270-2500
VARIANT™ II
HbA2/HbA1c Dual
Program
L70097101IT00
Istruzioni per l’uso
VARIANT™ II HbA2/HbA1c Dual Program
Reorder Pack
500
per HbA2/F/A1c o
800
Germany, Bio-Rad Laboratories GmbH,
Postfach 45 01 33 80901 München, Heidemannstraße 164 80939 München
per HbA1c
CD multilingue
Questo kit comprende un CD-ROM multilingue nelle seguenti lingue: inglese, tedesco, francese,
spagnolo, italiano, portoghese, svedese, danese e greco.
Simboli della Direttiva sui dispositivi medico-diagnostici in vitro (IVDD, 98/79/CE)
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Manufactured For
Hergestellt für
Fabriqué pour
Fabricado para
Prodotto per
Fabricado para
Tillverkas för
Produceret for
Κατασκευάστηκε για
Expiry date YYYY-MM-DD
Verwendbar bis JJJJ-MM-TT
Date d’expiration AAAA-MM-JJ
Fecha de caducidad AAAA-MM-DD
Data di scadenza AAAA-MM-GG
Data de validade DD-MM-AAAA
Bäst-före-datum ÅÅÅÅ-MM-DD
Udløbsdato ÅÅÅÅ-MM-DD
Ημερομηνία λήξης ΕΕΕΕ-ΜΜ-ΗΗ
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For In Vitro Diagnostic Use
In-vitro-Diagnostikum
Utilisation comme test de diagnostic
in vitro
Para uso en diagnóstico in vitro
Per uso diagnostico in vitro
Para uso em diagnóstico in vitro
För in vitro-diagnostiskt bruk
Til in vitro-diagnostisk brug
Για in vitro διαγνωστική χρήση
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Catalog Number
Katalognummer
Référence
Número de catálogo
Numero di catalogo
Número de catálogo
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Katalognummer
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Batch code
Chargen-Bezeichnung
Code de lot
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Numero di lotto
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Gruppkod
Lotnummer
Κωδικός παρτίδας
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Number of Tests
Anzahl der Tests
Nombre de tests
Número de pruebas
Numero di analisi
Número de testes
Antal tester
Antal test
Αριθμός δοκιμασιών
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European Conformity
EG-Konformität
Conformité européenne
Conforme a la normativa europea
Conformità Europea
Conformidade com as normas europeias
Uppfyller EU-direktiv
CE-mærkning
Συμμόρφωση με τα ευρωπαϊκά
πρότυπα
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Manufacturer
Hersteller
Fabricant
Fabricante
Produttore
Fabricante
Tillverkare
Producent
Κατασκευαστής
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See Instructions for use
Siehe Gebrauchsanweisung
Voir les instructions d’utilisation
Consulte las instrucciones de uso
Vedere le istruzioni per l’uso
Ver Instruções de utilização
Se användarinstruktionerna
Se brugsvejledningen
Βλ. Οδηγίες χρήσης
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Storage temperature limitation
Lagertemperatur
Limite de température de conservation
Temperatura límite para el
almacenamiento
Temperatura di conservazione
Temperatura limite de armazenamento
Begränsningar gällande
förvaringstemperatur
Opbevaringstemperatur
Περιορισμοί θερμοκρασίας
αποθήκευσης
EXP
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ii
For use with
Zur Verwendung mit
À utiliser avec
Uso con
Da usarsi con
Para utilizar com
För användning med
Til anvendelse sammen med
Για χρήση με
Istruzioni per l’uso
L70097101IT00
VARIANT™ II HbA2/HbA1c Dual Program
Simboli della Direttiva sui dispositivi medico-diagnostici in vitro (IVDD, 98/79/CE)
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Buffer 1
Puffer 1
Tampon 1
Tampón 1
Tampone 1
Tampão 1
Buffert 1
Buffer 1
Ρυθμιστικό διάλυμα 1
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Calibrator
Kalibrator
Étalon
Calibrador
Calibratore
Calibrador
Kalibrator
Kalibrator
Βαθμονομητής
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Analytical Cartridge
Analytische Kartusche
Cartouche analytique
Cartucho de análisis
Cartuccia analitica
Coluna analítica
Analyskolonn
Analysekolonne
Αναλυτική μικροστήλη
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Analytical Cartridge Set
Set mit analytischer Kartusche
Jeu de cartouches analytiques
Juego de cartuchos de análisis
Set di cartucce analitiche
Conjunto de colunas analíticas
Analyskolonnset
Analysekolonnesæt
Σετ αναλυτικής μικροστήλης
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Buffer 2
Puffer 2
Tampon 2
Tampón 2
Tampone 2
Tampão 2
Buffert 2
Buffer 2
Ρυθμιστικό διάλυμα 2
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Buffer
Puffer
Tampon
Tampón
Tampone
Tampão
Buffert
Buffer
Ρυθμιστικό διάλυμα
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Calibrator Level 1
Kalibrator Level 1
Étalon de niveau 1
Calibrador Nivel 1
Calibratore livello 1
Calibrador Nível 1
Kalibrator, nivå 1
Kalibrator niveau 1
Βαθμονομητής επιπέδου 1
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Calibrator Level 2
Kalibrator Level 2
Étalon de niveau 2
Calibrador Nivel 2
Calibratore livello 2
Calibrador Nível 2
Kalibrator, nivå 2
Kalibrator niveau 2
Βαθμονομητής επιπέδου 2
Calibrator Diluent
Kalibratorverdünnungslösung
Diluant des étalons
Diluyente del calibrador
Diluente del calibratore
Diluente Calibrador
Spädningsvätska för kalibrator
Kalibratorfortynder
Αραιωτικό μέσο βαθμονομητή
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Calibrator Set
Kalibratorset
Gamme étalon
Juego de calibradores
Set del calibratore
Conjunto calibrador
Kalibratorset
Kalibratorsæt
Σετ βαθμονομητών
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CD-ROM
CD-ROM
CD-ROM
CD-ROM
CD-ROM
CD-ROM
CD-ROM
CD-ROM
CD-ROM
Deionized Water
Deionisiertes Wasser
Eau déionisée
Agua desionizada
Acqua deionizzata
Água desionizada
Avjoniserat vatten
Deioniseret vand
Απιονισμένο νερό
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Reconstitute with
Rekonstitution mit
Reconstituer avec
Reconstituir con
Ricostituire con
Reconstituir com
Rekonstituera med
Rekonstitueres med
Ανασύσταση με
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Sample Vials
Probengefäße
Microtubes échantillons
Viales
Microprovette per campione
Frascos de amostras
Provrör
Prøvekopper
Σωληνάρια δείγματος
b1
c
b2
c1
b
c2
xc
L70097101IT00
Istruzioni per l’uso
iii
Simboli della Direttiva sui dispositivi medico-diagnostici in vitro (IVDD, 98/79/CE)
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iv
Sodium Azide
Natriumazid
Azide de sodium
Azida sódica
Sodio azide
Azida de sódio
Natriumazid
Natriumazid
Αζίδιο του νατρίου
Istruzioni per l’uso
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Mx
Wash/Diluent
Waschlösung/Verdünnungsreagenz
Solution de lavage/dilution
Solución de lavado/diluyente
Soluzione di lavaggio/diluente
Solução de Lavagem /Diluente
Tvätt-/spädningslösning
Vaske-/fortyndingsreagens
Διάλυμα έκπλυσης/αραίωσης
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Whole Blood Primer
Vollblut-Primer
Sang total de conditionnement
Cebador de sangre total
Primer di sangue intero
Iniciador de sangue total
Helblodsprimer
Fuldblodsprimer
Εκκινητής ολικού αίματος
L70097101IT00
VARIANT™ II HbA2/HbA1c Dual Program
Indice
Uso previsto ........................................................................................................................................3
Sommario e spiegazione del test .......................................................................................................3
Principio della procedura ....................................................................................................................4
Componenti del test ............................................................................................................................5
Ulteriori articoli, forniti da Bio-Rad ......................................................................................................6
Articoli forniti separatamente da Bio-Rad ...........................................................................................6
Ulteriori articoli richiesti, non forniti da Bio-Rad .................................................................................6
Precauzioni/Avvertenze.......................................................................................................................6
Procedura ............................................................................................................................................7
Raccolta dei campioni ..................................................................................................................8
Controllo di qualità........................................................................................................................8
Ricostituzione del primer di sangue intero, wW ...................................................................8
Ricostituzione dei calibratori, c ...............................................................................................8
Tamponi (b, Mx) e cartuccia analitica (aA) .............................................................8
Controlli HbA2/HbF e HbA1c .........................................................................................................8
Preparazione dei campioni...........................................................................................................9
Aggiornamento del metodo ..........................................................................................................9
Scelta del metodo.........................................................................................................................9
Installazione di una nuova cartuccia ..........................................................................................10
Impostazione dell’analisi ............................................................................................................10
Ottimizzazione dell’analisi .................................................................................................................12
Interpretazione dei risultati................................................................................................................13
Determinazione delle emoglobine HbA2, HbF e anomale .........................................................13
Intervallo dei valori previsti per HbA2 ...............................................................................13
Intervallo dei valori previsti per HbF..................................................................................13
Finestre di identificazione degli analiti - Metodo β-Thal ...................................................14
Determinazione dell’HbA1c .........................................................................................................14
Intervallo refertabile per l’HbA1c ........................................................................................14
Intervalli dell’emoglobina A1c .............................................................................................15
Intervallo di riferimento non diabetico ...............................................................................15
Finestre di identificazione degli analiti - Metodo HbA1c ...................................................15
Formato del referto del campione ..............................................................................................16
L70097101IT00
Istruzioni per l’uso
1
Caratteristiche delle prestazioni ........................................................................................................25
Precisione ...................................................................................................................................25
Precisione del metodo β-Thal ...........................................................................................25
Precisione del metodo HbA1c ...........................................................................................25
Linearità e recupero ...................................................................................................................26
Linearità e recupero per HbA2 .........................................................................................26
Linearità e recupero per HbF ............................................................................................27
Linearità e recupero per HbA1c ........................................................................................28
Interferenza dell’A1c labile ...........................................................................................................30
Campioni lipemici .......................................................................................................................31
Campioni itterici ..........................................................................................................................32
Emoglobina carbamilata .............................................................................................................32
Certificazione/tracciabilità per il materiale ed il metodo di riferimento ......................................33
Limiti della procedura ........................................................................................................................34
Sopravvivenza eritrocitaria anormale .........................................................................................34
Diluizione dei campioni...............................................................................................................34
HbA2 ...........................................................................................................................................36
HbF .............................................................................................................................................37
Varianti emoglobiniche ...............................................................................................................37
Informazioni sui marchi di fabbrica ...................................................................................................38
Bibliografia ........................................................................................................................................39
2
Istruzioni per l’uso
L70097101IT00
VARIANT™ II HbA2/HbA1c Dual Program
USO PREVISTO
Il Bio-Rad VARIANT™ II HbA2 /HbA1c Dual Program è previsto per la determinazione delle
emoglobine A2, F ed A1c in sangue umano intero, utilizzando il metodo della cromatografia liquida
ad alta prestazione (HPLC) a scambio ionico.
Il Bio-Rad VARIANT II HbA2/HbA1c Dual Program è previsto per l’uso con il Bio-Rad VARIANT™ II
Hemoglobin Testing System.
Solo per uso diagnostico in vitro.
SOMMARIO E SPIEGAZIONE DEL TEST
Il VARIANT II HbA2/HbA1c Dual Program esegue 500 test per la determinazione delle emoglobine A2
ed F, e per l’identificazione di emoglobine anomale, oppure 800 test per la determinazione
dell’emoglobina A1c.
Il VARIANT II HbA2/HbA1c Dual Program comprende due diversi metodi.
Metodo HbA1c: un metodo da 3,5 minuti che permette la determinazione dell’area percentuale
della HbA1c soltanto.
Metodo β-Thal : un metodo esteso da 6,5 minuti che permette la determinazione dell’area
percentuale delle emoglobine A2, F ed A1c.
L’utente può passare da un metodo all’altro senza cambiare tamponi o cartucce e senza
ricondizionare il sistema.
Determinazione dell’emoglobina glicata (HbA1c) - ll diabete mellito è una condizione
caratterizzata da iperglicemia derivante dall’incapacità dell’organismo di utilizzare il glucosio
ematico come fonte di energia. Nel diabete di tipo I, il pancreas non produce più insulina e
pertanto il glucosio ematico non riesce ad entrare nelle cellule per essere utilizzato come fonte
energetica. Nel diabete di tipo II, il pancreas non produce abbastanza insulina oppure il corpo non
è in grado di usare correttamente l’insulina.1 Gli effetti diretti e indiretti dell’iperglicemia sul sistema
vascolare sono la fonte principale di morbilità e mortalità nel diabete sia di tipo I che di tipo II.
