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ChromaticTM ESBL ChromaticTM ESBL+AmpC - Biotech-IgG

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© Liofilchem® - ChromaticTM ESBL and ChromaticTM ESBL+AmpC - Rev.0 / 19.03.2014
Instructions For Use
ChromaticTM ESBL
ChromaticTM ESBL+AmpC
ENGLISH
Chromogenic media for detection of ESBLs and AmpC
in Enterobacteriaceae directly from clinical specimens.
DESCRIPTION
ChromaticTM ESBL is a chromogenic medium used for detection of Extended-spectrum β-lactamase (ESBL)-producing
Enterobacteriaceae. ESBLs are enzymes that hydrolyze most penicillins and cephalosporins, inhibited by β-lactamase
inhibitors such as clavulanic acid, sulbactam and tazobactam.
ChromaticTM ESBL+AmpC is a chromogenic medium used for detection of ESBL and AmpC producers. AmpC-type enzymes
hydrolyze penicillins, cephalosporins and monobactam and are poorly inhibited by the classical ESBL inhibitors, especially
clavulanic acid.
ESBL-producing Enterobacteriaceae have become one of the most important causes of nosocomial community-acquired
infections caused by Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae, but also other Gram-negative bacteria. Patients infected by
ESBL producers often received inadequate empirical therapy until the pathogen’s resistance is recognized. Early detection is,
therefore, essential in order to limit the spread of these pathogens.
Organisms producing enough AmpC β-lactamase will typically give a positive ESBL screening test but fail the confirmatory
test involving increased sensitivity with clavulanic acid.
TYPICAL FORMULA
(g/l)
Peptone Mix
43.2
Chromogenic Mix
1.0
Agar
15.0
Selective Mix
0.5
Final pH 7.2 ± 0.2 at 25°C
METHOD PRINCIPLE
Peptones supply amino acids, nitrogen, carbon, minerals, vitamins and other nutrients which support the growth of
microorganisms. Chromogenic mix allows the identification of microorganisms on the basis of the colony color and
morphology. Agar is the solidifying agent.
The Selective mix in Chromatic™ ESBL inhibits the ESBL-non-producing organisms, including AmpC producers.
The Selective mix in Chromatic™ ESBL+AmpC inhibits the ESBL-non-producing organisms, but allows the growth of AmpC
producers.
PREPARATION
Dehydrated medium
Supplements
Suspend 29.6 g of the powder in 500 milliliters of distilled or deionized water. Mix well. Heat
until completely dissolved. Sterilize in autoclave at 121°C for 15 minutes. Cool to 45-50°C.
Aseptically, add 5 ml previously reconstituted supplement, mix well and dispense in Petri dishes.
Add 5 ml distilled or deionized water to the lyophilized supplement tube to be used. Mix well
using a vortex mixer before adding to the medium being prepared.
TEST PROCEDURE
Inoculate the plates by streaking directly the specimen onto the agar surface. Incubate aerobically at 37°C for 18-24 hours.
INTERPRETING RESULTS
After incubation observe the color of the colonies and interpret the results as indicated in the ID table.
ID Table.
Microorganism*
Typical colony color
E. coli
Pink-reddish-mauve
Klebsiella spp, Enterobacter spp, Serratia spp
Proteus spp
Green-blue
Brown
*On ChromaticTM ESBL medium only ESBL-producing organisms grow, while ChromaticTM ESBL+AmpC allows the growth of
both ESBL and AmpC producers.
See pictures in Appendix I.
APPEARANCE
Dehydrated medium: fine, dry, homogeneous, free of extraneous material, beige.
Lyophilized supplements: whitish button, limpid solution once reconstituted.
Prepared medium: slightly opalescent, amber.
STORAGE
The powder is very hygroscopic, store the powder at 10-30°C, in a dry environment, in its original container tightly closed.
Store prepared plates and the lyophilized supplements at 2-8°C away from light. Do not use the product beyond its expiry
date on the label or if product shows any evidence of contamination or any sign of deterioration.
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© Liofilchem® - ChromaticTM ESBL and ChromaticTM ESBL+AmpC - Rev.0 / 19.03.2014
Instructions For Use
SHELF LIFE
Dehydrated medium: 4 years.
Lyophilized supplements: 4 years.
Ready-to-use plates: 4 months.
