MINICAP IMMUNOTYPING
Ref. 2300
2014/10
MINICAP IMMUNOTYPING - 2014/10
ΧΡΗΣΗ ΓΙΑ ΤΗΝ ΟΠΟΙΑ ΠΡΟΟΡΙΖΕΤΑΙ
Το κιτ MINICAP IMMUNOTYPING προορίζεται για την ανίχνευση και το χαρακτηρισμό μονοκλωνικών πρωτεϊνών (ανοσοπροσδιορισμός) σε
ανθρώπινο ορό με το Σύστημα MINICAP, SEBIA, για τριχοειδή ηλεκτροφόρηση. Χρησιμοποιείται σε συνδυασμό με το κιτ MINICAP
PROTEIN(E) 6, SEBIA, που προορίζεται για το διαχωρισμό των πρωτεϊνών σε 6 κύρια κλάσματα σε αλκαλικό ρυθμιστικό διάλυμα (pH 9,9).
Το σύστημα MINICAP εκτελεί αυτόματα όλες τις ακολουθίες της διαδικασίας για τη λήψη ενός προφίλ πρωτεϊνών για ποιοτική ανάλυση. Κάθε
δείγμα ορού αναμιγνύεται με μεμονωμένους αντιορούς ειδικούς έναντι βαρέων αλυσίδων γάμμα (Ig G), άλφα (Ig A) και μι (Ig M) καθώς και
ελαφρών αλυσίδων κάππα και λάμδα (ελεύθερων και συνδεδεμένων) αντίστοιχα.
Οι πρωτεΐνες που έχουν διαχωριστεί σε τριχοειδή από διοξείδιο του πυριτίου (silica) ανιχνεύονται άμεσα με απορρόφηση στα 200 nm.
Τα ηλεκτροφορήματα αξιολογούνται οπτικά για την ανίχνευση της παρουσίας ειδικών αντιδράσεων με τις πιθανές μονοκλωνικές πρωτεΐνες.
Για in vitro διαγνωστική χρήση.
ΣΗΜΕΙΩΣΗ : Σε αυτό το φύλλο οδηγιών, η ονομασία "MINICAP" χρησιμοποιείται για τα αυτόματα όργανα MINICAP και MINICAP
FLEX-PIERCING.
ΑΡΧΗ ΤΗΣ ΕΞΕΤΑΣΗΣ
Η ηλεκτροφόρηση πρωτεϊνών είναι μια ευρέως καθιερωμένη και συνήθης τεχνική που χρησιμοποιείται σε κλινικά εργαστήρια για την εξέταση
δειγμάτων ορού για τυχόν πρωτεϊνικές ανωμαλίες (1, 3, 5, 6, 7, 10). Το Σύστημα MINICAP, SEBIA, για τριχοειδή ηλεκτροφόρηση έχει σχεδιαστεί ώστε
να παρέχει πλήρη αυτοματοποίηση της συγκεκριμένης εξέτασης με ταχύ διαχωρισμό και ικανοποιητική ανάλυση. Η μεθοδολογία αυτή μπορεί
να θεωρηθεί από πολλές απόψεις ως μια ενδιάμεση τεχνική μεταξύ της κλασικής ηλεκτροφόρησης ζώνης και της υγρής χρωματογραφίας (1, 4, 5).
Το Σύστημα MINICAP βασίζεται στην αρχή της τριχοειδούς ηλεκτροφόρησης. Με την τεχνική αυτή, τα φορτισμένα μόρια διαχωρίζονται με βάση
την ηλεκτροφορητική τους κινητικότητα σε αλκαλικό ρυθμιστικό διάλυμα με συγκεκριμένο pH. Ο διαχωρισμός πραγματοποιείται επίσης
σύμφωνα με το pH του ηλεκτρολύτη και την ηλεκτροοσμωτική ροή (2, 9, 10).
Στην τριχοειδή ηλεκτροφόρηση, τα μη φυσιολογικά κλάσματα στα ηλεκτροφορήματα πρωτεϊνών ορού, ιδιαίτερα εκείνα που αντιστοιχούν στις
ζώνες β-σφαιρινών και γ-σφαιρινών, μπορούν να θεωρηθούν πιθανές μονοκλωνικές πρωτεΐνες (Μ-πρωτεΐνες, παραπρωτεΐνες, μονοκλωνικές
ανοσοσφαιρίνες) και επομένως αποτελούν ένδειξη μονοκλωνικής γαμμαπάθειας. Με τη διαδικασία του MINICAP IMMUNOTYPING, ο
ανοσοπροσδιορισμός πραγματοποιείται με ειδικά αντισώματα για την ταυτοποίηση αυτών των μη φυσιολογικών κλασμάτων.
Το Σύστημα MINICAP διαθέτει 2 τριχοειδή που λειτουργούν παράλληλα. Στο συγκεκριμένο σύστημα, παρασκευάζεται ένα διάλυμα δείγματος το
οποίο εγχέεται ταυτόχρονα με αναρρόφηση στο άκρο ανόδου των δύο τριχοειδών, 3 φορές διαδοχικά. Για τον ανοσοπροσδιορισμό, το πρότυπο
αναφοράς (πρότυπο ELP) λαμβάνεται με έγχυση του δείγματος που έχει αναμιχθεί με διάλυμα ELP σε ένα τριχοειδές. Η μέθοδος αυτή παρέχει
το πλήρες ηλεκτροφορητικό πρότυπο των πρωτεϊνών του δείγματος. Τα πρότυπα αντιορών λαμβάνονται με τις ακόλουθες 5 αναλύσεις, με
έγχυση στα τριχοειδή των αραιωμένων δειγμάτων που αναμίχθηκαν προηγουμένως με ειδικούς αντιορούς έναντι γάμμα (Ig G), άλφα (Ig A) και
μι (Ig M) βαρέων αλυσίδων καθώς και ελεύθερων και συνδεδεμένων ελαφρών αλυσίδων κάππα και λάμδα.
Στη συνέχεια, οι πρωτεΐνες διαχωρίζονται με την εφαρμογή υψηλής τάσης και ανιχνεύονται άμεσα στα 200 nm στο άκρο καθόδου του
τριχοειδούς. Ακολουθεί άμεση έκπλυση των τριχοειδών με Διάλυμα Πλύσης και προετοιμασία για την επόμενη ανάλυση με ρυθμιστικό διάλυμα.
Η υπέρθεση των προτύπων αντιορών στο πρότυπο ELP επιτρέπει την οπτικοποίηση της απουσίας ή/και της μείωσης ενός μονοκλωνικού
κλάσματος στο πρότυπο αντιορού και η ανίχνευση γαμμαπάθειας.
ΣΗΜΕΙΩΣΗ : Στη διαδικασία του MINICAP IMMUNOTYPING, οι πρωτεΐνες ανιχνεύονται με την ακόλουθη σειρά από την κάθοδο προς την
άνοδο : γ-σφαιρίνες, β2-σφαιρίνες, β1-σφαιρίνες, α2-σφαιρίνες, α1-σφαιρίνες και λευκωματίνη, ενώ κάθε ζώνη περιέχει μία ή περισσότερες
πρωτεΐνες. Το σύμπλεγμα αντιγόνου - αντισώματος (μεταξύ των ανοσοσφαιρινών του δείγματος ορού και του ειδικού αντιορού) παρουσιάζει
έντονη ανοδική κινητικότητα (μεταξύ ζώνης άλφα 1 και λευκωματίνης ή μεγαλύτερη ανοδική κινητικότητα από τη λευκωματίνη).
Ο ανοσοπροσδιορισμός διεξάγεται σε τέσσερα αυτοματοποιημένα βήματα :
1. Αραίωση του δείγματος ορού με ειδικό αραιωτικό μέσο σε ένα δοχείο αντιδραστηρίου. Η αραίωση διεξάγεται σύμφωνα με τη συγκέντρωση
ανοσοσφαιρινών στο δείγμα.
2. Ανάμιξη του αραιωμένου δείγματος ορού με μεμονωμένους ειδικούς αντιορούς (2 αντιοροί ανά δοχείο αντιδραστηρίου) Το σύμπλεγμα
αντιγόνου – αντισώματος σχηματίζεται ταχέως σε υγρό μέσο χωρίς να απαιτείται επιπλέον επώαση ή αφαίρεση των ανοσοσυμπλεγμάτων.
3. Τρείς ακόλουθες εγχύσεις των προετοιμασμένων δειγμάτων με ταυτόχρονη αναρρόφηση σε 2 τριχοειδή στο άκρο ανόδου και διαχωρισμός
των πρωτεϊνών με ηλεκτροφόρηση υπό υψηλή τάση. Οι διαχωρισμένες πρωτεΐνες ανιχνεύονται στο άκρο καθόδου του τριχοειδούς στα
200 nm.
4. Υπέρθεση των προτύπων αντιορών (Ig G, Ig A, Ig M, κάππα και λάμδα) στο πρότυπο ELP, ώστε να είναι δυνατός ο χαρακτηρισμός του
ύποπτου μονοκλωνικού κλάσματος.
ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΑ ΜΕ ΤΟ ΚΙΤ MINICAP IMMUNOTYPING
ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ : Δείτε τα φύλλα δεδομένων ασφάλειας.
ΣΤΟΙΧΕΙΟ
PN 2300
Μέσο αραίωσης (έτοιμο προς χρήση)
6 φιαλίδια, 4,0 mL έκαστο
Βάση με διάλυμα ELP και σωληνάρια αντιορού
Διάλυμα ELP (έτοιμο προς χρήση)
1 φιαλίδιο, 1,2 mL
Αντιανθρώπινες ανοσοσφαιρίνες θηλαστικών έναντι άλφα βαρέων αλυσίδων (έτοιμο προς χρήση)
1 φιαλίδιο, 1,2 mL
Αντιανθρώπινες ανοσοσφαιρίνες θηλαστικών έναντι γάμμα βαρέων αλυσίδων (έτοιμο προς χρήση)
Αντιανθρώπινες ανοσοσφαιρίνες θηλαστικών έναντι μι βαρέων αλυσίδων (έτοιμο προς χρήση)
Αντιανθρώπινες ανοσοσφαιρίνες θηλαστικών έναντι κάππα (ελεύθερων και συνδεδεμένων) ελαφριών
αλυσίδων (έτοιμο προς χρήση)
Αντιανθρώπινες ανοσοσφαιρίνες θηλαστικών έναντι λάμδα (ελεύθερων και συνδεδεμένων) ελαφριών
αλυσίδων (έτοιμο προς χρήση)
1 φιαλίδιο, 1,2 mL
1 φιαλίδιο, 1,2 mL
1 φιαλίδιο, 1,2 mL
1 φιαλίδιο, 1,2 mL
Κατά τη μεταφορά, το κιτ μπορεί να παραμείνει εκτός ψυγείου (στους 15 ως 30 °C) επί 15 ημέρες χωρίς δυσμενείς επιδράσεις στην απόδοσή
του.
- 123 -
Ο∆ΗΓΙΕΣ SEBIA - Ελληνικά
MINICAP IMMUNOTYPING - 2014/10
ΓΙΑ ΑΡΙΣΤΑ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ :
Όλα τα αντιδραστήρια από ίδιο κιτ πρέπει να χρησιμοποιούνται πάντα μαζί και σύμφωνα με τις οδηγίες χρήσης.
ΠΑΡΑΚΑΛΟΥΜΕ ΔΙΑΒΑΣΤΕ ΠΡΟΣΕΚΤΙΚΑ ΤΟ ΦΥΛΛΟ ΟΔΗΓΙΩΝ.
ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ : Μη χρησιμοποιείτε απιονισμένο νερό που διατίθεται ευρέως στην αγορά, όπως, για παράδειγμα, νερό για σιδέρωμα
(κίνδυνος ζημιάς σημαντικών τριχοειδών). Χρησιμοποιείτε μόνο υπερκάθαρο νερό, όπως νερό κατάλληλο ειδικό για έγχυση.
1. ΜΕΣΟ ΑΡΑΙΩΣΗΣ ΔΕΙΓΜΑΤΩΝ
Παρασκευή
Το μέσο αραίωσης των δειγμάτων είναι έτοιμο προς χρήση. Περιέχει : ρυθμιστικό διάλυμα pH 9.4 ± 0.5 ; πρόσθετα, μη επιβλαβή στις
χρησιμοποιούμενες συγκεντρώσεις, αναγκαία για άριστη απόδοση.
Χρήση
Ειδικό μέσο αραίωσης για αυτόματη αραίωση δειγμάτων για ανάλυση πρωτεϊνών στην τριχοειδή ηλεκτροφόρηση με το αυτοματοποιημένο
σύστημα MINICAP. Επιτρέπει άριστη υπέρθεση των ηλεκτροφορητικών προτύπων.
Τοποθετείται απευθείας στον περιστρεφόμενο δειγματολήπτη MINICAP αφού αφαιρεθεί το πώμα του φιαλιδίου. Ο γραμμωτός κωδικός πρέπει
να είναι ορατός στα ανοίγματα του περιστρεφόμενου δειγματολήπτη.
Φύλαξη, σταθερότητα και σημεία αλλοίωσης
Φυλάσσετε το μέσο αραίωσης σε θερμοκρασία δωματίου (15 έως 30 °C) ή στο ψυγείο (2 έως 8 °C). Το προϊόν παραμένει σταθερό μέχρι την
ημερομηνία λήξης που αναγράφεται στις ετικέτες της συσκευασίας του κιτ ή του μέσου αραίωσης δειγμάτων.
Το μέσο αραίωσης δειγμάτων πρέπει να είναι ελεύθερο ιζήματος.
ΜΗΝ ΚΑΤΑΨΥΧΕΤΕ.
2. ΒΑΣΗ ΜΕ ΔΙΑΛΥΜΑ ELP ΚΑΙ ΣΩΛΗΝΑΡΙΑ ΑΝΤΙΟΡΟΥ
Η βάση με το διάλυμα ELP και τα σωληνάρια αντιορών anti-Ig G, anti-Ig A, anti-Ig M, αντι-κάππα και αντι-λάμδα είναι έτοιμη προς χρήση.
Τοποθετήστε την απευθείας πάνω στον περιστρεφόμενο δειγματολήπτη MINICAP. Οι γραμμωτοί κώδικες πρέπει να είναι ορατοί στα ανοίγματα
του περιστρεφόμενου δειγματολήπτη.
ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ : Τοποθετήστε τη θήκη στον περιστρεφόμενο δειγματολήπτη του MINICAP ακριβώς πριν από την έναρξη των αναλύσεων και
αμέσως μετά το πέρας των αναλύσεων τοποθετήστε την αμέσως στο ψυγείο (2 - 8 °C) για φύλαξη.
2.1.ΔΙΑΛΥΜΑ ELP
Παρασκευή
Το διάλυμα ELP είναι έτοιμο προς χρήση. Περιέχει : ρυθμιστικό διάλυμα pH 7.4 ± 0.5 ; πρόσθετα, μη επιβλαβή στις χρησιμοποιούμενες
συγκεντρώσεις, αναγκαία για άριστη απόδοση.
Για την εύκολη αναγνώριση και παρακολούθηση της χρήσης του, το διάλυμα ELP είναι χρωματισμένο με μη επιβλαβή χρωστική που ταιριάζει
με το χρώμα της ετικέτας του φιαλιδίου.
Χρήση
Για το ηλεκτροφορητικό πρότυπο αναφοράς των πρωτεϊνών του δείγματος (πρότυπο ELP).
Φύλαξη, σταθερότητα και σημεία αλλοίωσης
Φυλάσσετε το διάλυμα ELP στο ψυγείο (2 έως 8 °C) επάνω στη βάση. Πριν από την πρώτη χρήση, το προϊόν παραμένει σταθερό μέχρι την
ημερομηνία λήξης που αναγράφεται στις ετικέτες της συσκευασίας του κιτ ή του φιαλιδίου του διαλύματος ELP.
Εφόσον το φιαλίδιο του διαλύματος ELP βρίσκεται στη βάση και πάνω στον περιστρεφόμενο δειγματολήπτη MINICAP, παραμένει σταθερό για
μέγιστο διάστημα 60 ωρών (αθροιστικά) σε θερμοκρασία δωματίου (15 έως 30 °C).
Μετά από κάθε χρήση, το διάλυμα ELP πρέπει οπωσδήποτε να τοποθετείται αμέσως για φύλαξη στο ψυγείο (μεταξύ 2 και 8 °C). Στη
συνέχεια παραμένει σταθερό μέχρι την ημερομηνία λήξης που αναγράφεται στην ετικέτα του φιαλιδίου του.
ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ : Ο αθροιστικός χρόνος φύλαξης του διαλύματος ELP σε θερμοκρασία δωματίου δεν πρέπει να ξεπερνά τις 60 ώρες.
Το διάλυμα ELP πρέπει να είναι ελεύθερο ιζήματος.
ΜΗΝ ΚΑΤΑΨΥΧΕΤΕ.
2.2.ΑΝΤΙΟΡΟΙ
Παρασκευή
Οι αντιοροί είναι έτοιμοι προς χρήση. Κάθε φιαλίδιο περιέχει αντίστοιχα : αντιανθρώπινες ανοσοσφαιρίνες θηλαστικών έναντι γάμμα βαρέων
αλυσίδων (ροζ), έναντι άλφα βαρέων αλυσίδων (σκούρο μπλε), έναντι μι βαρέων αλυσίδων (κίτρινο-πράσινο), έναντι άλφα βαρέων αλυσίδων
(ελεύθερων και συνδεδεμένων) (ανοικτό πράσινο), έναντι ελαφριών αλυσίδων λάμδα (ελεύθερων και συνδεδεμένων) (ανοικτό μπλε) και
πρόσθετα, μη επιβλαβή στις χρησιμοποιούμενες συγκεντρώσεις, απαραίτητα για άριστη απόδοση.
Για την εύκολη αναγνώριση και παρακολούθηση της χρήσης τους, οι αντιοροί είναι χρωματισμένοι με ευδιάκριτες μη επιβλαβείς χρωστικές που
ταιριάζουν με το χρώμα των ετικετών των φιαλιδίων.
