ESEMPIO DI ESERCIZI DI ESAME! ! 1. Volete generare un ceppo di lievito che contenga il pathway completo per la sintesi del beta carotene, in modo da poterne studiare facilmente le caratteristiche biochimiche.! Partite da un ceppo di S. cerevisiae che contiene già 5 dei 7 enzimi necessari. Dovete però aggiungere il gene crt1 e il gene psy.! ! a. (4 punti) per che cosa codificano i geni crt1 e psy, e da quali organismi li prendereste?! gene codifica per…. viene da….. crt1 psy ! ! b. Decidete di amplificare il gene psy dal cDNA aggiungendo anche i siti di restrizione EcoRI e XhoI. L’amplificato verrà quindi digerito e clonato nel vettore per la trasformazione in lievito pEG202 (mappa nella pagina seguente). La sequenza di DNA del gene psy è indicata qui sotto. Sono evidenziati l’ATG e lo stop.! ! ! 5’-ATGGTGGTTGCTATATTACGA——————-GATCGAGCCTCTCGAAAGCGTAA-3’! 3’-TACCACCAACGATATAATGCT——————-CTAGCTCGGAGAGCTTTCGCATT -5’! ! ! Scrivete sotto le sequenze dei primers che intendete usare.! Indicate anche la temperatura di melting, la temperatura di annealing a cui effettuereste la PCR e il numero indicativo dei cicli. ! ! ! FWD 5‘_______________________________________________________3’ ! ! REV 5‘_______________________________________________________3‘ ! ! T ____°C! ! ! ! numero cicli_______! ! ! anneling c. Descrivete a cosa servono: il gene HIS3 il gene Amp RE pBR322 ori ADH prom. ! ! ! ! ! Tmelting ____°C! Tmelting ____°C! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! GAA TTC CCG GGG ATC CGT CGA CCA TGG CGG CCG CTC GAG TCG ECORI BAMHI NOTI ! ! mappa del vettore pEG202! ! ! ! d. Quali promotori sono stati utilizzati per esprimere in modo costitutivo il gene psy nel golden rice di I e II generazione? (5 righe max)! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! 2. Che cos’e’ una nucleasi Zinc Finger? (5 righe max)! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! 3. Quali di queste tecniche rientra in quelle che secondo la normativa vigente portano alla produzione di OGM (barrare con una crocetta)! mutagenesi tecniche di fusione cellulare fecondazione in vitro microniezione ! ! !
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