( 1 3 5 ) 尿路上皮がんにおける DNAメチル化異常とがん診断への応用 奈良県立医科大学分子病理学講座 千原良友 ABERRANTDNAMETHYLATIONINUROTHELIALCANCER YOSHITOMOCHIHARA D ψ α γt m e n t0 1M o l e c u l a re αt h o l o g y ,Nar 官 M e d i c a lU n i v e r s i t y R e c e i v e dO c t o b e r1 5, 2 0 1 0 A b s t r a c t:エピジェネティクス異常は種々のがんで認められる現象であり,がん発生におけ る遺伝子発現異常に関与することが明らかになってきた。がん研究の分野ではエピジェネティ ク異常を指標とした診断や治療への応用の試みが盛んである。 尿路上皮がんはがん細胞が尿中に存在するため,尿を用いた低侵襲な新しい診断法が期待され ているが未だ臨床応用に十分な分子マーカーは存在しない。 本稿では, DNAメチル化を指標とした尿路上皮がん診断について述べる. Keywords u r ・o t h e l i a lc a n c e r, DNAm e t h y l a t i o n,d i a g n o s i s はじめに エピジェネテイクスは塩基配列の変化を伴わない遺伝 子制御機構であり,ゲノム上の多数の遺伝子を選択的に 活性化または不活性化することで細胞の発生,分化に重 取り組んできた.本稿ではわれわれの研究成果を中心に 尿路上皮がんにおける DNAメチル化異常と臨床応用の 可能性について概説する. がんで認められる DNAメチル化異常 要な役割を担う.がんにおけるエピジェネテイクスの異 DNAメチル化は CpG部位(シトシン,グアニンの連続 常は多段階発がん過程のごく早期から認められ,多数の 配列)のシトシン 5位炭素原子にメチル基が付加される 異常が蓄積することで遺伝子異常を誘導することが報告 現象をいう. DNAメチル化は DNAメチル基転移酵素 されている. したがって,多段階発がん諸過程に生じる によって調節される生理的,可逆的な反応、であり,遺伝 エピジェネティクス異常の解明は,がんの予防-診断・ 子発現の調節を行う機構の一つであると考えられている. 治療への応用のみならず,がんの生物学的特性を明らか 時乳類のゲノム DNAでは全 CpG部位のうち約 80%が にするという観点からも期待されている. エピジェネティクスによる遺伝子制御機構は, 1)DNA メチル化されている1) CpG部位が多く存在する領域は LINE,SINEなどのレトロトランスポゾン由来の繰り返 メチルイじ, 2 )ヒストン修飾, 3 )ヌクレオソームポジショ し配列であり,この領域に存在する CpG部位は生理的に ンと,これらの相互作用によるクロマチン構造の変化に メチル化されている.また,遺伝子プロモータ}領域に よる調節,および 4 )マイクロ RNAによる調節に大別さ は CpGアイランドと呼ばれる CpG部位が高頻度に出現 れる.とくに DNAメチル化異常は発がんの初期段階か する領域があり,この CpG部位は生理的にはメチル化さ ら高頻度に存在していること,微量の臨床試料から定量 ) 遺伝子プロモーター領域に CpGアイラン れていない 2 解析が簡便に行える等の理由から,がんを診断するマ」 ドが存在する遺伝子は,この領域の DNAメチル化状態 カーとして優れている. は遺伝子の転写を制御している. われわれは尿路上皮がんにおける DNAメチル化異常 がん組織における DNAメチル化異常は「ゲノム全体 の解析に尿中剥離細胞を用いた診断マーカーの開発に の低メチル化と局所的な高メチル化」である. LINE, ( 1 3 6 ) 千 原 良 友 SINEなどの繰り返し配列は全ゲノムの 40%以上を占め 領域の網羅的解析では,遺伝子発現に関与しないがん随 るため,これらの領域はがんにおいては一様に低メチル 伴牲の DNAメチル化異常が種々のがんで報告されてお 化を示し,ゲノム全体の低メチル化に寄与している.ゲ り6) DNAメチル化異常を示標としたがんの存在診断, ノムの低メチル化は染色体不安定性を来たし,リンパ腫 リスク診断および病態診断の臨床的有用性が検討されて などの腫蕩発生を促進する 3) また,近年勝脱がんにお いる. いて Met遺伝子の発現上昇と Met特異的 LINE1の低メ 尿路上皮がんにおける DNAメチル化異常 チル化との関連が報告されたがペゲノム全体に存在す る繰り返し配列のメチル化異常とがん関連遺伝子群との 尿路上皮がんに生じる DNAメチル化異常の解析も 関係は明らかになっていない.一方, CpGアイランドの 様々ながん関連遺伝子群のプロモーター領域の解析に始 16,MLH1,E c a d h e r i n 高メチル化は下流に位置する p まり,遺伝子発現,悪性度,予後との関連が多方面から など主ながん抑制遺伝子の発現低下を来すためへ種々 C 1 S :C a r c i 報告されてきた.