Χρήση
Για ανοσοπροσδιορισμό πρωτεϊνών στο σύστημα MINICAP.
ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ : Οι αντιοροί είναι ειδικοί για τη διαδικασία του MINICAP IMMUNOTYPING. Δεν πρέπει να χρησιμοποιούνται σε καμία περίπτωση
για διαδικασίες ανοσοκαθήλωσης σε γέλη αγαρόζης και αντίστροφα.
Φύλαξη, σταθερότητα και σημεία αλλοίωσης
Φυλάσσετε τους αντιορούς στο ψυγείο (2 έως 8 °C) επάνω στη βάση. Πριν από την πρώτη χρήση, το προϊόν παραμένει σταθερό μέχρι την
ημερομηνία λήξης που αναγράφεται στις ετικέτες της συσκευασίας του κιτ ή του φιαλιδίου του αντιορού.
Εφόσον τα φιαλίδια των αντιορών είναι τοποθετημένα στη βάση και βρίσκονται πάνω στον περιστρεφόμενο δειγματολήπτη MINICAP,
παραμένουν σταθερά για μέγιστο διάστημα 60 ωρών (αθροιστικά) σε θερμοκρασία δωματίου (15 έως 30 °C).
Μετά από κάθε χρήση, οι αντιοροί πρέπει οπωσδήποτε να τοποθετούνται αμέσως για φύλαξη στο ψυγείο (μεταξύ 2 και 8 °C). Στη
συνέχεια παραμένουν σταθεροί μέχρι την ημερομηνία λήξης που αναγράφεται στην ετικέτα του φιαλιδίου τους.
ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ : Ο αθροιστικός χρόνος φύλαξης των αντιορών σε θερμοκρασία δωματίου δεν πρέπει να ξεπερνά τις 60 ώρες.
Οι αντιοροί πρέπει να είναι ελεύθεροι ιζήματος.
ΜΗΝ ΚΑΤΑΨΥΧΕΤΕ.
ΣΗΜΕΙΩΣΗ : Κατά τη μεταφορά, το διάλυμα ELP και οι αντιοροί μπορούν να παραμείνουν εκτός ψυγείου (στους 15 έως 30 °C) επί 15 ημέρες
χωρίς δυσμενείς επιδράσεις στην απόδοσή τους.
- 124 -
Ανάλυση δειγμάτων ορού : Διαδικασία MINICAP IMMUNOTYPING
MINICAP IMMUNOTYPING - 2014/10
ΑΠΑΙΤΟΥΜΕΝΑ ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΑ (μη παρεχόμενα με το κιτ MINICAP IMMUNOTYPING)
ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ : Δείτε τα φύλλα δεδομένων ασφάλειας.
1. MINICAP PROTEIN(E) 6 KIT (SEBIA, PN 2203)
Παρουσίαση, χρήση, φύλαξη, σταθερότητα και ενδείξεις αλλοίωσης
Βλ. φύλλο οδηγιών που παρέχεται με το κιτ.
2. ΑΠΕΣΤΑΓΜΕΝΟ Η ΑΠΙΟΝΙΣΜΕΝΟ ΝΕΡΟ
Χρήση
Για έκπλυση τριχοειδών στο Σύστημα MINICAP, SEBIA, για τη διαδικασία τριχοειδούς ηλεκτροφόρησης.
Συνιστάται η χρήση φιλτραρισμένου απεσταγμένου ή απιονισμένου νερού (σε φίλτρο με πορώδες ≤ 0,45 μm) και με αντιστασικότητα
υψηλότερη από 10 Megohm x cm.
Για την αποφυγή μικροβιακής επιμόλυνσης, το νερό πρέπει να ανανεώνεται καθημερινά.
Για βέλτιστη λειτουργία, προσθέστε 35 µL/dL CLEAN PROTECT (SEBIA, PN 2059, 1 φιαλίδιο των 5 mL).
ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ : Πριν από την πλήρωση του δοχείου έκπλυσης, συνιστάται η πλύση του δοχείου με άφθονο απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό.
3. CAPICLEAN
Σύνθεση
Το φιαλίδιο του συμπυκνωμένου διαλύματος CAPICLEAN (SEBIA, PN 2058, 25 mL) περιέχει : πρωτεολυτικά ένζυμα, επιφανειοδραστικούς
παράγοντες και πρόσθετα, μη επιβλαβή στις χρησιμοποιούμενες συγκεντρώσεις, αναγκαία για άριστη απόδοση.
Χρήση
Για τον καθαρισμό του ακροφυσίου δειγματοληψίας στο αυτοματοποιημένο σύστημα τριχοειδούς ηλεκτροφόρησης MINICAP της SEBIA, κατά
τη διάρκεια της ακολουθίας καθαρισμού CAPICLEAN.
ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ : Εκτελείτε ακολουθία καθαρισμού CAPICLEAN μία φορά την εβδομάδα τουλάχιστον και το μέγιστο μία φορά την ημέρα ή ανά
500 αναλύσεις όταν πραγματοποιούνται σε διάστημα μικρότερο της μίας εβδομάδας.
Βλ. φύλλα οδηγιών που παρέχονται με το σύστημα CAPICLEAN, SEBIA.
ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ : Για βέλτιστη χρήση του διαλύματος CAPICLEAN με το σύστημα MINICAP πρέπει να χρησιμοποιείται μια ετικέτα γραμμωτού
κωδικού που προορίζεται για την ταυτοποίηση του σωληναρίου αιμόλυσης που χρησιμοποιείται ως βάση για το μικροσωληνάριο που περιέχει
το αραιωμένο διάλυμα CAPICLEAN (κόψτε το πώμα του μικροσωληναρίου πριν από τη χρήση).
Φύλαξη, σταθερότητα και σημεία αλλοίωσης
Φυλάσσετε το CAPICLEAN στο ψυγείο (2 - 8 °C). Παραμένει σταθερό μέχρι την ημερομηνία λήξης που αναγράφεται στην ετικέτα του φιαλιδίου.
ΜΗΝ ΚΑΤΑΨΥΧΕΤΕ.
Ενδέχεται να παρατηρηθεί ίζημα ή αιωρούμενα συζευγμένα σωματίδια (θρόμβοι) στο φιαλίδιο CAPICLEAN, τα οποία ωστόσο δεν επηρεάζουν
δυσμενώς τη χρήση.
Μην διαλύετε αυτό το ίζημα ή αυτά τα σωματίδια. Συνιστάται η συλλογή μόνο του υπερκειμένου.
Για μετέπειτα χρήση, φυλάσσετε το σωληνάριο που περιέχει το αραιωμένο διάλυμα στους 2 - 8 °C. Το προϊόν πρέπει να χρησιμοποιείται εντός
της ημέρας.
4. ΔΙΑΛΥΜΑ ΥΠΟΧΛΩΡΙΩΔΟΥΣ ΝΑΤΡΙΟΥ (για καθαρισμό ακροφυσίων δειγματοληψίας)
Παρασκευή
Προετοιμάστε το διάλυμα υποχλωριώδους νατρίου (χλώριο 2 % έως 3 %) αραιώνοντας 250 mL χλωριούχου συμπυκνωμένου διαλύματος
(χλώριο 9,6 %) σε 1 λίτρο κρύου απεσταγμένου ή απιονισμένου νερού.
Χρήση
Για τον καθαρισμό των ακροφυσίων δειγματοληψίας στο Σύστημα MINICAP (εβδομαδιαία συντήρηση για την απομάκρυνση προσροφημένων
πρωτεϊνών από το ακροφύσιο).
Βλ. εγχειρίδιο χρήσης του συστήματος SEBIA MINICAP.
• Εφαρμόστε σε ένα μικροσωληνάριο 500 µL αραιωμένου χλωριούχου διαλύματος που έχετε ετοιμάσει προηγουμένως.
• Κόψτε το πώμα αυτού του μικροσωληναρίου.
• Τοποθετήστε το μικροσωληνάριο που βρίσκεται σε ένα νέο σωληνάριο αιμόλυσης που χρησιμοποιείται ως βάση στήριξης (αναγνωρίζεται από
μια ετικέτα γραμμωτού κωδικού ειδική για το διάλυμα υποχλωριώδους νατρίου στη θέση 1 του περιστρεφόμενου δειγματολήπτη του MINICAP.
• Τοποθετήστε ένα νέο δοχείο αντιδραστηρίου στο αυτοματοποιημένο σύστημα φόρτωσης δοχείων του MINICAP (εάν δεν υπάρχει δοχείο
αντιδραστηρίου θα εμφανιστεί ένα μήνυμα).
• Ωθήστε τον περιστρεφόμενο δειγματολήπτη στο σύστημα MINICAP.
• Κλείστε τις θύρες του συστήματος MINICAP. Η ακολουθία καθαρισμού ξεκινά αυτόματα.
ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ : Για βέλτιστη χρήση του διαλύματος υποχλωριώδους νατρίου με το σύστημα MINICAP πρέπει να χρησιμοποιείται μια ετικέτα
γραμμωτού κωδικού που προορίζεται για την ταυτοποίηση του σωληναρίου αιμόλυσης που χρησιμοποιείται ως βάση για το μικροσωληνάριο
που περιέχει το διάλυμα (κόψτε το πώμα του μικροσωληναρίου πριν από τη χρήση).
Φύλαξη, σταθερότητα και σημεία αλλοίωσης
Φυλάσσετε το χλωριούχο διάλυμα εργασίας σε κλειστό δοχείο σε θερμοκρασία δωματίου. Το διάλυμα παραμένει σταθερό για 3 μήνες.
Αποφεύγετε την έκθεση στο ηλιακό φως και την αποθήκευση κοντά σε πηγές θερμότητας και ανάφλεξης, οξέα και αμμωνία.
- 125 -
MINICAP IMMUNOTYPING - 2014/10
5. CAPILLARYS / MINICAP WASH SOLUTION
Παρασκευή
Κάθε φιαλίδιο του πυκνού Διαλύματος Πλύσης CAPILLARYS / MINICAP (SEBIA, PN 2052, 2 φιαλίδια, 75 mL) θα πρέπει να αραιώνεται σε έως
και 750 mL με απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό.
Για το MINICAP, σκόπιμο είναι να αραιώνονται μόνο 25 mL του πυκνού διαλύματος με 250 mL απεσταγμένου ή απιονισμένου νερού.
Μετά την αραίωση, το διάλυμα πλύσης περιέχει ένα αλκαλικό διάλυμα pH ≈ 12.
Χρήση
Για πλύση των τριχοειδών του MINICAP.
ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ : Πριν γεμίσετε τον περιέκτη του διαλύματος πλύσης, συνιστάται η πλύση του ανοίγματός του, του συνδετήρα και του σωλήνα με
άφθονο απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό για την αποφυγή εναπόθεσης αλάτων.
Φύλαξη, σταθερότητα και σημεία αλλοίωσης
Φυλάσσετε το πυκνό διάλυμα και το διάλυμα εργασίας σε κλειστά δοχεία σε θερμοκρασία δωματίου ή στο ψυγείο. Το πυκνό διάλυμα πλύσης
παραμένει σταθερό μέχρι την ημερομηνία λήξης που αναγράφεται στην ετικέτα του κιτ ή του φιαλιδίου διαλύματος πλύσης.
Το διάλυμα πλύσης εργασίας παραμένει σταθερό για 3 μήνες.
Πετάξτε το διάλυμα εργασίας αν μεταβληθεί η όψη του, π.χ. αν θολώσει λόγω μικροβιακής επιμόλυνσης.
6. ΒΗΤΑ-ΜΕΡΚΑΠΤΟΑΙΘΑΝΟΛΗ (BME ή 2- ΜΕΡΚΑΠΤΟΑΙΘΑΝΟΛΗ) (δεν παρέχεται από τη SEBIA)
ΣΗΜΕΙΩΣΕΙΣ :
Οι δοκιμές που πραγματοποιήθηκαν προς επικύρωση των αντιδραστηρίων κατέδειξαν ότι, για τα διαφορετικά διαλύματα και με χρήση κατάλληλου
εξοπλισμού για τον όγκο ανασύστασης, μια απόκλιση ± 5 % στον τελικό όγκο δεν επηρεάζει δυσμενώς την ανάλυση.
Το απεσταγμένο ή απιονισμένο ύδωρ που χρησιμοποιείται για την ανασύσταση διαλυμάτων πρέπει να είναι ελεύθερο βακτηρίων και μυκήτων (χρήση
φίλτρου ≤ 0.45 µm) και να έχει αντιστασικότητα υψηλότερη από 10 Megohms x cm.
ΕΞΟΠΛΙΣΜΟΣ ΚΑΙ ΣΥΜΠΛΗΡΩΜΑΤΙΚΑ ΕΞΑΡΤΗΜΑΤΑ
1.
2.
3.
4.
5.
Σύστημα MINICAP, SEBIA, PN 1230, MINICAP FLEX-PIERCING, SEBIA, PN 1232.
Περιστρεφόμενος δειγματολήπτης που παρέχεται με το MINICAP.
Κιτ περιεκτών που παρέχεται με το MINICAP : Περιέκτης έκπλυσης (για πλήρωση με απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό) και αποβλήτων.
Δοχεία αντιδραστηρίων MINICAP, SEBIA (250 τεμάχια), PN 2280.
Καπάκια για κάδους για χρησιμοποιημένα δοχεία αντιδραστηρίων, SEBIA (12 τεμάχια), PN 2286 : για τη σφράγιση των δοχείων που
περιέχουν χρησιμοποιημένα κύπελλα.
ΔΕΙΓΜΑΤΑ ΠΡΟΣ ΑΝΑΛΥΣΗ
Λήψη και διατήρηση δειγμάτων
Η ανάλυση συνιστάται να γίνεται σε φρέσκα δείγματα ορού. Οι οροί πρέπει να λαμβάνονται σύμφωνα με τις καθιερωμένες διαδικασίες στην
κλινική εργαστηριακή πράξη.
Τα δείγματα μπορούν να φυλαχθούν μέχρι 10 ημέρες μεταξύ 2 και 8 °C. Για μεγαλύτερα διαστήματα φύλαξης, τα δείγματα θα πρέπει να
καταψύχονται εντός 8 ωρών από τη συλλογή. Οι κατεψυγμένοι οροί είναι σταθεροί για ένα μήνα.
ΣΗΜΕΙΩΣΗ : Τα δείγματα δεν θα πρέπει να φυλάσσονται σε θερμοκρασία δωματίου!
Η αποδόμηση πρωτεϊνών, και ιδιαίτερα η αποδόμηση συμπληρωμάτων, για ορούς που φυλάσσονται σε θερμοκρασία μεταξύ 2 έως 8 °C
εξαρτάται σε μεγάλο βαθμό από το δείγμα.
Προετοιμασία δειγμάτων
Χρησιμοποιείτε μη αραιωμένα δείγματα ορού.
Μετά από φύλαξη σε θερμοκρασία 2 έως 8 °C ή κατάψυξη, ορισμένοι οροί (ιδιαίτερα όσοι περιέχουν κρυοσφαιρίνες ή κρυοπηκτή) μπορεί να
γίνουν ιξώδεις ή να εμφανίσουν θολερότητα. Σε θερμοκρασία δωματίου, τα δείγματα αυτά μπορούν να υποβληθούν άμεσα σε ανάλυση. Τα
δείγματα που περιέχουν πολυμερισμένη ανοσοσφαιρίνη μπορούν να χρησιμοποιηθούν χωρίς καμία επεξεργασία.
Συνιστάται η παρακολούθηση των χαρακτηριστικών του ορού πριν από την ανάλυση (π.χ. ενδείξεις αιμόλυσης, κρυοσφαιρίνες ή θολερότητα).
Δείγματα προς αποφυγή
• Μη χρησιμοποιείτε παλαιά ή ακατάλληλα αποθηκευμένα δείγματα ορού καθώς τα κλάσματα βήτα θα τροποποιηθούν.
• Αποφύγετε δείγματα πλάσματος. Το ινωδογόνο μετακινείται στη θέση βήτα-2 (μικρή κορυφή στη θέση βήτα-2).
ΣΗΜΕΙΩΣΗ : Τα σωληνάρια συλλογής για βιολογικά δείγματα περιγράφονται στη διαθέσιμη τεκμηρίωση σχετικά με την προαναλυτική φάση για
βιοϊατρική ανάλυση (δεδομένα που παρέχονται από τους κατασκευαστές σωληναρίων, από οδηγούς και συστάσεις σχετικά με τη συλλογή
βιολογικών δειγμάτων). Εάν δεν υπάρχει ένδειξη στις οδηγίες χρήσης σχετικά με το είδος του σωληναρίου που πρέπει να χρησιμοποιείται,
ανατρέξτε στην παρούσα τεκμηρίωση. Για τις διαστάσεις του σωληναρίου που πρέπει να χρησιμοποιείται, ανατρέξτε στο έγγραφο της SEBIA
"Χαρακτηριστικά των σωληναρίων που πρέπει να χρησιμοποιούνται ανάλογα με το όργανο". Η προαναλυτική φάση πρέπει να διενεργείται
σύμφωνα με την τελευταία λέξη της τεχνικής, τις διάφορες συστάσεις, συμπεριλαμβανομένων αυτών που παρέχονται από τους κατασκευαστές
σωληναρίων, και τους ισχύοντες κανονισμούς.