Questi effetti includono complicazioni macrovascolari (coronaropatia, arteriopatia periferica e ictus)
e complicazioni microvascolari (nefropatia, neuropatia e retinopatia da diabete).2 Il diabete mellito
colpisce all’incirca il 7% della popolazione mondiale.3
La terapia del diabete richiede il mantenimento a lungo termine di livelli di glicemia che siano il
più possibile vicini alla normalità, al fine di ridurre al minimo il rischio di conseguenze vascolari sul
lungo periodo.4,5 Una singola misurazione a digiuno della glicemia è un indicatore delle condizioni
appena trascorse (ore) del paziente, ma potrebbe non rispecchiare la condizione reale del controllo
glicemico.6,7 La misurazione dell’emoglobina A1c (HbA1c) ogni due o tre mesi è stata accettata come
una misurazione del controllo glicemico nella cura e nel trattamento dei pazienti affetti da diabete
mellito.
L’HbA1c, la glicoemoglobina di interesse, viene formata in due fasi dalla glicazione non enzimatica
dell’HbA. La prima fase è rappresentata dalla formazione di una aldimina instabile (emoglobina A1c
labile o pre-A1c), una reazione reversibile fra il gruppo carbonilico del glucosio e la valina del
terminale N sulla catena β dell’emoglobina. La formazione dell’emoglobina A1c labile è direttamente
L70097101IT00
Istruzioni per l’uso
3
proporzionale alla glicemia. Durante la circolazione dei globuli rossi, parte dell’emoglobina A1c
labile è convertita chimicamente (riarrangiamento di Amadori) in modo da dare origine ad una
chetoammina stabile, la HbA1c.8
La determinazione della HbA1c con il VARIANT II HbA2/HbA1c Dual Program è stata ottimizzata
per ridurre al minimo le interferenze causate da varianti emoglobiniche, emoglobina A1c labile ed
emoglobina carbamilata.
Determinazione di HbA2 ed HbF, e identificazione di emoglobine anomale - Il sangue
degli individui adulti contiene primariamente emoglobina A (HbA), una piccola percentuale di
emoglobina A2 (HbA2) e tracce di emoglobina fetale (HbF).
Le emoglobine anomale fanno parte di un gruppo di disturbi ereditari che vengono chiamati
collettivamente le emoglobinopatie.
Le emoglobinopatie sono il risultato di una sintesi difettosa delle catene globiniche che formano la
molecola emoglobinica. Si può verificare un difetto in due modi: sebbene le emoglobine anomale
derivino dalla produzione di una catena globinica strutturalmente differente, le emoglobinopatie
possono anche essere create dalla diminuita produzione di una catena globinica strutturalmente
normale. In questa situazione, le catene α-globiniche e β-globiniche vengono sintetizzate in quantità
diverse. La produzione non equilibrata di catene che ne risulta causa una produzione inadeguata
di emoglobina normale e determina un eccesso della catena globinica prodotta normalmente, che
forma un tetramero instabile. Le condizioni che insorgono da tale produzione non equilibrata della
catena vengono chiamate sindromi talassemiche.
I portatori di β-talassemia presentano di solito livelli di HbA2 pari a 4–9% e livelli di HbF pari a
1–5%.9
La determinazione di livelli di emoglobine A2 ed F contemporaneamente elevati è diventata il
mezzo più pratico per diagnosticare i portatori del gene della β-talassemia.10 I metodi per la
determinazione quantitativa dell’emoglobina A2 comprendono l’elettroforesi e la cromatografia
di colonna a scambio anionico.11,12 I metodi per la determinazione quantitativa dell’emoglobina
F comprendono l’elettroforesi, la denaturazione degli alcali e l’immunodiffusione radiale (RID).
La cromatografia liquida ad alta prestazione (HPLC), che può essere un metodo relativamente
veloce e riproducibile, è stata utilizzata per la determinazione di varie emoglobine, compresa le
emoglobine A2 ed F.13–16
PRINCIPIO DELLA PROCEDURA
Il VARIANT II HbA2/HbA1c Dual Program utilizza i principi della cromatografia liquida ad alta
prestazione (HPLC) a scambio ionico per la separazione automatica delle emoglobine normali e
anomale e per la determinazione accurata delle emoglobine A2, F ed A1c in campioni di sangue
intero, senza interferenza da parte di emoglobina A1c labile, lipemia o variazioni di temperatura.
I campioni vengono miscelati e diluiti automaticamente nella Stazione di campionamento
VARIANT II Sampling Station (VSS) e quindi iniettati nella cartuccia analitica. Le pompe doppie
della Stazione cromatografica VARIANT II Chromatographic Station (VCS) erogano nella cartuccia
un gradiente di soluzione tampone programmato di forza ionica crescente: le emoglobine
vengono separate sulla base delle rispettive interazioni ioniche con il materiale della cartuccia.
4
Istruzioni per l’uso
L70097101IT00
VARIANT™ II HbA2/HbA1c Dual Program
Le emoglobine separate passano quindi attraverso la cella di flusso del fotometro del filtro, dove
vengono misurati i cambiamenti nei valori di assorbanza (415 nm); le variazioni di fondo vengono
corrette da un ulteriore filtro a 690 nm.
Il software VARIANT II Clinical Data Management (CDM™) consente di eseguire l’elaborazione dei
dati grezzi raccolti da ogni analisi. Per la taratura dei valori di HbA2, HbF o HbA1c calcolati viene
usata una calibrazione a due livelli. Per ogni campione vengono generati dal CDM un referto del
campione ed un cromatogramma. I picchi A2, F e A1c appaiono ombreggiati. L’area A1c viene
calcolata usando un algoritmo che usa una funzione gaussiana esponenzialmente modificata
(EMG).
COMPONENTI DEL TEST
VARIANT II Dual Kit Reorder Pack (# 270-2500) (500 test HbA2/HbF oppure 800 test HbA1c)
#
Descrizione
270-2501
b1, Tampone 1, 3 × 2000 ml, tampone bis-tris/fosfato di sodio, contiene sodio
azide (<0,05%)
270-2502
b2, Tampone 2, 1 × 2500 ml, tampone bis-tris/fosfato di sodio, contiene sodio
azide (<0,05%)
270-2503
Mx, Soluzione di lavaggio/diluizione, 3 × 1900 ml, contiene sodio azide
(<0,05%)
270-2504
β-Thal cS, Set del calibratore β-Thal, liofilizzato, 2 livelli, 3 × 10 ml c1,
3 × 5,0 ml c2, emolisato di eritrociti umani liofilizzati, contiene gentamicina,
tobramicina ed EDTA come conservanti. Conservare a 2–8 °C.
270-2511
HbA1c cS, Set del calibratore HbA1c, liofilizzato, 2 livelli, 3 × 5,0 ml c1,
3 × 5,0 ml c2, emolisato di eritrociti umani liofilizzati, contiene gentamicina,
trobramicina ed EDTA come conservanti. Conservare a 2–8 °C.
220-0119
xc, Diluente del calibratore, 1 × 100 ml, contiene sodio azide come
conservante. Conservare a 2–8 °C.
270-2510
270-2149
270-2507
aAS, Set di cartucce analitiche, 2 set cad., contenente
• 1 aA a scambio cationico, 4,6 mm DI × 30 mm
• wW, Primer di sangue intero, liofilizzato, 1 × 1,0 ml, emolisato di eritrociti
umani liofilizzati, contiene gentamicina, tobramicina ed EDTA come conservanti.
Conservare a 2–8 °C.
• 2 prefiltri, 0,5 µm × 4 mm, per 400 iniezioni cad.
sv, Microprovette per campioni 1,5 ml, 1 × 100, con tappi perforabili
, CD-ROM, contenente il completo VARIANT II Dual kit Method Software
(V2_A1C_DUAL e V2_B-THAL_DU Method)
NOTA: i reattivi sono stabili fino alla data di scadenza quando vengono conservati
alla temperatura indicata. A meno che non venga specificato altrimenti, conservare
a temperatura ambiente (15–30 °C). Non usare i reattivi dopo la data di scadenza,
né miscelare lotti diversi di reattivi.
L70097101IT00
Istruzioni per l’uso
5
ULTERIORI ARTICOLI, FORNITI DA BIO-RAD
#
Descrizione
270-0021
VARIANT II Hemoglobin Testing System, 220 V
553
Lyphochek® Hemoglobin A2 Control, 2 × 2 × 0,5 ml
740
Lyphochek® Diabetes Control, 3 × 2 × 0,5 ml
171
Liquichek™ Diabetes Control, Level 1, 6 × 1,0 ml
172
Liquichek™ Diabetes Control, Level 2, 6 × 1,0 ml
173
Liquichek™ Diabetes Control, Level 3, 6 × 1,0 ml
172X
Liquichek™ Diabetes Control, Trilevel MiniPak, 3 × 1,0 ml
270-0333
270-0335
4 filtri sostitutivi in polimero
Adattatori per microprovette, 1 × 10
ARTICOLI FORNITI SEPARATAMENTE DA BIO-RAD
#
Descrizione
270-2510
aAS, Serie di cartucce analitiche, contenente ciascuna:
• 1 aA a scambio cationico, 4,6 mm DI × 30 mm
• wW, Primer di sangue intero, liofilizzato, 1 × 1,0 ml, emolisato di eritrociti
umani liofilizzati, contiene gentamicina, tobramicina ed EDTA come conservanti.
Conservare a 2–8 °C.
• 2 prefiltri, 0,5 µm × 4 mm, per 400 iniezioni cad.
sv, Microprovette per campioni 1,5 ml, 1 × 100, con tappi perforabili
270-2149
ULTERIORI ARTICOLI RICHIESTI, NON FORNITI DA BIO-RAD
Pipette, 5 µl, 0,5 ml, 1 ml, 5 ml, 10 ml
Acqua deionizzata
Guanti monouso
PRECAUZIONI/AVVERTENZE
1. Leggere bene e familiarizzarsi con il contenuto delle Istruzioni per l’uso prima di utilizzare il test
per la prima volta.
2. Tutto il personale che esegue il test deve indossare le protezioni di sicurezza standard di
laboratorio (occhiali protettivi, camice, guanti ecc.).
3. Tutti i materiali di riferimento (per esempio calibratori e controlli) ed i campioni dei pazienti
vanno considerati come materiale potenzialmente a rischio biologico e devono essere
manipolati secondo le istruzioni delle normative sulla sicurezza locali. Dopo l’uso, strumenti
e apparecchiature potrebbero essere contaminati. Aderire alle direttive sulla sicurezza delle
normative locali.
6
Istruzioni per l’uso
L70097101IT00
VARIANT™ II HbA2/HbA1c Dual Program
4. Alcuni dei reattivi sopra indicati contengono sodio azide che potrebbe interagire con le tubature
in rame o piombo e dare origine ad azidi metalliche potenzialmente esplosive. Aderire alle
direttive sulla sicurezza delle normative locali. Non mescolare con acidi!
5. Per dettagli completi sulla manipolazione sicura dei reattivi, consultare la scheda di sicurezza
sul prodotto (Material Safety Data Sheet, MSDS).
6. I materiali di scarto contengono campioni e materiali di riferimento (per esempio calibratori e
controlli) potenzialmente infettivi, e sostanze potenzialmente pericolose derivanti dai reattivi.
Manipolare e smaltire i materiali di scarto secondo le istruzioni delle direttive sulla sicurezza
delle normative locali.
7. Il materiale usato nella fabbricazione di calibratore e controlli è stato testato mediante metodi
approvati ed è risultato non reattivo per l’antigene di superficie dell’epatite B (HBsAg), per gli
anticorpi contro l’epatite C (HCV), e per il virus HIV-1, HIV-2 e l’antigene HIV (p24). Nessun
metodo di analisi può offrire una garanzia assoluta che i prodotti contenenti materiali di origine
umana siano privi di questi e di altri agenti infettivi. Questo prodotto potrebbe contenere
anche altro materiale di origine umana per il quale non vi sono test approvati. Secondo le
buone pratiche di laboratorio, tutti i materiali di origine umana devono essere considerati
potenzialmente infettivi per il virus dell’epatite B (HBV), epatite C (HCV), HIV-1, HIV-2, HTLV-I,
HTLV-II e tutti gli altri agenti infettivi, perciò si raccomanda di trattare i calibratori e i controlli con
le medesime precauzioni adottate per i campioni dei pazienti.