例えば,勝目光上皮内がん ( のがんで積極的に研究が行われてきた.正常細胞では発 nomai ns i t u )においては,細胞間接着分子である E c a d - 現している遺伝子を例にみると,その遺伝子はがん化に h e r i nのプロモーター領域が高頻度にメチル化され遺伝 向かうにつれプロモーター領域のメチル化が蓄積され, 子発現が低下する.その結果,がん細胞は容易に尿中に ついには遺伝子がサイレンシングされる ( F i g .1 ) . がん 剥離し,高率に尿細胞診で診断可能である 7) また,正 化に向かう細胞では異常メチル化が蓄積されるが,病理 常尿路上皮で発現している ABO遺伝子は,勝脱がんで 学的に正常で遺伝子発現も正常である前がん状態(前が は染色体欠失とメチル化の 2ヒットによって発現が消失 ん病変とは異なる)が存在する.エピジェネティクスを用 し,これまで染色体欠失だけでは説明できなかった ABO いたがん診断の最大のメリットはこの前がん状態を識別 遺伝子発現異常の原因が明らかになった 8) この報告で しうることにある.マイクロアレイ等を用いた全ゲノム は腸脱異形成では遺伝子発現は保たれていたが,勝脱異 ?w 品 Genee x p r e s s i o n 常弁 品t J L ( + ) ↓ A g i n g, En 川島 住弁 ~JL ( + ) ? 骨 頚 者3 : J a m ,L ( + ) :et.n~. { 圃 } T盛 忌 ヨ 日 F i g .1 .R o l eo f5-M 巴t h y l c y t o s i n ei nC a n c e r ¥ ( 1 3 7 ) 尿路上皮がんにおける DNAメチル化異常とがん診断への応用 NMIBC ( a ) CN Ta MIBC Tl T3 T4 ES ト叫 町 叫 五 E叫 ﹁ ドY U。同岳ト円}{ ¥ . . . Hypo Im e t h y l a t i o n 問 LH y p e r I m e t h y l a t i o n h u ‘ 、 , , 、 . . ' ' t HypermethylatedL o c i HypomethylatedL o c i CN ( 1 9 ) NMIB ( 4 8 8 ) MIBC ( 3 1 1) NMIBC ( 1 3 2 ) F i g .2 .( a ) :S u r p e r v i s e dc l u s t e ra n a l y s i so fb l a d d 巴r s a m p l e sa t1 , 3 7 0 ( 7 8 4g e n e s )u s i n g I l l uminaGodenGatem e t h y l a t i o na s s a y .N ( n二 1 1 )r e p r e s e n t snormalt i s s u 巴f romp a t i e n t sw i t h o u tu r o t h e l i a lc a n c e r( U C ),CN( n = 3 4 )r e p r e s e n t sc o r r e s p o n d i n gnormala p p e a r i n gt i s s u efromUCp a t i e n t s,Ta-T1 ( n = 4 9 )r e p r e s e n t sNMIBC,andT2-T4( nニ 3 8 )r e p r e s e n t sMIBC.Sevenembryonicstemc e l l s( E S )were usedf o rr e f e r e n c e .Nom e t h y l a t i o ni sshowni nb l a c kw i t hi n c r e a s i n gDNAmethy1 a t i o ni sshowni nw h i t e r 1 apo fhyp 巴rm 巴t h y l a t e dandhypom 巴t h y l a t e dl o c i .Theh y p e r m e t h y l a t e dand ( b ) :Venndiagramo ft h eo v e hypomethyatedc a n c e r s p e c i f i cl o c iwered e t e r m i n e du s i n gt h r e es e p a r a t ec o m p a r i s o n so ft i s s u efromUC p a t i e n t s(CN, NMIBC, andMIBC)t o1 1Ns a m p l e s( 5 %FDR , Wilcoxont e s t ) . 