpi IgG e IgM anti- L. donovani. Il risultato è positivo.
7.
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characterization of a kinesin-related antigen of Leishmania chagasi that detects specific
antibody in African and American visceral leishmaniasis. Proc Natl Acad Sci U S A.
1993 Jan 15;90(2):775-9.
Indice dei simboli CE
Consultare la metodica
Prima di una diagnosi,i risultati clinici dei campioni con risultati reattivi, devono essere
confermati con metodi di sperimentazione alternativi.
REF
Solo per un uso
diagnostico in vitro
Catalogo #
Numero di lotto
Conservare a 2-30°C
Rappresentante
autorizzato
Produttore
Data di produzione
Usare entro
Tests per kit
N
3.
NON VALIDO: Se la banda C non si sviluppa,la prova non è valida anche se si sviluppano le
bande T. Ripetere la prova.
Non
ri-utilizzare

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