HYDRAGEL IEP PLUS

HYDRAGEL IEP PLUS
Ref. 4037
2014/11
HYDRAGEL IEP PLUS - 2014/11
ΧΡΗΣΗ ΓΙΑ ΤΗΝ ΟΠΟΙΑ ΠΡΟΟΡΙΖΕΤΑΙ
Το κιτ HYDRAGEL IEP PLUS προορίζεται για την ανίχνευση κατακρημνιστικών αντισωμάτων έναντι παρασιτικών ή μυκητικών αντιγόνων (από
Candida και Aspergillus) ή λόγω έκθεσης σε αντιγόνα πτηνών στον ανθρώπινο ορό, μέσω ανοσοηλεκτροφόρησης σε gel αγαρόζης με αλκαλικό
ρυθμιστικό διάλυμα (pH 8,7). Οι ηλεκτροφορημένες αντιγονικές πρωτεΐνες ανοσοκαθηλώνονται από τα αντισώματα που περιέχει ο ορός του
ασθενούς προς ανάλυση. Στη συνέχεια, οι κατακρημνιστικές πρωτεΐνες χρωματίζονται με όξινη ιώδη χρωστική και το πλεόνασμα της χρώσης
αφαιρείται με όξινο διάλυμα. Το gel είναι έτοιμο για ερμηνεία και η ανάλυση είναι μόνο ποιοτική.
Το HYDRAGEL IEP PLUS προορίζεται αποκλειστικά για εργαστηριακή χρήση.
Κάθε gel αγαρόζης του κιτ HYDRAGEL IEP PLUS προορίζεται για την ανάλυση έξι δειγμάτων.
Για in vitro διαγνωστική χρήση.
ΑΡΧΗ ΤΗΣ ΕΞΕΤΑΣΗΣ
Η διαδικασία ανοσοηλεκτροφόρησης, σύμφωνα με τους Grabar και Williams, βασίζεται στην απεικόνιση ειδικών πρωτεϊνών μέσω γραμμών
κατακρήμνισης που δημιουργούνται μεταξύ αντιγόνου και αντισώματος, μετά τον ηλεκτροφορητικό διαχωρισμό αυτών των πρωτεϊνών.
Όταν τα διαλυτά αντιγόνα έρχονται σε επαφή με αντισώματα σε ένα κατάλληλο μέσο διάχυσης, όπως είναι το gel αγαρόζης, διαχέονται το ένα
προς το άλλο και σχηματίζουν ορατές γραμμές κατακρήμνισης κατά μήκος της ζώνης διασύνδεσης των βέλτιστων σχετικών συγκεντρώσεων.
Η διαδικασία ανοσοηλεκτροφόρησης πραγματοποιείται σε τέσσερα βήματα :
1. Διαχωρισμός αντιγονικών πρωτεϊνών με ηλεκτροφόρηση σε gel αγαρόζης.
2. Ανοσοκατακρήμνιση των ηλεκτροφορημένων πρωτεϊνών : εφαρμόζονται οροί ασθενών στις κατάλληλες τροχιές. Οι διαχωρισμένες
πρωτεΐνες και τα αντισώματα (από τον ορό του ασθενούς) διαχέονται μέσα στο gel. Τα αντισώματα δεσμεύουν τα αντίστοιχα αντιγόνα,
σχηματίζοντας γραμμές κατακρήμνισης.
3. Οι μη ειδικές μη κατακρημνισμένες, διαλυτές πρωτεΐνες απομακρύνονται από το gel με στύπωμα και πλύση. Το ίζημα του συμπλέγματος
αντιγόνου – αντισώματος παραμένει παγιδευμένο στο στρώμα του gel.
4. Οι κατακρημνισμένες πρωτεΐνες απεικονίζονται με χρώση και αναλύονται οι γραμμές κατακρήμνισης του ασθενούς.
Η διαδικασία ανοσοκατακρήμνισης δημιουργεί γραμμές κατακρήμνισης, οι οποίες είναι ειδικές προς ένα αντιγόνο και επιτρέπουν το
χαρακτηρισμό μιας λοίμωξης.
Το σχήμα, η θέση και το μήκος των γραμμών είναι χαρακτηριστικά για κάθε αντιγονική πρωτεΐνη.
Αυτή η γρήγορη και ευαίσθητη διαδικασία επιτρέπει την ανίχνευση αντισωμάτων σε ασθενείς, των οποίων ο ορός είναι ειδικός δείκτης της
ασθένειας.
ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΑ ΚΑΙ ΥΛΙΚΑ ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ ΜΕ ΤΟ ΚΙΤ HYDRAGEL IEP PLUS
ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ : Δείτε τα φύλλα δεδομένων ασφάλειας.
ΣΤΟΙΧΕΙΟ
Gel αγαρόζης (έτοιμο προς χρήση)
Ρυθμιστικό διάλυμα τρι-βαρβιτάλης (πυκνό διάλυμα)
Διάλυμα πλύσης (πυκνό διάλυμα)
Όξινη ιώδης χρωστική (πυκνό διάλυμα)
Διάλυμα αποχρωματισμού (πυκνό διάλυμα)
7 ταινίες κυψελών
Ταινίες διηθητικού χαρτιού
6 ιατρικές μάσκες
Διηθητικά χαρτιά - Λεπτά
Διηθητικά χαρτιά - Αδρά
PN 4037
10 gel
3 φιαλίδια, 75 mL έκαστο
6 φιαλίδια, 100 mL έκαστο
1 φιαλίδιο, 75 mL
1 φιαλίδιο, 100 mL
1 συσκ. των 10
1 συσκ. των 10
1 συσκ. των 10
6 συσκ. των 10
7 συσκ. των 10
ΓΙΑ ΑΡΙΣΤΑ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ :
Όλα τα αντιδραστήρια από το ίδιο κιτ πρέπει να χρησιμοποιούνται πάντα μαζί και σύμφωνα με τις οδηγίες χρήσης.
ΠΑΡΑΚΑΛΟΥΜΕ ΔΙΑΒΑΣΤΕ ΠΡΟΣΕΚΤΙΚΑ ΤΟ ΦΥΛΛΟ ΟΔΗΓΙΩΝ.
ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ : Μη χρησιμοποιείτε απιονισμένο νερό που διατίθεται ευρέως στην αγορά, όπως για παράδειγμα νερό για σιδέρωμα.
Χρησιμοποιείτε μόνο υπερκάθαρο νερό, όπως νερό ειδικό κατάλληλο για έγχυση.
1. GEL ΑΓΑΡΟΖΗΣ
Παρασκευή
Τα gel αγαρόζης είναι έτοιμα προς χρήση. Κάθε gel περιέχει : αγαρόζη, αλκαλικό ρυθμιστικό διάλυμα pH 8,7 ± 0,5, πρόσθετα, μη επιβλαβή στις
χρησιμοποιούμενες συγκεντρώσεις, αναγκαία για άριστη απόδοση.
Χρήση
Μέσο για ηλεκτροφόρηση πρωτεϊνών και ανοσοκατακρήμνιση.
Φύλαξη, σταθερότητα και σημεία αλλοίωσης
Φυλάσσετε τα gel οριζόντια εντός της συσκευασίας τους σε θερμοκρασία δωματίου (15 έως 30 °C) ή στη συντήρηση (2 έως 8 °C). Είναι σταθερά
μέχρι την ημερομηνία λήξης που σημειώνεται στις ετικέτες της συσκευασίας του κιτ ή των gel. (Το βέλος στην πρόσθια επιφάνεια του κουτιού
του κιτ πρέπει να δείχνει προς τα άνω). Αποφεύγετε τη φύλαξη κοντά σε παράθυρο ή σε πηγή θερμότητας. Αποφεύγετε τις μεγάλες
διακυμάνσεις θερμοκρασίας κατά τη φύλαξη.
ΜΗΝ ΚΑΤΑΨΥΧΕΤΕ.
