POSTUPCI U LABORATORIJU ZA HUMANU REPRODUKCIJU dr sc Sanja Vujisić POSTUPCI dijagnostiĉki postupak: SPERMIOGRAM terapijski postupci: INSEMINACIJA IZVANTJELESNA OPLODNJA ANALIZA KVALITETE SJEMENA Potrebno 3 do 5 dana apstinencije Uzorak se daje masturbacijom u sterilnu posudicu Analizira se: Broj i pokretljivost spermija Morfologija spermija Vitalnost spermija Parametri za postavljanje dijagnoze Donja granična vrijednost Parametar Volumen sjemena (ml) 1,5 (1,4-1,7) Ukupan broj spermija (106 u ejakulatu) 39 (33-46) Koncentracija spermija (106 po ml) 15 (12-16) Ukupno pokretnih (PP+P, %) 40 (38-42) Progresivno pokretnih (PP, %) 32 (31-34) Vitalnosti (živih spermija, %) 58 (55-63) Morfologija spermija (urednih oblika, %) 4 (3 – 4) pH ≥7,2 Peroxidaza-pozitivni leukociti (106 po ml) <1 MAR test (pokretni spermiji vezani na čestice, %) <50 IB test (pokretnih spermija vezanih na zrnca, %) <50 Koncentracija leukocita (106 po ml) <1 Dijagnoze na osnovi parametara kvalitete sjemena Dijagnoza Značenje ASPERMIA - nema sjemena (ili retrogradna ejakulacija) ASTHENOZOOSPERMIA - postotak progresivno pokretnih morfološki urednih spermija je ispod graniĉne vrijednosti AZOOSPERMIA - nema spermija u ejakulatu KRIPTOZOOSPERMIA - izostanak spermija u nativnom ejakulatu, ali naĊeni u talogu nakon centrifugiranja HAEMOSPERMIA LEUKOSPERMIA - prisustvo eritrocita u ejakulatu - prisustvo leukocita iznad graniĉne vrijednosti Dijagnoze na osnovi parametara kvalitete sjemena NEKROZOOSPERMIA - nizak postotak ţivih, visok postotak nepokretnih spermija u ejakulatu NORMOZOOSPERMIA - ukupan broj spermija, postotak progresivno pokretnih i morfološki urednih spermija su jednaki ili iznad graniĉnih vrijednosti OLIGOASTHENOZOOSPERMIA - ukupan broj spermija i postotak progresivno pokretnih su ispod graniĉnih vrijednosti OLIGOASTHENOTERATOZOOSPERMIA - ukupan broj spermija, te postotak progresivno pokretnih i morfološki uredenih spermija su ispod graniĉnih vrijednosti OLIGOTERATOZOOSPERMIA - ukupan broj i postotak morfološki urednih spermija su ispod graniĉnih vrijednosti OLIGOZOOSPERMIA - ukupan broj spermija je ispod graniĉne vrijednosti TERATOZOOSPERMIA - postotak morfološki urednih spermija je ispod graniĉne vrijednosti Morfologija spermija -razmaz ejakulata se boja i analizira pod povećanjem x 1000 - na slici oznaĉeni zvjezdicom su morfološki uredni spermiji VITALNOST SPERMIJA vitalnost spermija - test ĉiji je princip da mrtve stanice s oštećenom membranom upijaju boju test se