目 ( 1 3 8 ) 千 原 良 友 形 成 に お い て DNAメ チ ル 基 転 移 酵 素 (DNMT:DNA NMIBCにのみ低メチル化を認めた ( F i g .2 b ) . これらの methyl t r a n s f e r a s e )の活性が上昇し 9) 遺伝子発現異常の 結果から,担がん尿路上皮には既に勝脱がんに生じる 前段階での DNAメチル化異常が指摘された DNAメチル化異常が生じており,勝JlJ'eがん発がん過程に また尿路 上皮がんの既存リスクとしての喫煙と RUNX3の高メチ おけるエピジェネティック f i 巴l de f f e c tが示された. ル化の関連性が報告された 10) このように尿路上皮がん NMIBCと MIBCの異常メチル化領域が異なることから, における DNAメチル化異常は泌尿器科医が臨床で遭遇 両者の発がんには異なった遺伝子が関与することが示唆 o n v e n t i o n a lな事象を分子生物学的に説明する興 する c さj 守した. 味深いツールとなった. DNAメチル化を示標とした尿路上皮がん診断 尿路上皮がんは同時性異時性の多中心性発生が最大の 尿路上皮がんに生じる DNAメチル化異常をがん診断 特徴である.内視鏡的切除で治癒可能な非筋層浸潤性勝 usclei n v a s i v ebladd 巴r c a n c e r ) 目光がん (NMIBC:Nonm に応用する試みも多い.とくに尿路上皮がんは尿中剥離 は高頻度に再発し,一部は筋層浸潤性がん (MIBC)へ進 細胞としてがん細胞や前がん状態の細胞が存在し,また 展するため厳重な経過観察が必要である.この一因とし これらの細胞由来の DNAが尿中に(浮遊または溶解し F i 巴l de f f e c t ) "が て担がん尿路上皮に“がん発生の素地 ( て)存在すると考えられるため,尿を用いた低侵襲な診断 形成されると考えられている.F i e l de f f e c tは前がん状態 法の開発が期待されている. に相当し,既にメチル化異常が認められると考えられる. 診断マーカーとしてのターゲットは必ずしも遺伝子発 現には関与しないがん随伴性の DNAメチル化異常に言 N ),担がん尿路上皮 (CN)と われわれは正常尿路上皮 ( T )計 1 3 6サンプルを対象として,I1 各深遠度の跨脱がん ( able1に定量的メチル化解析を 及されることも多い. T luminaGoldenGateassayを用いた全ゲノム領域の網羅 用いて行われた報告を示す.がん組織を対象にした報告 ベ X染色体を除いた では l遺伝子のメチル化異常から高特異度の結果が得ら 的メチル化解析を行った ( F i g . 2 a ) 1 3 7 0カ所の CpG部位のうち, N と比較して T において れている.一方,尿を対象とした報告では高感度,高特 3 2カ 有意に高メチル化を示した CpG部位は NMIBC:1 異度を得るためには複数のマーカーの組み合わせが必要 所 , MIBC:526カ所であった.一方,低メチル化を認め となる.またターゲット遺伝子も一定の見解を得ない. 8 8カ所, MIBC:3 1 1カ所であ た CpG部位は NMIBC:4 これは尿試料の解析がいかに困難であるかを示している った. CNにおいては 1 6 9カ所に高メチル化, 1 9カ所に 尿中 DNAは微量である上に様々な細胞のコンタミネ 低メチル化 CpG部位を認めた.NMIBCと MIBCの比較 ーションとそれらの細胞白来のものが存在し,また尿自 では,1¥心HBCに認めた高メチル化領域は MIBCにおいて 体による変性を生じる. DNAメチル化マーカ)はがん 0 8カ所の CpG部位は MIBC も共通に認められた.また, 3 早期の変化を検出可能であるが, DNAメチル化は環境 にのみ高メチル化を認め, 2 1 7カ 所 の CpG部 位 で 因子や炎症等でも生じる可逆的な変化であること,組織 Table1 .Keys t u d i e si n q u a n t i t a t i v eDNAm e t h y l a t i o n b a s e dd e t e c t i o no fb l a d d e rc a n c e r APC , GSTP1, TIGI S e n s i t i v i t y 7 4 % 6 6 % 8 0 % BCL2 , DAPK , TERT 7 8. 4 % CDKN2A , GAT P l , M GMY, p14ARF 8 2 % 9 0 % 5 7 % 3 1 % 3 9 % 3 3 % 4 1 % 2 8 % 5 4 % G e n e s T i s s u e T i s s u e T i s s u e U r i n e U r i n e U r i n e U r i n e U l i n e U r i n e U r i n e U r i n e U r i n e U r i n e DAPK1 IGFBP1 TWIS T l , NID2 CC 九T A 1 MINT1 CRBP CCN D2 PGP9.5 CALCA AIM1 Q M S P . :Q u a n t i 阻 . t i v em e t h y l a t i o ns p e c i f i cP C R S p e c i f i c i t y 1 0 0 % 100~も 9 3 % 1 0 0 % 9 6 % 9 3 % 1 0 0 % 1 0 0 % 9 6 % 1 0 0 % 1 0 0 % 8 8 % 1 0 0 % 吐l o d Me QMSP QMSP QMSP QMSP M e t h l i g h t QMSP QMSP QMSP QMSP QMSP QMSP QMSP S P Q乱1 R e f e r e n c e s 1 2 1 2 1 3 1 4 1 5 1 6 1 7 1 7 1 7 1 7 1 7 1 7 1 7 尿路上皮がんにおける DNAメチル化異常とがん診断への応用 特異的にメチル化状態が異なることから,がん特異的な ( 1 3 9 ) 第 2段階では異なるサンプルセットを用いて P y r o s e メチル化を検出することが困難になるというジレンマが q u e n c e法による候補 CpG部位の定量解析を行った.各 ある CpG部位のメチル化頻度にカットオフ値を設定した.こ われわれはこれらの欠点を解消するために一連の研究 8 3 . 2 % のテストセットにおいて各遺伝子単独では,感度 ( をデザインした ( F i g . 3 ) . 十分な試料を得るため,また 9 4.4%),特異度 ( 8 4. 4% -100%), AUC(0.850 . 9 7 )の正確 人種聞の B i a sを考慮し,海外を含む多施設共同研究とし さで勝脱がん診断が可能であった.さらにこれらの組み た 第一段階は前述の網羅的解析による尿路上皮がん特 合わせ用いてヒストグラムを作成した ( F i g . 4 a ) . このヒ 異的に DNAメチル化を生じる CpG部位の同定であり, ストグラムを用いて 1 3遺伝子中 7カ所以上の CpG部位 目 この結果から 2 3遺伝子上の 3 0カ所の CpG部位を選出し で異常メチル化を認める組織をがんと規定すると感度 た( T a b l e2 ) .これらの遺伝子群は尿路上皮がんにおいて 9 4 . 3 %,特異度 9 7 . 8 %の正確さで勝脱がん診断が可能で はこれまでメチル化異常の報告がない遺伝子群であった. あった(存在診断).同様に別の遺伝子の組み合わせでは 1s tS tep I d e n t i f i c a t i o nofUCs p e c i f i c methylatedCpGs i t e sbyBeadsa r r a y 136t i s s u e s(N: l lCN:34T : 9 1 ) + 2ndStep V a l i d a t i o nofd i a g n o s t i ca c c u r a c y usingt i s s u esamplesbyPSQ 99t i s s u e s( N : 2 1CN:25T : 5 3 ) + 3rdStep V a l i d a t i o nofd i a g n o s t i ca c c u r a c y usingu r i n esampl回 byPSQ 91u r i n e s σ代J : 1 8TU:73) 6 4 . 8 % + 4血 Step V a l i d a t i o nofd i a g n o s t i ca c c u r a c y f o rp r o g n o s t i f i c a t i o nu s i n g b巴f o r eanda 日 t e rTURu r i n esamplesbyPSQ 92ur 泊四 ( c o n s e c u t i v eu r i n es a m p l e s ) t a b l i s h i n gDNAm e t h y l a t i o ni n d i c a t o r sf o rUCd i a g n o s i s .N : n o r m a lu r o t h e l i a, CN:c o r r e s p o n d F i g .3 .D e s i g no f巴s mgnor 官l a lu r o t h e l i afromUCp a t i 巴n t,T :tumor,PSQ:p y r o s e q u e n c i n g,NU:n o r m a lu r i n e,TU:u r i n efrom R :t r a n sul・e t h e r a lr e s e c t i o n .I n s t i t u t i o n1 :D e p t .o fu r o l o g y,No ぽr n sc ∞ ompr 陀e h 巴n 悶 s 討i 竹 v ec a n c 巴r UCp a t i e n t,TU ? C 白 巴n t 臼 巴, r 乙U n i v e r s i t yo fsouthemC剖 a l i f o ぽr n ι i a .I n s t i t u t i o n 2 :U r o l o g yd i v i s i o n,N a t i o n a lc a n c 巴rc e n t e rh o s p i t a l, i T o k y