PLATELIA™ Candida Ab Plus 96 ΕΞΕΤΑΣΕΙΣ 62785 ΑΝΙΧΝΕΥΣΗ ΤΩΝ ΑΝΤΙΣΩΜΑΤΩΝ ΚΑΤΑ ΤΗΣ ΜΑΝΝΑΝΗΣ CANDIDA ΣΕ ΑΝΘΡΩΠΙΝΟ ΟΡΟ Ή ΠΛΑΣΜΑ ΜΕ ΤΗ ΧΡΗΣΗ ΤΗΣ ΑΝΟΣΟΕΝΖΥΜΙΚΗΣ ΜΕΘΟΔΟΥ 1- ΠΡΟΒΛΕΠΟΜΕΝΗ ΧΡΗΣΗ Η Platelia™ Candida Ab Plus είναι μια έμμεση ανοσοενζυμική ανάλυση μικροπλάκας για την ανίχνευση του πλήρους αντισώματος Ig κατά της μαννάνης σε ανθρώπινο ορό ή πλάσμα. 2- ΕΝΔΕΙΞΕΙΣ ΧΡΗΣΗΣ Η διάγνωση της διηθητικής μονιλίασης πρέπει να βασίζεται στη συνδυαστική ανίχνευση αντισωμάτων και κυκλοφορούντων αντιγόνων. 13 Η Platelia™ Candida Ab Plus (αρ. κατ. 62785) είναι μια εξέταση, η οποία αν χρησιμοποιηθεί σε συνδυασμό με την εξέταση Platelia™ Candida Ag Plus (αρ. κατ. 62784) επιτρέπει την πρώιμη διάγνωση της διηθητικής μονιλίασης, με βελτιωμένη παράλληλα ευαισθησία, στο πλαίσιο μιας ολοκληρωμένης διαγνωστικής προσέγγισης που περιλαμβάνει κλινικά και μυκητολογικά δεδομένα, καθώς και εκτίμηση των ενδογενών και ιατρογενών παραγόντων κινδύνου 10, 13, 14. Ο συνδυασμός αυτός αποτελεί, επίσης, αναπόσπαστο μέρος ενός βιοκλινικού συστήματος παρακολούθησης ασθενών και χρησιμοποιείται ως βοήθημα στη λήψη θεραπευτικών αποφάσεων. 8 3- ΚΛΙΝΙΚΟ ΕΝΔΙΑΦΕΡΟΝ Οι λοιμώξεις Candida κατατάσσονται μεταξύ των συνηθέστερων νοσοκομειακών μυκητιασικών λοιμώξεων, με την καντινταιμία να καταλαμβάνει την τέταρτη θέση ανάμεσα στις βασικότερες αιτίες πρόκλησης νοσοκομειακών σηψαιμιών. 12, 15, 16 Σε κλινικό επίπεδο, η διηθητική μονιλίαση αποτελεί μία από τις πιο σοβαρές μορφές μονιλίασης ,με επίπεδα θνησιμότητας από 30 έως 70% σε ανοσοκατεσταλμένους ασθενείς. Η διάγνωσή της δεν μπορεί να καθοριστεί εύκολα λόγω της χαμηλής ειδικότητας των κλινικών συμπτωμάτων και της χαμηλής ευαισθησίας των καλλιεργειών. Η διάγνωση της διηθητικής μονιλίασης που οδηγεί στην έναρξη κατάλληλης θεραπείας, βασίζεται συνήθως σε ένα συνδυασμό κλινικών και μυκητολογικών παραγόντων, καθώς και παραγόντων κινδύνου 2. Στο πλαίσιο αυτό, η διάγνωση της συστημικής μονιλίασης θα πρέπει απαραιτήτως να περιλαμβάνει ορολογικές τεχνικές, καθώς και άμεσες μυκητολογικές μεθόδους. Η ορολογική παρακολούθηση των αντισωμάτων κατά της Candida επιτρέπει την υποβοήθηση ή την τεκμηρίωση της διάγνωσης με τα μυκητολογικά ευρήματα 10, 13, 14. Η Platelia™ Candida Ab Plus ανιχνεύει τα αντισώματα που κατευθύνονται έναντι του αντιγόνου μαννάνης Candida, το οποίο αποτελεί το κύριο συστατικό των τοιχωμάτων των ζυμομυκήτων που ανήκουν στο είδος Candida. Η μαννάνη -που αποτελεί και βιοδείκτη μονιλιάσεων- είναι ένας εξαιρετικά ανοσογόνος πολυσακχαρίτης. Στη διάγνωση λοιμώξεων αυτού του είδους μπορεί να βοηθήσει η τακτική παρακολούθηση των ασθενών υψηλού κινδύνου, σε συνδυασμό με την ανίχνευση του αντιγόνου μαννάνης και των αντισωμάτων κατά της μαννάνης. 9 4- ΑΡΧΗ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ Η Platelia™ Candida Ab Plus είναι μια έμμεση ανοσοενζυμική ανάλυση μικροπλάκας δύο σταδίων για την ανίχνευση των αντισωμάτων κατά της μαννάνης σε ανθρώπινο ορό ή πλάσμα. Τα αραιωμένα δείγματα ορού ή πλάσματος κατανέμονται στα μικροβυθίσματα της μικροπλάκας που έχουν επικαλυφθεί με υψηλής καθαρότητας μαννάνη που έχει προέλθει από Candida albicans. Μετά την επώαση στους 37°C, οι λωρίδες πλένονται για να απομακρυνθεί κάθε αδέσμευτο υλικό. Ο συζεύκτης (πολυκλωνικό αντίσωμα αίγας έναντι ανθρώπινων IgG/IgA/IgM, συζευγμένο με υπεροξειδάση) προστίθεται σε κάθε μικροβύθισμα της μικροπλάκας και επωάζεται στους 37°C. Με την παρουσία του αντισώματος κατά της μαννάνης στο ανθρώπινο δείγμα, σχηματίζεται το εξής σύμπλεγμα: μαννάνη – ανθρώπινο Ig κατά της μαννάνης - αντίσωμα αίγας έναντι ανθρώπινων IgG/IgA/IgM/ υπεροξειδάση. Οι λωρίδες πλένονται για να απομακρυνθεί κάθε αδέσμευτο υλικό. Η προσθήκη του χρωμογόνου που περιέχει το υπόστρωμα υπεροξειδάσης και έχει επωαστεί σε θερμοκρασία δωματίου επιτρέπει την εμφάνιση των συμπλεγμάτων που ενδεχομένως θα σχηματιστούν. Η ενζυμική αντίδραση διακόπτεται με την προσθήκη 1Ν θειικού οξέος. Για την ανάγνωση της οπτικής πυκνότητας χρησιμοποιείται ένα φασματοφωτόμετρο ρυθμισμένο σε μήκος κύματος 450/620 nm. 5- ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΑ Τα αντιδραστήρια παρέχονται σε επαρκή ποσότητα για την πραγματοποίηση 96 μετρήσεων σε σύνολο 9 σειρών δοκιμασιών το μέγιστο. Αποθηκεύστε το κιτ σε θερμοκρασία +2-8°C. Πριν από τη χρήση, όλα τα αντιδραστήρια πρέπει απαραιτήτως να αποκτήσουν θερμοκρασία δωματίου (+18-30°C). Αμέσως μετά τη χρήση, επαναφέρετε όλα τα αντιδραστήρια στους +2-8°C. Επανατοποθετήστε τις λωρίδες που δεν θα χρησιμοποιηθούν στο σακουλάκι τους και σφραγίστε το προσεκτικά. Μην αφαιρείτε το αποξηραντικό υλικό. 1 Συστατικό R1 Microplate R2 Concentrated Washing Solution (20x) R3 Calibrator 0 R4a Calibrator 5 R4b Calibrator 10 R4c Calibrator 20 R4d Calibrator 80 R6 Conjugate R7a Sample Diluent 1 R7b Sample Diluent 2 R9 Chromogen TMB R10 Stopping Solution Περιεχόμενο Μικροπλάκα: - 96 μικροβυθίσματα (12 λωρίδες των 8 μικροβυθισμάτων η καθεμία) επικαλυμμένα με υψηλής καθαρότητας μαννάνη που έχει προέλθει από Candida albicans. Συμπυκνωμένο διάλυμα πλύσης (20 x): - Ρυθμιστικό διάλυμα TRIS-NaCl (pH 7,4) - 2%Tween® 20 - Συντηρητικό: < 1,5% ProClin™300 Βαθμονομητής 0 UA/ml (έτοιμος προς χρήση): - Ρυθμιστικό διάλυμα Tris-NaCl - Συντηρητικό: μεθυλισοθειαζολινόνη 0,02%, βρωμονιτροδιοξάνιο 0,02%, < 1,5% ProClin™300 Βαθμονομητής 5 UA/ml (έτοιμος προς χρήση): - Ρυθμιστικό διάλυμα Tris-NaCl - Ανθρώπινος ορός με περιεκτικότητα Ig κατά της μαννάνης - Συντηρητικό: μεθυλισοθειαζολινόνη 0,02%, βρωμονιτροδιοξάνιο 0,02%, < 1,5% ProClin™300 Βαθμονομητής 10 UA/ml (έτοιμος προς χρήση): - Ρυθμιστικό διάλυμα Tris-NaCl - Ανθρώπινος ορός με περιεκτικότητα Ig κατά της μαννάνης - Συντηρητικό: μεθυλισοθειαζολινόνη 0,02%, βρωμονιτροδιοξάνιο 0,02%, < 1,5% ProClin™300 Βαθμονομητής 20 UA/ml (έτοιμος προς χρήση): - Ρυθμιστικό διάλυμα Tris-NaCl - Ανθρώπινος ορός με περιεκτικότητα Ig κατά της μαννάνης - Συντηρητικό: μεθυλισοθειαζολινόνη 0,02%, βρωμονιτροδιοξάνιο 0,02%, < 1,5% ProClin™300 Βαθμονομητής 