Life Science Group Research. Together. Bio-Rad News Vol.3 2013年5月 Contents ■ デジタルPCRのアプリケーション : 次世代シーケンサーのライブラリ定量 ■ 新製品 NEW : ddPCRライブラリ定量キット for Illumina TruSeq ■ 新製品 : S3TMセルソーター NEW ■ NEW Bio-Plex関連試薬に新たなラインアップが追加! 早期に腎毒性 /障害関連バイオマーカーの同時測定を可能にするBio-Plex Pro RBM腎毒性アッセイキット ■ 定量性の高いウェスタンブロッティングデータを得るための新しいワークフロー ■ 精製したタンパク質にタグが残っていても、本当にいいですか? アフィニティー精製でありながら完全タグフリータンパク質の精製が可能です ■ 次世代クロマトグラフィー NEW NGC 発売開始! ■ バイオ･ラッドからのお知らせ デジタルPCRのアプリケーション : 次世代シーケンサーのライブラリ定量 デジタルPCRのワークフロー 今回ご紹介するアプリケーション デジタルPCRは、断片化されたサンプルDNAを微小区画に分散させるこ QX100はスループットの高い絶対定量を行うことができるため、特に多 とにより、非常に高感度・高精度な定量を実現することができます。 （原理 サンプルの次世代シーケンサーライブラリ定量に高い適性を有します。次 については、Bio-Rad News vol.1およびvol.2をご参照ください） ページ以降、 このアプリケーションについてご紹介します。 Bio-RadのQX100TM Droplet DigitalTM PCRシステムでは、 0. サンプル調製（TaqManケミストリーと同様） 1. QX100 Droplet Generatorを用いて、各サンプルにつき約2万個の 0 サンプル調製 1 ドロップレット作製 Droplet Generator 2 PCR Thermal Cycler 3 ドロップレット蛍光測定* Droplet Reader 4 データ分析 Software ドロップレットを作製 2. PCRにより、ドロップレット内のターゲット遺伝子を増幅 3. QX100 Droplet Readerを用いて、各ドロップレットの蛍光を測定 4. ddPCRソフトウェアを用いて、ポジティブ/ネガティブのドロップレット 数を測定し、サンプルの濃度を算出 という流れで実験を行います。 QX100は1回のワークフローで最大96サンプル、約140万個の微小区画 を測定できるため、 スループットの高い実験を行うことができます。 また、サンプルDNA断片を含む/含まない、ポジティブ/ネガティブの微小 区画数を直接カウントすることにより絶対定量を行うため、従来のリアル タイムPCRのように検量線を作成する必要がありません。 *TaqManケミストリーを使用 図1 QX100 Droplet Digital PCRシステム ワークフロー 次世代シーケンサーのライブラリ定量 さらに、 QX100 Droplet Digital PCRシステムは、各ウェル約2万個の微 次世代シーケンサーは、非常に高いスループットで配列を読むことができ 小区画を含む、96ウェル分のサンプル濃度を1回の実験で決定することが るため、ゲノム解析/トランスクリプトーム解析/エピゲノム解析等の標準的 できるため（図4）、高いスループットでライブラリ定量を行うことができま な手法として広く普及してきています。 す。 これに対し、従来のリアルタイムPCRを用いる手法では、検量線作成 次世代シーケンサーを用いた実験で良好な結果を得るためには、 ライブラ 用のコントロールやリプリケートに多くのウェルを消費するため、1回の実 リ調製を注意深く行う必要があります。現在のライブラリ調製の手法にお 験で数サンプルしか測定できません。 いては、DNA断片化後の純度チェック、PCR増幅後のライブラリ定量等、各 ステップにおいてQC（Quality Check）が行われています（図2）。 DNA fragmentation DNA断片化 Quality Check DNA純度チェック End repair 96ウェルを測定 dA-tailing 1ウェル当り約2万個の 微小区画 アダプター付加 Ligation Size Selection サイズセレクション 図4 Droplet （PCR amplification） （PCR増幅） Quality Check ライブラリ定量 Readerを用いた測定の様子 左丸は測定時の俯瞰図、右丸は1ウェル分の拡大図。 以上のように、高いスループットで絶対定量を行うことができるQX100を 用いることにより、多サンプルのライブラリ定量を従来法よりも簡便に行う 図2 次世代シーケンサーのライブラリ調製方法 ことができます。 四角で囲ったステップは、QCに該当するステップ。 ライブラリ調製を行った後、フローセル上での Bridge PCR（ Illumina 2013年3月に行われた第7回日本ゲノム微生物学会のランチョンセミナー 社 HiSeq/MiSeq 等）もしくは、ビーズ上でのエマルション PCR（ Life において、沖縄科学技術大学院大学の藤江学先生に、実際に多数の生物 Technologies社 SOLiD、Roche Applied Science社 454シークエ のライブラリを一度に解析された例をご発表いただきました（図5）。 ンシングシステム等）を行いますが、フローセル上もしくはビーズ上での DNA断片をPCR増幅に最適な濃度にするためには、ライブラリ定量が非 常に重要なステップとなります。現在のライブラリ定量における標準的な 手法は、 リアルタイムPCRを用いた定量結果を、Bioanalyzer（Agilent） を用いて測定した平均ライブラリサイズにより補正する、という方法で す。QX100 Droplet Digital PCRシステムは、 このライブラリ定量に非常 に高い適性を有します。 QX100を用いたライブラリ定量のメリット index19 index19 index19 index22 index23 index24 index10 index11 index12 index13 index14 index15 index16 index17 index18 index01 index02 index03 index04 index05 index06 index07 index08 index09 まず、絶対定量を行うデジタルPCRは検量線を作成する必要がないため （図 3）、ライブラリ定量においてBioanalyzerを用いた平均ライブラリサ イズの測定を行う必要がなく、実験の手間およびコストを削減することが できます。 デジタル PCR リアルタイム PCR 30 図5 QX100を用いて24ライブラリを定量した後、各ライブラリを HiSeq2000(Illumina)でマルチプレックスシーケンシングした際のリード数の割合 沖縄科学技術大学院大学(OIST) DNAシーケンシングセクション(SQC) 藤江学先生ご提供。 — SYBR® Green: E = 98.7% Cq 25 20 まとめ 15 1 2 3 4 5 ログ開始量 6 ポジティブな微小区画数を直接カウントし、 サンプル中のターゲット遺伝子濃度を算出 検量線から相対的な ターゲット遺伝子濃度を算出 図3 リアルタイムPCRとデジタルPCRの比較 2 Bio-Rad News ・次世代シーケンサーを用いた実験で良好な結果を得るためには、ライ ブラリの定量を正確に行うことが重要です。 ・高いスループットで絶対定量を行うQX100を用いてライブラリ定量を 検量線作成の必要なし 行うことにより、多サンプルのライブラリ定量を従来法よりも簡便に行う ことが可能となります。 NEW 新製品 : ddPCRライブラリ定量キット for Illumina TruSeq Bio-RadのQX100TM Droplet DigitalTM PCRシステムは、高いスループッ ①（図 2 赤丸内）のプロットは、アダプターが DNA 断片の両端に正常に付 トでサンプルの絶対定量を行うことができるため、次世代シーケンサーの多 加された質の良いライブラリを示しています。また、②（緑丸内）および③ （水色丸）のプロットは、それぞれアダプター/アダプターのライゲーション サンプルのライブラリ定量に高い適性があります。 この度、Illumina社製次世代シーケンサーのライブラリ調製法として広く使 産物や、付加したアダプターの数が多い/少ない産物を表しています。