o .I n s t i t u t i o n3 :Depto fu r o l o g y,NaraM e d i c a lU n i v e r s i t y .I n s t i t u t i o n4D e p t .o fu r o l o g y,T o c h i g i C a n c e rC e n t e rH o s p i t a l 目 ( 1 4 0 ) 千 原 良 友 Table2 .T h i r t yc a n d i d a t ei nc 1i c a t o r sfrom2 3gen 巴 sbas巴 c 1onDNAm e t h y l a t i o nf o rUCc 1i a g n o s i s Gen 巴 A n n o t a t i o n H y p e n n e t h y l a t i o n TJ P2 T i g h tj u n c t i o np r o t e i n2 MYODl Myogenicd i f f e r e n t i a t i o n1 HOXA9 Hom 巴o boxA9 SOXl S巴xd 巴t 巴n u i n i n gr 巴g i o nYboxl CD Hl3 C a d h e r i n1 3 EYA4 Eyesa b s e n thomolog4 CY P1B CytochromeP450f a m i l y1 lRAK3 I n t e r l e u k i n lr e c e p t o r a s s o c i a t e dk i n a s e3 NPY N e u r o p e p t i d eY IPFl I n s u l i np r o m o t e rf a c t o r1 GALRl 巴c e p t o r1 G a l a n i n r DLKl D e l t a l i 1 防l RIPK3 n t e r a c t i n gs e r i n e t h r 巴o nm巴 k i n a s e3 Rec巴ptmi 目 H y p o m e t h y l a t i o n CEACAMl C a r c i n o e m b r γ o n i ca n t i g e n r e l a t e dc e l la d h e s i o nm o l e c u l e1 CAPGP C a p p i n gp r o t e i n HLADPAl rh i s t o c o m p a t i b i l i t ycompl 巴x , c l a s sI I, DPa l p h a1 M句o χ4MP8 V e s i c l e a s日o c i a t e dmembranep r o t e i n8 SPPl S e c r e t e dp h o s p h o p r o t e i n1 CASP8 C a s p a s e8 IFNGl I n t e r f e r o ngammar e c e p t o r1 NOS3 N i t r i co x i d es y n t h a s e3 CLDN4 C l a u d i n 4 NB Ll N e u r o b l a s t o m as u p p r e s s i o no f t u m o r i g 巴n i c i t y1 感度 7 6.0%,特異度 100%の正確さで正常尿路上皮と担が これらの DNAメチル化マーカーの再発予測に対する有 F i g . 4 b ) . ん尿路上皮を区別可能であった(リスク診断) ( 用牲を検討するとともに,実際の臨床応用を目指しさら 第 3段階は尿路上皮がんを有する患者尿と健常者尿を用 に候補遺伝子を絞り,検出感度を上げる定量系を確立す いた比較で,先の存在診断の遺伝子群を用いて感度 る必要がある. 9 4.4%,特異度 100%の正確さで尿路上皮がんを診断可能 おわりに であった ( F i g . 4 c ) . このように尿路上皮がんに生じる DNAメチル化異常 低侵襲で正確ながんの診断j 去を確立するために分子マ は尿からも高頻度に検出可能である.しかしながら感度, ーカーの担う役割は大きい .DNAメチル化はがん細胞に 特異度ともに満足できる結果を得るためには 1 3遺伝子 生じる分子生物学的変化の一面にすぎないが,がんにお が必要であった.ヒストグラムに示すように個々のマー ける様々な異常に関連し,異常にアプローチする有効な カーを比較すると尿中がん細胞の検出感度はがん組織よ 手段の一つである.エピジェネテイクスの解析法は急速 りはるかに低下する.現在,第 4段階として腸脱がん症 に進行しており,日常臨床に活用される日も近いと思わ 例の術後経時的尿を前向きに解析する研究を進めている. れる. 尿路上皮がんにおける DNAメチル化異常とがん診断への応用 ( a ) ( 1 4 1 ) 4 0 ヒ 2 z q 2 1 5 │匝竺 1 1 1 H J 1 0 5 。。 