Prof. Giovanni Raugei Ricevimento su appuntamento [email protected] http://www1.unifi.it/scibio/pers/raugei.html BIOLOGIA MOLECOLARE •Struttura dei nucleotidi e degli acidi nucleici. •Meccanismo della duplicazione del DNA e del controllo della fedeltà della copia. Mutazioni •Meccanismi di controllo della trascrizione e maturazione dell'mRNA •Il meccanismo della traduzione: codice genetico. Targeting proteico. •Interferenza a RNA •Struttura della cromatina. •Struttura dei genomi. •Oncogeni. •Struttura delle immunoglobuline e generazione della diversità anticorpale. INGEGNERIA GENETICA (TECNOLOGIA DEL DNA RICOMBINANTE) •cDNA, esperimento di clonaggio e vettori di espressone. •Esempi di espressione di proteine ricombianti (biofarmaci, vaccini ricombinanti). •Biofarmaci di seconda generazione e la mutagenesi in vitro. •Anticorpi chimerici e umanizzati •Animali e piante transgenici. Clonazione. •La tecnica della PCR in diagnostica. WATSON ALBERTS NMP ≅ 340Da (RNA) dNMP ≅ 330Da (DNA) Bp= base pair ≅ 660Da 1000bp ≅ 660kDa Legame fosfoesterico Legame N-glicosidico Accoppiamenti tra basi azotate Base adenina-timina (due legami idrogeno) Timina Adenina deossiribosio deossiribosio Base guanina-citosina (tre legami idrogeno) Citosina deossiribosio Guanina deossiribosio Il doppio filamento 3’ 5’ 5’ 3’ Pseudo-nodi: appaiamento fra sequenze che non sono contigue RNA M1, componente dell’enzima RNasiP Appaiamenti non canonici fra basi dell’RNA NMP ≅ 340Da (RNA) dNMP ≅ 330Da(DNA) Bp= base pair ≅ 660Da 1000bp ≅ 660kDa Confronto fra le forme A, B e Z Forma A Forma B Forma Z Senso dell’elica Destrorsa Destrorsa Sinistrorsa Diametro 26 Å 20 Å 18 Å Coppie basi/giro 11 10.5 12 Distanza fra le basi 2.6 Å 3.4 Å 3.7 Å Piegamento basi rispetto alla normale all’asse 20° 6° 7° Coefficiente di estinzione molare ε: Assorbanza (densità ottica) di una soluzione a concentrazione 1M attraverso una cuvetta a cammino ottico unitario, ad una certa lunghezza d’onda. veloce Denaturazione reversibile e riassociazione del DNA lento EFFETTO IPERCROMICO Deossi-oligonucleotidi sintetici
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