〔栄養繁殖系作物のウイルスフリー苗作出と大量増殖法の開発〕 ブバルディアの培養増殖における内生菌感染の影響 ～培養シュートの増殖，発根および成長量の評価～ 鈴木克彰・宮下千枝子・菅原優司*・竹内浩二*2・篠原弘亮*3 （園芸技術科・*生産環境科・*2 島しょセ大島・*3 東京農大） -------------------------------------------------------------------------------【要 約】大島のブバルディア基幹２品種に感染している Rhodanobacter 属の内生菌は， 培養シュートの生育に影響を及ぼす。感染シュートは無菌シュートに比べて，培養中の増 殖率は低いが，挿し木発根率は高く，その後の初期成長も優れる。 -------------------------------------------------------------------------------【目 的】 ブバルディアの無病苗で培養シュートの増殖効率が低いことが問題となっている。これ までに大島基幹２品種が Rhodanobacter 属の内生菌に感染していることを明らかにした。 本試験では，内生菌感染の有無が培養シュートの増殖と発根に及ぼす影響を明らかにする。 【方 法】 １．供試材料：「チェリーピンク(以下，ピンク)」と「ヨホワイト（以下，ホワイト）」の ２品種で，生長点培養由来の，内生菌に感染した培養シュート（以下，感染シュート） および非感染の培養シュート（以下，無菌シュート）を供試した。 ２．増殖試験：約３cm の感染または無菌シュートを各 10 本供試して培養を開始し，以後 １ヵ月ごとに継代培養を行った。継代培養では，１cm 以上伸長した節間部位でシュート を切り分けて増殖した。培養開始から３ヵ月後にシュート数を調査し，増殖率を評価し た。なお，培地は BA1.0mg/L＋NAA0.01mg/L を添加した MS 培地（pH5.8）を用い，培養条 件は 100μmol･m-2･s-1，16 時間明条件，温度 24℃とした。 ３．発根試験：試験区は，感染の有無とシュートの部位（頂芽・側芽）を組み合わせた４ 区とし，１区 10～20 本×８反復とした（図１） 。約３cm のシュートをバーミキュライト に挿し木した後，24℃の培養室内で順化を行った。１ヵ月後に発根率と成長度（｛（挿し 木 1 ヵ月後の生体重）－（挿し木時の生体重） ｝／挿し木時の生体重）を調査した。 【成果の概要】 １．増殖率：３ヵ月間の継代培養でシュートを増殖した結果，２品種ともに，無菌シュー トは感染シュートより常に増殖本数が多かった（図２）。３ヵ月後の増殖本数を比較する と， 「ピンク，ホワイト」の感染シュートが各々88，122 本であったのに対し，無菌シュ ートは各々201 本（2.3 倍），302 本（2.5 倍）であり，増殖率が顕著に高かった。 ２．挿し木シュートの発根率：２品種の挿し木シュートの発根率は頂芽・側芽ともに，無 菌シュートよりも感染シュートの方が高い傾向であった（図３）。また，２品種ともに， 頂芽は側芽よりも発根率が高い傾向であった。 ３．挿し木シュートの成長度：２品種の挿し木シュートの成長度は頂芽・側芽ともに，無 菌シュートよりも感染シュートの方が有意に高かった（図４）。また，２品種ともに，頂 芽は側芽よりも成長度が高かった。 ４．まとめ：内生菌の有無は培養シュートの生育に影響し，シュートの増殖率は無菌シュ ートで高く，挿し木時の発根率と成長度は感染シュートで高いことが明らかとなった。 頂芽：茎頂を含むシュート 側芽：頂芽下の 1 節を含むシュート 図１ 増殖本数 250本 発根試験に供試した培養シュートの各部位の名称 増殖本数 350本 ピンク ホワイト 302 200本 201 無菌 感染 150本 300本 無菌 250本 感染 200本 88 100本 150本 122 71 91 100本 41 50本 10 10 19 14 開始時 1ヵ月後 48 50本 0本 15 0本 図２ 発根率 2ヵ月後 3ヵ月後 開始時 1ヵ月後 2ヵ月後 3ヵ月後 継代培養におけるシュートの増殖に及ぼす内生菌感染の影響 発根率 頂芽 100% 80% 25 10 10 98% 88% 77% 75% 側芽 100% 80% 60% 60% 40% 40% 20% 20% 72% 58% 63% 45% 0% 0% 無菌 感染 ピンク 図３ 無菌 感染 ホワイト 挿し木シュートの発根率に及ぼすシュート部位および内生菌感染の影響 成長度 0.95 1.0 無菌 感染 ピンク 無菌 感染 ホワイト 成長度 頂芽 側芽 1.0 0.84 0.8 0.8 0.6 ** 0.49 ** 0.6 0.48 0.41 0.40 0.4 0.4 ** ** 0.20 0.23 無菌 感染 ピンク 無菌 感染 ホワイト 0.2 0.2 0.0 0.0 無菌 感染 ピンク 無菌 感染 ホワイト 図４ 挿し木シュートの成長に及ぼすシュート部位および内生菌感染の影響 成長度＝｛（挿し木 1 ヵ月後の生体重）－（挿し木時の生体重） ｝／挿し木時の生体重 **: P <0.01（t 検定）
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