© Liofilchem® - ChromaticTM ESBL and ChromaticTM ESBL+AmpC - Rev.0 / 19.03.2014 Instructions For Use ChromaticTM ESBL ChromaticTM ESBL+AmpC ENGLISH Chromogenic media for detection of ESBLs and AmpC in Enterobacteriaceae directly from clinical specimens. DESCRIPTION ChromaticTM ESBL is a chromogenic medium used for detection of Extended-spectrum β-lactamase (ESBL)-producing Enterobacteriaceae. ESBLs are enzymes that hydrolyze most penicillins and cephalosporins, inhibited by β-lactamase inhibitors such as clavulanic acid, sulbactam and tazobactam. ChromaticTM ESBL+AmpC is a chromogenic medium used for detection of ESBL and AmpC producers. AmpC-type enzymes hydrolyze penicillins, cephalosporins and monobactam and are poorly inhibited by the classical ESBL inhibitors, especially clavulanic acid. ESBL-producing Enterobacteriaceae have become one of the most important causes of nosocomial community-acquired infections caused by Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae, but also other Gram-negative bacteria. Patients infected by ESBL producers often received inadequate empirical therapy until the pathogen’s resistance is recognized. Early detection is, therefore, essential in order to limit the spread of these pathogens. Organisms producing enough AmpC β-lactamase will typically give a positive ESBL screening test but fail the confirmatory test involving increased sensitivity with clavulanic acid. TYPICAL FORMULA (g/l) Peptone Mix 43.2 Chromogenic Mix 1.0 Agar 15.0 Selective Mix 0.5 Final pH 7.2 ± 0.2 at 25°C METHOD PRINCIPLE Peptones supply amino acids, nitrogen, carbon, minerals, vitamins and other nutrients which support the growth of microorganisms. Chromogenic mix allows the identification of microorganisms on the basis of the colony color and morphology. Agar is the solidifying agent. The Selective mix in Chromatic™ ESBL inhibits the ESBL-non-producing organisms, including AmpC producers. The Selective mix in Chromatic™ ESBL+AmpC inhibits the ESBL-non-producing organisms, but allows the growth of AmpC producers. PREPARATION Dehydrated medium Supplements Suspend 29.6 g of the powder in 500 milliliters of distilled or deionized water. Mix well. Heat until completely dissolved. Sterilize in autoclave at 121°C for 15 minutes. Cool to 45-50°C. Aseptically, add 5 ml previously reconstituted supplement, mix well and dispense in Petri dishes. Add 5 ml distilled or deionized water to the lyophilized supplement tube to be used. Mix well using a vortex mixer before adding to the medium being prepared. TEST PROCEDURE Inoculate the plates by streaking directly the specimen onto the agar surface. Incubate aerobically at 37°C for 18-24 hours. INTERPRETING RESULTS After incubation observe the color of the colonies and interpret the results as indicated in the ID table. ID Table. Microorganism* Typical colony color E. coli Pink-reddish-mauve Klebsiella spp, Enterobacter spp, Serratia spp Proteus spp Green-blue Brown *On ChromaticTM ESBL medium only ESBL-producing organisms grow, while ChromaticTM ESBL+AmpC allows the growth of both ESBL and AmpC producers. See pictures in Appendix I. APPEARANCE Dehydrated medium: fine, dry, homogeneous, free of extraneous material, beige. Lyophilized supplements: whitish button, limpid solution once reconstituted. Prepared medium: slightly opalescent, amber. STORAGE The powder is very hygroscopic, store the powder at 10-30°C, in a dry environment, in its original container tightly closed. Store prepared plates and the lyophilized supplements at 2-8°C away from light. Do not use the product beyond its expiry date on the label or if product shows any evidence of contamination or any sign