8. I tappi del flacone di calibratore contengono gomma naturale secca.
9. Nessuno degli articoli disponibili presso Bio-Rad va riciclato dopo aver eseguito il test, a meno
che non venga specificato espressamente.
PROCEDURA
• Si prega di leggere attentamente e nella loro interezza le Istruzioni per l’uso prima di eseguire il
test per la prima volta. Per garantire delle prestazioni adeguate per questo prodotto, attenersi al
protocollo qui specificato.
• Prima dell’esecuzione del dosaggio riportare a temperatura ambiente (15–30 °C) tutti i reattivi, i
calibratori, i controlli ed i campioni dei pazienti eccetto il diluente del calibratore.
• A meno che non venga indicato altrimenti in queste Istruzioni per l’uso, i reattivi non aperti
sono stabili per un massimo di 12 settimane alle temperature di conservazione indicate. Questa
stabilità può essere assicurata solo se si evita la contaminazione dei reattivi.
• Per l’assegnazione dei valori e per gli intervalli, fare riferimento agli inserti acclusi nel lotto del
calibratore e controllo in uso.
• Indossare guanti durante le procedure di preparazione dei reattivi e dei campioni.
• Non usare i reattivi dopo la data di scadenza, né miscelare lotti diversi di reattivi.
• Non usare controlli o calibratori se il pellet liofilizzato ha un colore marrone o se il flacone è rotto.
• Se vengono ottenuti risultati anomali, rivolgersi all’assistenza tecnica Bio-Rad.
• Aprire i flaconi con cautela. I reattivi liofilizzati vengono imbottigliati a pressione ridotta.
• Si raccomanda un’analisi simultanea dei controlli (per esempio Lyphochek Diabetes Control e
Lyphochek Hemoglobin A2 Control).
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Istruzioni per l’uso
7
Raccolta dei campioni
Il campione di sangue intero va raccolto in una provetta di raccolta a vuoto contenente EDTA come
anticoagulante. I campioni del paziente sono stabili per 7 giorni se conservati a 2–8 °C.
Controllo di qualità
In conformità alle buone pratiche di laboratorio, includere in ogni analisi campioni di controllo basso
e alto. Se non si ottengono i valori di controllo attesi, è necessario ripetere l’analisi.
Ricostituzione del primer di sangue intero, wW
1. Quando si installa una nuova cartuccia analitica, usare un’aliquota nuova di primer di
sangue intero.
NOTA: per assicurare la corretta durata della cartuccia analitica, usare il primer solo prima
dell’uso iniziale della cartuccia stessa.
2. Aprire il flacone con cautela e preparare il primer di sangue intero dispensando 1,0 ml di
acqua deionizzata nel flacone.
3. Lasciare riposare per 10 minuti a temperatura ambiente (15–30 °C); agitare delicatamente
con movimento rotatorio per sciogliere la miscela e verificare che risulti omogenea.
4. Il primer di sangue intero ricostituito è stabile per 1 giorno se conservato a 2–8 °C, ed è
pronto all’uso.
5. Trasferire 1,0 ml di primer di sangue intero in una microprovetta per campioni da 1,5 ml
etichettata.
Ricostituzione dei calibratori, c
Ricostituire e conservare il calibratore HbA1c e il calibratore β-Thal come indicato nell’inserto del
VARIANT II HbA2/HbA1c Dual Program Calibrator Set.
Tamponi (b, Mx) e cartuccia analitica (aA)
Per installare o cambiare tampone 1, tampone 2, soluzione di lavaggio/diluizione, prefiltro e/o
cartuccia analitica, attenersi alle procedure descritte nel Manuale operativo del VARIANT II,
Sezione 3.
Controlli HbA2/HbF e HbA1c
In conformità alle buone pratiche di laboratorio, includere in ogni analisi campioni di controllo basso
e alto. Usare un controllo diabete per il metodo HbA1c e un controllo emoglobina A2 per il metodo
β-Thal.
• Ricostituire e conservare i controlli in base alle indicazioni dell’inserto della confezione del
produttore.
• I controlli Bio-Rad Lyphochek vanno diluiti 1:200 prima dell’analisi. In una microprovetta da
1,5 ml contrassegnata, pipettare 1,0 ml di soluzione di lavaggio/diluizione e poi 5 µl del controllo
ricostituito. Tappare ogni flacone dei controlli e mescolare bene.
• I controlli Bio-Rad Liquichek Diabetes vanno diluiti 1:200 prima dell’analisi. In una microprovetta
da 1,5 ml contrassegnata, pipettare 1,0 ml di soluzione di lavaggio/diluizione e poi 5 µl del
controllo. Tappare ogni flacone dei controlli e mescolare bene.
8
Istruzioni per l’uso
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VARIANT™ II HbA2/HbA1c Dual Program
NOTA: i controlli diluiti non devono restare a temperatura ambiente (15–30 °C, per es. nella
Stazione di campionamento VARIANT II) per più di un’ora.
Preparazione dei campioni
1. Non è richiesta alcuna preparazione del campione. Le provette dei campioni da 16 mm
vengono caricate in ordine casuale nei rack portacampioni del VARIANT II e quindi sul
nastro trasportatore della Stazione di campionamento VARIANT II. Utilizzare gli speciali
inserti dei rack per provette da 13 mm e gli speciali adattatori per le provette pediatriche da
10 mm.
2. Se il campione è in una provetta di dimensione/tipo anormale o se la provetta contiene
meno di 500 µl di campione, sarà necessario prediluire il campione. Prima di pipettare,
miscelare accuratamente il campione invertendo delicatamente la provetta. Per la
prediluizione pipettare, in una microprovetta per campioni da 1,5 ml contrassegnata,
1,0 ml di soluzione di lavaggio/diluizione e poi 5 µl del campione di sangue intero. Tappare
la microprovetta del campione e mescolare bene. Per i campioni prediluiti, utilizzare un
adattatore per microprovette.
Aggiornamento del metodo
1. Quando si cambiano i lotti di reattivi, aggiornare i parametri specifici del lotto del
VARIANT II HbA2/HbA1c Dual Program.
2. Inserire il CD-ROM dell’attuale pacchetto di riordinazione nell’unità CD-ROM.
3. Selezionare <Setup> (Impostazione)
<Update Kit> (Kit di aggiornamento)
<Unità CD-ROM>.
4. Selezionare il file V2_A1c_DUAL.TSS per caricare il metodo V2_A1c_DUAL (metodo
HbA1c). Fare clic su <OK> per avviare l’aggiornamento.
5. Selezionare il file V2_B-THAL_DU.TSS per caricare il metodo V2_B-THAL_DU (metodo
β-Thal). Fare clic su <OK> per avviare l’aggiornamento.
Scelta del metodo
1. Sono 2 i metodi disponibili sull’HbA2/HbA1c Dual Program:
V2_A1c_DUAL per l’analisi della HbA1c
V2_B-THAL_DU per l’analisi di HbA2, HbF, emoglobine anomale e HbA1c in presenza di
varianti emoglobiniche.
L’utente può passare da un metodo all’altro senza cambiare tamponi o cartucce e
senza ricondizionare il sistema.
2. Per caricare un metodo, selezionare <Setup>
Select New Test: <nome metodo>.
NOTA: quando si passa ad un metodo differente che richiede un cambio di reattivi, il CDM
chiede all’utente di installare nuovi reattivi e una nuova cartuccia analitica ed esegue un
lavaggio automatico del sistema di 20 minuti.
L70097101IT00
Istruzioni per l’uso
9
Installazione di una nuova cartuccia
Prima dell’analisi iniziale, occorre condizionare le nuove cartucce analitiche. Assicurarsi di
usare la cartuccia analitica solo nella direzione di flusso indicata dalla freccia sulla cartuccia
stessa.
1. Avviare il software CDM.
2. Disporre una microprovetta per campioni con primer di sangue intero ricostituito (1,0 ml) in
un adattatore per microprovette con etichetta PRIMER.
3. Disporre due microprovette per campioni con tampone 2 (1,0 ml) in adattatori per
microprovetta etichettati BLANK (Vuoto).
Disporre gli adattatori per microprovetta in un rack per campioni nell’ordine seguente:
Pos. N. 1 Primer di sangue intero
Pos. N. 2 Tampone 2
Pos. N. 3 Tampone 2
Pos. N. 4 Provetta STOP
4. Selezionare <RUN> (Esegui)
<WORKLIST> (Lista di lavoro)
<START/STOP> (Avvia/Stop).
5. Fare clic su <START> per dare avvio alla seduta analitica.
6. Una volta terminata la seduta, la cartuccia analitica è pronta ad iniziare le sedute analitiche.
NOTA: a partire dalla versione 5.1 del software CDM, è disponibile un’opzione di riempimento
automatico (Automatic Priming). Questa opzione permette di eseguire l’analisi di rastrelliere
contenenti calibratori, controlli e campioni pazienti nella stessa seduta della rastrelliera
di riempimento senza l’intervento dell’operatore. Per usare questa opzione, impostare le
rastrelliere di riempimento e calibrazione esattamente come specificato in questo manuale
di istruzioni (inclusi adattatori per microprovette adeguatamente etichettati BLANK e STOP).
Selezionare la casella di spunta Automatic Priming (Riempimento automatico) nella finestra di
dialogo Worklist Control (Controllo della lista di lavoro) prima di avviare la seduta.
Impostazione dell’analisi
La calibrazione va eseguita:
• dopo che si passa da un metodo all’altro;
• dopo che si installa una nuova cartuccia analitica;
• dopo ciascuna 100esima–150esima iniezione od ogni settimana (quando si esegue il
programma β-Thal).
NOTA: la frequenza di calibrazione dipende dal singolo laboratorio.
1. Preparare i campioni come descritto nella sezione Preparazione dei campioni.
10
Istruzioni per l’uso
L70097101IT00
VARIANT™ II HbA2/HbA1c Dual Program
2. Inserire una microprovetta vuota, i calibratori ed i controlli sulla Stazione di campionamento
VARIANT II. Usare gli speciali adattatori per microprovette da 1,5 ml con calibratori e
controlli. Gli adattatori devono avere i codici a barre che identificano il tipo di campione:
BLANK (Vuoto)
CALIBRATOR Level 1 (Calibratore Livello 1)
CALIBRATOR Level 2 (Calibratore Livello 2)
CONTROL Level 1 (Controllo Livello 1)
CONTROL Level 2 (Controllo Livello 2)
NOTA: assicurarsi sempre di usare gli appropriati calibratori (calibratore β-Thal e calibratore
HbA1c, rispettivamente). Per un vuoto, disporre una microprovetta per campioni con 1,0 ml di
calibratore oppure un campione del paziente prediluito in un adattatore per microprovetta
con un’etichetta con codice a barre BLANK.
Ordine dei campioni per la calibrazione:
Campione N.
1
2
3
4
5
da 6 a N
N+1
N+2
N+3
NOTA:
Reattivo
Vuoto
Calibratore Livello 1
Calibratore Livello 2
Controllo, Livello 1
Controllo, Livello 2
Campioni paziente
Controllo, Livello 1
Controllo, Livello 2
Provetta STOP
• Se il sistema non è stato usato per più di un giorno, eseguire il vuoto tre volte quando si
usa il metodo β-Thal.
• N si riferisce all’ultimo numero del paziente incluso nell’analisi.
• I controlli diluiti non devono restare a temperatura ambiente (15–30 °C, per es. nella
Stazione di campionamento VARIANT II) per più di un’ora.
L70097101IT00
Istruzioni per l’uso
11
Ordine dei campioni senza calibrazione:
Campione N. Reattivo
1
Vuoto
2
Controllo, Livello 1
3
Controllo, Livello 2
da 4 a N
Campioni paziente
N+1
Controllo, Livello 1
N+2
Controllo, Livello 2
N+3
Provetta STOP
3. Avviare la seduta selezionando <RUN>
<WORKLIST>
<START/STOP>.
4. Fare clic su <START> per dare avvio alla seduta analitica.
5. Fare riferimento alla Sezione 4 del Manuale operativo del VARIANT II per ulteriori
informazioni.
6. Dopo l’analisi dei calibratori, vengono calcolate automaticamente la pendenza e l’intercetta
della curva di calibrazione per le emoglobine A2, F e A1c. La pendenza e l’intercetta sono
utilizzate nel calcolo della percentuale di area delle emoglobine A2, F ed A1c per tutte
le successive analisi nella seduta. Se i parametri della calibrazione non rientrano negli
intervalli determinati, il sistema stampa un messaggio di errore.