- 43 -
Ο∆ΗΓΙΕΣ SEBIA - Ελληνικά
HYDRAGEL IEP PLUS - 2014/11
Πετάξτε τα gel όταν :
(i) στην επιφάνεια του gel σχηματιστούν κρύσταλλοι ή ιζήματα ή όταν η υφή του gel γίνει ιδιαίτερα μαλακή (λόγω κατάψυξης του gel),
(ii) αναπτυχθούν βακτήρια ή μούχλα,
(iii) υπάρχει μεγαλύτερη από το φυσιολογικό ποσότητα υγρού στο κουτί του gel (αποτέλεσμα της εξίδρωσης του ρυθμιστικού διαλύματος από
το gel λόγω ακατάλληλων συνθηκών φύλαξης).
2. ΡΥΘΜΙΣΤΙΚΟ ΔΙΑΛΥΜΑ ΤΡΙ - ΒΑΡΒΙΤΑΛΗΣ
Παρασκευή
Κάθε φιαλίδιο πυκνού ρυθμιστικού διαλύματος θα πρέπει να αραιώνεται μέχρι το 1 λίτρο με απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό.
Μετά την αραίωση, το διάλυμα εργασίας περιέχει : ρυθμιστικό διάλυμα pH 9,2 ± 0,5.
Χρήση
Ρυθμιστικό διάλυμα ηλεκτροφόρησης.
Φύλαξη, σταθερότητα και σημεία αλλοίωσης
Φυλάτε το πυκνό ρυθμιστικό διάλυμα σε θερμοκρασία δωματίου ή στο ψυγείο. Το πυκνό διάλυμα είναι σταθερό μέχρι την ημερομηνία λήξης η
οποία αναγράφεται στις ετικέτες της συσκευασίας του κιτ και των φιαλιδίων ρυθμιστικού διαλύματος.
Το αραιωμένο ρυθμιστικό διάλυμα παραμένει σταθερό για μια εβδομάδα σε θερμοκρασία δωματίου μέσα σε κλειστή φιάλη.
Πετάξτε το αραιωμένο ρυθμιστικό διάλυμα αν μεταβληθεί η όψη του, π.χ. θόλωση λόγω μικροβιακής επιμόλυνσης.
3. ΔΙΑΛΥΜΑ ΠΛΥΣΗΣ
Παρασκευή
Κάθε φιαλίδιο πυκνού διαλύματος πλύσης θα πρέπει να αραιώνεται μέχρι τα 500 mL με απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό.
Μετά την αραίωση, το διάλυμα εργασίας περιέχει : ρυθμιστικό διάλυμα pH 9,0 ± 0,5, πρόσθετα, μη επιβλαβή στις χρησιμοποιούμενες
συγκεντρώσεις, αναγκαία για άριστη απόδοση.
ΣΗΜΕΙΩΣΗ : Το διάλυμα πλύσης μπορεί να παρουσιάζει κρυστάλλωση χωρίς δυσμενείς επιπτώσεις στην απόδοσή του.
Για την ανασύσταση του διαλύματος πλύσης :
- Αδειάστε το φιαλίδιο του διαλύματος πλύσης στον περιέκτη που προορίζεται για την ανασύσταση.
- Προσθέστε απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό στο φιαλίδιο του διαλύματος πλύσης και κλείστε το προσεκτικά.
- Ανακινήστε έντονα το φιαλίδιο αναστρέφοντάς το επανειλημμένα, ώστε να διασπάσετε τους κρυστάλλους.
- Αδειάστε αυτό το διάλυμα στον περιέκτη που προορίζεται για την ανασύσταση.
- Γεμίστε τον όγκο έως τα 500 mL με απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό.
- Κλείστε τον περιέκτη και αναμίξτε το διάλυμα μέχρι να διαλυθούν εντελώς οι κρύσταλλοι.
Το διάλυμα πλύσης είναι έτοιμο για χρήση.
Χρήση
Για την πλύση των gel μετά την ανοσοκατακρήμνιση.
Φύλαξη, σταθερότητα και σημεία αλλοίωσης
Φυλάσσετε τα διαλύματα πλύσης προ και μετά την αραίωση σε θερμοκρασία δωματίου ή στο ψυγείο σε κλειστούς περιέκτες για να αποτραπεί
η εξάτμιση.
Το πυκνό διάλυμα πλύσης παραμένει σταθερό μέχρι την ημερομηνία λήξης η οποία αναγράφεται στις ετικέτες της συσκευασίας του κιτ και των
φιαλιδίων διαλύματος πλύσης.
Το αραιωμένο διάλυμα πλύσης παραμένει σταθερό για τρεις μήνες.
Πετάξτε το αραιωμένο διάλυμα πλύσης αν μεταβληθεί η όψη του, π.χ. αν θολώσει λόγω μικροβιακής επιμόλυνσης.
4. ΟΞΙΝΗ ΙΩΔΗΣ ΧΡΩΣΤΙΚΗ
Παρασκευή
Το φιαλίδιο με πυκνό διάλυμα όξινης ιώδους χρωστικής θα πρέπει να αραιώνεται μέχρι τα 300 mL με απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό.
Μετά την αραίωση, το διάλυμα εργασίας της χρωστικής περιέχει : όξινο διάλυμα pH ≈ 2, όξινη ιώδη χρωστική, αιθυλενογλυκόλη, πρόσθετα, μη
επιβλαβή στις χρησιμοποιούμενες συγκεντρώσεις, αναγκαία για άριστη απόδοση.
Χρήση
Για gel χρώσης με διαχωρισμό πρωτεϊνών μέσω ηλεκτροφόρησης.
ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ : Το διάλυμα έχει σχεδιαστεί για τη χρώση 10 μόνο gel. Αλλάζετε το διάλυμα μετά από 10 χρώσεις.
Φύλαξη, σταθερότητα και σημεία αλλοίωσης
Φυλάσσετε τα διαλύματα προ και μετά την αραίωση μακριά από το φως σε θερμοκρασία δωματίου ή στο ψυγείο σε κλειστούς περιέκτες για να
αποτραπεί η εξάτμιση. Το πυκνό διάλυμα χρωστικής είναι σταθερό μέχρι την ημερομηνία λήξης η οποία σημειώνεται στις ετικέτες της
συσκευασίας του κιτ ή των φιαλιδίων. Το διάλυμα χρώσης εργασίας είναι σταθερό για 6 μήνες.
5. ΔΙΑΛΥΜΑ ΑΠΟΧΡΩΜΑΤΙΣΜΟΥ
Παρασκευή
Το φιαλίδιο πυκνού διαλύματος αποχρωματισμού θα πρέπει να αραιώνεται μέχρι τα 100 λίτρα με απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό. Είναι
ευκολότερη η αραίωση 1/1000 μιας μικρής μόνο ποσότητας του πυκνού διαλύματος, π.χ. αραιώνετε 1 mL πυκνού διαλύματος μέχρι το 1 λίτρο.
Μετά την αραίωση, το διάλυμα αποχρωματισμού εργασίας περιέχει ένα όξινο διάλυμα pH ≈ 2.
Χρήση
Για αποχρωματισμό, δηλαδή αφαίρεση της περίσσειας χρωστικής από τα gel καθώς και της χρωστικής από το υπόστρωμα των gel.
Φύλαξη, σταθερότητα και σημεία αλλοίωσης
Φυλάσσετε το πυκνό διάλυμα αποχρωματισμού σε θερμοκρασία δωματίου ή στο ψυγείο. Το πυκνό διάλυμα είναι σταθερό μέχρι την ημερομηνία
λήξης η οποία αναγράφεται στις ετικέτες της συσκευασίας του κιτ ή των φιαλιδίων του διαλύματος αποχρωματισμού. Το αραιωμένο διάλυμα είναι
σταθερό για μία εβδομάδα σε θερμοκρασία δωματίου σε κλειστή φιάλη.
Πετάξτε το αραιωμένο διάλυμα αποχρωματισμού αν μεταβληθεί η όψη του, π.χ. αν θολώσει λόγω μικροβιακής επιμόλυνσης.
Μην προσθέτετε αζίδιο του νατρίου.
