多能性幹細胞（PSC）研究用ツール PSC 研究のための主要製品およびサービス Gibco™ ブランドの培地、サプリメント、細胞、細胞培養試薬は、再現性とパフォーマンスを 実現するよう設計されており、日々信頼できる結果をもたらします。研究室や製造施設で 細胞を培養したり、特殊または規定の組成が必要であったり、または細胞株や初代細胞、 幹細胞を培養する場合など、Gibco 製品は信頼性の高いソリューションを提供します。 Contents Stem cell introduction 体細胞および前駆細胞用製品セレクションガイド 4 リプログラミング リプログラミング製品セレクションガイド 5 トランスフェクション トランスフェクション製品セレクションガイド Lipofectamine 3000 Transfection Reagent Lipofectamine MessengerMAX Transfection Reagent 6 7 7 ゲノム編集 ゲノム編集製品セレクションガイド CRISPR 8 9 PSC 培養 PSC 培養用培地 セレクションガイド Essential 8 培地 Essential 8 Flex 培地 PSC 培養用マトリックス製品 セレクションガイド PSC 凍結保存用製品 セレクションガイド PSC 培養のためのキャラクタリゼーションツール TaqMan hPSC Scorecard Panel 10 10 11 11 12 12 13 分化誘導 分化誘導用培地 セレクションガイド PSC Neural Induction Medium PSC Dopaminergic Neuron Differentiation Kit PSC Cardiomyocyte Differentiation Kit PSC Definitive Endoderm Induction Kit 成長因子 14 15 16 17 18 19 キャラクタリゼーション キャラクタリゼーションおよび解析ツール 幹細胞のキャラクタリゼーションおよび分析のための解析装置 20 21 Ordering information Ordering information 22-23 体細胞から分化細胞まで研究をサポート ヒト多能性幹細胞研究は、発生生物学、疾患モデリング、および細胞療法の領域において、計り知れない可能性を秘めています。 これらの研究領域には、効率と再現性だけでなく、細胞遺伝子の完全性を保存する技術が必要とされます。当社は、これらの細 胞のリプログラミング、長期培養および増殖、ならびにキャラクタリゼーションのための新しいアプローチを用いて多能性幹細胞 （ PSC）を操作するツールの開発に焦点を当てています。これらの製品は、基礎研究から細胞療法研究に至るアプリケーションに おいて有用であるという独自の特長を持ちます。 幹細胞研究の発展により、科学者は体細胞または前駆細胞からスタートし、これらの細胞を人工多能性幹細胞（ iPSC）にリプロ グラミングし、さらに PSC を様々なタイプの分化細胞に分化させることが可能となりました。当社は、ワークフローを簡素化し、よ りコントロール可能な幅広い製品とサービスを提供し、より迅速で効率的なシステムを可能とします。 幹細胞研究の出発点̶体細胞および前駆細胞 実験の最終目標が細胞の基礎生物学の理解であっても、最終分化系譜に分化させるための細胞のリプログラミングであっても、 最良の出発材料を使用することがダウンストリームのアプリケーションにおいて極めて重要となります。当社は Gibco™ ブランドに 裏打ちされた幅広い細胞および増殖培地を提供し、お客様の細胞を次の研究ステップに進めるためのサポートをします。 目的の細胞タイプの選択と製品およびサービスの詳細は、こちらをご覧ください。 www.thermofisher.com/stemcells 表 1. 体細胞および前駆細胞用培地の概要 細胞タイプ ADSC MSC CD34+ および PBMC PBMC T 細胞 Gibco StemPro Gibco StemPro 培地キットに含まれ N/A Human Adipose- BM Mesenchymal ます Derived Stem Stem Cells Cells （製品番号 A15652） （製品番号 R7788115） 推奨培養培地 Gibco StemPro Gibco StemPro Gibco StemPro Gibco Gibco CTS Gibco StemPro Gibco Essential 8 Human Adipose- MSC SFM CD34+ Cell Kit StemPro-34 SFM OpTmizer T Cell NSC SFM Medium Derived Stem Cell XenoFree （製品番号 A14059） （製品番号 10639011） SFM （製品番号 A1050901）（製品番号 A1517001） Kit （製品番号 A1067501） （製品番号 A1048501） （製品番号 R7788110） る倍加時間の短縮 および変動の低減 ヒト ADSC および MSC 増殖用ゼノフ リー培地 CD34+ 細胞増殖 ならびに臍帯血 および骨髄からの CytoTune PBMC 増殖および T 細胞増殖用の リプログラミング 培地 をサポートする無血 清培地 リプログラミングの サポート 抗体 4 ヒト線維芽細胞 ヒト成人幹細胞 および 初代細胞 アプリケーション ADSC 培養におけ N/A NSC 幹細胞をターゲットとする抗体はこちらをご覧ください。 www.thermofisher.com/antibodies Gibco StemPro Gibco Human Neural Stem Cells Dermal （製品番号 A15654） Fibroblasts, Adult （製品番号 C0135C） NSC 増殖用の 無血清培地 線維芽細胞増殖 およびリプログラミ ング用の既知組成 培地 Stem cell introduction リプログラミング 体細胞から人工多能性幹細胞へのリプログラミングは、幹細胞研究において重要であり、長時間を要する可能性のあるステップ です。当社では、遺伝子組換えを使用しないリプログラミング技術を提供し、お客様の研究のゴール達成をサポートします。リプ リプログラミング ログラミングに加えて、PSC キャラクタリゼーションのオプションには、リプログラミング前後の細胞同定確認用、ならびに ESC および iPSC 増殖中の多能性検出用の製品が含まれます。 リプログラミング用ソリューションの詳細は、こちらをご覧ください。 www.thermofisher.com/reprogram トランスフェクション 表 2. 遺伝子組換え技術を使用しないリプログラミング製品およびサービスの概要 製品名 Episomal iPSC Reprogramming Vectors* Epi5 Episomal iPSC Reprogramming Vectors** アプリケーション 正常細胞および疾患細胞型からのウイルスフリー iPSC の作製 正常細胞および疾患細胞型からのウイルスフリー iPSC の作製 リプログラミング効率 0.002–0.08% 0.04–0.3% 山中因子 + Lin28 トムソン因子、山中因子 可（Neon Transfection System） 可（Neon Transfection System） 導入方法 Neon Transfection System Lipofectamine 3000 Transfection Reqgent 製品番号 A14703 A15960 ゲノム編集 遺伝子使用 血液細胞リプログラミング *Cellular Dynamics International 社との提携により商品化 ** 京都大学 iPS 細胞研究所（CiRA）山中教授研究室の沖田博士による設計 PSC 培養 さらなるリプログラミング効率の向上に必要なものは？ リプログラミング 7 日目に RevitaCell Supplement を添加した PSC 培養 分化誘導 図 1. 形質導入 7 日後に Gibco™ RevitaCell™ Supplement を添加すること でフィーダーフリーでのリプログラミング効率が改善 （製品番号 C0045C）について、 ヒト新生児皮膚線維芽細胞（HDFn） CytoTune™-iPS 2.0 Sendai Reprogramming Kit を用いて、MOI＝5：5：3 に てフィーダーフリー培養でのリプログラミングを実施しました。形質導入 7 日 後、リプログラミングされた線維芽細胞を、rhVTN-N マトリックス上において、 A キャラクタリゼーション RevitaCell Supplement 非添加 (A) および添加 (B) の増殖培地に播種し、播種 24 時間後以降は Essential 8 Medium のみを毎日添加しました。 B Alkaline Phosphatase Live Stain Invitrogen™ Alkaline Phosphatase Live Stain は、幹細胞イメー ジングに使用され、独自な PSC 染色が可能です。本染色試薬は、 アルカリホスァファターゼ（ AP）に対する細胞透過性蛍光基質で、 細胞毒性がなく、2 時間で消失します。 詳細はこちらをご覧ください。 www.thermofisher.com/aplivestain Ordering information リプログラミング用のキャラクタリゼーションツール 生細胞の免疫染色 より特異的な細胞染色は、確立されたマーカーに対する抗体を 用いることで達成できます。陽性 PSC マーカーおよび陰性 PSC マーカーなどの表面タンパク質は特に有用です。 詳細はこちらをご覧ください。 www.thermofisher.com/pscimmunokits 5 トランスフェクション トランスフェクションとは、核酸を真核細胞に導入するプロセスです。手法は多岐にわたり、脂質ナノ粒子テクノロジーやエレクトロ ポレーションなどの物理的手法が用いられます。Invitrogen™ Lipofectamine™トランスフェクション試薬は、広範囲の細胞に対して 優れた性能を発揮するため、市販されているトランスフェクションの中で最も引用文献数が多く、最も信頼されている製品です。 お客様のトランスフェクションに最適なソリューションは、下表のセクションガイドからお選びください。 各トランスフェクション製品の詳細はこちらをご覧ください。 www.thermofisher.com/transfection 表 3. 