7. Dopo aver analizzato l’ultimo campione, il sistema esegue automaticamente un gradiente di
fine seduta ed entra nello stato READY (Pronto), che permette di avviare immediatamente
un’altra seduta analitica. Se non viene avviata un’altra seduta entro 30 minuti, il sistema
entra nello stato INACTIVE (Inattivo).
OTTIMIZZAZIONE DELL’ANALISI
Per garantire risultati accettabili attenersi alle seguenti linee guida.
1. I picchi sono definiti correttamente.
2. Riempire le nuove cartucce analitiche con primer di sangue intero. Riempire ogni cartuccia
analitica solo prima dell’uso iniziale. La seduta di analisi che segue la procedura di
condizionamento deve includere almeno 20–30 campioni pazienti. Non riempire di nuovo
la cartuccia analitica dopo questa procedura.
3. Se il sistema non è stato usato per più di un giorno, eseguire il vuoto tre volte quando si
usa il metodo β-Thal. Raccomandazione: quando non si è usato il sistema per un lungo
periodo, iniziare con il metodo HbA1c.
4. Per garantire un adeguato ciclo di vita della cartuccia analitica, sostituire il prefiltro dopo
400 iniezioni. Il prefiltro va sostituito se il suo alloggiamento è stato aperto. Assicurarsi
di usare la cartuccia analitica solo nella direzione di flusso indicata dalla freccia sulla
cartuccia stessa. Dopo aver cambiato il prefiltro, iniziare con il metodo HbA1c.
12
Istruzioni per l’uso
L70097101IT00
VARIANT™ II HbA2/HbA1c Dual Program
5. L’area totale di ogni analisi dovrebbe oscillare fra 1,5 e 3,5 milioni di µvolt × secondo. I
risultati non vanno riportati se l’area è al di fuori di questo intervallo.
6. Qualsiasi campione con >15% o >140 mmol/mol di HbA1c va sospettato di presentare una
variante emoglobinica.17
7. Qualsiasi campione con un’area complessiva di 60% nelle finestre E (solo metodo HbA1c),
S e C va sospettato di presentare una variante omozigotica o una variante in combinazione
con un fenotipo β-talassemia. Per questi campioni non refertare il risultato HbA1c.18
INTERPRETAZIONE DEI RISULTATI
Determinazione delle emoglobine HbA2, HbF e anomale
Ogni laboratorio dovrà determinare i valori normali per conformarsi alle caratteristiche della
popolazione analizzata.
I seguenti dati potranno essere usati come punto di riferimento fino a quando il laboratorio non avrà
analizzato un numero di campioni sufficiente per poter determinare i propri intervalli per i valori
normali.
Intervallo dei valori previsti per HbA2
L’intervallo normale per l’HbA2 in genere è compreso fra l’1,7% e il 3,2% dell’emoglobina totale
mentre le condizioni di β-talassemia in eterozigosi presentano livelli di HbA2 fra il 4,0% e il
9,0%. Il VARIANT II HbA2/HbA1c Dual Program è lineare entro valori compresi fra 1,2% e 16%
di HbA2, e può misurare in modo costante e riproducibile livelli di HbA2 compresi fra l’1,4% e il
13% circa (intervallo refertabile).
Per poter essere coerenti con gli intervalli refertabili stabiliti, i valori di HbA2 che sono inferiori
all’intervallo refertabile vanno refertati come “inferiori a 1,4%”.
Intervallo dei valori previsti per HbF
L’intervallo normale per l’HbF in genere è inferiore all’1% dell’emoglobina totale. Le condizioni di
eterozigosi e omozigosi della β-talassemia generano intervalli di HbF rispettivamente compresi
fra 1% e 5% e fra 80% e 100%. Il VARIANT II HbA2/HbA1c Dual Program è lineare entro valori
compresi fra 0,7% e 65% di HbF, e può misurare in modo costante e riproducibile livelli di HbF
compresi fra l’1% e il 40% circa (intervallo refertabile).
Per poter essere coerenti con gli intervalli refertabili stabiliti, i valori di HbF che sono inferiori
all’intervallo refertabile vanno refertati come “inferiori a 1,0%”. I valori che superano l’intervallo
refertabile per l’HbF vanno refertati come “superiori al 40%”.
n
Media
Intervallo di sicurezza del 95%
Intervallo
HbA2
HbF
110
2,8%
2,4–3,2%
2,4–3,2%
110
0,53%
0,1–1,8%
0,1–2,1%
Tabella 1. Intervalli normali per HbA2 e HbF
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Istruzioni per l’uso
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Finestre di identificazione degli analiti - Metodo β-Thal
Le finestre di identificazione degli analiti hanno lo scopo di assistere il laboratorio nell’interpretazione delle emoglobine normali e anomale rilevate nei campioni del paziente. Le finestre
rappresentano intervalli di tempo stabiliti nei quali è stata osservata l’eluizione di varianti
comuni mediante il metodo β-Thal del VARIANT II HbA2/HbA1c Dual Program. Il tempo di
ritenzione è il centro della finestra, e viene misurato dal momento dell’iniezione del campione al
punto massimo di ciascun picco. La banda è pari a metà ampiezza della finestra.
Tempo (min.) Nome del picco Banda (minuti)
0,22
A1a
0,10
0,26
A1b
0,09
0,48
F
0,10
0,77
LA1c
0,07
0,93
A1c
0,10
1,49
P3
0,10
1,73
A0
0,15
2,91
A2
0,10
3,45
S-WINDOW
0,10
4,45
C-WINDOW
0,10
Finestra (min.)
0,12–0,32
0,17–0,35
0,38–0,58
0,70–0,84
0,83–1,03
1,39–1,59
1,58–1,88
2,81–3,01
3,35–3,55
4,35–4,55
Tabella 2. Finestre di identificazione degli analiti con il metodo β-Thal
NOTA: la tabella viene presentata come esempio. Fare riferimento ai parametri del metodo
attuale per informazioni specifiche sul lotto.
Si può creare un adattamento del tempo di ritenzione (per esempio per picchi molto elevati)
modificando la tabella di identificazione dei picchi nel software CDM.
Procedere come segue.
1. Selezionare <SETUP>
<TEST>
<PEAK TABLE> (Tabella dei picchi)
<ALLOW TABLE EDITING> (Consenti modifica tabella).
2. Digitare Password e confermare con <OK>.
3. Regolare i valori nella colonna Time (min.) [Tempo (min.)]. I tempi di ritenzione per le
finestre A2 e quelle S e C possono essere cambiati fino a 0,1 min.; tutti gli altri picchi
possono essere modificati fino a 0,05 min. I tempi di ritenzione per LA1c e A1c sono
collegati e devono essere modificati contemporaneamente con valori identici.
4. Selezionare <Lock Tables> (Blocca tabelle). Il VARIANT II è ora pronto per l’analisi.
Determinazione dell’HbA1c
Intervallo refertabile per l’HbA1c
I seguenti intervalli refertabili sono stati stabiliti in base ai dati presentati in Linearità e recupero
per HbA1c. Se il risultato HbA1c non rientra nell’intervallo refertabile, non va refertato.
14
Istruzioni per l’uso
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VARIANT™ II HbA2/HbA1c Dual Program
NGSP - % di HbA1c
IFCC - mmol/mol di HbA1c
Intervallo refertabile
per il metodo HbA1c
1,6–19,3
0–187
Intervallo refertabile
per il metodo β-Thal
3,1–19,1
10–185
Intervalli dell’emoglobina A1c19
I seguenti intervalli di HbA1c possono essere usati per l’interpretazione dei risultati; tuttavia,
per poter valutare il grado di controllo della glicemia, vanno presi in considerazione fattori quali
la durata del diabete, l’aderenza alla terapia e l’età del paziente. Questi valori si riferiscono a
soggetti non in gravidanza. L’“azione consigliata” dipende dalla circostanze del singolo paziente.
Tali azioni possono comprendere un’educazione di livello avanzato nell’autocontrollo del
diabete, una gestione congiunta con l’equipe diabetologica, una visita specialistica da un endocrinologo, un cambiamento nella terapia farmacologica, l’inizio o l’aumento dell’automonitoraggio della glicemia o un contatto più frequente con il paziente.
Emoglobina A1c (%)
>8
<7
<6
Grado di controllo del glucosio
Azione consigliata†
Obiettivo‡
Livello non diabetico
†
Rischio elevato di sviluppare complicazioni a lungo termine, quali retinopatia, nefropatia,
neuropatia e cardiopatia. L’azione consigliata dipende dalle circostanze del singolo paziente.
‡
Un certo pericolo di reazione ipoglicemica nei diabetici di tipo I. Alcuni soggetti intolleranti al
glucosio e diabetici “sub-clinici” possono presentare valori di HbA1c (elevati) in quest’area.
Intervallo di riferimento non diabetico
Il sondaggio “Third National Health and Nutrition Examination Survey” negli Stati Uniti ha
incluso soggetti di almeno 20 anni con valori normali di glucosio plasmatico a digiuno e senza
precedente diagnosi di diabete. I valori dell’HbA1c sono stati misurati con il Bio-Rad DIAMAT™
System.
La media ponderata dell’HbA1c per pazienti con valori normali di glucosio plasmatico a digiuno
(n = 5.694) è stata del 5,17% con una deviazione standard dello 0,45%. I limiti di confidenza
del 95% (media ± 2 DS) per l’HbA1c sono stati del 4,27–6,07%.20
Poiché il VARIANT II HbA2/HbA1c Dual Program è stato certificato dall’NGSP, questo intervallo
di riferimento può essere usato come punto di riferimento fino a quando il laboratorio non avrà
analizzato un numero di campioni sufficiente per determinare i propri intervalli di riferimento
non diabetici e diabetici rappresentativi della popolazione regionale analizzata.
Finestre di identificazione degli analiti - Metodo HbA1c
Le finestre di identificazione degli analiti hanno lo scopo di assistere il laboratorio nell’interpretazione delle emoglobine normali e anomale rilevate nei campioni del paziente. Le finestre
rappresentano intervalli di tempo stabiliti nei quali è stata osservata l’eluizione di varianti
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Istruzioni per l’uso
15
comuni mediante il metodo HbA1c del VARIANT II HbA2/HbA1c Dual Program. Il tempo di
ritenzione è il centro della finestra, e viene misurato dal momento dell’iniezione del campione al
punto massimo di ciascun picco. La banda è pari a metà ampiezza della finestra.
Tempo (min.) Nome del picco
0,15
A1a
0,24
A1b
0,40
F
0,69
LA1c
0,85
A1c
1,52
P3
1,64
A0
1,76
E-WINDOW
1,90
S-WINDOW
2,03
C-WINDOW
Banda (minuti) Finestra (min.)
0,06
0,09–0,21
0,10
0,14–0,34
0,10
0,30–0,50
0,08
0,61–0,77
0,10
0,75–0,95
0,07
1,45–1,59
0,07
1,57–1,71
0,06
1,70–1,82
0,08
1,82–1,98
0,10
1,93–2,13
Tabella 3. Finestre di identificazione degli analiti con il metodo HbA1c
NOTA: la tabella viene presentata come esempio. Fare riferimento ai parametri del metodo
attuale per informazioni specifiche sul lotto.
Si può creare un adattamento del tempo di ritenzione (per esempio per picchi molto elevati)
modificando la tabella di identificazione dei picchi nel software CDM.
Procedere come segue.
1. Selezionare <SETUP>
<TEST>
<PEAK TABLE>
<ALLOW TABLE EDITING>.
2. Digitare Password e confermare con <OK>.
3. Regolare i valori nella colonna Time (min.) [Tempo (min.)]. I tempi di ritenzione possono
essere cambiati fino a 0,05 min. I tempi di ritenzione per LA1c e A1c sono collegati e
devono essere modificati contemporaneamente di valori identici.
4. Selezionare <Lock Tables>. Il VARIANT II è ora pronto per l’analisi.
Formato del referto del campione
I seguenti esempi di referti dei campioni includono sia le unità IFCC che quelle NGSP per l’HbA1c.
A cominciare con la versione 5.1 del software CDM, le unità di referto per i risultati standardizzati
HbA1c possono essere selezionate nella finestra di dialogo Setup/Configuration/HbA1c Units
Settings. Per le informazioni in merito, consultare il Manuale operativo per il software CDM 5.1,
Sezione 3.2.
I seguenti cromatogrammi vogliono essere di ausilio nell’interpretazione dei risultati.