- 44 -
HYDRAGEL IEP PLUS - 2014/11
Για την αποφυγή πολλαπλασιασμού των μικροβίων στο αραιωμένο διάλυμα αποχρωματισμού που πρόκειται να αποθηκευτεί για
περισσότερο από μία εβδομάδα, προσθέστε 5 μL/dL ProClin 300 ή CLEAN PROTECT (SEBIA, PN 2059, 1 φιαλίδιο των 5 mL).
Ανατρέξτε στο φύλλο οδηγιών του CLEAN PROTECT για οδηγίες χρήσης.
Το διάλυμα εργασίας αποχρωματισμού στο οποίο έχει προστεθεί ProClin ή CLEAN PROTECT παραμένει σταθερό σε κλειστό δοχείο σε
θερμοκρασία δωματίου ή στο ψυγείο μέχρι την ημερομηνία λήξης που αναγράφεται στις ετικέτες της συσκευασίας του κιτ ή των φιαλιδίων
του διαλύματος αποχρωματισμού.
6. 7 ΤΑΙΝΙΕΣ ΚΥΨΕΛΩΝ
Χρήση
Πρότυπα μίας χρήσης για την εφαρμογή των αντιγόνων στο gel.
7. ΤΑΙΝΙΕΣ ΔΙΗΘΗΤΙΚΟΥ ΧΑΡΤΙΟΥ
Χρήση
Απορροφητικές ταινίες μίας χρήσης για το στύπωμα των αντιγόνων από τις κυψέλες των προτύπων μετά την εφαρμογή.
Αποθήκευση
Φυλάσσετε τις ταινίες διηθητικών χαρτιών σε ξηρό μέρος σε θερμοκρασία δωματίου.
8. 6 ΙΑΤΡΙΚΕΣ ΜΑΣΚΕΣ
Χρήση
Μάσκες μίας χρήσης για την εφαρμογή των δειγμάτων ορού που προορίζονται για ανάλυση με ανοσοκατακρήμνιση, πάνω στο ζελέ.
9. ΔΙΗΘΗΤΙΚΑ ΧΑΡΤΙΑ - ΛΕΠΤΑ
Χρήση
Απορροφητικά μάκτρα μίας χρήσης για στύπωμα της υπερβολικής ποσότητας υγρασίας από το gel, πριν και μετά την ηλεκτροφόρηση, και των
μη κατακρημνισμένων πρωτεϊνών μετά το βήμα της ανοσοκατακρήμνισης.
Φύλαξη
Φυλάσσετε τα λεπτά διηθητικά χαρτιά σε ξηρό μέρος σε θερμοκρασία δωματίου.
10. ΔΙΗΘΗΤΙΚΑ ΧΑΡΤΙΑ - ΑΔΡΑ
Χρήση
Απορροφητικά χάρτινα μάκτρα μίας χρήσης για το βήμα της ανοσοκατακρήμνισης (για τοποθέτηση στο κουτί επώασης) και για στύπωμα των
μη κατακρημνισμένων πρωτεϊνών από το gel μετά το βήμα της ανοσοκατακρήμνισης.
Φύλαξη
Φυλάσσετε τα αδρά διηθητικά χαρτιά σε ξηρό μέρος σε θερμοκρασία δωματίου.
ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΑ ΑΠΑΡΑΙΤΗΤΑ ΑΛΛΑ ΜΗ ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ
1. ΧΛΩΡΙΟΝΑΤΡΙΟΥΧΟ ΔΙΑΛΥΜΑ
Παρασκευή
Ετοιμάστε διάλυμα 0,15 M (0,9 g/dL) NaCl σε απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό.
Χρήση
Για την πλύση των gel μετά την ανοσοκατακρήμνιση.
Φύλαξη, σταθερότητα και σημεία αλλοίωσης
Να φυλάσσεται σε θερμοκρασία δωματίου ή στο ψυγείο. Πετάξτε το μετά από 3 μήνες ή αν μεταβληθεί η όψη του, π.χ. θόλωση λόγω
μικροβιακής επιμόλυνσης.
2. ΑΝΤΙΓΟΝΑ (ΠΑΡΑΔΕΙΓΜΑΤΑ)
Τα αποτελέσματα των δοκιμών κατακρημνισμένων αντισωμάτων ορού από ασθενείς με παρασιτικές και μυκητικές λοιμώξεις ή ασθενείς
εκτεθειμένους σε αντιγόνα πτηνών, τα οποία αναφέρονται στο τμήμα ΔΕΔΟΜΕΝΑ ΑΠΟΔΟΣΗΣ, προέκυψαν με τα ακόλουθα αντιγόνα :
- Αλλεργιογόνα πτηνών, Microgen Bioproducts, αναφ. FSK 4.
- Aspergillus, Microgen Bioproducts, αναφ. FSK 1.
- Αντιγόνο Aspergillus fumigatus ID, IMMY, αναφ. A70110.
- Αντιγόνο Aspergillus ID, IMMY, αναφ. A30110.
- Αντιγόνα Candida albicans : μεταβολικό αντιγόνο + σωματικό αντιγόνο, Bio-Rad, αναφ. 52952.
Η διαδικασία HYDRAGEL IEP PLUS μπορεί να πραγματοποιηθεί και με άλλα αντιγόνα, όπως για παράδειγμα :
- Αντιγόνο Ascaris, γεννητικά όργανα, SR2B, αναφ. ASCGENIT.
- Αντιγόνο Ascaris, σπλαγχνικό κοίλωμα, SR2B, αναφ. ASCOELO.
- Αντιγόνο διστομίασης (αντιγόνο Fasciola hepatica), Bio-Rad, αναφ. 355 – 2751.
- Αντιγόνο διστομίασης, SR2B, αναφ. 5398.
- Micropolyspora faeni, Microgen Bioproducts, αναφ. FSK 3.
Συνιστάται κάθε εργαστήριο να καθιερώνει προσαρμοσμένες πειραματικές συνθήκες για κάθε αναλυόμενο αντιγόνο, ιδίως σχετικά με
τη συγκέντρωσή του, σύμφωνα με τις προδιαγραφές του κατασκευαστή.
Παρασκευή, χρήση και φύλαξη : Ανατρέξτε στο ένθετο συσκευασίας που συνοδεύει κάθε αντιγόνο.
- 45 -
HYDRAGEL IEP PLUS - 2014/11
3. ΟΡΟΙ ΕΛΕΓΧΟΥ (ΠΑΡΑΔΕΙΓΜΑΤΑ)
- Θετικός ορός ελέγχου Candida albicans, Bio-Rad, αναφ. 61691.
- Θετικός ορός ελέγχου Aspergillus fumigatus ID, IMMY, αναφ. A80110.
- Θετικός ορός ελέγχου Aspergillus ID, IMMY, αναφ. A40110.
Παρασκευή, χρήση και φύλαξη : Ανατρέξτε στο ένθετο συσκευασίας που συνοδεύει κάθε ορό ελέγχου.
ΣΗΜΕΙΩΣΕΙΣ :
- Συνιστάται η χρήση των ορών ελέγχου, ώστε να καθοριστεί η συγκέντρωση αντιγόνων που πρέπει να εφαρμοστεί στην ανάλυση.
- Συνιστάται να φοράτε προστατευτικό ρουχισμό εργασίας, γάντια και γυαλιά και να χειρίζεστε με προσοχή τα βιολογικά δείγματα από
ανθρώπους ή ζώα.
ΠΡΟΑΙΡΕΤΙΚΟ ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΟ (ΔΕΝ ΠΑΡΕΧΕΤΑΙ)
ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ : Δείτε τα φύλλα δεδομένων ασφάλειας.
ΥΠΕΡΟΞΕΙΔΙΟ ΤΟΥ ΥΔΡΟΓΟΝΟΥ : H2O2, 10 όγκοι
Παρασκευή
Ετοιμάστε το διάλυμα εμφάνισης εργασίας λίγο πριν τη χρήση : Αραιώστε το υπεροξείδιο του υδρογόνου (10 όγκους) 3 φορές σε απεσταγμένο
ή απιονισμένο νερό.
