各種耐性菌に対する Bio Ozone B z n Nano an Water a ( BON B ) の殺菌効果 Moe Chou1, 伊藤輝代1, 平松啓一1, ○荒川真一2, 和泉雄一2, 眞野喜洋3 1順天堂大学 2東京医科歯科大学 3東京医科歯科大学 医学部 細菌学講座 歯学部附属病院 歯周病科 医学部附属病院 高気圧治療部 4オゾンナノバブル水協力 株式会社REO研究所 目的 的 各種耐性菌に対してのBio Ozone Nano Water (BON)の殺菌効果を調べる. 材料と方法 細菌 Escherichia coli NIHJ JC2 Staphylococcus aureus N315 (MRSA) Staphylococcus aureus: hetero VISA Mu3, Mu3 VISA;Mu50, HIP PC, HIP NJ, HIP MI (MRSA) Enterococcus faecalis NCTC12201, NCTC12203 (VRE) Enterococcus faecium NCTC12202, NCTC12204 (VRE) Pseudomonas aeruginosa JICC 3, 4, 5, 6 (MDRP) Staphylococcus p y aureus ATCC29213 N315 Mu3(hetero-VISA) Mu50(VISA) VISA HIP NJ VISA HIP PC VISA HIP MI TEC VCM GM AMK CPFX LVFX 1 0.5 0.5 4 1 0.125 1 1 1 32 1 0.125 16 3 256 32 32 0.125 256 5 256 64 32 128 16 6 2 128 32 32 16 6 0.5 32 32 32 32 6 128 64 128 8 IPM 0.125 0.06 >256 32 8 2 16 CZX 2 2 >256 >256 >256 64 256 CEZ ABPC 1 0.5 128 16 >256 32 >256 16 128 8 128 16 >256 64 TC 1 0.25 16 32 0 25 0.25 0.25 0.25 EM 1 >256 >256 >256 >256 >256 >256 TEC,teicoplanin;VCM, , p ; , vancomycin; y ; GM,, ggentamicin;; AMK, amikacin; CPFX, ciprofloxacin; LVFX, levofloxacin; IPM,, imipenem; pe e ; CZX, C , ce ceftizoxim; o ; CEZ, C , cefazolin; ce o ; ABPC, C, ampicillin; pc ; TC, tetracycline; EM, erythromycin Enterococci E.faecidis f E.faecium E.faecalis E.faecium E.faecalis E.faecium ATCC 19433 ATCC 19434 NCTC 12201(VRE) NCTC12202(VRE) NCTC 12203(VRE) NCTC 12204(VRE) TEC 0.25 1 >256 128 >256 128 VCM GM AMK CPFX LVFX 1 32 256 1 2 1 32 128 16 32 >256 >256 >256 1 2 >256 16 64 4 8 >256 >256 >256 1 16 >256 32 64 4 8 IPM 1 4 4 64 1 64 CZX CEZ ABPC TC EM >256 128 1 0.5 2 >256 256 4 0.25 4 >256 128 2 32 >256 >256 >256 32 32 >256 >256 64 2 128 >256 >256 >256 32 32 >256 TEC,teicoplanin;VCM, vancomycin; GM, gentamicin; AMK, amikacin; CPFX, ciprofloxacin; LVFX, levofloxacin; IPM imipenem; CZX, IPM, CZX ceftizoxim; CEZ, CEZ cefazolin; ABPC ABPC, ampicillin; TC, tetracycline; EM, erythromycin Pseudomonas aeruginosa TEC VCM GM AMK CPFX LVFX IPM CZX CEZ ABPC TC EM >256 >256 2 4 0.25 0.5 1 64 >256 >256 16 256 JICC3(MDRP) >256 >256 >256 >256 64 128 128 >256 >256 >256 64 256 JICC4(MDRP) >256 >256 >256 256 256 256 128 >256 >256 >256 64 256 JICC5(MDRP) >256 >256 >256 >256 32 64 128 >256 >256 >256 64 256 JICC6(MDRP) >256 >256 >256 128 32 64 128 >256 >256 >256 64 256 PAO1 32μg/ml 4μg/ml 16μg/ml TEC,teicoplanin;VCM, TEC teicoplanin;VCM vancomycin; GM GM, gentamicin; AMK, amikacin; CPFX, ciprofloxacin; LVFX, levofloxacin; IPM imipenem; CZX, IPM, CZX cefti ceftizoxim; o im; CEZ CEZ, cefa cefazolin; olin; ABPC ABPC, ampicillin; TC, tetracycline; EM, erythromycin 殺菌効果の判定 1. 