koristi da bi se utvrdio postotak ţivih nepokretnih spermija AGLUTINACIJA SPERMIJA aglutinacija - sljepljivanje spermija: indikacija za imunološki uzrok neplodnosti ili upalnu promjenu MAR test – test koji se koristi da bi se otkrilo prisustvo protuspermalnih protutijela i odredila njihova vrsta (IgG, IgM ili IgA) HALO TEST – TEST DNA FRAGMENTACIJE 1. SPERMIJ S FRAGMENTIRANOM DNA 2. SPERMIJI S UREDNOM DNA Prema rezultatima DNA fragmentacije, odluĉuje se o naĉinu lijeĉenja neplodnosti AZOOSPERMIA ukoliko se ne naĊu spermiji kako u nativnom preparatu ejakulata, kao i nakon koncetriranja uzorka najmanje u dva navrata tijekom razdoblja od dva mjeseca, potrebno je razluĉiti da li se radi o obstruktivnoj ili neobstruktivnoj azoospermiji kod obstruktivne azoospermije još uvijek je moguće ostvariti ţeljeno roditeljstvo stoga je potrebno uĉiniti: - mikrobiološku analizu urina i ejakulata analizu razine FSH u krvi analizu razine inhibina B u krvi analizu enzima LDHx u ejakulatu analizu mikrodelecije Y kromosoma kariogram ultrazvuk, pregled i mišljenje urologa MIKROBIOLOŠKE PRETRAGE VAŢNO: PRIJE ULASKA U POSTUPAK INSEMINACIJE I IZVANTJELESNE OPLODNJE POTREBNO JE IMATI UREDNE NALAZE MIKROBIOLOŠKE ANALIZE URINA I EJAKULATA TERAPIJSKI POSTUPCI INSEMINACIJA AIH IZVANTJELESNA OPLODNJA IVF – in vitro fertilization ICSI – intracytoplasmatic sperm injection RADNI PROSTOR ZA ANALIZU, PRIPREMU I OBRADU SJEMENA BESPRAŠNA KOMORA S GRIJANOM PLOHOM CENTRIFUGA FAZNO KONTRASTNI MIKROSKOP PRIPREMA SJEMENA SJEME SE DAJE MASTURBACIJOM U STERILNU POSUDU, POTREBNO 3-5 DANA APSTINENCIJE 30 MINUTA NAKON DAVANJA, PROVJERAVA SE KVALITETA UZORKA UZORAK SE CENTRIFUGIRA I ISPIRE SA ZA TO PREDVIĐENIM HRANILIŠTEM (metoda swimm up ili na gradijentu gustoće) METODOM ISPLIVAVANJA ODJELJUJU SE POKRETNI SPERMIJI RADNI PROSTOR ZA MANIPULACIJU SA SPOLNIM STANICAMA I ZAMECIMA STEREOMIKROSKOP S GRIJANOM PLOHOM STOLNI INKUBATOR BESPRAŠNA KOMORA INKUBATOR S KONTROLOM CO2 I O2 SALA ZA ZAHVATE OPREMA ZA POSTUPAK ANESTEZIJE GRIJANI STALAK ZA EPRUVETE UZV PODESIVI GINEKOLOŠKI STOL ASPIRACIJSKA PUMPA PRIBOR ZA PUNKCIJU I ASPIRACIJU FOLIKULA UZV PRIKAZ JAJNIKA S FOLIKULIMA SADRŢAJ FOLIKULA ASPIRIRAN U EPRUVETU PUNKCIJA I ASPIRACIJA FOLIKULA, IZOLACIJA JAJNIH STANICA IZOLACIJA JAJNE STANICE IZ FOLIKULARNOG ASPIRATA POHRANA JAJNE STANICE U PRIPREMLJENU PETRIJEVU POSUDU ZA STANIĈNU KULTURU SPREMANJE U INKUBATOR PROVJERA KVALITETE JAJNE STANICE NEZRELA JAJNA STANICA U FAZI GERMINALNE VEZIKULE JAJNA STANICA