- 126 -
MINICAP IMMUNOTYPING - 2014/10
ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ
Το Σύστημα MINICAP είναι ένα όργανο πολλαπλών παραμέτρων για την ανάλυση πρωτεϊνών ορού σε 2 παράλληλα τριχοειδή με τη διαδικασία
του MINICAP IMMUNOTYPING ως εξής :
• Ανάγνωση των γραμμωτών κωδικών των σωληναρίων δειγμάτων ορού (έως 18), των σωληναρίων αντιδραστηρίων του MINICAP
IMMUNOTYPING και του περιστρεφόμενου δειγματολήπτη,
• Αραίωση του δείγματος από τα πρωτογενή σωληνάρια στα δοχεία αντιδραστηρίων,
• Ανάμιξη των αραιωμένων δειγμάτων ορού με διάλυμα ELP και ειδικούς αντιορούς σε δοχεία αντιδραστηρίων,
• Έκπλυση τριχοειδών,
• Έγχυση αραιωμένων δειγμάτων,
• Διαχωρισμός πρωτεϊνών και άμεση ανίχνευση των διαχωρισμένων πρωτεϊνών σε τριχοειδή.
Τα χειροκίνητα βήματα της διαδικασίας είναι τα εξής :
• Τοποθετήστε τα ανοιγμένα σωληνάρια δειγμάτων στον περιστρεφόμενο δειγματολήπτη στις θέσεις 1 έως 18,
• Τοποθετήστε το σωληνάριο του μέσου αραίωσης δειγμάτων στον περιστρεφόμενο δειγματολήπτη στη θέση 27,
• Τοποθετήστε τη βάση με το διάλυμα ELP και τα σωληνάρια αντιορού στον περιστρεφόμενο δειγματολήπτη στις θέσεις 19 έως 24.
• Τοποθετήστε τον περιστρεφόμενο δειγματολήπτη στο σύστημα MINICAP,
• Αφαιρέστε τα σωληνάρια δείγματος μετά την ανάλυση,
• Αφαιρέστε και κλείστε τους κάδους για τα χρησιμοποιημένα δοχεία.
Η ηλεκτροφορητική ανάλυση στο σύστημα MINICAP με τη διαδικασία του MINICAP PROTEIN(E) 6 πρέπει αρχικά να εκτελεστεί για την επιλογή
δειγμάτων, τα οποία είναι ύποπτα για παρουσία μονοκλωνικών πρωτεϊνών (π.χ. με μη φυσιολογικό πρότυπο πρωτεϊνών ή κλάσμα
πρωτεϊνών).
ΠΑΡΑΚΑΛΟΥΜΕ ΔΙΑΒΑΣΤΕ ΠΡΟΣΕΚΤΙΚΑ ΤΟ ΕΓΧΕΙΡΙΔΙΟ ΧΡΗΣΗΣ ΤΟΥ ΣΥΣΤΗΜΑΤΟΣ MINICAP.
I. ΠΡΟΕΤΟΙΜΑΣΙΑ ΗΛΕΚΤΡΟΦΟΡΗΤΙΚΗΣ ΑΝΑΛΥΣΗΣ
1. Επιλέξτε τα δείγματα με μη φυσιολογικό κλάσμα πρωτεϊνών στα ηλεκτροφορήματα που λαμβάνονται με τη διαδικασία του MINICAP
PROTEIN(E) 6.
2. Ενεργοποιήστε το όργανο MINICAP και τον υπολογιστή.
3. Για εκκίνηση του οργάνου, τοποθετήστε τουλάχιστον ένα νέο δοχείο αντιδραστηρίου στο αυτοματοποιημένο σύστημα φόρτωσης δοχείων
του MINICAP (εάν δεν υπάρχει δοχείο αντιδραστηρίου θα εμφανιστεί ένα μήνυμα).
4. Ενεργοποιήστε το λογισμικό. Η λειτουργία του οργάνου ξεκινά αυτόματα.
5. Επιλέξτε το πρόγραμμα αραίωσης που θα εφαρμοστεί αυτόματα για κάθε δείγμα προς ανάλυση και σύμφωνα με τη συγκέντρωση
ολικών ανοσοσφαιρινών του :
• "HYPERGAMMA", εάν το επίπεδο ολικών ανοσοσφαιρινών είναι > 2 g/dL (υπεργαμμασφαιριναιμία),
• "HYPOGAMMA", εάν το επίπεδο ολικών ανοσοσφαιρινών είναι < 0,8 g/dL (υπογαμμασφαιριναιμία),
• "STANDARD", εάν το επίπεδο ολικών ανοσοσφαιρινών κυμαίνεται μεταξύ 0,8 και 2 g/dL (προεπιλεγμένο πρόγραμμα αραίωσης).
6. Για την ανάλυση δειγμάτων ορού, το κιτ MINICAP IMMUNOTYPING προορίζεται για ανάλυση με το πρόγραμμα ανάλυσης
"IMMUNOTYPING 6" του οργάνου MINICAP και το ρυθμιστικό διάλυμα MINICAP PROTEIN(E) 6. Για να επιλέξετε το πρόγραμμα
ανάλυσης "IMMUNOTYPING 6" και να τοποθετήσετε το φιαλίδιο ρυθμιστικού διαλύματος MINICAP PROTEIN(E) 6 στη θέση "B1" του
οργάνου, διαβάστε προσεκτικά το εγχειρίδιο οδηγιών του MINICAP και ακολουθήστε τις οδηγίες που εμφανίζονται στην οθόνη.
ΣΗΜΕΙΩΣΗ : Κατά τη μετάβαση από τη διαδικασία του MINICAP PROTEIN(E) 6 στη διαδικασία του MINICAP IMMUNOTYPING (και
αντίστροφα) δεν απαιτείται αλλαγή του φιαλιδίου ρυθμιστικού διαλύματος.
7. Τοποθετήστε νέα δοχεία αντιδραστηρίου στο αυτοματοποιημένο σύστημα φόρτωσης δοχείων του MINICAP (εάν δεν υπάρχουν δοχεία
αντιδραστηρίου θα εμφανιστεί ένα μήνυμα).
8. Τοποθετήστε έναν νέο κάδο για τα χρησιμοποιημένα δοχεία στο MINICAP στη θέση που προορίζεται για το συγκεκριμένο σκοπό.
9. Ελέγξτε τη στάθμη πλήρωσης των φιαλιδίων αντιδραστηρίου, προσθέστε αντιδραστήριο, εάν απαιτείται και αδειάστε τον περιέκτη
αποβλήτων. Στο παράθυρο "Check reagent levels", ενημερώστε το λογισμικό μετακινώντας τα κουμπιά δρομέα.
10. Ο περιστρεφόμενος δειγματολήπτης διαθέτει 28 θέσεις για τα σωληνάρια δειγμάτων :
• Τοποθετήστε έως και 18 ανοιγμένα σωληνάρια δειγμάτων στον περιστρεφόμενο δειγματολήπτη (θέσεις 1 έως 18). Ο γραμμωτός
κωδικός κάθε σωληνάριου πρέπει να είναι ορατός από τα ανοίγματα του περιστρεφόμενου δειγματολήπτη. Εάν το σωληνάριο
δείγματος που έχει τοποθετηθεί στη βάση δειγμάτων δεν έχει επιλεγεί προηγουμένως, θα εκτελεστεί αυτόματα το πρόγραμμα
αραίωσης "STANDARD".
• Η βάση με το διάλυμα ELP και τα σωληνάρια αντιορών anti-Ig G, anti-Ig A, anti-Ig M, αντι-κάππα και αντι-λάμδα είναι έτοιμη προς
χρήση.
Τοποθετήστε τη βάση απευθείας στον περιστρεφόμενο δειγματολήπτη στις θέσεις του διαλύματος ELP και των αντιορών κρατώντας
την από τα δύο κλιπ που βρίσκονται σε κάθε πλευρά. Ο γραμμωτός κώδικας του κάθε σωληναρίου πρέπει να φαίνεται από τα
ανοίγματα του περιστρεφόμενου δειγματολήπτη.
ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ : Πριν ξεκινήσετε την ανάλυση, βεβαιωθείτε ότι έχετε εισαγάγει σωστά τη βάση στον περιστρεφόμενο δειγματολήπτη.
• Αφαιρέστε το πώμα από το σωληνάριο του διαλύματος του δείγματος και τοποθετήστε το σωληνάριο στη θέση 27 (θέση «Αραιωτικό
/ Διάλυμα» [Diluent / Solution]). Ο γραμμωτός κώδικας του σωληναρίου πρέπει να είναι ορατός από το άνοιγμα του περιστρεφόμενου
δειγματολήπτη.
ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ : Το διάλυμα ELP και όλοι οι αντιοροί πρέπει να έχουν τον ίδιο αριθμό παρτίδας για μία ανάλυση. Μην αναμειγνύετε τυχόν
υπολοιπόμενη ποσότητα αντιορών της ίδιας ειδικότητας ή διαλύματος ELP με τα 2 επόμενα φιαλίδια, ακόμη κι αν έχουν τον ίδιο αριθμό
παρτίδας.
ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ : Αν δεν υπάρχει ένα σωληνάριο στις θέσεις για τα σωληνάρια δειγμάτων, στις θέσεις 19 έως 24 (αντιοροί και διάλυμα
ELP) και στη θέση 27 (μέσο αραίωσης δείγματος), η ανάλυση δεν μπορεί να ξεκινήσει και εμφανίζεται ένα μήνυμα.
11. Ωθήστε τον περιστρεφόμενο δειγματολήπτη στο σύστημα MINICAP.
12. Κλείστε τις θύρες του συστήματος MINICAP. Η ανάλυση ξεκινά αυτόματα.
13. Μετά τις αναλύσεις, αφαιρέστε τον περιστρεφόμενο δειγματολήπτη με τα σωληνάρια δειγμάτων που έχουν υποβληθεί σε ανάλυση.
Αφαιρέστε τη βάση με το διάλυμα ELP και τα σωληνάρια αντιορών και τοποθετήστε την αμέσως στο ψυγείο (2 – 8 °C) για φύλαξη.
ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ : Μεταξύ των ζωνών άλφα-2 και βήτα-1 ενδέχεται να παρατηρηθεί μια μετατόπιση των αποτυπωμάτων ELP και αντιορών,
εάν τα σωληνάρια μείνουν στη συσκευή για παρατεταμένο διάστημα.
- 127 -
MINICAP IMMUNOTYPING - 2014/10
14. Εάν χρειάζεται, αφαιρέστε προσεκτικά τον κάδο που περιέχει τα χρησιμοποιημένα δοχεία αντιδραστηρίου, κλείστε τον καλά με το ειδικό
καπάκι και απορρίψτε τον.
ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ : Ο χειρισμός των κάδων που περιέχουν χρησιμοποιημένα δοχεία αντιδραστηρίων με βιολογικά δείγματα πρέπει
να γίνεται με προσοχή.
ΑΡΑΙΩΣΗ - ΜΕΤΑΚΙΝΗΣΗ - ΠΕΡΙΓΡΑΦΗ ΤΩΝ ΑΥΤΟΜΑΤΟΠΟΙΗΜΕΝΩΝ ΒΗΜΑΤΩΝ
1. Η ανάγνωση των γραμμωτών κωδικών εκτελείται στα σωληνάρια δειγμάτων (έως και 18), στα σωληνάρια αντιδραστηρίων του MINICAP
IMMUNOTYPING και στον περιστρεφόμενο δειγματολήπτη.
2. Το δείγμα αραιώνεται με το ειδικό μέσο αραίωσης σε ένα δοχείο αντιδραστηρίου.
3. Τα 2 πρώτα αντιδραστήρια και το αραιωμένο δείγμα αναρροφώνται και στη συνέχεια αναμιγνύονται σε ένα δοχείο αντιδραστηρίου. Το
ακροφύσιο δειγματοληψίας εκπλένεται μετά από κάθε δείγμα. Για κάθε δείγμα εκτελείται το επιλεγμένο πρόγραμμα αραίωσης. Εάν δεν έχει
επιλεγεί το κατάλληλο πρόγραμμα, εφαρμόζεται βάσει προεπιλογής το πρόγραμμα αραίωσης "STANDARD". Η σειρά των αντιδραστηρίων
έχει ως εξής : Διάλυμα ELP, αντιοροί anti-Ig G, anti-Ig A, anti-Ig M, αντι-κάππα & αντι-λάμδα.
4. Τα τριχοειδή υποβάλλονται σε πλύση.
5. Τα αραιωμένα δείγματα με τα αντιδραστήρια εγχέονται στα τριχοειδή.
6. Η μετακίνηση των πρωτεϊνών εκτελείται υπό σταθερή τάση για περίπου 4 λεπτά και η θερμοκρασία ελέγχεται με το φαινόμενο Peltier.
7. Οι πρωτεΐνες ανιχνεύονται άμεσα με σάρωση στα 200 nm και το ηλεκτροφορητικό προφίλ εμφανίζεται στην οθόνη του συστήματος.
ΣΗΜΕΙΩΣΗ : Τα βήματα 3 έως 7 εκτελούνται ξανά για τα ακόλουθα αντιδραστήρια (anti-Ig A, anti-Ig M, αντι-κάππα και αντι-λάμδα).
ΣΗΜΕΙΩΣΗ : Τα συγκεκριμένα βήματα περιγράφονται για τα 2 πρώτα αντιδραστήρια (διάλυμα ELP και anti-Ig G). Για τα ακόλουθα αντιδραστήρια
(αντιοροί anti-Ig A, anti-Ig M, αντι-κάππα και αντι-λάμδα), το βήμα 3 εκτελείται κατά τις 2 προηγούμενες αναλύσεις. Τα πλήρη ηλεκτροφορητικά
πρότυπα που αντιστοιχούν στον ανοσοπροσδιορισμό του δείγματος εμφανίζονται μετά από 35 λεπτά περίπου.
Στο παράθυρο κατάστασης :
- Ο φάκελος "Υπόμνημα" (Legend) εμφανίζει την πρόοδο των αναλύσεων που πραγματοποιούνται στον περιστρεφόμενο δειγματολήπτη.
- Το στοιχείο "Μετρητής IT" (IT counter) δηλώνει τον αριθμό των αναλύσεων που έχουν πραγματοποιηθεί και εμφανίζεται μόνο στην κατάσταση
"πωματισμένα σωληνάρια" (capped tubes). Μετά την εγκατάσταση της έκδοσης του λογισμικού, ο μετρητής αναλύσεων ξεκινά από το μηδέν.
Καταμετρά την ανάλυση που πραγματοποιείται και τις αναλύσεις που έχουν ολοκληρωθεί ή διακοπεί (μετά από ματαίωση).
Εκτελέστε επαναφορά του μετρητή όταν εκκενωθούν τα σωληνάρια (χρησιμοποιώντας το κουμπί "επαναφορά" [reset]).
ΣΗΜΕΙΩΣΗ : Όταν ολοκληρωθούν 60 αναλύσεις, στο παράθυρο κατάστασης αναβοσβήνει ένα σήμα προειδοποίησης. Το σήμα αυτό παραμένει,
αλλά δεν διακόπτει τις επόμενες αναλύσεις έως ότου μηδενιστεί ο μετρητής αναλύσεων.
II. ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ ΤΗΣ ΑΝΑΛΥΣΗΣ
Στο τέλος της ανάλυσης, κάθε πρότυπο αντιορών (Ig G, Ig A, Ig M, Κάππα και Λάμδα) υπερτίθεται αυτόματα στο πρότυπο ELP. Σε περίπτωση
αντίδρασης ενός μονοκλωνικού κλάσματος και ενός ειδικού αντιορού, το σχετικό κλάσμα παύει να εμφανίζεται στο πρότυπο αντιορού.
Με σύγκριση των προτύπων είναι δυνατός ο προσδιορισμός και ο χαρακτηρισμός των μονοκλωνικών κλασμάτων.
III. ΑΚΟΛΟΥΘΙΑ ΤΕΛΟΥΣ ΤΗΣ ΑΝΑΛΥΣΗΣ
Μετά το τέλος κάθε ακολουθίας ανάλυσης, ο χειριστής πρέπει να θέσει το σύστημα MINICAP σε αναμονή ή να τερματίσει τη λειτουργία του
συστήματος, ώστε τα τριχοειδή να αποθηκευτούν σε βέλτιστες συνθήκες.
ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ : Τοποθετήστε τουλάχιστον ένα νέο δοχείο αντιδραστηρίου στο αυτοματοποιημένο σύστημα φόρτωσης δοχείων του MINICAP (εάν
δεν υπάρχει δοχείο αντιδραστηρίου θα εμφανιστεί ένα μήνυμα).
IV. ΠΛΗΡΩΣΗ ΤΩΝ ΔΟΧΕΙΩΝ ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΩΝ
Το σύστημα MINICAP διαθέτει αυτόματο σύστημα ελέγχου αντιδραστηρίων.
ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ : Ανατρέξτε στις οδηγίες για την αντικατάσταση των δοχείων αντιδραστηρίων σύμφωνα με τη χρωματική κωδικοποίηση για τα
φιαλίδια και τους συνδετήρες.
Όταν πρέπει να εκτελεστεί ένα από τα παρακάτω βήματα εμφανίζεται ένα μήνυμα :
• Τοποθέτηση νέου φιαλιδίου ρυθμιστικού διαλύματος ή/και,
• Πλήρωση του δοχείου με διάλυμα πλύσης εργασίας ή/και,
• Πλήρωση του δοχείου με διηθημένο απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό για έκπλυση των τριχοειδών ή/και,
• Αδειάστε το δοχείο αποβλήτων.
ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ : Μη χρησιμοποιείτε απιονισμένο νερό που διατίθεται ευρέως στην αγορά, όπως, για παράδειγμα, νερό για σιδέρωμα
(κίνδυνος ζημιάς σημαντικών τριχοειδών). Χρησιμοποιείτε μόνο υπερκάθαρο νερό, όπως νερό κατάλληλο ειδικό για έγχυση.
ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ : Πριν από την πλήρωση του δοχείου έκπλυσης, συνιστάται η πλύση του δοχείου με άφθονο απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό.
ΠΑΡΑΚΑΛΟΥΜΕ ΔΙΑΒΑΣΤΕ ΠΡΟΣΕΚΤΙΚΑ ΤΟ ΕΓΧΕΙΡΙΔΙΟ ΧΡΗΣΗΣ ΤΟΥ ΣΥΣΤΗΜΑΤΟΣ MINICAP.