④は 用されている、TruSeq DNAサンプル調製キットにより調製したライブラ ネガティブなドロップレットを示します。 アダプターが正常に付加されたド リの定量用として、 「ddPCRライブラリ定量キット for Illumina TruSeq」 ロップレットの数とトータルのドロップレットの数より、ライブラリ濃度を を新発売いたしました。 絶対定量します。 TruSeq DNAサンプル調製キットのアダプターには、フローセルとのハ 当キットを用いて、12 個の RNA Seqライブラリに関してシーケンシング イブリダイゼーションを行うための P5 配列および P7 配列が共通して含 を行い、各ライブラリのリード数を比較した結果を図3に示します。12ライ まれています。また、シーケンスプライマーとのハイブリダイゼーションを ブラリ全体のリード数に対して、各々のライブラリのリード数の割合の期 行うRd1 SP配列とRd2 SP配列も共通して含まれています。Bio-Rad 待値が 8.3%となる測定において、すべてのライブラリの値が期待値に近 の ddPCRライブラリ定量キット for Illumina TruSeqは、P5 配列・P7 く、ばらつきの少ない測定を実施できました。 配列に対応したプライマーおよび Rd1 SP 配列・Rd2 SP 配列に対応し ブにはindex配列は含まれないため、TruSeq DNA LT Sample Prep KitとTruSeq DNA HT Sample Prep Kitの両方に対して使用すること ができます。 Probe2 F 5 P5 Rd1 SP DNA Insert Rd2 SP Index P7 5 Probe1 R 図1 ddPCRライブラリ定量キット for のデザイン % Reads Identified （Passing Filter） たプローブを用いることにより、TruSeqで調製したライブラリの絶対定量 を行うことができます。弊社キットに用いているプライマーおよびプロー 12 10 8.3% Expected 8 6 4 2 0 Illumina TruSeqのプライマー、プローブ 0 プライマー（青矢印）：ForwardプライマーはアダプターのP5配列に、Reverseプライマーはアダプ ターのP7配列に対応している プローブ：Probe1はRd1 SP配列に、Probe2はRd2 SP配列に対応する配列を含む 2 4 6 図3 当キットを用いて12個のRNA 結果 当キットを用いた測定結果の例を図2に示します。 8 10 12 14 Index Number Seqライブラリに関してシーケンシングを行った 下 記 のRNA初 期 濃 度を有 する12個 のライブラリを用 いてシーケンシングを行った。Average fragment length : 280bp ライブラリ1~3 : 4,000ng RNA, ライブラリ4~6 : 1,000ng RNA、ライブラリ7~9 : 100ng RNA、ライブ ラリ10~12 : 10ng RNA まとめ ・ QX100は高いスループットでサンプルの絶対定量を行うことができる ため、次世代シーケンサーの多サンプルのライブラリ定量に高い適性 があります。 ・ ddPCRライブラリ定量キット for Illumina TruSeqは、P5配列・P7配 列に対応したプライマーおよびRd1 SP配列・Rd2 SP配列に対応した プローブを用いています。 ・ 当キットを用いてアダプターが正常に付加されたDNAの濃度を絶対定 図2 当キットを用いたライブラリの定量結果例 QX100 Droplet Digital PCRシステムおよびddPCRライブラリ定量キット for Illumina TruSeqを用い てライブラリ定量を行った。 FAM Probeのターゲット : 図1のProbe1と同様、VIC Probeのターゲット : 図1のProbe2と同様 量することにより、 ライブラリ間のばらつきがより少ないシーケンシング を行うことが可能となります。 Ordering Information カタログ番号 品名 186-3040 ddPCRライブラリ定量キット for Illumina TruSeq（200反応分） 価格 ¥78,000 Bio-Rad Laboratories 2013 3 NEW 新製品 : S3TMセルソーター S3セルソーター の分取速度です。 バイオ・ラッド社の新製品S3セルソーターは、 1もしくは2レーザーと最大4蛍 従来Jet in Air方式はノズルから出たストリームに対してレーザーを照射 光検出器、前方散乱光（FSC） ・側方散乱光（SSC）検出器を備えた卓上型 するため、光軸調整が必須であり、操作が難しくなる大きな要因になって のセルソーターです。 いました。そのため光軸調整の必要のないキュベット方式が一般に広く使 従来、セルソーティングは広範囲の研究領域で必要とされる技術にも関わ 用されてきました。 らず容易な実験ではありませんでした。 S3セルソーターではセルソーティングに最適なJet in Air方式を採用した S3セルソーターはセルソーターにおける30年以上の開発経験に基づい 上で、光軸調整等を自動化することにより、性能と使いやすさを両立させ て設計された、研究者ご自身が使用できる本格的な性能を備えたセルソー ています。 ターです。 S3セルソーターはすべての研究者に信頼性のあるシンプルなセルソーテ 使いやすさを追求した全自動操作 S3セルソーターでは機器セットアップ時のユーザー作業を最小限に抑え ィングを提供いたします。 るために各種全自動機能を備えています。 S3セルソーターの特長 ユーザーはソフトウェア上から 「Start-up」ボタンを押すだけで、機器起動 ・Jet in Air方式による高速・高純度ソーティング 時に行うストリームとレーザーの光軸調整等が S3セルソーターによって ・使いやすさを追求した全自動操作 自動的に処理されます。新技術であるProDropTMテクノロジーはドロップ ・送液カート不要で70×65×65cmのコンパクトサイズ ディレイ計算とブレイクオフモニターを自動的に行います。 Jet in Air方式による高速・高純度ソーティング S3セルソーターでは細胞分取に最適なJet in Air方式（下図左）を採用し ています。 従来、一般的なキュベット方式（下図右）はノズル手前のキュベット部分に レーザーを照射します。 レーザーを照射する表面は平面であるため、 この 方式ではキュベットに光軸を固定することにより、光軸調整を不要にする ことができます。 レーザー照射時にはストリーム断面は四角の断面を持っ ProLine TMキャリブレーションビーズを用いた QCもソフトウェア上の 「RunQC」ボタンを押すだけで実行可能です。 S3セルソーターでは実験開始に必要な機器のスタートアップからQCまで を30分以内に終了します。その間にユーザーが必要な操作はソフトウェア 上のボタンをクリックして、ProLine TMキャリブレーションビーズをセット するだけです。 このため、 どなたでも簡単にS3セルソーターをご使用いた だくことができます。 ていますが、 ノズルにより絞られ円形の断面を持つストリームになります。 送液カート不要で70×65×65cmのコンパクトサイズ キュベット方式ではこのストリームの断面形状が四角から円形に変化する S3セルソーターでは廃液、シース液、脱イオン水を本体に内蔵することに 際に乱流が起き細胞にダメージを与え、また流速が大きく変化するため より、送液カートを排し、研究室のベンチトップに収まるコンパクトなデザ ディレイタイムがばらついてソーティング純度が低下します。 インを実現しています。 Jet in Air 方式 キュベット方式 250 ∼ 430μm レーザー 6m/ 秒 ノズル 65cm レーザー 70μm ノズル 断面図 30m/ 秒 断面図 65cm 70cm 一方、 Jet in Air方式はノズルから出たストリームに対してレーザーを照射 する方式です。Jet in Air方式はキュベット方式のようにストリーム断面が 変化することがないため、乱流が起こらず細胞の機能や生存率を維持した ままでの細胞分取が可能になります。流速も一定なためディレイタイムに 誤差が生じません。そのため、高純度な分取が可能になります。 S3セルソーターはこのJet in Air方式を採用することで分取速度30,000 イベント/秒、分取純度99%を実現しています。 