Innovation in Diagnostics EBV Epstein Barr Virus ID INFECTIOUS DISEASES IT EBV: DIAGNOSI DIFFERENZIALE In corso di sospetta infezione da EBV la diagnosi sierologica è lo strumento principe per la valutazione dello stato immune del soggetto. L’indagine sierologica di routine misura la risposta anticorpale alle proteine virali espresse durante il ciclo litico e/o durante la latenza; consente, quasi sempre, di distinguere tra infezione acuta e pregressa, infine, permette di monitorare la storia dell’infezione nel tempo e di evidenziare eventuali riattivazioni. Tale indagine consiste nel dosaggio delle immunoglobuline IgM verso l’antigene VCA, e nel dosaggio delle immunoglobuline IgG verso EA(D), VCA ed EBNA-1. Early Antigen (EA) Le EA(D) sono proteine espresse nelle fasi precoci del ciclo litico. Dopo qualche settimana dall’infezione compaiono nell’80% dei pazienti IgG verso l’EA(D). Le IgG anti–EA(D) scompaiono in convalescenza anche se circa il 20-30% dei pazienti mantengono un basso livello di IgG anti-EA(D) nel tempo. Questi anticorpi possono essere presenti nelle riattivazioni. Viral Capsid Antigen (VCA) Le VCA sono proteine strutturali che costituiscono il capside virale. Durante le fasi iniziali dell’infezione, i primi anticorpi che compaiono nel siero della maggior parte dei pazienti sono di tipo IgM anti-VCA che raggiungono un picco e poi scompaiono dopo qualche settimana (eccezionalmente possono permanere per settimane o addirittura per anni). A seguire compaiono anticorpi IgG verso il VCA, che permangono indefinitamente e stabilmente nel tempo. Epstein-Barr Nuclear Antigen (EBNA) Il complesso EBNA è costituito da almeno 6 proteine (EBNA 1-6). Dopo qualche settimana/mese dall’esordio, compaiono anticorpi IgG anti EBNA-1, considerati come marcatore di convalescenza. Gli anticorpi anti-EBNA-1 sono quindi generalmente assenti nella fase acuta dell’infezione primaria ed a seguire sono relazionati alla memoria immunologica dell’individuo. EBV: SIERODIAGNOSI DELL’INFEZIONE Sintomi VCA IgG VCA IgM EBNA-1 IgG EA IgG VCA IgG INFEZIONE VCA IgM EBNA-1 IgG -1 0 1 2 3 mesi Anni RIATTIVAZIONE EA IgG EA IgG Mesi INNOVATION IN DIAGNOSTICS Diagnosi - - - - Non immune -/+ + - +/- Infezione Primaria Acuta + + /- -/+ +/- Infezione Primaria Recente + - +/- -/+ Infezione Pregressa + +/- +/- + Riattivazione/Cronicizzazione TGS TA: METODO I test per il dosaggio delle immunoglobuline IgG (EA(D), VCA ed EBNA-1) ed IgM (VCA) della linea TGS TA impiegano un metodo sandwich a 2 Step. Il test TGS TA EBV VCA CLIA 2 STEP 1 IgM prevede una fase di pre-trattamento del campione per eliminare le interferenze del Fattore Reumatoide e delle Immunoglobuline di classe IgG. 2 3 I Step CLIA 2 STEP CON PRETRATTAMENTO 4 II Step P 1 2 3 4 IgM α - hIgG IgG FR FR I Step Pre-Trattamento P 1 2 3 4 II Step Pre-trattamento del campione per eliminare le interferenze del Fattore Reumatoide e delle Immunoglobuline di classe IgG. Il campione in esame viene messo in contatto con la fase solida costituita da particelle magnetiche sensibilizzate. Formazione di un complesso tra le particelle magnetiche e gli anticorpi specifici. Dispensazione del coniugato (Ab anti-h-IgG oppure Ab anti-h-IgM) marcato con un derivato dell’estere di acridinio. Il coniugato reagisce con il complesso fase solida – ab specifico. Viene attivata una reazione di chemiluminescenza e misurato il segnale luminoso generato. TGS TA: CARATTERISTICHE DELLA LINEA ELEVATA SEMPLICITÀ D’USO AFFIDABILITÀ FLESSIBILITÀ EFFICIENZA In completa automazione e tutti i reagenti pronti all’uso. Profili diagnostici per paziente e differenti modalità operative. Grazie all’impiego di micro‑particelle sensibilizzate aventi una superficie di coating ampia e uniforme. Elevata resa analitica, reagenti on board, rapidità primo risultato. ACCURATEZZA L’impiego delle proteine ricombinanti garantisce un’accurata rilevazione degli anticorpi anti-EBV permettendo di evitare le interferenze con altri herpes virus. INNOVATION IN DIAGNOSTICS TGS TA EBV VCA IgG TGS TA EBV VCA IgM TGS TA EBV EBNA-1 IgG TGS TA EBV EA IgG Produttività Primo risultato Sensibilità Relativa Specificità Relativa Shelf life YB500024 p18 Rec. 100 10’+ 10’ 3 settimane 0.0 – 750 UA/mL. Neg < 10 UA/mL Pos ≥ 10 UA/mL 70 test/ora 24 minuti 97,3% 99,1% 12 mesi YB500026 p18 Rec. 100 10‘ + 20’ + 10’ 3 settimane 0.0 – 330 UA/mL. Neg < 15 UA/mL Pos ≥ 15 UA/mL 38 test/ora 35 minuti 93,5% 97,9% 12 mesi YB500023 EBNA-1 Rec. 100 10’+ 10’ 3 settimane 0.0 – 835 UA/mL. Neg < 10 UA/mL Pos ≥ 10 UA/mL 70 test/ora 24 minuti 96,3% 95,7% 12 mesi YB500025 p54 Rec. 50 10’+ 10’ 3 settimane 0.0 – 640 UA/mL. Neg < 10 UA/mL Pos ≥ 10 UA/mL 70 test/ora 24 minuti 92,0% 100,0% 12 mesi Metodo CLIA - 2 Step CLIA - 2 Step con pretrattamento CLIA – 2 Step CLIA – 2 Step Codice Antigene Numero Test Incubazioni Stabilità calibrazione Range di misura Risultati attesi EBV Control Set TGS TA EBV Control Set – codice YB500030 TGS TA ANALYSER 120 ¾¾ ¾¾ ¾¾ ¾¾ ¾¾ Cuvette monouso per evitare cross-reazioni. Ricalibrazione a 2 punti della curva memorizzata. Primo risultato: 24 min. Massima resa analitica: 70 test/ora. Fino a 15 parametri a bordo strumento. Technogenetics Srl via Vanvitelli 4 – 20129 Milano, Italia Email: [email protected] – www.technogenetics.it Vers.: 06/2014 ¾¾ Profili diagnostici per paziente. ¾¾ Modalità di lavoro con accesso random, batch e STAT. ¾¾ Caricamento continuo con identificazione positiva dei campioni e dei reagenti tramite codice a barre. ¾¾ Conservazione dei reattivi refrigerati a bordo strumento.
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