〈研究用〉 アクティブ・モティフ社 ヒストンペプチドアレイキャンペーン キャンペーン期間：2013年6月10日〜 8月30日受注分まで MODified™ Histone Peptide Array ヒストン修飾を簡便にスクリーニングできるペプチドアレイ MODifiedTM Histone Peptide Array は，ヒストンやヒストン翻訳後修飾に対する相互作用に関して抗体，タンパク質，酵素をスクリーニング するために使用できる有用な研究ツールです。各アレイは，デュプリケートで 384 通りの多様なヒストン修飾の組み合わせから構成されています。 修飾には，ヒストンH2A，H2B，H3，H4 の N 末端尾部のアセチル化，メチル化，リン酸化，シトルリン化が含まれます。 この独自のヒストンアレイには，ペプチド19merあたり最大4つの修飾が搭載されているため，個々の修飾についての研究だけでなく，近接 する修飾によって部位認識や結合が変化するかどうかも確認できます。アレイプロトコールは簡単で，ウエスタンブロットと同等の原理で実験 を行います。検出にはECLベースのシステムまたは比色システムのいずれかを使用できます。フィルムまたはCCDカメラで画像を取り込み， 無料のソフトウェアを用いて解析します（図 1） 。 40 A Histone H3K9me3 pAb 35 Specificity factor 30 25 20 15 B 10 5 0 H H H H H H H H H 9m 3K27m 3R2m 3R8m 3R8m 3K4ac 3K4m 3K4m 3K4m 3R2m e2a e2 e3 e1 e3 e3 e2s e2a e2s H3K 図 1：Histone H3K9me3 pAb の交差反応性の解析 MODified™ Histone Peptide Arrayおよび MODified™ Array Labeling Kitを用 いて，アクティブ・モティフ社の Histone H3K9me3 pAb（商品コード：39161）の交差 反応性を解析した。検出後，イメージをCCDカメラにより画像取込みを行い，アク ティブ・モティフ社のアレイ解析ソフトウェアを用いて解析した。グラフの値は，全 てのスポットの平均強度をH3K9me3 以外のスポットの平均強度で除した比率を示 している。この抗体はHistone H3K9me3と高い特異性を有し，他の修飾とほとんど 交差反応性を示さないことがわかる。 ヒストン修飾アレイの利点 ◆ヒストン特異的 ― 特定のヒストン修飾に対する独自のアレ イにより解析します。 ◆近隣修飾の影響 ― 各々のペプチドは最大4 種類のヒストン 修飾の組合せを有します。それにより近隣修飾の影響の解 析を可能にします。 C 図 2：G9a methyltransferase と MODified ™ Histone Peptide Array と の反応 MODified™ Histone Peptide Array（ 商 品 コ ー ド：13001）に A）25µM G9a methyltransferase（商品コード：31327） ， B）25µM G9a mutant H904K（商品コード： 31328）またはC）酵素コントロールなしを，1mM AdoMet 存在下でオーバーナイト反 応させた。アレイはHistone H3K9me2 抗体を用いて検出した。新しいメチル化部位 が野生型 G9a histone methyltransferase によって処理されたアレイ上で観察され た。ペプチド基質上でこのヒストン修飾酵素が活性を示したことがわかる。 ◆ウエスタンブロットのような検出方法 ― 迅速かつ簡便に ECLまたは比色法で検出します。 MODifiedTM Histone Peptide Array の簡易ラベリングと化学発光検出に必要な試薬を含む，MODifiedTM Array Labeling Kit（別売） を用意しています。さらに，MODifiedTM Histone Peptide Arrayと併用して，ヒストン修飾認識タンパク質ドメインとヒストン修飾間の 結合解析を行うことができる，MODifiedTM Protein Domain Binding Kitを発売しました。これらキットの詳細および無料のArray Analyse Software のダウンロードについては，www.activemotif.jp/modified をご覧ください。 