ΠΟΙΟΤΙΚΟΣ ΕΛΕΓΧΟΣ
Συνιστάται να πραγματοποιείται ανάλυση ενός ήδη αναλυμένου δείγματος ορού ελέγχου (π.χ. δείγμα ελέγχου IT / IF της SEBIA PN 4788) μετά
από κάθε αλλαγή παρτίδας αντιδραστηρίου.
ΣΗΜΕΙΩΣΗ : Εάν κρίνεται απαραίτητο, το φυσιολογικό δείγμα ελέγχου ορού SEBIA PN 4785 μπορεί να χρησιμοποιείται ως αρνητικός έλεγχος.
- 128 -
MINICAP IMMUNOTYPING - 2014/10
ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ
Κατευθυντήριες οδηγίες για την ανάλυση των προτύπων
1. Πρότυπο αναφοράς (πρότυπο ELP)
• Αρχικά, συνιστάται η προσεκτική εξέταση του προτύπου αναφοράς (πρότυπο ELP) για τυχόν ανωμαλίες.
• Σε περίπτωση που παρατηρήσετε οποιαδήποτε ανωμαλία στο ίχνος ELP, σημειώστε τη θέση μετακίνησης της κορυφής (ή των κορυφών)
στην καμπύλη, στη ζώνη άλφα-2, βήτα, βήτα-γάμμα ή γάμμα. Χρησιμοποιώντας το πρότυπο ELP, ελέγξτε την περιοχή ειδικά για
ανωμαλίες συγκρίνοντας το πρότυπο ELP με κάθε πλαίσιο – G, A, M, κάππα & λάμδα).
• Οι ανωμαλίες μπορεί να είναι μονοκλωνικά, δικλωνικά, τρικλωνικά, ολιγοκλωνικά κλάσματα, βαριές αλυσίδες και ελεύθερες βαριές
αλυσίδες, κλπ…
2. Εξετάστε κάθε ανοσοσφαιρίνη συγκρίνοντάς την με την υπερκείμενη καμπύλη αναφοράς (πρότυπο ELP). Ελέγξτε
κάθε πλαίσιο για τυχόν απουσία ή μείωση μιας μη φυσιολογικής κορυφής :
• Ig G : Η Ig G είναι η πιο κοινή τάξη ανοσοσφαιρινών που ανευρίσκεται σε δείγματα ορού. Συνήθως παρατηρείται φυσιολογική
πολυκλωνική αφαίρεση. Η φυσιολογική πολυκλωνική μείωση της κορυφής αυτής δεν θα πρέπει να εκλαμβάνεται εσφαλμένα ως
μονοκλωνικό κλάσμα. Η πολυκλωνική αφαίρεση εμφανίζεται ως μείωση του κλάσματος χωρίς καμία αλλαγή στη συμμετρία του κλάσματος.
Η μονοκλωνική Ig G θα εμφανίσει αφαίρεση της κορυφής με αλλαγή στη συμμετρία ορατή κατά τη σύγκριση με το πρότυπο ELP.
• Ig A : Φυσιολογικά, η Ig A βρίσκεται σε σχετικά μικρή συγκέντρωση σε σχέση με την Ig G. Ελέγξτε για μικρές μειώσεις στη βήτα-πρώιμη
περιοχή γάμμα. Το πρότυπο ELP θα πρέπει να είναι ίδιο με την Ig A στα φυσιολογικά δείγματα.
• Ig M : Το πρότυπο είναι παρόμοιο με αυτό της Ig A πλην του ότι η συγκέντρωση είναι φυσιολογικά ακόμη μικρότερη. Τα φυσιολογικά
δείγματα παρουσιάζουν πολύ μικρή μείωση χωρίς αλλαγή στη συμμετρία του κλάσματος. Το πρότυπο ELP θα πρέπει να είναι ίδιο με αυτό
της Ig Μ στα φυσιολογικά δείγματα.
• Κάππα : Ανευρίσκονται συνήθως σε αναλογία 2 κάππα προς κάθε 1 λάμδα. Συνήθως σημειώνεται μια μείωση 2/3 στο κλάσμα γάμμα. Η
πολυκλωνική αφαίρεση εμφανίζεται ως μείωση του κλάσματος χωρίς καμία αλλαγή στη συμμετρία του κλάσματος. Το μονοκλωνικό
κλάσμα κάππα θα εμφανίσει αφαίρεση μιας κορυφής με αλλαγή στη συμμετρία ορατή κατά τη σύγκριση με το πρότυπο ELP.
• Λάμδα : Λόγω της αναλογίας κάππα προς λάμδα 2:1, το ίχνος της λάμδα θα πρέπει να εμφανίζει μια συνολική μείωση 1/3 στο κλάσμα
γάμμα με φυσιολογικά δείγματα. Η πολυκλωνική αφαίρεση εμφανίζεται ως μείωση του κλάσματος χωρίς καμία αλλαγή στη συμμετρία του
κλάσματος. Το μονοκλωνικό κλάσμα λάμδα θα εμφανίσει αφαίρεση μιας κορυφής με αλλαγή στη συμμετρία ορατή κατά τη σύγκριση με το
πρότυπο ELP.
Ο προσδιορισμός ενός μονοκλωνικού κλάσματος πραγματοποιείται παρατηρώντας την απουσία ή την αφαίρεση των μη φυσιολογικών
κορυφών στα αντίστοιχα πλαίσια. Για παράδειγμα, η αφαίρεση μιας μη φυσιολογικής κορυφής στα δύο πλαίσια γάμμα και κάππα αποτελεί
ένδειξη μονοκλωνικού κλάσματος Ig G, αλυσίδας κάππα.
Ερμηνεία της ανάλυσης δειγμάτων ορού
Απουσία μονοκλωνικού κλάσματος
Ένα φυσιολογικό δείγμα ορού ή ένα δείγμα με υπεργαμμασφαιριναιμία χαρακτηρίζεται από την απουσία πολυκλωνικών ανοσοσφαιρινών σε
πρότυπα αντιορών (εμφανίζεται ως μείωση των κλασμάτων γάμμα και/ή βήτα) χωρίς επιπτώσεις σε άλλα κλάσματα πρωτεϊνών (εικ. 1).
Παρουσία μονοκλωνικού κλάσματος
• Η παρουσία μονοκλωνικής πρωτεΐνης (μονοκλωνική γαμμαπάθεια) χαρακτηρίζεται από την απουσία ενός κλάσματος που ανιχνεύεται με
έναν από τους αντιορούς έναντι βαρέων αλυσίδων (γάμμα, άλφα ή μι) και με αντιορό ελαφρών αλυσίδων αντι-κάππα ή αντι-λάμδα. Η
ανιχνευόμενη μονοκλωνική κορυφή, συνήθως οξεία και οριοθετημένη, πρέπει να βρίσκεται στην ίδια απόσταση μετακίνησης με το ύποπτο
μονοκλωνικό κλάσμα στο ίχνος αναφοράς (ίχνος ELP) (Εικ. 3 και 4).
• Η απουσία αντίδρασης με τους αντιορούς έναντι βαρέων αλυσίδων και έναν από τους αντιορούς έναντι ελαφρών αλυσίδων μπορεί να
θεωρηθεί ένδειξη για :
α)μια πολύ σπάνια Ig D ή Ig E γαμμαπάθεια : επιβεβαιώστε την ένδειξη με αντιορούς βαρέων αλυσίδων αντι-δέλτα ή αντι-έψιλον και τη
διαδικασία του SEBIA HYDRAGEL IF,
β)γαμμαπάθεια ελαφρών αλύσων : επιβεβαιώστε την ένδειξη με αντιορούς έναντι ελεύθερων ελαφρών αλυσίδων κάππα ή λάμδα και τη
διαδικασία του SEBIA HYDRAGEL BENCE JONES ή HYDRAGEL IF,
• Απουσία θετικής αντίδρασης με τους αντιορούς έναντι ελαφρών αλυσίδων. Εάν παρατηρηθεί αντίδραση με αντιορό έναντι βαρέων αλυσίδων
μπορεί να θεωρηθεί ένδειξη πολύ σπάνιας γαμμαπάθειας βαρέων αλυσίδων (γάμμα, άλφα ή μι).
Παρουσία δύο ή περισσότερων μονοκλωνικών κλασμάτων
Η ίδια διαδικασία ερμηνείας μπορεί να εφαρμοστεί για δείγματα με δύο ή περισσότερα μονοκλωνικά κλάσματα. Σε σπάνιες περιπτώσεις, πολλοί
κλώνοι B-κυττάρων πολλαπλασιάζονται όπως υποδεικνύουν οι διάφορες μονοκλωνικές ζώνες με ανοσοπροσδιορισμό :
• Η δικλωνική γαμμαπάθεια χαρακτηρίζεται από την απουσία δύο κλασμάτων βαρέων αλυσίδων (πανομοιότυπων ή διαφορετικών) και δύο
κλασμάτων ελαφρών αλυσίδων (πανομοιότυπων ή διαφορετικών) (Εικ. 5).
• Οι πολυμερισμένες ανοσοσφαιρίνες χαρακτηρίζονται από την απουσία πολλών κλασμάτων βαρέων αλυσίδων και ελαφρών αλυσίδων ίδιου
τύπου.
Για να επιβεβαιωθεί η παρουσία μονοκλωνικής ανωμαλίας, απαιτείται αποπολυμερισμός με βήτα-μερκαπτοαιθανόλη και επανάληψη του
ανοσοπροσδιορισμού. Στην περίπτωση αυτή (i) προετοιμάστε 1 % βήτα-μερκαπτοαιθανόλης (BME ή 2- μερκαπτοαιθανόλη, 2 ME) σε Fluidil
(SEBIA, PN 4587, 1 φιαλίδιο 5 mL) (ii) ετοιμάστε το σύστημα MINICAP ώστε να βρίσκεται σε κατάσταση αναμονής για τον περιστρεφόμενο
δειγματολήπτη, προσθέστε 100 µL αυτού του αναγωγικού διαλύματος σε 300 µL καθαρού ορού, (iii) περιδινήστε το διάλυμα, περιμένετε για
15 λεπτά το μέγιστο και στη συνέχεια ακολουθήστε την τυπική διαδικασία.
ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ : Μετά την αναγωγή με βήτα-μερκαπτοαιθανόλη, το δείγμα πρέπει να αναλυθεί αμέσως. Δεν θα πρέπει να υπάρχει κανένα
σωληνάριο δείγματος στο εσωτερικό του συστήματος MINICAP σε αναμονή για ανάλυση.
• Μετά την επεξεργασία με βήτα-μερκαπτοαιθανόλη, στο δείγμα παρατηρείται ένα μόνο μονοκλωνικό κλάσμα, εάν στο δείγμα υπάρχει ένας
κλώνος. Η αναγωγική επεξεργασία του δείγματος προκαλεί αποδόμηση του συμπληρώματος C3 (με υψηλή παραμόρφωση της ζώνης βήτα).
Ανάμεσα στη ζώνη άλφα 1 και τη λευκωματίνη ενδέχεται να εμφανιστεί ένα μεγάλο κλάσμα.
• Η ολιγοκλωνική γαμμαπάθεια χαρακτηρίζεται από την απουσία πολλαπλών και συνήθως μικρών κορυφών ή μετατοπίσεων με βαριές
αλυσίδες ενός ή περισσότερων τύπων και ελαφριές αλυσίδες των δύο τύπων (Εικ. 7).
- 129 -
MINICAP IMMUNOTYPING - 2014/10
Ειδικές περιπτώσεις
• Εάν δεν παρατηρηθεί ολική απουσία του μονοκλωνικού κλάσματος στα πρότυπα αντιορών, επαναλάβετε τη διαδικασία με μεγαλύτερη
αραίωση δείγματος. Επιλέξτε το πρόγραμμα αραίωσης "STANDARD" αντί για το πρόγραμμα "HYPOGAMMA" ή το πρόγραμμα αραίωσης
"HYPERGAMMA" αντί για το πρόγραμμα "STANDARD".
• Δείγματα με μονοκλωνικά κλάσματα με υψηλή συγκέντρωση ολικών ανοσοσφαιρινών (πρόγραμμα αραίωσης "HYPERGAMMA")
Στην περίπτωση αυτή, το σύμπλεγμα αντιγόνου - αντισώματος είναι μεγάλο και ανάμεσα στη ζώνη λευκωματίνης και τη ζώνη άλφα 1
εμφανίζεται ένα μεγάλο κλάσμα. Στα πρότυπα αντιορών ενδέχεται να μην παρατηρείται ολική απουσία των μονοκλωνικών κλασμάτων (Εικ.
2).
• Δείγματα με πολυμερισμένα μονοκλωνικά κλάσματα
Στην περίπτωση αυτή, το σύμπλεγμα αντιγόνου - αντισώματος είναι μεγάλο και ανάμεσα στη ζώνη λευκωματίνης και τη ζώνη βήτα 1
εμφανίζεται ένα μεγάλο κλάσμα.
• Δείγματα με μονοκλωνικά κλάσματα στις ζώνες βήτα 1 ή βήτα 2
Εάν το μονοκλωνικό κλάσμα δεν ανιχνεύεται στη ζώνη γάμμα, επιλέξτε το πρόγραμμα αραίωσης που είναι κατάλληλο για τη συγκέντρωση Ig
του δείγματος.
Εάν υπάρχει υποψία για άλλο μονοκλωνικό κλάσμα στη ζώνη γάμμα, επιλέξτε το πρόγραμμα αραίωσης που είναι κατάλληλο για τη
συγκεκριμένη πρωτεΐνη.
• Δικλωνικά κλάσματα
Τα δικλωνικά κλάσματα ενδέχεται να οφείλονται σε ανοσοσυμπλέγματα ή δικλωνικές γαμμαπάθειες ή ιδιαίτερα σπάνιες διασταυρούμενες
αντιδράσεις (ανατρέξτε στην παράγραφο "Παρεμβολές και περιορισμοί").
• Εξαφάνιση του Ig M στη μορφολογία των αντιορών κάππα και λάμδα :
Σε περίπτωση πλήρους αφαίρεσης μιας κορυφής με τις ελαφριές αλυσίδες των αντιορών Ig M, κάππα και λάμδα, συνιστάται η επεξεργασία
του δείγματος με τον αναγωγικό παράγοντα β μερκαπτοαιθανόλη (βλ. προηγούμενη παράγραφο) και η επανάληψη του
ανοσοπροσδιορισμού.
• Σε περίπτωση πολλαπλών ταυτόχρονων αντιδράσεων με τους αντιορούς βαρέων αλυσίδων G, A και M, συνιστάται να αναλύσετε εκ νέου το
δείγμα ορού επιλέγοντας τον τρόπο αραίωσης "OPTIMIZED" (Βελτιστοποιημένος).
Παρεμβολές και περιορισμοί
ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ : Η χρήση διαφορετικών αντιορών από τους ειδικούς αντιορούς για τη διαδικασία του MINICAP IMMUNOTYPING που παρέχονται
με το κιτ ενδέχεται να επηρεάσει τα αποτελέσματα. Χρησιμοποιείτε μόνο τους αντιορούς που είναι ειδικοί για τη διαδικασία του MINICAP
IMMUNOTYPING.
Βλέπε ΔΕΙΓΜΑΤΑ ΠΡΟΣ ΑΝΑΛΥΣΗ.
Λόγω των ορίων διακριτικής ικανότητας και ευαισθησίας της ηλεκτροφόρησης ζώνης, είναι πιθανό κάποια μονοκλωνικά στοιχεία να μην
ανιχνεύονται με αυτήν τη μέθοδο.
Πολλές μελέτες καταδεικνύουν ότι η αντίδραση αντιγόνου – αντισώματος είναι διαφορετική στην υγρή φάση και τη φάση αγαρόζης. Όταν η
διαδικασία του MINICAP IMMUNOTYPING εκτελείται εξ ολοκλήρου σε υγρό μέσο, ορισμένοι αντιοροί ενδέχεται να εμφανίσουν ορισμένες φορές
διασταυρούμενη αντίδραση με μονοκλωνικά κλάσματα που υπάρχουν στο δείγμα.
Δεν υπάρχει κίνδυνος ψευδών αρνητικών αποτελεσμάτων, όπως είναι η μη ανίχνευση γαμμαπάθειας, ωστόσο αυτή η διασταυρούμενη
αντίδραση, η οποία είναι ιδιαίτερα σπάνια, ενδέχεται να οδηγήσει στο συμπέρασμα για ύπαρξη δικλωνικής γαμμαπάθειας αντί για μονοκλωνική
γαμμαπάθεια. Σύμφωνα με τη βιβλιογραφία, η κλινική θεραπεία είναι ίδια τόσο για τη δικλωνική γαμμαπάθεια όσο και για τη μονοκλωνική (Kyle
et al, 1981).
Εάν το δικλωνικό πρότυπο δεν είναι σαφές, ενδέχεται να απαιτείται περαιτέρω εξέταση χρησιμοποιώντας τα κιτ ανοσοκαθήλωσης HYDRAGEL.
Ενδέχεται να παρατηρηθούν μικρές αλλαγές μεταξύ του προτύπου ELP και των υπερκείμενων προτύπων αντιορών (ιδιαίτερα στη ζώνη βήτα 1).
Οι αποκλίσεις αυτές δεν πρέπει να θεωρείται ότι οφείλονται στην απουσία μονοκλωνικού κλάσματος σε ένα ή περισσότερα πρότυπα αντιορών.
Όπως ισχύει για κάθε ηλεκτροφορητική μέθοδο, μικρές μονοκλωνικές πρωτεΐνες που μετακινούνται μαζί με άλλες φυσιολογικές πρωτεΐνες ορού
ενδέχεται να είναι δυσδιάκριτες. Εάν υπάρχει υποψία για μικρά μονοκλωνικά κλάσματα, ενδέχεται να απαιτείται περαιτέρω εξέταση
χρησιμοποιώντας τα κιτ ανοσοκαθήλωσης SEBIA HYDRAGEL.
