より早く、より確実な医薬品バイオアナリシスを実現するサンプル前処理ソリューション⽇本ウォタズ株式会社⽇本ウォーターズ株式会社 1 ©2014 Nihon Waters K.K. Oasis 固相ケミストリー固相ケミストリー:: 2 ©2014 Nihon Waters K.K. 1 Oasis HLB: 固相ケミストリー Hydrophilic-Lipophilic Balanced Copolymer 表面積：810m2/g N O 平均ポアサイズ 8 平均ポアサイズ：8nm[80Å] [80Å] 総ポア体積：1.3cm3/g 親⽔性モノマー親油性モノマー極性保持能逆相保持能平均粒子直径：30μm 微粒子(<10μm)％：0.1% ピロリドン：20% 架橋度：>30%  幅広い化合物に⾼い保持能と回収率を有する  極性化合物も保持  固相が乾燥しても回収率に影響が無い  通常のシリカゲルベースC18固相と⽐べて3-10倍⾼いキャパシティ  シラノール活性無し  pH 1-14で使⽤可能  タンパク質等の⾼分⼦化合物を素通りで除去可能 3 ©2014 Nihon Waters K.K. Oasis HLB: 湿潤性の効果 C18 100 60 40 40 20 20 0 Drying Time 4 (minutes) 8 • • • • (1cc/30mg) 80 60 0 HLB 100 Acetaminophen (Polar) 80 % SPE Recovery (1cc/100mg) 0 Procainamide Ranitidine Acetaminophen (polar) Propranolol Doxepin 0 Drying Time 5 (minutes) 10 メタノールでコンディショニングメタノルでコンディショニング精製⽔で平衡化吸引により乾燥サンプルロード⼀般の逆相固相は乾燥した状態ではdewettingにより⽔系サンプルが固相に浸透せずブレークスルーにより回収率が低下する Oasisは乾燥の影響無し Bouvier, Caparella ©2014 Nihon Waters K.K. 2 4 より早く、より確実な医薬品バイオアナリシスのためのサンプル前処理ソリューション Oasis μElution プレート  25 µL で脱離を可能にするSPEプレート — 1:1希釈の場合、希釈前のサンプル容量として最⼤ 375 µL までロまでロード可能ド可能 o 各wellの容量：750 µL — 脱離容量はわずか 25 µL — 感度向上: 最⼤ 15x  エバポレート不要→ハイスループットかつ⾼感度 — ⽣体試料分析のための⾼感度で⾼選択性SPE 1⼈1⽇8枚処理可能シリンジタイプは1⼈1⽇ → 96 x 8=768 sample 処理可能 → 100 sample が限界約8倍効率アップ！ 5 ©2014 Nihon Waters K.K. スループットを更に加速! スループットを更に加速! Oasis HLB μElution μElutionプレートプレートSimplified Simplified プロトコール Simplifiedプロトコール 1⼈1⽇8枚処理可能 1⼈1⽇13枚処理可能〜更に効率UP! 標準プロトコール Simplifiedプロトコールサンプルスループット • 200µL メタノール Condition 標準プロトコール • 200µL 精製⽔ Time Equilibrate • 200µL 希釈⾎漿 (100µL ⾎漿+100µL 4% リン酸⽔溶液) • 200µL 希釈⾎漿 (100µL ⾎漿+100µL 4% リン酸⽔溶液) Load • 200µL 200 L 5% メタノール⽔メタノル⽔ • 200µL 200 L 5% メタノール⽔メタノル⽔ Wash • 25µL x2回メタノール • 25µL x2回メタノール Elute  ダイレクトインジェクション  添加回収試験の回収率、変動、マトリックスファクターと清浄度を検証 6 ©2014 Nihon Waters K.K. 3 Oasis HLB μElution μElutionプレートプレートSimplified Simplified プロトコール検証に使⽤した医薬品 Name 1B Azidothymidine (AZT) pKa Log P Comments 9.68 0.05 Antiretroviral drug for HIV/AIDS 2B 7-Hydroxycoumarin 7.8 1.6 Gradient in sunscreen, absorb UV 3A Phenacetin 2.2 1.6 Pain, fever reducer -- 1.1 Anti-inflammatory and immunosuppressive 4N Betamethasone 5B Protriptyline 8.2 4.4 Antidepressant 6A Alprazolam 2.4 4.9 Panic and anxiety disorders 7B Amitriptyline 9.7 4.8 Antidepressant 8A N Naproxen 42 4.2 32 3.2 P i ffever reducer Pain, d 9B Propranolol 9.5 2.5 Hypertension  異なる疾病⽤の医薬品をカバー  幅広いpKa と Log P 7 ©2014 Nihon Waters K.K. 添加⾎漿回収率結果標準 vs. Simplified プロトコール回収率標準プロトコール Simplified プロトコール 120 100 80 60 40 20 0 AZT Propra 7HC Phen Protrip Amitrip BetaMeth Alpraz  回収率計算 Recovery  100  (  各分析種のMSピーク⾯積値から右式で計算  標準プロトコールと同等の回収率と変動 Naprox AVG 添加回収試料の面積値 ) 後添加標準試料の面積値  平均回収率90% 以上、相対標準偏差(RSD)5%以下 8 ©2014 Nihon Waters K.K. 4 マトリックスファクター(MF) マトリックスファクター(MF) 標準 vs. Simplified プロトコール MF 標準プロトコール Simplified プロトコール 1.40 1.20 1.00 - 0.80 Procain N acety AZT Propra 7HC Phen Protrip Amitrip BetaMeth Alpraz Naprox 0.60 Response in R i matrix ti * Response in blank 1= マトリックス効果無; >1= イオンエンハンスメント; <1= イオンサプレッション  マトリックスファクター計算法 MF   同等のMF  Simplifiedプロトコールで1.00±0.15 のMF *Guideline in bioanalytical method validation from European Medicines Agency 2012 厚⽣労働省薬⾷審査発0711 第1号医薬品開発における⽣体試料中薬物濃度分析法のバリデーションに関するガイドライン 9 ©2014 Nihon Waters K.K. Oasis HLB μElution μElutionプレートプレートメタノール抽出液MS メタノール抽出液 MSバックグラウンド試験バックグラウンド試験 R f Reference: メタノルメタノールバックグラウンドの上昇無し Simplified プロトコール標準プロトコール  ESI+ MS scan 50-650  同等のMSスキャン結果（Xevo TQ-S使⽤） 10 ©2014 Nihon Waters K.K. 5