16
Istruzioni per l’uso
L70097101IT00
VARIANT™ II HbA2/HbA1c Dual Program
Bio-Rad CDM System
CDM 5.1 VII Instrument
PATIENT REPORT
V2_B-THAL_DU
Patient Data
Analysis Data
Sample ID:
Patient ID:
Name:
Physician:
Sex:
DOB:
Comments:
2000053003
Analysis Performed:
Injection Number:
Run Number:
Rack ID:
Tube Number:
Report Generated:
Operator ID:
IFCC
mmol/mol
------------34
-------
Peak Name
Unknown
Unknown
A1a
A1b
F
LA1c
A1c
P3
Ao
A2
NGSP
%
--------0.2
--5.3
----2.7
Area %
0.1
0.6
0.3
0.8
--1.2
--4.7
85.7
---
21/07/2010 13:33:52
91
3
8
28/07/2010 09:59:40
Retention
Time (min)
0.102
0.162
0.204
0.260
0.394
0.717
0.907
1.511
1.705
2.893
Total Area:
Peak
Area
3177
12426
6051
17257
14515
27059
73061
104076
1884468
56365
2,198,454
0.2 %
HbA1c (NGSP) = 5.3 %
2.7 %
F Concentration =
HbA1c (IFCC) = 34 mmol/mol
A2 Concentration =
Analysis comments:
20.0
17.5
15.0
2.89
1.51
A2
-
-
0.72
A1c -
F
2.5
-
5.0
0.10
0.16
0.20
0.26
0.39
7.5
1.70
0.91
10.0
---
% HbA2
12.5
-
0.0
0
1
2
3
4
5
6
Time (min.)
Figura 1. Campione non diabetico (normale) (Metodo β-Thal)
L70097101IT00
Istruzioni per l’uso
17
Bio-Rad CDM System
CDM 5.1 VII Instrument
PATIENT REPORT
V2_B-THAL_DU
Patient Data
Analysis Data
Sample ID:
Patient ID:
Name:
Physician:
Sex:
DOB:
Comments:
4060636205
Analysis Performed:
Injection Number:
Run Number:
Rack ID:
Tube Number:
Report Generated:
Operator ID:
IFCC
mmol/mol
------------68*
---------
Peak Name
Unknown
Unknown
A1a
A1b
F
LA1c
A1c
Unknown
P3
Ao
A2
NGSP
%
--------0.8
--8.4*
------2.4
Area %
0.1
0.5
0.4
0.9
--1.4
--0.8
4.6
81.5
---
21/07/2010 15:59:24
113
3
0004
10
27/07/2010 15:16:45
Retention
Time (min)
0.103
0.165
0.217
0.259
0.405
0.713
0.885
1.292
1.516
1.710
2.896
*Values outside of expected ranges
Peak
Area
3050
11003
7840
19720
25885
28939
132934
17124
97400
1729450
48897
2,122,242
0.8 %
HbA1c (NGSP) = 8.4* %
2.4 %
F Concentration =
HbA1c (IFCC) = 68* mmol/mol
A2 Concentration =
Analysis comments:
20.0
17.5
A2
-
1.71
-
0.71
A1c
-
1.29
0.10
0.16
0.22
0.26
0.40
2.5
---
5.0
-
7.5
2.90
10.0
1.52
0.88
12.5
F
% HbA2
15.0
-
0.0
0
1
2
3
4
5
6
Time (min.)
Figura 2. Campione diabetico (Metodo β-Thal)
18
Istruzioni per l’uso
L70097101IT00
VARIANT™ II HbA2/HbA1c Dual Program
Figura 3. Campione con HbS e HbF elevata (Metodo β-Thal)
L70097101IT00
Istruzioni per l’uso
19
Bio-Rad CDM System
CDM 5.1 VII Instrument
PATIENT REPORT
V2_B-THAL_DU
Patient Data
Analysis Data
Sample ID:
Patient ID:
Name:
Physician:
Sex:
DOB:
Comments:
2001990002
Analysis Performed:
Injection Number:
Run Number:
Rack ID:
Tube Number:
Report Generated:
Operator ID:
IFCC
mmol/mol
------------47*
-------
Peak Name
Unknown
Unknown
A1a
A1b
F
LA1c
A1c
P3
Ao
A2
NGSP
%
--------0.8
--6.4*
----5.2*
Area %
0.2
0.7
0.4
1.0
--1.6
--6.2
79.6
---
21/07/2010 12:27:44
81
3
0010
8
27/07/2010 15:18:01
Retention
Time (min)
0.103
0.165
0.212
0.259
0.403
0.715
0.904
1.512
1.716
2.882
*Values outside of expected ranges
Peak
Area
4053
13568
7779
21111
25076
32086
87169
126682
1635004
100267
2,052,795
0.8 %
HbA1c (NGSP) = 6.4* %
5.2* %
F Concentration =
HbA1c (IFCC) = 47* mmol/mol
A2 Concentration =
Analysis comments:
20.0
17.5
15.0
2.88
A2
0.72
A1c -
-
1.72
0.10
0.16
0.21
0.26
0.40
2.5
---
5.0
-
7.5
1.51
0.90
10.0
F
% HbA2
12.5
-
0.0
0
1
2
3
4
5
6
Time (min.)
Figura 4. Campione di β-talassemia (Metodo β-Thal)
20
Istruzioni per l’uso
L70097101IT00
VARIANT™ II HbA2/HbA1c Dual Program
Bio-Rad CDM System
CDM 5.1 VII Instrument
PATIENT REPORT
V2_A1C_DUAL
Patient Data
Analysis Data
Sample ID:
Patient ID:
Name:
Physician:
Sex:
DOB:
Comments:
Unknown-2-48
Analysis Performed:
Injection Number:
Run Number:
Rack ID:
Tube Number:
Report Generated:
Operator ID:
IFCC
mmol/mol
--------31
---
Peak Name
A1a
A1b
F
LA1c
A1c
Ao
NGSP
%
--------5.0
---
Area %
1.3
0.7
0.9
1.3
--92.7
21/05/2010 13:05:38
48
6
0004
6
07/06/2010 11:43:06
Retention
Time (min)
0.150
0.242
0.364
0.693
0.856
1.618
Total Area:
HbA1c (IFCC) = 31 mmol/mol
Peak
Area
28421
15772
20690
28188
70435
2065878
2,229,385
HbA1c (NGSP) = 5.0 %
Analysis comments:
20.0
17.5
15.0
0.86
1.62
A1c
0.69
-
2.5
-
0.15
0.24
5.0
-
-
7.5
0.36
10.0
-
%A1c
12.5
0.0
-
0.0
0.5
1.0
1.5
2.0
2.5
3.0
Time (min.)
Figura 5. Campione non diabetico (normale) (Metodo HbA1c)
L70097101IT00
Istruzioni per l’uso
21
Bio-Rad CDM System
CDM 5.1 VII Instrument
PATIENT REPORT
V2_A1C_DUAL
Patient Data
Analysis Data
Sample ID:
Patient ID:
Name:
Physician:
Sex:
DOB:
Comments:
Unknown-2-87
Analysis Performed:
Injection Number:
Run Number:
Rack ID:
Tube Number:
Report Generated:
Operator ID:
IFCC
mmol/mol
----------78*
---
Peak Name
Unknown
A1a
A1b
F
LA1c
A1c
Ao
NGSP
%
----------9.2*
---
Area %
0.3
0.6
1.3
1.2
3.1
--87.0
09/06/2010 18:59:08
87
11
4
11/06/2010 15:32:32
Retention
Time (min)
0.101
0.160
0.253
0.352
0.666
0.880
1.646
*Values outside of expected ranges
Peak
Area
4828
11103
23445
20526
54568
114332
1536383
1,765,186
HbA1c (IFCC) = 78* mmol/mol
HbA1c (NGSP) = 9.2* %
Analysis comments:
20.0
0.88
17.5
15.0
A1c
0.67
1.65
-
-
0.10
0.16
0.25
5.0
-
7.5
0.35
10.0
--
%A1c
12.5
2.5
0.0
-
0.0
0.5
1.0
1.5
2.0
2.5
3.0
Time (min.)
Figura 6. Campione diabetico (Metodo HbA1c)
22
Istruzioni per l’uso
L70097101IT00
VARIANT™ II HbA2/HbA1c Dual Program
Bio-Rad CDM System
CDM 5.1 VII Instrument
PATIENT REPORT
V2_A1C_DUAL
Patient Data
Analysis Data
Sample ID:
Patient ID:
Name:
Physician:
Sex:
DOB:
Comments:
Unknown-2-50
Analysis Performed:
Injection Number:
Run Number:
Rack ID:
Tube Number:
Report Generated:
Operator ID:
IFCC
mmol/mol
----------38
-----
Peak Name
Unknown
A1a
A1b
F
LA1c
A1c
Ao
S-Window
NGSP
%
----------5.6
-----
Area %
0.4
0.5
0.5
0.6
0.7
--54.1
41.2
21/05/2010 13:12:47
50
6
0004
8
07/06/2010 11:43:21
Retention
Time (min)
0.101
0.152
0.243
0.378
0.687
0.856
1.623
1.867
Total Area:
HbA1c (IFCC) = 38 mmol/mol
Peak
Area
10099
13441
14485
18068
18510
58948
1530348
1164624
2,828,524
HbA1c (NGSP) = 5.6 %
Analysis comments:
20.0
17.5
0.86
1.87
A1c
1.62
-
2.5
0.0
-
0.0
0.5
1.0
1.5
S-Window
-
-
5.0
0.69
-
0.150.24
7.5
0.38
10.0
-
%A1c
12.5
0.10
15.0
2.0
2.5
3.0
Time (min.)
Figura 7. Campione con HbS (Metodo HbA1c)
L70097101IT00
Istruzioni per l’uso
23
Bio-Rad CDM System
CDM 5.1 VII Instrument
PATIENT REPORT
V2_A1C_DUAL
Patient Data
Analysis Data
Sample ID:
Patient ID:
Name:
Physician:
Sex:
DOB:
Comments:
Unknown-2-52
Analysis Performed:
Injection Number:
Run Number:
Rack ID:
Tube Number:
Report Generated:
Operator ID:
IFCC
mmol/mol
----------48*
-------
Peak Name
Unknown
A1a
A1b
F
LA1c
A1c
Ao
S-Window
C-Window
NGSP
%
----------6.5*
-------
Area %
0.3
0.4
1.2
0.8
0.8
--54.5
5.4
34.0
21/05/2010 13:19:54
52
6
0004
10
07/06/2010 11:43:30
Retention
Time (min)
0.100
0.154
0.243
0.370
0.704
0.865
1.630
1.915
2.040
*Values outside of expected ranges
Peak
Area
7196
10591
29027
20489
19895
62428
1327641
130385
826705
2,434,358
HbA1c (IFCC) = 48* mmol/mol
HbA1c (NGSP) = 6.5* %
Analysis comments:
20.0
17.5
0.86
1.91
2.04
-
1.63
2.5
0.0
-
0.0
0.5
1.0
1.5
S-Window
C-Window
-
A1c
-
%A1c
5.0
0.70
-0.15 0.10
- 0.24
7.5
12.5
0.37
10.0
-
15.0
2.0
2.5
3.0
Time (min.)
Figura 8. Campione con HbC (Metodo HbA1c)
24
Istruzioni per l’uso
L70097101IT00
VARIANT™ II HbA2/HbA1c Dual Program
CARATTERISTICHE DELLE PRESTAZIONI
Si noti che tutti i dati sulle prestazioni e gli intervalli di riferimento per l’HbA1c in queste Istruzioni per
l’uso sono riportati in valori NGSP.
Precisione
Precisione del metodo β-Thal
La precisione del metodo β-Thal del Bio-Rad VARIANT II HbA2/HbA1c Dual Program è
stata valutata in uno studio basato sulle linee guida NCCLS EP5-A “Evaluation of Precision
Performance of Clinical Chemistry Devices” (Valutazione delle prestazioni di precisione dei
dispositivi di chimica clinica). In questo studio sono state eseguite ogni giorno 2 analisi in un
periodo di 20 giornate lavorative. In ogni seduta di analisi, sono state analizzate in doppio
aliquote di campioni con valori bassi, medi e alti. I dati dello studio di precisione vengono
riassunti nella seguente tabella.