80 UA/ml (έτοιμος προς χρήση): - Ρυθμιστικό διάλυμα Tris-NaCl - Ανθρώπινος ορός με περιεκτικότητα Ig κατά της μαννάνης - Συντηρητικό: μεθυλισοθειαζολινόνη 0,02%, βρωμονιτροδιοξάνιο 0,02%, < 1,5% ProClin™300 Συζεύκτης (έτοιμος προς χρήση): - Πολυκλωνικό αντίσωμα αίγας έναντι ανθρώπινων Ig, συζευγμένο με υπεροξειδάση - Πράσινο του μαλαχίτη - Συντηρητικό:<1,5% ProClin™300 Αραιωτικό διάλυμα δείγματος 1 (έτοιμο προς χρήση): - Ρυθμιστικό διάλυμα Tris-NaCl, - 0,1% Tween® 20 - Ερυθρό της φαινόλης, - Συντηρητικό:< 1,5% ProClin™300 Αραιωτικό διάλυμα δείγματος 2 (έτοιμο προς χρήση): - Ρυθμιστικό διάλυμα Tris-NaCl, - 0,1% Tween® 20, - Κυανό της βρωμοθυμόλης, - Συντηρητικό:<1,5% ProClin™300 Διάλυμα ρωμογόνου TMB (έτοιμο προς χρήση): - Διάλυμα που περιέχει 3,3’,5,5’-τετραμεθυλοβενζιδίνη (< 0,1%), H2O2 (<1,0%) Διάλυμα αναστολής (έτοιμο προς χρήση): - 1N θειικό οξύ Αυτοκόλλητα φύλλα Ποσότητα 1 1 x 70 ml 1 x 2,5 ml 1 x 2,5 ml 1 x 2,5 ml 1 x 2,5 ml 1 x 2,5 ml 1 x 26 ml 1 x 28 ml 1 x 26 ml 1 x 28 ml 1 x 28 ml 4 6- ΟΔΗΓΙΕΣ ΥΓΙΕΙΝΗΣ ΚΑΙ ΑΣΦΑΛΕΙΑΣ 1. 2. 3. Μόνο για in vitro διαγνωστική χρήση. Μόνο για επαγγελματική χρήση. Δεν συνιστάται η χρήση αυτής της εξέτασης με άλλα δείγματα, εκτός από ανθρώπινο ορό ή πλάσμα. 2 4. Οι βαθμονομητές R4a, R4b, R4c και R4d έχουν προετοιμαστεί από ανθρώπινο ορό που βρέθηκε αρνητικός για αντισώματα anti-HIV-1, anti-HIV-2 και anti-CHV , καθώς και για αντιγόνο HBs με τη χρήση εξετάσεων που φέρουν πιστοποίηση CE. Ωστόσο, όλα τα αντιδραστήρια πρέπει να αντιμετωπίζονται ως δυνητικά μολυσματικά. Όλες οι εξετάσεις πρέπει να διεξάγονται σύμφωνα με τα πρότυπα σχετικά με τους παθογόνους παράγοντες που μεταδίδονται με το αίμα (OSHA), επίπεδο βιοασφάλειας 2 ή σύμφωνα με άλλες ενδεδειγμένες πρακτικές βιοασφάλειας. 5. Πρέπει να γίνεται χρήση προστατευτικής ενδυμασίας, όπως εργαστηριακή ρόμπα, προστασία ματιών και προσώπου, γάντια μίας χρήσης (συνιστώνται γάντια κατασκευασμένα από συνθετικά υλικά χωρίς λατέξ), κιτ χειρισμού αντιδραστηρίων και δείγματα ασθενών σύμφωνα με το προβλεπόμενο πρότυπο Ορθής εργαστηριακής πρακτικής (ΟΕΠ). Πλένετε σχολαστικά τα χέρια σας μετά από την ολοκλήρωση της εξέτασης. 6. Μην αναρροφάτε με πιπέτα από το στόμα. 7. Μην καπνίζετε και μην καταναλώνετε ροφήματα ή τρόφιμα σε περιοχές όπου εκτελείταιεπεξεργασία δειγμάτων ή αντιδραστηρίων του κιτ. 8. Αποφεύγετε τη διαρροή δειγμάτων ή διαλυμάτων αυτών. 9. Επιφάνειες που έχουν μολυνθεί με βιολογικό υλικό που δεν περιέχει οξύ πρέπει να σκουπίζονται επιμελώς με ένα δραστικό απολυμαντικό. Τα απολυμαντικά που μπορούν να χρησιμοποιηθούν περιλαμβάνουν, ενδεικτικά, ένα διάλυμα 10% λευκαντικού (0,5% διάλυμα υποχλωριώδους νατρίου), 70% αιθανόλης ή 0,5% Wescodyne Plus. Τα υλικά που χρησιμοποιούνται για τον καθαρισμό πρέπει να απορρίπτονται ως επικίνδυνα βιολογικά απόβλητα. ΠΡΟΣΟΧΗ: Μην τοποθετείτε διαλύματα που περιέχουν λευκαντικά στο αυτόκαυστο. 10. Αν το μολυσματικό υγρό είναι οξύ, οι λερωμένες επιφάνειες θα πρέπει να σκουπίζονται και να εξουδετερώνονται με διττανθρακικό νάτριο και έπειτα να ξεπλένονται και να στεγνώνονται. Σε περίπτωση που το μολυσματικό υγρό περιέχει επικίνδυνα βιολογικά υλικά, πλύνετε την επιφάνεια με ένα χημικό απολυμαντικό. 11. Απορρίψτε όλα τα δείγματα και τα αντιδραστήρια που χρησιμοποιήθηκαν για την εξέταση ως δυνητικά μολυσματικά. Τα επικίνδυνα χημικά και βιολογικά απορρίμματα πρέπει να καταστρέφονται σύμφωνα με τους κανονισμούς που ισχύουν. 12. ΠΡΟΣΟΧΗ: Παρακάτω αναφέρονται οι δυνητικοί χημικοί κίνδυνοι που παρουσιάζουν ορισμένα συστατικά των κιτ (ανατρέξτε στο κεφάλαιο 5 – ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΑ) Xi - Ερεθιστικό Μερικά αντιδραστήρια περιέχουν ProClin™ 300 < 1,5%: R43: Μπορεί να προκαλέσει ευαισθησία κατά την επαφή με το δέρμα. S23-24-37-60: Μην εισπνέετε τις αναθυμιάσεις ή τους ψεκασμούς. Αποφεύγετε την επαφή με το δέρμα. Φοράτε κατάλληλα γάντια. Η απόρριψη αυτού του υλικού και της συσκευασίας του πρέπει να γίνεται σύμφωνα με τους κανονισμούς απόρριψης επικίνδυνων αποβλήτων. 13. Το δελτίο δεδομένων ασφαλείας υλικού (MSDS) διατίθεται κατόπιν αιτήματος. 7- ΠΡΟΦΥΛΑΞΕΙΣ ΧΡΗΣΗΣ 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. ΚΑΤΕΨΥΓΜΕΝΑ ΔΕΙΓΜΑΤΑ ΟΡΟΥ Ή ΠΛΑΣΜΑΤΟΣ ΠΟΥ ΑΠΟΘΗΚΕΥΤΗΚΑΝ ΥΠΟ ΑΓΝΩΣΤΕΣ ΣΥΝΘΗΚΕΣ ΕΝΔΕΧΕΤΑΙ ΝΑ ΔΩΣΟΥΝ ΨΕΥΔΗ ΘΕΤΙΚΑ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ ΛΟΓΩ ΤΗΣ ΜΟΛΥΝΣΗΣ ΑΠΟ ΜΥΚΗΤΕΣ Ή/ΚΑΙ ΒΑΚΤΗΡΙΑ. Μη χρησιμοποιείτε το κιτ ή κάποιο από τα αντιδραστήριά του μετά το πέρας της αναγραφόμενης ημερομηνίας λήξης. Μην αναμειγνύετε ή συνδυάζετε αντιδραστήρια από κιτ με διαφορετικούς αριθμούς παρτίδας κατά τη διάρκεια της ίδιας σειράς εξετάσεων. ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Μπορείτε να χρησιμοποιήσετε διαφορετικές παρτίδες διαλύματος πλύσης (R2, συμβολίζεται* ως 20x με πράσινο χρώμα), χρωμογόνου (R9, συμβολίζεται ως TMB με τυρκουάζ χρώμα) και διαλύματος αναστολής (R10, συμβολίζεται ως 1Ν με κόκκινο χρώμα) από αυτές που παρέχονται στη συσκευασία, αρκεί να χρησιμοποιείτε αντιδραστήρια που είναι ακριβώς αντίστοιχα και από την ίδια παρτίδα κατά τη διάρκεια της ίδιας σειράς εξετάσεων. ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Το διάλυμα πλύσης (R2 συμβολίζεται* ως 20x με πράσινο χρώμα) δεν μπορεί να αναμειχθεί με το διάλυμα πλύσης (R2 συμβολίζεται* ως 10x με μπλε χρώμα) που παρέχεται στα κιτ αντιδραστηρίων της Bio-Rad. * στην ετικέτα του φιαλιδίου Πριν από τη χρήση, περιμένετε 30 λεπτά για να αποκτήσουν τα αντιδραστήρια θερμοκρασία δωματίου (+18 έως +30°C). Είναι προτιμότερο να χρησιμοποιείτε εξοπλισμό μίας χρήσης. Αν αυτό δεν είναι εφικτό, χρησιμοποιήστε γυάλινα δοχεία τα οποία έχουν πλυθεί και ξεπλυθεί σχολαστικά με αποσταγμένο νερό. Ελέγξτε αν οι πιπέτες είναι ακριβείας και αν τα εργαλεία που χρησιμοποιείτε λειτουργούν σωστά. Η ανασύσταση του αντιδραστηρίου R2 πρέπει να γίνεται με προσοχή για την αποφυγή τυχόν μόλυνσης. Η ενζυμική αντίδραση είναι εξαιρετικά ευαίσθητη σε μέταλλα ή μεταλλικά ιόντα. Συνεπώς, κανένα μεταλλικό αντικείμενο δεν πρέπει να έρχεται σε επαφή με τα διαλύματα συζεύκτη και υποστρώματος. Για χειροκίνητη μεταφορά των βαθμονομητών και των δειγμάτων με πιπέτα, χρησιμοποιείτε ξεχωριστά ακροφύσια πιπέτας για κάθε μικροβύθισμα ορού, προκειμένου να αποφευχθεί τυχόν επιμόλυνση. Για να διασφαλίσετε επαρκές πλύσιμο των μικροβυθισμάτων, τηρήστε τον συνιστώμενο αριθμό κύκλων πλύσης και βεβαιωθείτε ότι όλα τα μικροβυθίσματα γεμίζουν και αδειάζουν πλήρως. Ο καθαρισμός πρέπει να γίνεται με τη χρήση της συσκευής πλύσης μικροπλάκας. Μην αφήνετε τη μικροπλάκα να στεγνώσει στο διάστημα από το τέλος του κύκλου πλύσης και μέχρι την προσθήκη των αντιδραστηρίων. Μην χρησιμοποιείτε το ίδιο δοχείο για το σύζευγμα και για το διάλυμα ανάπτυξης. Αποφύγετε την έκθεση του διαλύματος χρωμογόνου ή εμφάνισης σε δυνατό φως κατά την αποθήκευση ή την επώαση. Βεβαιωθείτε ότι τα διαλύματα χρωμογόνου δεν έρχονται σε επαφή με οξειδωτικούς παράγοντες. 3 14. Το χρωμογόνο (R9) πρέπει να είναι άχρωμο. Η εμφάνιση ενός μπλε χρώματος υποδεικνύει ότι το αντιδραστήριο δεν είναι κατάλληλο για χρήση και πρέπει να αντικατασταθεί. 15. Αποφύγετε την επαφή του διαλύματος αναστολής με οποιοδήποτε οξειδωτικό παράγοντα, μέταλλο ή μεταλλικά ιόντα. 16. Μη διοχετεύετε τυχόν ποσότητες συζεύκτη που δεν χρησιμοποιήθηκαν στο αρχικό δοχείο. 8- ΠΡΟΕΤΟΙΜΑΣΙΑ ΚΑΙ ΑΠΟΘΗΚΕΥΣΗ ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΩΝ Μικροπλάκα (R1) Κάθε βάση περιέχει 12 λωρίδες και είναι συσκευασμένη σε μια σακούλα. Κόψτε τη σακούλα με ένα ψαλίδι ακριβώς κάτω από την ένωση. Ανοίξτε τη σακούλα και αφαιρέστε τη βάση. Τοποθετήστε τη βάση που περιέχει τις μη χρησιμοποιημένες λωρίδες στη σακούλα. Κλείστε τη σακούλα προσεκτικά και φυλάξτε τη σε θερμοκρασία +2 έως 8°C. Μετά το άνοιγμα της σφραγισμένης σε κενό αέρος σακούλας, οι λωρίδες που θα αποθηκευτούν σε αυτή στους +2-8°C θα είναι σταθερές για 8 εβδομάδες, αν η σακούλα έχει σφραγιστεί προσεκτικά. Ελέγξτε ότι υπάρχει ακόμα αποξηραντικό. Διάλυμα πλύσης (R2) Προετοιμάστε το διάλυμα πλύσης αραιώνοντας το συμπυκνωμένο διάλυμα 20 φορές σε αποσταγμένο νερό: 50 ml R2 σε 950 ml αποσταγμένου νερού. (Χρειάζονται 650 ml αραιωμένου διαλύματος πλύσης για ολόκληρη την πλάκα των 12 λωρίδων χωρίς να υπολογίζεται ο νεκρός όγκος που χρειάζεται η συσκευή πλύσης). Μετά την αραίωση, το διάλυμα πλύσης μπορεί να διατηρηθεί για 14 ημέρες στους +230°C. Αφού ανοιχτεί, το συμπυκνωμένο διάλυμα πλύσης που είναι αποθηκευμένο στους +2-30°C είναι σταθερό έως την ημερομηνία λήξης που αναγράφεται στην ετικέτα, αν δεν υπάρχει μόλυνση. Βαθμονομητής 0 (R3), βαθμονομητής 5 (R4a), βαθμονομητής 10 (R4b), βαθμονομητής 20 (R4c), βαθμονομητής 80 (R4d): Οι βαθμονομητές είναι έτοιμοι προς χρήση. Αφού ανοιχτούν, αυτά τα αντιδραστήρια είναι σταθερά για 8 εβδομάδες, αν διατηρούνται στους +2-8°C και δεν υπάρχει μόλυνση. Συζεύκτης (R6), αρααιωτικό διάλυμα δείγματος 1 (R7a), αραιωτικό διάλυμα δείγματος 2 (R7b), διάλυμα χρωμογόνου TMB (R9): Αυτά τα αντιδραστήρια είναι έτοιμα προς χρήση. Αφού ανοιχτούν, αυτά τα αντιδραστήρια είναι σταθερά για 8 εβδομάδες, αν διατηρούνται στους +2-8°C και δεν υπάρχει μόλυνση. Διάλυμα αναστολής (R10): Αυτό το αντιδραστήριο είναι έτοιμο προς χρήση. Αφού ανοιχτεί, αυτό το αντιδραστήριο είναι σταθερό έως την ημερομηνία λήξης που αναγράφεται στην ετικέτα, αν διατηρείται στους +2-8°C και δεν υπάρχει μόλυνση. 9- ΔΕΙΓΜΑΤΑ 1. 2. 3. 4. Αυτές οι εξετάσεις πραγματοποιούνται σε δείγματα ορού ή πλάσματος που έχουν ληφθεί από αντιπηκτικό τύπου EDTA, ηπαρίνη ή κιτρικό άλας. Η δειγματοληψία, η επεξεργασία και η αποθήκευση αυτών των δειγμάτων αίματος πρέπει να γίνεται σύμφωνα με τις ακόλουθες οδηγίες: Συλλέξτε ένα δείγμα αίματος σύμφωνα με τις τυπικές εργαστηριακές διαδικασίες. Για ορό, αφήστε το θρόμβο να σχηματιστεί πλήρως πριν από τη φυγοκέντρηση. Τα σωληνάρια πρέπει να είναι κλειστά. Μετά από τη φυγοκέντρηση, αφαιρέστε τον ορό ή το πλάσμα και αποθηκεύστε το σε ένα σφραγισμένο σωληνάριο. Αν η εξέταση πραγματοποιηθεί εντός 4 ημερών, τα δείγματα αποθηκεύονται στους +2-8°C. Αν η εξέταση δεν πραγματοποιηθεί εντός 4 ημερών, τα δείγματα καταψύχονται στους -20°C (ή -80°C). Τα δείγματα συνιστάται να μην υποβάλλονται σε περισσότερους από τρεις κύκλους ψύξης/απόψυξης. Μετά από την απόψυξη και πριν από την πραγματοποίηση της εξέτασης, τα δείγματα θα πρέπει να αναμιγνύονται καλά. Τα αποτελέσματα δεν επηρεάζονται από δείγματα που περιέχουν 60 g/l ανθρώπινης αλβουμίνης ή 120 g/l σε πλήρεις πρωτεΐνες ή 200 mg/l έμμεσης χολερυθρίνης ή 200 mg/l άμεσης χολερυθρίνης, από λιπαιμικά δείγματα που περιέχουν το ισοδύναμο σε 30 g/l τριελαΐνης (τριγλυκερίδιο) ή 5 g/l χοληστερίνης, ή από αιμολυμένα δείγματα που περιέχουν 2 g/l αιμοσφαιρίνης. Μη θερμαίνετε τα δείγματα. 10-ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ Παρεχόμενα υλικά Ανατρέξτε στο κεφάλαιο 5-ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΑ 4 Απαιτούμενα υλικά που δεν παρέχονται 1. Αποστειρωμένο αποσταγμένο ή απιονισμένο νερό για την αραίωση του συμπυκνωμένου διαλύματος πλύσης. 2. Απορροφητικό χαρτί. 3. Γάντια μίας χρήσης. 4. Προστατευτικά γυαλιά. 5. Υποχλωριώδες νάτριο (λευκαντικό) και διττανθρακικό νάτριο. 6. Πιπέτες ή πολυκάναλες πιπέτες, αυτόματες ή ημιαυτόματες,ρυθμιζόμενες ή σταθερές, που μπορούν να μετρούν και να διοχετεύουν 10 έως 1000 μl, 1 ml, 2 ml και 10 ml. 7. Βαθμονομημένοι δοκιμαστικοί σωλήνες των 25 ml, 50 ml, 100 ml και 1000 ml. 8. Σωληνάρια μίας χρήσης. 9. Δοχείο για μολυσμένα απορρίμματα. 10. Αναδευτήρας τύπου “Vortex”. 11. Επωαστής μικροπλακών στους 37°C ± 1°C (*). 12. Ημιαυτόματη ή αυτόματη συσκευή πλύσης μικροπλάκας (*). 13. Αναγνώστης μικροπλάκας εξοπλισμένος με φίλτρα 450 και 620 nm (*). (*) Αν το επιθυμείτε, μπορείτε να ζητήσετε περισσότερες πληροφορίες σχετικά με συσκευές που έχουν πιστοποιηθεί από το τεχνικό μας τμήμα. Διαδικασία ανοσοενζυμικής ανάλυσης (ΕΙΑ) Τηρείτε αυστηρά το προτεινόμενο πρωτόκολλο. Τηρείτε την Ορθή εργαστηριακή πρακτική: • Πριν από τη χρήση, τα αντιδραστήρια πρέπει απαραιτήτως να αποκτήσουν θερμοκρασία δωματίου (+18-30°C) για 30 λεπτά τουλάχιστον. • Χρησιμοποιήστε όλους τους βαθμονομητές κάθε φορά που η δόση χρησιμοποιείται για την επαλήθευση της εξέτασης. Ακολουθήστε την παρακάτω διαδικασία: 1. Διαμορφώστε προσεκτικά το διάγραμμα για την κατανομή και την ταυτοποίηση των βαθμονομητών και των δειγμάτων. 