2 3 4 5 6 7 8 9 1 0 1 1 1 2 1 3 Numberofpositivemarkers ( b ) 8 7 6 E 主 E 自 C + 4 0 i ロ ) 巴 Z [ コ A 3 ー 2 。。 ( c ) 園 1 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 0 1 1 1 2 1 3 1 4 Numberofpositivemark 巴r s 1 8 1 6 1 4 ~島 1 2 ι 。 , lE • 。 2 3 4 5 6 7 B 9 Numberofp o s i t i v emarkers 1 0 1 1 1 2 1 3 F i g .4 . Histogramshowingthenumbero fi n d i c a t o r ss a t i s f y i n gt h ec r i t e r i abasedont h ee a c hc u t o f fv a l u e( d a t a n o ts h o w n ) .( a )Basedont h i sh i s t o g r a m, i ft h enumberso fp o s i t i v ei n d i c a t o ra r e7o rmore, t h e ya r ed i a g noseda sTumor.Basedont h e s ec r i t 巴r i a,t h es 巴n s i t i v i t yands p e c i f i c i t yi nt h i sc o h o r twere9 4 . 3% and C N ) .( b )CNv s .N .7 6 . 0 %o fs 巴n s i t i v i t y,100%o fs p e c i f i c i t y .( c )TUv s .NU. 9 7 . 8 %r e s p e c t i v e l y( Tv s .N! 9 4 . 4 %o fs e n s i t i v i t y,100%o fs p e c i f i c i t y . ( 1 4 2 ) 千 原 良 友 文 Groshen, S . and Jones, P . A . 献 RUNX3 m e t h y l a t i o nr e v e a l st h a tb l ac 1 c 1e rt u m o r sa r e 1 )R azin ,A. and Riggs,A.D. DNAmethylation o l d e ri np a t i e n t sw i t hah i s t o r yo fs m o k i n g .C a n 2 0 0 8 c e rR e s . 6 8:6 2 0 8 1 4, andg巴nef u n c t i o n .S c i e n c e210:6 0 4 6 1 0,1 9 8 0 . 2 ) Jones,P . A . andTakai,D . Th 巴 r o l eo fDNA 1 1 ) Wol 任 E.M., Chihara, Y ., Pan, F ., i g e n 巴t i c s .S c i e n c 巴 m e t h y l a t i o ni nmammalian 巴p Weisenberger,D . J .,Siegmund,K .D.,Laird, 293:1 0 6 81 0 7 0,2 0 01 . P川 T ., Sugano,K .,Kawashima ,K.,Jones,P.A. 悶 3 ) Gaudet,F .,Hodgson ,J . G .,Eden A.,J a c k s o n Grusby ,L . , Dausman ,J ., Gray , J.W., and Liang,G . Unique DNAm e t h y l a t i o np a t t e r n sd i s t i n g u i s hs u p e r f i c i a landi n v a s i v eb l a d - Leo 凶Ia r d t,H . and J a e n i s c h,R . ・ Inductionof d巴r c a n c e r s and e s t a b l i s h an e p i g e n 巴t i cf i e l d tumors i n mice by genomic h y p o m e t h y l a t i o n . d e f e c ti np r e m a l i g n a n tt i s s u e .C a n c e rR e s . 