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Sistema per la
ricerca di Virus
Respiratori in
campioni biologici
(espettorato, tamponi, BAL)
Il Kit ProDect® CHIP RV fornisce un
grandissimo contributo nello studio
delle sindromi respiratorie acute,
permettendo la rivelazione
contemporanea di molteplici
patogeni respiratori virali.
Il sistema comprende: reattivi di
amplificazione (-20°C), reattivi di
rivelazione (+4°C).
Materiale necessario non fornito:
sistema di estrazione dell’acido
nucleico (ProDect VIRAL NUCLEIC
ACID EXTRACTION o sistemi tipo
Roche), enzimi per la
retrotrascrizione.
Le sindromi respiratorie acute
hanno quadri anatomo-clinici
simili che possono avere
eziologia assai differente.
E’ indispensabile una duplice
diagnosi: clinica-strumentale, volta
a definire la localizzazione e la
tipologia del processo
infiammatorio ed eziologica, con
l’identificazione certa dell’agente
causale.
Numerosi protocolli e linee guida
per la diagnosi e la terapia delle
sindromi respiratorie acute sono
stati proposti (British Thoracic
Society, American Thoracic
Society etc.): nessun insieme di
standards può efficacemente
adattarsi alla moltitudine di
variabili che determinano e
condizionano un buon giudizio
clinico.
Il sistema consente di rivelare
l’eventuale presenza di uno o piu’
dei seguenti patogeni:
•ADENOVIRUS (ADV)
•INFLUENZA A (IA), INFLUENZA B (IB)
•PARAINFLUENZA1 (P1),
PARAINFLUENZA2 (P2),
PARAINFLUENZA3 (P3)
•VIRUS RESPIRATORIO SINCIZIALE (RSV)
•METAPNEUMOVIRUS (HMPV)
•INFLUENZA A H1N1
•INFLUENZA AVIARIA (AV H5N1)
SGQ 07/2009-03
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ESTRAZIONE
DELL’ACIDO NUCLEICO
DURATION:
TEMPO DI
ESECUZIONE:
4,5 HOURS
4,5 ORE
RETROTRASCRIZIONE
E PCR MULTIPLEX
ANALISI DEI
RISULTATI
JANUS AUTOMATED WORKSTATION
MICROPIASTRA 96 CHIP
IBRIDAZIONE
Strep/AP
Sonda
specifica
RIVELAZIONE COLORIMETRICA
LETTURA
Il sistema prevede l’utilizzo di chip sui quali sono state preventivamente immobilizzate le sonde specifiche per
i patogeni in oggetto. L’acido nucleico estratto dal campione è quindi sottoposto a retrotrascrizione ed
amplificazione genica tramite RT-PCR Multiplex. I primers utilizzati sono marcati con Biotina e di
conseguenza anche gli amplificati che ne derivano. Questi, denaturati, sono fatti quindi ibridare su chip (1 h di
incubazione a temperatura ed agitazione controllata). Segue il lavaggio e l’aggiunta di una soluzione
contenente Streptavidina coniugata con fosfatasi alcalina (AP) (30 minuti di incubazione a RT). Dopo un
ulteriore lavaggio, l’aggiunta del cromogeno/substrato (NBT-BCIP; 15’ minuti di incubazione a RT al buio),
media la reazione colorimetrica alla base della rivelazione. La presenza della sequenza bersaglio è evidenziata
dalla formazione di un precipitato di colore bruno in corrispondenza della relativa sonda: ogni differente
positivo da vita a patterns specifici. Il sistema rileva mediamente sino a 12.5 pg/l delle sequenze bersaglio
per ciascun tipo.
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