Campione
basso
Campione
medio
Campione
alto
Campione
molto alto
5,64
0,89
4,10
1,66
4,51
8,11
1,00
3,15
1,95
3,84
11,53
0,41
1,47
0,92
1,78
–
–
–
–
–
1,47
1,86
2,38
3,04
4,29
5,01
0,55
1,20
0,77
1,53
10,64
0,58
1,49
0,61
1,71
34,89
0,94
2,05
2,00
3,01
2,64
2,47
1,43
0,85
2,98
4,09
1,19
1,74
2,64
3,38
6,61
0,76
0,95
1,61
2,01
–
–
–
–
–
HbA1c
Valore medio [HbA1c %]
Nell’analisi [CV %]
Fra i giorni [CV %]
Fra le analisi [CV %]
Precisione totale [CV %]
HbF
Valore medio [HbF %]
Nell’analisi [CV %]
Fra i giorni [CV %]
Fra le analisi [CV %]
Precisione totale [CV %]
HbA2
Valore medio [HbA2 %]
Nell’analisi [CV %]
Fra i giorni [CV %]
Fra le analisi [CV %]
Precisione totale [CV %]
Tabella 4. Precisione del metodo β-Thal
Precisione del metodo HbA1c
La precisione del metodo HbA1c del Bio-Rad VARIANT II HbA2/HbA1c Dual Program è
stata valutata in uno studio basato sulle linee guida NCCLS EP5-A “Evaluation of Precision
Performance of Clinical Chemistry Devices” (Valutazione delle prestazioni di precisione dei
L70097101IT00
Istruzioni per l’uso
25
dispositivi di chimica clinica). In questo studio sono state eseguite ogni giorno 2 analisi in un
periodo di 20 giornate lavorative. In ogni seduta di analisi, sono state analizzate in doppio
aliquote di campioni con valori bassi, medi e alti. I dati dello studio di precisione vengono
riassunti nella seguente tabella.
Campione Campione Campione
basso
medio
alto
HbA1c
Valore medio [HbA1c %]
Nell’analisi [CV %]
Fra i giorni [CV %]
Fra le analisi [CV %]
Precisione totale [CV %]
5,23
0,77
1,50
0,91
1,91
8,03
0,62
1,54
2,08
2,66
10,93
0,46
2,12
0,69
2,27
Tabella 5. Precisione del metodo HbA1c
Linearità e recupero
Linearità e recupero per HbA2
Per dimostrare la linearità della misurazione dell’HbA2 con il metodo VARIANT II β-Thal in tutto
l’intervallo refertabile, sono stati preparati nel modo seguente campioni di livello basso e alto di
HbA2.
Livello basso: un campione di paziente di A0 parzialmente purificato con un contenuto rilevabile
molto basso di HbA2.
Livello alto: A2 purificata con 93,3% di HbA2.
Il campione di livello alto è stato diluito con il campione di livello basso in varie proporzioni
per ottenere specifiche percentuali relative di HbA2 (percentuali teoriche di HbA2 corrette per
la concentrazione di Hb di ciascun campione). Questi campioni diluiti sono stati analizzati con
il metodo β-Thal (percentuali osservate di HbA2). Il recupero percentuale è stato determinato
dividendo le percentuali osservate di HbA2 per le percentuali teoriche di HbA2 e moltiplicando il
risultato per 100. I risultati dello studio di linearità sono presentati nelle seguenti tabelle.
26
Istruzioni per l’uso
L70097101IT00
VARIANT™ II HbA2/HbA1c Dual Program
Contributo percentuale Percentuale
Percentuale
teorica di HbA2 osservata di HbA2
Alto
Basso
53,3
46,7
16,55
15,95
40
60
10,82
10,35
33,3
66,7
8,61
8,7
30
70
7,63
7,65
25
75
6,28
6,3
18,3
81,7
4,68
4,6
15
85
3,96
3,8
13,3
86,7
3,61
3,45
6,7
93,3
2,34
2,4
0
100
1,20
1,2
Recupero
percentuale
96,4
95,6
101,0
100,3
100,4
98,3
96,0
95,4
102,7
100,0
Tabella 6. Linearità e recupero per HbA2
Linearitydella
of HbA2
Determination
Linearità
determinazione
dell’HbA2
18
16
%Measured
misurata
HbA2
%HbA2
14
y = 0.9629x + 0.116
R2 = 0.9987
12
10
8
6
4
2
0
0.00
2.00
4.00
6.00
8.00
10.00
12.00
14.00
16.00
18.00
Theoretical
%
teoretica%HbA2
HbA2
Figura 9. Linearità di HbA2
Linearità e recupero per HbF
Per dimostrare la linearità della misurazione dell’HbF con il Bio-Rad VARIANT II HbA2/HbA1c
Dual Program in tutto l’intervallo refertabile, sono stati preparati nel modo seguente campioni di
livello basso e alto di HbF.
Livello basso: campioni paziente parzialmente purificati con contenuto rilevabile molto basso di
HbF.
Livello alto: campioni di pazienti talassemici con livelli di HbF di 65,15%.
Il campione di livello alto è stato diluito con il campione di livello basso in vari rapporti, in
modo da generare percentuali relative specifiche di HbF (percentuali teoriche di HbF). Questi
campioni diluiti sono stati analizzati con il metodo β-Thal (percentuali osservate di HbF). Il
L70097101IT00
Istruzioni per l’uso
27
recupero percentuale è stato determinato dividendo le percentuali osservate di HbF per le
percentuali teoriche di HbF e moltiplicando il risultato per 100. I risultati dello studio di linearità
sono presentati nella seguente tabella.
Contributo percentuale Percentuale
Percentuale
teorica di HbF osservata di HbF
Alto
Basso
100
0
65,15
65,15
66,7
33,3
43,23
42,80
50
50
32,44
33,25
33,3
66,7
21,75
22,30
25
75
16,45
16,80
16,7
83,3
11,17
11,35
12,5
87,5
8,55
8,45
8,3
91,7
5,92
6,00
6,7
93,3
4,88
4,80
5
95
3,83
4,10
3,3
96,7
2,79
2,95
2,5
97,5
2,26
2,45
1,7
98,3
1,74
1,90
0
100
0,70
0,70
Recupero
percentuale
100,0
99,0
102,5
102,5
102,1
101,6
98,9
101,3
98,4
107,0
105,9
108,2
109,0
100,0
Tabella 7. Linearità e recupero per HbF
Linearitydella
of HbF
Determination
Linearità
determinazione
dell’HbF
70.00
%Measured
misurata%HbF
HbF
60.00
50.00
y = 0.999x + 0.1682
R2 = 0.9998
40.00
30.00
20.00
10.00
0.00
0.00
10.00
20.00
30.00
40.00
50.00
60.00
70.00
Theoretical
%
teoretica%HbF
HbF
Figura 10. Linearità di HbF
Linearità e recupero per HbA1c
Per dimostrare la linearità della misurazione dell’HbA1c sul Bio-Rad VARIANT II HbA2/HbA1c
Dual Program in tutto l’intervallo refertabile, sono stati preparati nel modo seguente campioni di
livello basso e alto di HbA1c.
28
Istruzioni per l’uso
L70097101IT00
VARIANT™ II HbA2/HbA1c Dual Program
Livello basso: a sangue intero di un campione di paziente normale è stata aggiunta HbA0
purificata per ottenere livelli di HbA1c rispettivamente dell’1,6% e del 3,1%.
Livello alto: a sangue intero di un campione di paziente diabetico è stata aggiunta HbA1c
purificata per ottenere livelli di HbA1c rispettivamente del 19,3% e del 19,1%.
Il campione di livello alto è stato diluito con il campione di livello basso in vari rapporti, in modo
da generare percentuali relative specifiche di HbA1c (percentuali teoriche di HbA1c). Questi
campioni diluiti sono stati analizzati con il Bio-Rad VARIANT II HbA2/HbA1c Dual Program
(percentuali osservate di HbA1c). Il recupero percentuale è stato determinato dividendo le
percentuali osservate di HbA1c per le percentuali teoriche di HbA1c e moltiplicando il risultato
per 100. I risultati dello studio di linearità sono presentati nelle seguenti tabelle.
Contributo percentuale
Alto
Basso
100
0
86,7
13,3
76,7
23,3
63,3
36,7
53,3
46,7
40
60
38,3
71,7
28,3
81,7
10
90
0
100
Percentuale
Percentuale
Recupero
teorica di HbA1c osservata di HbA1c percentuale
19,30
16,77
14,91
12,48
10,69
8,34
6,33
4,64
3,25
1,60
19,3
17,1
15,4
12,6
10,6
8,5
6,25
4,7
3,2
1,6
100,0
102,0
103,3
101,0
99,2
101,9
98,7
101,3
98,6
100,0
Tabella 8. Linearità e recupero per HbA1c con il metodo HbA1c
Contributo percentuale
Alto
Basso
100
0
88,3
11,7
75
25
61,7
38,3
48,3
51,7
36,7
63,3
20
80
10
90
0
100
Percentuale
teorica di HbA1c
19,05
17,05
14,82
12,63
10,49
8,66
6,09
4,58
3,10
Percentuale
Recupero
osservata di HbA1c percentuale
19,05
17,2
15,25
12,65
10,55
8,6
5,95
4,6
3,1
100,0
100,9
102,9
100,1
100,6
99,4
97,7
100,4
100,0
Tabella 9. Linearità e recupero per HbA1c con il metodo β-Thal
L70097101IT00
Istruzioni per l’uso
29
Linearità
della determinazione
dell’HbA1c
Linearity
of A1c Determination
% Measured
misurata%A1c
HbA1c
25
20
y = 1.0156x - 0.0591
R2 = 0.9993
15
10
5
0
0.00
5.00
10.00
15.00
20.00
25.00
%A1c
%Theoretical
teoretica HbA
1c
Figura 11. Linearità per HbA1c con il metodo HbA1c
Linearity
of A1c Determination
Linearità
della determinazione
dell’HbA1c
25
% Measured
misurata%A1c
HbA1c
20
y = 1.0135x - 0.0914
R2 = 0.9994
15
10
5
0
0.00
5.00
10.00
15.00
20.00
25.00
%Theoretical
teoretica %A1c
HbA1c
Figura 12. Linearità per HbA1c con il metodo β-Thal
Interferenza dell’A1c labile
Per testare il livello di interferenza, campioni paziente con livelli bassi, medi ed alti di HbA1c sono
stati suddivisi in aliquote. Un’aliquota è stata conservata congelata a −70 °C. Alla seconda aliquota
è stata aggiunta una soluzione madre di glucosio che ha portato la concentrazione di glucosio a
500 mg/dl. Le aliquote sono quindi state incubate per tre ore a 37 °C per facilitare la formazione di
HbA1c labile. Tutte le aliquote hanno mostrato aumentati livelli di HbA1c labile pari a oltre il tre per
cento. Tutte le aliquote sono poi state analizzate in doppio sul Bio-Rad VARIANT II HbA2/HbA1c Dual
Program. I risultati indicano che livelli di A1c labile fino al 3% non interferiscono con il dosaggio.
30
Istruzioni per l’uso
L70097101IT00
VARIANT™ II HbA2/HbA1c Dual Program
Campione
basso senza
A1c labile
%HbA1c
Campione
basso con
A1c labile
%HbA1c
Campione
medio senza
A1c labile
%HbA1c
Campione
medio con
A1c labile
%HbA1c
Campione
alto senza
A1c labile
%HbA1c
Campione
alto con
A1c labile
%HbA1c
4,3
4,4
4,35
0,95
4,2
4,2
4,2
3,35
8,2
8,2
8,2
2,45
8,0
8,1
8,05
3,75
11,9
12
11,95
2,85
11,7
11,7
11,7
4,05
Repl. 1
Repl. 2
Media HbA1c
Media LA1c
Tabella 10. Interferenza dell’A1c labile testata con il metodo β-Thal
Campione
basso senza
A1c labile
%HbA1c
Campione
basso con
A1c labile
%HbA1c
Campione
medio senza
A1c labile
%HbA1c
Campione
medio con
A1c labile
%HbA1c
Campione
alto senza
A1c labile
%HbA1c
Campione
alto con
A1c labile
%HbA1c
5,4
5,4
5,4
1,4
5,2
5,0
5,1
4,05
7,7
7,7
7,7
2,3
7,5
7,1
7,3
4,25
11,1
10,6
10,85
3,05
10,6
10,5
10,55
4,6
Repl. 1
Repl. 2
Media HbA1c
Media LA1c
Tabella 11. Interferenza dell’A1c labile testata con il metodo HbA1c
Campioni lipemici
Sono stati ottenuti tre campioni paziente rappresentativi di livelli di HbA1c bassi, medi e alti. I
campioni sono stati centrifugati e la frazione di plasma è stata rimossa da ogni campione. Sono
stati ottenuti campioni di siero con valori di trigliceridi approssimativamente da 185 a 6000 mg/dl.
I pool di siero sono stati quindi preparati alle concentrazioni di trigliceridi elencate nella tabella 12.