2. Προαραιώστε τα δείγματα αμέσως πριν από την εξέταση: για αναλογία 1/20, 10 μl ορού ή 10 μl πλάσματος + 190 μl αραιωτικού διαλύματος δείγματος 1 (R7a). Η προαραίωση του δείγματος εμφανίζει σκούρο ερυθρό χρώμα. 3. Αφαιρέστε τη βάση και τις λωρίδες (R1) από την προστατευτική τους συσκευασία. Επανατοποθετήστε τις λωρίδες που δεν θα χρησιμοποιηθούν στη συσκευασία τους και σφραγίστε τη. 4. Αδειάστε 190 μl αραιωτικού διαλύματος δείγματος 2 (R7b) στα μικροβυθίσματα που προορίζονται για τη λήψη των δειγμάτων προς εξέταση και προσθέστε 10 μl προαραιωμένων δειγμάτων σε αναλογία 1/20, αναδεύοντας προσεκτικά μέσω επαναρρόφησης 2 ή 3 φορές. ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Σε αυτό το στάδιο της διαδικασίας, η κατανομή των δειγμάτων είναι ελεγχόμενη. Έτσι, το αναμενόμενο αποτέλεσμα είναι ότι μετά την προσθήκη 10 μl προαραιωμένων δειγμάτων, τα δοχεία που περιέχουν τα δείγματα αποκτούν καφέ χρώμα. Τα δοχεία που δεν περιέχουν κάποιο δείγμα εμφανίζουνμια πράσινη απόχρωση. 5. Αδειάστε τους έτοιμους προς χρήση βαθμονομητές σε αναλογία 200 μl ανά μικροβύθισμα, σύμφωνα με το παρακάτω διάγραμμα: - A1: Βαθμονομητής 0 UA/ml (R3) - B1: Βαθμονομητής 5 UA/ml (R4a) - C1: Βαθμονομητής 10 UA/ml (R4b) - D1: Βαθμονομητής 20 UA/ml (R4c) - E1: Βαθμονομητής 80 UA/ml (R4d) A B C D E F G H 1 R3 R4a R4b R4c R4d S1 S2 S3 2 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 3 S12 4 5 6 7 8 9 10 11 12 6. Καλύψτε τη μικροπλάκα με μια αυτοκόλλητη μεμβράνη, πιέζοντας σε όλη την επιφάνεια για να βεβαιωθείτε ότι είναι υδατοστεγής. 7. Επωάστε αμέσως τη μικροπλάκα σε ξηρό επωαστή μικροπλάκας για 60 ± 5 λεπτά στους 37°C (± 1°C). 8. Ετοιμάστε το αραιωμένο διάλυμα πλύσης (ανατρέξτε στο κεφάλαιο 8). 9. Αφαιρέστε την αυτοκόλλητη μεμβράνη. Αναρροφήστε τα περιεχόμενα όλων των μικροβυθισμάτων σε ένα δοχείο αποβλήτων (που περιέχει υποχλωριώδες νάτριο). 10. Πλύνετε τη μικροπλάκα 4 φορές χρησιμοποιώντας μια συσκευή πλύσης μικροπλάκας με 800 μl αραιωμένου διαλύματος πλύσης. Μετά την τελευταία πλύση, αναστρέψτε τη μικροπλάκα και σκουπίστε προσεκτικά με απορροφητικό χαρτί για να απομακρύνετε όλο το υγρό που έχει απομείνει. 11. Αναμίξτε τα περιεχόμενα της φιάλης R6 ανακινώντας πριν από τη χρήση. Αν διαθέτετε πολυκάναλη πιπέτα, χρησιμοποιήστε μόνο τον όγκο που είναι απαραίτητος για την ολοκλήρωση της σειράς των εξετάσεων: απαιτούνται 3,5 ml για δύο λωρίδες των 8 δοχείων. 12. Αδειάστε 200 μl συζεύκτη R6 σε κάθε μικροβύθισμα. 5 13. Καλύψτε τη μικροπλάκα με μια αυτοκόλλητη μεμβράνη, πιέζοντας σε όλη την επιφάνεια για να βεβαιωθείτε ότι είναι υδατοστεγής. 14. Επωάστε τη μικροπλάκα σε ξηρό επωαστή μικροπλάκας για 60 ± 5 λεπτά στους 37°C (± 1°C). 15. Αφαιρέστε την αυτοκόλλητη μεμβράνη. Αναρροφήστε τα περιεχόμενα όλων των μικροβυθισμάτων σε ένα δοχείο αποβλήτων (που περιέχει υποχλωριώδες νάτριο). 16. Πλύνετε τη μικροπλάκα 4 φορές χρησιμοποιώντας μια συσκευή πλύσης μικροπλάκας με 800 μl αραιωμένου διαλύματος πλύσης. Μετά την τελευταία πλύση, αναστρέψτε τη μικροπλάκα και σκουπίστε προσεκτικά με απορροφητικό χαρτί για να απομακρύνετε όλο το υγρό που έχει απομείνει. 17. Επιλέγοντας ένα σημείο μακριά από έντονο φως, προσθέστε γρήγορα 200 μl διαλύματος χρωμογόνου TMB (R9) σε κάθε μικροβύθισμα. 18. Επωάστε τη μικροπλάκα στο σκοτάδι σε θερμοκρασία δωματίου (+18-30°C) για 30 ± 5 λεπτά. Μη χρησιμοποιείτε αυτοκόλλητη μεμβράνη κατά τη διάρκεια αυτού του σταδίου επώασης. 19. Προσθέστε 100 μl διαλύματος αναστολής (R10) σε κάθε μικροβύθισμα, ακολουθώντας την ίδια διαδικασία όπως και για την προσθήκη του διαλύματος ανάπτυξης. Αναμίξτε καλά. 20. Σκουπίστε καλά το κάτω μέρος της κάθε μικροπλάκας. 21. Διαβάστε την ένδειξη οπτικής πυκνότητας κάθε μικροβυθίσματος στα 450 nm (φίλτρο αναφοράς 620 nm) εντός 30 λεπτών από την προσθήκη του διαλύματος αναστολής (πριν από την ανάγνωση, οι λωρίδες θα πρέπει πάντα να αποθηκεύονται σε σημείο όπου δεν εκτίθενται άμεσα στο φως). 22. Πριν καταχωρίσετε τα αποτελέσματα, βεβαιωθείτε ότι η εκτύπωση της συσκευής ανάγνωσης αντιστοιχεί με το διάγραμμα κατανομής των μικροπλακών. 11-ΠΟΙΟΤΙΚΟΣ ΕΛΕΓΧΟΣ (ΚΡΙΤΗΡΙΑ ΕΓΚΥΡΟΤΗΤΑΣ) Χρησιμοποιείτε βαθμονομητές σε κάθε μικροπλάκα για κάθε εξέταση. Για να διασφαλιστεί η εγκυρότητα της εξέτασης, θα πρέπει να πληρούνται τα ακόλουθα κριτήρια: Τιμή οπτικής πυκνότητας: ΟΠ R4a > 0,160 Λόγοι: Αναλογία ΟΠ R4a/ΟΠ R3 > 6,00 Αναλογία ΟΠ R4b/ ΟΠ R4a > 1,20 Αναλογία ΟΠ R4c/ ΟΠ R4b > 1,20 Αναλογία ΟΠ R4d/ ΟΠ R4c > 1,20 12-ΕΡΜΗΝΕΙΑ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΩΝ Καθορισμός της καμπύλης βαθμονόμησης Η καμπύλη βαθμονόμησης ορίζεται με 5 σημεία εύρους (βαθμονομητές) 0, 5, 10, 20 και 80 UA/ml. Σχεδιάστε την καμπύλη βαθμονόμησης [ΟΠ = συνάρτηση (UA/ml)] σημειώνοντας την ΟΠ για τους βαθμονομητές R3, R4a, R4b, R4c και R4d στον κατακόρυφο άξονα (άξονα Y) και τις αντίστοιχες συγκεντρώσεις σε UA/ml στον οριζόντιο άξονα (άξονα X). Επιλέξτε μια διαδρομή που ενώνει τα σημεία του εύρους. Καθορισμός της συγκέντρωσης αντισωμάτων κατά της μαννάνης (UA/ml) στα δείγματα εξέτασης Μπορείτε να χρησιμοποιήσετε την καμπύλη βαθμονόμησης για να καθορίσετε τη συγκέντρωση αντισωμάτων κατά της μαννάνης, σε UA/ml, για κάθε δείγμα εξέτασης. Ερμηνεία των αποτελεσμάτων • Δείγματα με συγκέντρωση μαννάνης χαμηλότερη από 5 UA/ml (C < 5) θεωρούνται «αρνητικά» στην παρουσία αντισωμάτων κατά της μαννάνης. • Δείγματα με συγκέντρωση μαννάνης μεταξύ 5 και 10 UA/ml (5 ≤ C < 10) θεωρούνται «ενδιάμεσα» στην • παρουσία αντισωμάτων κατά της μαννάνης. • Δείγματα με συγκέντρωση μαννάνης υψηλότερη από ή ίση με 10 UA/ml (C ≥ 10) θεωρούνται «θετικά» στην παρουσία αντισωμάτων κατά της μαννάνης. • Οι βαθμονομητές που χρησιμοποιούνται για το σχεδιασμό της καμπύλης βαθμονόμησης δεν επιτρέπουν την τιτλοδότηση για συγκεντρώσεις μεγαλύτερες των 80 UA/ml. Συνιστάται να επαναλάβετε την εξέταση αφού πρώτα έχετε ολοκληρώσει έναν πρόσθετο κύκλο προαραίωσης ορού ή πλάσματος αραιώνοντας 1 (R7a) στο 1/10ατο. Μετά από αυτήν την πρώτη προαραίωση, ακολουθήστε τη διαδικασία που περιγράφεται στο κεφάλαιο 10 (προαραίωση στο 1/20 με R7a, και στη συνέχεια αραίωση στο 1/20 με R7b). Η συγκέντρωση του ισχυρού θετικού δείγματος θα πρέπει να υπολογιστεί πολλαπλασιάζοντας τη συγκέντρωση που έχει προκύψει με τον αριθμό 10. Ένα «ενδιάμεσο» αποτέλεσμα μπορεί να επιβεβαιωθεί από ένα νέο δείγμα που θα λαμβάνεται από τον ασθενή εντός διαστήματος κάποιων εβδομάδων από την ημερομηνία του πρώτου δείγματος. 