細胞タイプ別推奨ガイド トランスフェクション製品 DNA リポフェクション試薬 mRNA RNAi Protein 初代細胞 Co-delivery 幹細胞 浮遊細胞 Lipofectamine 3000 Transfection Reagent Lipofectamine RNAiMAX Transfection Reagent Lipofectamine MessengerMAX Transfection Reagent エレクトロポレーション Neon Transfection System CRISPR ゲノム編集 Lipofectamine 3000 Transfection Reagent Lipofectamine MessengerMAX Transfection Reagent Not yet tested Lipofectamine CRISPRMAX Cas9 Transfection Reagent Not yet tested 多くの文献で 引用されている ロングセラー製品 製品名 Lipofectamine 2000 DNA の導入に siRNA の導入に mRNA の導入に Cas9 Protein の 最適な リポフェクション試薬 最適な リポフェクション試薬 最適な リポフェクション試薬 導入に最適な リポフェクション試薬 試薬では導入困難な 細胞のための エレクトロポレーション装置 Lipofectamine 3000 Lipofectamine RNAiMAX Lipofectamine MessengerMAX Lipofectamine CRISPRMAX Neon Transfection System ・プラスミド DNA ・プラスミド DNA サンプル ・siRNA ・siRNA タイプ ・DNA と siRNA の ・DNA と siRNA の co-transfection 導入効率 トライアル サイズ 6 ★★ - ・siRNA ・microRNA ・mRNA ・Cas9 Protein co-transfection ★★★ ★★★ ★★★ ・プラスミド DNA ・siRNA ・microRNA ・タンパク質 ★★★ 0.1 mL サイズ 0.1 mL サイズ 0.1 mL サイズ 0.1 mL サイズ （製品番号 L3000001）（製品番号 13778100 ）（製品番号 LMRNA001）（製品番号 CMAX00001） ★★★★ デモ受付中 Stem cell introduction 導入困難な細胞で10倍以上のトランスフェクション効率を実現 Lipofectamine 3000 Transfection Reagent Invitrogen™ Lipofectamine™ 3000 Transfection Reagent 幹細胞へのトランスフェクション は、幹細胞の有用性を最大限に引き出すために、エレクトロ A B リプログラミング ポレーションに代わる高効率で低コストな遺伝子導入法とし て開発されました（図 3） 。細胞ストレスの高いエレクトロポ レーションに代わり、高度な脂質ナノ粒子テクノロジーが、リ プログラミングのワークフローを簡略化し、また、新しいゲノ ム編集技術を可能にします。 • 優れた導入効率̶導入困難な細胞から一般的な細胞まで、 トランスフェクション 広範囲の細胞で高い導入効率を実現 DNA:1.3 μg Lipofectamine 3000: SSEA4+/GFP+:69% GFP MFI: 456741 DNA:1.0 μg Lipofectamine 3000: SSEA4+/GFP+:42% GFP MFI:247344 • 低毒性̶細胞にやさしく、細胞生存率が改善 • 高い汎用性̶1 種類のキットで DNA、RNA、コトランスフェ クションが可能 図 2. 幹細胞へのトランスフェクション Lipofectamine 3000 試薬を用いて、H9 ESC (A) または iPSC (B) にトランスフェ クションを行いました。多能性を確認するために細胞を SSEA4 抗体で染色し、蛍 製品の詳細はこちらをご覧ください。 ゲノム編集 www.thermofisher.com/3000 光顕微鏡により細胞を可視化し、フローサイトメトリーを用いた解析によりトラン スフェクション効率および SSEA4 陽性細胞率を求めました。 人工多能性幹細胞（iPSC）の作製 Day 14 Day 17 BJ HDFn HDFa 図 3. Lipofectamine 3000 試薬によるリプログラ ミング効率をエレクトロポレーションと比較 PSC 培養 Lipofectamine 3000 試薬または Neon Transfection System を用いて Epi5™ ベクターをトランスフェクショ ンすることにより、BJ 線維芽細胞、ならびに新生児 （ HDFn）および成人（ HDFa）ヒト皮膚線維芽細胞 を iPSC にリプログラミングしました。コロニーは明視 Lipofectamine 3000 野顕微鏡およびアルカリフォスファターゼ染色により Neon システム 可視化しました。 トランスフェクション効率を実現 Invitrogen™ Lipofectamine™ MessengerMAX™ Transfection hNSC mESC Lipofectamine MessengerMAX mRNA Reagent キャラクタリゼーション Lipofectamine MessengerMAX Transfection Reagent H9 ESC 分化誘導 iPSC 幹細胞、初代細胞、神経細胞において良効な DNA導入用試薬 Reagent は、幹細胞、初代細胞、神経細胞において、一般的な DNA の導入試薬に比べて、トランスフェクション効率を大幅に改善する ことが期待できます。 他社mRNA 導入用試薬 Ordering information • ゲノム組み込みのリスクがなく、より迅速にタンパク質を発現 • mRNA CRISPR によるゲノム切断効率が最大で 10 倍向上 • 細胞質へ直接導入 − 分裂速度が遅い細胞に最適 図 4. Lipofectamine MessengerMAX 試薬は、さまざまな幹細胞（ Gibco™ iPS 細胞、 H9 ES 細胞、マウス ES 細胞、ヒト神経幹細胞）において、主要な DNA 導入試薬や従来の他社 mRNA 導入試薬に比べてより優れた導入効率を 実現 Lipofectamine MessengerMAX および他社 mRNA 導入試薬を用いて、48 ウェ ルフォーマットで、1 ウェルあたり250ng の GFP mRNA を各細胞に導入しました。 また、主要な DNA 導入試薬を用いて、1 ウェルあたり250ng の GFP DNA を各 細胞に導入し、トランスフェクションから 24 時間後に GFP 発現を観察しました。 7 ゲノム編集 Clustered regularly interspaced short palindromic repeat（CRISPR） 、あるいは transcription activator-like（TAL）エフェク ターを利用した技術などを用いることにより、ゲノム編集、すなわち正確かつ部位特異的に DNA を改変することが可能になりまし た。特定の領域をターゲットとする CRISPR シーケンス（ターゲット特異的 CRISPR）または TAL エフェクター DNA 結合ドメイン を使用することにより、目的の位置に 2 本鎖切断（DSB）を形成することができます（表 4） 。 DNA 切断部位は、HDR（homology directed repair）または non-homologous end-joining（NHEJ）による細胞の自然修復機 構によって、修復されます。HDR は、お客様が指定した配列を有する外来 DNA をテンプレートとし取り込むため、より精密なゲノ ム編集に活用されます。一方 NHEJ による DSB の修復は挿入または欠失などのエラーを起こしやすく、このため非機能的な遺伝 子への改変が可能となります。 表 4．ゲノム編集製品の概要 製品名 GeneArt CRISPR all-in-one plasmid GeneArt CRISPR mRNA GeneArt Cas9 Protein GeneArt CRISPR GeneArt TAL lentiviral libraries effectors ・マルチプレクシングおよび ・分裂性および非分裂性の ・基礎的 TAL IP 下の権利を 哺乳類細胞に導入可能 スクリーニングが可能 含む TALEN 技 術を提 供 ・CRISPR gRNA の長期発 ・優れた切断効率 する唯一の製品 ・細胞内における迅速なター ・正確 現が可能 ンオーバーにより非特異 ・機能損失スクリーニング ・デザインの制約なし 的な切断が制限 ・細 胞 特 異 的 なプ ロモ ー ターは不要 ・ランダムなインテグレー ションの心配なし 製品の利点 ・デザインが容易なゲノム編 ・マルチプレクシングおよび スクリーニングが可能 集システム ・プラスミド発現 Cas9 およ ・細 胞 特 異 的 なプ ロモ ー ターが不要 び gRNA を含むオールイ ・ランダムなインテグレー ンワンフォーマット ションの心配なし ・トランスフェクトされた 細胞を濃縮するためのレ ポーターシステムを含む 修飾オプション 遺伝子ノックアウト、遺伝子 遺伝子ノックアウト、遺伝子 遺伝子ノックアウト、 ノックイン ノックイン 遺伝子ノックイン 機能損失スクリーニング 遺伝子ノックアウト、 遺伝子ノックイン、 遺伝子抑制、遺伝子活性化 デザインの容易さ シンプルで迅速なデザイン 合成キットによるシンプルで gRNA 合成キットによるシン すぐに使えるレンチウイルス フレキシブル、 8 プロセス 迅速なデザインプロセスで、 プルで迅速なデザインプロ 粒子 クローニングは不要 セスで、クローニングは不要 デザインに制約なし マルチプレックス 推奨されません 可能 可能 ハイスループットスクリーニ 使用されることは稀 ング デザイン要件 PAM 部位（NGG） PAM 部位（NGG） PAM 部位（NGG） PAM 部位（NGG） デザインに制約はありませ んが、エフェクター活性のた めに DNA 結合ドメインに特 定のスペースが必要 認識の種類 RNA-DNA RNA-DNA RNA-DNA RNA-DNA タンパク質 -DNA Stem cell introduction ゲノム編集に技術革新をもたらしたツール CRISPR 特異的なターゲット化を極めてフレキシブルに実現することを可能にする CRISPR-Cas9 システムを活用することにより、ゲノム 編集のためのパワフルなツールを構築することが可能となります。CRISPR-Cas9 技術は様々な種類の細胞において標的遺伝子 リプログラミング の編集を可能としますが、CRISPR-Cas9 システムにおけるエンドヌクレアーゼ切断特異性は RNA 配列によりガイドされているた め、目的に応じたガイド RNA 配列を構築し、Cas9 エンドヌクレアーゼと共にターゲットとする細胞に注入することにより事実上あ らゆるゲノム遺伝子座を標的とすることが可能となります（図 5） 。