Antosiyaninler birçok meyve, sebze ve çiçeklerin kendine özgü pembe, kırmızı, viole, mavi ve mor tonlarındaki renklerini veren suda çözünebilir nitelikli doğal renklerdir. Antosiyaninler ortam pH sına göre adeta bir indikatör gibi renk değiştirmektedir. Örneğin pH 1 ‘de renkli oksonyum formuna, pH 4.5’te ise renksiz karbinol psödobaz (hemiketal) formuna dönüşmektedir. Yöntemin ilkesi: Monomerik antosiyaninlerin pH 1’de renkli oksonyum formunun, pH 4.5’te ernksiz hemiketal formunun egemen olmasına dayanmaktadır. Buna göre ortam pH 1 ve pH 4.5 olduğu zaman ölçülen absorbans değerlerinin farkı, doğrudan antosiyanin konsantrasyonu ile doğru orantılıdır. Çözeltiler: pH 1 tampon çözeltisi: Bir behere 1.86 g KCl tartılır ve üzerine 980 mL su eklenip karıştırıldıktan sonra yoğun HCl ile pH değeri 1’e ayarlanır. pH 4.5 tampon çözeltisi: Bir behere 54.43 g sodyum asetat tartılır ve üzerine yaklaşık 960 mL damıtık su eklenip karıştırılır. pH derecesi yoğun HCl eklenerek 4.5’e ayarlanır. Ekstraksiyon: Waring blender haznesine örnek tartılır ve üzerine ekstraksiyon çözeltisi (etil alkol ilave edilir) maksimum hızda birkaç kere çalıştırılıp homojen bir ezme oluşturulur. Filtre kağıdından süzülerek ekstrakt elde edilir. 1 mL ekstrakt 9 mL pH 1 tamponuyla karıştırılarak pH 1 deki renkli form elde edilir, aynı şekilde 1 mL ekstrakt 9 mL pH 4.5 tamponuyla karıştırılarak renksiz form oluşturulur. Hesaplama: En yüksek absorbans veren dalga boyu olan 523 nm ile 700 nm’de hem pH 1 hem de pH 4.5 tamponuyla hazırlanan karışımlarla spektrofotometrede ölçümler yapılır. A = (Amax – A 700nm)pH 1.0 – (Amax – A700nm)pH 4.5 Antosiyanin pigmenti (cyanidin-3-glucoside equivalents, mg/L) =(A*449,2*SF*1000)/26900
© Copyright 2024 Paperzz