Χρήση
Για την απεικόνιση της καταλασικής ενζυματικής δραστηριότητας στο gel.
Φυσαλίδες γύρω από τα ειδικά τόξα κατακρήμνισης υποδεικνύουν καταλασική δραστηριότητα στα gel HYDRAGEL IEP PLUS που
χρησιμοποιούνται, για παράδειγμα, για την οροδιάγνωση ασπεργίλλωσης με αντίδραση ανοσοκατακρήμνισης.
Φύλαξη
Το υπεροξείδιο του υδρογόνου πρέπει να φυλάσσεται σε σκουρόχρωμη φιάλη στο ψυγείο (2 έως 8 °C). Κατά τη διανομή, χρησιμοποιείτε πάντα
καθαρή πιπέτα για να αποφύγετε επιμόλυνση του περιεχομένου της φιάλης.
ΣΗΜΕΙΩΣΕΙΣ :
Οι δοκιμές που πραγματοποιήθηκαν προς επικύρωση των αντιδραστηρίων κατέδειξαν ότι, για τα διαφορετικά διαλύματα και με χρήση κατάλληλου
εξοπλισμού για τον όγκο ανασύστασης, μια απόκλιση ± 5 % στον τελικό όγκο δεν επηρεάζει δυσμενώς την ανάλυση.
Το απεσταγμένο ή απιονισμένο ύδωρ που χρησιμοποιείται για την ανασύσταση διαλυμάτων πρέπει να είναι ελεύθερο βακτηρίων και μυκήτων (χρήση
φίλτρου ≤ 0.45 µm) και να έχει αντιστασικότητα υψηλότερη από 10 Megohms x cm.
ΕΞΟΠΛΙΣΜΟΣ ΚΑΙ ΣΥΜΠΛΗΡΩΜΑΤΙΚΑ ΕΞΑΡΤΗΜΑΤΑ ΑΠΑΡΑΙΤΗΤΑ ΑΛΛΑ ΜΗ ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ
1.
2.
3.
4.
Τροφοδοσία : MG 300 SEBIA, PN 1302 ή MG 500 SEBIA, PN 1303.
Θάλαμος ηλεκτροφόρησης : K20 SEBIA, PN 1400 (ή θάλαμος ηλεκτροφόρησης BECKMAN).
Πιπέτες : 5 µL και 200 µL.
Στεγνωτήρας επωαστήρας για το στέγνωμα των πλακετών του gel. IS 80 SEBIA, PN 1430.
5. Βοηθητικό κιτ HYDRAGEL IEP PLUS SEBIA, PN 1419.
ή
6. Βοηθητικό κιτ HYDRAGEL K20 SEBIA, PN 1420 και κουτιά επώασης SEBIA, PN 1421.
ΔΕΙΓΜΑΤΑ ΠΡΟΣ ΑΝΑΛΥΣΗ
Λήψη και φύλαξη δειγμάτων
Η ανάλυση συνιστάται να γίνεται σε φρέσκα δείγματα ορού. Οι οροί πρέπει να λαμβάνονται σύμφωνα με τις καθιερωμένες διαδικασίες στην
κλινική εργαστηριακή πράξη. Αν χρειάζεται, φυλάσσετε τους ορούς στο ψυγείο (2 έως 8 °C) για έως μία εβδομάδα. Για μεγαλύτερα διαστήματα,
φυλάσσετε τα δείγματα στην κατάψυξη. Τα κατεψυγμένα δείγματα είναι σταθερά για τουλάχιστον ένα μήνα.
Προετοιμασία δειγμάτων
Τα καθαρά ή συμπυκνωμένα δείγματα ορού μπορούν να αναλύονται.
Σε περίπτωση αντισωμάτων υψηλής συμπύκνωσης, που ανιχνεύονται με ηλεκτροφόρηση, συνιστάται η αραίωση του δείγματος με
χλωρονατριούχο διάλυμα για την αποτροπή του φαινομένου προζώνης.
ΣΗΜΕΙΩΣΗ : Τα σωληνάρια συλλογής για βιολογικά δείγματα περιγράφονται στη διαθέσιμη τεκμηρίωση σχετικά με την προαναλυτική
φάση για βιοϊατρική ανάλυση (δεδομένα που παρέχονται από τους κατασκευαστές σωληναρίων, από οδηγούς και συστάσεις σχετικά με
τη συλλογή βιολογικών δειγμάτων). Εάν δεν υπάρχει ένδειξη στις οδηγίες χρήσης σχετικά με το είδος του σωληναρίου που πρέπει να
χρησιμοποιείται, ανατρέξτε στην παρούσα τεκμηρίωση. Για τις διαστάσεις του σωληναρίου που πρέπει να χρησιμοποιείται, ανατρέξτε στο
έγγραφο της SEBIA "Χαρακτηριστικά των σωληναρίων που πρέπει να χρησιμοποιούνται ανάλογα με το όργανο". Η προαναλυτική φάση
πρέπει να διενεργείται σύμφωνα με την τελευταία λέξη της τεχνικής, τις διάφορες συστάσεις, συμπεριλαμβανομένων αυτών που
παρέχονται από τους κατασκευαστές σωληναρίων, και τους ισχύοντες κανονισμούς.
- 46 -
HYDRAGEL IEP PLUS - 2014/11
ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ
I. ΠΡΟΕΤΟΙΜΑΣΙΑ ΤΗΣ ΗΛΕΚΤΡΟΦΟΡΗΣΗΣ
1. Αφαιρέστε το gel από τη συσκευασία και ακουμπήστε το σε μια επίπεδη επιφάνεια.
2. Στυπώστε απαλά και γρήγορα το πλεόνασμα του υγρού από την επιφάνεια του gel με λεπτό διηθητικό χαρτί.
3. Τοποθετήστε την ταινία για την εφαρμογή των αντιγόνων στην επιφάνεια του gel. Ευθυγραμμίστε τις δύο εξωτερικές οπές της ταινίας με
τις κηλίδες στη θέση αρ. 1 που είναι τυπωμένη στην πίσω πλευρά του gel. Αποφύγετε την παγίδευση φυσαλίδων αέρα κάτω από την
ταινία.
ΣΗΜΕΙΩΣΗ : Για την εφαρμογή αντιγόνων με πιο καθοδική μετακίνηση, συνιστάται η τοποθέτηση της ταινίας στη θέση αρ. 2 που είναι
τυπωμένη στο πίσω μέρος του gel.
4.
5.
6.
7.
Εφαρμόστε 3 έως 4 µL αντιγόνου σε κάθε οπή της ταινίας.
Αφήστε τα αντιγόνα να διαχυθούν στο gel για 15 λεπτά.
Αν χρειάζεται, στυπώστε το πλεόνασμα του αντιγόνου με μια ταινία διηθητικού χαρτιού και αφαιρέστε την ταινία αντιγόνου.
Τοποθετήστε το gel σε έναν κατάλληλο θάλαμο. Όταν χρησιμοποιείτε θάλαμο SEBIA K20 (ή θάλαμο BECKMAN), τοποθετήστε το
HYDRAGEL στη γέφυρα με την πλευρά του gel στραμμένη προς τα πάνω. Η γέφυρα πρέπει να βρίσκεται εκτός του θαλάμου για να
αποφευχθεί πτώση ρυθμιστικού διαλύματος πάνω στις κηλίδες του αντιγόνου. Στη συνέχεια, τοποθετήστε προσεκτικά τη γέφυρα μέσα
στο θάλαμο, με τα αντιγόνα στην καθοδική πλευρά. Το gel βυθίζεται μέσα στο ρυθμιστικό διάλυμα σε βάθος περίπου 1 cm σε κάθε
πλευρά.
Βλέπε το φύλλο οδηγιών του θαλάμου Κ20 (ή του θαλάμου BECKMAN) για περισσότερες λεπτομέρειες.
8. Συνδέστε το θάλαμο με την τροφοδοσία.