当社がご提供する異なるフォーマットの CRISPR ツールである、 CRISPR-Cas9 all-in-one expression plasmid、Cas9 mRNA、Cas9 protein、または CRISPR lentiviral library service から、お 客様の研究ニーズに応じた製品をお選びいただけます。 製品の詳細はこちらをご覧ください。 www.thermofisher.com/crispr トランスフェクション 当社が提供する豊富な CRISPR-Cas9 デリバリーフォーマット IVT gRNA GeneArt CRISPR vector with OFP reporter IVT gRNA GeneArt CRISPR vector with CD4 reporter Cas9 protein ゲノム編集 Cas9 mRNA GeneArt CRISPR all-in-one GeneArt CRISPR GeneArt plasmid mRNA protein Lipofectamine MessengerMAX Transfection Reagent iPSCs Control Control Lipofectamine CRISPRMAX Cas9 Transfection Reagent トランスフェクション直後 H9 ESCs gRNA + Cas protein PSC 培養 Lipofectamine 3000 Transfection Reagent トランスフェクション後48 時間 gRNA + Cas protein 分化誘導 Cleavage % 0 0 71 83 83 0 0 58 64 58 図 6. Invitrogen™ Lipofectamine™ CRISPRMAX™ トランスフェクション試薬は 最大 55％の切断効率を実現、500ng の Invitrogen™ GeneArt™ Platinum™ Cas9 Gibco™ Human iPS 細胞および H9 ES 細胞へ、GeneArt Cas9/ gRNA リ Nuclease を iPS 細胞に導入 細胞はすべて 24 ウェルプレートフォーマットで、Gibco™ Opti-MEM™ 無血清培地 ( 製品番号：31985062) を用いて培養し、GCD キットで検出しました。 ボ核タンパク質（ RNP）の複合体をトリプリケートでトランスフェクトしま した。トランスフェクションから 48∼72 時間後に、Invitrogen™ GeneArt™ キャラクタリゼーション 図 5. Invitrogen™ GeneArt™ Cas9/gRNA RNP を使用したヒト幹細 胞のゲノム編集 Genomic Cleavage Detection（ GCD）キットを用いて標的部位の切断効 率を確認しました。 Ordering information ゲノム編集実験を効率化する便利なツール GeneArt Genomic Cleavage Detection Kit 迅速かつ確実に標的遺伝子の変異を検出し、ゲノム編集の効率を評価 GeneArt Precision gRNA Synthesis Kit 高収量かつ高濃度なガイド RNA を手軽に合成 GeneArt Genomic Cleavage Selection Kit 切断活性の測定およびヌクレアーゼで編集済みの細胞濃縮が可能 詳細はこちらをご覧ください。 www.thermofisher.com/geneart 9 多能性幹細胞の培養 当社は、多能性幹細胞（ PSC）を培養するために必要とされる試薬を取り揃えています。PSC 研究において良い結果を得るため には、培養条件に細心の注意を払う必要があります。Gibco™ KnockOut™ Serum Replacement（ KSR）から Gibco™ Essential 8™ 培地や細胞療法研究用培地まで、Gibco 製品をご使用いただくことで、信頼性の高い培養を行うことができます。 お客様の研究に最適な PSC 培地は、下記のセクションガイドからお選びください。 表 5. 多能性幹細胞培養用の培地システム アプリケー ション 培地 フィーダー培養、 フィーダー細胞上での リプログラミング、 PSC の分化 フィーダーフリー培養 KnockOut Serum Replacement Gibco StemPro hESC SFM フィーダーフリーかつゼノフリー の培養および増殖、 フィーダーフ リーのリプログラミングおよび PSC の分化 Essential 8 培地 （製品番号 A1517001） Essential 8™ Flex 培地 （製品番号 A2858501） （製品番号 1082801、10828028） （製品番号 A1000701） 推奨される Mouse（ICR）Inacivated Embryonic Fibroblasts 基質 （製品番号 A24903） 推奨される Gibco Collagenase IV 継代方法 （製品番号 17104019） Gibco Geltrex hESC-qualified Ready-To-Use Reduced Growth Factor Basement Membran Matrix （製品番号 A1569601） Collagenase IV Gibco Vitronectin（VTN-N） Recombinant Human Protein, Truncated （製品番号 A14700） Gibco Versene Solution （製品番号 17104019） または （製品番号 15040066） 細胞療法研究用の フィーダーベースおよび フィーダーフリーかつ ゼノフリーの培養 CTS KnockOut SR XenoFree Medium （製品番号 12618012、12618013） Gibco CTS CELLstart Substrate （製品番号 A1014201） Gibco CTS TrypLE Select Enzyme（製品番号 A1285901） または Gibco StemPro EZPassage StemPro EZPassage Disposable Disposable Stem Cell Passaging Stem Cell Passaging Tool Tool （製品番号 23181010） （製品番号 23181010） EZPassage Disposable Stem Cell Passaging Tool （製品番号 23181010） 各製品の詳細はこちらをご覧ください。www.thermofisher.com/pscculture 構成成分が明確で、一貫性の高い幹細胞培養用培地 Essential 8 培地 Essential 8 培地は、幹細胞研究のパイオニアである James Thomsons 氏の研究室で独自に開発されたフィーダーフリー、ゼ ノフリーの培地です。Essential 8 培地には、多能性幹細胞（ PSC）の成長と増殖に欠かせない 8 種類の必須成分のみが含ま れています。iPSC 産生のスケールアップにも有用です。未確定の不純物を含むタンパク質（ BSA など）や他の成分を除去して いるので、培養におけるばらつきが最小限となります。 Essential 8 培地システムは、複数の PSC 用のゼノフリー培養試薬を提供しています。このシステムは、明確な条件下での培養 を提供し、一貫性のある結果を可能にします。 製品の詳細はこちらをご覧ください。www.thermofisher.com/essential8media お客様に最適な PSC 培地は？ お客様に最適な Essential 8 培地システムをお選びください。 PSC の増殖と維持 Essential 8 培地 含有成分が明確で、一貫性の高い iPSC 用フィーダーフリー培地 シングルセル継代などのストレス 環境下での培養 Essential 8 培地 + RevitaCell Supplement 細胞に対するストレスレベルを制御 10 毎日の培地交換から解放される Essential 8 Flex 培地 PSC 培養スケジュールを管理でき、 毎日の培地交換が不要 フィーダー培養からの移行に Essential 8 Adaptation Kit オンフィーダーからフィーダーフリーへの 移行においても PSC の生存と促進 Stem cell introduction PSC培養スケジュールを管理でき、毎日の培地交換が不要 Essential 8 Flex 培地 Gibco™ Essential 8™ Flex 培地は、FGF2 などの PSC 培地に含まれる主要な熱感受性成分の活 性を、より長い期間持続するように改良しました。多能性幹細胞の性能に影響を及ぼすことなく、 リプログラミング 週末の培地交換作業を不要にします。 • フレキシブルな添加スケジュール̶丸 2 日以上にわたり細胞に培地を添加せずに多能性を維持 • E8 培地から簡単に移行可能̶毎日の添加が不要であること以外は、セットアップ、アプリケー ションおよびプロトコールはオリジナルの Essential 8 培地の処方と共通 従来の培地：毎日の培地交換が必要、週7日 Day 1 Day 2 Day 3 Day 4 Day 5 Day 6 Day 7 100 Essential 8 Flex 培地 75 50 他社製品 1 他社製品 2 25 継代 培地交換 培地交換 培地交換 継代 培地交換 トランスフェクション 培養スケジュールの比較 FGF2 活性（％） • 実証済み̶オリジナルの Essential 8 培地に基づいて、長期間の培養における多能性および正常な核型の維持について実証済み 他社製品 3 培地交換 0 Day 1 継代 Day 2 Day 4 培地交換 24 48 72 時間 （h） Day 5 図 7. PSC 培養用培地における FGF2 活性の経時変化 休日 休日 休日 他のフィーダーフリー PSC 培養用培地とは異なり、Essential 8 培地交換 なし 培地交換 なし 培地交換 なし 化されています。活性が高められることによって、毎日培地を交換 継代 ゲノム編集 0 Essential 8 Flex 培地：毎日の培地交換が不要 培地交換 Flex 培地は、FGF2 などの不安定な成分の活性を高めるように最適 する必要のない培養が可能となります。 PSC 培養 PSC培養用マトリックス 当社では、馴化時間を最小限に抑え、細胞パフォーマンスを最大限に高めるように デザインされた細胞外マトリックス（ECM）を提供しています。 分化誘導 フィーダー層上で細胞を培養する場合でも、あるいはより要求度の高いアプリケー ションのためにフィーダーフリーかつゼノフリーの条件が必要とされる場合でも、 Gibco 製品はお客様の多能性幹細胞を適切な環境で培養するのに必要なあらゆる 選択肢を取りそろえています。 お客様の研究に最適なマトリックスおよび各製品の詳細は、こちらをご覧ください。 キャラクタリゼーション www.thermofisher.com/pscmatrices 表 6. 