of deterioration. Page 1 of 2 © Liofilchem® - ChromaticTM ESBL and ChromaticTM ESBL+AmpC - Rev.0 / 19.03.2014 Instructions For Use SHELF LIFE Dehydrated medium: 4 years. Lyophilized supplements: 4 years. Ready-to-use plates: 4 months. QUALITY CONTROL Plates are inoculated with the microbial strains indicated in the QC tables. Inoculum for productivity: 10-100 CFU/ml. Inoculum for selectivity: 104-105 CFU/ml. Incubation conditions: aerobically at 35±2°C for 18-24 h. ChromaticTM ESBL, QC Table. Microorganism Escherichia coli Klebsiella pneumoniae Klebsiella pneumoniae Escherichia coli DSM 22311 ATCC® 700603 ATCC® BAA-1144 ATCC® 25922 ESBL phenotype Positive Positive Negative Negative AmpC phenotype Negative Negative Positive Negative ESBL phenotype Negative Positive Negative Negative AmpC phenotype Positive Negative Positive Negative Growth Specification Good Good Inhibited Inhibited Reddish colonies Green-blue colonies ----- Growth Specification Good Good Good Inhibited Green-blue colonies Green-blue colonies Green-blue colonies --- ChromaticTM ESBL+AmpC, QC Table. Microorganism Enterobacter cloacae Klebsiella pneumoniae Klebsiella pneumoniae Escherichia coli ATCC® BAA-1143 ATCC® 700603 ATCC® BAA-1144 ATCC® 25922 WARNING AND PRECAUTIONS The product does not contain hazardous substances in concentrations exceeding the limits set by current legislation and therefore is not classified as dangerous. It is nevertheless recommended to consult the safety data sheet for its correct use. The product is intended for In vitro diagnostic use and must be used only by properly trained operators. DISPOSAL OF WASTE Disposal of waste must be carried out according to national and local regulations in force. BIBLIOGRAPHY 1. EUCAST guidelines for detection of resistance mechanisms and specific resistances of clinical and/or epidemiological importance. Version 1.0, 2013. 2. Podschun R, Ullman U. Klebsiella spp as Nosocomial Pathogens: Epidemiology, Taxonomy, Typing Methods, and Pathogenicity Factors. Clinical Microbiology Reviews. 1998; 11 (4): 589–603. 3. Geiss H.K. Comparison of two test kits for rapid identification of Escherichia coli by a beta-glucuronidase assay. European Journal of Clinical Microbiology & Infections Diseases. 1990; 9 (2):151-152. PRESENTATION ChromaticTM ESBL Contents Ref. 90 mm ready-to-use plates 20 plates 11622 ChromaticTM ESBL+AmpC 90 mm ready-to-use plates 20 plates 11629 ChromaticTM ESBL Dehydrated medium 500 g of powder 610629 ChromaticTM ESBL Dehydrated medium 100 g of powder 620629 ChromaticTM ESBL Supplement Lyophilized supplement 10 tubes 81089 ChromaticTM Lyophilized supplement 10 tubes 81090 ESBL+AmpC Supplement TABLE OF SYMBOLS LOT Batch code REF Catalogue number IVD In vitro Diagnostic Medical Device Manufacturer Use by Temperature limitation Contains sufficient for <n> tests Caution, consult Instruction For Use Fragile, handle with care Do not reuse LIOFILCHEM® s.r.l. Via Scozia zona ind.le, 64026 Roseto degli Abruzzi (Te) Italy Tel. +39 0858930745 Fax +39 0858930330 www.liofilchem.net Page 2 of 2 [email protected] Keep away from sunlight © Liofilchem® - Chromatic™ ESBL and Chromatic™ ESBL+AmpC - Rev.0 / 19.03.2014 Istruzioni per l’uso Chromatic™ ESBL Chromatic™ ESBL+AmpC ITALIANO Terreno cromogenico per la ricerca di ESBL ed AmpC in Enterobacteriaceae direttamente da campioni clinici. DESCRIZIONE Chromatic™ ESBL è un terreno cromogenico utilizzato per la ricerca di Enterobacteriaceae produttrici di β-lattamasi a spettro esteso. ESBL sono enzimi che idrolizzano la maggior parte delle penicilline e cefalosporine, inibiti da inibitori delle β-lattamasi come acido clavulanico, sulbactam e tazobactam. Chromatic™ ESBL+AmpC è un terreno cromogenico utilizzato per la ricerca di produttori di ESBL ed AmpC. AmpC sono enzimi che idrolizzano penicilline, cefalosporine e monobattami e sono inibiti debolmente dai classici inibitori degli ESBL, specialmente l’acido clavulanico. Le Enterobacteriaceae produttrici di ESBL sono diventate tra i maggiori responsabili di infezioni nosocomiali principalmente ad opera di Escherichia coli e Klebsiella pneumoniae, ma anche altri batteri Gram-negativi. Pazienti infettati da produttori di ESBL spesso ricevono terapie empiriche inadeguate finché la resistenza del patogeno non viene riconosciuta. L'identificazione precoce è, quindi, essenziale al fine di limitare la diffusione di questi patogeni. Gli organismi che producono abbastanza β-lattamasi AmpC tipicamente risultano positivi ad uno screening per ESBL ma falliscono i test di conferma che prevedono un aumento di sensibilità con l’acido clavulanico. FORMULA TIPICA (g/l) Miscela di Peptoni 43.2 Miscela Cromogenica 1.0 Agar 15.0 Miscela Selettiva 0.5 pH Finale 7.2 ± 0.2 a 25°C PRINCIPIO DEL METODO I peptoni forniscono amino acidi, azoto, carbonio, minerali, vitamine ed altri nutrienti che supportano la crescita dei microrganismi. La miscela cromogenica permette l’identificazione dei microrganismi sulla base del colore e della morfologia delle colonie. L’agar è l’agente solidificante. La Miscela selettiva in Chromatic™ ESBL inibisce gli organismi che non producono ESBL, inclusi i produttori di AmpC. La Miscela Selettiva in Chromatic™ ESBL+AmpC inibisce gli organismi che non producono ESBL, ma permette la crescita dei produttori di AmpC. PREPARAZIONE Terreno disidratato Supplementi Sospendere 29.6 g di polvere in 500 millilitri di acqua distillata o deionizzata sterile. Mescolare bene. Riscaldare fino a completa dissoluzione. Sterilizzare in autoclave a 121°C per 15 minuti. Raffreddare il terreno a 45-50°C. In condizioni di asepsi, aggiungere 5 ml di supplemento precedentemente ricostituito, mescolare bene e dispensare in piastre Petri. Aggiungere 5 ml di acqua distillata o deionizzata nella provetta contenente il supplemento liofilizzato da utilizzare. Mescolare bene utilizzando un miscelatore vortex prima di aggiungere al terreno in preparazione. PROCEDURA DEL TEST Inoculare la piastra strisciando direttamente il campione clinico sulla superficie dell’agar. Incubare in atmosfera aerobica a 37°C per 18-24 ore. INTERPRETAZIONE DEI RISULTATI Dopo l’incubazione osservare il colore delle colonie ed interpretare i risultati come indicato nella tabella ID. Tabella ID. Microrganismo* E. coli Colore tipico delle colonie Rosa-rossastro-malva Klebsiella spp, Enterobacter spp, Serratia spp Verde-blu Proteus spp Marrone *Sul terreno Chromatic™ ESBL crescono solo organismi produttori di ESBL, mentre Chromatic™ ESBL+AmpC permette la crescita di produttori sia di ESBL che AmpC. Consultare le figure nell’Appendice I. ASPETTO Terreno disidratato: fine, asciutto, omogeneo, privo di materiale estraneo, beige. Supplemento liofilizzato: bottone biancastro, soluzione limpida una volta ricostituita. Terreno preparato: ambra, leggermente opalescente. Pagina 1di 2 © Liofilchem® - Chromatic™ ESBL and Chromatic™ ESBL+AmpC - Rev.0 / 19.03.2014 Istruzioni per l’uso CONSERVAZIONE La polvere è fortemente igroscopica, conservare a 10-30°C, in ambiente asciutto, nel suo contenitore originale chiuso ermeticamente. Conservare le piastre pronte ed i supplementi liofilizzati a 2-8°C al riparo dalla luce. Non usare il prodotto dopo la sua data di scadenza indicata sull’etichetta o se il prodotto mostra segni di contaminazione o deterioramento. DURATA Terreno disidratato: 4 