Όταν ένα μονοκλωνικό κλάσμα ανιχνεύεται από τη διαδικασία ανάλυσης πρωτεϊνών του MINICAP, MINICAP PROTEIN(E) 6, και δεν
χαρακτηρίζεται από τη διαδικασία του MINICAP IMMUNOTYPING, συνιστάται η επανάληψη του ανοσοπροσδιορισμού του δείγματος που έχει
υποβληθεί προηγουμένως σε επεξεργασία με βήτα-μερκαπτοαιθανόλη (βλ. προηγούμενη παράγραφο) και σε περίπτωση που η αβεβαιότητα
παραμένει, συνιστάται επιβεβαίωση του αποτελέσματος με τεχνική ανοσοκαθήλωσης σε γέλη αγαρόζης.
Δεν ανιχνεύτηκε καμία παρεμβολή με τη διαδικασία MINICAP IMMUNOTYPING λόγω της υψηλής συγκέντρωσης χοληστερόλης (≤ 8,24
mmol/L), τριγλυκεριδίων (≤ 11,58 mmol/L) και αιμοσφαιρίνης (≤ 0,40 g/dL) στο δείγμα.
Δεν έχουν μελετηθεί οι παρεμβολές με τη διαδικασία MINICAP IMMUNOTYPING σε συνάρτηση με τις συγκεντρώσεις χολερυθρίνης. Συνιστάται
η παρατήρηση των χαρακτηριστικών του δείγματος ορού. Εάν υπάρχουν υπόνοιες για ένα παρεμβάλον κλάσμα, συνιστάται η επανάληψη της
ανάλυσης του δείγματος ορού ή η χρήση συμπληρωματικών εξετάσεων με άλλες τεχνικές.
Αντιμετώπιση προβλημάτων
Επικοινωνήστε με την Τεχνική Υπηρεσία SEBIA του προμηθευτή εάν δεν είναι δυνατή η διεξαγωγή της ανάλυσης, ακόμη και εάν έχετε
ακολουθήσει προσεκτικά τις οδηγίες για την προετοιμασία και τη φύλαξη των υλικών καθώς και για την εκτέλεση της διαδικασίας.
Φύλλα Δεδομένων Ασφαλείας για τα αντιδραστήρια και πληροφορίες για την ασφαλή απόρριψη των αποβλήτων διατίθενται από την Τεχνική
Υπηρεσία του προμηθευτή.
ΔΕΔΟΜΕΝΑ ΑΠΟΔΟΣΗΣ
Αναπαραγωγιμότητα εντός της ακολουθίας και μεταξύ αναλύσεων
Η αναπαραγωγιμότητα εντός της ακολουθίας και μεταξύ αναλύσεων καταδείχθηκε σε τρία διαφορετικά παθολογικά δείγματα ορού με ένα
μονοκλωνικό κλάσμα (Ig GL, Ig AK και Ig MK) και σε ένα φυσιολογικό δείγμα ορού. Τα δείγματα αναλύθηκαν σε 3 συστήματα MINICAP με τη
διαδικασία του MINICAP IMMUNOTYPING και το τυπικό πρόγραμμα αραίωσης "STANDARD", με χρήση της ίδιας παρτίδας κιτ MINICAP
IMMUNOTYPING. Κάθε ορός αναλύθηκε 3 φορές και στα δύο τριχοειδή κάθε συστήματος MINICAP με ένα από τα 6 αντιδραστήρια, σύμφωνα
με το αναλυόμενο δείγμα (διάλυμα ELP για το φυσιολογικό δείγμα, αντιοροί anti-Ig G, anti-Ig A, anti-Ig M, αντι-κάππα και αντι-λάμδα για τα
παθολογικά δείγματα, σύμφωνα με το μονοκλωνικό κλάσμα).
Τα αποτελέσματα όλων των επαναληπτικών εξετάσεων ήταν πανομοιότητα εντός της ακολουθίας και μεταξύ των αναλύσεων ενώ τα πρότυπα
αντιστοιχούσαν στον τύπο κάθε εξεταζόμενου δείγματος. Με τη διαδικασία του MINICAP IMMUNOTYPING, ο ανοσοπροσδιορισμός επέτρεψε
τον χαρακτηρισμό μόνο ενός μονοκλωνικού κλάσματος για κάθε παθολογικό δείγμα και κανενός μη φυσιολογικού κλάσματος για το φυσιολογικό
δείγμα.
- 130 -
MINICAP IMMUNOTYPING - 2014/10
Αναπαραγωγιμότητα μεταξύ αναλύσεων και μεταξύ συστημάτων
Η αναπαραγωγιμότητα μεταξύ αναλύσεων και μεταξύ συστημάτων καταδείχθηκε σε τρία διαφορετικά παθολογικά δείγματα ορού με ένα
μονοκλωνικό κλάσμα (Ig GK, Ig GL και Ig MK) και με διαφορετικές συγκεντρώσεις ανοσοσφαιρίνης. Ένα δείγμα (με συγκέντρωση ολικής
Ig < 0,8 g/dL) υποβλήθηκε σε ανάλυση με τη διαδικασία του MINICAP IMMUNOTYPING και το πρόγραμμα αραίωσης "HYPOGAMMA", ένα
δείγμα (με συγκέντρωση ολικής Ig μεταξύ 0,8 και 2 g/dL) με το πρόγραμμα αραίωσης "STANDARD" και ένα δείγμα (με συγκέντρωση ολικής
Ig > 2 g/dL) με πρόγραμμα αραίωσης "HYPERGAMMA". Τα συγκεκριμένα δείγματα υποβλήθηκαν σε ανάλυση 3 διαδοχικά σε κάθε ένα από τα
3 συστήματα MINICAP με χρήση της ίδιας παρτίδας κιτ MINICAP IMMUNOTYPING.
Τα αποτελέσματα όλων των επαναληπτικών εξετάσεων ήταν πανομοιότυπα μεταξύ των αναλύσεων και μεταξύ των συστημάτων ενώ τα
πρότυπα προσδιόρισαν ορθά τα μονοκλωνικά κλάσματα. Με τη διαδικασία MINICAP IMMUNOTYPING, ο ανοσοπροσδιορισμός επέτρεψε τον
χαρακτηρισμό των αναμενόμενων μονοκλωνικών κλασμάτων σε τρία παθολογικά δείγματα.
Αναπαραγωγιμότητα μεταξύ αναλύσεων και μεταξύ παρτίδων
Η αναπαραγωγιμότητα μεταξύ αναλύσεων και μεταξύ παρτίδων καταδείχθηκε σε δύο διαφορετικά παθολογικά δείγματα ορού με ένα
μονοκλωνικό κλάσμα (Ig GK και Ig MK αντίστοιχα) και σε ένα δείγμα ορού με δύο μονοκλωνικά κλάσματα (Ig AL), ενώ όλα τα δείγματα είχαν
επίπεδο Ig μεταξύ 0,8 και 2 g/dL. Τα δείγματα αυτά αναλύθηκαν διαδοχικά 3 φορές, χρησιμοποιώντας τρεις διαφορετικές παρτίδες κιτ MINICAP
IMMUNOTYPING και την πρότυπη τεχνική αραίωσης "STANDARD".
Τα αποτελέσματα όλων των επαναληπτικών εξετάσεων ήταν πανομοιότυπα μεταξύ των αναλύσεων και μεταξύ των παρτίδων, ενώ τα πρότυπα
προσδιόρισαν ορθά τα μονοκλωνικά κλάσματα. Με τη διαδικασία MINICAP IMMUNOTYPING, ο ανοσοπροσδιορισμός επέτρεψε τον
χαρακτηρισμό των αναμενόμενων μονοκλωνικών κλασμάτων σε τρία παθολογικά δείγματα.
Μελέτη συμφωνίας
Διεξήχθη μελέτη συμφωνίας σε 69 δείγματα ορού μεταξύ της διαδικασίας του MINICAP IMMUNOTYPING και ενός συστήματος τριχοειδούς
ηλεκτροφόρησης για ανοσοπροσδιορισμό του εμπορίου : 57 διαφορετικά παθολογικά δείγματα ορού και 12 φυσιολογικά δείγματα ορού
υποβλήθηκαν σε ανάλυση και με τις δύο τεχνικές. Η μελέτη αυτή κατέδειξε συμφωνία 100 % μεταξύ των δύο τεχνικών :
• Για τα 12 φυσιολογικά δείγματα ορού : πλήρης συμφωνία.
• Για τα 57 παθολογικά δείγματα ορού : πλήρης συμφωνία.
Σε όλες τις περιπτώσεις, ήταν δυνατή και με τις δύο τεχνικές η ανίχνευση και ο χαρακτηρισμός των μονοκλωνικών πρωτεϊνών
(ανοσοπροσδιορισμός) σε ανθρώπινο ορό με πλήρη συμφωνία.
Ευαισθησία
Προετοιμάστηκαν διαδοχικές αραιώσεις σε φυσιολογικό ορό με τρία παθολογικά δείγματα ορού με μονοκλωνικά κλάσματα, τα οποία
υποβλήθηκαν σε ανάλυση με τη διαδικασία του MINICAP IMMUNOTYPING.
Τα αποτελέσματα συνοψίζονται ως εξής :
Αρ. δείγματος
1
2
3
Μονοκλωνικό κλάσμα
Είδος
Άλφα
Ig A, L
Λάμδα
Γάμμα
Ig G, K
Κάππα
Μι
Ig M, K
Κάππα
Συγκέντρωση (g/dL)
(στον αρχικό ορό)
2,7
2,9
1,7
Το όριο ανίχνευσης του μονοκλωνικού κλάσματος είναι περίπου 25 mg/dL.
Όριο ανίχνευσης (mg/dL)
25
25
25
25
25
25
ΣΗΜΕΙΩΣΗ : Το όριο ανίχνευσης ενδέχεται να διαφέρει ανάλογα με την εγγύτητα και το μέγεθος της πρωτεΐνης που επηρεάζει αρνητικά τη
διαδικασία. Η ευαισθησία είναι συνήθως υψηλότερη για μονοκλωνικά κλάσματα που μετακινούνται στο άκρο καθόδου της ζώνης γάμμα και
χαμηλότερη στη μέση της πολυκλωνικής ζώνης υπεργαμμασφαιριναιμίας. Το όριο ανίχνευσης ενδέχεται να διαφέρει ανάλογα με τη θέση του
μονοκλωνικού κλάσματος και του πολυκλωνικού υποβάθρου στις ζώνες γάμμα και βήτα.
- 131 -
ΑΝΑΛΥΣΗ ΔΕΙΓΜΑΤΩΝ ΟΥΡΩΝ : ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ MINICAP IMMUNOTYPING URINE
MINICAP IMMUNOTYPING - 2014/10
ΑΠΑΙΤΟΥΜΕΝΑ ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΑ (μη παρεχόμενα με το κιτ MINICAP IMMUNOTYPING)
ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ: Βλ. τα δελτία δεδομένων ασφαλείας.
1. ΚΙΤ MINICAP PROTEIN(E) 6 (SEBIA, PN 2203)
Παρουσίαση, χρήση, φύλαξη, σταθερότητα και ενδείξεις αλλοίωσης
Βλ. το φύλλο οδηγιών που παρέχεται με το κιτ.
2. ΚΙΤ CAPILLARYS / MINICAP URINE (SEBIA, PN 2013)
Παρουσίαση, φύλαξη, σταθερότητα και ενδείξεις αλλοίωσης
Βλ. το φύλλο οδηγιών που παρέχεται με το κιτ.
Χρήση
Για την προετοιμασία των δειγμάτων ούρων πριν από τον διαχωρισμό των πρωτεϊνών ανθρώπινων ούρων μέσω τριχοειδούς
ηλεκτροφόρησης με χρήση του Συστήματος MINICAP.
3. ΑΠΕΣΤΑΓΜΕΝΟ Ή ΑΠΙΟΝΙΣΜΕΝΟ ΝΕΡΟ
Χρήση
Για έκπλυση τριχοειδών στο Σύστημα MINICAP, SEBIA, για τη διαδικασία τριχοειδούς ηλεκτροφόρησης.
Συνιστάται η χρήση φιλτραρισμένου απεσταγμένου ή απιονισμένου νερού (σε φίλτρο με πορώδες ≤ 0,45 μm) και με αντιστασικότητα
υψηλότερη από 10 Megohm x cm.
Για την αποφυγή μικροβιακής επιμόλυνσης, το νερό πρέπει να ανανεώνεται καθημερινά.
Για τη βέλτιστη λειτουργία, προσθέστε 35 µL/dL CLEAN PROTECT (SEBIA, PN 2059, 1 φιαλίδιο των 5 mL).
ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Πριν από την πλήρωση του περιέκτη έκπλυσης, συνιστάται η πλύση του με άφθονο απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό.
4. CAPICLEAN
Σύνθεση
Το φιαλίδιο του συμπυκνωμένου διαλύματος CAPICLEAN (SEBIA, PN 2058, 25 mL) περιέχει: πρωτεολυτικά ένζυμα, επιφανειοδραστικούς
παράγοντες και πρόσθετα, μη επιβλαβή στις χρησιμοποιούμενες συγκεντρώσεις, αναγκαία για άριστη απόδοση.
Χρήση
Για τον καθαρισμό των ακροφυσίων δειγματοληψίας στο Σύστημα MINICAP, SEBIA, για τη διαδικασία τριχοειδούς ηλεκτροφόρησης, κατά
τη διάρκεια της ακολουθίας καθαρισμού CAPICLEAN.
ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Ενεργοποιείτε μια ακολουθία καθαρισμού CAPICLEAN τουλάχιστον μία φορά την εβδομάδα και το μέγιστο μία φορά την
ημέρα, ή κάθε 500 αναλύσεις, εφόσον αυτές έχουν διεξαχθεί εντός χρονικού διαστήματος μικρότερου από μία εβδομάδα.
Βλ. τα φύλλα οδηγιών που παρέχονται με το σύστημα CAPICLEAN, SEBIA.
ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Για βέλτιστη χρήση του διαλύματος CAPICLEAN με το σύστημα MINICAP, πρέπει να χρησιμοποιείται μια ετικέτα γραμμωτού
κωδικού που προορίζεται για την ταυτοποίηση του σωληναρίου αιμόλυσης, το οποίο χρησιμοποιείται ως βάση για το μικροσωληνάριο που
περιέχει το αραιωμένο διάλυμα CAPICLEAN (κόψτε το πώμα του μικροσωληναρίου πριν από τη χρήση).
Φύλαξη, σταθερότητα και ενδείξεις αλλοίωσης
Φυλάσσετε το CAPICLEAN στο ψυγείο (2 – 8 °C). Παραμένει σταθερό μέχρι την ημερομηνία λήξης που αναγράφεται στην ετικέτα του
φιαλιδίου. ΜΗΝ ΚΑΤΑΨΥΧΕΤΕ.
Ενδέχεται να παρατηρηθεί ίζημα ή αιωρούμενα συζευγμένα σωματίδια (θρόμβοι) στο φιαλίδιο CAPICLEAN, τα οποία δεν επηρεάζουν
δυσμενώς τη χρήση.
Μην διαλύετε αυτό το ίζημα ή αυτά τα σωματίδια. Συνιστάται η συλλογή μόνο του υπερκειμένου υλικού.
Για μετέπειτα χρήση, φυλάσσετε το σωληνάριο που περιέχει το αραιωμένο διάλυμα στους 2 – 8 °C. Πρέπει να χρησιμοποιείται εντός της
ημέρας.
5. ΔΙΑΛΥΜΑ ΥΠΟΧΛΩΡΙΩΔΟΥΣ ΝΑΤΡΙΟΥ (για καθαρισμό ακροφυσίων δειγματοληψίας)
Προετοιμασία
Προετοιμάστε διάλυμα υποχλωριώδους νατρίου (χλώριο 2% έως 3%) αραιώνοντας 250 mL χλωριούχου συμπυκνωμένου διαλύματος 9,6%
σε 1 λίτρο κρύου απεσταγμένου ή απιονισμένου νερού.
Χρήση
Για τον καθαρισμό των ακροφυσίων δειγματοληψίας στο Σύστημα MINICAP (εβδομαδιαία συντήρηση για την απομάκρυνση
προσροφημένων πρωτεϊνών από το ακροφύσιο).
Βλ. το εγχειρίδιο χρήσης του συστήματος SEBIA MINICAP.
• Γεμίστε ένα μικροσωληνάριο 500 µL με το αραιωμένο χλωριούχο διάλυμα που έχετε ετοιμάσει προηγουμένως.
• Κόψτε το πώμα του μικροσωληναρίου.
• Τοποθετήστε το μικροσωληνάριο, το οποίο βρίσκεται σε ένα νέο σωληνάριο αιμόλυσης που χρησιμοποιείται ως βάση στήριξης
(αναγνωρίζεται από μια ετικέτα γραμμωτού κωδικού ειδική για το διάλυμα υποχλωριώδους νατρίου), στη θέση 1 του περιστρεφόμενου
δειγματολήπτη του MINICAP.
• Τοποθετήστε ένα νέο δοχείο αντιδραστηρίων στο αυτοματοποιημένο σύστημα φόρτωσης δοχείων του MINICAP (εάν δεν υπάρχει δοχείο
αντιδραστηρίων, θα εμφανιστεί ένα μήνυμα).
• Ωθήστε τον περιστρεφόμενο δειγματολήπτη στο σύστημα MINICAP.
• Κλείστε τις θύρες του συστήματος MINICAP και ακολουθήστε τις οδηγίες που εμφανίζονται στην οθόνη.
ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Για βέλτιστη χρήση του διαλύματος υποχλωριώδους νατρίου με το σύστημα MINICAP, πρέπει να χρησιμοποιείται μια ετικέτα
γραμμωτού κωδικού που προορίζεται για την ταυτοποίηση του σωληναρίου αιμόλυσης, το οποίο χρησιμοποιείται ως βάση για το
μικροσωληνάριο που περιέχει το διάλυμα (κόψτε το πώμα του μικροσωληναρίου πριν από τη χρήση).