QUALITY CONTROL
Plates are inoculated with the microbial strains indicated in the QC tables.
Inoculum for productivity: 10-100 CFU/ml.
Inoculum for selectivity: 104-105 CFU/ml.
Incubation conditions: aerobically at 35±2°C for 18-24 h.
ChromaticTM ESBL, QC Table.
Microorganism
Escherichia coli
Klebsiella pneumoniae
Klebsiella pneumoniae
Escherichia coli
DSM 22311
ATCC® 700603
ATCC® BAA-1144
ATCC® 25922
ESBL
phenotype
Positive
Positive
Negative
Negative
AmpC
phenotype
Negative
Negative
Positive
Negative
ESBL
phenotype
Negative
Positive
Negative
Negative
AmpC
phenotype
Positive
Negative
Positive
Negative
Growth
Specification
Good
Good
Inhibited
Inhibited
Reddish colonies
Green-blue colonies
-----
Growth
Specification
Good
Good
Good
Inhibited
Green-blue colonies
Green-blue colonies
Green-blue colonies
---
ChromaticTM ESBL+AmpC, QC Table.
Microorganism
Enterobacter cloacae
Klebsiella pneumoniae
Klebsiella pneumoniae
Escherichia coli
ATCC® BAA-1143
ATCC® 700603
ATCC® BAA-1144
ATCC® 25922
WARNING AND PRECAUTIONS
The product does not contain hazardous substances in concentrations exceeding the limits set by current legislation and
therefore is not classified as dangerous. It is nevertheless recommended to consult the safety data sheet for its correct use.
The product is intended for In vitro diagnostic use and must be used only by properly trained operators.
DISPOSAL OF WASTE
Disposal of waste must be carried out according to national and local regulations in force.
BIBLIOGRAPHY
1. EUCAST guidelines for detection of resistance mechanisms and specific resistances of clinical and/or epidemiological
importance. Version 1.0, 2013.
2. Podschun R, Ullman U. Klebsiella spp as Nosocomial Pathogens: Epidemiology, Taxonomy, Typing Methods, and
Pathogenicity Factors. Clinical Microbiology Reviews. 1998; 11 (4): 589–603.
3. Geiss H.K. Comparison of two test kits for rapid identification of Escherichia coli by a beta-glucuronidase assay.
European Journal of Clinical Microbiology & Infections Diseases. 1990; 9 (2):151-152.
PRESENTATION
ChromaticTM
ESBL
Contents
Ref.
90 mm ready-to-use plates
20 plates
11622
ChromaticTM ESBL+AmpC
90 mm ready-to-use plates
20 plates
11629
ChromaticTM
ESBL
Dehydrated medium
500 g of powder
610629
ChromaticTM
ESBL
Dehydrated medium
100 g of powder
620629
ChromaticTM ESBL Supplement
Lyophilized supplement
10 tubes
81089
ChromaticTM
Lyophilized supplement
10 tubes
81090
ESBL+AmpC Supplement
TABLE OF SYMBOLS
LOT
Batch code
REF
Catalogue
number
IVD
In vitro Diagnostic
Medical Device
Manufacturer
Use by
Temperature
limitation
Contains sufficient
for <n> tests
Caution, consult
Instruction For Use
Fragile, handle
with care
Do not reuse
LIOFILCHEM® s.r.l.
Via Scozia zona ind.le, 64026 Roseto degli Abruzzi (Te) Italy
Tel. +39 0858930745
Fax +39 0858930330
www.liofilchem.net
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Keep away
from sunlight
© Liofilchem® - Chromatic™ ESBL and Chromatic™ ESBL+AmpC - Rev.0 / 19.03.2014
Istruzioni per l’uso
Chromatic™ ESBL
Chromatic™ ESBL+AmpC
ITALIANO
Terreno cromogenico per la ricerca di ESBL ed AmpC
in Enterobacteriaceae direttamente da campioni clinici.
DESCRIZIONE
Chromatic™ ESBL è un terreno cromogenico utilizzato per la ricerca di Enterobacteriaceae produttrici di β-lattamasi a
spettro esteso. ESBL sono enzimi che idrolizzano la maggior parte delle penicilline e cefalosporine, inibiti da inibitori delle
β-lattamasi come acido clavulanico, sulbactam e tazobactam.