包 装 商品 コード 定価 （税別） ヒストンペプチドアレイキャンペーン 1 array 13001 ¥39,800 ヒストンペプチドアレイキャンペーン 5 arrays 13005 ¥179,800 ➡ ¥143,800 5 rxns 13006 ¥18,000 キャンペーン対象外 5 rxns 13007 ¥28,000 キャンペーン対象外 製品名 MODified™ Histone Peptide Array NEW MODified™ Array Labeling Kit MODified™ Protein Domain Binding Kit アクティブ•モティフ株式会社 キャンペーン 価格（税別） ➡ ¥31,800 〈研究用〉 アクティブ・モティフ社 ヒストン解析 定番製品のご紹介 Histone Purification Kit / Histone Purification Mini Kit 翻訳後修飾を保持した高純度コアヒストンタンパク質の単離 日本語版プロトコール配布中 e-mailでご請求ください Histone Purification Kits の使用法 キット購入で ソーラーライト プレゼント中 （2013 年 8 月 30 日受付分まで） ※ご購入いただいた製品と一緒にお届けします。 アクティブ・モティフ社の Histone Purification Kit および Histone Purification Mini Kitは，翻訳後修飾を保持したまま，培養細胞お よび組織試料から簡単にコアヒストンを単離できます（図1） 。 高純 度のヒストン画分を単離するために，本キットではユニークな精製 用樹脂および独自の溶出バッファーを採用しています。標準的な酸 抽出法とは異なり，コアヒストンを1画分として単離するだけでなく， さらにH2A/H2B 画分とH3/H4 画分に分けることができます（図 2） 。 さらにユニークな抽出バッファーにより不要な酵素反応を防ぎ，ヒ ストンの翻訳後修飾を保存します。 Acetylation 図 2：Histone Purification Kit を用いて精製したコアヒストンの SDS-PAGE 解析 Methylation 各レーンに10µg の試料を加え16%Tris-glycine ゲルで電気泳動を行った。 左図：対数増殖期の組織培養細胞（TC）およびラット脳組織（Brain）から単離したコ アヒストン。 右図：HeLa 細胞から単離した ヒストンH2A/H2B（レーン1）およびヒストンH3/H4（レ ーン 2） Phosphorylation 図 1：翻訳後修飾の保持 酸抽出法で単離したヒストンおよび Histone Purification Kitで単離したヒストンの 比較。本キットで単離したヒストンは前者の方法で単離したヒストンと比較して，同 等またはそれ以上にヒストンのアセチル化，メチル化，リン酸化が保持されている。 ヒストン精製キットの利点 ◆アセチル化，リン酸化，メチル化などのヒストン修飾を保持 できます。 キット Histone Purification Kit Histone Purification Mini Kit フォーマット 2画分 0.5-2.5 mg （H2A/H2B, H3/H4） スピンカラム 1画分 0.5-2.5 mg （H2A, H2B, H3, H4） ミニスピン カラム 1画分 0.1-0.5 mg （H2A, H2B, H3, H4） 表 1: Histone Purification Kit の比較 製品名 ◆ Histone Purification Mini Kitを用いれば，ヒトだけでなく 出芽酵母由来のヒストンを精製可能です。 Histone Purification Kit Histone Purification Mini Kit 2 3 容量 重力流 ◆精製したヒストンは1画分（H2A, H2B, H3 および H4）また は2 画分（H2A/H2B および H3/H4）に単離できます。 1 溶出方法 包 装 商品コード 定価（税別） 10 rxns 40025 ¥62,000 20 rxns 40026 ¥62,000 資料をご用意しています。 1 クロマチンおよびヒストン修飾解析2013 2 Epigenetics Products & Services 2013（英語版） 3 Epigenetics Services (英語版) ご希望の方は， 「希望するカタログ名」 ・「氏名」 ・ 「所属」 ・ 「郵便番号」 ・ 「住所」を明記の上，電子メールにて [email protected] 宛 にご請求ください。 アクティブ•モティフ株式会社 www.activemotif.jp 〒 162-0824 東京都新宿区揚場町 2-21 Tel: 03-5225-3638 Fax: 03-5261-8733 e-mail: [email protected] 〈130601His〉
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