novel products from eBioscience CYTOKINES Compendium of Tools for ELISA, ELISPOT, IC Staining & Bioassays Th17 Cells Express IL-17A, IL-17F, IL-22 & IL-17A/F Heterodimer 4 3 j6350 A647 (log10) 分化したTh17細胞は、IL-17Aに加え、再刺激 に応じてIL-17FとIL-22を産生します。IL-17A と同様に、IL-17Fは炎症性疾患に関連しま す。IL-17FとIL-17Aの発現は、種々の自己免疫 疾患、例えば関節リウマチ、多発性硬化症、乾 癬、炎症性大腸疾患や喘息などの組織中に見出 されます。気道上皮などをIL-17Fで処理する と... 2 1 0 0 1 2 17B7 PE (log ) 3 4 CONTENTS Th17 Reagents (pgs 2-3) IL-17F & IL-17A IC Flow Antibodies IL-17A ELISA & ELISPOT Antibodies Mouse IL-17A Neutralizing Antibody IL-17F versus IL-17A: In Vitro で分化した Th17 細胞をモネンシ ン存在下で再度活性化 し、CD4 で染色、固 定、透過後、マウス IL-17F と IL-17A で染 色しました。 IC Flow Reagents (pgs 4-5) IL-13, IL-17F, IL-21 & Granulysin IC Flow Recombinant Cytokines (pgs 6-7) 10 (continue reading on page 2) New 2 mg Size & ELISA Standard 4 packs IL-17F, IL-23, IL-27, IL-28, IL-29 & IL-23 ELISA Sets & Kits IL-15, IL-21, IL-23, IL-29 & TGF-β ELISA Sets ELISPOT Sets (pgs 11-13) IL-1b, IL-13, IL-17A ELISPOT Sets 4 IL-13 versus CD4: 再度活性化したマウス 脾臓細胞を FITC 標識 抗マウス CD4 で染色、 固定、透過後、PE 標 識抗マウス IL-13 で染 色しました。 eBio13A-PE (log10) 3 2 1 (continue reading on page 4) TGF-β Proteins ELISA Sets (pgs 8-10) Mouse IL-13 IL-13は主にTh2細胞から生産されるサイトカ インで、抗原感作CD8T細胞からも産生されま す。IL-13は、アレルギー性炎症と寄生中除去 に強い関連があり、腫瘍モデル系でも腫瘍の種 類により抑制的あるいは促進的な活性があるこ とが示されています。ヒトにおいて... Antibodies 0 0 1 2 3 CD4-FITC (log ) In Vivo Cytokine Capture Assay (pg 14) IL-10 IVCCA Cytokine & Chemokine Receptors (pg 16) IL-15Ra, IL-21Ra, CCR9, IL-18Ra, IL-22R & 4 10 IL-27R Antibodies Human IFN-α2 References: COPE: Horst Ibelgaufts’ Cytokines Online Pathfinder Encyclopaedia (www.copewithcytokines.de). Cao, W., et al. 2006. Plasmacytoid dendritic cell-specific receptor ILT7-FceRIg inhibits toll-llike receptor-induced interferon production. J. Exp. Med. 203:1399-1405. 60 CD123 PerCP-Cy5.5 60 CD123 PerCP-Cy5.5 IFN- αには、少なくとも 23 種の異型が存在することが知られています。個々のタンパ ク質は 19-26kDa の分子量を持ち、長さは 156-166 と 172 のアミノ酸から構成されてい ます。全ての IFN- αサブタイプは、アミノ酸 115-151 に共通の保存配列領域を有しま すが、アミノ末端は多様です。多くの IFN- αサブタイプは、一つか二つの配列の違い により異なります。カルボキシ末端側から 10 アミノ酸短い異型も存在します。ジスル フィド結合は、1-98 と 29-138 のシステイン間で形成されます。29-138 間のジスルフィ ド結合は生物活性に重要ですが、1-98 間のジスルフィド結合は生物活性に影響を及ぼす ことなく還元することが可能です。すべての IFN-α は、潜在的な糖鎖修飾部位を含み ますが、ほとんどのサブタイプが糖鎖修飾を受けません。IFN-γ と対照的に、IFN-α タンパク質は pH 2.0 に安定です。IFN-α は、単球 / マクロファージ、リンパ芽球状細胞、 線維芽細胞から産生され、またウイルス、核酸、糖質コルチコイドホルモンや低分子物 質の刺激に伴い、種々の細胞からも産生されます。IFN-α には、種々の抗ウイルス作用、 抗増殖作用、および、免疫調節性活性があることが明らかにされています。 50 40 30 20 10 0 10 0 10 1 10 2 IFNa PE 10 3 10 4 50 40 30 20 10 0 10 0 10 1 10 2 IFNa PE 10 3 10 4 Human IFN-a2: 正常ヒト末梢血単核細胞をモネンシン存在下 でTLR9アゴニスト(CpG A-2216;Coley Pharmaceuticals)で 刺激しました(右);刺激しません(左)。細胞はCD123 で染色、固定、透過後、IFN-α2で染色しました。細胞は HLA-DRとCD123の発現を基にpDCのゲート内の細胞で す。 cytokines Th17 Cell Markers Th17 Lineage IL-17 産生 CD4 T細胞(Th17 細胞)は、Th1 や Th2 細胞の分化経路とは異なる経路で分化するユニー クな Th 細胞サブセットとして同定されました。提唱されているメカニズムの一つに、IL-23 依存的に、 STAT-1、T-bet、STAT4 や STAT6 には依存しない系があります。Th1 と Th2 細胞に特徴的なエフェクタ ー分子(例えば IFN- γと IL-4)が、Th17 細胞の誘導に負に働くことが知られています。また第二の メカニズムとして、IL-23 非存在下でも、TGF-β1 と IL-6 によって、ナイーブ CD4 T 細胞を Th17 細 胞に分化させることができる新たな経路が示されています。この効果は、IL-1β と TNF-α により高 められます。Th17 分化の際に IL-23 は必要ではありませんが、Th17 細胞の生存と発達に IL-23 は必 要とされています。実験的自己免疫性脳脊髄炎(EAE)において、IL-23 で誘導された IL-17 エフェ クター細胞の移入が、疾患進行のために必要とされています。さらに、IFN-γ(負の調節性)シグナ ルを抑制すると、病原性 Th17 エフェクター細胞の発達増強と自己免疫疾患の悪化が誘導されること が報告されています。 Human IL-17A ELISPOT Assay: 左:ヒト末梢血単核細胞を 24 時間(マイトジ ェン、分裂促進因子なし)培養。 右:ヒト末梢血単核細胞を PMA / イオノマイ シンで 24 時間培養 IL-17 Biology インターロイキン 17(IL-17)は、CD4 T 細胞由来のサイトカインで、炎症反応を促進し、関節リウマチ、喘息、多発性硬化症、乾癬や移植拒絶反応 に関係します。ヒト IL-17 をコードする cDNA は、CD4 T 細胞ライブラリーから単離されました。そこから翻訳されるタンパク質は、ヘルペスウイルス saimiri が作る HVS13 タンパク質とアミノ酸レベルで 72%が一致し、またマウス CTLA-8 と 63%一致することが示されました。ヒト IL-17 は、糖鎖修 飾された 20-30kD ホモダイマーとして存在します。IL-17 ホモダイマーは、活性化された末梢血 CD4 T 細胞から高産生されます。IL-17 は、ヒト線維芽 細胞の細胞接着分子 ICAM-1 の発現を増強します。またヒト IL-17 は、上皮細胞や内皮細胞、線維芽細胞を刺激して IL-6、IL-8、G-CSF と PGE2 の分泌 を促します。線維芽細胞はヒト IL-17 存在下で、CD34+ 造血系前駆細胞の増殖を維持し、好中球へと成熟を誘導することができます。マウス、ラット、 ヒトの IL-17 は、マウス間質細胞に働き IL-6 産生を誘導することができることから、これらすべての IL-17 は、マウスの IL-17 レセプターに結合する ことができることを示しています。 2 7, I L- THP 1 IL- t -be 2, T TH1 IFN-G IL-2, IL-27, STAT5 ROR-GT, STAT3, STAT4 TGF-B/IL-6 IL-23 Initiation Differentiation Expansion Survival IL4, G I LATA 2 5, -3 IL31, IL 33 IL-17A IL-17F IL-17A/F IL-22 TH17/ THi positive signal/induction TH2 IL-4 secretion negative regulation Th17 Cells Express IL-17A, IL-17F, IL-22 & IL-17A/F Heterodimer 分化した Th17 細胞は、IL-17A に加え、再刺激に応じて IL-17F と IL-22 を産生します。