細菌のコロニーを生理的食塩水に懸濁 2 懸濁度を OD 2. O 578 = 0.3に調製 0 3に調製 3. 2の懸濁液を 1/100,, 1/104, and 1/105に希釈 4. 50μl の 細菌懸濁液を培地に播種(コントロール) 5. 2の懸濁液を の懸濁液を 1/20に希釈 に希釈 6-1. 5の懸濁液 0.1ml を0.9ml の BONに加える (最終 最終 BON 濃度: 濃度 90%) (5x105/ml: S. aureus:based on the standard of CLSI ) 6-2. . 5の懸濁液 0.1ml を0.9ml の蒸留水 または培地(HIB)で希釈したBONに 加える (最終 BON 濃度: 40, 60, 80 %) 77.1, 1 5, 5 15,30 15 30 分間インキュベ 分間インキュベート ト 8. 100μl を培地に播種 9 37oC 一晩培養 9. 晩培養 10. プレート上のコロニー数を計測 結果 Escherichia coli NIHJ JC2 Num. of bacteria 1000000 100000 10000 1000 BON DDW 100 10 1 0.1 BON final 90% 0 5 15 Time (minutes) Staphylococcus aureus N315 Num. of bacteria 1000000 100000 10000 1000 BON DDW 100 10 1 0.1 BON final 90% 0 1 5 15 Time (minutes) Multi-drug resistant Staphylococcus aureus Num. of bacteria 1000000 100000 Mu3 in BON Mu50 in BON VISA HIP PC in BON VISA HIP NJ in BON VISA HIP MI in BON Mu3 in DDW Mu50 in DDW VISA HIP PC in DDW VISA HIP NJ in DDW VISA HIP MI in DDW 10000 1000 100 10 1 BON final 90% 0.1 0 15 30 Time (minutes) VCM resistant Enterococcus faecalis and Enterococcus faecium Num. of bacteria 1000000 100000 12201in 1124 12202in 1125 1126 12203in 12204in 1127 12201in 1124 12202in 1125 i 12203in 1126 11204in 1127 10000 1000 100 10 BON BON BON BON DDW DDW DDW DDW 1 BON final 90% 0.1 0 15 30 Time (minutes) Multidrug-resistant Pseudomonas aeruginosa Num. of bacteria 1000000 100000 #3JICC3 in BON #4JICC4 in BON BON #5JICC5 in BON #6JICC6 in BON #3JICC3 in DDW #4JICC4 in DDW DW #5JICC5 in DDW #6JICC6 in DDW 10000 1000 100 10 1 BON final 90% 01 0.1 0 15 30 Time (minutes) Effects of medium to bactericidal activity of BON (E h i hi coli (Escherichia li NIHJ JC2) Num. of bacteria 1000000 100000 0.1mlE.coli +0.1mlDDW+0.8mlBON 10000 0.1mlE.coli +0.3mlDDW+0.6mlBON 1000 0.1mlE.coli +0.5mlDDW+0.4mlBON 0.1mlE.coli +0.1mlHIB+0.8mlBON 100 0.1mlE.coli +0.3mlHIB+0.6mlBON 10 0.1mlE.coli +0.5mlHIB+0.4mlBON 1 BON final 40% BON final 60% 0.1 0 15 30 BON final 80% Time (minutes) Effects of medium to bactericidal activity of BON (Staphylococcus aureus N315) Num. of bacteria 1000000 0.1mlS.aureus +0.1mlDDW+0.8mlBON 0 1mlS aureus 0.1mlS.aureus +0.3mlDDW+0.6mlBON 0.1mlS.aureus +0.5mlDDW+0.4mlBON 0 1 lS 0.1mlS.aureus +0.1mlHIB+0.8mlBON 0.1mlS.aureus +0.3mlHIB+0.6mlBON 0.1mlS.aureus +0.5mlHIB+0.4mlBON 100000 10000 1000 100 10 1 BON final 40% 01 0.1 0 BON final 60% 15 30 BON final 80% Time (minutes) 結論 実験に供した耐性菌のすべては,BONに感受性 であった. しかしながら BONを培地と混合すると上記の殺 しかしながら,BONを培地と混合すると上記の殺 菌効果は阻害されることが明らかとなった. 菌効果は阻害されることが明らかとなった
© Copyright 2024 Paperzz