これは同クラス機器の3倍 4 Bio-Rad News Ordering Information カタログ番号 品名 S3セルソータ− システム 145-1001J1 S3セルソータ− 488nmレーザー 2蛍光検出システム 145-1002J2 S3セルソータ− 488/561nmレーザー 4蛍光検出システム NEW Bio-Plex関連試薬に新たなラインアップが追加! 早期に腎毒性/障害関連バイオマーカーの同時測定を可能にするBio-Plex Pro RBM腎毒性アッセイキット を可能にします。 従来、 腎毒性/障害の評価で用いられてきた血中クレアチニン （Scr） や血中尿 素窒素 （BUN） などのバイオマーカーは、 腎障害が起きた後、 検出できるまでに 数日から数週間必要であり、 早期の検出が可能なバイオマーカーがもとめられ ておりました。 Myriad RBM社とのパートナーシップにより製品化された本キッ 25,000 20,000 15,000 10,000 5,000 Normal 関連研究分野 ・薬剤性腎毒性 ・腎損傷の特性評価 - 糖尿病 - 高血圧 - 糸球体腎炎 - 多発性嚢胞腎 - 慢性感染症 - SLE（Lupus）や自己免疫疾患 1,000 1 0 2 2 8 1 Days post gentamycin treatment 2 8 Days post gentamycin treatment 図1-2 ラット尿サンプル̶SDラットおよび多発性嚢胞腎ラットから得られた尿サンプルの比較例 B2M 500 450 400 350 300 250 200 150 100 50 0 NGAL p=0.00330 Normal PCK Normal Category Albumin p=4.54e-05 4,500 4,000 3,500 3,000 2,500 2,000 1,500 1,000 500 0 PCK p=5.1e-06 200,000 180,000 160,000 140,000 120,000 100,000 80,000 60,000 40,000 20,000 0 Normal Category 図1-3 イヌ尿サンプル̶ゲンタマイシン処理 PCK Category 1、 2、 8日後の尿サンプルを用いた測定例 Alternate Names ApoJ TIM-1 30 Calbindin Clusterin GST-π IL-18 KIM-1 MCP-1 Albumin B2M Cystatin C NGAL Osteopontin TFF3 Clusterin IL-18 KIM-1 MCP-1 Osteopontin B2M Calbindin Cystatin C NGAL 64 12 25 21 44 15 30 22 51 46 20 61 12 21 20 15 52 22 62 44 46 30 0.043 Lipocalin-2 ApoJ TIM-1 Lipocalin-2 OPN ApoJ TIM-1 OPN Lipocalin-2 Albumin Bead Region 12 53 15 46 感度例をご紹介します。 Assay Working Ranges, ng/ml LLOQ ULOQ Albumin Pro 0 1 図1に各キットを用いた測定例、および表1に各種項目の測定レンジ、検出 Canine Kidney Toxicity Albumin Kit 表1 Bio-Plex 8 Days post gentamycin treatment ことが可能です。 Clusterin KIM-1 MCP-1 NGAL Rat Kidney Toxicity Albumin Kit 0.3 0 1 MCP-1 0.5 置を用いた効果的かつ簡便な測定が可能です。本製品は、Bio-Plexシステ Canine Kidney Toxicity Panel 1 Rat Kidney Toxicity Panel 2 KIM-1 2 ムをはじめLuminexテクノロジーを用いたすべての装置でご利用いただく Analyte Rat Kidney Toxicity Panel 1 Diseased Category Bio-Rad Pro RBM腎毒性アッセイキットは、ヒト、ラット、イヌの尿サンプ Assay Panel Human Kidney Toxicity Panel 2 Normal ルに対応します。 また、磁気ビーズを採用しているため、専用の磁気洗浄装 など Human Kidney Toxicity Panel 1 Diseased Category Clusterin 2,000 が可能となり、 早期の腎毒性/障害の評価を可能にします。 また、 本キットは検出 感度が高く、 ダイナミックレンジが広いためアプリケーションの幅が広がります。 Normal p=0.121 疾患サンプル：慢性腎疾患、糖尿病性腎症、腎臓結石、腎不全患者の尿サンプル Fluorescence intensity (FI) の結果採用されたバイオマーカーは、 腎毒性/障害が起きた数時間後から検出 Diseased Category 20 18 16 14 12 10 8 6 4 2 0 - 図1-1 ヒト尿サンプル̶健常および疾患 尿サンプルを用いた比較例 トは、 Myriad RBM社とPSTC（Predictive Safety Testing Consortium） とのコラボレーションにより開発され、 バイオマーカーの選定がされました。 そ GST-π p=0.028 18,000 16,000 14,000 12,000 10,000 8,000 6,000 4,000 2,000 0 Concentration, ng/ml にし、薬剤性腎毒性試験をはじめ、さまざまな疾患に関連した腎障害評価 TFF3 p=0.053 35,000 30,000 0 Concentration, ng/ml Pro RBM腎毒性アッセイキットの販売が開始されました。本キットでは、 早期に腎毒性 /障害の可能性が示唆されるバイオマーカーの測定を可能 Concentration, ng/ml Albumin 複数の腎毒性 / 障害関連バイオマーカーの測定を可能にするBio-Plex 0.69 0.012 0.013 0.010 Assay Sensitivity, ng/ml LOD Assay Precision Intra-assay %CV 4 4 5 5 Inter-assay %CV 6 7 12 7 800 10 4.8 9.0 0.65 0.0046 0.0043 0.0042 0.0052 4.8 0.0022 8 11 4.4 1.3 0.5 0.019 0.021 0.011 2.8 0.043 0.16 0.062 3.8 0.075 0.99 0.36 0.042 0.15 0.0039 8.3 0.7 0.062 0.63 1,750 1,250 230 15 21 3.8 640 22 40 34 2,100 98 840 35 50 35 3.2 2,760 535 42 480 0.97 0.57 0.23 0.048 0.01 0.0017 1.2 0.022 0.077 0.052 1.7 0.036 0.43 0.17 0.023 0.045 0.0015 4.1 0.61 0.026 0.22 4 3 5 5 4 3 2 3 3 3 6 2 3 4 4 2 4 10 9 2 5 5 10 8 7 5 8 8 9 20 8 12 6 12 5 7 6 5 18 14 6 10 5 9 35 0.014 RBM腎毒性パネル測定項目および測定レンジ例 Ordering Information RBM腎毒性アッセイ キットおよび関連製品 ヒト Kidney Toxicity アッセイ キット カタログ番号 品名 ・ プレミックスパネル（各内容量 96well×1回分） ラット Kidney Toxicity アッセイ キット ・ プレミックスパネル（各内容量 96well×1回分） イヌ Kidney Toxicity アッセイ キット 171-ATR1CK 171-ATR2CK 価格 Bio-Plex Pro RBM ヒト Kidney Toxicity1 6-Plexパネル Bio-Plex Pro RBM ヒト Kidney Toxicity2 6-Plexパネル ¥250,000 ¥250,000 171-KTR1CK Bio-Plex Pro RBM ラット Kidney Toxicity1 5-Plexパネル 171-KTR2CK Bio-Plex Pro RBM ラット Kidney Toxicity2 4-Plexパネル ・ All-in-one シングルプレックス （各内容量 96well×1回分） 171-KTR3CK Bio-Plex Pro RBM ラット Kidney Toxicity Alubumin キット ・ プレミックスパネル（各内容量 96well×1回分） 171-QTR1CK Bio-Plex Pro RBM イヌ Kidney Toxicity1 4-Plexパネル ・ All-in-one シングルプレックス （各内容量 96well×1回分） 171-QTR2CK Bio-Plex Pro RBM イヌ Kidney Toxicity Alubumin キット ¥220,000 ¥190,000 ¥110,000 ¥190,000 ¥110,000 ※ 磁気ビーズ用洗浄器をご利用でないお客様は、 フィルタープレート付のカタログ番号がございます。