70 2 0 1 0 ( 2 0 ):8 1 6 9 8 1 7 8, 9 2,2 0 0 3 . S c i e n c e300:4 8 94 【 4 ) 羽T o l f f,E.M.,Byun ,H.M.,Han,H.F.,Sharma, S .,N i c h o l s,P.W.,Siegmund,K .D.,Yang,A.S., 1 2 )C h r i s t o p h ,F ., Weikert, S ., Kempkensteffen, C ., Kr ause,H ., Schostak , M.,Mi 1 le r,K . and Jones, P . A .andL iang ,G.:Hypomethylationo f Schrader, M. R e g u l a r l ym e t h y l a t 巴dn o v e lp r o - a LINE-l p r o m o t e ra c t i v a t e s ana1 t e r n a t et r a n e sa s s o c i a t ec 1w i t hr e c u r r e n c 巴 m a p o p t o t i c g巴n s c r i p to ft h e MET oncogene i nb l a d d e r sw i t h t r a n s i t i o n a lc e l lc a r c i n o m ao ft h eb l a dc 1 e r .I n t .J 【 e n e t .6:e l 0 0 0 9 1 7,2 0 1 0 . c a n c e r PLoSG 目 5 )U s h i j i m a ,T.andSasako,M. Focusongastric 巴r. C anc 巴rC e l l5:1 2 1 1 2 5,2 0 0 4 . c a n c 6 )U s h i j i m a, T .:D巴t e c t i o nandi n t e r p r e t a t i o no fa l C a n c e r119:1 3 9 6 1 4 0 2,2 0 0 6 . .,E l Kassem,N .,Heukamp,L .C ., 1 3 ) El 1 i n g e r,J Matthews,S .,Cubukluoz,F .,Kahl,P .,Perabo, F . G ., M u l l e r , S.C., von Ruecker, A. and t e r e dm e t h y l a t i o np a t t e r n si nc a n c e rc e l l s . Nat . J . B a s t i a n,P 2 3 2 3 1,2 0 0 5 . RevC a n c e r5・2 S巴r umDNAi n d i c a t e sworseoutcomei np a t i e n t s , Y., Sugano, K . , 7 ) Horikawa S h i g y o, M., H y p e r m e t h y l a t i o no fc e l lf r 巴e 【 w i t hb l a d d e rc a n c e r. J Uro . 1179:346-352,2008 4 )F r i e d r i c h,M.G.,Weisenberger Yamamoto,H .,Nakazono,M.,F u j i m o t o,H ., 1 ,D . J .,Cheng , Kanai,Y .,H i r o h a s h i,S .,Kakizoe,T .,Habuchi, J . C ., Chandrasoma ,S ., Siegmund ,K .D., T . amd Kato,T . H y p e r m e t h y l a t i o no f an E - Gonzalgo,M., . L Toma,M. , . I Huland,H.,Yoo, c a d h e r i n (CDH1)p r o m o t e rr e g i o ni nh i g hg r a d e C .,T s a i,Y . C .,N i c h o l s,P.W.,Bochner ,B.H., ー t r a n s i t i o n a lc e l lc a r c i n o m ao ft h eb l a d d e rcom Jones, P . A . anc 1 L i ang ,G . . 1 169 1 5 4 1 p r i s i n gc a r c i n o m ai ns i t u .] . Uro m e t h y l a t e da p o p t o s i s a s s o c i a t e dg e n e si nu r i n e 1 5 4 5,2 0 0 3 . s e d i m e n t so fb l a d d e rc a n c e rp a t i e n t s .C l i n .Can D e t e c t i o n o f 【 8 ) Chihara ,Y.,Sugano,K . , Kobayashi,A.,Kanai, c e rR e s . 