- 132 -
MINICAP IMMUNOTYPING - 2014/10
Φύλαξη, σταθερότητα και ενδείξεις αλλοίωσης
Φυλάσσετε το χλωριούχο διάλυμα εργασίας σε κλειστό περιέκτη σε θερμοκρασία δωματίου. Το διάλυμα παραμένει σταθερό για 3 μήνες.
Αποφεύγετε την έκθεση στο ηλιακό φως και τη φύλαξη κοντά σε πηγές θερμότητας και ανάφλεξης, οξέα και αμμωνία.
6. ΔΙΑΛΥΜΑ ΠΛΥΣΗΣ CAPILLARYS / MINICAP
Προετοιμασία
Κάθε φιαλίδιο του πυκνού Διαλύματος Πλύσης CAPILLARYS / MINICAP (SEBIA, PN 2052, 2 φιαλίδια, 75 mL) θα πρέπει να αραιώνεται σε έως
και 750 mL με απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό.
Για το MINICAP, είναι σκόπιμο να αραιώνονται μόνο 25 mL του πυκνού διαλύματος με 250 mL απεσταγμένου ή απιονισμένου νερού.
Μετά την αραίωση, το διάλυμα πλύσης περιέχει ένα αλκαλικό διάλυμα pH ≈ 12.
Χρήση
Για πλύση των τριχοειδών του MINICAP.
ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Πριν γεμίσετε τον περιέκτη του διαλύματος πλύσης, συνιστάται η πλύση του ανοίγματός του, του συνδετήρα και του σωλήνα
με άφθονο απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό για την αποφυγή εναπόθεσης αλάτων.
Φύλαξη, σταθερότητα και ενδείξεις αλλοίωσης
Φυλάσσετε το πυκνό διάλυμα και το διάλυμα πλύσης εργασίας σε κλειστούς περιέκτες σε θερμοκρασία δωματίου ή στο ψυγείο. Το πυκνό
διάλυμα πλύσης παραμένει σταθερό μέχρι την ημερομηνία λήξης που αναγράφεται στην ετικέτα του κιτ ή του φιαλιδίου διαλύματος
πλύσης.
Το διάλυμα πλύσης εργασίας παραμένει σταθερό για 3 μήνες.
Πετάξτε το διάλυμα πλύσης εργασίας αν μεταβληθεί η όψη του, π.χ. θόλωση λόγω μικροβιακής επιμόλυνσης.
ΣΗΜΕΙΩΣΕΙΣ:
Οι αναλύσεις που πραγματοποιήθηκαν προς επικύρωση των αντιδραστηρίων κατέδειξαν ότι, για τα διαφορετικά διαλύματα και με χρήση
κατάλληλου εξοπλισμού για τον όγκο ανασύστασης, μια απόκλιση ±5% στον τελικό όγκο δεν επηρεάζει δυσμενώς την ανάλυση.
Το απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό που χρησιμοποιείται για την ανασύσταση των διαλυμάτων πρέπει να είναι ελεύθερο βακτηρίων και
μούχλας (χρήση φίλτρου ≤ 0,45 µm) και να έχει αντιστασικότητα υψηλότερη από 10 Megohm x cm.
ΕΞΟΠΛΙΣΜΟΣ ΚΑΙ ΣΥΜΠΛΗΡΩΜΑΤΙΚΑ ΕΞΑΡΤΗΜΑΤΑ
1.
2.
3.
4.
5.
Σύστημα MINICAP, SEBIA, PN 1230.
Περιστρεφόμενος δειγματολήπτης παρεχόμενος με το MINICAP.
Κιτ περιεκτών παρεχόμενο με το MINICAP: Περιέκτες έκπλυσης (για πλήρωση με απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό) και αποβλήτων.
Δοχεία αντιδραστηρίων MINICAP, SEBIA (250 τεμάχια), PN 2280.
Καπάκια κάδων για χρησιμοποιημένα δοχεία αντιδραστηρίων, SEBIA (12 τεμάχια), PN 2286: καπάκια για το κλείσιμο των κάδων που
περιέχουν χρησιμοποιημένα δοχεία.
6. Σωληνάρια αιμόλυσης (ύψους 75 mm και διαμέτρου 13 mm).
ΔΕΙΓΜΑΤΑ ΠΡΟΣ ΑΝΑΛΥΣΗ
Λήψη και διατήρηση δειγμάτων
Η ανάλυση συνιστάται να διεξάγεται σε φρέσκα δείγματα ούρων που συλλέγονται σε διάστημα 24 ωρών. Τα δείγματα ούρων πρέπει να
συλλέγονται σύμφωνα με τις καθιερωμένες διαδικασίες για τη διεξαγωγή κλινικών εργαστηριακών εξετάσεων.
Τα δείγματα ούρων μπορούν να φυλάσσονται έως και για μία εβδομάδα σε θερμοκρασία μεταξύ 2 και 8 °C.
Για μεγαλύτερα διαστήματα φύλαξης, συνιστάται η διατήρηση των δειγμάτων στο ψυγείο στους - 70 / - 80 °C (παραμένουν σταθερά για
τουλάχιστον ένα μήνα).
ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Μη φυλάσσετε τα δείγματα σε θερμοκρασία - 20 °C.
Σε αποψυγμένα ή ακατάλληλα αποθηκευμένα δείγματα ενδέχεται να εμφανιστούν τροποποιημένα ή πρόσθετα κλάσματα λόγω
αποδόμησης των πρωτεϊνών.
ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Τα δείγματα ούρων δεν θα πρέπει να φυλάσσονται σε θερμοκρασία δωματίου.
Προετοιμασία των δειγμάτων
Πριν από την ανάλυση, προετοιμάστε τα δείγματα ούρων σύμφωνα με τη διαδικασία προετοιμασίας για διαπίδυση και συμπύκνωση που
περιγράφεται στο ένθετο συσκευασίας του κιτ CAPILLARYS / MINICAP URINE (βλ. παράγραφο «Απαιτούμενα μη παρεχόμενα
αντιδραστήρια»).
Χρησιμοποιείτε τα δείγματα ούρων αμέσως μετά την προετοιμασία τους.
ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Η τεχνική ανάλυσης ούρων μέσω τριχοειδούς ηλεκτροφόρησης συνίσταται σε 2 στάδια: ένα στάδιο διαπίδυσης και ένα
στάδιο συμπύκνωσης των δειγμάτων ούρων με τα συστήματα διαπίδυσης SEBIA (σωληνάρια των 20 mL). Χρησιμοποιείτε μόνο ένα
σωληνάριο ανά δείγμα. Στη συνέχεια, η ανάλυση του δείγματος που έχει υποβληθεί σε διαπίδυση και συμπύκνωση μπορεί να γίνει με χρήση
των διαδικασιών MINICAP URINE και MINICAP IMMUNOTYPING URINE.
Η ανάλυση των δειγμάτων ούρων πρέπει να γίνεται εντός μίας ημέρας το μέγιστο από την προετοιμασία τους. Για να περιοριστεί η
προσρόφηση πρωτεϊνών από τη μεμβράνη της συσκευής διαπίδυσης και συμπύκνωσης (σύστημα διαπίδυσης), το δείγμα δεν συνιστάται να
διατηρείται στο σύστημα διαπίδυσης μετά τη φυγοκέντρηση, αλλά σε μικροσωληνάριο υπό ψύξη (σε θερμοκρασία 2 έως 8 °C).
Δείγματα προς αποφυγή
• Μη χρησιμοποιείτε παλαιά ή ακατάλληλα φυλαγμένα δείγματα ούρων. Τα κλάσματα θα τροποποιηθούν λόγω μετουσίωσης.
• Συνιστάται η παρακολούθηση των χαρακτηριστικών των δειγμάτων ούρων μετά την πρώτη φυγοκέντρηση (π.χ., ενδείξεις αιμόλυσης ή
θολερότητα).
• Μην αποθηκεύετε τα δείγματα στις συσκευές διαπίδυσης και συμπύκνωσης. Ορισμένες πρωτεΐνες ενδέχεται να προσκολληθούν στη
μεμβράνη.
- 133 -
MINICAP IMMUNOTYPING - 2014/10
ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Τα σωληνάρια συλλογής και οι παράμετροι φυγοκέντρησης για τα βιολογικά δείγματα περιγράφονται στη διαθέσιμη
τεκμηρίωση σχετικά με τη φάση που προηγείται της βιοϊατρικής ανάλυσης (δεδομένα που παρέχονται από τους κατασκευαστές των
σωληναρίων, οδηγούς και συστάσεις σχετικά με τη συλλογή βιολογικών δειγμάτων κ.λπ.). Αν δεν υπάρχουν ενδείξεις στις οδηγίες χρήσης
σχετικά με τον απαιτούμενο τύπο σωληναρίων ή τη φυγοκέντρηση, ανατρέξτε στην παρούσα τεκμηρίωση και σχετικά με τις απαιτούμενες
διαστάσεις σωληναρίων, ανατρέξτε στο έγγραφο της SEBIA Characteristics of tubes to use according to the instrument (Χαρακτηριστικά των
σωληναρίων προς χρήση ανάλογα με το όργανο). Η φάση που προηγείται της ανάλυσης πρέπει να ολοκληρώνεται σύμφωνα με την
τελευταία τεχνολογία, τις εκάστοτε συστάσεις, συμπεριλαμβανομένων αυτών που παρέχονται από τους κατασκευαστές των σωληναρίων,
και τους ισχύοντες κανονισμούς.
ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ
Το Σύστημα MINICAP είναι ένα όργανο πολλαπλών παραμέτρων για την ανάλυση πρωτεϊνών ούρων σε 2 παράλληλα τριχοειδή με τη
διαδικασία MINICAP IMMUNOTYPING URINE ως εξής:
• Ανάγνωση των γραμμωτών κωδικών των σωληναρίων δειγμάτων ούρων (έως 18), των σωληναρίων αντιδραστηρίων του MINICAP
IMMUNOTYPING και του περιστρεφόμενου δειγματολήπτη.
• Αραίωση των δειγμάτων σε δοχεία αντιδραστηρίων.
• Ανάμιξη αραιωμένων δειγμάτων ούρων με διάλυμα ELP και ειδικούς αντιορούς σε δοχεία αντιδραστηρίων.
• Έκπλυση τριχοειδών.
• Έγχυση αραιωμένων δειγμάτων.
• Διαχωρισμός πρωτεϊνών και άμεση ανίχνευση των διαχωρισμένων πρωτεϊνών σε τριχοειδή.
Τα χειροκίνητα βήματα της διαδικασίας είναι τα εξής:
• Τοποθετήστε τα μικροσωληνάρια (χωρίς πώματα) που περιέχουν τα δείγματα προς ανάλυση σε σωληνάρια αιμόλυσης στις θέσεις 1 έως
18 του περιστρεφόμενου δειγματολήπτη. Κάθε σωληνάριο αναγνωρίζεται από την ειδική ετικέτα γραμμωτού κωδικού αναγνώρισης
δείγματος που αντιστοιχεί στο δείγμα προς ανάλυση.
• Τοποθετήστε το σωληνάριο του μέσου αραίωσης δειγμάτων στον περιστρεφόμενο δειγματολήπτη στη θέση 27.
• Τοποθετήστε τη βάση με το διάλυμα ELP και τα σωληνάρια αντιορού στον περιστρεφόμενο δειγματολήπτη στις θέσεις 19 έως 24.
• Τοποθετήστε τον περιστρεφόμενο δειγματολήπτη στο όργανο MINICAP.
• Αφαιρέστε τα σωληνάρια δείγματος μετά την ανάλυση.
• Αφαιρέστε και κλείστε τους κάδους για τα χρησιμοποιημένα δοχεία.
Η ηλεκτροφορητική ανάλυση στο Σύστημα MINICAP με τη διαδικασία MINICAP URINE πρέπει αρχικά να εκτελεστεί για την επιλογή
δειγμάτων, τα οποία είναι ύποπτα για παρουσία μονοκλωνικών πρωτεϊνών (π.χ. με μη φυσιολογικό πρότυπο πρωτεϊνών ή κλάσμα
πρωτεϊνών).
ΔΙΑΒΑΣΤΕ ΠΡΟΣΕΚΤΙΚΑ ΤΟ ΕΓΧΕΙΡΙΔΙΟ ΧΡΗΣΗΣ ΤΟΥ ΣΥΣΤΗΜΑΤΟΣ MINICAP.
I. ΠΡΟΕΤΟΙΜΑΣΙΑ ΗΛΕΚΤΡΟΦΟΡΗΤΙΚΗΣ ΑΝΑΛΥΣΗΣ
1. Επιλέξτε τα δείγματα με μη φυσιολογικό κλάσμα πρωτεϊνών στα ηλεκτροφορήματα που λαμβάνονται με τη διαδικασία MINICAP
URINE.
2. Ενεργοποιήστε το όργανο MINICAP και τον υπολογιστή.
3. Για εκκίνηση του οργάνου, τοποθετήστε τουλάχιστον ένα νέο δοχείο αντιδραστηρίων στο αυτοματοποιημένο σύστημα φόρτωσης
δοχείων του MINICAP (εάν δεν υπάρχει δοχείο αντιδραστηρίων, θα εμφανιστεί ένα μήνυμα).
4. Ενεργοποιήστε το λογισμικό. Η λειτουργία του οργάνου ξεκινά αυτόματα.
5. Για κάθε δείγμα προς ανάλυση, καθορίστε την τιμή «Ratio urine» (Αναλογία ούρων) του μη φυσιολογικού κλάσματος προς
χαρακτηρισμό από το ηλεκτροφορητικό πρότυπο που λαμβάνεται με το πρόγραμμα ανάλυσης URINE (βλ. παράγραφο «Ανάλυση
αποτελεσμάτων» του ένθετου συσκευασίας του κιτ CAPILLARYS / MINICAP URINE). Η τιμή «Ratio urine» ορίζεται ως η αναλογία της
περιοχής μη φυσιολογικού κλάσματος προς τη συνολική περιοχή πρωτεϊνών Φυσιολογικού Ορού Ελέγχου.
6. Επιλέξτε το πρόγραμμα αραίωσης που θα εφαρμοστεί αυτόματα σύμφωνα με την τιμή «Ratio urine»:
• HYPOGAMMA εάν η τιμή «Ratio urine» είναι < 0,55.
• STANDARD εάν η τιμή «Ratio urine» κυμαίνεται μεταξύ 0,55 και 1,55.
• HYPERGAMMA εάν η τιμή «Ratio urine» είναι < 1,55.
ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Όταν η τιμή «Ratio urine» κυμαίνεται μεταξύ ±10% της τιμής κατωφλίου (0,55 ή 1,55), το πρόγραμμα αραίωσης
συνιστάται να επιλέγεται σύμφωνα με το μη φυσιολογικό κλάσμα προς χαρακτηρισμό με τη διαδικασία MINICAP IMMUNOTYPING
URINE:
- για βελτίωση της ανίχνευσης ενός μικρού κλάσματος, αραιώστε σε μικρότερο βαθμό το δείγμα ούρων επιλέγοντας το
πρόγραμμα αραίωσης «HYPOGAMMA» αντί για το πρόγραμμα «STANDARD» και το πρόγραμμα αραίωσης «STANDARD» αντί για
το πρόγραμμα «HYPERGAMMA».
- για βελτίωση του ανοσοπροσδιορισμού ενός μεγάλου κλάσματος, αραιώστε σε μεγαλύτερο βαθμό το δείγμα ούρων επιλέγοντας
το πρόγραμμα αραίωσης «STANDARD» αντί για το πρόγραμμα «HYPOGAMMA» και το πρόγραμμα αραίωσης «HYPERGAMMA» αντί
για το πρόγραμμα «STANDARD».
7. Για την ανάλυση δειγμάτων ούρων, το κιτ MINICAP IMMUNOTYPING προορίζεται για ανάλυση με το πρόγραμμα ανάλυσης
«IMMUNOTYPING URINE» του οργάνου MINICAP και το ρυθμιστικό διάλυμα MINICAP PROTEIN(E) 6. Για να επιλέξετε το πρόγραμμα
ανάλυσης «IMMUNOTYPING URINE» και να τοποθετήσετε το φιαλίδιο ρυθμιστικού διαλύματος MINICAP PROTEIN(E) 6 στη θέση
«B1» του οργάνου, διαβάστε προσεκτικά το εγχειρίδιο οδηγιών του MINICAP και ακολουθήστε τις οδηγίες που εμφανίζονται στην
οθόνη.
ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Κατά τη μετάβαση από τη διαδικασία MINICAP URINE στη διαδικασία MINICAP IMMUNOTYPING URINE (και αντίστροφα)
δεν απαιτείται αλλαγή του φιαλιδίου ρυθμιστικού διαλύματος.
8. Τοποθετήστε νέα δοχεία αντιδραστηρίων στο αυτοματοποιημένο σύστημα φόρτωσης δοχείων του MINICAP (εάν δεν υπάρχουν
δοχεία αντιδραστηρίων, θα εμφανιστεί ένα μήνυμα).
9. Τοποθετήστε ένα νέο κάδο για τα χρησιμοποιημένα δοχεία στο MINICAP στη θέση που προορίζεται για το συγκεκριμένο σκοπό
10. Ελέγξτε τη στάθμη πλήρωσης των φιαλιδίων αντιδραστηρίου, προσθέστε αντιδραστήριο, εάν απαιτείται, και αδειάστε τον περιέκτη
αποβλήτων. Στο παράθυρο «Check reagent levels» (Έλεγχος επιπέδων αντιδραστηρίου), ενημερώστε το λογισμικό μετακινώντας τα
κουμπιά δρομέα.