別途お問い合わせください。 Bio-Rad Laboratories 2013 5 定量性の高いウェスタンブロッティングデータを得るための新しいワークフロー ウェスタンブロッティングデータの 信頼性 多くのステップを経て得られるウェスタンブロッ ティングデータは、手技的要素や機器・試薬要 定量ウェスタンV3ワークフロー ワークフロー 1 時間 電気泳動と泳動状態の確認 Stain-Freeゲルと イメージング装置 因によるさまざまなエラーが生じます。 + 泳動後のゲルにUVをあて、 泳動パターンの確認を行う Gel Doc EZ ロッティング実験、およびデータそのものの信頼 メンブレンへの転写と転写状態の確認 性が得られず、 ジャーナルによっては掲載不可と いう結果につながることがあります。多くの場合、 20–30 min または これらのエラーを補正しない場合、 ウェスタンブ データ補正にはハウスキーピングタンパク質（以 得られるデータ 2 トランスブロットTurbo、 RTA試薬 （低蛍光PVDFメンブレン） とイメージングシステム 3–10 min + 転写後のゲルにUVをあて、 タンパク質の抜け具合を確認する または 下、HKP）を別途検出・定量し、HKP量が一定で Gel Doc EZ あるという仮定のもと目的タンパク質バンドの 抗体反応と検出、および総タンパク定量 シグナル値を補正し定量を行っています。 HKP の発現量については、さまざまな刺激や 3 Clarity Western ECL Substrate + 状態の変化により変動することが報告されて Gel Doc EZ 画像取得と解析、およびデータ補正 ティングで行うため、ウェスタンブロッティング ます。 UVによるブロット上の 総タンパク質の検出と定量 または います。また、HKP の検出もウェスタンブロッ で生じるエラーが同様に起こる可能性があり ~5 hr 4 10–15 min ChemiDoc MP システム ● Liらはレビュー*1の中でウェスタンブロッティン ChemiDoc MP システム or 目的タンパク質の検出 Total time: （Chemiluminescence） 6 hr 目的タンパク質の検出 （Fluorescence） グのインターナルコントロールを再考し、メン ブレン上の各レーンの総タンパク質量をインターナルコントロールとし すでにいくつかの論文で定量ウェスタンV3ワークフローが用いられてい て利用することがより有効であると報告しています。また、同レビューの中 ます。 で、Stain-Freeゲルを用いた総タンパク質定量の有効性も紹介されてい 論文でも認められた、 より正確なウェスタンブロッティングデータのための ます。 定量ウェスタンV3ワークフローを是非お試しください。 定量ウェスタンV3ワークフロー 定量ウェスタンV3ワークフローは、総タンパク質量によるウェスタンブロッ ティングデータの補正を簡単に行える、画期的なウェスタンブロッティング ワークフローです。 ワークフローの要となるのが、 ミニプロティアンTGX Stain-Freeゲルで す。Stain-Freeゲルは、泳動後のゲルにUV照射するだけでタンパク質を 可視化することが可能で、かつ、転写をした後も蛍光を観察できるため、目 的タンパク質を検出した前後でメンブレン上の総タンパク質量を測定する ことが可能になります。 また、低蛍光PVDFメンブレンを利用することで、S/N比の高い定量性の あるデータをクリアに取得することが可能です。 V3ワークフローでは、泳動イメージ（泳動の確認）、転写後のゲルイメージ （転写の確認）、ブロットイメージ（総タンパク検出）、目的タンパク質検出 イメージが得られるため、ウェスタンブロッティング実験に高い信頼性を もたらします。 ChemiDoc MPイメージングシステム付属のコントロール&解析ソフトウェ アであるImageLabは、Stain-Freeイメージによる総タンパク質定量とこの 値を用いた目的タンパク質データの補正までサポートしているので、簡単に 信頼性の高いウェスタンブロッティングデータを得ることができます。 6 Bio-Rad News バイオ・ラッドでは、定量ウェスタンV3ワークフローを研究室単位でご紹 介するセミナーも行っております。 ご興味がございましたら、バイオ・ラッド までご連絡ください。 V3ワークフローを利用した論文 ・ Stain-Free Technology as Normalization Tool in Western Blot Analysis. Gürtler, A et al.（2013）. Anal Biochem 433, 105–111. ・ Ca2+-dependent Proteolysis of Junctophilin 1 and Junctophilin 2 in Skeletal and Cardiac Muscle. Murphy RM et al.（2012）. J Physiol Dec 17. [Epub ahead of print] ・ S-glutathionylation of troponin I （fast） increases contractile apparatus Ca2+ sensitivity in fasttwitch muscle fibers of rats and humans. Mollica JP et al.（2012）. J Physiol 590, 1443–1463. ・ Influences of temperature, oxidative stress, and phosphorylation on binding of heat shock proteins in skeletal muscle fibers. Larkins NT et al.（2012）. Am J Physiol Cell Physiol 3, C654–65. ・ Effects of carnosine on contractile apparatus Ca2+ sensitivity and sarcoplasmic reticulum Ca2+ release in human skeletal muscle fibers. Dutka TL et al.（2012）. J Appl Physiol 112, 728-36. ・ Lack of expression and function of erythropoietin receptors in the kidney. Elliott S et al.（2012）. Nephrol Dial Transplant 27, 2733–45. ・ Changes in plasma membrane Ca-ATPase and stromal interacting molecule 1 expression levels for Ca（2+）signaling in dystrophic mdx mouse muscle. Cully TR et al.（2012）. Am J Physiol Cell Physiol 303, C567–76. ・ Comparison of stain-free gels with traditional immunoblot loading control methodology. Colella AD et al.