ダリアの 3 種ウイルス・ウイロイドの同時検出技術の開発～マルチプレックス RT-PCR により、検定作業の省力・低コスト化を実現～１．背景と目的奈良県内でのダリアの球根生産は宇陀市や奈良市の中山間地域を中心に行われており、国内有数の産地となっています。切り花生産については露地での夏秋切りは宇陀市、施設での冬春切りは葛城市を中心に行われています（図１）。のダリアに感染が確認されているトマト黄化えそウイルス（TSWV）、ダリアモザイクウイルス（DMV）、キク矮化ウイロイド（CSVd）を同時に検出する技術を開発しました。２．研究成果の概要通常のRT-PCRでは特定のウイルス・ウイロイドを増幅させるプライマーが1種類しか入っていないのに対して、今回開発した技術では、一つの反応系に互いに反応を阻害しない組み合わせでTSWV、DMV、CSVdを増幅させる3種類のプライマーを入れることで、同時に3種類のウイルス・ウイロイドの検出を行うことができました（図３）。このように複数種類のプライマーを使用するRT-PCRをマルチプレックスRT-PCRと呼びま図１切り花生産園地す。一般的に、マルチプレックスRT-PCR法は通ダリアの球根・切り花生産ともにウイルス・常のRT-PCRと比べて、検出感度が低いことが課ウイロイド病による被害が問題となっています。題でした。しかし、今回開発したマルチプレッその症状はえそ斑、モザイク、矮化などで（図クスRT-PCRの検出感度は通常のRT-PCRと比較し２）、生産性を低下させます。ダリアは、主にてほぼ同等でした。本技術を利用することで作栄養繁殖により増殖されるため、球根・挿し芽業時間・コストともに３分の１に抑えることが苗を通じて被害が拡大します。可能となりました。ウイルス病対策として、これまで当センター通常の RT-PCR マルチプレックス RT-PCR では、「茎頂培養によるウイルスフリー化技術」と「遺伝子診断技術によるウイルス検出技術」 ←TSWV を組み合わせることにより、健全な親株の選抜 ←ＤＭV を実施してきました。しかし、ダリアに感染するウイルス・ウイロ ←CSVd イドの種類は複数あります。従来の遺伝子診断技術であるRT-PCRと呼ばれる手法では、種類ごとに実施する必要があり、作業の煩雑性やコス図３マルチプレックスRT-PCRによる同時検出ト高が課題となっていました。そこで奈良県内３．今後の取り組み等同時検出技術の対象としたTSWV、DMV、CSVd のうち、TSWVのみ植物体内で局在して分布することが知られています。しかし、その分布の傾向は明らかではありません。今後、TSWVが高頻度で分布する部位を明らかにし、検定の精度の向上を目指します。（病害虫防除ユニット浅野峻介）図２ウイルス症状（えそ斑（左）、モザイク）奈良農研ニュース vol.146 2014 ５奈良農研ニュース vol.146 2014 5