U ATREZIJI ZRELA JAJNA STANICA Fertilizacija jajnih stanica Kriopohrana jajnih stanica FERTILIZACIJA JAJNIH STANICA 4 SATA NAKON PUNKCIJE I APSIRACIJE, JAJNE STANICE SU SPREMNE ZA FERTILIZACIJU KLASIČAN IVF POSTUPAK: DODAVANJE SPERMIJA U HRANILIŠTE S JAJNIM STANICAMA POSTUPAK ICSI: INJICIRANJE JEDNOG SPERMIJA U JAJNU STANICU INDIKACIJA ZA PROVOĐENJE POSTUPKA ICSI Izostanak oplodnje u prethodnom IVF postupku Muški ĉimbenik neplodnosti INJICIRANJE JEDNOG SPERMIJA U JAJNU STANICU Dob pacijentice Povišena razina FSH u pacijentice Inverzni mikroskop s mikromanipulatorima za provoĊenje postupka ICSI JAJNA STANICA FIKSIRANA S HOLDING PIPETOM PETRIJEVA POSUDICA S HRANILIŠTIMA PRIPREMLJENIM ZA POSTUPAK ICSI SPERMIJI U PVP MEDIJU ZA USPORAVANJE MOTILITETA POSTUPAK ICSI U VRŠNOM DIJELU ICSI PIPETE IMOBILIZIRAN SPERMIJI ICSI PIPETA PROŠLA BARIJERU ZONE PELUCIDE I NALAZI SE U CITOPLAZMI JAJNE STANICE SPERMIJ ISPUŠTEN U CITOPLAZMI JAJNE STANICE POSTUPAK TESE - ICSI INDIKACIJA: azoospermia - FSH < 12 IU/ml - inhibin B uredan na dan punkcije i aspiracije folikula, urolog uzima tkivo testisa tkivo se dostavlja u laboratorij: -mehaniĉki usitnjava i pregledava Ukoliko se naĊu zreli oblici spermija, dio tkiva se priprema za postupak ICSI, a dio tkiva se kriopohrani za moguće naredne postupke STANIČNA KULTURA GAMETA, RANIH ZAMETAKA I BLASTOCISTI PRVI DAN (24 SATA OD ASPIRACIJE FOLIKULA) DRUGI DAN TREĆI DAN ČETVRTI DAN PETI DAN -PROMJENA HRANILIŠTA -PROVJERA FERTILIZACIJE -PROVJERA DINAMIKE DIJELJENJA - OCJENA ZAMETAKA -OCJENA ZAMETA -PRIJENOS ZAMETAKA ILI -PROMJENA HRANILIŠTA I NASTAVAK KULTURE ZA RAZVOJ BLASTOCISTE -PROVJERA I OCJENA RAZVOJA ZAMETAKANNAKON -OCJENA RAZVOJA BLASTOCISTI -PRIJENOS NAJVIŠE 2 U MATERIŠTE -KRIOPOHRANA BLASTOCISTI PRIBOR POTREBAN ZA MANIPULACIJU SPOLNIM STANICAMA I ZAMECIMA PRVI DAN PROVJERA OPLODNJE JAJNIH STANICA ZIGOTA S DVIJE PROJEZGRE UREDNA OPLODNJA ZIGOTA S TRI PROJEZGRE NEPRAVILNO OPLODNJA RAZVOJ ZAMETAKA OD 2. DO 5. DANA DRUGI DAN RANI ZAMETAK PETI DAN BLASTOCISTE TREĆI DAN OSAM STANIĈNI ZAMETAK ČETVRTI DAN FAZA KOMPAKTACIJE PRIJENOS ZAMETAKA KATETER ZA PRIJENOS ZAMETAKA SOBA ZA OPORAVAK PACIJENTICA NAKON PROVEDENOG POSTUPKA MEDICINSKI POMOGNUTE OPLODNJE KRIOPOHRANA SPOLNIH STANICA I ZAMETAKA Metode: - ULTRABRZO ZAMRZAVANJE SJEMENA U KRIOAMPULAMA - VITRIFIKACIJA JAJNIH STANICA I ZAMETAKA POHRANA BIOLOŠKOG MATERIJALA U SPREMNICIMA ZA TEKUĆI DUŠIK NA -196oC RADNI PROSTOR ZA KRIOPOHRANU BIOLOŠKOG MATERIJALA
© Copyright 2024 Paperzz