（2012）. Anal Biochem 430, 108–110. *1 An old method facing a new challeng: Re-visiting housekeeping proteins as internal reference control for neuroscience research., Rena Li and Yong Shen, Life Sciences, in press. Clarity Western ECL Substrate 高速・高効率転写で大好評のトランスブロットTurbo ブロッティングシ 「感度・コストパフォー Clarity Western ECL Substrate（以下、Clarity）は、 マンス・使いやすさ」の3つの要素を兼ね備えたケミルミ検出試薬です。 ステム に 、新しくラン ニングコ スト を 抑 え た RTA（Ready To Assemble）キットが登場しま した。 高感度検出 トランスブロットTurbo用RTAキットは、転写パッ 広く使用されているT社 Plusよりも安定 クで使用されているメンブレン・ろ紙・転写バッ した強いシグナルが得られます。 ファーをキット化した、お客様にて転写スタックを 一般的に露光時間が長くなればなるほ 作成して使用いただけるキットです。別途必要な ど、バックグランドが高くなりS/N 比が ものはエタノールと超純水だけ。転写パックよりも 悪いデータとなりますが、Clarityは長時 ランニングコストを抑えることができ、 大量にウェス 間発光と低バックグランドの特長により、露光時間によらず、非常にクリア タンブロッティング実験を行う研究室でも安心して な検出イメージを得ることが可能です（図A,B お客様ご提供データ）。 お使いいただけます。 図A シグナル検出イメージ 3 1 2 3 150 100 ゆるウェスタンブロッティングニーズにお応えできるようになりました。 T社 Plus Clarity 200 Peak intensity 2 転写パックで使用されている試薬が使われているので、 トランスブロット Turboの高速・高効率転写の特長はそのままです。 また、低蛍光PVDFメンブレンのキットもあるため、蛍光検出によるウェス タンブロッティングや定量ウェスタンV3ワークフローにも利用でき、あら Clarity T社 Plus 1 図B バックグランドを差し引いた シグナル強度 50 0 10.0 5.0 1Runあたりのコスト比較 2.5 RTAキット ¥1,155 ¥1,155 ¥1,355 ¥1,655 ¥1,655 ¥1,955 Total protein load, µg 抜群のコストパフォーマンス Clarityには200mlタイプ、500mlタイプがあり、それぞれミニゲルサイズ で34 枚、85 枚使用できます。1 回あたり¥500前後の高いコストパフォー マンスがClarityを安心して長くお使いいただくためのもう一つの特長です。 バイオ・ラッド Clarity 200ml バイオ・ラッド Clarity 500ml T社 Plus 価格 推奨処理枚数 ¥20,000 ¥40,000 ¥33,000 34枚 85枚 10枚 1Runあたり ¥588 ¥471 ¥3,300 TBT RTA NC（mini） TBT RTA PVDF（mini） TBT RTA 低蛍光 PVDF（mini） TBT RTA NC（midi） TBT RTA PVDF（midi） TBT RTA 低蛍光 PVDF（midi） 転写パック ¥1,680 ¥1,680 ¥2,360 ¥2,360 ※NC＝ニトロセルロース mini＝ミニゲル用 midi＝ミディ （criterion） ゲル用 転写・検出性能は転写パックと同等 RTAキット 転写パック 室温保存と長時間発光で使いやすい 冷蔵保存の場合、室温に戻してから使用する必要があり、時間がかかるう え、使用温度によっては安定したシグナル検出が難しくなります。 Clarityは室温保存が可能で1：1混合なので、簡単に使いたいときにすぐに 使用できます。 また、長時間発光特性により、何度でも検出像を取り直すこと も可能です。 反応後10分程度で発光のピークを迎えますので、慌ててセットしたり取り Ordering Information 出したりすることなく、ゆっくりと確実に検出することが可能です。 トランスブロットTurbo用 RTA転写キット カタログ番号 品名 170-4270 トランスブロットTurbo用 170-4272 トランスブロットTurbo用 170-4274 トランスブロットTurbo用 170-4271 トランスブロットTurbo用 170-4273 トランスブロットTurbo用 170-4275 トランスブロットTurbo用 3,500,000.00 3,000,000.00 2,500,000.00 シグナル値 ニトロセルロース膜に転写し、ケミルミで検出 キャンペーン実施中 RTA転写キット NC（ミニ） RTA転写キット PVDF（ミニ） RTA転写キット 低蛍光PVDF（ミニ） RTA転写キット NC（ミディ） RTA転写キット PVDF（ミディ） RTA転写キット 低蛍光PVDF（ミニ） 価格 ¥46,000 ¥46,000 ¥54,000 ¥66,000 ¥66,000 ¥78,000 ※ 各キットは40回分です。 ※ トランスブロットTurboとのセット品もございます。詳しくはお問い合わせください。 2,000,000.00 1,500,000.00 1,000,000.00 500,000.00 0.00 0 20 40 60 80 100 試薬添加後の時間（分） Ordering Information カタログ番号 品名 170-5060 170-5061 Clarity Western ECL Substrate, 200ml Clarity Western ECL Substrate, 500ml 120 140 キャンペーン実施中 価格 ¥20,000 ¥40,000 保存 室温 室温 Bio-Rad Laboratories 2013 7 精製したタンパク質にタグが残っていても、本当にいいですか? アフィニティー精製でありながら完全タグフリータンパク質の精製が可能です Profinity eXact システムの特長 切断するため、 プロテアーゼ認識配列の直下に目的タンパク質のN末端配 □タグ由来のアミノ酸が残らない完全タグフリータンパク質精製システム 列を挿入すれば、 タグが残らないタグフリータンパク質の精製が可能です。 □On-Column切断でタグの切断と分離がワンステップで実現 □タグ除去用のプロテアーゼが不要 □Profiniaシステムなどで精製の自動化が可能 eXactタグを使った精製法 Bio-Radでは、eXactシステムでタグフリータンパク質を精製していただ くために大腸菌発現用ベクター、 レジン、スピンカラム、カラムをご用意し アフィニティー精製の問題点 ています。 より簡単に利用していただけるように、スピンカラムに、バクテ アフィニティー法でのタンパク質の精製は、非常に簡単で、従来の複数の リア溶解試薬、結合・洗浄バッファ一、溶出バッファーをセットしたスター カラムを使った方法に比べて時間も短縮できます。そのため、現在では ターキットがあります。 レジンは、洗浄操作により5 回まで、再利用可能で His、GST、MBP などのアフィニティータグを使った精製法が広く利用さ れています。 これらのタグをタンパク質の N末端側やC末端側に結合させ す。タンパク質に応じて、界面活性剤や還元剤を含むバッファーも利用可 能です。 て、特異的に結合するレジン等を用いて精製しますが、多くの場合、 タグが 結合した状態で精製されます。 タンパク質の性質を解析する上で、タグがその機能を阻害しない場合も 多いですが、タンパク質間相互作用や結晶構造解析などの場合に、タグ 切断（＋F−） eXact タグ 目的タンパク質 これらの要望を満たすため、タグと がないタンパク質がより望まれます。 目的タンパク質のリンカー配列に特異性の高いプロテアーゼの切断認識 配列を挿入して、プロテアーゼによりタグを切断、除去する方法が利用さ れています。 しかし、 これまでの方法では、 プロテアーゼ認識配列やクロー 結合 溶出 洗浄 ニング用の制限酵素配列に由来するアミノ酸残基が部分的に目的タンパ ク質側に残存してしまうという問題点がありました。またこの方法では、 プ ロテアーゼの切断のステップが増え、時間もコストもかかってしまいます。 再生 Profinity eXact レジン には、Subtilisin プロ テアーゼ（青）が固定 化されている（灰色） 。 プロドメイン （eXactタグ） プロテアーゼサブ ユニットに強く結 合する eXact タグ が固定化される。 ハロゲン化物イオ ン（F−）の 添 加 で プロテアーゼ活性 が 高まり、目的タ ンパク質の N 末端 側が切断される。 