IL-17A と同様に、IL-17F は炎症性疾患に関連します。IL-17F と IL-17A の発現は、種々の自己免疫疾患、例えば関節リウマチ、多発性硬化症、乾癬、炎症性大腸疾患や喘息などの組織中に見出されます。気道上皮、 静脈内皮細胞、線維芽細胞を IL-17F で処理すると、IL-6、IL-8、GRO-α、ENA-78、TGF-β、MCP-1、G-CSF、GM-CSF、ICAM-1 の発現が誘導されること が報告されています。 全部で 6 個の IL-17 ファミリーメンバーのうち、IL-17F と IL-17A は最も高い相同性を示し(50% アミノ酸同一性)、2 つの遺伝子は同じ染色体領域に 位置します。最近、Th17 分化において IL-17A と IL-17F は連係して調節に関わることが示されています。IL-17F と IL-17A の発現は、活性化されたヒ ト末梢血リンパ球で、特に活性化されたヒト CD4+ T 細胞に見られます。 IL-17Aの様に、IL-17Fはジスルフィド結合したホモダイマーの糖タンパク質です。IL-17Fホモダイマーは、TGF-β、骨形成タンパク質(BMP)、神経 成長因子スーパーファミリーでみられる典型的なシステイン・ノット・モチーフを含みます。システイン・ノット・モチーフがあると、TGF-βとイン ヒビン/アクチビンで見られるように、ヘテロダイマー構造をとる可能性があります。2つの研究チーム(Chen Dongら、Neil Wolfmanら)による最近の 報告から、IL-17FとIL-17Aを共発現するHEK293細胞において、IL-17FホモダイマーとIL-17Aホモダイマー以外に、生物活性を持つIL-17F/IL-17Aヘテ ロダイマーも形成されることが確認されました。さらに、活性化ヒトCD4+ T細胞も、それぞれのホモダイマーの他に、IL-17A/Fヘテロダイマーを産生 することが見出されています。IL-17A、IL-17F、IL-17A/Fの相対的な能力を比較すると、この3つはともにGRO-α分泌を誘導し、IL-17Aホモダイマー が最も強く、次にIL-17A/Fヘテロダイマー、そしてIL-17Fホモダイマー(IL-17Aより100倍低い)の順となります。活性化ヒトCD4+ T細胞から分泌さ れるタンパク質の相対量は、隠れたIL-17FホモダイマーがIL-17Aホモダイマーより10倍高く産生されます。このことから、発現したIL-17Aタンパク質 の大半は、IL-17A/Fヘテロダイマーの形で存在すると示唆されています。マウスにおいて、IL-17A/Fヘテロダイマー(単独もしくはTNF-αとともに) は、IL-6とKC(ヒトGRO-αのマウスホモログ)の発現を調節します。これはIL-17RAとTRAF6に依存することから見出されました。この新たなヘテロダ イマーのサイトカインIL-17A/Fは、炎症反応を調節すると考えられています。 2 References: Chang, S.H., et al. 2007. A novel heterodimeric cytokine consisting of IL-17 and IL-17F regulates inflammatory responses. Cell Res. Advance online publication. 24 April 2007. doi: 10.1038. Wright, J.F., et al. 2007. Identification of an IL-17F/17A heterodimer in activated human CD4+ T cells. JBC. 282: 13447-13455. Liang, S.C., et al. 2006. IL-22 and IL-17 are coexpressed by Th17 cells and cooperatively enhance expression of anti-microbial peptides. J. Exp. Med. 203: 2271-2279. 4 4 4 3 3 3 3 2 2 1 1 1 10 j6350 A647 (log10) Rat 2a A647 (log ) 4 Rat 2a A647 (log10) Th17 Cells Co-express IL-17F & IL-17A Upon Re-activation j6350 A647 (log10) IL-17F Is Expressed By Th17 Cells Upon Re-activation 2 1 0 0 1 2 3 CD4 FITC (log10) 0 0 4 1 2 3 CD4 FITC (log10) 0 0 4 2 1 2 17B7 PE (log10) 3 4 0 0 1 2 17B7 PE (log10) 3 4 IL-17F versus IL-17A: In Vitroで分化したTh17細胞をモネンシン存在下 で再度活性化し、CD4で染色、固定、透過後、マウスIL-17FとIL-17A で染色しました(左)。右はアイソタイプコントロールとIL-17Aを示 しました。 IL-17F versus CD4: In Vitroで分化したTh17細胞をモネンシン存在下で再 度活性化し、CD4で染色、固定、透過後、Alexa Fluor 647標識抗マウ スIL-17F (clone,eBio 18F10)(左)、右はアイソタイプコントロール。 Phenotypic Profile of Th1, Th2 & Th17 Cell Types Cell Type Surface Phenotype CD3 CD4 IL-12Rβ2 IL-23R IFNγR Tim-3 Cytokine Profile IFN-γ IL-2 IL-4 IL-5 IL-6 IL-10 IL-12 IL-13 IL-17A IL-17F IL-22 IL-25 IL-31 IL-33 TNF-α Ontogeny: Key Function: In vitro Polarization by: Lineage Inhibition by: Transcription Factors Involved: SOCS Signaling: CD28 Signaling: ICOS Signaling: Treg Signaling: Th1 Th2 Th17 + + + upregulated by IFN-γg + + + + + - + + + + downregulated by IFN-γ - ? + + - +/+ + +/+ (m) + + + + Thymus, ThP Control of parasitic infections + + + + + Thymus, ThP Regulation of inflammatory reactions IL-4, anti-IL-12 IL-12, IFN-γ STAT-6, GATA-3 TGF-β/IL-6 anti-IFN-γ, anti-IL-4; IL-23. IL-4, IFN-γ and Type I IFN ROR-γt, STAT3, STAT5. Independent of STAT-4, STAT-6, T-bet, GATA-3. STAT-1 suppresses. Not as sensitive? Dependent Dependent Not as sensitive? + Thymus, ThP Viral and intracellular pathogen Clearance IL-12, anti-IL-4 IL-4 STAT-1, STAT-4, T-bet. GATA-3 suppresses. Sensitive Dependent Not dependent Sensitive? Sensitive Sensitive? 3 IL-21 は、IL-2、IL-4、IL-15 に構造的に関連し、CD8 T 細胞の機能促進と B 細胞の IgE 産生を抑制するなど、リンパ球系の中で種々の役割を持ちま す。IL-21 は活性化された T 細胞から産生され、T と B 細胞の増殖と NK 細胞 の細胞傷害活性に影響します。NK 細胞系列では、IL-21 はヒト骨髄前駆細胞 から NK 細胞へと成熟を促進し、末梢 NK 細胞を活性化します。マウスにおい て、IL-21 は NK 細胞の大きさ・顆粒状度の増加、NK1.1 の消失、細胞傷害活 性の増強に関わる NKG2/CD94 複合体の発現増強などの効果を持ち、対照的に、 IL-15 の作用によってもたらされる休止期 NK 細胞の増加を抑制するという効 果もあります。IL-21 で活性化されたマウス NK 細胞は、細胞傷害 / 抗腫瘍免 疫、IFN- γ産生(過剰な IL-15 処理による)が増強します。IL-21 を投与さ れたマウスでは、肝臓と肺における腫瘍の転移抑制能が NK とパーフォリン依 存的に増強されることが示されています。さらに、IL-21 は NKG2D 依存的に、 in vivo における腫瘍拒絶を増強することが明らかにされています。 