Συνθήκες μετακίνησης*
Όγκος ρυθμιστικού διαλύματος ανά μονάδα
Συνολικός όγκος ρυθμιστικού διαλύματος
SEBIA K20
150 mL
300 mL
Θάλαμος BECKMAN
45 mL
90 mL
Χρόνος μετακίνησης
28 λεπτά
24 λεπτά
Αρχική ένταση του ρεύματος (ένα gel)
12 ± 2 mA
14 ± 3 mA
Συνεχής τάση
100 V
100 V
* για αντιγόνα Aspergillus και Candida.
9. Μετά τη μετακίνηση, αποσυνδέστε το θάλαμο και απομακρύνετε την πλακέτα του gel.
II. ΑΝΟΣΟΚΑΤΑΚΡΗΜΝΙΣΗ
1. Τοποθετήστε το gel σε μια επίπεδη επιφάνεια.
2. Περάστε γρήγορα και ομοιόμορφα ένα λεπτό διηθητικό χαρτί στην επιφάνεια του gel για να απορροφήσει την περίσσεια υγρού.
3. Τοποθετήστε το πρότυπο εφαρμογής για τα δείγματα ορού που θα αναλυθούν πάνω στο gel ευθυγραμμίζοντάς το με τις κηλίδες στη
θέση αρ. 1, η οποία είναι τυπωμένη στην πίσω πλευρά του gel και στις άκρες του gel. Αποφύγετε την παγίδευση τυχόν φυσαλίδων κάτω
από το πρότυπο και βεβαιωθείτε ότι το πρότυπο σφραγίζεται καλά στην επιφάνεια του gel.
4. Εφαρμόστε 120 µL ορού από τον ασθενή που πρόκειται να αναλυθεί σε κάθε τροχιά.
5. Επωάστε σε θερμοκρασία δωματίου για 30 λεπτά.
6. Αν χρειαστεί, στυπώστε γρήγορα το πλεόνασμα του ορού με λεπτό διηθητικό χαρτί.
7. Αφαιρέστε το πρότυπο και τοποθετήστε το gel σε ένα κουτί επώασης πάνω σε αδρό διηθητικό χαρτί που έχετε εμποτίσει με
απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό.
8. Κλείστε το κουτί επώασης και επωάστε σε θερμοκρασία δωματίου για 18 έως 72 ώρες.
III. ΑΦΑΙΡΕΣΗ ΤΩΝ ΜΗ ΚΑΤΑΚΡΗΜΝΙΣΜΕΝΩΝ ΠΡΩΤΕΪΝΩΝ
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
Αφαιρέστε το gel από το κουτί επώασης και τοποθετήστε το σε έναν στατήρα gel.
Πλύνετε το gel κάθετα στο διάλυμα πλύσης για τουλάχιστον 1 ώρα.
Τοποθετήστε το gel σε μια επίπεδη επιφάνεια.
Τοποθετήστε ένα λεπτό διηθητικό χαρτί στο gel. Προσθέστε δύο στρώσεις αδρού διηθητικού χαρτιού και στην κορυφή της στοίβας
τοποθετήστε βάρος 1 έως 1,5 kg περίπου για 20 λεπτά. Βεβαιωθείτε ότι το βάρος κατανέμεται ομοιόμορφα.
Όταν επεξεργάζεστε πολλά gel ταυτόχρονα, μπορούν να τοποθετηθούν σε μία στοίβα. Τοποθετήστε τα διηθητικά χαρτιά μεταξύ των gel,
όπως περιγράφηκε παραπάνω.
Αφαιρέστε τα διηθητικά χαρτιά. Πλύνετε το gel σε κάθετη θέση σε χλωρονατριούχο διάλυμα για τουλάχιστον 20 λεπτά.
Τοποθετήστε ένα λεπτό διηθητικό χαρτί στο gel. Προσθέστε δύο στρώσεις αδρού διηθητικού χαρτιού και στην κορυφή της στοίβας
τοποθετήστε βάρος 1 έως 1,5 kg περίπου για 20 λεπτά.
Επαναλάβετε τα βήματα 5 και 6 (πλύση και στύπωμα των gel).
Αφαιρέστε τα διηθητικά χαρτιά. Αποξηράνετε το πήκτωμα τελείως στον επωαστήρα-αποξηραντή για 5 λεπτά στους 50 °C για τα στάδια
χρώσης και αποχρωματισμού (ή στους 37 °C για 20 λεπτά περίπου για την απεικόνιση της καταλασικής δραστηριότητας, βλ.
παράγραφος V – ΑΠΕΙΚΟΝΙΣΗ ΤΗΣ ΚΑΤΑΛΑΣΙΚΗΣ ΔΡΑΣΤΗΡΙΟΤΗΤΑΣ).
ΣΗΜΕΙΩΣΗ : Μπορείτε να μειώσετε τη διάρκεια των βημάτων 4 έως 7 (στύπωμα και πλύση σε χλωρονατριούχο διάλυμα) που περιγράφηκαν
παραπάνω στα 10 λεπτά. Σε αυτήν την περίπτωση, μετά το χρωματισμό, το gel θα έχει ένα ελαφρώς χρωματισμένο υπόστρωμα, ωστόσο
αυτό δεν επηρεάζει την ερμηνεία του αποτελέσματος. Συνιστάται να τηρείτε την τυπική διαδικασία αφαίρεσης των μη κατακρημνισμένων
πρωτεϊνών, ώστε να διατηρείται η διαύγεια του υποστρώματος του gel.
- 47 -
HYDRAGEL IEP PLUS - 2014/11
IV. ΒΗΜΑΤΑ ΧΡΩΣΗΣ ΚΑΙ ΑΠΟΧΡΩΜΑΤΙΣΜΟΥ
1.
2.
3.
4.
Αν
Μετά το στέγνωμα, βυθίστε το στεγνό gel κάθετα στο διάλυμα χρώσης για 5 λεπτά.
Αποχρωματίστε σε δύο διαδοχικά λουτρά διαλύματος αποχρωματισμού, έως ότου το υπόστρωμα να γίνει εντελώς άχρωμο και διαυγές.
Πλύνετε το gel σε απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό για 1 λεπτό.
Αφαιρέστε το πλεόνασμα του υγρού από την επιφάνεια του gel και στεγνώστε το gel σε ρεύμα αέρα 50 °C.
χρειάζεται, καθαρίστε την πίσω πλευρά (πλευρά στήριξης) με υγρό και μαλακό χαρτί.
V. ΑΠΕΙΚΟΝΙΣΗ ΤΗΣ ΚΑΤΑΛΑΣΙΚΗΣ ΔΡΑΣΤΗΡΙΟΤΗΤΑΣ (ΠΡΟΑΙΡΕΤΙΚΟ)
1.
2.
3.
4.
Αφαιρέστε τις μη κατακρημνισμένες πρωτεΐνες, όπως περιγράφηκε στην παράγραφο ΙΙΙ (βήματα 1 έως 7).
Αφαιρέστε τα διηθητικά χαρτιά και στεγνώστε εντελώς το gel στο στεγνωτήρα του επωαστήρα στους 37 °C για 20 λεπτά περίπου.
Τοποθετήστε το gel σε ένα κουτί επώασης.
Βυθίστε το gel στο διάλυμα του υπεροξειδίου του υδρογόνου που προορίζεται για την απεικόνιση, σε θερμοκρασία δωματίου. Η θετική
αντίδραση υποδεικνύεται από τις φυσαλίδες γύρω από τα ειδικά τόξα κατακρήμνισης.
5. Στεγνώστε εντελώς το gel σε ρεύμα θερμού αέρα.
ΣΗΜΕΙΩΣΗ : Μετά την απεικόνιση της καταλασικής δραστηριότητας, το στεγνό gel μπορεί να υποβληθεί σε χρώση, σύμφωνα με το
πρωτόκολλο χρώσης και αποχρωματισμού που περιγράφηκε παραπάνω, στην παράγραφο IV.