細胞外マトリックスの概要 最も一般的に使用されている、 最も一般的に使用されている ESC および iPSC 培養のため 基底膜の簡単なソリューション の基底膜マトリックス Gibco Geltrex LDEV-Free hESCqualified Reduced Growth Factor Basement Membrane Matrix （製品番号 A1413301） アプリケーション フィーダーフリーの培養 Geltrex hESC-qualified Readyto-Use Reduced Growth Factor Basement Membrane Matrix （製品番号 A1569601） フィーダーフリーへの スムーズな移行に最適 Vitronectin (VTN-N) rhLaminin-521 Recombinant Human Protein, （製品番号 A29249） Truncated （製品番号 A14700） フィーダーフリーの培養 フィーダーフリーかつゼノフリー の培養 フィーダーフリーかつゼノフリー の培養 推奨される培地 の組み合わせ StemPro hESC SFM または Essential 8 培地 StemPro hESC SFM または Essential 8 培地 Essential 8 培地 Essential 8 培地 材料の由来 マウス EHS 腫瘍細胞培養物； 組成不明 マウス EHS 腫瘍細胞培養物； 組成不明 ヒト（組換え） ；組成既知 ヒト（組換え） ；組成既知 Ordering information 製品名 Essential 8 培地との使 オンフィーダーから 用に最適化 11 PSCの凍結保存 より効率的な細胞の回復が 必要ですか？ 凍結保存は、研究において重要で、かつ多くの場合は困難なステップです。 RevitaCell Supplement は、 PSC 培地に併用する ことで、 解凍後の細胞生存率を改善するように最適 このため、当社では、お客様の研究およびリソースニーズに応えるようにデザ 化された回復用サプリメントです。 インされた Gibco 凍結保存技術を提供しています。 詳細はこちらをご覧ください。 www.thermofisher.com/revitacell 表 7. 凍結保存ソリューションの概要 Gibco PSC Cryopreservation Kit Gibco Synth-a-Freeze Cryopreservation Medium Gibco Recovery Cell Culture Freezing Medium 多能性幹細胞（PSC）の解凍後の細胞生存率 幅広い種類の細胞の凍結と保存に最適 を最大限に高めるように最適化された凍結保 存培地および回復用サプリメント 多様な哺乳類細胞の凍結保存に適した培地 テスト済みの細胞 iPSC、ESC、PBMC、iPSC 由来の心筋細胞 ヒトケラノサイト、MSC、NSC、その他の 初代細胞 CHO-S、CHO-K1、HEK 293、Jurkat、 NIH 3T3 化学組成 凍結保存培地：ゼノフリー 回復用サプリメント：動物由来成分不含 ケミカルディファイン 動物由来成分不含 FBS 含有 Ready-to-use 回復用サプリメントの添付 ○ ○ × ○（RevitaCell Supplement） CTS 製品 N/A 製品番号 A2644601 ○ × Gibco CTS Synth-a-Freeze Cryopreservation Medium N/A （製品番号 A1371301） A1254201 12648010 製品の詳細はこちらをご覧ください。www.thermofisher.com/cryopreservation PSC培養のためのキャラクタリゼーションツール 基本的あるいは高度なキャラクタリゼーションのいずれを実施する場合においても、人工多能性幹細胞（ iPSC）研究においては バリデーションが極めて重要です。当社では、細胞の多能性を迅速に評価する Alkaline Phosphatase Live Stain から、多能性お よび三胚葉への分化能を確認する Applied Biosystems™ TaqMan® hPSC Scorecard™ Panel まで、キャラクタリゼーションに必 要とされる信頼性の高いツールを取り揃えています。 各製品の詳細はこちらをご覧ください。www.thermofisher.com/characterization 表 8. キャラクタリゼーション製品の概要 細胞の健全性を犠牲に 特異的でフレキシブルな 効率的で簡便な未分化 幹細胞のキャラクタリ しない、多能性の簡便な PSC の同定 ゼーション 同定 多能性および三胚葉へ の分化能を評価 製品名 Alkaline Phosphatase Live Stain TaqMan hPSC Scorecard Panel（13 ぺージ参照） 製品番号 A14353 結果の特異性 試験後の生存性 反応時間 Applied Biosystems TaqMan human stem cell pluripotency array 抗体染色 ordering information （22 ぺージ参照） 低（幹細胞および前駆細胞の 染色） 中（ヒト ESC および iPSC の 染色） ○ PSC を通常 20 分以内で染色 染色 × 4∼ 6 時間 × 6∼ 8 時間 データ解析ツールの添付 × × × ○（無償のクラウドベースの ソフトウェア） レファレンススタンダードとの比較解析 × × × ○ ○ ○ N/A N/A EVOS FLoid Cell Imager プロトコールの使用 12 （22 ぺージ参照） 高（PSC および初期胚葉マー 中（ヒト PSC および組織マー カーの遺伝子発現プロファイリ カーの遺伝子発現プロファイリ ング） ング） × PSC を通常 90∼ 120 分で ordering information 4385344 Stem cell introduction 三胚葉への分化能の定量解析 TaqMan hPSC Scorecard Panel TaqMan hPSC Scorecard Panel は、リアルタイム qPCR アッセイと直観的なデータ解析ソフトウェアを使用して、多能性および 三胚葉への分化能を評価します。この hPSC Scorecard アッセイは、Alexander Meissner 博士との共同開発によって開発され、 博士の画期的な論文 [1] に発表されました。このアッセイは、テラトーマ形成に代わり、定量的で時間の節約が可能な代替法となり リプログラミング ます。[2] ● 一回の実験で、細胞を特徴づける主要な 93 遺伝子の発現を定量解析 ● 各遺伝子のプライマー・プローブがプレートにプレーティングされており、誰でも簡便な操作で実施可能 ● 専用のソフトウェア（無償）を用いてリファレンスパネルに対する比較分析を行ない、結果をスコアリング ● スコアリング結果は直感的で分かりやすいグラフ、テーブル、レポートとして出力 5 EB1_Proto3_130430.eds 4 H9-ESC-...50-Day0 Selfrenewal Ectoderm Mesoderm Endoderm H9-EB-Day7 Selfrenewal Ectoderm Mesoderm Endoderm 2 1 0 ゲノム編集 Algorithm sco re 3 トランスフェクション 製品の詳細はこちらをご覧ください。www.thermofisher.com/scorecard -1 -2 -3 -4 Self-renewal H9-ESC-...50-Day0 Ectoderm H9-EB-Day2 Mesoderm H9-EB-Day4 Endoderm H9-EB-Day7 図 8. hPSC Scorecard Analysis Software では、バリデーション 図 9. 多能性および系統マーカーの遺伝子発現結果を一目でわかるよう 結果のグラフ、表、レポートの表示やエクスポートが可能 な形で表示 未分化リファレンスセット（グレーのボックスおよびウィスカ―）に対す PSC 培養 るサンプルスコア（カラ―）のボックスプロットの表示 分化誘導 キャラクタリゼーション 図 10. 各種遺伝子発現量について、未分化リファレンススタンダードと比較した相対的な倍差を色別で表示 Invitrogen™ Pluripotent Stem Cell 4-Marker Immunocytochemistry Kit このキットは、ヒト多能性幹細胞の 4 つの主要マーカーである OCT4、SOX2、SSEA4、TRA-1-60 を検出し、最適なイメージン 製済みバッファーが含まれています。 Invitrogen™ 3-Germ Layer Immunocytochemistry Kit このキットは、ヒト多能性幹細胞から自然に分化した胚葉体の最 適なイメージング解析を提供します。3 胚葉に特徴的で、広く認 められているマーカー（外胚葉：βIII チューブリン、中胚葉：平滑 ・一度に複数のマーカーを計測することで、サンプルごとにより多 くの情報を取得 ・最小限の手間で美しいマルチプレックス画像を生成 ・染色プロトコルから不必要な洗浄ステップを省くことで、時間を 節約し細胞損失を回避 ・最適化された ICC 試薬一式を使用することで、確実にサンプル を処理 Ordering information グ解析をご提供します。高性能の本キットには、最適な染色を実 現するための一次抗体、二次抗体のセット、核 DNA 染色試薬、作 ・高度に特異的な抗体によって、主要なマーカーの発現を確認 各キットおよび他の染色キットの詳細はこちらをご覧ください。 www.thermofisher.com/pscimmunokits 筋アクチン、内胚葉：α- フェトプロテイン）で検出します。 13 分化誘導 基礎研究、創薬、あるいは将来的な臨床アプリケーションなど、幹細胞分化には、再現性と信頼性のある結果を確実にするための 標準化された培養法が必要となります。Gibco の培地、サプリメント、および基質は、目的の細胞系譜への標的分化を行うための 簡単で使いやすいフレキシブルなツールのセットをお届けします。当社の分化製品ポートフォリオは、ワークフローを簡素化し、よ り迅速で効率的なシステムによる分化の制御を可能とします。 表 9． 