4 4 3 3 2 3A3 A647 (log10) Intracellular Staining Reagents Human IL-21 3A3 A647 (log10) cytokines 1 1 0 0 2 1 2 3 CD4 FITC (log10) 4 0 0 1 2 3 CD4 FITC (log10) 4 Human IL-21: 未刺激ヒト末梢血単核細胞(右)とPMA / イオノマイシン で刺激したヒト末梢血単核細胞(左)をFITC標識ヒトCD4 (RPA-T4) とAlexa Fluor 647標識抗ヒトIL-21 (eBio3A3-N2)で細胞内染色しまし た。リンパ球ゲート内の細胞を用い解析しました。 References: Gansert, J.L., et al. 2003. J Immunol. 170(6):3154-61. Hanson, D.A., et al. 1999. Mol Immunol. 36(7):413-22. Ochoa, M.T., et al. 2001. Nat Med. 7(2):174-9. Stegelmann, F., et al. 2005. J Immunol. 175(11):7474-83. Stenger, S., et al. 1998. Science. 282(5386):121-5. Stenger, S., et al. 1998. Science. 282(5386):121-5. Mouse IL-13 IL-13 は主に Th2 細胞から生産されるサイトカインで、抗原感作 CD8 T細胞 からも産生されます。IL-13 は、アレルギー性炎症と寄生中除去に強い関連が あり、腫瘍モデル系では、腫瘍の種類により抑制的あるいは促進的な活性が あることが示されています。ヒトにおいて、IL-13 は B 細胞のアイソタイプス イッチに働くことが見出されています。IL-13 は、炎症誘発性サイトカイン (IL-1、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12)の産生減少に働き、マクロファージの活 性を低下させます。 References: Miyahara, N., et al. 2004. J. Immunol. 172: 2539-2558. McKenzie, A.N., et al. 1993. J Immunol. 150(12):5436-44. Doherty, T.M., et al. 1993. J Immunol. 151(12):7151-60. Terabe, M., et al. 2000. Nat Immunol. 1(6):515-20. Grunig, G., et al. 1998. Science. 282(5397):2261-3. 4 4 3 3 2 FL2-H (log10) 1 1 0 0 2 1 2 FL1-H (log10) 3 4 0 0 1 2 FL1-H (log10) 3 4 Human Granulysin: 正常ヒト末梢血単核細胞をFITC標識抗ヒト CD56 (MEM188)で染色、固定、透過し、PE標識マウスIgG1,k アイソタイプコントロール(cat. 12-4714)(左)とPE標識抗ヒト Granulysin(eBioDH2)(左)で染色しました。リンパ球ゲート内の細胞 を用い解析しました。 4 4 3 3 2 eBio13A-PE (log10) 細胞溶解に関連するタンパク質である Granulysin は、saposin 様タンパク (SAPLIP)ファミリーに属します。9 kDa と 15kDa の2つのタンパク質のうち、 9 kDa は 15kDa タンパク質の翻訳後に修飾によって生じると考えられていま す。Granulysin は、NK や活性化 T 細胞に検出され、パーフォリンやグランザ イムを含む細胞溶解顆粒内に発現がみられます。Granulysin は、パーフォリ ンとともに細菌殺傷やアポトーシスの誘導に相乗的に働くと考えられていま す。 4 eBio13A-PE (log10) Human Granulysin FL2-H (log10) References: Parrish-Novak, J., et al. 2000. Nature. 408(6808):57-63. Parrish-Novak, J., et al. 2002. J Leukoc Biol. 72(5):856-63. 1 1 0 0 2 1 2 3 CD4-FITC (log10) 4 0 0 1 2 3 CD4-FITC (log10) 4 IL-13 versus CD4: マウス脾臓細胞を活性化後休止させ、再度モネンシン 存在下で5時間 PMA / イオノマイシンで再活性化させました。細胞は FITC標識抗マウスCD4で染色、固定、透過し、PE標識抗マウスIL-13 (左)で染色しました。;リガンドでのブロッキングによりIL-13の染 色はできません。 Mouse Intracellular Staining Reagents Antigen CD152/CTLA4 GM-CSF Granzyme B IFN-γg Clone UC10-4B9 MP1-22E9 16G6 XMG1.2 SKU 1522 7331 8822 7311 IL-1α IL-2 IL-4 ALF-161 JES6-5H4 11B11 BVD6-24G2 TRFK5 MP5-20F3 JES5-16E3 C17.8 eBio13A eBio17B7 eBioTC11-18H10.1 eBio18F10 MIG-2F5.5 eBioOMAK-D MP6-XT22 TN3-19 7011 7021 7041 7042 7052 7061 7101 7123 7133 7177 7172 7471 3009 9392 7321 7423 IL-5 IL-6 IL-10 IL-12/IL-23 p40 IL-13 IL-17A IL-17F MIG Perforin TNF-α Formats Purified, FG Purified, Biotin, PE Purified, FG Purified, FITC, PE Purified, Biotin, FITC, PE, Alexa Fluor® 647 Purified, FG Purified, Biotin, FITC, PE, APC, PE-Cy7, Cy5, Alexa Fluor® 488, Alexa Fluor® 647, Pacific Blue® Purified, FG Purified, FITC, PE Purified, FG Purified, Biotin, FITC, PE, APC, Alexa Fluor® 488, Alexa Fluor® 647, Pacific Blue® Purified, FG Purified, PE, APC, Alexa Fluor® 488, Alexa Fluor® 647 Purified, Biotin, FITC, PE-Cy7 Purified, FG Purified, PE Purified, FG Purified, FITC, PE Purified, FG Purified, FITC, PE, APC, Alexa Fluor® 488, Alexa Fluor® 647 FG Purified, Biotin, PE, Alexa Fluor® 647 Purified, FG Purified, PE, Alexa Fluor® 647 Biotin, FITC, PE, APC, Alexa Fluor® 488, Alexa Fluor® 647 Alexa Fluor® 488, Alexa Fluor® 647 PE, Alexa Fluor® 488, Alexa Fluor® 647 PE, Alexa Fluor® 647 Purified, FITC, PE, APC Purified, FG Purified, FITC, PE, APC, Cy5, Alexa Fluor® 488, Alexa Fluor® 647, Pacific Blue® Purified, FG Purified, FITC, PE, PE-Cy7 Human Intracellular Staining Reagents Antigen CD152/CTLA4 Granzyme B Granulysin IFN-α2 IFN-γg IL-1α IL-1β IL-2 IL-4 IL-5 IL-6 IL-10 IL-12/IL-23 p40 IL-13 IL-17A IL-21 Perforin TNF-α TNF-β Clone 14D3 eBio20A eBioGrB eBioDH2 eBio225.c 4S.B3 CRM8 364/3B3-14 CRM56 MQ1-17H12 8D4-8 MP4-25D2 JES1-5A10 TRFK5 MQ2-13A5 JES3-9D7 C8.6 eBioHP40 PVM13-1 eBio64CAP17 eBio64DEC17 eBio3A3-N2 dG9 MAb11 359-81-11 SKU 1529 1528 8899 8828 8317 7319 7019 7118 7018 7029 7049 7048 7059 7052 7069 7108 7129 7235 7139 7178 7179 7219 9994 7349 7327 Formats Purified, FG Purified, Biotin, PE Purified, FG Purified, Biotin, PE PE PE FITC, PE, APC Purified, Biotin, FITC, PE, APC, PE-Cy7, Alexa Fluor® 488, Alexa Fluor® 647, Pacific Blue® Purified, FG Purified, FITC Purified, FITC, PE Purified, FG