溶 出 後 のレジン は、0.1M リン酸 で洗浄することで、 再利用できる。 図2 eXactタグを使ったタンパク質の精製ステップ GFP レジンに結合したタグ付きタンパク質がフッ素イオン（F−）の添加でタグフリータンパク質として 精製される。 T7 lac promoter bla (AmpR) Subtilisin Profinity eXact tag 図1 Subtilisinプロテアーゼとプロドメイン（eXactタグ）と融合したGFPの構造 複合体の立体構造は、Subtilisin-プロドメイン複合体の構造（PDB, 1spd）と、GFPの立体構造 （PDB, 1gfl）から予測した。 （Ruan et al, 2004） SapI HindIII pPAL7 5901 bp MCS タグフリーアフィニティー精製の原理 Profinity eXactシステムは、プロテアーゼ（Subtilisin）を2つのドメインに 分割して、そのドメイン間の強い相互作用（KD<100 pM）を利用していま す（図1）。 この2つのドメインが結合すると、F−などのハロゲン化物イオン pBR322 ori T7 lac terminator 依存的に強いプロテアーゼ活性が誘導されます。非常に高い選択性を持 つように改変したSubtilisinプロテアーゼは、精製したい目的タンパク質と の間のリンカー配列を認識し、切断します（図2） （Ruan et al, 2004）。 Subtilisinプロテアーゼは、EEDKLFKAL配列のC末端側を切断します。図 5に示すようにP1',P2'アミノ酸残基によっては切断効率が低くなる場合 もありますが、P1' 領域のアミノ酸残基がメチオニンの場合にも効率よく 8 Bio-Rad News SpeI NcoI BamHI EcoRI XhoI NotI lac I 図3 eXactタグを発現させるベクター Profinity eXact pPAL7 vector. HindIIIサイトにクローニングすることにより、 タグフリータンパク質が精製可能となる。 （図4参照） （図3-6；Profinity eXact Protein Purification System Instruction Manualより） T7 Promoter lac Operator 1 TAATACGACT CACTATAGGG GAATTGTGAG CGGATAACAA TTCCCCTCTA GAAATAATTT TGTTTAACTT TAAGAAGGAG ATTATGCTGA GTGATATCCC CTTAACACTC GCCTATTGTT AAGGGGAGAT CTTTATTAAA ACAAATTGAA ATTCTTCCTC Profinity eXact Tag (92-316) GFP MW L FT W MBP E MW MW L FT W E MW - NdeI GlyGlyLys SerAsnGlyGlu LysLysTyr IleValGly PheLysGlnGly PheLysSer CysAlaLys 81 ATATACATAT GGGAGGGAAA TCAAACGGGG AAAAGAAATA TATTGTCGGG TTCAAACAGG GCTTTAAGAG CTGCGCTAAG TATATGTATA CCCTCCCTTT AGTTTGCCCC TTTTCTTTAT ATAACAGCCC AAGTTTGTCC CGAAATTCTC GACGCGATTC Profinity eXact Tag (92-316) LysGluAspVal IleSerGlu LysGlyGly LysLeuGlnLys CysPheLys TyrValAsp AlaAlaSerAla ThrLeuAsn· 161 AAGGAGGATG TCATTTCTGA AAAAGGCGGG AAACTCCAAA AGTGCTTCAA ATATGTAGAC GCAGCTAGCG CTACATTAAA TTCCTCCTAC AGTAAAGACT TTTTCCGCCC TTTGAGGTTT TCACGAAGTT TATACATCTG CGTCGATCGC GATGTAATTT Profinity eXact Tag (92-316) SapI HindIII SpeI Cleavage Recognition Sequences ·GluLysAla ValGluGluLeu LysLysAsp ProSerVal AlaTyrValGlu GluAspLys LeuPheLys AlaLeuThrSer· 241 CGAAAAAGCT GTAGAAGAAT TGAAAAAAGA TCCGAGCGTC GCGTACGTAG AAGAAGACAA GCTCTTCAAA GCTTTGACTA GCTTTTTCGA CATCTTCTTA ACTTTTTTCT AGGCTCGCAG CGCATGCATC TTCTTCTGTT CGAGAAGTTT CGAAACTGAT Profinity eXact Cleavage Site NcoI XhoI SpeI BamHI EcoRI NotI STOP ·SThrMetAla GlySerGly CysGluPheLeu GluAlaAla Ala*** 321 GTACCATGGC GGGATCCGGC TGCGAATTCC TCGAGGCGGC CGCATAAGCC CGAAAGGAAG CTGAGTTGGC TGCTGCCACC CATGGTACCG CCCTAGGCCG ACGCTTAAGG AGCTCCGCCG GCGTATTCGG GCTTTCCTTC GACTCAACCG ACGACGGTGG T7 Terminator 401 GCTGAGCAAT AACTAGCATA ACCCCTTGGG GCCTCTAAAC GGGTCTTGAG GGGTTTTTTG CTGAAAGGAG GAACTATATC CTTGATATAG 図4 eXact タグの配列とマルチクローニングサイ ト周辺の配列 CGACTCGTTA TTGATCGTAT TGGGGAACCC CGGAGATTTG CCCAGAACTC CCCAAAAAAC GACTTTCCTC HindIIIサイト近辺のEEDKLFKALのC末端側が、Subtilisinプロテアーゼにより切断される。HindIII 以外の制限酵素を使ってクローニングした場合には、目的タンパク質に数アミノ酸残基が付加さ れることになる。 図6 eXactタグを用いたGFPとMBPの精製例 大腸菌で発現させて調製したライセートを、1mlのBio-Scale Mini Profinity eXactカートリッジに BioLogic DuoFlow システムを用いてロードした。 カートリッジは、 カラムの10倍量（CV）のバッファー で洗浄後、3CV（0.1ml/min, 30min）のフッ化カリウム（100mM）を含むバッファーで溶出した。精 製にかかる合計時間は、約60分であった。 MW ; 分子量マーカー（Precision Plus プロテインスタンダード）、L ; ライセート、FT ; フロースルー、 W ; ウォッシュ、E ; 溶出、（ ）タグ付きタンパク質、（ ）タグフリータンパク質 FAQ Q : レジンの結合容量は、どれくらいですか? A : ＞ 3 mg/mlです（40 kDaのmaltose binding protein の場合） Q : レジンは、再利用可能ですか? A : はい、可能です。精製に使用したレジンは、0.1M H3PO4で、レジンに結合した非 特異的に結合したタンパク質とeXactタグを洗浄することが可能です。洗浄後は、 リン酸バッファーなどで保存してください。 Q : HindIII以外の制限酵素を使ってクローニング可能ですか? A : 可能ですが、その場合、アミノ酸残基が残ります。 Q : 大腸菌以外の発現系でも使えますか? A : eXactタグを他のベクターに移し替えて利用している例があります。 参考文献 図5 プロテアーゼ切断サイト下流のP1 、P2 アミノ酸の違いによる切断効率の違い P1’ がメチオニンの場合も、切断効率は比較的良い。ただし、プロテアーゼ認識配列直後に E、V、I、 Dなどのアミノ酸が続く場合には、切断効率が低くなるので、反応時間を長くするか、何らかのア ミノ酸を付加する対策が必要となる。 