- 134 -
MINICAP IMMUNOTYPING - 2014/10
11. Ο περιστρεφόμενος δειγματολήπτης διαθέτει 28 θέσεις για τα σωληνάρια δειγμάτων:
• Τοποθετήστε έως και 18 κενά σωληνάρια αιμόλυσης (χρησιμοποιούμενα ως βάσεις), ταυτοποιημένα με τις ετικέτες γραμμικού
κωδικού κάθε ασθενή, στον περιστρεφόμενο δειγματολήπτη (θέσεις 1 έως 18), και στη συνέχεια, τα μικροσωληνάρια τα οποία
περιέχουν τα δείγματα ούρων που έχουν υποβληθεί σε διαπίδυση. Κόψτε το πώμα κάθε μικροσωληναρίου πριν από τη χρήση. Ο
γραμμωτός κώδικας κάθε σωληναρίου πρέπει να είναι ορατός από τα ανοίγματα του περιστρεφόμενου δειγματολήπτη. Εάν το
σωληνάριο δείγματος που έχει τοποθετηθεί στον περιστρεφόμενο δειγματολήπτη δεν έχει επιλεγεί προηγουμένως, θα
εκτελεστεί αυτόματα το πρόγραμμα αραίωσης «HYPOGAMMA».
• Φυλάξτε το πώμα από κάθε μικροσωληνάριο για μετέπειτα αποθήκευση των δειγμάτων, εφόσον απαιτείται.
ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Συνιστάται η τοποθέτηση σε κάθε σωληνάριο αιμόλυσης που χρησιμοποιείται για τη συγκράτηση του
μικροσωληναρίου, το οποίο περιέχει δείγμα προς ανάλυση, της ετικέτας γραμμωτού κωδικού αναγνώρισης που αντιστοιχεί στο
κάθε δείγμα.
• Η βάση με το διάλυμα ELP και τα σωληνάρια αντιορών anti-Ig G, anti-Ig A, anti-Ig M, αντι-κάππα και αντι-λάμδα είναι έτοιμη προς
χρήση.
Τοποθετήστε τη βάση απευθείας στον περιστρεφόμενο δειγματολήπτη στις θέσεις του διαλύματος ELP και των αντιορών
κρατώντας την από τα δύο κλιπ που βρίσκονται σε κάθε πλευρά. Ο γραμμωτός κωδικός του κάθε σωληναρίου πρέπει να είναι
ορατός από τα ανοίγματα του περιστρεφόμενου δειγματολήπτη.
ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Πριν ξεκινήσετε την ανάλυση, βεβαιωθείτε ότι έχετε εισαγάγει σωστά τη βάση στον περιστρεφόμενο
δειγματολήπτη.
• Αφαιρέστε το πώμα του σωληναρίου του μέσου αραίωσης δειγμάτων και τοποθετήστε το στη θέση 27 (θέση «Diluent/Solution»).
Ο γραμμωτός κωδικός του σωληναρίου πρέπει να είναι ορατός από το άνοιγμα του περιστρεφόμενου δειγματολήπτη.
ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Το διάλυμα ELP και όλοι οι αντιοροί πρέπει να έχουν τον ίδιο αριθμό παρτίδας για μία ανάλυση. Μην αναμειγνύετε
τυχόν υπολειπόμενη ποσότητα αντιορών της ίδιας ειδικότητας ή διαλύματος ELP με τα 2 επόμενα φιαλίδια, ακόμη και αν έχουν τον
ίδιο αριθμό παρτίδας.
12.
13.
14.
15.
ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Αν δεν υπάρχει ένα σωληνάριο στις θέσεις για τα σωληνάρια δειγμάτων, στις θέσεις 19 έως 24 (αντιοροί και διάλυμα
ELP) και στη θέση 27 (μέσο αραίωσης δείγματος), η ανάλυση δεν μπορεί να ξεκινήσει και εμφανίζεται ένα μήνυμα.
Ωθήστε τον περιστρεφόμενο δειγματολήπτη στο σύστημα MINICAP.
Κλείστε τις θύρες του συστήματος MINICAP και ακολουθήστε τις οδηγίες που εμφανίζονται στην οθόνη.
Μετά τις αναλύσεις, αφαιρέστε τον περιστρεφόμενο δειγματολήπτη με τα σωληνάρια δειγμάτων που έχουν υποβληθεί σε ανάλυση.
Αφαιρέστε τη βάση με το διάλυμα ELP και τα σωληνάρια αντιορών και τοποθετήστε την αμέσως στο ψυγείο (2 – 8 °C) για φύλαξη.
ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Μεταξύ των ζωνών άλφα-2 και βήτα-1 ενδέχεται να παρατηρηθεί μια μετατόπιση των προτύπων ELP και αντιορών,
εάν τα σωληνάρια μείνουν στο όργανο για παρατεταμένο χρονικό διάστημα.
Εάν χρειάζεται, αφαιρέστε προσεκτικά τον κάδο που περιέχει τα χρησιμοποιημένα δοχεία αντιδραστηρίου, κλείστε τον καλά με το
ειδικό καπάκι και απορρίψτε τον.
ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ: Ο χειρισμός των κάδων που περιέχουν χρησιμοποιημένα δοχεία αντιδραστηρίων με βιολογικά δείγματα πρέπει
να γίνεται με προσοχή.
ΑΡΑΙΩΣΗ - ΜΕΤΑΚΙΝΗΣΗ - ΠΕΡΙΓΡΑΦΗ ΤΩΝ ΑΥΤΟΜΑΤΟΠΟΙΗΜΕΝΩΝ ΒΗΜΑΤΩΝ
1. Ανάγνωση των γραμμωτών κωδικών των σωληναρίων δειγμάτων ούρων προς ανάλυση (έως 18), των σωληναρίων αντιδραστηρίων του
MINICAP IMMUNOTYPING και του περιστρεφόμενου δειγματολήπτη.
2. Αραίωση του δείγματος ούρων που έχει υποβληθεί σε διαπίδυση με το μέσο αραίωσης δειγμάτων σε ένα δοχείο αντιδραστηρίου.
3. Τα 2 πρώτα αντιδραστήρια και το αραιωμένο δείγμα αναρροφώνται και στη συνέχεια αναμιγνύονται σε ένα δοχείο αντιδραστηρίου. Το
ακροφύσιο δειγματοληψίας εκπλένεται μετά από κάθε δείγμα. Για κάθε δείγμα εκτελείται το επιλεγμένο πρόγραμμα αραίωσης. Εάν
δεν έχει επιλεγεί το κατάλληλο πρόγραμμα, εφαρμόζεται βάσει προεπιλογής το πρόγραμμα αραίωσης HYPOGAMMA. Η σειρά των
αντιδραστηρίων έχει ως εξής: Διάλυμα ELP, αντιοροί anti-Ig G, anti-Ig A, anti-Ig M, αντι-κάππα & αντι-λάμδα.
4. Τα τριχοειδή υποβάλλονται σε πλύση.
5. Τα αραιωμένα δείγματα με τα αντιδραστήρια εγχέονται στα τριχοειδή.
6. Η μετακίνηση των πρωτεϊνών εκτελείται υπό σταθερή τάση για περίπου 4 λεπτά και η θερμοκρασία ελέγχεται με το φαινόμενο Peltier.
7. Οι πρωτεΐνες ανιχνεύονται άμεσα με σάρωση στα 200 nm και το ηλεκτροφορητικό προφίλ εμφανίζεται στην οθόνη του συστήματος.
ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Τα βήματα 3 έως 7 εκτελούνται ξανά για τα ακόλουθα αντιδραστήρια (anti-Ig A, anti-Ig M, αντι-κάππα και αντι-λάμδα).
ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Τα συγκεκριμένα βήματα περιγράφονται για τα 2 πρώτα αντιδραστήρια (διάλυμα ELP και anti-Ig G). Για τα ακόλουθα
αντιδραστήρια (αντιοροί anti-Ig A, anti-Ig M, αντι-κάππα και αντι-λάμδα), το βήμα 3 εκτελείται κατά τις 2 προηγούμενες αναλύσεις. Τα πλήρη
ηλεκτροφορητικά πρότυπα που αντιστοιχούν στον ανοσοπροσδιορισμό του δείγματος εμφανίζονται μετά από 35 λεπτά περίπου.
Στο παράθυρο κατάστασης:
- Στον φάκελο «Legend» εμφανίζεται η πρόοδος των αναλύσεων που πραγματοποιούνται στον περιστρεφόμενο δειγματολήπτη.
- Το στοιχείο «IT counter» δηλώνει τον αριθμό των αναλύσεων που έχουν πραγματοποιηθεί και εμφανίζεται μόνο στην κατάσταση «capped
tubes». Μετά την εγκατάσταση της έκδοσης του λογισμικού, ο μετρητής αναλύσεων ξεκινά από το μηδέν. Καταμετρά την ανάλυση που
πραγματοποιείται και τις αναλύσεις που έχουν ολοκληρωθεί ή διακοπεί (μετά από ματαίωση).
Εκτελέστε επαναφορά του μετρητή όταν εκκενωθούν τα σωληνάρια (χρησιμοποιώντας το κουμπί «reset»).
ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Όταν ολοκληρωθούν 60 αναλύσεις, στο παράθυρο κατάστασης αναβοσβήνει ένα σήμα προειδοποίησης. Το σήμα αυτό
παραμένει, αλλά δεν εμποδίζει τις επόμενες αναλύσεις έως ότου μηδενιστεί ο μετρητής αναλύσεων.
II. ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ ΤΗΣ ΑΝΑΛΥΣΗΣ
Στο τέλος της ανάλυσης, κάθε πρότυπο αντιορών (Ig G, Ig A, Ig M, Κάππα και Λάμδα) υπερτίθεται αυτόματα στο πρότυπο ELP. Σε περίπτωση
αντίδρασης ενός μονοκλωνικού κλάσματος και ενός ειδικού αντιορού, το σχετικό κλάσμα παύει να εμφανίζεται στο πρότυπο αντιορού.
Με σύγκριση των προτύπων είναι δυνατός ο προσδιορισμός και ο χαρακτηρισμός των μονοκλωνικών κλασμάτων.
Για την ανάλυση των δειγμάτων ούρων, οι διάφορες θέσεις των ζωνών πρωτεϊνών (Λευκωματίνη, Άλφα 1, Άλφα 2, Βήτα και Γάμμα)
προσδιορίζονται στην οθόνη και στην αναφορά αποτελεσμάτων.
- 135 -
MINICAP IMMUNOTYPING - 2014/10
III. ΑΚΟΛΟΥΘΙΑ ΤΕΛΟΥΣ ΤΗΣ ΑΝΑΛΥΣΗΣ
Μετά το τέλος κάθε ακολουθίας ανάλυσης, ο χειριστής πρέπει να θέσει το Σύστημα MINICAP σε αναμονή ή να τερματίσει τη λειτουργία
του συστήματος, ώστε τα τριχοειδή να αποθηκευτούν σε βέλτιστες συνθήκες.
ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Τοποθετήστε τουλάχιστον ένα νέο δοχείο αντιδραστηρίων στο αυτοματοποιημένο σύστημα φόρτωσης δοχείων του MINICAP
(εάν δεν υπάρχει δοχείο αντιδραστηρίων, θα εμφανιστεί ένα μήνυμα).
IV. ΠΛΗΡΩΣΗ ΤΩΝ ΠΕΡΙΕΚΤΩΝ ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΩΝ
Το Σύστημα MINICAP διαθέτει αυτόματο σύστημα ελέγχου αντιδραστηρίων.
ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Ανατρέξτε στις οδηγίες για την αντικατάσταση των περιεκτών αντιδραστηρίων σύμφωνα με τη χρωματική κωδικοποίηση για
τα φιαλίδια και τους συνδετήρες.
Όταν πρέπει να εκτελεστεί ένα από τα παρακάτω βήματα εμφανίζεται ένα μήνυμα:
• Τοποθετήστε ένα νέο φιαλίδιο ρυθμιστικού διαλύματος ή/και
• Γεμίστε τον περιέκτη με διάλυμα πλύσης εργασίας ή/και
• Γεμίστε τον περιέκτη με διηθημένο απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό για έκπλυση των τριχοειδών ή/και
• Αδειάστε τον περιέκτη αποβλήτων.
ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ: Μη χρησιμοποιείτε απιονισμένο νερό που διατίθεται ευρέως στην αγορά, όπως, για παράδειγμα, νερό για σιδέρωμα
(κίνδυνος ζημιάς σημαντικών τριχοειδών). Χρησιμοποιείτε μόνο υπερκάθαρο νερό, όπως νερό ειδικό για έγχυση.
ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Πριν από την πλήρωση του περιέκτη έκπλυσης, συνιστάται η πλύση του με άφθονο απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό.
ΔΙΑΒΑΣΤΕ ΠΡΟΣΕΚΤΙΚΑ ΤΟ ΕΓΧΕΙΡΙΔΙΟ ΧΡΗΣΗΣ ΤΟΥ ΣΥΣΤΗΜΑΤΟΣ MINICAP.
ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ
Ερμηνεία της ανάλυσης δειγμάτων ούρων
Απουσία μονοκλωνικού κλάσματος
• Ένα δείγμα ούρων με σπειραματική ή μικτή πρωτεϊνουρία και πολυκλωνικές ανοσοσφαιρίνες χαρακτηρίζεται από την απουσία
πολυκλωνικών ανοσοσφαιρινών στα πρότυπα αντιορών (εμφανίζεται ως μείωση των κλασμάτων γάμμα ή/και βήτα) χωρίς επιπτώσεις σε
άλλα κλάσματα πρωτεϊνών.
Παρουσία μονοκλωνικού κλάσματος
• Η παρουσία πλήρους μονοκλωνικής ανοσοσφαιρίνης χαρακτηρίζεται από την απουσία ενός κλάσματος που ανιχνεύεται με έναν από τους
αντιορούς έναντι βαρέων αλύσεων (γάμμα, άλφα ή μι) και με αντιορό έναντι ελαφρών αλύσεων κάππα ή λάμδα. Η ανιχνευόμενη
μονοκλωνική κορυφή, συνήθως οξεία και οριοθετημένη, πρέπει να βρίσκεται στην ίδια θέση μετακίνησης με το ύποπτο μονοκλωνικό
κλάσμα στο ίχνος αναφοράς (ίχνος ELP).
• Η απουσία αντίδρασης με οποιονδήποτε από τους αντιορούς έναντι βαρέων αλύσεων και η αντίδραση με κάποιον από τους αντιορούς
έναντι ελαφρών αλύσεων μπορεί να θεωρηθεί ένδειξη γαμμαπάθειας ελαφρών αλύσεων: επιβεβαιώστε την ένδειξη με αντιορούς έναντι
ελεύθερων ελαφρών αλύσεων κάππα ή λάμδα και τη διαδικασία του SEBIA HYDRAGEL BENCE JONES ή HYDRAGEL IF.
• Η απουσία θετικής αντίδρασης με οποιονδήποτε από τους αντιορούς έναντι ελαφρών αλύσεων και η αντίδραση με κάποιον από τους
αντιορούς έναντι βαρέων αλύσεων μπορεί να υποδηλώνει πολύ σπάνια γαμμαπάθεια βαρέων αλύσεων (γάμμα, άλφα ή μι).
Παρουσία δύο ή περισσότερων μονοκλωνικών κλασμάτων
• Οι πολυμερισμένες ανοσοσφαιρίνες χαρακτηρίζονται από την απουσία πολλών κλασμάτων ελαφρών αλύσεων του ιδίου τύπου.
Ειδικές περιπτώσεις:
• Εάν δεν παρατηρηθεί ολική απουσία του μονοκλωνικού κλάσματος στα πρότυπα αντιορών, επαναλάβετε τη διαδικασία με μεγαλύτερη
αραίωση του δείγματος ούρων. Επιλέξτε το πρόγραμμα αραίωσης «STANDARD» αντί για το πρόγραμμα «HYPOGAMMA» ή το πρόγραμμα
αραίωσης «HYPERGAMMA» αντί για το πρόγραμμα «STANDARD».
• Δείγματα με μονοκλωνικά κλάσματα με υψηλή συγκέντρωση ολικών ανοσοσφαιρινών (πρόγραμμα αραίωσης «HYPERGAMMA»):
Στην περίπτωση αυτή, το σύμπλεγμα αντιγόνου - αντισώματος είναι μεγάλο και στις ζώνες λευκωματίνης και άλφα 1 εμφανίζεται ένα
μεγάλο κλάσμα. Στα πρότυπα αντιορών ενδέχεται να μην παρατηρείται ολική απουσία των μονοκλωνικών κλασμάτων.
• Η παρουσία πλήρους ανοσοσφαιρίνης που συνδέεται με μια ελεύθερη ελαφριά άλυσο ενδέχεται να χαρακτηρίζεται από την απουσία δύο
κλασμάτων με έναν από τους αντιορούς έναντι ελαφρών αλύσεων και την απουσία ενός μόνου κλάσματος με τους αντιορούς έναντι
βαρέων αλύσεων.
• Συνιστάται η επιλογή του προγράμματος αραίωσης σύμφωνα με το μη φυσιολογικό κλάσμα προς χαρακτηρισμό, ώστε να βελτιωθεί η
ανίχνευση ενός μικρού κλάσματος ή ο ανοσοπροσδιορισμός ενός μεγάλου κλάσματος (βλ. παράγραφο «Προετοιμασία
ηλεκτροφορητικής ανάλυσης»).
Παρεμβολές και περιορισμοί
ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Η χρήση διαφορετικών αντιορών από τους ειδικούς αντιορούς για τη διαδικασία MINICAP IMMUNOTYPING URINE που
παρέχονται με το κιτ ενδέχεται να επηρεάσει τα αποτελέσματα. Χρησιμοποιείτε μόνο τους αντιορούς που είναι ειδικοί για τη διαδικασία
MINICAP IMMUNOTYPING URINE.
Βλέπε ΔΕΙΓΜΑΤΑ ΠΡΟΣ ΑΝΑΛΥΣΗ.
Αναλύετε μόνο δείγματα που έχουν προετοιμαστεί με συσκευές διαπίδυσης και συμπύκνωσης όπως τα συστήματα διαπίδυσης
CAPILLARYS ή άλλες αντίστοιχες συσκευές με την ίδια απόδοση, εγκεκριμένες για κλινικές αναλύσεις.