Chromatic™ ESBL+AmpC è un terreno cromogenico utilizzato per la ricerca di produttori di ESBL ed AmpC. AmpC sono
enzimi che idrolizzano penicilline, cefalosporine e monobattami e sono inibiti debolmente dai classici inibitori degli ESBL,
specialmente l’acido clavulanico.
Le Enterobacteriaceae produttrici di ESBL sono diventate tra i maggiori responsabili di infezioni nosocomiali principalmente
ad opera di Escherichia coli e Klebsiella pneumoniae, ma anche altri batteri Gram-negativi. Pazienti infettati da produttori di
ESBL spesso ricevono terapie empiriche inadeguate finché la resistenza del patogeno non viene riconosciuta.
L'identificazione precoce è, quindi, essenziale al fine di limitare la diffusione di questi patogeni.
Gli organismi che producono abbastanza β-lattamasi AmpC tipicamente risultano positivi ad uno screening per ESBL ma
falliscono i test di conferma che prevedono un aumento di sensibilità con l’acido clavulanico.
FORMULA TIPICA
(g/l)
Miscela di Peptoni
43.2
Miscela Cromogenica
1.0
Agar
15.0
Miscela Selettiva
0.5
pH Finale 7.2 ± 0.2 a 25°C
PRINCIPIO DEL METODO
I peptoni forniscono amino acidi, azoto, carbonio, minerali, vitamine ed altri nutrienti che supportano la crescita dei
microrganismi. La miscela cromogenica permette l’identificazione dei microrganismi sulla base del colore e della
morfologia delle colonie. L’agar è l’agente solidificante.
La Miscela selettiva in Chromatic™ ESBL inibisce gli organismi che non producono ESBL, inclusi i produttori di AmpC.
La Miscela Selettiva in Chromatic™ ESBL+AmpC inibisce gli organismi che non producono ESBL, ma permette la crescita
dei produttori di AmpC.
PREPARAZIONE
Terreno disidratato
Supplementi
Sospendere 29.6 g di polvere in 500 millilitri di acqua distillata o deionizzata sterile. Mescolare
bene. Riscaldare fino a completa dissoluzione. Sterilizzare in autoclave a 121°C per 15 minuti.
Raffreddare il terreno a 45-50°C. In condizioni di asepsi, aggiungere 5 ml di supplemento
precedentemente ricostituito, mescolare bene e dispensare in piastre Petri.
Aggiungere 5 ml di acqua distillata o deionizzata nella provetta contenente il supplemento
liofilizzato da utilizzare. Mescolare bene utilizzando un miscelatore vortex prima di aggiungere al
terreno in preparazione.
PROCEDURA DEL TEST
Inoculare la piastra strisciando direttamente il campione clinico sulla superficie dell’agar. Incubare in atmosfera aerobica a
37°C per 18-24 ore.
INTERPRETAZIONE DEI RISULTATI
Dopo l’incubazione osservare il colore delle colonie ed interpretare i risultati come indicato nella tabella ID.
Tabella ID.
Microrganismo*
E. coli
Colore tipico delle colonie
Rosa-rossastro-malva
Klebsiella spp, Enterobacter spp, Serratia spp
Verde-blu
Proteus spp
Marrone
*Sul terreno Chromatic™ ESBL crescono solo organismi produttori di ESBL, mentre Chromatic™ ESBL+AmpC permette la
crescita di produttori sia di ESBL che AmpC.
Consultare le figure nell’Appendice I.
ASPETTO
Terreno disidratato: fine, asciutto, omogeneo, privo di materiale estraneo, beige.
Supplemento liofilizzato: bottone biancastro, soluzione limpida una volta ricostituita.
Terreno preparato: ambra, leggermente opalescente.
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© Liofilchem® - Chromatic™ ESBL and Chromatic™ ESBL+AmpC - Rev.0 / 19.03.2014
Istruzioni per l’uso
CONSERVAZIONE
La polvere è fortemente igroscopica, conservare a 10-30°C, in ambiente asciutto, nel suo contenitore originale chiuso
ermeticamente. Conservare le piastre pronte ed i supplementi liofilizzati a 2-8°C al riparo dalla luce. Non usare il prodotto
dopo la sua data di scadenza indicata sull’etichetta o se il prodotto mostra segni di contaminazione o deterioramento.
DURATA
Terreno disidratato: 4 anni.