6 13- ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΙ ΧΡΗΣΗΣ 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. Μια αρνητική εξέταση δεν μπορεί να αποκλείσει τη διάγνωση διηθητικής μονιλίασης. Η ερμηνεία της απουσίας αντισωμάτων είναι δύσκολη σε ασθενείς με τροποποιημένο ανοσοποιητικό σύστημα. Η διηθητική μονιλίαση μπορεί να διαγνωσθεί μόνο μετά τη μελέτη των κλινικών, θεραπευτικών, ακτινολογικών, κυτταρολογικών, άμεσων μυκητολογικών και ορολογικών αποτελεσμάτων, ενώ κρίνεται απαραίτητη η ερμήνευση του κάθε στοιχείου ξεχωριστά και με προσοχή. Μια αρνητική εξέταση για την παρουσία αντισωμάτων κατά της μαννάνης θα πρέπει επίσης να ερμηνεύεται σε συνδυασμό με τα αποτελέσματα των εξετάσεων για αντιγόνα μαννάνης: ακόμα και στην περίπτωση της διηθητικής μονιλίασης, είναι πιο δύσκολο να ανιχνευτεί το αντιγόνο σε ασθενείς με θετική διάγνωση για αντισώματα κατά της μαννάνης (ανατρέξτε στην παράγραφο 15-Ειδικά χαρακτηριστικά απόδοσης) Η απόδοση της ανίχνευσης των αντισωμάτων κατά της μαννάνης σε ορό ή πλάσμα σχετίζεται με τη συχνότητα των εξετάσεων που πραγματοποιούνται στους ασθενείς. Για την αύξηση της ευαισθησίας και της πρώιμης θετικότητας της εξέτασης, συνιστάται η τακτική παρακολούθηση των ασθενών υψηλού κινδύνου, καθώς και ο διαγνωστικός έλεγχος για αντιγόνα μαννάνης. Κατά την εξέταση των δειγμάτων για την παρουσία αντισωμάτων κατά της μαννάνης πρέπει να τηρείται η διαδικασία της ανάλυσης Platelia™ Candida Ab Plus και η ερμηνεία των αποτελεσμάτων. Σε κάθε χρήστη αυτού του κιτ συνιστάται η προσεκτική ανάγνωση του ένθετου συσκευασίας πριν από την εκτέλεση της εξέτασης. Συγκεκριμένα, η διαδικασία εξέτασης πρέπει να τηρείται προσεκτικά για τη μεταφορά δειγμάτων και αντιδραστηρίων με πιπέτα, για την πλύση της πλάκας και για το χρονισμό των βημάτων επώασης. Η αποτυχία προσθήκης των δειγμάτων ή των αντιδραστηρίων σύμφωνα με τις οδηγίες που περιγράφονται στη διαδικασία ενδέχεται να οδηγήσει σε ψευδώς αρνητικά αποτελέσματα. Όταν υπάρχει κλινική υποψία διηθητικής μονιλίασης ή σφάλματος διαδικασίας, θα πρέπει να εξετάζεται το ενδεχόμενο επαναληπτικής εξέτασης πρόσθετων δειγμάτων. Η μόλυνση μικροβυθισμάτων αρνητικού δείγματος ασθενή με θετικό ορό ελέγχου/μικροβυθίσματα δείγματος ασθενή είναι πιθανή, αν τα περιεχόμενα ενός μικροβυθίσματος διαρρεύσουν σε άλλο μικροβύθισμα λόγω αμελούς χειρισμού της μικροπλάκας ή κακής τεχνικής μεταφοράς με πιπέτα κατά την προσθήκη αντιδραστηρίων. Για την αξιολόγηση της απόδοσης της εξέτασης Platelia™ Candida Ab Plus δεν χρησιμοποιήθηκαν δείγματα ορού ή πλάσματος από νεογέννητα βρέφη ή παιδιατρικούς ασθενείς. Η λειτουργία του Platelia™ Candida Ab Plus δεν σχεδιάστηκε για μη αυτόματη ανάγνωση ή/και για οπτικό προσδιορισμό των αποτελεσμάτων. Παρατηρήθηκαν λανθασμένα θετικά αποτελέσματα σε δείγματα που περιείχαν αναλογία ανθρώπινης γ-σφαιρίνης ≥ 60 g/l, καθώς και σε κάποια δείγματα που βρέθηκαν θετικά στο ρευματοειδή παράγοντα ή θετικά σε αντισώματα anti-ds-DNA ή θετικά στην παρουσία IgG anti-Aspergillus. 14-ΑΝΑΜΕΝΟΜΕΝΕΣ ΤΙΜΕΣ Ο επιπολασμός των αντισωμάτων που κατευθύνονται έναντι του αντιγόνου της μαννάνης ειδικά για Candida που μετρήθηκε με τη χρήση της εξέτασης Platelia™ Candida Ab Plus αξιολογήθηκε με τη χρήση ενός πάνελ από 613 δείγματα από 51 Ολλανδούς ασθενείς (τοποθεσία 1 – Ολλανδία) που νοσηλεύονταν για θεραπεία καρκίνου (κακοήθεις νόσοι του αίματος σε 49 ασθενείς και μη αιματολογικές κακοήθειες σε 2 ασθενείς) μέσω εντατικής χημειοθεραπείας. Από τα 613 δείγματα, 114 βρέθηκαν θετικά και 136 ενδιάμεσα, και ο επιπολασμός ήταν 114/613 = 18,6% [CI 95%: 15,6-21,9%], θεωρώντας ότι τα ενδιάμεσα αποτελέσματα ήταν αρνητικά, και 250/613 = 40,8% [CI 95%: 36,9-44,8%], θεωρώντας ότι τα ενδιάμεσα αποτελέσματα ήταν θετικά. Όσον αφορά τους ασθενείς, από τους 51 που εξετάστηκαν, οι 14 είχαν τουλάχιστον ένα θετικό δείγμα και οι 20 είχαν τουλάχιστον ένα ενδιάμεσο δείγμα χωρίς κανένα θετικό, και ο επιπολασμός ήταν 14/51 = 27,5% [CI 95%: 15,9-41,7%], θεωρώντας ότι τα ενδιάμεσα αποτελέσματα ήταν αρνητικά, και 34/51 = 66,7% [CI 95%: 52,1-79,2%], θεωρώντας ότι τα ενδιάμεσα αποτελέσματα ήταν θετικά. Σε αυτούς τους 51 ασθενείς, οι 30 (388 δείγματα) δεν παρουσίασαν διηθητική μονιλίαση. Σε 20 από αυτούς βρέθηκαν αποικίες ζυμομυκήτων (12 με Candida albicans, 7 με Candida albicans συνδεδεμένη με κάποιο άλλο είδος Candida και 1 με αποικίες ενός τουλάχιστον είδους Candida non albicans). Τέσσερις από τους ασθενείς παρουσίασαν κλινικά συμπτώματα και εξωτερική μόλυνση με Candida , η οποία εξακριβώθηκε μετά από μικροβιολογικές εξετάσεις. Σε 24 από τους ασθενείς παρατηρήθηκαν εκτεταμένες αλλοιώσεις των βλεννογόνων. Από τα 388 δείγματα, τα 53 βρέθηκαν θετικά και τα 95 ενδιάμεσα, και ο επιπολασμός ήταν 53/388 = 13,7% [CI 95%: 10,4-17,5%], θεωρώντας ότι τα ενδιάμεσα αποτελέσματα ήταν αρνητικά, και 148/388 = 38,1% [CI 95%: 33,3-43,2%], θεωρώντας ότι τα ενδιάμεσα αποτελέσματα ήταν θετικά. Όσον αφορά τους ασθενείς, από τους 30 που εξετάστηκαν, οι 7 είχαν τουλάχιστον ένα θετικό δείγμα και οι 12 είχαν τουλάχιστον ένα ενδιάμεσο δείγμα χωρίς κανένα θετικό, και ο επιπολασμός ήταν 7/30 = 23,3% [CI 95%: 9,9-42,3%], θεωρώντας ότι τα ενδιάμεσα αποτελέσματα ήταν αρνητικά, και 19/30 = 63,3% [CI 95%: 43,9-80,1%], θεωρώντας ότι τα ενδιάμεσα αποτελέσματα ήταν θετικά. 