分化用の培地システムおよび試薬 アプリケーション 14 外胚葉 外胚葉 中胚葉 内胚葉 神経幹細胞への分化 ドーパミン作動性ニューロンへの 分化 心筋細胞への分化 胚体（胚性）内胚葉への分化 培地システム Gibco PSC Neural Induction Medium （製品番号 A1647801） Gibco PSC Dopaminergic Neuron Differentiation Kit （製品番号 A3147701） Gibco PSC Cardiomyocyte Differentiation Kit （製品番号 A2921201） 基質 Geltrex LDEV-Free hESCqualified Reduced Growth Factor Basement Membrane Matrix （製品番号 A1413301） Geltrex LDEV-Free hESCVitronectin (VTN-N) Recombinant Human Protein, qualified Reduced Growth Truncated Factor Basement Membrane Matrix （製品番号 A14700） Laminin Mouse Protein, （製品番号 A1413301） Natural （製品番号 23017015） Gibco PSC Definitive Endoderm Induction Kit （製品番号 A27654SA） Vitronectin (VTN-N) Recombinant Human Protein, Truncated （製品番号 A14700） アッセイ期間 7日 35 日 14 日 2日 作製される細胞タイプ 神経幹細胞 中脳ドーパミン作動性ニューロン 心筋細胞 胚体（胚性）内胚葉 培地フォーマット 50X supplement/500 mL basal, serum-free Serum-free Ready-to-use, xeno-free Ready-to-use, xeno-free Stem cell introduction わずか7日間でPSCから神経幹細胞へ PSC Neural Induction Medium Gibco™ PSC Neural Induction Medium は、わずか 7 日間でヒト多能性幹 リプログラミング 細胞を高効率で神経誘導する無血清培地です。従来の誘導法では時間と手 間がかかり、ばらつきの原因になる胚様体（ EB）形成の中間ステップが必 要でしたが、本培地では多能性幹細胞を直接神経幹細胞（ NSC）へ誘導し ます（図 12） 。PSC Neural Induction Medium を用いて作製した高品質の NSC は、NSC マーカーの発現量が高く、凍結保存、増殖、さらに他の神経 細胞に分化させることが可能です（図 13） 。 トランスフェクション 製品の詳細はこちらをご覧ください。www.thermofisher.com/nscdiff Gibco PSC Neural Induction Medium 神経誘導の 開始 NSC が hPSC 継代 0 2 4 6 ゲノム編集 Day 完成 8 従来の方法による NSC 作製 NSC が 神経誘導の 開始 hPSC 継代 完成 胚様体形成 100 0 2 4 6 8 10 PSC 培養 陽性細胞 Day 120 12 図 12. 従来の方法とは異なり、 Gibco PSC Neural Induction Medium は、時間や手間、 ばらつきの原因となる胚様体（EB）形成の中間ステップが不要 80 60 40 20 分化誘導 0 Oct4 Nestin Sox1 Sox2 図 11.80∼90% の神経誘導効率 キャラクタリゼーション 図 13.Gibco PSC Neural Induction Medium を用いて作製した神経幹細胞（ NSC）は、 NSC マーカーの発現量 が高く、さらに他の神経細胞に分化させることが可能 Invitrogen™ Human Neural Stem Cell Immunocytochemistry Kit は、4 種類の一般的なヒト神経幹細胞マーカーである nestin、 PAX6、SOX1、および SOX2 の簡便なイメージベースの解析 を可能とします。本キットには、一次および二次抗体、核 DNA 染色試薬、および最適化された染色実験用のプリメイドバッ ファーの完全なセットが含まれます。 詳細はこちらをご覧ください。 Ordering information Human NSC Immunocytochemistry Kit • 高特異的な抗体によるキーマーカーの発現確認 • 1 度に複数のマーカーを測定することで、サンプル当たりの 情報をより多く取得可能 • 最小限の労力で、きれいな多重染色画像の取得が可能 • 染色プロトコールにおける不要な洗浄ステップを排除するこ とによって時間の節約と細胞損失の回避が可能 www.thermofisher.com/pscimmunokits 15 iPS細胞を機能性中脳ドーパミン作動性ニューロンへ分化 PSC Dopaminergic Neuron Differentiation Kit Gibco™ PSC Dopaminergic Neuron Differentiation Kit を用いることで、多能性幹細胞 (PSCs) を中脳ドーパミン作動性ニュー ロンへ分化させることができます。多能性幹細胞をドーパミン作動性ニューロンへ分化させる他のプロトコルや市販のソリュー ションは、生物学的な制約があったり、長時間を要したり、明確に定義されていないことがあります。一方、PSC Dopaminergic Neuron Differentiation Kit は、適切な生物学的関連性を維持しながら、より柔軟に迅速にスケーラブルな形で多能性幹細胞を ドーパミン作動性ニューロンへ分化させることが可能です。また、本システムは前駆体細胞集団を維持することができ、増殖や保 存が可能です。 製品の詳細はこちらをご覧ください。www.thermofisher.com/dopadiff A TH B FOXA2 C TH and FOXA2 図 14.成熟ドーパミン作動性ニューロンの典型的な画像 上記は、Dopaminergic Neuron Maturation Medium(ドーパミン作動性ニューロン成熟用培地 ) で底板前駆細胞を 14 日 間成熟させた後、Invitrogen™ Human Dopaminergic Neuron Immunocytochemistry Kit( 製品番号 A29515) を用いて染 色した細胞の画像です。TH を発現するニューロンの大半において、FOXA2 の共発現がみられました。A. 抗 TH ( 緑 )、B. 抗 FOXA2 ( 赤 ) および Invitrogen™ NucBlue™ 試薬 (DAPI 核 DNA 染色試薬 ) ( 青 )、C. 抗 TH と抗 FOXA2 ( 緑および赤 ) のマージ画像 増殖 / 保存 （11 − 20 日） 特異化 （0 − 10 日） • Essential 8 培地で培養した 多能性幹細胞を使用 • 細胞が 20∼40% コンフルエ ントになったら特異化 （specification）を開始 • 2 日おきに培地を交換 • 細胞を分割し、増殖用培地に 成熟 （21 − 35 日） • 細胞を解離し、成熟用培地に 再度播種 • 2 日おきに培地を交換 • 細胞は Day16 で凍結 / 保存可 能、あるい は Day20 まで 培 再度播種 • 2 日おきに培地を交換 • 最短 Day30 でニューロンを 視覚的に確認可能 養し成熟させることが可能 図 15.Essential 8 培地で培養した多能性幹細胞 多能性幹細胞を中脳底板へ特異化、増殖、保存し、35 日間で中脳ドーパミン作動性ニューロンに成熟させることができます。 底板由来の中脳前駆細胞は、10 継代まで増殖させることが可能です。 Human Dopaminergic Neuron Immunocytochemistry Kit Invitrogen™ Human Dopaminergic Neuron Immunocytochemistry Kit は、神経分化の 3 つの主要マーカーである OTX2、FoxA2、チロ シン・ヒドロキシラーゼ (TH) を検出し、最適なイメージング解析をご 提供します。高性能の本キットには、最適な染色を実現するための一 次抗体、二次抗体のセット、核 DNA 染色試薬、作製済みバッファーが 含まれています。 詳細はこちらをご覧ください。 www.thermofisher.com/pscimmunokits 16 • 高度に特異的な抗体によって、主要な細胞マーカーの発現 を確認 • 一度に複数のマーカーを計測することで、サンプルごとに より多くの情報を取得 • 最小限の手間で美しいマルチプレックス画像を生成 • 染色プロトコルから不必要な洗浄ステップを省くことで、 時間を節約し細胞損失を回避 Stem cell introduction わずか8日間で拍動する心筋細胞へ PSC Cardiomyocyte Differentiation Kit Gibco™ PSC Cardiomyocyte Differentiation Kit は、わずか 8 日間で リプログラミング 効率的にヒト多能性幹細胞を心筋細胞に分化させるキットで、無血清 でゼノフリーの 3 種類の培地から構成されます。複数の構成品や長期 間を要する従来の方法とは異なり、本キットでは、すぐに使用可能な培 地フォーマットで、短期間で PSC から心筋細胞を作製することが可能 です。 本キットは、融解・希釈が不要な 3 種類の 1X 培地から構成され、各培 トランスフェクション 地はトータルで連続 14 日間以上続けて使用されます。主要な心筋マー カーを発現し、生理学的に意味のある機能的な心筋細胞を培養液中に 作製し、培養液中に続けて 15 日以上維持することができます。 100% % TNNT2+ cells ゲノム編集 図 16.複数の多能性幹細胞株で高い分化効率を実現 Gibco™ TrypLE™ を 用 い て 解 離した 多 能 性 幹 細 胞 株 を、Gibco™ Geltrex™ でコーティングした容器に一定の密度で播種し、Essential 8 培地で培養しました。3 日間増殖させた後、プロトコルに従い、最適 なコンフルエンシーに達した多能性幹細胞株を PSC Cardiomyocyte Differentiation Kit を用いて誘導し、2 週間培養させました。細胞を収 集し、フローサイトメトリーによって TNNT2+ 細胞の解析を行いまし 80% 60% 40% 20% た。誘導時に細胞が最適なコンフルエンシーに達しているとき、すべ ての細胞株において心筋細胞への高い分化効率が確認されました。 H9 hESC iPSC (CytoTune/Sendai) PSC 培養 0% Gibco Human Episomal iPSC PSC lines 3 Fibroblast-derived control CD71+-derived control 2 HCM (R145W TNNI3) 分化誘導 Beat period (s) HCM (R663H MYH7) 図 17.PSC Cardiomyocyte Differentation Kit を用いて作製 した肥大型心筋症患者の iPS 細胞由来の心筋細胞を、Maestro 1 Multielectrode Array (MEA) プラットフォーム (Axion Biosystems 社製 ) によって電気生理学的に評価 変異を有する心筋細胞の拍動周期を、他の細胞株由来の心筋細胞と 比較したとき、不整脈がはっきりと確認されました。 