Aliquote di eritrociti dei campioni di pazienti con valori bassi, medi ed alti sono state quindi
combinate con un uguale volume di pool di siero di trigliceridi e analizzate in doppio sul Bio-Rad
VARIANT II HbA2/HbA1c Dual Program. I risultati dimostrano che livelli fino a 6000 mg/dl di
trigliceridi (TG) non interferiscono con le HbA1c, HbA2 e HbF percentuali.
Trigliceridi
[mg/dl]
Basso
HbA2
Medio
Alto
Basso
HbF
Medio
Alto
Basso
HbA1c
Medio
Alto
185
1638
3093
4546
6000
2,7
2,7
2,7
2,7
2,7
4,5
4,45
4,4
4,4
4,35
4,95
5,05
5,05
5,1
5,1
1,95
1,9
1,95
1,9
1,9
9,9
9,95
9,95
9,9
9,9
22,6
22,8
23,05
22,95
22,9
5,35
5,4
5,2
5,25
5,2
8,4
8,4
8,3
8,3
8,3
10,95
11,0
11,1
10,75
10,85
Tabella 12. Campioni lipemici analizzati con il metodo β-Thal
L70097101IT00
Istruzioni per l’uso
31
Trigliceridi
[mg/dl]
185
1638
3093
4546
6000
Basso
5,2
5,2
5,2
5,2
5,15
HbA1c
Medio
8,35
8,4
8,4
8,4
8,3
Alto
11,15
11,15
11,15
11,2
11,25
Tabella 13. Campioni lipemici analizzati con il metodo HbA1c
Campioni itterici
La presenza di bilirubina nel siero ne determina un notevole aspetto “itterico” quando la concentrazione della bilirubina supera i 2,5 mg/dl. Per studiare l’effetto dell’ittero sulla misurazione con il
VARIANT II HbA2/HbA1c Dual Program delle HbA2, HbF o HbA1c percentuali, a campioni di sangue
intero con livelli bassi, medi e alti di HbA2, HbF o HbA1c è stata aggiunta bilirubina con l’addizione di
0,1 mg/ml di soluzione madre per ottenere livelli in sangue intero di 0 e 20 mg/dl. I campioni sono
stati analizzati dal VARIANT II in doppio in un’unica analisi.
I risultati dimostrano che concentrazioni di bilirubina fino a 20 mg/dl non interferiscono con la
misurazione di HbA2, HbF o HbA1c con il VARIANT II.
HbF
Basso Medio
Bilirubina 0 mg/dl
2,0
5,45
Bilirubina 20 mg/dl
2,0
5,4
HbA2
Alto Basso Medio
10,9
2,3
3,8
10,8
2,3
3,7
HbA1c
Alto Basso Medio
6,35 5,15
8,2
6,3
5,1
8,2
Alto
11,6
11,5
Tabella 14. Campioni itterici analizzati con il metodo β-Thal
Bilirubina 0 mg/dl
Bilirubina 20 mg/dl
Basso
4,8
4,7
HbA1c
Medio
8,1
8,1
Alto
12,0
12,0
Tabella 15. Campioni itterici analizzati con il metodo HbA1c
Emoglobina carbamilata
L’insufficienza renale può determinare aumentati livelli di emoglobina carbamilata (CHb), che
coeluisce con l’HbA1c labile. Per studiare l’effetto dell’emoglobina carbamilata sulla misurazione
con il VARIANT II HbA2/HbA1c Dual Program dell’HbA1c, eritrociti sono stati incubati con cianato di
potassio e ad essi è stato aggiunto fino al 2,2% di emoglobina carbamilata.
I risultati dimostrano che l’emoglobina carbamilata può interferire con il dosaggio a concentrazione
pari a circa l’1%. L’A1c labile e l’emoglobina carbamilata eluiscono insieme in un picco, subito prima
del picco A1c. L’area di questo picco, che viene riconosciuto come LA1c, rappresenta dunque
la somma delle concentrazioni dei due derivati emoglobinici. Fino a concentrazioni di 3,0%, il
dosaggio HbA1c non viene influenzato dal picco riconosciuto come LA1c.
32
Istruzioni per l’uso
L70097101IT00
VARIANT™ II HbA2/HbA1c Dual Program
HbA1c
Replicato 1
Replicato 2
Replicato 3
Media
6,8
6,7
6,6
6,7
HbA1c
+ 1,2% CHb
6,4
6,3
6,3
6,33
HbA1c
+ 2,2% CHb
6,1
6,0
6,1
6,07
Tabella 16. Emoglobina carbamilata analizzata con il metodo β-Thal
HbA1c
Replicato 1
Replicato 2
Replicato 3
Media
6,2
6,2
6,2
6,2
HbA1c
+ 1,0% CHb
5,9
5,9
5,9
5,9
HbA1c
+ 2,0% CHb
5,4
5,4
5,4
5,4
Tabella 17. Emoglobina carbamilata analizzata con il metodo HbA1c
Certificazione/tracciabilità per il materiale ed il metodo di riferimento
Il VARIANT II HbA2/HbA1c Dual Program è tracciabile ai metodi di riferimento sia del programma
NGSP (National Glycohemoglobin Standardization Program) che della federazione IFCC
(International Federation of Clinical Chemistry and Laboratory Medicine).
Il VARIANT II HbA2/HbA1c Dual Program è certificato dal programma NGSP come in possesso
di tracciabilità documentata rispetto al metodo di riferimento DCCT (Diabetes Control and
Complications Trial). Lo scopo del programma NGSP è la standardizzazione dei risultati del test
della glicoemoglobina affinché i risultati dei laboratori clinici siano comparabili con quelli refertati
nel DCCT, in cui è stato stabilito il rapporto fra la glicemia media ed il rischio di complicazioni
vascolari.20
L’IFCC Working Group on HbA1c Standardization ha sviluppato e mantiene la procedura di
misurazione di riferimento per l’HbA1c da usare come ancora analitica per la tracciabilità dell’HbA1c.
Il metodo di riferimento IFCC separa i peptidi N-terminali glicati e non glicati della catena β
mediante HPLC in fase inversa e quantifica l’analita mediante spettrometria di massa o elettroforesi
capillare.21
Il metodo di riferimento IFCC viene impiegato per l’assegnazione dei valori IFCC a materiali
di riferimento secondari. Questi materiali vengono usati dai fabbricanti per assegnare valori ai
calibratori dei prodotti.22
I risultati HbA1c tradizionalmente sono stati refertati in percentuale convenzionale
(100 × HbA1c/Hb totale) o in unità SI percentuali (HbA1c/Hb totale). Nel maggio del 2007, American
Diabetes Association, European Association for the Study of Diabetes, International Diabetes
Federation, ed IFCC hanno pubblicato una dichiarazione congiunta sulla standardizzazione
mondiale della misurazione di HbA1c. Hanno raccomandato l’uso delle unità SI IFCC (mmol/mol).23
L70097101IT00
Istruzioni per l’uso
33
Per implementare l’uso delle unità SI di recente accettate, le equazioni master originariamente
pubblicate fra il metodo di riferimento IFCC e il metodo di confronto designato sono state modificate
come segue.
Equazione master per il metodo di confronto designato (DCM):
Conversione da IFCC a DCM21
NGSP = (0,09148 × IFCC) + 2,152
DCM
NGSP (USA)
Esempi di risultati dei pazienti:
IFCC
43 mmol/mol
48 mmol/mol
53 mmol/mol
NGSP
6,1%
6,5%
7,0%
In caso di domande su queste informazioni, si prega di rivolgersi al distributore locale Bio-Rad.
I valori per l’HbA2 possono essere ricondotti allo standard dell’OMS.24,25
I valori per l’HbF vengono assegnati usando un metodo di riferimento interno.
LIMITI DELLA PROCEDURA
Sopravvivenza eritrocitaria anormale
Campioni provenienti da pazienti con anemia emolitica presenteranno valori diminuiti di emoglobina
glicata a causa del ridotto periodo di vita degli eritrociti. Questo effetto dipende dalla gravità
dell’anemia. Campioni di pazienti con policitemia o post-splenectomia possono presentare un
aumento dei valori di emoglobina glicata a causa del periodo di vita degli eritrociti relativamente più
lungo.26
Diluizione dei campioni
Campioni di sangue intero con valori bassi, medi e alti sono stati diluiti per ottenere delle aree
totali da 0,5 a 5,9 milioni di µvolt × secondo. La concentrazione dell’emoglobina totale normale
corrisponde ad aree totali di circa 2,0–2,5 milioni di µvolt × secondo.
L’intervallo di area totale raccomandato è di 1,5–3,5 milioni di µvolt × secondo. I risultati non vanno
riportati se l’area è al di fuori di questo intervallo.
34
Istruzioni per l’uso
L70097101IT00
VARIANT™ II HbA2/HbA1c Dual Program
Area (M) Conc. bas. HbA2 Area (M) Conc. med. HbA2 Area (M)
5,99
2,4
5,99
3,75
5,42
5,50
2,4
5,49
3,8
4,86
4,98
2,4
4,95
3,8
4,52
4,45
2,4
4,43
3,8
4,10
3,95
2,4
3,87
3,8
3,66
3,40
2,4
3,32
3,8
3,14
2,87
2,4
2,77
3,75
2,63
2,32
2,3
2,20
3,7
2,03
1,77
2,3
1,66
3,6
1,62
1,17
2,2
1,08
3,5
1,03
0,54
2
0,53
3,4
0,54
Conc. alta HbA2
5,1
5,1
5,0
5,0
4,95
4,95
5,0
5,05
5,0
5,0
4.95
Tabella 18. Risultati della diluizione dei campioni per l’HbA2
Area (M)
6,00
5,49
4,95
4,43
3,87
3,32
2,77
2,20
1,66
1,08
0,53
Conc. bas. HbF
1,7
1,7
1,7
1,7
1,7
1,7
1,7
1,7
1,7
1,7
1,7
Area (M) Conc. med. HbF Area (M)
7,12
5,45
5,99
6,51
5,4
5,50
5,87
5,3
4,98
5,20
5,3
4,45
4,61
5,3
3,95
3,99
5,2
3,40
3,38
5,2
2,87
2,71
5,2
2,32
2,07
5,2
1,77
1,38
5,1
1,17
0,64
5,2
0,54
Conc. alta HbF
10,9
10,9
10,9
10,8
10,8
10,8
10,8
10,8
10,8
10,85
10,6
Tabella 19. Risultati della diluizione dei campioni per l’HbF
L70097101IT00
Istruzioni per l’uso
35
Area (M) Conc. bas. HbA1c Area (M)
4,78
6,75
6,37
4,34
6,7
5,78
3,96
6,65
5,19
3,52
6,7
4,62
3,09
6,7
4,11
2,68
6,7
3,58
2,23
6,7
2,89
1,80
6,7
2,45
1,41
6,7
1,94
0,88
6,65
1,33
0,42
6,8
0,67
Conc. med. HbA1c
9,5
9,45
9,45
9,45
9,4
9,4
9,35
9,35
9,4
9,25
9,35
Area (M) Conc. alta HbA1c
6,40
12,2
5,81
12,0
5,25
11,8
4,70
11,6
4,22
11,4
3,61
11,2
3,07
11,15
2,46
11,0
1,93
10,9
1,31
10,75
0,72
10,6
Tabella 20. Risultati della diluizione dei campioni per l’HbA1c con il metodo β-Thal
Area (M) Conc. bas. HbA1c Area (M)
7,10
5,6
5,83
6,65
5,5
5,29
6,18
5,5
4,86
5,65
5,45
4,42
5,11
5,4
3,84
4,57
5,3
3,33
3,94
5,4
2,85
3,19
5,3
2,30
2,31
5,35
1,77
1,52
5,45
1,21
0,67
5,35
0,54
Conc. med. HbA1c
8,1
8,05
8,1
8,3
8,35
8,4
8,4
8,4
8,4
8,3
7,8
Area (M) Conc. alta HbA1c
6,66
11,0
6,08
11,15
5,52
11,35
4,95
11,5
4.36
11,8
3,80
11,95
3,24
12,05
2,63
12,15
2,03
12,1
1,39
12,1
0,57
11,55
Tabella 21. Risultati della diluizione dei campioni per l’HbA1c con il metodo HbA1c
HbA2
Livelli elevati di HbA2 potrebbero essere mascherati da una concomitante anemia da deficienza di
ferro.10
Nella conferma di laboratorio di una diagnosi di β-talassemia in eterozigosi, si dovranno prendere
in considerazione i livelli di HbA2 assieme all’etnia, all’anamnesi familiare e ai dati di laboratorio,
compreso il ferro serico, la capacità legante del ferro, la morfologia dei globuli rossi, l’ematocrito
dell’emoglobina, l’emoglobina corpuscolare media (MCH) ed il volume corpuscolare medio (MCV).16
L’emoglobina S ed altre varianti emoglobiniche a eluizione tardiva presentano dei picchi di
componenti minori che potrebbero coeluire con l’HbA2. Ciò potrebbe generare per l’HbA2 un valore
percentuale di area erroneamente elevato.27
36
Istruzioni per l’uso
L70097101IT00
VARIANT™ II HbA2/HbA1c Dual Program
Si è osservato che l’emoglobina E coeluisce con l’HbA2. I campioni con livelli di HbA2 superiori al
10% vanno analizzati per l’eventuale presenza di interferenza delle varianti emoglobiniche.28
HbF
Livelli fino al 20% di emoglobina fetale (HbF) non interferiscono con la determinazione precisa della
percentuale di HbA1c relativa all’emoglobina totale presente. Poiché l’area di HbF viene esclusa
dai calcoli dell’area totale, livelli superiori al 20% di HbF possono influire sulla risoluzione di HbA1c
e HbF, determinando un aumento nella percentuale misurata di HbA1c. Questi risultati sono stati
ottenuti in uno studio in cui venivano misurati i valori di concentrazioni di HbF purificate in un
campione di paziente normale (vedi tabella 22).