Purified, FITC, PE Purified, FITC, PE, APC Purified, PE, APC, PE-Cy7, Alexa Fluor® 488, Alexa Fluor® 647 Purified, FG Purified, Biotin, FITC, PE, APC FG Purified, Biotin, PE Purified, FG Purified, PE Purified, FG Purified, FITC, PE Purified, FG Purified, PE, Alexa Fluor® 488, Alexa Fluor® 647, Pacific Blue® Purified, FG Purified, Biotin, PE, Alexa Fluor® 488, Alexa Fluor® 647, Pacific Blue® Alexa Fluor® 647 Purified, FG Purified, FITC Purified, FG Purified, PE, Alexa Fluor® 647 Biotin, FITC, PE, Alexa Fluor® 488, Alexa Fluor® 647 PE, Alexa Fluor® 647 Purified, FITC, PE Purified, Biotin, FITC, PE, APC, PE-Cy7, Alexa Fluor® 488, Alexa Fluor® 647, Pacific Blue® Biotin, PE, APC Alexa Fluor® and Pacific Blue® are registered trademarks of and licensed under patents assigned to Molecular Probes, Inc. for research use only. 5 cytokines Recombinant Cytokines Novel Recombinant Proteins eBioscience では、新たに昆虫細胞で発現させた IL-23 を発売するとともに、生物活性を保つ組換えサイトカインの数を増やし、大量 のサイズでもご利用していただきたいと考えています。eBioscience は、in vitro や in vivo 実験、ELISA や他の免疫学的分析に用い る標準スタンダードなど、スケールの大小に関わらず、最高品質のタンパク質を生産、提供することを心がけています。 Bacterial, Insect, or Mammalian Cell Expressed Proteins 昆虫細胞や細菌による最新の発現技術を用いて、最終的なタンパク製品は、天然のコンフォメーションと高い活性を持っています。ゲ ル電気泳動の測定結果から、ほとんどの組換えタンパク質は 98% 以上に精製されています。 Authentic, Tagless Proteins eBioscience の組換え IL-23 は、p19 と p40 サブユニットから成る良質なヘテロダイマーとして、バキュロウイルス感染昆虫細胞から 生産されています。単鎖サブユニットをそれぞれ発現し、リンカーで結合させた人工的なヘテロダイマーに比べて、自然な形でヘテロ ダイマーを形成し発現するという点で、他で入手可能なタンパク質とは形状が異なります。 Recombinant Mouse Cytokines Description GM-CSF HGF IFN-γ IL-1α IL-1β IL-2 IL-3 IL-4 IL-5 IL-6 IL-7 IL-10 IL-12 (p40 monomer) IL-12 (p40 homodimer) IL-12 (p35/p40) IL-13 IL-15 IL-17A IL-17F IL-22 IL-23 (p19/p40) IL-27 IL-28 SCF Tim-1 Fc Tim-3 Fc TNF-α VEGF B18R SKU Root 8331 8431 8311 8011 8012 8021 8031 8041 8051 8061 8071 8101 8122 8123 8121 8131 8151 8171 8471 8221 8231 8271 8281 8341 5860 5771 8321 8351 8185 2 ug 5 ug 58,000 56,000 56,000 10 ug 39,000 47,000 43,000 61,000 48,000 55,000 55,000 25 ug 11,5000 69,000 169,000 169,000 85,000 193,000 153,000 137,500 51,000 61,000 43,000 42,000 163,000 200,000 60,000 79,000 79,000 79,000 55,000 103,000 32,000 62,000 69,000 46,000 69,000 69,000 69,000 186,000 100 ug 385,000 206,000 90,000 330,000 330,000 138,000 330,000 261,000 385,000 330,000 358,000 550,000 500 ug 1,100,000 619,000 269,000 990,000 990,000 413,000 990,000 770,000 1,155,000 990,000 990,000 1,650,000 ELISA Standard 4-pack 22,000 371,000 413,000 261,000 165,000 165,000 413,000 550,000 550,000 206,000 330,000 1,045,000 963,000 770,000 495,000 495,000 880,000 1,650,000 1,650,000 825,000 990,000 22,000 22,000 22,000 22,000 165,000 495,000 495,000 1,238,000 688,000 22,000 22,000 22,000 22,000 22,000 22,000 22,000 22,000 22,000 22,000 B18R B18R タンパク質は、ワクシニアウイルスがコードするレセプターで、マウス、ヒト、ウサギ、ブタ、ラット、ウシのⅠ型インターフェロン (IFN) を中 和する活性を持ちます。B18R タンパク質は、Western Reserve ワクシニアウイルスの B18R 遺伝子によってコードされるⅠ型 IFN レセプターです。6065kD の糖蛋白は、クラス II サイトカインレセプター・ファミリーに属する他のI型 IFN レセプターと異なり、インターロイキン1レセプターに関連 して免疫グロブリンスーパーファミリーに属します。B18R タンパク質は、ヒト IFNα に高い親和性(KD、174pM)を持ち、他のI型 IFN レセプターと 異なり、ヒト、マウス、ラット、ウサギ、ブタ、ウシなど、多種のI型 IFN と結合します。ウイルス宿主反応調節因子の一つで、B18R タンパク質は、 細胞表面だけでなく細胞外にも可溶型として存在し、オートクライン、パラクライン両方の IFN 機能を効果的に阻害することができます。B18R タン パク質は、ヒト細胞の IFN- α 1、IFN- α 2、IFN-α-8/1/8、IFN-ω の抗ウイルス能を抑制することが示されています。また可溶型 B18R タンパク質は、 IFN- α、β、δ、κを含むⅠ型 IFN を強力に抑制します。 6 Authentic, Non-Methionylated Proteins eBioscience は、 可 能 な 限 り 最 も 良 質 な タ ン パ ク 質 を 供 給 し た い と 考 え て い ま す。 eBioscience は、大腸菌で非メチオニン付加の組換えサイトカインを生産している数少な いプロバイダーです。これらの大腸菌で発現されるタンパク質は詳細に設計されており、 成熟型タンパク質をコードする cDNA の前にスタート配列を配置することにより余計な N 末 端のメチオニンを除く処理がなされています。このようなメチオニン付加状態と発現情報 は、パッケージ内の印刷物で示しています。 Well Characterized, Highly Bioactive Proteins すべてのタンパク質の生物活性は、様々な濃度で検査しており、入手時に表示されている 値の範囲内で弱まることも確認しています。50%有効量(ED50)等の比活性や標的細胞、 バイオアッセイの条件等が製品データシートに記載されています。厳しい製造プロセスに より、各製品は常に業界標準を上回る無菌性と低エンドトキシンを維持しています。最終 製品における無菌試験とエンドトキシン分析は、最も厳しい品質管理基準を適用していま す。 IL-23 Bioassay: マウス脾臓細胞を用い、マウスIL-23無添加( 左)と添加(右)で24時間培養し、可溶化CD3 (1ug/ml)で マウスIL-17バイオアッセイを行ないました。IL-23で誘導 したIL-17産生は右のパネルで見られました。 Validated & Calibrated for ELISA & Bioassay 生物活性が最高基準であることに加えて、各タンパク質は、優れた抗体を用いたサンドイッチELISAとReady-SET-Go! ELISAセット(血清と血漿分析に 適した)により、天然のタンパク質と同程度の反応性があることを確認しています。新たな2μgサイズは、経済性を考えた予備実験を可能にし、新し いELISAセット•スタンダード4-パックは、ELISAセットやキットの便宜性を考え、一回使用分に分注してあります。