Ruan et al., Engineering S Subtilisin into a fluoride-triggered processing protease useful for one-step protein purification. Biochemistry 43, 14539-14546, 2004 (PMID; 15544324) Huang et al., One-step purfication of a functional, constitutively activated form of visual arrestin. Protein Expression and Purification 82（1）, 55-60, 2012（PMID; 22133714） Ishimoto et al., Opposing effects of fructokinase C and A isoforms on fructose-induced metabolic syndrome in mice. PNAS 109（11）, 4320-4325, 2012（PMID; 22371574） Tang et al., PP2A activates brassinosteroide-responsive gene expression and plant growth by dephosphorylating BZR1. Nat. Cell. Biol., 13（2）, 124-, 2012 （PMID; 21258370） Ordering Information カタログ番号 品名 156-3002 キャンペーン実施中 価格 キャンペーン価格 Profinity eXact pPAL Supercoiled Expression Vector Kit（10µg） ¥32,000 ¥24,000 156-3005 156-3007 732-4646 732-4647 732-4648 Profinity eXact Purification Resin（10ml） Profinity eXact ミニスピンカラム（10×100µl） Bio-Scale Mini Profinity eXact カートリッジ（2×1ml） Bio-Scale Mini Profinity eXact カートリッジ（4×1ml） Bio-Scale Mini Profinity eXact カートリッジ（1×5ml） ¥90,000 ¥36,000 ¥42,000 ¥75,000 ¥70,000 ¥54,000 ¥21,600 ¥25,200 ¥45,000 ¥42,000 156-3004 Profinity eXact Antibody（100µl, 1mg/ml） ¥18,000 ¥9,000 156-3006 Profinity eXact Mini Spin Purification Starter Kit 構成内容:スピンカラム（10本）、2ml回収チューブ（50本）、 コントロールタンパク質、 バクテリア溶解試薬、結合・洗浄バッファー（50ml）、溶出バッファー（20ml） ¥95,000 ¥66,500 Bio-Rad Laboratories 2013 9 NEW 次世代クロマトグラフィーNGC 発売開始! ●フロント配管で、 クロマトチャンバーでも楽々操作 NGCクロマトグラフィーシステムは配管がすべて機器前面にあり、しか も必要に応じて横に向けることも可能です（拡張ベイ3 rd Tier, 4 th Tier 使用時）。 設置場所を選ばず自由に使える、 これも他の装置には無い大きな特長 です。 ●タッチスクリーンで基本操作が可能 NGC Quest™ and NGC Scout™ Series NGC Discover™ Series NGC Discover Pro Series NGCクロマトグラフィーシステムにはタッチスクリーンが付属します。 機器の基本的な制御や確認はすべてこのタッチスクリーンで行えます。 例えば、4℃での使用が不安なPCは低温室の外に置き、低温室ではす 次世代クロマトグラフィーとは、なんでしょう?バイオ・ラッドの目指した次 べてタッチスクリーンでコントロールということも可能です。 世代クロマトグラフィーは、 「誰でも簡単に利用できる装置」 と考えました。 また、次々と変わる研究のニーズにも答える拡張性も、次世代のクロマト 研究と実験をサポートするユニークな機能 装置に求められる要素であると考えました。 ●LED配管アシスト機能 クロ マト装 置 の 各 ポ ー NGCクロマトグラフィーシステムはお客様のニーズとバイオ・ラッドが目 トに LED をつけました。 指す姿を妥協することなく融合させた、 これからのクロマトグラフィー装置 セットアップ時の配管を の新しいスタンダードです。 指示してくれるだけでな これまでのクロマトグラフィー装置とはここが違います! と目で確認できます（右 く、Run 中には流路がひ 写真）。 ●ソフトウェアの操作がとても簡単 クロマト機器を使う上で最も大変なことはソフトウェアの操作を覚えるこ ●Plug and Play とです。何回もクリックしないと到達しないメニューや、たくさんの英語 実験の目的に応じて、各 テキストなど、大変な思いをしたことはありませんか? 種モジュールを選択して NGCクロマトグラフィーシステムのChromLabソフトウェアは30分程 いただけます。 これらのモジュールを本体に組み込むだけで、本体が自動 度のトレーニングで簡単に使用でき、使いたい機能にすぐにアクセスで 認識します。実験室、 クロマトチャンバーの配置に合わせて、バルブ、検出 きるようわかりやすく設計されています。 器などのモジュールを好きな位置にセットすることが可能です。 ●拡張ベイ Tier Rotate™（3rd, 4th Tiers） 〈オプション〉 バルブや検出器を増設する 場合にも設置面積は増えま せん 磁石式カラムホルダー 機器側面、前面に取り付け 可能 拡張ベイ（Tier）を増設するこ とで、システムの拡張が可能 タッチスクリーン マニュアルコントロール リアルタイムのステータ ス表示 機器の左右のどちらに でも設置可能 （オプションの台でセパ レートも可能） NGCのモジュールはすべて組込可能です。モジュールを追加する空き ベイが必要な時は拡張ベイTierを最大 2 個まで追加することができま す。設置面積を増やすことなく必要な機能を追加することが可能です。 バッファートレー アウトレットバルブ また、設置環境に合わせて拡張ベイTierは回転させることも可能です。 お客様の声 ソフトウェアの操作画面が視覚的にわかり サンプルポンプ 100ml/min リアルタイムディスプレイ やすく、メソッドの作成法もわかりやすいと pHモニターバルブ 感じた。 UV/Vis, コンダクティビ ティーモニター 本体付属のタッチパネルで操作できるた サンプルインジェクト バルブ インレットバルブ め、低温室に設置してPCがすぐ近くに置け カラムスイッチングバルブ （リバースフロー対応） バッファーブレンディ ングバルブ 国立大学 A 先生 NGC のソフトウェアは、追加ライセンスを システムポンプ 10ml/min もしくは 100ml/min 購入せずに、自由にインストールできるた め、データの解析やレポート用のデータ資 ミキサー 料の作成を自分の PCで作業できるのは大 国立大学 B先生 10 Bio-Rad News ない場合には便利である。 変便利だと思う。 クロマトグラフィーを行う研究者の意見を取り入れた渾身のChromLabソフトウェア マニュアルモードのデータ保存 必要な情報だ け表 示。色の 変更も可能 ポンプのスタートとともに、 UVデータなどのデー ターが記録され、必要に応じて保存可能 フラクションコレクターの情報も一元的に保存 ログ表示 各アクション ス テップ も、 記録 アクティブフローパス Phaseベースのメソッド作成 左欄の実行したい内容（Phase）を 選択し、順番に並べてメソッドを作成 複数のクロマトグラムのオーバーレ イ、 ズームが可能。クロマトグラムは、 TIFFやJPEGなどの形式で出力可能 充実したカラムライブラリー バイオ・ラッドのカラム情報だけで なく、他社のカラム情報も登録済み 表示項目の色な どを自由に編集 可能 小ウィンドウでの簡易操作 流路を明るい緑色で表示。 バルブの切り替えミスなど を防ぐ ポンプのスタート停止、フラクションコ レクターの分取開始、バルブの切り替 えなど、簡易的な操作が実行可能 図1 データはCSV形式で 出力可能 ドラッグによる%B、時間の変更が可能 図2 ワンクリックピーク解析。複数クロマトグラムも 一括で自動解析可能。 マニュアルモードもあり。 