ΠΟΙΟΤΙΚΟΣ ΕΛΕΓΧΟΣ
Συνιστάται να εκτελείτε τη διαδικασία με πολυσθενείς θετικούς αντιορούς ελέγχου που περιέχουν τους κατάλληλους τίτλους των σχετικών
αντισωμάτων κατά των διαφορετικών αναλυόμενων αντιγόνων.
Βεβαιωθείτε ότι οι γραμμές κατακρήμνισης είναι ορατές μεταξύ του θετικού ορού ελέγχου και των αναλυόμενων αντιγονικών παρασκευασμάτων.
ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ
ΕΡΜΗΝΕΙΑ
Η οροδιάγνωση των παρασιτικών και μυκητικών νόσων ή της έκθεσης σε αντιγόνα πτηνών με χρήση της ανοσοκατακρήμνισης βασίζεται στην
ανίχνευση ειδικών αντισωμάτων έναντι των αναλυόμενων αντιγόνων στον ορό των ασθενών. Τα κατακρημνιστικά αντισώματα έναντι των
αντίστοιχων αντιγόνων επιτρέπουν την ανίχνευση των νόσων. Η παρουσία τους υποδηλώνει έκθεση και ανοσολογική απόκριση προς τα
αναλυόμενα αντιγόνα.
Η ερμηνεία γίνεται με οπτική παρατήρηση ή σε φωτεινή επιφάνεια, του αριθμού, του σχήματος, του μεγέθους και της θέσης των γραμμών
κατακρήμνισης. Η ανάλυση είναι μόνο ποιοτική.
Η ανάγνωση / ερμηνεία των gel πρέπει να γίνεται αμέσως μετά την ολοκλήρωσή τους, ενώ η φύλαξη (σε ξηρό μέρος μακριά από φως)
πραγματοποιείται μόνο για σκοπούς αρχειοθέτησης. Όταν γίνεται επαναληπτική ανάγνωση / ερμηνεία του gel μετά από φύλαξή του, δεν
παρέχεται καμιά διασφάλιση για τα αποτελέσματα.
Όταν τα διαλυτά αντιγόνα έρχονται σε επαφή με αντισώματα σε ένα κατάλληλο μέσο διάχυσης, όπως είναι το gel αγαρόζης στη διαδικασία
HYDRAGEL IEP PLUS, διαχέονται το ένα προς το άλλο και σχηματίζουν ορατές γραμμές κατακρήμνισης κατά μήκος της ζώνης διασύνδεσης
των βέλτιστων σχετικών συγκεντρώσεων.
Η παρουσία γραμμών κατακρήμνισης μεταξύ του δείγματος του ασθενούς και του αντιγόνου είναι ενδεικτική θετικού αποτελέσματος, η απουσία
γραμμής κατακρήμνισης είναι ενδεικτική αρνητικού αποτελέσματος.
Ο μεγάλος αριθμός γραμμών κατακρήμνισης δηλώνει την παρουσία διαφορετικών ειδικών αντισωμάτων στον ορό του αναλυόμενου ασθενούς.
Μία μοναδική γραμμή κατακρήμνισης μπορεί να επαρκεί για τη διάγνωση λοίμωξης.
Όταν ο ορός περιέχει μεγάλο αριθμό αντισωμάτων, η γραμμή κατακρήμνισης είναι κοντά στο αντιγόνο.
Όταν ο αριθμός των αντισωμάτων είναι πολύ μικρός, η γραμμή κατακρήμνισης είναι κοντά στον ορό του ασθενούς.
Τα κατακρημνιστικά αντισώματα που ανιχνεύονται με τη διαδικασία HYDRAGEL IEP PLUS δημιουργούνται ως μέρος της ανοσολογικής
αντίδρασης στην έκθεση στα αναλυόμενα αντιγόνα. Τα αντισώματα αυτά είναι κυρίως Ig τάξης G, παρόλο που πιθανόν και άλλες τάξεις να έχουν
κατακρημνιστική λειτουργία. Σε ορισμένες περιπτώσεις, εμφανίζονται αργότερα κατά τη διάρκεια της λοίμωξης και ανιχνεύονται μόνο μετά από
δεύτερη ανάλυση σε χρόνο που εξαρτάται από το αντιγόνο.
Ο αριθμός των γραμμών κατακρήμνισης που παρατηρείται είναι ανάλογος με τη σοβαρότητα των κλινικών εκδηλώσεων και αυξάνεται με την
πρόοδο των νόσων. Τα κατακρημνιστικά αντισώματα μπορεί να εξαφανιστούν μετά από 2 ή 3 έτη, αν πάψει η έκθεση στα αντιγόνα, και η
αντιστρεψιμότητα των κλινικών συμπτωμάτων εξαρτάται από τη σοβαρότητα και την εξάπλωση της νόσου.
Η αντίδραση αντιγόνων-αντισωμάτων, η οποία χαρακτηρίζεται από ανοσοκατακρήμνιση, δεν επαρκεί για τη διάγνωση της νόσου και πρέπει να
εξεταστούν και άλλα κλινικά κριτήρια. Η διάγνωση μπορεί να γίνει μόνο μετά από αποτελέσματα κλινικών, ακτινολογικών και βιολογικών
εξετάσεων (όπως μικροβιολογικές, ιστολογικές και ορολογικές).
Ειδικές περιπτώσεις :
Σε ορισμένες περιπτώσεις, οι γραμμές κατακρήμνισης πιθανόν να έχουν ενζυματική δραστηριότητα, η οποία αποκαλύπτεται από ειδικές
αντιδράσεις. Η απεικόνιση της καταλασικής δραστηριότητας σε ορισμένες γραμμές κατακρήμνισης παρέχει επιπρόσθετες ενδείξεις για την
ειδικότητα των γραμμών λόγω ασπεργίλλωσης.
Παρεμβολές και περιορισμοί
Λόγω των ορίων διακριτικής ικανότητας και ευαισθησίας της ηλεκτροφόρησης ζώνης, είναι πιθανό κάποια αντισώματα κατά παρασίτων να μην
ανιχνεύονται με αυτήν τη μέθοδο.
Ο συνιστώμενος χρόνος ανοσοδιάχυσης για τη διαδικασία HYDRAGEL IEP PLUS είναι από 18 έως 72 ώρες σε θερμοκρασία δωματίου. Η
παράταση του χρόνου επώασης μπορεί να οδηγήσει σε διάχυση και παραμόρφωση των γραμμών κατακρήμνισης. Με μικρότερο χρόνο
επώασης δεν επιτυγχάνεται η βέλτιστη ανοσοκατακρήμνιση.
Η ανίχνευση των γραμμών κατακρήμνισης σχετίζεται άμεσα με την ανοσολογική κατάσταση των ασθενών και η παρουσία χαμηλών επιπέδων
κατακρημνιστικών αντισωμάτων μπορεί απλώς να δηλώνει προηγούμενη ή τρέχουσα έκθεση σε αντιγόνα, χωρίς εμφάνιση νόσου.
- 48 -
HYDRAGEL IEP PLUS - 2014/11
Η ανίχνευση των κατακρημνιστικών αντισωμάτων από μόνη της δεν συνιστά διάγνωση ενεργής νόσου προκαλούμενης από τα αναλυόμενα
αντιγόνα. Πρέπει επίσης να αναλυθούν τα κλινικά δεδομένα του ασθενούς.
Η απουσία κατακρημνιστικών αντισωμάτων δεν αποκλείει την παρουσία νόσου λόγω έκθεσης στα αναλυόμενα αντιγόνα.
Αντιμετώπιση προβλημάτων
Καλέστε την Τεχνική Υπηρεσία του προμηθευτή αν η ανάλυση δεν λειτουργεί παρόλο που οι οδηγίες προετοιμασίας και φύλαξης των υλικών
και οι οδηγίες λειτουργίας τηρούνται προσεκτικά.
Τα φύλλα δεδομένων ασφαλείας του κιτ και πληροφορίες για τον καθαρισμό και την απόρριψη αποβλήτων, οι κανόνες επισήμανσης και
ασφαλείας που εφαρμόζει η SEBIA και η συσκευασία για τη μεταφορά βιολογικών δειγμάτων διατίθενται στο DVD "ΦΥΛΛΑ ΟΔΗΓΙΩΝ ΚΑΙ
ΔΕΔΟΜΕΝΩΝ ΑΣΦΑΛΕΙΑΣ".