大規模な研究に必要なバッチ確保に ついては、お問い合わせ下さい。 mg 単位を必要とする実験には、最適価格をお問い合わせ下さい。eBioscience では、組換えタンパク質を 0.005mg から 100mg まで、あなたのニーズに 合わせてご提供させていただきます! Recombinant Human Cytokines Description Flt-3/Flk-2 Ligand GM-CSF HGF IFN-α1 IFN-γg IL-1α IL-1β IL-2 IL-4 IL-5 IL-6 IL-7 IL-8 IL-10 IL-12 (p40 monomer) IL-12 (p40 homodimer) IL-12 (p35/p40) IL-13 IL-15 IL-17A IL-17F IL-19 IL-22 IL-23 (p19/p40) IL-27 IL-29 SCF TGF-β1 TNF-αa TWEAK VEGF B18R SKU Root 8358 8339 8439 8318 8319 8019 8018 8029 8049 8059 8069 8079 8089 8109 8129 8139 8159 8179 8479 8199 8229 8239 8279 8299 8349 8348 8329 8916 8359 8185 2 ug 5 ug 35,000 48,000 69,000 91,000 56,000 32,000 38,000 38,000 51,000 56,000 10 ug 78,000 47,000 32,000 38,000 62,000 45,000 41,000 42,000 79,000 78,000 79,000 54,000 73,000 26,000 40,000 50,000 69,000 25 ug 109,000 169,000 100 ug 330,000 330,000 495,000 550,000 69,000 330,000 330,000 90,000 193,000 500 ug 990,000 990,000 1,238,000 1,650,000 207,000 990,000 990,000 495,000 578,000 156,000 152,000 55,000 182,000 330,000 413,000 165,000 413,000 990,000 1,100,000 495,000 1,238,000 371,000 413,000 330,000 165,000 165,000 165,000 413,000 550,000 550,000 206,000 330,000 550,000 1,045,000 1,238,000 990,000 495,000 495,000 495,000 880,000 1,650,000 1,650,000 825,000 990,000 1,650,000 495,000 495,000 1,238,000 688,000 206,000 39,000 207,000 138,000 69,000 69,000 75,000 69,000 39,000 193,000 ELISA Standard 4-pack 22,000 22,000 22,000 22,000 22,000 22,000 22,000 22,000 22,000 22,000 22,000 22,000 22,000 22,000 22,000 7 cytokines IL-23 ELISA Kits & Sets New ELISA Kit and Set for Measurement of Human IL-23 eBioscience のヒト IL-23 Ready-SET-Go! ELISA キットとセットは、定量的酵素免疫測定法(ELISA)を行うために必要な試薬、スタンダード標準液、 バッファと希釈液が含まれています。これらの ELISA キットとセットは、特に血清や血漿、細胞培養液などのサンプルからヒト IL-23 タンパク質量を 正確に測定するために設計されています。 Unambiguous Quantitation of Human IL-23, Without Interference by IL-12 p70 or p40 p19 に特異的な捕獲用抗体と p40 に特異的な検出用抗体を使用したことにより、このサンドイッチ ELISA では、ヒト IL-23 に対して極めて特異的に反 応します。IL-12 p40 モノマーと IL-12 p70 が 200ng/ml 濃度でも、干渉は受けず交差反応もしません。100ng/ml 濃度の他の 20 種類のサイトカインに 対しても、干渉は受けず交差反応もしません。 Log Scale of OD Standard Data log(y) = 0.917log(x) − 2.62 0 10 −1 10 1 10 2 10 3 10 Log Scale of Concentration (pg/ml) Human IL-23 ELISA: ヒトIL-23 ELISA Ready-SETGo!のスタンダードカーブ リコンビナントサイトカインのスタンダード濃 度は pg/ml です。 Validated Specific Reactivity with Native IL-23 この ELISA では、組換え型と天然型のヒト IL-23 タンパク質を、15pg/ml ~ 2,000pg/ml の標準曲線範囲において測定することが可能です。検出限界は 15pg/ml 以下です。種々の異なる活性化樹状細胞の培養液に含まれる天然型ヒト IL-23 タンパク質を有意なレベルで特異的に検出することができます。 Human IL-23 and Th17 Cells IL-23 は、IL-12 の p40 サブユニットと p19 タンパク質がジスルフィド結合して構成されたヘテロダイマーのサイトカインです。IL-23 は、IL-12Rβ1 に加え、IL-23R と呼ばれる STAT4 結合領域を持った新たな β2 類似レセプターに結合します。IL-23 は、活性化された樹状細胞から分泌されます。ヒ ト IL-23 は、メモリー T 細胞の増殖を誘導し、IL-12 と比較して同程度の IFN-γ をナイーヴおよびメモリー T 細胞から産生誘導します。IL-23 依存性 の IL-17 産生 CD4+ T 細胞(Th17 細胞)が、Th1 や Th2 細胞の分化経路とは異なる経路で分化する Th 細胞サブセットとして同定されました。また最近では、 IL-23 非存在下でも、TGF- β 1 と IL-6 によりナイーブ CD4 T 細胞から Th17 に分化させる新たな経路が存在することが明らかにされています。 eBioscience’s Ready-SET-Go! ELISA Kit & Sets Contents of Ready-SET-Go! ELISA Kits with Pre-Coated Plates ▪ Pre-coated ELISA Plate ▪ Detection Antibody: Pre-titrated, biotin-conjugated antibody ▪ Standard: Recombinant cytokine for generating standard curve and calibrating samples ▪ Assay Diluent: 5X concentrated ▪ ELISA Wash Buffer Powder ▪ Detection enzyme: pre-titrated Avidin-HRP ▪ Substrate Solution: Tetramethylbenzidine (TMB) Substrate Solution ▪ Stop Solution: 10 mls of 1X solution per plate ▪ Certificate of Analysis: Lot-specific instructions for dilution of antibodies and standards 8 Contents of Ready-SET-Go! ELISA Sets ▪ Capture Antibody: Pre-titrated, purified antibody ▪ Detection Antibody: Pre-titrated, biotin-conjugated antibody ▪ Standard: Recombinant cytokine for generating standard curve and calibrating samples ▪ ELISA/ELISPOT Coating Buffer Powder ▪ Assay Diluent: 5X concentrated ▪ Detection enzyme: pre-titrated Avidin-HRP ▪ Substrate Solution: Tetramethylbenzidine (TMB) Substrate Solution ▪ Certificate of Analysis: Lot-specific instructions for dilution of antibodies and standards ▪ 96 Well Plate: Corning Costar 9018 or NUNC Maxisorp flat-bottom (included with catalog numbers ending in suffixes -22, -44, -76, -86) New Cytokine ELISA Sets for IL-15, IL-21, and IL-29! 