anni. Supplementi liofilizzati: 4 anni. Piastre pronte all’uso: 4 mesi. CONTROLLO DI QUALITÀ Le piastre vengono inoculate con i ceppi microbici indicati nelle tabelle CQ. Inoculo per produttività: 10-100 UFC/ml. Inoculo per selettività: 104-105 UFC/ml. Condizioni di incubazione: ambiente aerobico a 35±2°C per 18-24 ore. ChromaticTM ESBL, Tabella CQ. Microrganismo Escherichia coli Klebsiella pneumoniae Klebsiella pneumoniae Escherichia coli DSM 22311 ATCC® 700603 ATCC® BAA-1144 ATCC® 25922 Fenotipo ESBL Positivo Positivo Negativo Negativo Fenotipo AmpC Negativo Negativo Positivo Negativo Fenotipo ESBL Negativo Positivo Negativo Negativo Fenotipo AmpC Positivo Negativo Positivo Negativo Crescita Specifiche Buona Buona Inibita Inibita Colonie rossastre Colonie verdi-blu ----- Crescita Specifiche Buona Buona Buona Inibita Colonie verdi-blu Colonie verdi-blu Colonie verdi-blu --- ChromaticTM ESBL+AmpC, QC Tabella CQ. Microrganismo Enterobacter cloacae Klebsiella pneumoniae Klebsiella pneumoniae Escherichia coli ATCC® BAA-1143 ATCC® 700603 ATCC® BAA-1144 ATCC® 25922 AVVERTENZE E PRECAUZIONI Il prodotto non contiene sostanza nocive in concentrazioni superiori ai limiti fissati dall’attuale legislazione e perciò non è classificato come pericoloso. Ciononostante si raccomanda di consultare la scheda di sicurezza per il suo corretto uso. Il prodotto è da intendersi per uso diagnostico in vitro e deve essere utilizzato esclusivamente da operatori adeguatamente addestrati. SMALTIMENTO DEI RIFIUTI Lo smaltimento dei rifiuti deve essere effettuato in conformità alle normative nazionali e locali in vigore. BIBLIOGRAFIA 1. EUCAST guidelines for detection of resistance mechanisms and specific resistances of clinical and/or epidemiological importance. Version 1.0, 2013. 2. Podschun R, Ullman U. Klebsiella spp as Nosocomial Pathogens: Epidemiology, Taxonomy, Typing Methods, and Pathogenicity Factors. Clinical Microbiology Reviews. 1998; 11 (4): 589–603. 3. Geiss H.K. Comparison of two test kits for rapid identification of Escherichia coli by a beta-glucuronidase assay. European Journal of Clinical Microbiology & Infections Diseases. 1990; 9 (2):151-152. PRESENTAZIONE Contenuto Ref. 20 piastre 11622 ChromaticTM ESBL Piastre da 90 mm pronte all’uso ChromaticTM ESBL+AmpC Piastre da 90 mm pronte all’uso 20 piastre 11629 ChromaticTM ESBL Terreno disidratato 500 g di polvere 610629 ChromaticTM ESBL Terreno disidratato 100 g di polvere 620629 ChromaticTM Supplemento liofilizzato 10 provette 81089 Supplemento liofilizzato 10 provette 81090 ESBL Supplement ChromaticTM ESBL+AmpC Supplement TABELLA DEI SIMBOLI LOT Codice del lotto REF Numero di catalogo IVD Dispositivo Medico Diagnostico in vitro Fabbricante Utilizzare entro Limiti di temperatura Contenuto sufficiente per <n> saggi Attenzione, Consultare le istruzioni per l’uso LIOFILCHEM® s.r.l. Via Scozia zona ind.le, 64026 Roseto degli Abruzzi (Te) Italy Tel. +39 0858930745 Fax +39 0858930330 www.liofilchem.net Pagina 2di 2 [email protected] Fragile, maneggiare con cura Non riutilizzare © Liofilchem® - ChromaticTM ESBL and ChromaticTM ESBL+AmpC - Rev.0 / 19.03.2014 Instructions For Use ChromaticTM ESBL ChromaticTM ESBL+AmpC Chromogenic media for detection of ESBL and AmpC in Enterobacteriaceae directly from clinical specimens. Colony appearance on ChromaticTM ESBL and ChromaticTM ESBL+AmpC plates. E. coli DSM 22311 (ESBL+) K. pneumoniae ATCC® 700603 (ESBL+) LIOFILCHEM® s.r.l. Via Scozia zona ind.le, 64026 Roseto degli Abruzzi (Te) Italy Tel. +39 0858930745 Fax +39 0858930330 www.liofilchem.net Page 1 of 1 [email protected] ENGLISH Appendix I
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