0 0 20 80 100 キャラクタリゼーション 40 60 Time (s) Invitrogen™ Human Cardiomyocyte Immunocytochemistry Kit は、2 種類の主要な心筋マーカー NKX2.5 および TNNT2/ cTnT の最適なイメージベースの解析を可能とします。本キット には、一次および二次抗体、核 DNA 染色試薬、および最適化 された染色実験用のプリメイドバッファーの完全なセットが含ま れます。 詳細はこちらをご覧ください。 www.thermofisher.com/pscimmunokits Ordering information Human Cardiomyocyte Immunocytochemistry Kit • 高特異的な抗体によるキーマーカーの発現確認 • 1 度に複数のマーカーを測定することで、サンプル当たりの 情報をより多く取得可能 • 最小限の労力で、きれいな多重染色画像の取得が可能 • 染色プロトコールにおける不要な洗浄ステップを排除するこ とによって時間の節約と細胞損失の回避が可能 • 完全で最適化された一連の免疫組織化学試薬を用いた信頼 性の高いサンプル処理 17 2日間で胚体（胚性）内胚葉細胞に誘導 PSC Definitive Endoderm Induction Kit Gibco™ PSC Definitive Endoderm Induction Kit は、ヒト多能性幹細胞 から胚体（胚性）内胚葉へ効率的に誘導するキットで、2 種類のゼノフ リー培地から構成されます。複数の構成品や 5 日以上の期間を要する従 来の方法とは異なり、本キットでは、わずか 2 種類の培地から、たったの 2 日で、多能性幹細胞から 90％以上の誘導効率で CXCR4+/PDGFRα– 胚体（胚性）内胚葉細胞を作製することが可能です（図 19） 。 各培地は 1X 完全培地として提供され、他の成分の混合は一切不要です。 複数の PSC 株において、90％以上の高率で主要な内胚葉マーカーであ る SOX17 および FOXA2 を発現し（図 20） 、ダウンストリームの細胞系 譜への分化が可能です。 H9-ESC CytoTune-iPS 2.0 Sendai-generated line Human Episomal iPSC Line CytoTune-iPS 1.0 Sendai-generated line 図 18.PSC Definitive Endoderm Induction Kit は、エピソーマルベクターや CytoTune キットを用いてリプログラミングした細 胞株を含む hESC や iPSC 細胞株から 90％以上の高効率で胚体（胚性）内胚葉へ誘導 ドットプロットは、様々な細胞株由来の細胞 集団中の CXCR4+/PDGFRα– を示します。各実験において、象限ゲートを設定するために非染色細胞を使用しました。 PSC Definitive Endoderm Induction Kit hPSC 播種 培地 A を添加 培地 B を添加 胚体（胚性）内胚葉細胞 の分化準備完了 胚体（胚性）内胚葉へ分化 Day 0 1 2 3 継代 培地 1を添加 培地 2 を添加 5 6 7 他社製品 S hPSC の馴化および プレ分化 hPSC 培地交換 培地交換 胚体（胚性）内胚葉細胞 の分化準備完了 9 10 胚体（胚性）内胚葉へ分化 Day 0 8 図 19.従来の分化プロトコールとは異なり、PSC Definitive Endoderm Induction Kit は、所要時間が最大半分でプレ分化のステップや培地の混合が不要 SOX17 FOXA2 Oct4 図 20.PSC Definitive Endoderm Induction Kit で処理した hESC の免疫組織化学染色 3 日目に誘導処理した細胞を、内胚葉転写因子の SOX17 および FOXA2、ならびに多能性マーカーの Oct4 で免疫染色しました。核は DAPI（青色）で対比染色し、総細胞数を評価しました。 18 Stem cell introduction 分化：Gibco 成長因子 成長因子は幹細胞の分化を促進し、幹細胞の発達に影響を与えることができます。高品質な Gibco™ ブランドの成長因子は、高 い生物活性、高純度 ( 純度 95%)、マイクログラム当たり <0.1 ng のエンドトキシンレベルを提供すべくデザインされています。 Fibroblast Growth FactorBasic （bFGF, FGF-basic, FGF 2） 線維芽細胞成長因子 リプログラミング Gibco の成長因子は Gibco 培地で検証済みで、適合性が確認されています。 Activin A Activin A は、造血、神経発生、炎症などさまざまな生物 学的プロセスに関わっています。 トランスフェクション この大きなタンパク質ファミリーは、細胞の増殖、成長、分 化を含め、細胞の発達の多くの側面に関わっています。 FGF-basic は、培養下の ES 細胞を未分化状態に維持する うえで不可欠な成分です。 Tumor Necrosis Factor（TNF） 上皮成長因子 腫瘍壊死因子 EGF は、in vivo での特定の細胞の分化において重要な役 TNF は、さまざまな腫瘍細胞株の細胞溶解や細胞性塞栓 割を果たし、外胚葉および中胚葉由来のさまざまな細胞に を引き起こします。TNF は、好中球の走化性、内皮の変化、 とって強力な細胞培養促進因子です。 抗凝固メカニズムの抑制、血管形成の促進など幅広い役 ゲノム編集 Epidermal Growth Factor（EGF） 割をもっています。 PSC 培養 Granulocyte Macrophage Colony-Stimulating Factor（GM-CSF） Vascular Endothelial Cell Growth Factor （VEGF） 顆粒球・マクロファージコロニー刺激因子 血管内皮細胞成長因子 VEGF は、内皮細胞に特化し、血管形成、細胞分裂、血管 透過性の促進などに関わっています。また単球および骨 球の走化性などさまざまな生物学的反応に関わっています。 芽細胞の走化因子であることも確認されています。 分化誘導 GM-CSF は、顆粒球およびマクロファージ前駆細胞の成長 と発達、骨髄芽球および単芽球の刺激と分化の開始、好酸 キャラクタリゼーション Gibco 成長因子の詳細はこちらをご覧ください。www.thermofisher.com/growthfactors Ordering information 19 キャラクタリゼーションおよび解析ツール 幹細胞研究には、多能性の確認や下流実験での細胞の 使用法の決定に役立つ細胞および分子学的ツールが必 要とされます。増殖、タンパク質レベル、遺伝子発現から、 エピジェネティックプロファイルに至る解析まで、お客様 の研究に最適な装置、製品、およびサービスをご用意し ています。 幹細胞解析用ツールの詳細はこちらをご覧ください。 www.thermofisher.com/stemcellanalysis 標識および検出用ツール サンプル調製 幹細胞構造の研究、幹細胞のトレーシングおよびトラッキ スケーラブルで効率的な核酸およびタンパク質の精製技術、 ング、ならびに増殖、生存率、および機能の解析のための ならびに遺伝子発現解析ツール 研究用製品 ™ ™ ● Invitrogen Qdot ナノクリスタル ● Invitrogen™ Alexa Fluor™ 色素 ● nvitrogen™ Alexa Fluor™ 二次抗体および ストレプトアビジン ● ● Invitrogen™ TaqMan™ PreAmp Cells-to-CT™ Kit ● Applied Biosystems™ Protein Expression ● Invitrogen™ RNA 抽出および精製キット ● Invitrogen™ DNA 精製キット サンプル調製キット 一次抗体 ● Alkaline Phosphatase Live Stain ● Invitrogen™ cell health assays ゲノム解析 タンパク質解析 幅広いゲノム解析のための信頼性の高い qRT-PCR および 比色および蛍光アッセイによるタンパク質定量のための シーケンシングプラットフォーム 高品質で使いやすい試薬およびキット ● Applied Biosystems™ TaqMan™ タンパク質解析 ™ ™ ● Applied Biosystems™ TaqMan™ 遺伝子発現アッセイ ● Applied Biosystems™ TaqMan™ miRNA Assays ● Invitrogen Novex マルチプレックスアッセイ ● Applied Biosystems™ TaqMan™ SNP Assays ● Invitrogen™ Novex™ ウェスタン検出用抗体 ● Applied Biosystems™ TaqMan™ CNV Assays ● Invitrogen™ Novex™ ELISA キット ● Applied Biosystems™ AuthentiFiler™ PCR Amplification Kit ● Invitrogen™ Bolt™ タンパク質分離および検出システム ● Ion Ampliseq™ パネル ● ウェスタンブロッティングキット 多能性幹細胞マーカー抗体 ChIP、ICC、IF、IHC、フローサイトメトリー、ウェスタンブロッ ト、ELISA など、多能性幹細胞のキャラクタリゼーションに使用す 抗体検索ツールでは、ターゲット、ホスト生物種、モノクローナル あるいはポリクローナル抗体、その他の条件で検索が可能です。 るさまざまなアプリケーションに対して、Invitrogen ブランドでは 20 各々に対応する幹細胞マーカー抗体をご用意していします。多数 の幹細胞ターゲットを網羅した 40,000 を超える抗体ラインナッ あらゆる幹細胞ターゲットに対応する抗体の詳細はこちらをご覧 ください。 プから、研究に最適な抗体を見つけていただくことができます。 www.thermofisher.com/antibodies Neon Transfection System Invitrogen™ Neon™ Transfection System は、幹 は、デザイン性が高く、デジタル倒立顕微鏡の 細胞や血球系細胞などのトランスフェクション困 ワークステーション要素が一体化されたコンパク 難な細胞に有用な次世代エレクトロポレーション トなオールインワン顕微鏡です。お客様が迅速 装置です。エピソームベクターの体細胞への導 にデータを取得し、次へと進めることができるよ 入のほか、ゲノム編集にも幅広く活用できます。 