0 10 Log Scale of OD Log Scale of OD Standard Data log(y) = 1.03log(x) − 3.42 −1 10 −1 10 −2 2 3 10 10 Log Scale of Concentration (pg/ml) 4 10 Mouse IL-15 ELISA: マウスIL-15 ELISA ReadySET-Go!のスタンダードカーブ リコンビナントサイトカインのスタンダード濃 度は pg/ml です。 −1 10 10 −2 10 Standard Data log(y) = 0.995log(x) − 2.65 0 10 Log Scale of OD Standard Data log(y) = 0.961log(x) − 3.39 0 10 −2 2 3 10 10 Log Scale of Concentration (pg/ml) Human IL-21 ELISA: ヒトIL-21 ELISA Ready-SETGo!のスタンダードカーブ リコンビナントサイトカインのスタンダード濃 度は pg/ml です 10 1 10 2 3 10 10 Log Scale of Concentration (pg/ml) Human IL-29 ELISA: ヒトIL-29 ELISA ReadySET-Go!のスタンダードカーブ リコンビナントサイトカインのスタンダード濃 度はpg/mlです。 Ready-SET-Go! ELISA Sets Ready-SET-Go! ELISA Kits Description IFN-γg IFN-γ (high sensitivity) IL-1βb IL-2 IL-4 IL-6 IL-10 IL-12 (p40 total) IL-12 (p70) IL-13 IL-17A IL-23 (p19/p40) TGF-β1 TNF-α Mouse ELISA Kit 88-7914 88-8344 88-7913 88-7924 88-7944 88-7964 88-7904 88-7922 88-7921 88-7971 88-7231, 88-7923 88-7449 88-7342 ELISA kits are available in the following sizes w/ pre-coated plates: 2 plates (-29) & 10 plates (-89) Human ELISA Kit 88-7916 88-7910 88-7926 88-7946 88-7966 88-7906 88-7929 88-7939 88-7976 88-7239 88-7449 88-7347 Description GM-CSF Granzyme B IFN-γgg IFN-γg (high sensitivity) IL-1α IL-2 IL-4 IL-5 IL-6 IL-10 IL-12 (p70) IL-12 (p40 total) IL-13 IL-15 IL-17A IL-21 IL-23 (p19/p40) IL-29 MCP-1/CCL2 TGF-β1 TNF-αa TNF-β Mouse ELISA Set 88-7334 88-8022 88-7314 88-8314 88-7013 88-7024 88-7044 88-7054 88-7064 88-7104 88-7121 88-7120 88-7137 88-7150 88-7371 88-7234, 88-7230 88-7391 88-7344 88-7324 - ELISA sets are available in the following sizes w/ uncoated plates: 2 plates (-22), 10 plates (-86) & 20 plates (-76) Human ELISA Set 88-7316 88-7010 88-7026 88-7046 88-7056 88-7066 88-7106 88-7126 88-7439 88-7176 88-7216 88-7237 88-7296 88-7399 88-7344 88-7346 88-7345 ELISA kits come with pre-coated ELISA plates, while ELISA sets come with or without high-affinity binding microwell plates. 9 cytokines Mouse Cytokine Antibody Pairs & Standards Quick Guide Mouse Cytokine Capture mAb Catalog No. Detection mAb Catalog No. Recombinant Standard Range (pg/ml) GM-CSF IFN-γg IFN-γg IL-1αa IL-1βb IL-2 IL-4 IL-5 IL-6 IL-10 IL-12/IL-23 p40 (total) IL-12 p70 IL-13 IL-17A IL-23 (p19/p40) IL-23 (p19/p40) LAG-3, sCD223 MCP-1 TNF-αa TNF-αa MP1-22E9 XMG1.2 AN-18 ALF-161 B122 JES6-1A12 11B11 TRFK5 MP5-20F3 JES5-16E3 C15.6 C18.2 eBio13A eBio17CK15A5 G23-8 5B2 eBioC9B7W 4E2 1F3F3D4 TN3-19.12 14-7331 14-7311 14-7313 14-7011 14-7012 14-7022 14-7041 14-7052 14-7061 14-7101 14-7125 14-7122 14-7133 14-7175 14-7232 14-7233 14-2231 14-7091 14-7325 14-7423 MP1-31G6 R4-6A2 R4-6A2 Polyclonal Polyclonal JES6-5H4 BVD6-24G2 TRFK4 MP5-32C11 JES5-2A5 C17.8 C17.8 eBio1316H eBio17B7 C17.8 C17.8 Polyclonal 2H5 Polyclonal Polyclonal 13-7332 13-7312 13-7312 13-7111 13-7112 13-7021 13-7042 13-7051 13-7062 13-7102 13-7123 13-7123 13-7135 13-7177 13-7123 13-7123 24-2232 13-7096 13-7341 13-7341 8 - 1000 15 - 2000 1.6 - 200 8 - 1000 15 - 2000 4 - 500 4 - 500 8 - 1000 8 - 1000 30 - 4000 15 - 2000 15 - 2000 30-4000 15-2000 30-4000 30-4000 15 - 2000 15 - 2000 15 - 2000 ELISA Standard 4-pack 39-8331-65 39-8311-65 39-8311-65 39-8011-65 39-8012-65 39-8021-65 39-8041-65 39-8051-65 39-8061-65 39-8101-65 39-8121-65 39-8121-65 39-8131-65 39-8171-65 39-8231-65 39-8231-65 39-8321-65 39-8321-65 Human Cytokine Antibody Pairs and Standards Quick Guide 10 Human Cytokine Capture mAb Catalog No. Detection mAb Catalog No. IFN-γg IFN-γ IL-1α IL-1α IL-1β IL-1RA IL-2 IL-4 IL-5 IL-6 IL-10 IL-12 p40 monomer IL-12 (p70) IL-13 IL-17A IL-23 MCP-1 TNF-α TNF-β TRANCE (RANK-L) TWEAK NIB42 MD-1 364/3B3-14 CRM8 CRM56 CRM17 MQ1-17H12 8D4-8 TRFK5 MQ2-13A5 JES3-9D7 C8.3 B-T21 PVM13-1 eBio64CAP17 eBio473P19 5D3-F7 MAb1 359-238-8 MIH23 CARL-2 14-7318 14-7317 14-7118 14-7019 14-7018 14-7015 14-7029 14-7049 14-7052 14-7069 14-7108 14-7127 14-7128 14-7139 14-7178 14-7238 14-7099 14-7348 14-7329 14-6617 14-9916 4S.B3 4S.B3 CRM6 CRM6 CRM57 Polyclonal Polyclonal MP4-25D2 JES1-5A10 MQ2-39C3 JES3-12G8 C8.6 C8.6 Polyclonal eBio64DEC17 C8.6 2H5 MAb11 359-81-11 MIH24 CARL-1 13-7319 13-7319 13-7017 13-7017 13-7016 13-7014 13-7028 13-7048 13-7059 13-7068 13-7109 13-7129 13-7129 13-7138 13-7179 13-7129 13-7096 13-7349 13-7327 13-6619 13-9915 Recombinant Standard Range (pg/ml) 8 - 1000 8 - 1000 15 - 2000 15 - 2000 8 - 1000 80 - 10000 8 - 1000 4 - 500 4 - 500 8 - 1000 8 - 1000 80 - 10000 15 - 2000 8 - 1000 8 - 1000 15 - 2000 15 - 2000 8 - 1000 15 - 2000 - ELISA Standard 4-pack 39-8319-65 39-8319-65 39-8019-65 39-8019-65 39-8018-65 39-8029-65 39-8049-65 39-8059-65 39-8069-65 39-8109-65 39-8128-65 39-8129-65 39-8139-65 39-8179-65 39-8239-65 39-8329-65 - ELISPOT Sets ELISPOT アッセイは、元来、抗原特異的に反応する抗体を分泌する B 細胞を検出するために開発されました。