ΔΕΔΟΜΕΝΑ ΑΠΟΔΟΣΗΣ
Για τα δεδομένα απόδοσης της διαδικασίας HYDRAGEL IEP PLUS χρησιμοποιήθηκαν τα τυπικά υλικά, η τυπική παρασκευή δειγμάτων και οι
τυπικές διαδικασίες. Όλα τα ηλεκτροφορήματα αξιολογήθηκαν οπτικά. Τα αποτελέσματα που προέκυψαν μετά από την ποιοτική ανάλυση των
ηλεκτροφορητικών προτύπων και την ανοσοκατακρήμνιση καταδεικνύουν μια πολύ καλή αναπαραγωγιμότητα (ακρίβεια) εντός του gel και
μεταξύ των gel για τη διαδικασία HYDRAGEL IEP PLUS για όλες τις δοκιμές, με μεταβολικά και σωματικά αντιγόνα από Candida albicans και
Aspergillus fumigatus και αντιγόνα πτηνών, τα οποία παρασκευάστηκαν από δείγματα ορού και απεκκρίσεις περιστεριών, ορνίθων και
παπαγάλων. Στις οπτικές αξιολογήσεις των ηλεκτροφορημάτων, δεν παρατηρήθηκαν εμφανείς οπτικά διαφορές μεταξύ των επαναλήψεων.
Αναπαραγωγιμότητα εντός του gel
Η αναπαραγωγιμότητα εντός του gel για την ανίχνευση αντισωμάτων καταδείχθηκε σε 3 διαφορετικά δείγματα ορού ελέγχου
(συμπεριλαμβανομένου 1 θετικού ορού στο Candida albicans, 1 θετικού ορού στο Aspergillus fumigatus και 1 θετικού ορού σε αντιγόνα πτηνών)
με τη διαδικασία HYDRAGEL IEP PLUS σε gel από την ίδια παρτίδα. Κάθε δείγμα ορού ελέγχου αναλύθηκε σύμφωνα με την ανοσολογική του
ειδικότητα, συμπεριλαμβανομένων 6 έως 12 αναλύσεων ανά gel έναντι μεταβολικών και σωματικών αντιγόνων από Candida albicans και
Aspergillus fumigatus, και αντιγόνων πτηνών που παρασκευάστηκαν από δείγματα ορού και απεκκρίσεις περιστεριών, ορνίθων και
παπαγάλων.
Τα αποτελέσματα όλων των επαναληπτικών εξετάσεων ήταν πανομοιότυπα εντός του ίδιου gel και οι γραμμές κατακρήμνισης αντιστοιχούσαν
στον τύπο κάθε εξεταζόμενου δείγματος.
Με τη διαδικασία HYDRAGEL IEP PLUS τα ειδικά αντισώματα ανιχνεύθηκαν σωστά μέσω ανοσοκατακρήμνισης στο καθένα από τα 3 δείγματα
που αναλύθηκαν και σε κάθε gel, δεν παρατηρήθηκαν διαφορές μεταξύ των επαναλήψεων.
Αναπαραγωγιμότητα μεταξύ των gel
Η αναπαραγωγιμότητα μεταξύ των gel για την ανίχνευση αντισωμάτων καταδείχθηκε σε 2 διαφορετικά δείγματα ορού ελέγχου,
συμπεριλαμβανομένου 1 θετικού ορού σε αντιγόνα πτηνών και 1 θετικού ορού στο Aspergillus fumigatus, τα οποία εξετάστηκαν 9 φορές και
2 φορές ανά gel αντίστοιχα. Αυτά τα δείγματα ορού ελέγχου αναλύθηκαν 5 φορές διαδοχικά σύμφωνα με την ανοσολογική τους ειδικότητα σε
gel της ίδιας παρτίδας με χρήση της διαδικασίας HYDRAGEL IEP PLUS έναντι αντιγόνων πτηνών που παρασκευάστηκαν από δείγματα ορού
και απεκκρίσεις περιστεριών, ορνίθων και παπαγάλων και μεταβολικών και σωματικών αντιγόνων από Aspergillus fumigatus.
Τα αποτελέσματα όλων των επαναληπτικών εξετάσεων ήταν πανομοιότυπα μεταξύ των gel και οι γραμμές κατακρήμνισης αντιστοιχούσαν στον
τύπο κάθε εξεταζόμενου δείγματος.
Με τη διαδικασία HYDRAGEL IEP PLUS τα ειδικά αντισώματα ανιχνεύθηκαν σωστά μέσω ανοσοκατακρήμνισης για καθένα από τα
2 αναλυόμενα δείγματα και σε όλα τα gel, δεν παρατηρήθηκαν διαφορές μεταξύ των επαναλήψεων.
Ακρίβεια – Εσωτερική μελέτη συμφωνίας
ΣΗΜΕΙΩΣΗ : Τα δείγματα ορού, τα οποία αναλύθηκαν στην ακόλουθη εσωτερική μελέτη συμφωνίας, παρασχέθηκαν από ένα βιοϊατρικό
εργαστήριο ειδικευμένο στην ορολογική ανίχνευση μυκήτων και παρασίτων, το οποίο βρίσκεται στη Γαλλία.
Η μελέτη συμφωνίας πραγματοποιήθηκε σε 34 διαφορετικά δείγματα ορού, συμπεριλαμβανομένων 3 φυσιολογικών δειγμάτων ορού και
31 παθολογικών δειγμάτων ορού, μεταξύ της διαδικασίας HYDRAGEL IEP PLUS και μιας άλλης διαδικασίας ανοσοηλεκτροφόρησης σε gel
αγαρόζης του εμπορίου που προορίζεται για την ανίχνευση κατακρημνιστικών αντισωμάτων ορού σε ασθενείς με παρασιτικές ή μυκητικές
νόσους ή εκτεθειμένους σε αντιγόνα πτηνών, η οποία χρησιμοποιήθηκε ως αναφορά. Τα αντιγόνα που αναλύθηκαν ήταν αντιγόνα του
εμπορίου.
Η συγκεκριμένη μελέτη κατέδειξε άριστη συσχέτιση μεταξύ των 2 διαδικασιών ανάλυσης για την ανίχνευση κατακρημνιστικών αντισωμάτων ορού
έναντι παρασιτικών, μυκητικών αντιγόνων ή αντιγόνων πτηνών, με 100 % ευαισθησία και 100 % ειδικότητα της διαδικασίας HYDRAGEL IEP
PLUS συγκριτικά με τη διαδικασία ανοσοηλεκτροφόρησης σε gel αγαρόζης που χρησιμοποιήθηκε ως αναφορά, τα οποία υπολογίστηκαν με
χρήση της συνιστώμενης τεχνικής (Wendling, 1986).
Τα αποτελέσματα παρουσιάζονται στον ακόλουθο πίνακα :
Candida albicans
Aspergillus fumigatus
Αντιγόνα πτηνών
9 θετικά δείγματα
πλήρης συμφωνία
2 αρνητικά δείγματα
πλήρης συμφωνία
12 θετικά δείγματα
10 θετικά δείγματα
1 αρνητικό δείγμα
Ακρίβεια – Εξωτερική μελέτη συμφωνίας
πλήρης συμφωνία
πλήρης συμφωνία
πλήρης συμφωνία
ΣΗΜΕΙΩΣΗ : Η ακόλουθη εξωτερική μελέτη συμφωνίας διεξήχθη από ένα νοσοκομειακό εργαστήριο ειδικευμένο στις μυκητικές και παρασιτικές
νόσους, το οποίο βρίσκεται στη Γαλλία.