う、お客様を第一に考えて開発されたラインナッ www.thermofisher.com/neon リプログラミング EVOS セルイメージングシステム Invitrogen™ EVOS™ セルイメージングシリーズ Stem cell introduction 幹細胞のキャラクタライゼーションおよび 分析のための解析装置 プになっています。最適な機種をお探し下さい。 Attune NxT フローサイトメーター ＆オートサンプラー トランスフェクション www.thermofisher.com/evos アコースティックフォーカシングテクノロジー （音 Countess II 自動セルカウンター Invitrogen™ Countess™ II 自動セルカウンター は、細胞カウントを迅速かつ正確に行うことが 可能です。タッチスクリーンでの直観的な操 フォーカス機能による実験誤差の最小化で手 間を大幅に削減します。取得したイメージ画像 データは画面上で見ることができ、計測が正 確に行われているか確認して次の実験に進む ことができ、安心です。また Countess Ⅱ FL な www.thermofisher.com/countess え、最大 4レーザー、16の検出パラメータまで構 成可能なベンチトップ型のフローサイトメーター です。シンプルな構造のため目詰まりを防止し、 従来のサイトメーターと比較して最大 10倍のサ ンプル解析スピードを提供します。チューブや プレート間の交換も数秒で容易に行うことがで き、ロボットによる自動化に対応した Invitrogen™ Attune™ Autosamplerによって、お使いの 96あ るいは 384ウェルプレートで自動化することがで PSC 培養 ら、蛍光測定機能を追加できます。 フローサイトメーターは、高い性能と精度を備 ゲノム編集 作、約 10 秒の正確な細胞数のカウント、オート 響技術）を活用した Invitrogen™ Attune™ NxT きます。従来、検出できなかったターゲットを検 出できるのが Attune NxTです。 www.thermofisher.com/attune StepOnePlus リアルタイム PCR システム Ion S5™ / Ion S5™ XL システム タイム PCRシステムは、タッチパネルの操作画 カートリッジ型試薬の採用により、セットアップ 面と直感的なソフトウェアを提供し、利便性を追 時のハンズオンタイムが 15 分以下になり、次 究したコンパクトタイプのシステムです。簡単に 世代シーケンシング（ NGS ）技術をより身近 多能性幹細胞の細胞特性を評価する TaqMan に、より簡 単にご 使 用 いただけます。 3 種 類 のチップ から、目 的に最 適 なスル ー プットの チップを選択可能な上に、 200bp 2.5 時間、 www.thermofisher.com/steponeplus 400bp 4 時間の高速シーケンスを実現し、簡 キャラクタリゼーション hPSC Scorecard Panel（１３ページ）に対応し ます。 分化誘導 Applied Biosystems™ StepOnePlus™ リアル 便さとスピードを兼ね備えた次世代シーケン スワークフローをご提供します。 www.thermofisher.com/ions5 Ion PGM™ システム 高性能と拡張性を備えた Applied Biosystems™ ターゲットリシーケンシングや、微生物・ウイル QuantStudio™ ファミリーは、お 客 様 のどのよ スゲノム解析に適した次世代シーケンサです。 うなニーズにも最適なソリューションを提供し Ion AmpliSeq™ テクノロジーと組み合わせる ます。リアルタイム PCR からデジタル PCR ま ことにより、FFPE サンプルのような微量で困 で幅広いアプリケーションに対応し、研究の変 難 な サ ンプ ル から、網 羅 的 な 遺 伝 子 変 異 解 化にも柔軟に対応します。お客様に最適なプ 析を容易に行うことができます。 ラットフォームをお選びください。 www.thermofisher.com/pgm Ordering information QuantStudio ファミリー ( リアルタイム PCR/ デジタル PCR システム ) www.thermofisher.com/quantstudio 21 Ordering information 製品名 体細胞および前駆細胞 製品番号 StemPro Human Adipose-Derived Stem Cells StemPro Human Adipose-Derived Stem Cell Kit StemPro BM Mesenchymal Stem Cells StemPro MSC SFM XenoFree StemPro CD34+ Cell Kit StemPro-34 SFM Gibco CTS OpTmizer T Cell Expansion SFM CTS Immune Cell Serum Replacement StemPro Neural Stem Cells StemPro NSC SFM Human Dermal Fibroblasts, Adult R7788115 R7788110 A15652 A1067501 A14059 10639011 A1048501 A2596101 A15654 A1050901 C0135C サイズ 価格 1 バイアル 1 キット 1 x 106 cells 1 キット 0.5 x 106 cells/mL 500 mL 1,000 mL 50 mL 1 x 106 cells 1 キット 1 バイアル ¥75,000 ¥100,800 ¥87,600 ¥50,300 ¥151,200 ¥31,300 ¥16,400 ¥22,000 ¥78,400 ¥36,000 ¥53,700 A15960 A14703 1 キット 1 tube ¥114,000 ¥90,400 L3000001 L3000008 LMRNA001 LMRNA008 MPK5000S MPK5000 CMAX00001 CMAX00008 13778075 IVF3001 0.1 mL 0.75 mL 0.1 mL 0.75 mL 1 セット 1 ユニット 0.1 mL 0.75 mL 0.75 mL 1 mL ¥9,900 ¥70,800 ¥10,400 ¥72,600 ¥1,164,000 ¥1,000,000 ¥10,800 ¥71,800 ¥72,700 ¥158,400 15 μg 10 反応 10 反応 ¥84,000 ¥206,200 ¥206,200 お問い合わせ お問い合わせ 20 反応 10 反応 お問い合わせ お問い合わせ リプログラミング Epi5 Episomal iPSC Reprogramming Kit Episomal iPSC Reprogramming Vectors トランスフェクション Lipofectamine 3000 Transfection Reagent Lipofectamine MessengerMAX Transfection Reagent Neon Transfection System Starter Pack Neon Transfection System Lipofectamine CRISPRMAX Cas9 Transfection Reagent Lipofectamine RNAiMAX Transfection Reagent Invivofectamine 3.0 Reagent ゲノム編集 GeneArt CRISPR Nuclease mRNA GeneArt CRISPR Nuclease Vector with CD4 Enrichment Kit GeneArt CRISPR Nuclease Vector with OFP Reporter Kit GeneArt CRISPR T7 Strings DNA GeneArt CRISPR U6 Strings DNA GeneArt Genomic Cleavage Detection Kit GeneArt Genomic Cleavage Selection Kit GeneArt Platinum Cas9 Nuclease GeneArt Precision gRNA Synthesis Kit GeneArt TALs PSC培養 Essential 8 Flex Medium Essential 8 Medium RevitaCell Supplement Essential 8 Adaptation Kit Collagenase IV StemPro EZPassage Disposable Stem Cell Passaging Tool StemPro hESC SFM Gibco Versene Solution Essential 6 Medium KnockOut Serum Replacement CTS KnockOut SR XenoFree Medium CTS TrypLE Select Enzyme A29378 A21175 A21174 お問い合わせ お問い合わせ A24372 A27663 B25642 B25640 B25641 A29377 お問い合わせ 10 μg 25 μg 75 μg 25 反応 ¥48,100 ¥48,100 ¥43,000 ¥85,000 ¥180,000 ¥87,000 お問い合わせ お問い合わせ 500 mL 500 mL 5 mL 1 キット 1g A2858501 A1517001 A2644501 A25935 17104019 23181010 A1000701 15040066 A1516401 10828010 10828028 12618012 A1285901 10 ユニット 1 キット 100 mL 500 mL 100 mL 500 mL 100 mL 100 mL ¥31,000 ¥24,500 ¥14,300 ¥36,900 ¥38,700 ¥25,200 ¥52,200 ¥3,200 ¥19,200 ¥14,500 ¥52,800 ¥18,600 ¥4,500 A14700 A29248 A24903 A1569601 A1413301 A1014201 1 mL 100 μg 1 mL 50 mL 1 mL 2 mL ¥6,000 ¥15,800 ¥3,300 ¥5,900 ¥5,200 ¥38,200 A2644601 A1371301 12648010 A2644501 A1254201 50 mL 50 mL 50 mL 5 mL 50 mL ¥21,900 ¥11,700 ¥12,600 ¥14,300 ¥13,100 マトリックス Vitronectin (VTN-N) Recombinant Human Protein, Truncated rhLaminin-521 Gibco Mouse (ICR) Inactivated Embryonic Fibroblasts Geltrex hESC-qualified Ready-To-Use Reduced