TX テクノロジー・ショーケース in つくば 2009 農林水産 P-56 オリーブ葉化合物による卵巣機能の改善効果 ■ 背景 古くから、夏の暑熱ストレスが雌家畜に発情や排 卵の抑制を起こすことが知られている。これは夏季 不妊と呼ばれ、畜産業では食肉や鶏卵の安定供給の 面で、地球温暖化と相まって深刻な問題となってい る。卵胞の排卵・閉鎖の運命決定は卵胞顆粒膜細胞 の生存かアポトーシスかが鍵を握っており、我々は 既に、暑熱ストレスが体内で活性酸素種を発生させ ること、酸化ストレスが同細胞のアポトーシスを誘 導することを示している。本研究は地中海地域の健 康食品として知られるオリーブ、特にその葉に含有 される 5 つの化合物に着目し、夏季不妊を改善する 化合物の探査とその作用機序の解明を目的とした。 ■ 方法 実験にはオリーブ葉化合物 5 種を用いた。顆粒 膜細胞をと畜場のブタ卵胞から採取し培養後、活 性化型キナーゼはウェスタンブロッド法、生存率 は MTS Assay、mRNA 発現レベルは Real-time PCR、 細胞内過酸化水素量は DCF-DA を用いて測定した。 また、3 週齢雌 Wister ラットに暑熱暴露を行い、ヒ ドロキシチロソル（HT）、その前駆体のオレウロ ペイン（OLE）を経口投与し、排卵誘発ホルモン （PMSG、hCG）により排卵を誘発させ、排卵卵子 数を測定した。 ■ 結果 HT とルテオリンは、過酸化水素との同時添加で 過酸化水素依存的なブタ顆粒膜細胞のアポトーシ スを有意に抑制した。一方、化合物を細胞に添加 し 24 時間経過後に添加化合物を培地から取り除き 過酸化水素処理をした場合、HT のみが同様の抑制 効果を示した。同細胞の生存に重要な Akt とその上 流の PDK1 は、HT 添加により活性化され、過酸化 水素依存的なアポトーシスを仲介する JNK と p38 は、HT の前処理でその活性化が抑制された。さら に、HT 添加 16 時間後、カタラーゼ、スーパーオ キシドジスムターゼ 1（SOD1） 、SOD2 の mRNA レ ベルが上昇した。暑熱ストレス下（室温 35℃、相 対湿度 60%）のラットは、対照区（25℃、50%）に 比べ排卵数が 1/3 に減少したが、HT の前駆体であ る OLE の 5.0 及び 1.5mg/kg 経口投与によりその減 少は完全に改善された。以上より、HT はスカベン ジング作用、生存シグナルの活性化、アポトーシス シグナルの抑制、活性酸素除去酵素の発現上昇を誘 導し、顆粒膜細胞に酸化ストレスへの耐性を持たせ ることが分かった。OLE は、経口摂取後体内で HT に変換され、上記の機序により暑熱ストレス依存的 排卵数減少を改善すると考えられる。 ᥤᾲ䉴䊃䊧䉴 㪩㪦㪪㩷 䉥䊧䉡䊨䊕䉟䊮㩷 䊍䊄䊨䉨䉲䉼䊨䉸䊦 㪩㪦㪪㩷 㗰☸⤑⚦⢩ 㪘㪢㪫 㪩㪦㪪㪄㫉㪼㫄㫆㫍㫀㫅㪾㩷㪜㫅㫑㫐㫄㪼㫊㩷 㪩㪦㪪㩷 㩿㪚㪸㫋㪸㫃㪸㫊㪼㪃㩷㪪㪦㪛㪈㪃㩷㪪㪦㪛㪉㪀㩷 㪘㫇㫆㫇㫋㫆㫊㫀㫊 ឃෆ㩷 ኅ⇓䈱ᄐቄਇᅧ䇮ᅚᕈ䈱ឃෆ㓚ኂ䊶ਇᅧ∝䈱ᡷༀ Fig.1 オリーブ葉化合物による夏季不妊の改善 ■ 結論 以上のことより、OLE の家畜飼料への添加は家 畜の夏季不妊を改善し、食肉、鶏卵の安定供給に繋 がると期待できる。また、ヒトへの投与によりの排 卵異常の予防・改善など不妊治療への応用も期待で きる。 代表発表者 若林 由季（わかばやし ゆき） 所 属 筑波大学大学院 生命環境科学研究科 生物資源科学専攻 食機能探査科学研究室 問合せ先 〒 305-8572 茨城県つくば市天王台 1-1-1 遺伝子実験センター 宮崎研究室 TEL: 029-853-7720, FAX: 029-853-7723 [email protected] ■キーワード : （1）夏季不妊 – 58 – （2）酸化ストレス （3）オリーブ
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