15-ΕΙΔΙΚΑ ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΑΠΟΔΟΣΗΣ A. Έρευνες αναπαραγωγιμότητας • Διαφοροποίηση εντός της ανάλυσης εξέτασης (επαναληψιμότητα): Για την αξιολόγηση της επαναληψιμότητας εντός της ανάλυσης, εξετάστηκαν πέντε θετικά δείγματα και ένα αρνητικό επί 32 φορές σε μία σειρά εξετάσεων. Υπολογίστηκε η συγκέντρωση σε UA/ml για κάθε δείγμα. Ο μέσος όρος των συγκεντρώσεων, η τυπική απόκλιση (SD) και ο συντελεστής διακύμανσης (CV%) για κάθε δείγμα δίνονται στον ακόλουθο πίνακα: 7 Διαφοροποίηση εντός της ανάλυσης εξέτασης (επαναληψιμότητα) Ασθενές Ασθενές Αρνητικό N=32 θετικό δείγμα θετικό δείγμα δείγμα αρ. 1 αρ. 2 Μέσος όρος συγκεντρώσεων 3,14 7,91 10,17 (UA/ml) SD 0,123 0,547 0,424 CV% 3,9% 6,9% 4,2% Ασθενές θετικό δείγμα αρ. 3 Μέτριο θετικό δείγμα Ισχυρό θετικό δείγμα 10,06 38,42 67,62 0,464 4,6% 3,836 10,0% 4,070 6,0% • Διαφοροποίηση μεταξύ των αναλύσεων (αναπαραγωγιμότητα): Για την αξιολόγηση της επαναληψιμότητας μεταξύ των αναλύσεων, εξετάστηκαν έξι δείγματα (ένα αρνητικό και πέντε θετικά) επί 2 φορές σε δύο σειρές ανά ημέρα εξετάσεων, και σε συνολικό διάστημα 20 ημερών. Υπολογίστηκε η συγκέντρωση σε UA/ml για κάθε δείγμα. Ο μέσος όρος των συγκεντρώσεων, η τυπική απόκλιση (SD) και ο συντελεστής διακύμανσης (CV%) για κάθε δείγμα δίνονται στον ακόλουθο πίνακα: Διαφοροποίηση μεταξύ των αναλύσεων (αναπαραγωγιμότητα) Ασθενές Ασθενές Αρνητικό N=80 θετικό δείγμα θετικό δείγμα δείγμα αρ. 1 αρ. 2 Μέσος όρος συγκεντρώσεων 3,54 8,16 11,51 (UA/ml) SD 0,332 0,814 1,481 CV% 9,4% 10,0% 12,9% Ασθενές θετικό δείγμα αρ. 3 Μέτριο θετικό δείγμα Ισχυρό θετικό δείγμα 11,42 31,54 62,58 1,452 12,7% 6,55 20,8% 7,162 11,4% B. Διασταυρούμενες αντιδράσεις Παθολογία Αντισώματα antiAspergillus Αντισώματα anti-ds-DNA Θετικά αντιπυρηνικά αντισώματα (ANA) Μυέλωμα IgG/IgM Anti-Toxoplasma IgG Ανθρώπινα αντισώματα αντι-ποντικού Ρευματοειδής παράγοντας Αριθμός ενδιάμεσων δειγμάτων, επιβεβαιωμένων μέσω εξέτασης του εμπορίου Αριθμός δειγμάτων εξέτασης Αριθμός θετικών δειγμάτων Αριθμός ενδιάμεσων δειγμάτων Αριθμός θετικών δειγμάτων, επιβεβαιωμένων μέσω εξέτασης του εμπορίου 110 12 30 9/12 12/30 10 2 2 0/2 0/2 10 0 1 Μη διαθέσιμο 0/1 20 10 0 1 0 1 Μη διαθέσιμο 0/1 Μη διαθέσιμο 1/1 12 1 1 0/1 0/1 31 5 4 4/5 1/4 Τα δείγματα που βρέθηκαν θετικά ή ενδιάμεσα με την εξέταση Platelia™ Candida Ab Plus εξετάστηκαν στη συνέχεια με μια εξέταση του εμπορίου για τη σύγκριση των αποτελεσμάτων ανίχνευσης αντισωμάτων κατά της Candida (που περιελάμβανε μια εξέταση ανίχνευσης IgG κατά της Candida και μια εξέταση ανίχνευσης IgM κατά της Candida). Γ. Γραμμικότητα Το εύρος γραμμικότητας της εξέτασης Platelia™ Candida Ab Plus ορίστηκε μεταξύ 2 και 78 UA /ml βάσει αναλύσεων αραίωσης που πραγματοποιήθηκαν σε 5 θετικά δείγματα. Δ. Κλινικές μελέτες Η απόδοση του κιτ Platelia™ Candida Ab Plus αξιολογήθηκε σε 3 κέντρα έρευνας σε 836 συνολικά δείγματα που συλλέχθηκαν από 489 ασθενείς. ΕΥΑΙΣΘΗΣΙΑ Η ευαισθησία του κιτ Platelia™ Candida Ab Plus προσδιορίστηκε μετά από την ανάλυση σε πάνελ 436 δειγμάτων που συλλέχθηκαν από 89 ασθενείς που νοσηλεύονταν σε 2 τοποθεσίες στην Ολλανδία και τη Γαλλία. Η δειγματοληψία πραγματοποιήθηκε ως εξής: • Τοποθεσία 1 (Ολλανδία): 225 δείγματα που συλλέχθηκαν από 21 Ολλανδούς ασθενείς νοσηλευόμενους σε μονάδα αιματολογίας-ογκολογίας για θεραπεία κακοήθους νόσου του αίματος (19 περιπτώσεις) ή για μη αιματολογικές κακοήθειες (2 περιπτώσεις) μέσω εντατικής χημειοθεραπείας, η οποία ακολουθήθηκε, ανά περίπτωση, από μόσχευμα αρχέγονων αιμοποιητικών κυττάρων. Όλοι οι ασθενείς εμφάνισαν διηθητική μονιλίαση, επιβεβαιωμένη μετά από μικροβιολογικές εξετάσεις, βάσει τουλάχιστον μίας θετικής καλλιέργειας για Candida (καλλιέργεια αίματος ή καλλιέργεια φυσιολογικά άσηπτου ιστολογικού δείγματος). 17 8 • Τοποθεσία 2 (Γαλλία): 211 δείγματα που συλλέχθηκαν από 68 Γάλλους ασθενείς νοσηλευόμενους σε διάφορα τμήματα νοσοκομείων ή μονάδες αιματολογίας-ογκολογίας με διηθητική μονιλίαση, επιβεβαιωμένη μετά από μικροβιολογικές εξετάσεις, βάσει τουλάχιστον μίας θετικής καλλιέργειας αίματος για Candida spp. ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Τα πάνελ των εξετάσεων που χρησιμοποιήθηκαν σε αυτές τις έρευνες προήλθαν από ασθενείς από τους οποίους είχαν συλλεχθεί δείγματα αίματος την περίοδο μεταξύ 1999 και 2007. Η σχετική σταθερότητα του αντιγόνου μαννάνης και του αντισώματος κατά της μαννάνης σε αυτά τα δείγματα κατά το στάδιο της ψύξης, καθώς και μετά από κάθε κύκλο ψύξης και απόψυξης, κάνουν τα αποτελέσματα άμεσα εξαρτώμενα από τις συνθήκες συντήρησης του πάνελ εξετάσεων. Έτσι, οι τιμές ευαισθησίας της εξέτασης που καθορίστηκαν μέσα στο πλαίσιο των αναδρομικών κλινικών μελετών ενδέχεται να είναι χαμηλότερες από εκείνες που καταγράφηκαν κατά τις αναμενόμενες κλινικές μελέτες, που πραγματοποιήθηκαν σε δείγματα που συλλέχθηκαν πολύ πρόσφατα. Αποτελέσματα από την τοποθεσία 1 Οι 21 Ολλανδοί ασθενείς που συμμετείχαν σε αυτήν τη μελέτη νοσηλεύονταν στο νοσοκομείο για θεραπεία κακοήθους νόσου του αίματος (οξεία μυελοβλαστική λευχαιμία, οξεία λεμφοβλαστική λευχαιμία, χρόνια λεμφοειδής λευχαιμία, μυέλωμα, μυελοδυσπλαστικό σύνδρομο, απλαστική αναιμία ή μη Hodgkin λέμφωμα) ή για μη αιματολογικές κακοήθειες μέσω εντατικής χημειοθεραπείας, η οποία ακολουθήθηκε από μόσχευμα αιμοποιητικών κυττάρων 17. Αυτοί οι 21 ασθενείς εμφάνισαν διηθητική μονιλίαση, επιβεβαιωμένη μετά από μικροβιολογικές εξετάσεις, βάσει τουλάχιστον μίας θετικής καλλιέργειας για Candida spp. (καλλιέργεια αίματος ή καλλιέργεια φυσιολογικά άσηπτου ιστολογικού δείγματος). Η κατάσταση αυτών των ασθενών απέναντι στην παρουσία αντισωμάτων που κατευθύνονται έναντι του αντιγόνου μαννάνης ειδικά για Candida που ανιχνεύθηκε με την εξέταση Platelia™ Candida Ab Plus θεωρήθηκε θετική, εάν τουλάχιστον ένα από τα δείγματα του ασθενή ήταν θετικό. Απουσία θετικού δείγματος, η κατάσταση θεωρήθηκε ενδιάμεση, εάν ένα τουλάχιστον από τα δείγματα του ασθενή ήταν ενδιάμεσο, και αρνητική εάν όλα τα δείγματα του ασθενή ήταν αρνητικά. 