しかしその後、サイトカイン産生細胞を 細胞一つレベルで同定することや算出することに応用されるようになりました。方法は、ELISA のサンドイッチアッセイにいくつか変更を加えた方法 が用いられています。ELISPOT の捕獲用抗体は、ポリビニリデン・ジフルオリド(PVDF)で被膜されたマイクロウェルプレートに無菌的にコートされ ています。血清蛋白質でプレートをブロックした後、試験する細胞を様々な密度で抗原またはマイトジェンとともに 37℃で培養します。活性化された 細胞から分泌されたサイトカインは、PVDF 膜上にコートされた捕獲用抗体によって局所的に捕らえられます。ウェルを細胞や残骸、培地成分を除くた めに洗います。捕えたサイトカインを検出するために、捕獲用抗体とは異なるエピトープに結合するビオチン化二次抗体を加えます。検出されたサイ トカインは、アビジン -HRP と基質(例えば AEC)を用いて視覚化されます。色がついた最終産物(スポット)は、個々のサイトカイン産生細胞として 示されます。スポットは顕微鏡などを用いて手動で数えるか、マイクロウェルの画像を自動で読み取り、スポット数と大きさを分析します。 ELISPOT アッセイは、活性化した、あるいは反応している細胞を細胞一つレベルで分析することが可能です。一般のアッセイでは検出不能だった稀な 細胞集団(例えば抗原特異的に反応する少数の細胞)の頻度解析が、ELISPOT アッセイの感度の高さにより可能になりました。検出限界は、抗原特異 的な反応をモニタリングするために有効な 1/100,000 以下であり、癌、移植、感染症やワクチン開発を含む広範囲にわたる免疫学研究領域に適用可能 です。 Human IL-17A ELISPOT Assay: 左:ヒト末梢血単核細胞を24時間(マイトジェン、分裂促 進因子なし)培養。 右:ヒト末梢血単核細胞を PMA / イオノマイシン添加し 24 時間活性化。 Human Granzyme B ELISPOT Assay: 左:ヒト末梢血単核細胞を24時間(マイトジェン、分裂促 進因子なし)培養。 右:ヒト末梢血単核細胞を PMA / イオノマイシン添加し 24 時間活性化。 Contents of eBioscience’s Ready-SET-Go! ELISPOT Sets ▪ Capture Antibody: Pre-titrated, Functional Grade (low endotoxin) purified antibody ▪ Detection Antibody: Pre-titrated, biotin-conjugated antibody ▪ ELISA/ELISPOT Coating Buffer Powder ▪ Assay Diluent: 5X concentrated ▪ Detection enzyme: pre-titrated Avidin-HRP ▪ Certificate of Analysis: Lot-specific instructions for dilution of antibodies and enzyme 11 cytokines Mouse Ready-Set-Go! ELISPOT Sets Mouse Price 10 plates Price IFN-γg 88-7384-21 62,000 88-7384-88 164,000 Mouse IFN-γg ELISPOT Assay: PLP139-151ペプ チドで免疫したマウスの脾臓細胞を4週間後回 収し、PLP139-151で24時間活性化しマウス IFN-γELISPOTアッセイを行ないました。 コントロールのウェルは培養液のみです。 IL-1α 88-7813-21 62,000 88-7813-88 164,000 Mouse IL-1aα ELISPOT Assay: チオグロコレー トで誘導されたマウス腹腔滲出細胞を採取 し、1ug/ml LPSで24時間刺激しました。コン トロールのウェルは培養液のみです。 164,000 Mouse IL-2 ELISPOT Assay: PLP139-151ペプチ ドで免疫したマウスの脾臓細胞を4週間後回 収し、PLP139-151で24時間活性化しマウス IL-2 ELISPOTアッセイを行ないました。コ ントロールのウェルは培養液のみです。 164,000 Mouse IL-4 ELISPOT Assay: OVA/IFAで免疫し た8週令のマウスの脾臓細胞をOVAで36時間 活性化しマウスIL-4 ELISPOTアッセイを行 ないました。コントロールのウェルは培養液 のみです。 164,000 Mouse IL-5 ELISPOT Assay: SJL/J系マウスの脾 臓細胞をHL-1培養液を用い2ug/ml ConAで48 時間刺激しマウスIL-5 ELISPOTアッセイプ レート(FG標識TRFK5抗体プレコート済) (右)。左のウェルは培養液のみです。 164,000 Mouse IL-6 ELISPOT Assay: マウス脾臓細胞 (5X105 cells/ well)をLPS (1ug/ml)で48時 間活性化しマウスIL-6 ELISPOTアッセイを 行ないました。コントロールのウェルは培養 液のみです。 IL-2 IL-4 IL-5 IL-6 88-7824-21 88-7844-21 88-7825-21 88-7864-21 62,000 62,000 62,000 62,000 88-7824-88 88-7844-88 88-7825-88 88-7864-88 IL-10 88-7804-21 62,000 88-7804-88 164,000 Mouse IL-10 ELISPOT Assay: マウス脾臓細胞 (5X105 cells/ well)をLPS (1ug/ml)で48時 間活性化しマウスIL-10 ELISPOTアッセイを 行ないました。コントロールのウェルは培養 液のみです。 IL-13 88-7834-21 67,000 88-7834-88 180,000 Mouse IL-13 ELISPOT Assay: 脾臓細胞をPMAと イオノマイシンで24時間活性化しマウスIL-13 ELISPOTアッセイを行ないました(右)。 コン トロールのウェルは培養液のみです(左)。 179,000 Mouse IL-17A ELISPOT Assay: 脾臓細胞をPMA とイオノマイシンで24時間活性化しマウス IL-17A ELISPOTアッセイを行ないました( 右)。 コントロールのウェルは培養液のみで す(左)。 164,000 Mouse TNF-αa ELISPOT Assay: マウス脾臓細胞 (5X105 cells/ well)を抗CD3で48時間活性 化しマウスTNF-α ELISPOTアッセイを行 ないました。コントロールのウェルは培養液 のみです。 IL-17A TNF-αa 12 2 plates 88-7370-21 88-7328-21 66,000 62,000 88-7370-88 88-7328-88 Human Ready-Set-Go! ELISPOT Sets Human 2 plates Price 10 plates Price Granzyme B 88-8399-21 69,000 88-8399-88 172,000 Human Granzyme B ELISPOT Assay: 左:ヒト末梢血単核細胞をマイトジェンなし で 24 時間培養 右:ヒト末梢血単核細胞を PMA / イオノマイ シン添加し 24 時間培養 IFN-γ 88-7386-21 62,000 88-7386-88 164,000 Human IFN-gγ ELISPOT Assay: ヒト末梢血単核 細胞をPMA / イオノマイシンで活性化しヒト IFN-γ ELISPOTアッセイを行ないました。 コントロールのウェルは培養液のみです。 164,000 Human IL-1bβ ELISPOT Assay: IL-4とGM-CSF で7日間処置した末梢血単核細胞から樹状細 胞を分化させました。分化した樹状細胞を LPS(右)または培養液(左)で24時間培養 しました。 Human IL-4 ELISPOT Assay: ヒト末梢血単核細 胞をPMA(50ng/ml)、イオノマイシン(500ng/ ml)、LPS(1ng/ml)で24時間培養しヒトIL-4 ELISPOTアッセイを行ないました。