Σε περίπτωση ανεπαρκούς διαπίδυσης των δειγμάτων ενδέχεται να παρατηρηθούν μη πρωτεϊνικά υπολειμματικά κλάσματα. Εάν υπάρχει
υποψία ότι η διαδικασία επηρεάζεται αρνητικά από κάποιο κλάσμα, συνιστάται η εκ νέου διαπίδυση του δείγματος ούρων. Οι παρεμβολές,
για παράδειγμα, από φάρμακα ή άλατα εξαλείφονται κατά τη διάρκεια του σταδίου διαπίδυσης. Εάν το συγκεκριμένο στάδιο δεν τηρηθεί
πιστά, ενδέχεται να παρατηρηθούν πλασματικές κορυφές.
- 136 -
MINICAP IMMUNOTYPING - 2014/10
Η αιμοσφαιρίνη είναι γνωστό ότι μετακινείται ταυτόχρονα με την τρανσφερίνη (κλάσμα βήτα) όταν βρίσκεται σε δείγμα ούρων. Συνιστάται
η παρακολούθηση των χαρακτηριστικών των δειγμάτων ούρων μετά την πρώτη φυγοκέντρηση (π.χ. ενδείξεις ερυθρών αιμοσφαιρίων ή/και
αιμόλυσης στο δείγμα ούρων).
Πολλές μελέτες έχουν καταδείξει ότι η αντίδραση αντιγόνου–αντισώματος είναι διαφορετική στην υγρή φάση και τη φάση αγαρόζης.
Όταν η διαδικασία MINICAP IMMUNOTYPING URINE εκτελείται εξ ολοκλήρου σε υγρό μέσο, κάποιοι αντιοροί ενδέχεται να εμφανίσουν
ορισμένες φορές διασταυρούμενη αντίδραση με μονοκλωνικά κλάσματα που υπάρχουν στο δείγμα.
Δεν υπάρχει κίνδυνος ψευδών αρνητικών αποτελεσμάτων, όπως είναι η μη ανίχνευση γαμμαπάθειας, ωστόσο αυτή η διασταυρούμενη
αντίδραση, η οποία είναι ιδιαίτερα σπάνια, ενδέχεται να οδηγήσει στο συμπέρασμα για ύπαρξη δικλωνικής γαμμαπάθειας αντί για
μονοκλωνική γαμμαπάθεια. Σύμφωνα με τη βιβλιογραφία, η κλινική θεραπεία είναι ίδια τόσο για τη δικλωνική όσο και για τη μονοκλωνική
γαμμαπάθεια (Kyle et al, 1981).
Εάν το δικλωνικό πρότυπο δεν είναι σαφές, ενδέχεται να απαιτείται περαιτέρω εξέταση χρησιμοποιώντας τα κιτ ανοσοκαθήλωσης
HYDRAGEL.
Ενδέχεται να παρατηρηθούν μικρές αλλαγές μεταξύ του προτύπου ELP και των υπερκείμενων προτύπων αντιορών (ιδιαίτερα στη ζώνη
βήτα 1). Οι αποκλίσεις αυτές δεν πρέπει να θεωρείται ότι οφείλονται στην απουσία μονοκλωνικού κλάσματος σε ένα ή περισσότερα
πρότυπα αντιορών.
Λόγω των ορίων διακριτικής ικανότητας και ευαισθησίας της ηλεκτροφόρησης ζώνης, είναι πιθανό κάποια μονοκλωνικά στοιχεία να μην
ανιχνεύονται με αυτήν τη μέθοδο.
Όπως ισχύει για κάθε ηλεκτροφορητική μέθοδο, μικρές μονοκλωνικές πρωτεΐνες ενδέχεται να είναι δυσδιάκριτες. Εάν υπάρχει υποψία
για μικρά μονοκλωνικά κλάσματα, ενδέχεται να απαιτείται περαιτέρω εξέταση χρησιμοποιώντας τα κιτ ανοσοκαθήλωσης SEBIA
HYDRAGEL.
Αντιμετώπιση Προβλημάτων
Εάν δεν είναι δυνατή η διεξαγωγή της εξέτασης, ακόμη και εάν έχετε ακολουθήσει προσεκτικά τις οδηγίες για την προετοιμασία και τη
φύλαξη των υλικών καθώς και για την εκτέλεση της διαδικασίας, επικοινωνήστε με το τεχνικό τμήμα της SEBIA του προμηθευτή.
Φύλλα Δεδομένων Ασφαλείας για τα αντιδραστήρια και πληροφορίες για την ασφαλή απόρριψη των αποβλήτων διατίθενται από την
Τεχνική Υπηρεσία του προμηθευτή.
ΔΕΔΟΜΕΝΑ ΑΠΟΔΟΣΗΣ
Μελέτη συμφωνίας
Διεξήχθη μελέτη συμφωνίας για χαρακτηρισμό παραπρωτεϊνών και ελεύθερων ελαφρών αλύσεων σε 39 διαφορετικά παθολογικά δείγματα
ούρων (με παραπρωτεΐνες ή ελαφρές ελεύθερες αλύσους κάππα ή λάμδα), σε 2 δείγματα με πολυκλωνικό πρότυπο και σε 5 φυσιολογικά
δείγματα, μεταξύ της διαδικασίας MINICAP IMMUNOTYPING URINE και ενός συστήματος τριχοειδούς ηλεκτροφόρησης για
ανοσοπροσδιορισμό του εμπορίου: Και τα 46 δείγματα υποβλήθηκαν σε ανάλυση και με τις δύο τεχνικές.
Η μελέτη αυτή κατέδειξε συμφωνία 100% μεταξύ των 2 τεχνικών:
Για τα 5 φυσιολογικά δείγματα ορού: πλήρης συμφωνία.
Για τα 2 δείγματα ούρων με πολυκλωνικό πρότυπο: πλήρης συμφωνία.
Για τα 39 παθολογικά δείγματα ούρων: πλήρης συμφωνία.
Στα παθολογικά δείγματα ούρων που υποβλήθηκαν σε ανάλυση παρατηρήθηκε συμφωνία στα αποτελέσματα που προέκυψαν με κάθε
διαδικασία και σε όλα τα παθολογικά δείγματα ανιχνεύτηκαν οι ίδιες ζώνες με κάθε σύστημα.
- 137 -
MINICAP IMMUNOTYPING - 2014/10
BIBLIOGRAPHIE / BIBLIOGRAPHY
1. Cameron JS. 1987. The nephrotic syndrome. Am. J. Kidney Dis, 10 : 157-171.
2. Chopin N. 1991. Étude de la protéinurie. Inf. Tech. Biol., 1 : 23-28.
3. Clark R et al. Rapid capillary electrophoretic analysis of human serum proteins : qualitative comparison with high-throughput agarose gel
electrophoresis. J. Chromatogr. A, 744, 205 - 213 (1996).
4. Gay-Bellile C, Bengoufa D, Houze P, Le Carrer D, Benlakehal M, Bousquet B, Gourmel B, Le Bricon T. Automated multicapillary electrophoresis
for analysis of human serum proteins. Clin. Chem., 49, 1909 - 1915 (2003).
5. Henskens Y et al. Detection and identification of monoclonal gammopathies by capillary electrophoresis. Clin. Chem., 44, 1184 - 1190 (1998).
6. Jellum E et al. Journal of Chromatography Biomedical Applications : Diagnostic applications of chromatography and capillary electrophoresis. J.
Chromatogr. B, 689, 155 - 164 (1997).
7. Jenkins MA and Guerin MD. Journal of Chromatography Biomedical Applications : Capillary electophoresis procedures for serum protein analysis :
comparison with established techniques. J. Chromatogr. B, 699, 257 - 268 (1997).
8. Joachim GR, Cameron JS, Chwartz M, Belker EL. 1964. Selectivity of protein excretion in patients with the nephrotic syndrome. J. Clin. Invest.,
43, 2332-2346.
9. Katzmann JA et al. Identification of monoclonal proteins in serum : A quantitative comparison of acetate, agarose gel, and capillary electrophoresis.
Electrophoresis, 18, 1775 - 1780 (1997).
10. Keren DF. Detection and characterization of monoclonal components in serum and urine. Clin. Chem., 44, 6, 1143 – 1145 (1998).
11. Kyle RA, Robinson RA, Katzmann JA. The clinical aspects of biclonal gammopathies. Review of 57 cases. Am. J. Med., 71, 6, 999 - 1008 (1981).
12. Landers JP. Clinical Capillary Electrophoresis. Clin. Chem., 41, 495 - 509 (1995).
13. Le Bricon T. 2002. Identification et dosage des proteines urinaires au laboratoire d’analyses. Ann. Biol. Clin., 60 : 525-540.
14. Le Carrer D. 1990. Protéinuries : Mise au point sur leur exploration biologique en 1990. L’Eurobiologiste, 190 : 395-405.
15. Le Carrer D, Nicolas A, Ducasse L. 1992. L’analyse des protéinuries au laboratoire de biologie en 1992. Revue française des laboratoires, 225 :
41-47.
16. Le Carrer D, Chopin N. 1994. Profil protéique urinaire : Proposition d’un protocole d’exploration biologique des protéinuries. Revue française des
laboratoires, 269 : 29-37.
17. Philipon C. 1989. Protéines urinaires : Intérêt clinique et interprétation. Technique et Biologie, 6 : 239-249.
18. Oda RP et al. Capillary electrophoresis as a clinical tool for the analysis of protein in serum and other body fluids. Electrophoresis, 18, 1715 - 1723
(1997).
19. Waller KV, Ward KM, Mahan JD, Wismatt DK. 1989. Current concepts in proteinuria. Clin. Chem., 35 : 755-765.
20. Westermeier R., "Electrophoresis in Practice. A Guide to Theory and Practice", VCH Publishers, New York, NY, 1993.
21. Wendling A. Procédures de diagnostic ou de dépistage : Justification et validité d’un test de diagnostic ou de dépistage-sensibilité-spécificité.
Impact-Internat, 1986 ; Sept : 93 - 97.
- 359 -
MINICAP IMMUNOTYPING - 2014/10
PHOTO
INSERTION dU SUPPORT SUR LE CARROUSEL - INSERTION Of THE RACk IN THE ROTATING SAMPLER
- 360 -
MINICAP IMMUNOTYPING - 2014/10
SCHÉMAS / fIGURES
PROfILS ÉLECTROPHORÉTIQUES dE SÉRUMS - ELECTROPHORETIC PATTERNS Of SERUM SAMPLES
Sérum Normal / Normal serum
figure 1
ELP
Ig G
Ig A
Ig M
L
K
- 361 -
MINICAP IMMUNOTYPING - 2014/10
SCHÉMAS / fIGURES
PROfILS ÉLECTROPHORÉTIQUES dE SÉRUMS - ELECTROPHORETIC PATTERNS Of SERUM SAMPLES
Sérum Hypergamma / Hypergamma serum
figure 2
Immun complexe
Immune complex
ELP
Ig G
Ig A
Ig M
Immun complexe
Immune complex
Immun complexe
Immune complex
K
L
- 362 -
MINICAP IMMUNOTYPING - 2014/10
SCHÉMAS / fIGURES
PROfILS ÉLECTROPHORÉTIQUES dE SÉRUMS - ELECTROPHORETIC PATTERNS Of SERUM SAMPLES
figure 3
Protéine monoclonale 0,5 g/L / Monoclonal component 0.5 g/L
Paraprotéine éliminée / Decreased paraprotein
Paraprotéine non affectée / Not affected paraprotein
Ig G
ELP
Ig A
Ig M
K
L
Interpretation : Ig G, Lambda
- 363 -
MINICAP IMMUNOTYPING - 2014/10
SCHÉMAS / fIGURES
PROfILS ÉLECTROPHORÉTIQUES dE SÉRUMS - ELECTROPHORETIC PATTERNS Of SERUM SAMPLES
figure 4
Ig G, kappa - mode de dilution Hypergamma / Hypergamma dilution program
Paraprotéine éliminée / Decreased paraprotein
Paraprotéine non affectée / Not affected paraprotein
ELP
Ig G
Ig A
Ig M
K
L
Interpretation : Ig G, kappa
- 364 -
MINICAP IMMUNOTYPING - 2014/10
SCHÉMAS / fIGURES
PROfILS ÉLECTROPHORÉTIQUES dE SÉRUMS - ELECTROPHORETIC PATTERNS Of SERUM SAMPLES
figure 5
Profil biclonal / Biclonal pattern : Ig G, kappa + Ig M, kappa
Paraprotéine éliminée / Decreased paraprotein
Paraprotéine non affectée / Not affected paraprotein
ELP
Ig G
Ig A
Ig M
K
L
Interpretation : Ig G, kappa + Ig M, kappa
- 365 -
MINICAP IMMUNOTYPING - 2014/10
SCHÉMAS / fIGURES
PROfILS ÉLECTROPHORÉTIQUES dE SÉRUMS - ELECTROPHORETIC PATTERNS Of SERUM SAMPLES
figure 6
Profil biclonal / Biclonal pattern : Ig G, kappa + Ig G, Lambda
Paraprotéine éliminée / Decreased paraprotein
Paraprotéine non affectée / Not affected paraprotein
ELP
Ig G
Ig A
Ig M
K
L
Interpretation : Ig G, kappa + Ig G, Lambda
- 366 -
MINICAP IMMUNOTYPING - 2014/10
SCHÉMAS / fIGURES
PROfILS ÉLECTROPHORÉTIQUES dE SÉRUMS - ELECTROPHORETIC PATTERNS Of SERUM SAMPLES
Profil oligoclonal / Oligoclonal pattern
figure 7
ELP
Ig G
Ig A
Ig M
K
L
- 367 -
MINICAP IMMUNOTYPING - 2014/10
SCHÉMAS / fIGURES
PROfILS ÉLECTROPHORÉTIQUES d'URINES - ELECTROPHORETIC PATTERNS Of URINE SAMPLES
figure 8
Proteine monoclonale / Monoclonal component – mode de dilution Hypogamma / Hypogamma dilution program
Albumin(e)
Paraprotéine éliminée / Decreased paraprotein
Paraprotéine non affectée / Not affected paraprotein
Alpha 1
Alpha 2
Beta
Albumin(e)
Gamma
Alpha 1
Alpha 1
Alpha 2
Beta
Albumin(e)
Gamma
Alpha 1
Alpha 1
Alpha 2
K
Interpretation :
Gamma
Alpha 2
Beta
Gamma
Beta
Gamma
Ig M
Ig A
Albumin(e)
Beta
Ig G
ELP
Albumin(e)
Alpha 2
Beta
Albumin(e)
Gamma
Alpha 1
Alpha 2
L
Suspicion de chaîne légère libre kappa (à confirmer)
kappa free light chain suspected (to confirm)
- 368 -
MINICAP IMMUNOTYPING - 2014/10
SCHÉMAS / fIGURES
PROfILS ÉLECTROPHORÉTIQUES d'URINES - ELECTROPHORETIC PATTERNS Of URINE SAMPLES
figure 9
Proteine monoclonale / Monoclonal component – mode de dilution Hypergamma / Hypergamma dilution program
Albumin(e)
Paraprotéine éliminée / Decreased paraprotein
Paraprotéine non affectée / Not affected paraprotein
Alpha 1
Alpha 2
Beta
Albumin(e)
Gamma
Alpha 1
Alpha 1
Alpha 2
Beta
Albumin(e)
Gamma
Alpha 1
Alpha 1
Alpha 2
K
Interpretation :
Gamma
Alpha 2
Beta
Gamma
Beta
Gamma
Ig M
Ig A
Albumin(e)
Beta
Ig G
ELP
Albumin(e)
Alpha 2
Beta
Gamma
Albumin(e)
Alpha 1
Alpha 2
L
Suspicion de chaîne légère libre Lambda (à confirmer)
Lambda free light chain suspected (to confirm)
- 369 -
MINICAP IMMUNOTYPING - 2014/10
SCHÉMAS / fIGURES
PROfILS ÉLECTROPHORÉTIQUES d'URINES - ELECTROPHORETIC PATTERNS Of URINE SAMPLES
Profil biclonal / Biclonal pattern – mode de dilution Hypogamma / Hypogamma dilution program
figure 10
Paraprotéine éliminée / Decreased paraprotein
Paraprotéine non affectée / Not affected paraprotein
Albumin(e)
Alpha 1
Alpha 2
Beta
Albumin(e)
Gamma
Alpha 1
Alpha 1
Alpha 2
Beta
Albumin(e)
Gamma
Alpha 1
Alpha 1
Alpha 2
Gamma
Alpha 2
Beta
Gamma
Beta
Gamma
Ig M
Ig A
Albumin(e)
Beta
Ig G
ELP
Albumin(e)
Alpha 2
Beta
Albumin(e)
Gamma
K
Alpha 1
Alpha 2
L
Interpretation : Ig G, Lambda + suspicion de chaîne légère libre Lambda (à confirmer)
Ig G, Lambda + Lambda free light chain suspected (to confirm)
- 370 -

πλασματοκυτταρικες δυσκρασιες

MINICAP PROTEIN(E) 6

Chlamydia pneumoniae-IgG-sELISA medac Ελληνικά 0123

Βασικές αρχές Ιατρικής Μικροβιολογίας Γενικές αρχές εργαστηριακής δ

ΚΕΦ. 7 - learning biology

Πρόγραμμα Συνεδρίου

Chlamydia IgA SeroFIA

Ακαδημαϊκό Έτος 2014-15 - Laboratory of Steam Boilers and

Διαλέξεις Κινητικής

ΑΔΑ: ΒΟΝ3Θ-Ο2Σ

(*.pdf) cv - Department of Marine Sciences

MINICAP HEMOGLOBIN(E) MINICAP FLEX-PIERCING

CRV 1600 - Kaoussis

Όλα όσα θα θέλατε να μάθετε για την Αντί