17 Κατηγορίες ασθενών 21 ασθενείς (225 δείγματα) με μία τουλάχιστον θετική καλλιέργεια για Candida spp. Αποτελέσματα Platelia™ Candida Ab Plus Αριθμός ασθενών (αριθμός Ευαισθησία: Ευαισθησία: δειγμάτων) (ενδιάμεσα (ενδιάμεσα που που Θετικά Ενδιάμεσα Αρνητικά θεωρήθηκαν θεωρήθηκαν αρνητικά) θετικά) 33,3% 71,4% 7 (61) 8 (41) 6 (123) 95% CI 95% CI [14,6-57,0%] [47,8-88,7%] Παράλληλα με την εξέταση Platelia™ Candida Ab Plus, αυτά τα ίδια δείγματα εξετάστηκαν για την παρουσία αντιγόνου μαννάνης ειδικά για Candida με το κιτ Platelia™ Candida Ag Plus 9. Η κατάσταση του ασθενή απέναντι στην παρουσία αντιγόνου μαννάνης ή αντισωμάτων κατά της μαννάνης ειδικά για Candida θεωρήθηκε θετική, εάν μία τουλάχιστον από τις δύο εξετάσεις ήταν θετική. Απουσία θετικού δείγματος, η κατάσταση θεωρήθηκε ενδιάμεση, εάν μία τουλάχιστον από τις δύο εξετάσεις ήταν ενδιάμεση, και αρνητική εάν όλες οι εξετάσεις ήταν αρνητικές. Κατηγορίες ασθενών 21 ασθενείς (225 δείγματα) με μία τουλάχιστον θετική καλλιέργεια για Candida spp. Συνδυασμός αποτελεσμάτων της Platelia™ Candida Ab Plus και της PlateliaTM Candida Ag Plus Αριθμός ασθενών (αριθμός Ευαισθησία: Ευαισθησία: δειγμάτων) (ενδιάμεσα (ενδιάμεσα που που Θετικά Ενδιάμεσα Αρνητικά θεωρήθηκαν θεωρήθηκαν αρνητικά) θετικά) 71,4% 90,5% 15 4 (34) 2 (93) 95% CI 95% CI (98) [47,8-90,5%] [69,9-98,8%] Αποτελέσματα από την τοποθεσία 2 Οι 68 Γάλλοι ασθενείς που συμπεριλήφθησαν σε αυτήν τη μελέτη νοσηλεύονταν σε διάφορα τμήματα νοσοκομείων (χειρουργικό, μεταμοσχεύσεων, μονάδα εγκαυμάτων, τραυματολογικό, πνευμονολογικό κλπ...) ή ογκολογικό-αιματολογικό (κακοήθεις νόσοι του αίματος). Όλοι εμφάνισαν διηθητική μονιλίαση, η οποία επιβεβαιώθηκε μετά από μικροβιολογικές εξετάσεις βάσει τουλάχιστον μίας θετικής καλλιέργειας αίματος για Candida (albicans, parapsilosis, norvegensis, glabrata, krusei ή tropicalis) 6, 7, 14 εντός των ημερών που προηγήθηκαν ή ακολούθησαν την εξέταση του δείγματος αίματος. Τα αιματολογικά δείγματα συλλέχθηκαν 6 ημέρες κατά μέσο όρο μετά την πρώτη καλλιέργεια αίματος που βρέθηκε θετική για Candida (61 ημέρες πριν από το ελάχιστο, 67 ημέρες μετά το μέγιστο). Η κατάσταση αυτών των ασθενών απέναντι στην παρουσία αντισωμάτων που κατευθύνονται έναντι του αντιγόνου μαννάνης ειδικά για Candida που ανιχνεύθηκε με την εξέταση Platelia™ Candida Ab Plus θεωρήθηκε θετική, εάν τουλάχιστον ένα από τα δείγματα του ασθενή ήταν θετικό. Απουσία θετικού δείγματος, η κατάσταση θεωρήθηκε ενδιάμεση, εάν ένα τουλάχιστον από τα δείγματα του ασθενή ήταν ενδιάμεσο, και αρνητική εάν όλα τα δείγματα του ασθενή ήταν αρνητικά. 9 Κατηγορίες ασθενών 68 ασθενείς (211 δείγματα) με μία τουλάχιστον θετική καλλιέργεια αίματος για Candida spp. - οι 34 εκ των οποίων για C. albicans (113 δείγματα) - οι 15 εκ των οποίων για C. parapsilosis (37 δείγματα) - οι 12 εκ των οποίων για C. glabrata (32 δείγματα) Αποτελέσματα Platelia™ Candida Ab Plus Αριθμός ασθενών (αριθμός Ευαισθησία: Ευαισθησία: δειγμάτων) (ενδιάμεσα που (ενδιάμεσα που θεωρήθηκαν θεωρήθηκαν Θετικά Ενδιάμεσα Αρνητικά αρνητικά) θετικά) 44,1% 63,2% 30 13 (51) 25 (89) 95% CI 95% CI (71) [32,1-56,7%] [50,7-74,6%] 50,0% 67,6% 17 6 (31) 11 (37) 95% CI 95% CI (45) [32,4-67,6%] [49,5-82,6%] 26,7% 66,7% 4 (5) 6 (15) 5 (17) 95% CI 95% CI [7,8-55,1%] [38,4-88,2%] 58,3% 66,7% 7 (15) 1 (4) 4 (13) 95% CI 95% CI [27,7-84,8%] [34,9-90,1%] - οι 4 εκ των οποίων για C. tropicalis (19 δείγματα) 2 (6) 0 (1) 2 (12) 50,0% * 50,0% * - οι 2 εκ των οποίων για C. krusei (8 δείγματα) 0 (0) 0 (0) 2 (8) 0,0% * 0,0% * - ο ένας εκ των οποίων για C. norvegensis (2 0 (0) 0 (0) 1 (2) 0,0% * δείγματα) *: Το διάστημα εμπιστοσύνης στο 95% δεν μπόρεσε να υπολογιστεί λόγω του ανεπαρκούς ύψους του δείγματος. 0,0% * Παράλληλα με την εξέταση Platelia™ Candida Ab Plus, αυτά τα ίδια δείγματα εξετάστηκαν για την παρουσία αντιγόνου μαννάνης ειδικά για Candida με το κιτ Platelia™ Candida Ag Plus. Η κατάσταση του ασθενή απέναντι στην παρουσία αντιγόνου μαννάνης ή αντισωμάτων κατά της μαννάνης ειδικά για Candida θεωρήθηκε θετική, εάν μία τουλάχιστον από τις δύο εξετάσεις ήταν θετική. Απουσία θετικού δείγματος, η κατάσταση θεωρήθηκε ενδιάμεση, εάν μία τουλάχιστον από τις δύο εξετάσεις ήταν ενδιάμεση, και αρνητική εάν όλες οι εξετάσεις ήταν αρνητικές. 17 Κατηγορίες ασθενών 68 ασθενείς (211 δείγματα) με μία τουλάχιστον θετική καλλιέργεια αίματος για Candida spp. - οι 34 εκ των οποίων για C. albicans (113 δείγματα) - οι 15 εκ των οποίων για C. parapsilosis (37 δείγματα) - οι 12 εκ των οποίων για C. glabrata (32 δείγματα) Συνδυασμός αποτελεσμάτων της Platelia™ Candida Ab Plus και της PlateliaTM Candida Ag Plus Αριθμός ασθενών (αριθμός Ευαισθησία: Ευαισθησία: δειγμάτων) (ενδιάμεσα που (ενδιάμεσα που θεωρήθηκαν θεωρήθηκαν Θετικά Ενδιάμεσα Αρνητικά αρνητικά) θετικά) 70,6% 82,4% 48 (122) 8 (40) 12 (49) 95% CI 95% CI [58,3-81,0%] [71,2-90,5%] 82,4% 88,2% 28 2 (22) 4 (17) 95% CI 95% CI (74) [65,5-93,2%] [72,6-96,7%] 33,3% 73,3% 5 (7) 6 (15) 4 (15) 95% CI 95% CI [11,8-61,6%] [44,9-92,2%] 91,7% 91,7% 11 0 (3) 1 (5) 95% CI 95% CI (24) [61,5-99,8%] [61,5-99,8%] - οι 4 εκ των οποίων για C. tropicalis (19 δείγματα) 4 (17) 0 (0) 0 (2) 100,0% * 100,0% * - οι 2 εκ των οποίων για C. krusei (8 δείγματα) 0 (0) 0 (0) 2 (8) 0,0% * 0,0% * - ο ένας εκ των οποίων για C. norvegensis (2 0 (0) 0 (0) 1 (2) 0,0% * δείγματα) *: Το διάστημα εμπιστοσύνης στο 95% δεν μπόρεσε να υπολογιστεί λόγω του ανεπαρκούς ύψους του δείγματος. 0,0% * ΕΙΔΙΚΟΤΗΤΑ Η προσδιοριστικότητα καθορίστηκε βάσει ενός πάνελ 400 δειγμάτων από 2 τοποθεσίες στη Γαλλία με την εξής κατανομή: • Τοποθεσία 1: 200 δείγματα που συλλέχθηκαν από 200 Γαλλίδες ασθενείς υπό ορολογικό έλεγχο για ανίχνευση τοξοπλάσμωσης κατά τη διάρκεια της εγκυμοσύνης τους και οι οποίες δεν παρουσίασαν κανένα κλινικό σύμπτωμα λοίμωξης από Candida. • Τοποθεσία 2: 200 δείγματα που συλλέχθηκαν από 200 Γάλλους ασθενείς-αιμοδότες. 