コントロ ールのウェルは培養液のみです。. IL-1β 88-7810-21 62,000 88-7810-88 IL-4 88-7849-21 62,000 88-7849-88 164,000 IL-5 88-7859-21 62,000 88-7859-88 164,000 IL-6 IL-10 IL-12 p70 IL-13 IL-17A TNF-α 88-7869-21 88-7805-21 88-7879-21 88-7839-21 88-7876-21 88-7398-21 62,000 62,000 62,000 62,000 67,000 62,000 88-7869-88 88-7805-88 88-7879-88 88-7839-88 88-7876-88 88-7398-88 164,000 Human IL-6 ELISPOT Assay: ヒト末梢血単核細 胞をPMA(50ng/ml)、イオノマイシン(500ng/ ml)で24時間培養しヒトIL-6 ELISPOTアッセ イを行ないました。コントロールのウェルは 培養液のみです。 164,000 Human IL-10 ELISPOT Assay: ヒト末梢血単核細 胞をPMA(50ng/ml)、イオノマイシン(500ng/ ml)、LPS(1ng/ml)で24時間培養しヒトIL-10 ELISPOTアッセイを行ないました。コントロ ールのウェルは培養液のみです。. 164,000 Human IL-12 p70 ELISPOT Assay: ヒト末梢血単核 細胞をIFN-γで2時間培養し、その後LPSで 16時間培養しヒトIL-12 p70 ELISPOTアッセ イを行ないました。コントロールのウェルは 培養液のみです。 164,000 Human IL-13 ELISPOT Assay: ヒト末梢血単核細胞 (3X105 cells/ well)(100ul RPMI培養液中) をCandida(10ug/ml)で24時間処置なし(左) または処置(右)したIL-13 ELISPOTアッセ イプレートです。(FG標識PVM13-1抗体プレ コート済) 180,000 Human IL-17A ELISPOT Assay: 左:ヒト末梢血単核細胞をマイトジェンなし で 24 時間培養 右:ヒト末梢血単核細胞を PMA/Ionomycin 添加し 24 時間培養 164,000 Human TNF-αa ELISPOT Assay: ヒト末梢血単核細 胞をPMA(50ng/ml)、イオノマイシン(500ng/ ml)、LPS(1ng/ml)で24時間培養しヒトTNFαELISPOTアッセイを行ないました。コント ロールのウェルは培養液のみです。 13 cytokines In Vivo Cytokine Capture Assay Principle In vivo におけるサイトカイン産生の測定は、産生と分泌の後に急速に消費や代謝、排泄がおこるという問題があります。In Vivo Cytokine Capture Assay(IVCCA)は、標準のサイトカイン ELISA に工夫を施したもので、in vivo における半減期を著しく延ばすこ とにより、血清中のサイトカイン測定を容易にしました。IVCCA は、血清サイトカインを測定するために、標準 ELISA の 30 から 1000 倍感度を増しました。 In vivo におけるサイトカイン半減期を延長させるために、マウスに少量のビオチン化抗サイトカイン中和抗体(無菌、低エンドトキ シン)を注入します。この in vivo 捕獲抗体はサイトカインに結合して、サイトカインの利用、分解、排出を抑制します。サイトカイ ン / ビオチン化抗サイトカイン抗体の複合体は、血液中に蓄積します。血清に集めたサイトカインは、マイクロプレートウェルに第2 のエピトープを認識する抗体がコートされた ELISA プレート内に添加することによって測定されます(サンドイッチ ELISA)。IVCCA は、 マウス IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-15、IFN-γ と TNF-α が用意されています。In vivo での活性化、捕獲、血清採取については、 主要引例で詳述されています (Finkelman, F., et al. 2003. Current Protocols in Immunology, Unit 6.28)。 すでに 25 以上の論文で、 in vivo サイトカイン測定に IVCCA の使用が取り上げられています。 Antibodies & Controls for In Vivo Cytokine Capture Assay Target Cytokine In Vivo Capture Antibodies Cat. No. Isotype Controls for In Vivo Capture Antibodies Cat. No. ELISA Coating Antibody Cat. No. IL-2 FG Biotin anti-mouse IL-2, clone JES6-5H4 36-7021 FG Biotin Rat IgG2b 36-4031 Affinity Purified anti-mouse IL-2, clone JES6-1A12 14-7022 IL-4 FG Biotin anti-mouse IL-4, clone BVD4-1D11 36-7043 FG Biotin Rat IgG2b 36-4031 Affinity Purified anti-mouse IL-4, clone BVD6-24G2 14-7042 IL-6 FG Biotin anti-mouse IL-6, clone MP5-32C11 36-7062 FG Biotin Rat IgG2a 36-4321 Affinity Purified anti-mouse IL-6, clone MP5-20F3 14-7061 IL-10 FG Biotin anti-mouse IL-10, clone JES5-16E3 36-7101 FG Biotin Rat IgG2b 36-4031 Affinity Purified anti-mouse IL-10, clone JES5-2A5 14-7102 IL-15 FG Biotin anti-mouse IL-15, clone AIO.3 36-7154 FG Biotin Rat IgG2a 36-4321 Affinity Purified anti-mouse IL-15, polyclonal - IFN-γ FG Biotin anti-mouse IFN-γg, clone R4-6A2 36-7312 FG Biotin Rat IgG1 36-4301 Affinity Purified anti-mouse IFN-γ, clone AN-18 14-7313 TNF-αa FG Biotin anti-mouse TNF-αa, clone TN3-19 36-7423 FG Biotin Armenian Hamster IgG 36-4888 Affinity Purified anti-mouse TNF-α, polyclonal rabbit IgG 14-7341 Protocol For step-by-step methodology of this application, please refer to this detailed reference: Finkelman, F., S. Morris, T. Orekhova, and D. Sehy. 2003. The In Vivo Cytokine Capture Assay for measurement of cytokine production in the mouse. In Current Protocols in Immunology. Unit 6.28. J. Coligan, A. Kruisbeek, D. Margulies, E. Shevach, and W. Strober, eds. John Wiley and Sons, New York. 14 IVCCA References: 1) Marat V. Khodoun, et al. Basophils Initiate IL-4 Production during a Memory T-dependent Response. J. Exp. Med., Oct 2004; 200: 857 - 870. 2) Ram Raj Singh, et al. Differential Contribution of IL-4 and STAT6 vs STAT4 to the Development of Lupus Nephritis. J. Immunol., May 2003; 170: 4818 - 4825. 3) Allen Smith, et al. Deficiencies in Selenium and/or Vitamin E Lower the Resistance of Mice to Heligmosomoides polygyrus Infections. J. Nutr., Apr 2005; 135: 830 - 836. 4) Roman Puliaev, et al. Via Differential Requirement for IFN-gamma in CTL Maturation in Acute Murine Graft-versus-Host Disease. J. Immunol., Jul 2004; 173: 910 - 919. 5) Fred D. Finkelman, et al. 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