Η μελέτη συμφωνίας πραγματοποιήθηκε σε 44 διαφορετικά δείγματα ορού, συμπεριλαμβανομένων 16 φυσιολογικών δειγμάτων ορού και
28 παθολογικών δειγμάτων ορού, τα οποία αναλύθηκαν έναντι αντιγόνων Candida albicans και Aspergillus fumigatus του εμπορίου, μεταξύ της
διαδικασίας HYDRAGEL IEP PLUS και μιας άλλης διαδικασίας ανοσοηλεκτροφόρησης σε gel αγαρόζης του εμπορίου που χρησιμοποιήθηκε ως
αναφορά, η οποία προορίζεται για την ανίχνευση κατακρημνιστικών αντισωμάτων ορού σε ασθενείς με παρασιτικές ή μυκητικές νόσους.
- 49 -
HYDRAGEL IEP PLUS - 2014/11
Η συγκεκριμένη μελέτη κατέδειξε άριστη συσχέτιση μεταξύ των 2 διαδικασιών ανάλυσης για την ανίχνευση κατακρημνιστικών αντισωμάτων ορού
έναντι παρασιτικών ή μυκητικών αντιγόνων, με 100 % ευαισθησία και 100 % ειδικότητα της διαδικασίας HYDRAGEL IEP PLUS σε σύγκριση με
τη διαδικασία ανοσοηλεκτροφόρησης σε gel αγαρόζης που χρησιμοποιήθηκε ως αναφορά, τα οποία υπολογίστηκαν με χρήση της
συνιστώμενης τεχνικής (Wendling, 1986).
Τα αποτελέσματα παρουσιάζονται στον ακόλουθο πίνακα :
Candida albicans
Aspergillus fumigatus
28 θετικά δείγματα
πλήρης συμφωνία
44 αρνητικά δείγματα
πλήρης συμφωνία
16 αρνητικά δείγματα
- 50 -
πλήρης συμφωνία
HYDRAGEL IEP PLUS - 2014/11
BIBLIOGRAPHIE / BIBLIOGRAPHY
1. Aide-Mémoire de Parasitologie et de Pathologie Tropicale, P. Bourré, 3ème édition, Médecine-sciences, Flammarion.
2. Andriamanantena D, Rey P, Perret JL, Klotz F. Distomatoses, EMC (Elsevier SAS Paris), Maladies infectieuses, 8 – 512 – A - 10, 2005.
3. Axelsen NH, Bock E. Identification and quantitation of antigens and antibodies by means of quantitative immunoelectrophoresis. A survey of
methods. J. Immunol. Methods. 1972 Jan ; 1 (2) : 109 – 121.
4. Barboriak JJ, Sosman AJ, Reed CE. Serological studies in pigeon breeder’s disease. J Lab Clin Med. 1965 Apr ; 65 : 600 – 604.
5. Becq-Giraudon B, Roblot F, Le Moal G, Landron C. Fascioloses. Encycl. Med. Chir., Maladies infectieuses, B – 514 – A -10, 2003, 10 p.
6. Biguet J, Tran Vanky P, Fruit J, Andrieu S. Identification d’une activité chymotrypsique au niveau de fractions remarquables de l’extrait antigénique
d’Aspergillus fumigatus. Répercussion sur le diagnostic immunologique de l’Aspergillose. Rev. Immunol., 1967, 31, 317 – 328.
7. Bronstein JA, Klotz F. Cestodoses larvaires. Encycl. Med. Chir., Maladies infectieuses, 8 – 511 – A - 12, 2005, 18 p.
8. Danuser B. Respiratory health risks in working with chickens, Pneumonologie, 2000 ; 54 : 37 – 42.
9. Debeaupuis JP, Sarfati J, Kobayashi H, Boucias D, Gumowski P, Beauvais A, Paris S, Monod M, Latgé JP, (1995) Antigens of Aspergillus fumigatus
expressed during infection. Can. J. Bot. 73 : 1087 - 1091.
10. Debeaupuis JP, Sarfati J, Chazalet V, Latgé JP, (1997) Genetic diversity among clinical and environmental isolates of Aspergillus fumigatus. Infect.
Immun. 65 : 3080 - 3085.
11. Drouhet E, Dupont B. Infections mycosiques et parasitaires au cours des traitements immunosuppresseurs. Pathol. Biol. (1976), 24, 99 – 116.
12. Drouhet E. Antigènes des Candida. Application à l’étude de l’immunité humorale et du diagnostic immunologique. Rev. Franc. Allergol. (1976) 16,
No. 5, 241 – 250.
13. Drouhet E. Systemic candidosis and its immunology. Mykosen (1978), Suppl 1, 175 – 191.
14. Fink JN. Hypersensitivity pneumonitis. J Allergy Clin Immunol 1973 ; 52 : 309 - 17.
15. Frisk A. Serological aspects of candidosis. Current Therap. Research. (1977), 22, No. 1, 46 – 50.
16. Glickman LT, The epidemiology of human toxocariasis. In Toxocara and toxocariasis. J.W. Lewis et R.M. Maizels ed ; British Society for
Parasitology, Londres, 1993, p 3 - 10.
17. Iranitalab M, Jarolim E, Rumpold H, Steiner R, Ebner H, Feldner H, Scheiner O, Kraft D. Characterization of Micropolyspora faeni antigens by
human antibodies and immunoblot analysis. Allergy, Volume 44, Issue 5 , Pages 314 – 321 Munksgaard 1989.
18. Jensen HE, Latgé JP, (1995) An analysis of antibodies against Aspergillus fumigatus in bovine serum by immunoblotting and enzyme-linked
immunosorbent assays. APMIS 103 : 124 - 130.
19. Kobayashi M, Stahmann MA, Rankin J, Dickie HA. Antigens in moldy hay as the cause of farmer's lung. Proc Soc Exp Biol Med. 1963 Jun ; 113 :
472 – 476.
20. Latgé JP (1999) Aspergillus fumigatus and aspergillosis. Clin. Microbiol. Rev. 12 : 310 - 350.
21. Latgé JP (2001) The pathobiology of Aspergillus fumigatus. Trends Microbiol. 9 (8) : 382 - 389.
22. Latgé JP (2003). Aspergillus fumigatus, a saprophytic pathogenic fungus. Mycologist 17, 56 - 61.
23. Longbottom JL. Immunological aspects of infection and allergy due to Aspergillus Species. Mukosen (1978), suppl 1, 207 – 217.
24. Makni F, Hachicha L, Maeddi F et al. Apport de la technique Western Blot dans le diagnostic d'hydatidose. Bull. Soc. Path. Exot., 2007, 100, 171 2173.
25. Parasitologie-Mycologie, ANOFEL, 7ème édition, Format Utile.
26. Peltre G. Électrophorèse, les trois principes de base. Technique et Biologie, 1990, 1, p. 16 à 23.
27. Pilly E, Maladies Infectieuses et Tropicales, APPIT, 18ème édition, 2M2 éd.
28. Roberts RC. Fractionation and chemical characterization studies on Micropolyspora faeni antigens. Ann N Y Acad Sci. 1974 ; 221 : 199 – 204.
29. Tekaia F, Latgé JP (2005) Aspergillus fumigatus: saprophyte or pathogen? Curr Opin Microbiol. 8 : 385 - 392.
30. Tomee JFC, Van der Wer TS, Latgé JP, Koeter, GH, Dubois AEJ, Kauffman HF (1995) Serologic monitoring of disease and treatment in a patient
with pulmonary aspergilloma. Amer. J. Respir. Crit. Care. Med. 151 : 199 - 204.
31. Van Wijk RG, van Toorenbergen AW, Dieges PH. Nasal allergy to avian antigens. Clin Allergy 1987 ; 17 : 515 - 21.
32. Walbaum S, Vaucelle T, Biguet J. Analyse de l'extrait de Micropolyspora faeni par immunoélectrophorèse en double dimension. Localisation des
activités chymotrypsiques. Pathol Biol (Paris). 1973 Apr ; 21 (4) : 355 – 358.
33. Wendling A. Procédures de diagnostic ou de dépistage : Justification et validité d’un test de diagnostic ou de dépistage-sensibilité-spécificité.
Impact-Internat, 1986 ; Sept : 93-97.
- 114 -

Download Report