Supplementi liofilizzati: 4 anni.
Piastre pronte all’uso: 4 mesi.
CONTROLLO DI QUALITÀ
Le piastre vengono inoculate con i ceppi microbici indicati nelle tabelle CQ.
Inoculo per produttività: 10-100 UFC/ml.
Inoculo per selettività: 104-105 UFC/ml.
Condizioni di incubazione: ambiente aerobico a 35±2°C per 18-24 ore.
ChromaticTM ESBL, Tabella CQ.
Microrganismo
Escherichia coli
Klebsiella pneumoniae
Klebsiella pneumoniae
Escherichia coli
DSM 22311
ATCC® 700603
ATCC® BAA-1144
ATCC® 25922
Fenotipo
ESBL
Positivo
Positivo
Negativo
Negativo
Fenotipo
AmpC
Negativo
Negativo
Positivo
Negativo
Fenotipo
ESBL
Negativo
Positivo
Negativo
Negativo
Fenotipo
AmpC
Positivo
Negativo
Positivo
Negativo
Crescita
Specifiche
Buona
Buona
Inibita
Inibita
Colonie rossastre
Colonie verdi-blu
-----
Crescita
Specifiche
Buona
Buona
Buona
Inibita
Colonie verdi-blu
Colonie verdi-blu
Colonie verdi-blu
---
ChromaticTM ESBL+AmpC, QC Tabella CQ.
Microrganismo
Enterobacter cloacae
Klebsiella pneumoniae
Klebsiella pneumoniae
Escherichia coli
ATCC® BAA-1143
ATCC® 700603
ATCC® BAA-1144
ATCC® 25922
AVVERTENZE E PRECAUZIONI
Il prodotto non contiene sostanza nocive in concentrazioni superiori ai limiti fissati dall’attuale legislazione e perciò non è
classificato come pericoloso. Ciononostante si raccomanda di consultare la scheda di sicurezza per il suo corretto uso. Il
prodotto è da intendersi per uso diagnostico in vitro e deve essere utilizzato esclusivamente da operatori adeguatamente
addestrati.
SMALTIMENTO DEI RIFIUTI
Lo smaltimento dei rifiuti deve essere effettuato in conformità alle normative nazionali e locali in vigore.
BIBLIOGRAFIA
1. EUCAST guidelines for detection of resistance mechanisms and specific resistances of clinical and/or epidemiological
importance. Version 1.0, 2013.
2. Podschun R, Ullman U. Klebsiella spp as Nosocomial Pathogens: Epidemiology, Taxonomy, Typing Methods, and
Pathogenicity Factors. Clinical Microbiology Reviews. 1998; 11 (4): 589–603.
3. Geiss H.K. Comparison of two test kits for rapid identification of Escherichia coli by a beta-glucuronidase assay.
European Journal of Clinical Microbiology & Infections Diseases. 1990; 9 (2):151-152.
PRESENTAZIONE
Contenuto
Ref.
20 piastre
11622
ChromaticTM ESBL
Piastre da 90 mm pronte all’uso
ChromaticTM ESBL+AmpC
Piastre da 90 mm pronte all’uso
20 piastre
11629
ChromaticTM ESBL
Terreno disidratato
500 g di polvere
610629
ChromaticTM ESBL
Terreno disidratato
100 g di polvere
620629
ChromaticTM
Supplemento liofilizzato
10 provette
81089
Supplemento liofilizzato
10 provette
81090
ESBL Supplement
ChromaticTM ESBL+AmpC Supplement
TABELLA DEI SIMBOLI
LOT
Codice del
lotto
REF
Numero di
catalogo
IVD
Dispositivo Medico
Diagnostico in vitro
Fabbricante
Utilizzare entro
Limiti di temperatura
Contenuto sufficiente per
<n> saggi
Attenzione, Consultare
le istruzioni per l’uso
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Fax +39 0858930330
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Fragile, maneggiare
con cura
Non riutilizzare
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Instructions For Use
ChromaticTM ESBL
ChromaticTM ESBL+AmpC
Chromogenic media for detection of ESBL and AmpC
in Enterobacteriaceae directly from clinical specimens.
Colony appearance on ChromaticTM ESBL and ChromaticTM ESBL+AmpC plates.
E. coli DSM 22311 (ESBL+)
K. pneumoniae ATCC® 700603 (ESBL+)
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