10 Κατηγορίες ασθενών 200 γυναίκες έγκυες (200 δείγματα) υπό ορολογικό έλεγχο για ανίχνευση τοξοπλάσμωσης 200 αιμοδότες (200 δείγματα) Αποτελέσματα Platelia™ Candida Ab Plus Αριθμός ασθενών (αριθμός Ειδικότητα Ειδικότητα δειγμάτων) (ενδιάμεσα που (ενδιάμεσα που θεωρήθηκαν θεωρήθηκαν Θετικά Ενδιάμεσα Αρνητικά θετικά) αρνητικά) 78,0% 95,5% 9 35 156 95% CI 95% CI [71,6-83,5%] [91,6-97,9%] 82,0% 96,0% 8 28 164 95% CI 95% CI [76,0-87,1%] [92,3-98,3%] 16- ΠΟΙΟΤΙΚΟΣ ΕΛΕΓΧΟΣ ΤΟΥ ΠΑΡΑΣΚΕΥΑΣΤΗ Όλα τα προϊόντα που έχει κατασκευάσει και εμπορεύεται η εταιρεία Bio-Rad έχουν πιστοποιηθεί μέσω ενός συστήματος διασφάλισης ποιότητας, από την προμήθεια των πρώτων υλών μέχρι τη διακίνηση των τελικών προϊόντων. Κάθε παρτίδα τελικών προϊόντων υποβάλλεται σε αξιολόγηση ποιοτικού ελέγχου και διατίθεται στην αγορά μόνο εφόσον διασφαλιστεί ότι συμμορφώνεται με προκαθορισμένα κριτήρια αποδοχής. Τα συνοδευτικά έγγραφα που σχετίζονται με την παραγωγή και τον έλεγχο κάθε μεμονωμένης παρτίδας φυλάσσονται στις εγκαταστάσεις του κατασκευαστή. 17- ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΑ 12- 34- 5- 6- 78- 910- 111213- Alam, F.F., Mustafa, A.S., Khan, Z.U. 2007. Comparative evaluation of (1,3)-beta-D-glucan, mannan and anti-mannan antibodies, and Candidaspecies-specific snPCR in patients with candidemia. BMC Infectious Diseases 7(103):p. 1-9. Ascioglu, S., Rex, J.H., de Pauw, B., Bennett, J.E., Bille, J., Crokaert, F., Denning, D.W., Donnelly, J.P., Edwards, J.E., Erjavec, Z., Fiere, D., Lortholary, O., Maertens, J., Meis, J.F., Patterson, T.F., Ritter, J., Selleslag,D., Shah, P.M., Stevens, D.A., Walsh,T.J. 2002. Defining opportunistic invasive fungal infections in immunocompromised patients with cancer and hematopoietic stem cell transplants: An international consensus. Clinical Infectious Diseases 34: p. 7–14. Ellepola, A.N.B., Morrison, C.J. 2005. Laboratory Diagnosis of Invasive Candidiasis. Journal of Microbiology 43(No. S): p. 65-84. Ellis, M., Al-Ramadi, B., Bernsen, R., Kristensen, J., Alizadeh, H., Hedstrom, U. 2009. Prospective evaluation of mannan and anti-mannan antibodies for diagnosis of invasive Candidainfections in patients with neutropenic fever. Journal of medical microbiology 58(5): p. 606-615. Guery, B.P., Arendrup, M.C., Auzinger, G., Azoulay, E., Borges Sá, M.,Johnson, E.M., Müller, E., Putensen, C., Rotstein, C., Sganga, G., Venditti, M., Zaragoza Crespo, R., Kullberg, B.J. 2009. Management of invasive candidiasis and candidemia in adult non-neutropenic intensive care unit patients: Part I. Epidemiology and diagnosis. Intensive Care Med. 35: p. 55–62. Nucci, M., , Colombo, A.L. 2007. Candidemia due to Candida tropicalis: clinical, epidemiologic, and microbiologic characteristics of 188 episodes occurring in tertiary care hospitals. Diagnostic Microbiology and Infectious Disease 58: p. 77–82. Oliveri, S., Trovato, L., Betta, P., Romeo, M.G., Nicoletti, G. 2008. Experience with the Platelia™ Candida ELISA for the diagnosis of invasive candidiosis in neonatal patients. Clinical Microbiology and Infection 14 (4): p. 377-397. Pappas, P.G., Kauffman, C.A., Andes, D., Benjamin D.K.Jr., Calandra, T.F.,Edwards, J.E.Jr, Filler, S.G., Fisher, J.F., Kullberg, B.J., Ostrosky-Zeichner, L., Reboli, A.C., Rex, J.H., Walsh, T.J., Sobel, J.D. 2009. Clinical Practice Guidelines for the Management of Candidiasis: 2009 Update by the Infectious Diseases Society of America. Clinical Infectious Diseases 48: p. 503–535. Persat, F., Topenot, R., Piens, M.A., Thiebaut, A., Dannaoui, E., Picot, S. 2002. Evaluation of different commercial ELISA methods for the serodiagnosis of systemic candidiosis. Mycoses 45: p. 455–460. Prella, M., Bille, J., Pugnale, M., Duvoisin, B., Cavassini, M., Calandra, T., Marchetti, O. 2005. Early diagnosis of invasive candidiasis with mannan antigenemia and antimannan antibodies. Diagnostic Microbiology and Infectious Disease 51: p. 95–101. Rentz, A.M., Halpern, M.T., Bowden, R. 1998. The Impact of Candidemia on Length of Hospital Stay, Outcome, and Overall Cost of Illness. Clinical Infectious Diseases 27: p. 781–788. Ruan, S.-Y., Hsueh, P.-R. 2009. Invasive Candidiasis: An Overview from Taiwan. J. Formos. Med. Assoc. 108(6): p. 443– 451. Sendid, B., Poirot, J.L., Tabouret, M., Bonnin, A., Caillot, D., Camus, D., Poulain, D. 2002. Combined detection of mannanaemia and antimannan antibodies as a strategy for the diagnosis of systemic infection caused by pathogenic Candida species. J. Med. Microbiol. 51: p. 433–442. 11 14- Sendid, B., Caillot, D., Baccouch-Humbert, B., Klingspor, L., Grandjean, M., Bonnin, A., Poulain, D. 2003. Contribution of the Platelia™ Candida-specific antibody and antigen tests to early diagnosis of systemic Candida tropicalis infection in neutropenic adults. Journal of Clinical Microbiology 41(10): p. 4551–4558. 15- Tortorano, A.M., Peman, J., Bernhardt, H., Klingspor, L., Kibbler, C.C., Faure, O., Biraghi, E., Canton, E., Zimmermann, K., Seaton, S., Grillot, R. 2004. Epidemiology of Candidaemia in Europe: Results of 28-Month European Confederation of Medical Mycology (ECMM) Hospital-Based Surveillance Study.Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 23: p. 317–322. 16- Vardakas, K. Z., Michalopoulos, A., Kiriakidou, K. G., Siampli, E. P., Samonis, G., Falagas, M. E. 2009. Candidaemia: incidence, risk factors, characteristics and outcomes in immunocompetent critically ill patients. Clin. Microbiol. Infect. 15: p. 289–292. 17- Verduyn Lunel, F.M., Donnelly, J.P., van der Lee, H. A. L., Blijlevens, N.M. A., Verweij, P. E. 2009. Circulating Candida-specific anti-mannan antibodies precede invasive candidiasis in patients undergoing myelo-ablative chemotherapy. Clin. Microbiol. Infect. 15(4): p. 380-386. Bio-Rad 3, boulevard Raymond Poincaré 92430 Marnes-la-Coquette France Tel. : +33 (0) 1 47 95 60 00 Fax : +33 (0) 1 47 41 91 33 881050 08/2009 12