Aggiunta
% di HbF
0,2
3,0
6,3
8,6
13,3
21,3
30,7
HbA1c % misurata
(Metodo β-Thal)
5,5
5,5
5,4
5,4
5,4
5,1
4,8
Aggiunta
% di HbF
0,0
2,9
6,4
8,7
13,7
21,9
31,3
HbA1c % misurata
(Metodo HbA1c)
5,3
5,3
5,2
5,2
5,3
4,85
4
Tabella 22. Risultati dello studio sull’interferenza dell’emoglobina F
Varianti emoglobiniche
Le varianti emoglobiniche S e C hanno soltanto un lieve effetto sul metodo HbA1c quando si trovano
allo stato eterozigote (AS o AC), in quanto le aree dei picchi delle emoglobine S e C non sono
inclusi nel calcolo dell’emoglobina totale. Si raccomanda caldamente l’uso del metodo β-Thal. Nelle
rare forme omozigotiche (SS, CC o EE), l’HbA è virtualmente assente e di conseguenza anche
l’HbA1c non è presente. Pertanto, per valutare il controllo del glucosio a lungo termine andranno
usati criteri diversi dal monitoraggio dell’HbA1c.
L’emoglobina E e le varianti emoglobiniche che eluiscono in modo simile (per es. l’HbD) non
sono completamente separate dal picco HbA0 nel metodo HbA1c. Se si rilevano tali varianti Hb,
si raccomanda di rianalizzare il campione usando il metodo β-Thal. Per la misurazione dell’HbA1c
in campioni derivati da popolazioni con alta incidenza di tali varianti Hb, si raccomanda di usare
il metodo β-Thal in quanto l’area di picco delle varianti emoglobiniche che eluiscono dopo l’HbA0
(HbE, HbD ecc.) non viene inclusa nel calcolo dell’emoglobina totale. L’uso del metodo β-Thal
determina valori di HbA1c accurati anche in presenza di tali varianti Hb. HbE, HbD ed altre
emoglobine coeluenti non sono incluse nel referto del metodo β-Thal (refertate come “Unknown”
(Non noto)). Le emoglobine di Bart ed H eluiscono prima dell’HbF.
La tabella seguente mostra una selezione delle emoglobine e dei loro tempi di ritenzione ottenuti
con il metodo β-Thal. I tempi di ritenzione vengono forniti a titolo esemplificativo.
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Istruzioni per l’uso
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Nome dell’emoglobina
Emoglobina F
Emoglobina Okayama
Emoglobina Geelong
Emoglobina A1c
Emoglobina J-Bangkok
Emoglobina A0
Emoglobina D-Iran *
Emoglobina Lepore *
Emoglobina E *
Emoglobina G-Copenhagen *
Emoglobina A2
Emoglobina D
Emoglobina Stanleyville II
Emoglobina S
Emoglobina Manitoba
Emoglobina O-Arab
Emoglobina Hasharon
Emoglobina Agenogi
Emoglobina C
Tempo di ritenzione
(minuti)
0,55
0,63
0,82
0,98
1,62
1,76
2,67
2,83
2,89
2,95
2,99
3,21
3,40
3,48
3,51
4,07
4,14
4,20
4,50
Tabella 23. Varianti emoglobiniche confermate per il metodo β-Thal
*Le varianti emoglobiniche contrassegnate mostrano picchi ampi e interferiscono con l’HbA2.
Per il momento non sono state valutate completamente altre varianti emoglobiniche anomale
sul VARIANT II HbA2/HbA1c Dual Program. Per una conferma positiva di qualsiasi variante
emoglobinica particolare, potrebbe essere necessaria un’analisi di catene globiniche, MS/MS, DNA
o delle sequenze.
INFORMAZIONI SUI MARCHI DI FABBRICA
VARIANT, CDM, Liquichek e DIAMAT sono marchi di fabbrica di Bio-Rad Laboratories, Inc.
Lyphochek è un marchio registrato di Bio-Rad Laboratories, Inc.
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Istruzioni per l’uso
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VARIANT™ II HbA2/HbA1c Dual Program
BIBLIOGRAFIA
1. American Diabetes Association Home Page. http://www.diabetes.org (accessed Jan 2010).
2. Fowler, M. J. Microvascular and Macrovascular Complications of Diabetes. Clin. Diabetes
2008, 26 (2), 77-82.
3. Shaw, J. E.; Sicree, R. A.; Zimmet, P. Z. Global Estimates of the Prevalence of Diabetes for
2010 and 2030. Diabetes Res. Clin. Pract. 2010, 87, 4-14.
4. Forsham, P. H. Diabetes Mellitus: A Rational Plan for Management. Postgrad. Med. 1982,
71, 139-154.
5. Hollander, P. The Case for Tight Control in Diabetes. Postgrad. Med. 1984, 75, 80-87.
6. Baynes, J. W.; Bunn, H. F.; Goldstein, D.; Harris, M.; Martin, D. B.; Peterson, C.; Winterhalter,
K. National Diabetes Data Group: Report of the Expert Committee on Glucosylated
Hemoglobin. Diabetes Care 1984, 7, 602-606.
7. Nathan, D. M.; Singer, D. E.; Hurxthal, K.; Goodson, J. D. The Clinical Information Value of
the Glycosylated Hemoglobin Assay. N. Engl. J. Med. 1984, 310, 341-346.
8. Mayer, T. K.; Freedman, Z. R. Protein Glycosylation in Diabetes Mellitus: A Review of
Laboratory Measurements and of Their Clinical Utility. Clin. Chim. Acta 1983, 127, 147-184.
9. Fairbanks, V. F. Thalassemias and Related Disorders. Hemoglobinopathies and
Thalassemias; Brian C. Decker: New York, 1980; pp 18-27.
10. Rowley, P. T. The Diagnosis of Beta-Thalassemia Trait: A Review. Am. J. Hematol. 1976, 1,
129-137.
11. Marengo-Rowe, A. J. Rapid Electrophoresis and Quantitation of Haemoglobins on Cellulose
Acetate. J. Clin. Pathol. 1965, 18 (6), 790-792.
12. Huisman, T. H.; Schroeder, W. A.; Brodie, A. N.; Mayson, S. M.; Jakway, J.
Microchromatography of Hemoglobins. II. A Simplified Procedure for the Determination of
Hemoglobin A2. J. Lab. Clin. Med. 1975, 86 (4), 700-702.
13. Ou, C. N.; Buffone, G. J.; Reimer, G. L.; Alpert, A. J. High-Performance Liquid
Chromatography of Human Hemoglobins on a New Cation Exchanger. J. Chromatogr.
1983, 266, 197-205.
14. Kutlar, A.; Kutlar, F.; Wilson, J. B.; Headlee, M. G.; Huisman, T. H. Quantitation of
Hemoglobin Components by High-Performance Cation-Exchange Liquid Chromatography:
its use in diagnosis and in the assessment of cellular distribution of hemoglobin variants.
Am. J. Hematol. 1984, 17 (1), 39-53.
15. Turpeinen, U. Liquid-Chromatographic Determination of Hemoglobin A2. Clin. Chem. 1986,
32 (6), 999-1002.
16. Traeger-Synodinos, J.; Old, J. M.; Petrou, M.; Galanello, R. Best Practice Guidelines for
Carrier Identification and Prenatal Diagnosis of Haemoglobinopathies. (These guidelines
are the product of a best practice meeting organized by the European Molecular Genetics
Quality Network) EMQN 2002.
L70097101IT00
Istruzioni per l’uso
39
17. Sacks, D. B.; Bruns, D. E.; Goldstein, D. E.; Maclaren, N. K.; McDonald, J. M.; Parrott,
M. Guidelines and Recommendations for Laboratory Analysis in the Diagnosis and
Management of Diabetes Mellitus. Clin. Chem. 2002, 48 (3), 436-472.
18. Williams, J. L. Anemias of Abnormal Globin Development-Thalassemias. In Clinical
Hematology: Principles, Procedures, Correlations, 2nd ed.; Stiene-Martin, E. A., LotspeichSteininger, C. A., Koepke, J. A., Eds.; Lippincott-Raven Publishers: Philadelphia, PA, 1998;
pp 217-240.
19. American Diabetes Association. Standards of Medical Care for Patients with Diabetes
Mellitus. Diabetes Care 2001, 24 (Suppl. 1), 33-43.
20. Rohlfing, C. L.; Little, R. R.; Wiedmeyer, H. M.; England, J. D.; Madsen, R.; Harris, M. I.;
Flegal, K. M.; Eberhardt, M. S.; Goldstein, D. E. Use of GHb (HbA1c) in Screening for
Undiagnosed Diabetes in the U.S. Population. Diabetes Care 2000, 23, 187-191.
21. International Federation of Clinical Chemistry and Laboratory Medicine Home Page. http://
www.ifcchba1c.net (accessed Jan 2010).
22. Hoelzel, W.; Weykamp, C.; Jeppsson, J. O.; Miedema, K.; Barr, J. R.; Goodall, I.; Hoshino,
T.; John, W. G.; Kobold, U.; Little, R.; Mosca, A.; Mauri, P.; Paroni, R.; Susanto, F.; Takei,
I.; Thienpont, L.; Umemoto, M.; Wiedmeyer, H. M.; IFCC Working Group on HbA1c
Standardization. IFCC Reference System for Measurement of Hemoglobin A1c in Human
Blood and the National Standardization Schemes in the United States, Japan, and Sweden:
A Method-Comparison Study. Clin. Chem. 2004, 50 (1), 166-174.
23. American Diabetes Association, European Association for the Study of Diabetes,
International Federation of Clinical Chemistry and Laboratory Medicine, and International
Diabetes Federation. Consensus Statement on the Worldwide Standardization of the
Hemoglobin A1c Measurement. Diabetes Care 2007, 30 (9), 2399-2400.
24. International Committee for Standardization in Haematology. Recommendations for
Selected Methods for Quantitative Estimation of HbA2 and for HbA2 Reference Preparation.
Br. J. Haematol. 1978, 38 (4), 573-578.
25. Dr. Barbara J. Wild, Department of Haematological Medicine, King’s College Hospital,
Bessemer Road, Denmark Hill, London SE5 9RS.
26. Panzer, S.; Kronik, G.; Lechner, K.; Bettelheim, P.; Neumann, E.; Dudczak, R. Glycosylated
Hemoglobins (GHb): An Index of Red Cell Survival. Blood 1982, 59, 1348-1350.
27. Riou, J.; Godart, C.; Mathis, M.; Hurtrel, D.; Wajcman, H.; Préhu, C.; Bardakdjian, J.
Evaluation of the Bio-Rad VARIANT™ II HbA2/HbA1c Dual Program for Measurement of
Hemoglobin Concentrations and Detection of Variants. Clin. Chem. Lab. Med. 2005, 43 (2),
237-243.
28. Lafferty, J. D.; McFarlane, A. G.; Chui, D. H. K. Evaluation of a Dual Hemoglobin A2/A1c
Quantitation Kit on the Bio-Rad Variant II Automated Hemoglobin Analyzer. Arch. Pathol.
Lab. Med. 2002, 126, 1494-1500.
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Istruzioni per l’uso
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VARIANT™ II HbA2/HbA1c Dual Program
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Istruzioni per l’uso
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