図3 圧倒的にわかりやすいメイン画面（図1） ソフトは自分のPCにインストール可能 バルブの状態、流路がわかりやすく、 クロマトグラムの各種情報の色も変更 可能です。本体横に付属するタッチスクリーンでは、情報の閲覧だけでな ChromLabは、本体付属のPCだけでなく、自分のPCにインストールも可 能です。ChromLabがインストールされたPCがあれば、データをコピー く、ポンプのオン／オフ、UVモニターのゼロ点調整も可能です。マニュアル して持ち出し、チャートの確認やレポート作成を自由に行えます。 モードでの情報も保存できます。 便利な小道具 : マグネチックアダプター 直感的なメソッド作成（図2） カラムホルダーやカートリッジホルダー、チュービングホルダー、サンプ カラムの種類を選ぶだけで、 メソッド作成はほぼ終了。 ル/ウォッシュチューブホルダーは、マグネチック式アタッチメントを採用し サンプル量、洗浄時間、フラクション方法を選択して、Run するだけ。BioRadのカラムだけでなく、他社カラム情報も入っているので安心です。 ているので、本体両側面だけでなく、本体の前面にも取り付けることが可 能です。 今までにないほど簡単なピーク解析（図3） これまでのピーク解析は、各種パラメーターの設定を行ってから分析とい う流れでしたが、ChromLabのピーク解析はワンクリック。ピーク分割・統 合やピーク幅の調整などもチャート上でマウスを使って簡単に行えます。 詳しくはWEBで NGC クロマト カラムホルダー チュービングホルダー カートリッジホルダー サンプル/ウォッシュチューブホルダー Ordering Information カタログ番号 品名 788-0001J1 キャンペーン実施中 NGC Quest 10 クロマトグラフィーシステム ¥5,200,000 構成内容:NGC Quest 10本体（10ml/min、単一波長検出器）、BioFracフラクションコレクター、PC キャンペーン実施中 ¥6,500,000 NGC Quest 10 Plus クロマトグラフィーシステム 構成内容:NGC Quest 10 Plus本体（10ml/min、多波長検出器）、BioFracフラクションコレクター、PC 近日発売予定 NGC Quest 100 クロマトグラフィーシステム 構成内容:NGC Quest 100本体（100ml/min、単一波長検出器）、BioFracフラクションコレクター、PC 近日発売予定 NGC Quest 100 Plus クロマトグラフィーシステム 構成内容:NGC Quest 100 Plus本体（100ml/min、多波長検出器）、BioFracフラクションコレクター、PC お問い合わせください NGC Scout 10 クロマトグラフィーシステム 構成内容:NGC Scout 10本体（10ml/min、単一波長検出器、バッファーブレンディング、pHメーター）、BioFracフラクションコレクター、PC お問い合わせください NGC Scout 10 Plus クロマトグラフィーシステム 構成内容:NGC Scout 10本体（10ml/min、多波長検出器、バッファーブレンディング、pHメーター）、BioFracフラクションコレクター、PC 近日発売予定 NGC Scout 100 クロマトグラフィーシステム 構成内容:NGC Scout 100本体（100ml/min、単一波長検出器、バッファーブレンディング、pHメーター）、BioFracフラクションコレクター、PC 近日発売予定 NGC Scout 100 Plus クロマトグラフィーシステム 構成内容:NGC Scout 100本体（100ml/min、多波長検出器、バッファーブレンディング、pHメーター）、BioFracフラクションコレクター、PC 近日発売予定 NGC Discover 10 クロマトグラフィーシステム 構成内容:NGC Discover 10本体、BioFracフラクションコレクター、PC 近日発売予定 NGC Discover 100 クロマトグラフィーシステム 構成内容:NGC Discover 100本体、BioFracフラクションコレクター、PC NGCクロマトグラフィーシステム 788-0003J1 788-0002J1 788-0004J1 788-0005J1 788-0007J1 788-0006J1 788-0008J1 788-0009J1 788-0010J1 価格 Bio-Rad Laboratories 2013 11 バイオ･ラッドからのお知らせ ■第13回 日本蛋白質科学会年会 ランチョンセミナーのご案内 相互作用研究を加速するProteOn XPR36システム 新規アプリケーションの紹介 ProteOn XPR36システムは、ラベルフリーにリアルタイムに相互作用を解析することができる SPRテクノロジーを用いた相互作用解析システムです。 従来のSPRに革新をもたらす独自の6x6の流路系により、 これまでの相互作用研究にブレーク ｢新規抗MRSA抗生物質トリプロペプチンの作用機序解析 におけるSPRを利用した低分子−低分子間相互作用解析｣ スルーをもたらします。 〈アプリケーション例〉 -再生不要のOne-shot-Kinetics -SPRアレイによる高速スクリーニング -細胞/Liposome/Lipoparticleを用いた 相互作用解析 〈演者〉微生物化学研究所 生物活性研究部 橋爪 秀樹先生 〈日時〉2013年6月13日 〈場所〉とりぎん会館 ■開催中のキャンペーン 各キャンペーンの詳細はキャンペーンリーフレットをご参照ください。 さきどり！夏キャンペーン CFX ConnectTM リアルタイムPCR解析システムキャンペーン 期間 : 2013年5月20日∼2013年7月31日 期間 : 2013年7月31日まで 価値ある製品を 価値ある価格でご提供 96ウェル2波長検出 CFX Connectリアルタイム PCR解析システム ¥3,950,000 28% F ¥2,850,000 OF ⇒ 数ある中から、特に人気製品をラインアッ 通常価格 キャンペーン価格 プして、大変お求めやすい価格でご提供 しています。いつもお使いの製品はもち ろん、興味のある製品をお得な価格でご T100TM サーマルサイクラー 1,000台突破記念キャンペーン 購入いただくチャンスです。試薬や消耗 期間 : 2013年7月31日まで 品のまとめ買いにもおすすめです。 T100 サーマルサイクラー 通常価格 ⇒ 最大 5 0％ キャンペーン価格 ¥470,000 OFF 期間 : 2013年3月25日∼ NGC Quest 10 クロマトグラフィーシステム 量 定 ル プ ン サ 機器 ング ージ メ イ 台 限定 20 ー フィ グラ マト クロ ／ PCR 通常価格 ¥5,200,000 100万円 ¥4,200,000 OFF ⇒ 電気 泳動 とブ 伝 ロッ 子 ティ 導 ング 入 セ ル カ ウ ン テ ィ ン グ 19% OFF NGCクロマトグラフィーシステム 発売記念キャンペーン Campaign 2013 Summer 遺 ¥580,000 キャンペーン価格 核酸増幅 キャンペーン期間 2013. 5. 20~7. 31 オールラウンド ウェスタン画像撮影解析装置キャンペーン 期間 : 2013年9月27日まで ChemiDoc XRS Plus Clarityパッケージ 通常価格 ¥4,020,000 ⇒ 40% F ¥2,400,000 OF キャンペーン価格 バイオ・ラッド ラボラトリーズ株式会社 ライフサイエンス事業部 www.bio-rad.com 取扱店 本 社 〒140-0002 東京都品川区東品川 2-2-24 TEL：03-6361-7000 FAX：03-5463-8480 大阪営業所 〒532-0025 大阪市淀川区新北野 1-14-11 TEL：06-6308-6568 FAX：06-6308-3064 福岡営業所 〒812-0013 福岡市博多区博多駅東 2-5-28 TEL：092-475-4856 FAX：092-475-4858 * 学術的お問い合わせは TEL：03-6404-0331 FAX：03-6404-0334 *価格（ 税抜き）、仕様などは予告無く変更することがありますので、ご了承ください。 *価格は 2013年5月現在のもので、メーカー希望小売価格（税別）です。 ※本カタログに記載されている会社名、商品名は各社の商標または登録商標です。 C10523 1305A
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