1 0:7 4 5 7 7 4 6 5,2 0 0 4 . Y ., Yamamoto, H ., Nakazono, M., F u j i m o t o,H ., 1 ,S ., T o p a l o g l u, 0 ., 5 ) Hoque, M.O., Begum Kakizoe,T .,F u j i m o t o,K .,H i r o h a s h i,S . and C h a t t e r j e e,A.,Rosenbaum ,E.,VanCriekinge, H i r a o, Y .: Losso fb l o o dgroupA a n t i g 巴ne x p r e s - W.,Westra ,W.H.,Schoenberg,M.,Zahurak, s i o ni nb l a d d e rc a n c e rc a u s巴d by a l l 巴l i cl o s s M., Goo 也nan , S.N. and Sidransky, D. a n d / o rm e t h y l a t i o no ft h e ABO gen 巴. L ab Q u a n t i t a t i o no fp r o m o t e rm e t h y l a t i o no f1日J.u l t i - .85:8 9 5 9 0 7,2 0 0 5 I n v e st p l eg e n e si nu r i n e DNA and b l a dc 1e rc a n c 巴r 目 9 ) Nakagawa ,T.,Kanai,Y.,Saito,Y.,Kitamura, T .,Kakizoe,T . and H i r o h a s h i,S . I n c r e a s e d d e t e c t i o n .] .Nat . 1CancerInst.98:996-1004,2006 1 6 ) Renard,1 .,J o n i a u,S .,vanC l e y n e n b r e u g e l,B . , p r e s slOn m DNAm e t h y l t r a n s f e r a s e 1p r o t e i n巴x C o l l e t t e, C ., Naome C ., Vlassenbroeck ,, . 1 human t r a n s i t i o n a l c e l l c a r c i n o m a o f t h e N i c o l a s,H .,de L e v a l,J .,S t r a u b,J .,Van b l a d d 巴r. ]. U r 叫. 1 70:2 4 6 3 2 4 6 6,. 2 0 0 3 . C r i e k i n g e, W.,Hamida, W., H e l l e l, M., 1 0 ) Wolff ,E.M.,Lian , 昌 G.,Cortez, C.C,Tsai ,Y.C., Thomas,A.,de L e v a l,, . L Bierau,K . and C a s t e l a o,J .E . , Cortessis,V.K.,Tsao・Wei,D.D., Wa ! t regny,D . I d e n t i f i c a t i o nandv a l i d a t i o no f 尿路上皮がんにおける DNAメチル化異常とがん診断への応用 巴d TWIS T1 and NID2 gen巴S t h e m e t h y l a t ( 1 4 3 ) S .,Ve 枕o r e,A.L . , Czerni 枯ら B .,C a b a l l e r o,O .L . , t h r o u g h r e a lt i m e m e t h y l a t i o ns p e c i f i c po Westra ,W.H.,Sidransky,D .andHoque,M.O.: lym 巴r a s ec h a i nr e a c t i o na s s a y sf o rt h en o n i n v a - A b e r r a n t p r o m o t e r m e t h y l a t i o n o f m u l t i p l e s i v ed e t e c t i o no f primary b l a d d e rc a n c e ri n r . g e n e sd u r i n gp a t h o g e n e s i so fb l a d d e rc a n c e u r i n es a m p l e s .Eu r .Uro. 158・9 6 1 0 4 ,2 0 0 9 C a n c e r Epidemio. l Biomark 巴r sP r e v . 1 7 ・2 7 8 6 目 】 】 1 7 )B r a i t,M.,Begum,S .,C a r v a l h o,A.L . , Dasgupia, 町 2 7 9 4 ,2 0 0 8 .
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