Growth Factor Basement Membrane Matrix Geltrex LDEV-Free hESC-qualified Reduced Growth Factor Basement Membrane Matrix CTS CELLstart Substrate 凍結保存 PSC Cryopreservation Kit CTS Synth-a-Freeze Cryopreservation Medium Recovery Cell Culture Freezing Medium RevitaCell Supplement Synth-a-Freeze Cryopreservation Medium 22 PSC Neural Induction Medium PSC Dopaminergic Neuron Differentiation Kit PSC Cardiomyocyte Differentiation Kit PSC Definitive Endoderm Induction Kit bFGF Recombinant Human Protein EGF Recombinant Human Protein GM-CSF Recombinant Human Protein Activin A Recombinant Human Protein TNF Recombinant Human Protein VEGF Recombinant Human Protein A1647801 A3147701 A2921201 A27654-SA 13256029 PHG0311 PHC2015 PHC9564 PHC3015 PHC9394 サイズ 価格 500 mL 1 キット 1 キット 1 キット 10 μg 100 μg 10 μg 10 μg 10 μg 10 μg ¥58,800 ¥304,000 ¥47,800 ¥85,300 ¥51,300 ¥14,200 ¥37,700 ¥66,800 ¥21,200 ¥27,000 2 x 96 well 2 x 96 well 1 x 384 well 1 x 384 well 50 μL 4 cards 50 反応 50 反応 50 反応 50 反応 40 反応 40 反応 40 反応 20 反応 20 反応 40 反応 50 反応 100 μg 5 μg 100μg 100 μg 100 μg 100 μL 100 μg 100 μg 100 μg 100 μg 100 μg 100 μg 100 μg 100 μg ¥96,000 ¥70,500 ¥89,000 ¥50,600 ¥32,800 ¥227,000 ¥46,700 ¥46,700 ¥46,700 ¥46,700 ¥56,100 ¥56,100 ¥86,400 ¥86,400 ¥100,800 ¥86,400 ¥56,000 ¥56,500 ¥61,000 ¥61,000 ¥56,500 ¥61,000 ¥51,000 ¥61,000 ¥71,400 ¥56,500 ¥56,500 ¥56,500 ¥61,000 ¥61,000 ¥61,000 リプログラミング 製品番号 Stem cell introduction 製品名 分化誘導 キャラクタリゼーション ゲノム編集 PSC 培養 分化誘導 A15871 A15876 A15872 A15870 A14353 4385344 A24879 A24882 A25528 A25618 A25526 A25525 A24881 A25538 A24354 A29515 A25973 MA1980 491028 710659 MA1016 MA1017 A13998 720030 481400 MA1022 MA1020 MA1021 MA1144 411000 411100 トランスフェクション TaqMan hPSC Scorecard Kit , Fast 96-well TaqMan hPSC Scorecard Panel, Fast 96-well TaqMan hPSC Scorecard Kit , 384-well TaqMan hPSC Scorecard Panel, 384-well Alkaline Phosphatase Live Stain TaqMan Human Stem Cell Pluripotency Array AlexaFluor 555 Tra-1-60 Live Cell Imaging Kit AlexaFluor 594 Tra-1-60 Live Cell Imaging Kit AlexaFluor 488 CD44 Live Cell Imaging Kit AlexaFluor 488 Tra-1-60 Live Cell Imaging Kit PSC Immunocytochemistry Kit (OCT4, SSEA4) PSC Immunocytochemistry Kit (SOX2, TRA-1-60) Pluripotent Stem Cell 4-Marker Immunocytochemistry Kit 3-Germ Layer Immunocytochemistry Kit Human Neural Stem Cell Immunocytochemistry Kit Human Dopaminergic Neuron Immunocytochemistry Kit Human Cardiomyocyte Immunocytochemistry Kit c-Myc Antibody DNMT3b Antibody KLF4 Antibody LIN28 Antibody NANOG Antibody OCT4 Antibody SALL4 Antibody SOX 2 Antibody SSEA-1 Antibody SSEA-3 Antibody SSEA-4 Antibody SSEA-5 Antibody TRA-1-60 Antibody TRA-1-81 Antibody Gibco カスタム培地 細胞培養に必要とされるニーズは全て同じではないため、当社では定評と信頼のある高品質の Gibco™ 培地を、お客様のご要望に合わ キャラクタリゼーション せてカスタマイズした特注培地として提供しています。液体培地の多くは、米国の cGMP* 準拠のカスタム CTS 製品として製造すること が可能です。 カスタムパッケージングオプション 大規模な臨床用または商業用のバイオ製造アプリケーション Gibco™ カスタム培地の包装は、お客様のご要望に最も合う形 用のカスタム培地については、米国本社のバリデーション済 態をお選びいただけます。液体培地および乾燥粉末培地につ cGMP* 準拠の受託サービスにお任せください いて、ボトルおよびバッグの形態で、小、中、大規模スケール • 液体培地は、10L から 10,000L までのバッチ生産が可能 のニーズに対応する多様なパッケージサイズのオプションを提 • 乾燥粉末培地（DPM）は、１㎏から 8,000kg までのバッチ生 供しています。 Ordering information 大規模 cGMP* カスタム培地 産が可能 • Advanced Granulation Technology ™（ AGT ™）培地は 50kg から 6,000kg までのバッチ生産が可能 カスタム培地に関するお問い合わせ、およびお見積をご希望の方は、弊社営業担当または販売代理店様までお問い合わせください。 *cGMP：米国連邦規則集 CFR Title 21, part210“current Good Manufacturing Practice”を意味しており、本邦における薬機法下のGMPとは同一ではありません。 23 参考文献 1. Bock C, Kiskinis E, Verstappen G et al. (2011) Reference Maps of human ES and iPS cell variation enable high-throughput characterization of pluripotent cell lines. Cell 144(3):439–452. 2. Tsankov AM, Akopian V, Pop R et al. (2015) A qPCR Scorecard quantifies the differentiation potential of human pluripotent stem cells. Nat Biotechnol 33(11):1182–1192. 研究用にのみ使用できます。診断目的およびその手続上での使用はできません。 記載の社名および製品名は、 弊社または各社の商標または登録商標です。 For Research Use only. Not for use in diagnostic procedures. © 2016 Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved. All trademarks are the property of Thermo Fisher Scientific and its subsidiaries unless otherwise specified. CytoTune is a trademark of DNAVEC Corporation. Essential 6 and Essential 8 are trademarks of Cellular Dynamics International, Inc. TaqMan is a trademark of Roche Molecular Systems, Inc., used under permission and license. Axion Biosystems and Maestro are trademarks of Axion Biosystems. 記載の価格は2016年8月現在のメーカー希望小売価格です。消費税は含まれておりません。 価格、 製品の仕様、 外観、 記載内容は予告なしに変更する場合がありますので予めご了承ください。 標準販売条件はこちらをご覧ください。www.thermofisher.com/jp-tc サーモフィッシャーサイエンティフィック ライフテクノロジーズジャパン株式会社 本社：〒108-0023 東京都港区芝浦 4-2-8 テクニカルサポート オーダーサポート 営 業 部 0120-477-392 TEL：03-6832-6980 TEL：03-6832-9300 facebook.com/ThermoFisherJapan www.thermofisher.com [email protected] FAX：03-6832-9584 FAX：03-6832-9580 @ThermoFisherJP 販売店 GIB070-A1608TY
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